组培复习资料
第一章绪论
1、植物组织培养：是指将植物的离体器官、组织、细胞以及去除细胞壁的原生质体，放在人工控制的无菌环境条件下培养，使其生长、分化并成长为完整植株的过程。
2、植物细胞组织培养：指在离体(in vitro)条件下利用人工培养基(medium)对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使其长成完整植株的过程
3、组织培养材料：◆器官：根、茎尖、叶、花、果实、种子等◆组织：形成层、表皮、皮层、胚、胚乳等◆细胞：大孢子、小孢子、体细胞◆原生质体
基本特点：无菌、离体材料、人工培养基与培养环境
4、根据组织培养材料分类：器官培养、茎尖分生组织培养、愈伤组织培养、细胞培养、原生质体培养
5、组织、器官或细胞培养：指利用生物体各部分组织、器官或细胞进行离体培养，使之形成愈伤组织或完整有机体的技术。
6、愈伤组织: 指在人工培养基上由外植体（explant）形成的一团无序生长的薄壁细胞。
7、外植体（explant）: 在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物体上提取下来，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。
8、脱分化（dedifferentiation）：一个成熟细胞或分化细胞转变成为分生状态的过程，即形成愈伤组织的过程。
9、再分化（redifferentiation）：植物成熟细胞经历了脱分化之后，即形成愈伤组织之后，由愈伤组织再形成完整的植株的过程。
10、原生质体培养：指将微生物或植物细胞游离成原生质体，在适宜培养条件下，依据细胞全能性使其再生细胞壁，并进行细胞分裂分化，形成完整个体的技术。
11、培养方式:固体培养、液体培养◆培养物量:大量培养、微量培养◆培养过程中是否需要光: 光培养、暗培养
◆培养方法不同: 平板培养、微室培养、悬浮培养、单细胞培养◆培养器官的不同：花药培养、胚珠培养、根培养、茎尖培养
12、细胞全能性（cell totipotengcy）学说：植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，在一定条件下具有发育成为完整植株的潜在能力。
第二章3节—外植体的选择和灭菌
1、外植体的选择：植物组织培养的主要作业大致包括：外植体的选择、培养基的制备、器具的消毒、无菌操作和环境条件的调控。（1）选择优良的种质：选取性状优良的种质，或特殊的基因型（2）选择健壮的植株：选取发育正常的器官或组织（3）选择最适的时期（4）选取适宜的大小：一般选取培养材料的大小，在0.5cm--1.0cm。如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。
2、外植体的灭菌方法：预处理方法：先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。常规的表面灭菌处理方法：①把材料放进70%的酒精中约30s。②用0.1%的升汞（HgCl2）中浸泡10min。或用10%的漂白粉上清液中浸10min～15min。③无菌蒸馏水冲洗3～5次。④灭菌时进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触。⑤在灭菌剂里滴入数滴0.1%的Tween20（吐温）或Tween80湿润剂，则灭菌效果更好。
3、污染原因和预防措施：污染—是指在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。（1）细菌污染的特点：菌斑呈粘液状物，而且在接种后1～2天即可发现。污染的原因：①材料带菌②培养基灭菌不彻底③操作人员未遵守操作规程。因此接种人员的手应经常用70%洒精擦净，镊子和接种针在使用前必须在火焰上烧红。(2) 真菌污染的特点：污染部分长有不同颜色的霉菌，在接种后3～10天才能发现。原因：①周围环境不清洁②超净工作台的过滤装置失效③培养用器皿的口径过大等。解决方法：为了减少损失，提高工作效率，必须在每个操作环节注意防止污染的发生。（3）污染的预防措施：a.发现污染的材料应及时处理，否则将导致培养室环境污染。b.对一些特别宝贵的材料，可以取出再次进行更为严格的灭菌，然后接入新鲜的培养基中重新培养。
c.要处理的污染培养瓶最好在打开瓶盖前，先集中进行高压灭菌，再清除污染物，然后洗净备用。
4、污染的几个预防措施: 1）防止材料带菌的措施：①用茎尖作外植体时，可在室内或无菌条件下对枝条先进行预培养②选择合适的时间去田间采取外植体。2）外植体的灭菌：①多次灭菌法②多种药液交替浸泡法。3）玻
璃器皿的灭菌：①湿热灭菌法—即将玻璃器皿包扎后置入蒸汽灭菌锅中进行高温高压灭菌，灭菌时间可延长达25min—30min。②干热灭菌法——即将玻璃器皿置入电热烘箱中进行灭菌。③煮沸灭菌——即将玻璃器皿放入水中煮沸进行灭菌。4）金属器械的灭菌：①火焰灭菌法②干热灭菌法5）布质制品的灭菌：湿热灭菌法6）无菌操作室的灭菌7）操作人员在接种时一定要严格按照无菌操作的程序进行
第二章4节—外植体的接种和培养
1、外植体的接种:是把经过表面消毒后的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞，并将它们转放到无菌培养基上的全部操作过程。整个接种过程均须无菌操作。操作过程中引起的污染，主要由空气中的细菌和工作人员本身引起的。因此除接种室空气消毒外，应特别注意防止工作人员本身引起的污染。
2、外植体的培养条件: 光照、温度、湿度、氧气和培养基的pH值等。①光照: 普
通培养室要求每日光照12h-16h，光照强度1000lx-5000lx ②温度:培养室一般所用的温度是25?C±2?C.③湿度:要求室内保持70%-80%的相对湿度。④氧气
3、外植体的褐变及其预防措施：（1）什么叫褐变？褐变——是指外植体在培养过程，自身组织从表面向培养基释放出褐色物质，以致培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。（2）褐变的原因是什么？褐变的发生与外植体组织中所含的酚类化合物多少和多酚氧化酶活性有直接关系。但酚类很不稳
定，溢出过程中与多酚氧化酶接触，在多酚氧化酶的催化下迅速氧化成褐色的醌类物质和水，醌类又会在酪氨酸酶等的作用下，与外植体组织中的蛋白质发生聚合，进一步引起其他酶系统失活，从而导致组织代谢紊乱，生长停滞不前，最终
衰老死亡。(3) 影响褐变的因素有哪些？随着植物种类、基因型、外植体的部位及生理状况等的不同，褐变的程度也有所不同。
4、影响褐变的因素：1）植物材料①基因型②材料年龄③取材部位④取材时期
⑤外植体大小及受伤害程度2）培养条件：主要是光照与温度。温度过高或光照过强，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速外植体的褐变。3）培养基：①培养基状态：液体培养基可以有效克服外植体褐变，液体培养基再加上滤纸桥，效果就更好②无机盐③植物生长调节物质④抗氧化剂⑤吸附剂⑥pH值 4）材料转瓶周期5、褐变的预防措施有哪些？?选择适宜的外植体?采用适宜的培养基和光温条件?在培养基中加活性炭、抗氧化剂和其他抑制剂?缩短转瓶周期
第二章5节—玻璃化、驯化与移栽
1、玻璃化现象：是指组培苗出现叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，植株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表皮缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织；体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低的现象。
2、玻璃化的原因：细胞生长过程中的环境变化。试管苗为了适应变化了的环境而呈玻璃状。产生玻璃化苗的因素主要有激素浓度、琼脂用量、温度、离子水平、光照时间、通风条件等。(一) 激素浓度：细胞分裂素浓度提高（或细胞分裂素与生长素比例高），易导致玻璃化苗的产生。(二)琼脂浓度：培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例增加，水浸状严重，苗向上长，琼脂的浓度一定要适当。(三)温度：温度越低玻璃化苗的比例越高(四)光照时间 (五) 通风条件：气体交换的好坏取决于生长量、瓶内空间、培养时间和瓶盖种类(六)离子水平
3、预防玻璃化的措施：（1）适当控制培养基中无机营养成分?适当提高培养基中蔗糖和琼脂的浓度?适当降低细胞分裂素和赤霉素的浓度?增加自然光照，控制光照时间?控制好温度?改善培养器皿的气体交换状况?在培养基中添加其它物质
4、试管苗的生态环境：组织培养中培育出来的苗通常称试管苗或组培苗。由于试管苗长期生长在试管或三角瓶等培养器皿中，与外界环境隔离，形成了一个独特的生态系统。与外界环境条件相比具有以下4大差异，即高温、高湿、弱光和无菌。?高温且恒温：通常温度控制25℃±2℃（2）高湿（3）弱光（4）无菌
5、试管苗的特点：第一，试管苗生长细弱，茎、叶表面角质层不发达；第二，试管苗茎、叶虽呈绿色，但叶绿体的光合作用功能较差；第三，试管苗的叶片气孔数目少，活性差；第四，试管苗根的吸收功能弱
6、试管苗的驯化：（一）驯化的目的:在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试管苗健壮，最终达到提高试管苗的移栽成活率。（二）驯化的原则：应从温度、湿度、光照及有无菌态等环境
要素进行，驯化开始数天内，应和培养时的环境条件相似；驯化后期，则要与预计的栽培条件相似，从而达到逐步适应的目的（三）驯化的方法：驯化一般在试管苗移栽前进行，首先进行移栽前的驯化锻炼即炼苗（练苗），其具体方法是将长有完整试管苗的试管或三角瓶由培养室转移到半遮荫的自然光下进行锻炼，在自然光下恢复植物体内叶绿体的光合作用能力和健壮度，并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌，这样幼苗周围的环境就会逐步与自然环境相似。驯化一般进行1～2周。
7、试管苗的移栽：试管苗的移栽往往和驯化同步。移栽的方法有：常规移栽法、直接移栽法和嫁接移栽法。试管苗的嫁接移栽法与常规移栽法相比具有许多优点
8、影响试管苗移栽成活率的因素：包括内因与外因：?试管苗的生理状况（选择壮苗）?植物生长调节物质?无机盐浓度?活性炭?环境因子?从无菌向有菌逐渐过渡
第二章12节—组织培养实验室及操作技术
1、灭菌方法：?物理方法：物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等。?化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌
2、?培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法：压力在9.8×104—10.8×104Pa，温度在121℃，灭菌20—30min（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌，干热消毒灭菌（3）塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用（5）接种室灭菌（6）外植体灭菌
3、无菌操作：?消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。?打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。?开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。?用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手?用沾有70%—75%酒精的纱布擦拭盛培养基的培养器皿，放进工作台。?把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。?在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。?打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。?取下接种器械，在火焰上消毒。?把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。⑴接种结束后，清理和关闭超净工作台
4、植物组织培养所需的环境条件及营养成分：㈠所需环境条件：?温度：植物材料一般最适温度在25±2℃之间?光照：最常用的光周期是光照16h，黑暗8h ?湿度：一般情况下，培养器内相对湿度应达100%，培养室内环境的相对湿度在70%—80% ?气体：氧气是愈伤组织生长所必需的?渗透压?pH值：培养基的pH值大多在
5.0—
6.5㈡营养成分：①大量元素②微量元素③碳源④维生素类⑤肌醇⑥氨基酸⑦天然复合物⑧琼脂
⑨活性炭⑩抗生素⑴生长素类⑵细胞分裂素类⑶赤霉素类和脱落酸
5、培养基的配制、灭菌与保存：㈠培养基的种类◆培养基形态不同：固体培养基、液体培养基◆培养过程不同：初代培养基、继代培养基◆其作用不同：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基◆营养水平不同：基本培养基、完全培养基㈡几种常见培养基的特点：?MS培养基：◆无机盐浓度高◆高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐◆含有一定数量的铵盐◆营养丰富◆不需要添加更多的有机附加物
?White培养基：◆1943年由White为培养番茄根尖而设计◆ 1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素◆无机盐浓度较低◆使用广泛◆在生根培养、胚胎培养中有良好的效果?B5培养基：◆1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计◆含有较低的铵盐◆较高的硝酸盐和盐酸硫胺素
6、培养基的配制：配制培养基应做好几点工作：?实验用具的准备。包括配制过程中所需电炉、酸度计、高压灭菌锅等设备及其他玻璃器皿的清洗和准备?试剂、药品的准备?根据培养基的配方、母液扩大倍数及需要配制的培养基体积计算所需各种母液及其他附加物的量
7、具体操作如下：?取规定数量的糖源和凝固剂置于烧杯或搪瓷锅内，加蒸馏水加热使之溶解，并不断搅拌；?根据计算所需量依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质母液及其他特殊的附加物，搅拌均匀；?加水定容至规定体积，搅拌均匀；?调整培养基的pH值；?分装；?封口
8、培养基的灭菌：培养基分装封口后立刻进行灭菌，至少在24h内完成灭菌程序。一般采用的是高压蒸汽灭菌。高压蒸汽灭菌锅使用时要注意一下几点：①锅中应放足量的水，以免造成空烧或干烧；②装锅时不要过度倾斜，可保持内部有一定的空间，利于蒸汽流动；③增压前高压锅内的空气必须排净，否则易影响灭菌效果④灭菌过程中，应尽量保持压力恒定，严格遵守灭菌时间；⑤排气降压时应缓慢进行；⑥只有待高压锅内压力表指针恢复到零后，才能开启压力锅；⑦高压锅工作时，应有专人看守
9、培养基的保存：灭菌后的培养基经冷却和凝固后即可使用检验灭菌效果。检验方法：将培养基置于培养室中3天，若没有污染现象，说明灭菌可靠，可以使用。◆保存在低温条件下。常温下保存时要进行防尘和避光处理。
◆保存时间不可过
第三章植物组织与细胞培养
1、植物细胞全能性：植物体的每个活细胞都具有该植物的全套遗传信息，与合子一样，具备发育成完整植株的潜在能力。定义的3个方面的含义：①植物细胞无论是体细胞还是生殖细胞均具有该物种的全套遗传信息②只有在适宜的条件下，植物细胞才具有发育成完整植株的能力③植物每个细胞均具有发育成完整植株的能力。
2、◆细胞分化：由于细胞的分工而导致细胞结构和功能的改变，或发育方式改变的过程。
3、◆细胞脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。即失去已分化细胞的典型特征。
4、◆细胞再分化：脱分化的分生细胞重新恢复细胞分化能力，沿着正常的发育途径，形成具有特定结构和功能的细胞。细胞再分化的两种途径：①胚胎发生②直接分化器官再形成植株
5、高等植物细胞分化、脱分化与再分化过程：胚性细胞→（分裂）多细胞团→（分化）形态建成→（生长）完整植株；成熟细胞→（脱分化）分生细胞→（分裂）多细胞团→（再分化）形态建成→（生长）完整植株。
6、胚状体：在植物组织培养中起源于一个非合子细胞，经胚胎发育所形成的胚状结构，又称体细胞胚、不定胚、无性胚。
7、体细胞胚胎发生特点：?是离体培养的产物?起源于非合子细胞?发育过程与合子胚相似，也经历球形期、心形期、鱼雷期和子叶期阶段
8、在植物组织培养中，诱导体细胞胚胎发生与诱导器官发生相比具有显著的特点：①具双极性②生理隔离③遗传性相对稳定④重演受精卵形态发生的特性
9、体细胞胚胎发生途径：?直接从器官外植体上发生?愈伤组织发生?悬浮培养细胞发生?单倍体细胞发生?原生质体发生
10、体细胞胚胎起源：大多数体细胞胚起源于单细胞，体细胞胚发生的实质是细胞分化
11、体细胞胚胎的生殖隔离：生理隔离是体细胞胚发生的先决条件、生理隔离是相对的
12、影响植物细胞形态发生的因素：外因是指培养植物细胞的培养基和培养环境条件。内因是指植物细胞的遗传性和生理状态。①培养基◆生长调节类物质◆营养成分◆渗透压◆pH值◆固态或液态。②环境条件◆光对细胞形态发生具有诱导反应◆温度有利于器官发生。③器官、组织类型◆不同种植物的器官、组织产生的愈伤组织的器官分化（能力）明显不同，差异显著◆材料的基因型决定④个体发育年龄◆幼嫩部位易诱导形成愈伤组织，也易诱导器官分化◆愈伤组织继代次数越多，器官分化能力愈低。
13、植物离体无性繁殖的概念：◆简称离体繁殖、微型繁殖或快速无性繁殖◆指利用组织培养方法进行植物离体培养，在短期内获得大量遗传性状一致个体的方法。意义：①繁殖速度快，经济效益高②占用空间小，不受季节限制，便于工厂化育苗③繁殖各种珍稀、濒危苗木和突变体，为育种服务。
14、植物离体无性繁殖中的器官五种发生方式：①不定芽型.特点：a、繁殖率高b、能保持遗传稳定性c、缩短繁殖周期②器官型.特点：a、繁殖率高，但速度慢b、遗传性稳定③器官发生型.特点：a、繁殖速度快b、遗传性不稳定，易产生变异c、愈伤组织是遗传转化、细胞培养或原生质体培养的良好材料④胚状体发生型.特点：a、数量多、速度快、繁殖系数高；b、遗传性稳定⑤原球茎型.特点：指兰属特有的器官发生方式，即外植体经培养产生原球茎，再直接长成植株。
15、离体无性繁殖的方法：①母株制备②增殖③植株再生④炼苗和移植。影响因素：1、培养基（选择适宜的培养基、激素及其他添加物）2、培养条件（不同植物离体无性繁殖的最适温度不同，大多为25±2℃，一般不低于15℃，不高于35℃）3、外植体（①外植体材料来源丰富程度②成苗是否容③在培养中的遗传稳定性④试管苗是否整齐一致）
16、快繁中常见的问题：?污染：A、来源：①材料表面消毒不彻底②无菌操作中外界环境进入培养容器造成。B、危害：①初代培养失败、增殖速度慢、生长速度慢、玻璃化加剧②成活率低、病毒和病菌的扩散、培养物的遗传变异C、种类：a、细菌性污染①培养基某一位置或培养材料周围出现黏液状物或浑浊的水渍状痕，有时呈发酵状泡沫。接种后1 ~ 2天可见。②材料、培养基灭菌不彻底③操作不当b、真菌性污染①主要是霉菌污染②培养基
污染部位发霉，接种后3 ~ 5天或更长时间可见③颜色有黝黑、白、黄等。原因：①周围环境和空气污染造成②接种过程中，操作不慎造成。D、防止：①选择植物材料：品种、部位、大小、时期②严格消毒灭菌③合理安排繁殖程序④规范操作，控制环境条件。
?褐变：A、原因:◆酚类化合物 ------（多酚氧化酶与氧气）醌类物质 + 水◆生理状态◆培养基成分◆培养条件不当B、影响褐变的因素：◆基因型：木本植物比草本植物更易引起褐变◆外植体的生理状态◆培养基◆温度和光照：光能促进植物组织中酚的氧化◆外植体大小：材料太小易褐变◆外植体的受伤程度◆材料转移时间◆灭菌的化学药品C、克服褐变的措施：◆选择适宜的外植体◆适宜的培养条件◆连续转移◆加抗氧剂
?玻璃化现象：◆试管苗的玻璃化◆试管苗的茎、叶变成透明水浸状◆生长畸形◆增殖系数明显下降◆难以诱导生根，其根系质量极差◆移栽成活率极低。
预防的措施:a、使用透气性好的封口材料b、选择合适的激素种类和浓度c、采用固体培养基，适当增加琼脂含量，降低水势d、高温季节时要有降温措施e、改变供氮形态f、适当增加培养基中的间苯三酚等抑制玻璃化苗的产生g、适当延长光照培养时间，提高光照强度h、适当提高培养基中无机盐含量。
17、试管苗的特点：◆生长细弱◆茎、叶表面角质层不发达◆茎、叶呈绿色◆叶绿体的光合作用较差◆叶片气孔数目少，活性差◆根的吸收功能弱◆对逆境的适应和抵抗能力差。
提高试管苗移栽成活率的措施：◆提高试管苗生根质量◆加强移栽前炼苗◆保证组培苗移栽基质质量◆作好移栽前根系处理◆湿度控制◆温度控制◆光照控制。
18、愈伤组织培养概念：是指将母株上的各个部分切下形成外植体接种到无菌培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。
19、愈伤组织细胞的分化大致经历三个时期，即：诱导期、分裂期和分化期。
20、愈伤组织的形态发生：?不定芽和根的发生：是愈伤组织培养物或细胞培养物培养中常见的器官发生方式，分三个不同生长阶段：A、细胞和离体外植体脱分化形成愈伤组织B、愈伤组织中形成一些分生，形成瘤状结构C、器官原基的形成。?体细胞胚的发生的三个特征：a、具有两极性b、胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系，而不定芽或不定根往往与愈伤组织的维管组织相联系c、胚状体的维管组织的分布是独立的“Y”形，而不定芽的维管组织无此现象
21、愈伤组织的器官发生顺序：a、无芽的根或无根的芽b、先芽后根c、先根后芽d、同时长根和芽
22、愈伤组织的遗传变异：?引起异质性的原因：A、外植体染色体倍数性与遗传组成不同的细胞经诱导后的分裂。B、培养条件引起的不规则性。?初生愈伤组织，接种到培养基上后，细胞核内的变化：A、正常有丝分裂B、先核内复制，后有丝分裂C、先核碎裂，后有丝分裂
23、愈伤组织的影响因素：A、培养基（生长调节物、无机营养元素、有机成分、物理性质）B、组织原有的倍数性C、培养环境的条件（光照、温度）
24、愈伤组织培养的应用：a、加快园艺植物新品种和良种繁育速度b、培养无病毒苗木c、获得倍性不同的植物
d、克服远缘杂交困难
e、利于种质资源长期保存和远距离运输
f、提供育种中间材料
g、诱发和离体筛选突变体
h、制造人工种子。
25、器官培养：是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。
26、根的培养：将表面消毒后的植物种子在无菌条件下萌发，待根伸长后从根尖切取长1.0cm的根尖，接种于培养基中，待侧根生长约一周后，即可取侧根的根尖进行扩大培养。
28、影响离体根生长的因素：基因型、培养条件、激素、pH、光照和温度等。
29、茎尖的培养概念与意义：◆据培养目的与取材大小◆茎尖分生组织培养：长度小于0.1mm，常带有1~2个叶原基◆普通茎尖培养：茎尖、芽尖、侧芽◆用于植物开花生理的研究◆无毒苗木的生产
31、培养方法：（1）材料制备（2）培养基（3）培养方式。A、固体培养：茎尖紧贴培养基、25~28℃恒温、100%相对湿度B、纸桥培养：◆滤纸代替琼脂◆液体培养基◆工艺复◆康乃馨茎尖培养
32、影响因素：◆基因型◆外植体大小◆供试植株的生理状态及年龄◆芽的着生部位◆培养基◆褐变◆玻璃化◆遗传稳定性。
33、叶的培养：离体叶培养是指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。
34、叶培养的意义：（1）研究叶形态建成、光合作用、叶绿素形成（2）证实叶细胞的全能性（3）探索离体叶培养的条件与影响因素，提供理论依据（4）建立快速无性繁殖系，提高繁殖系数（5）诱变处理，筛选突变体，应用于育种实践。
35、叶原基培养：◆采用休眠的顶芽，剥去部位鳞片◆在5%NaClO液中浸泡20min左右，表面消毒◆切取柱状叶原基进行培养◆培养基：Knop‘s无机盐或Kundson，填加Nistch中的微量元素、CoCl2、2%蔗糖、8%琼脂，pH5.5
◆温度24℃、光照24h。
36、叶组织的分化与再分化：（1）叶组织分离与消毒（2）培养基（3）培养条件◆25~28℃◆光照12~14h◆光强度为1500~2000lx。
37、影响因素：◆基因型◆细胞分裂素与生长素的配合◆供试植株的发育时间与年龄◆叶脉◆极性◆损伤
38、离体叶组织的茎与芽发生途径：（1）直接产生不定芽（2）由愈伤组织产生不定芽（3）胚状体形成（4）其他途径：小鳞茎、原球茎等。
39、植物细胞培养：①机械法：利用叶肉组织或愈伤组织排列疏松、细胞间接触较少的特点，将叶片轻轻研碎，经过滤和离心，收集和净化细胞。优点：a、细胞未受酶伤害b、有利于细胞的生理和生化研究c、无须质壁分离。
②酶法：利用果胶酶、纤维素酶来处理植物叶片或其他外植体，使细胞分离。③化学法：利用一些化学药剂游离细胞。如秋水仙碱等。特点：①分离细胞数量大②易引起细胞改变。
40、培养方法与影响因素：1、细胞悬浮培养：是将植物游离细胞或细小的细胞团，在液体培养基中进行培养的方法。为两种类型：①成批培养②连续培养。特点：a、生长速度快，适于大规模培养及工业化生产有用的细胞次生代谢物；
b、能大量提供分散性好且较为均匀的细胞，用于细胞基础研究、突变体筛选或作为遗传转化受体等；
c、大规模悬浮培养成本较高。（2）连续培养：是用一定容积但非密闭的特别容器进行大规模细胞培养的一种方法。
特点：a、使细胞保持在增殖最快的，对数生长期b、具有稳定的培养状态c、适于大规模工业化生产（开放式，密闭式）。
41、细胞生长曲线：延迟期、对数生长期、直线生长期、减缓期、静止期。
42、单细胞培养程序：建立细胞株------高产细胞株的选择------ 分化培养或扩大培养------鉴定和提取。
43、①建立细胞株：A、确定材料◆选择易于分散的花粉为材料◆分散性好的愈伤组织材料◆直接从叶肉、根尖、髓组织取材B、悬浮细胞液的制备◆振荡培养分散性好的材料，提取◆用孔径为200~300目的网过滤收集
②起始浓度控制：◆细胞密度◆起始细胞密度：临界密度③高产细胞株的选择◆细胞株：在培养基上生长出的每个细胞团都来自一个细胞的分裂。◆初步鉴定和测定◆高抗、高品质、高产④分化培养与扩大培养⑤鉴定与提取。
第四章植物脱毒技术茎尖分生组织培养
1、为什么要培育脱毒苗？由病毒引起植物产量和品质退化的事例甚多。多数植物都受到一种或几种病毒侵染，且带毒株比率高。病毒对寄主植物造成毁灭性危害,导致大幅度减产,甚至全株死亡。潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害，不易被发现，尤其危险。受病毒侵染的植物全身终身带毒，目前尚无有效药物可以治愈。利用植物茎尖等方法脱毒，培育无病毒苗，是解决病毒危害的有效途径。
2、什么叫无病毒苗？是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。
3、为什么茎尖培养能够除去病毒？一是病毒运转速度慢。二是茎尖分生组织没有维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长点的病毒数量极少，几乎测不出来。
4、提高脱毒效果：①高温处理②低温处理③化学处理
5、其他途径脱毒：a.愈伤组织脱毒b.珠心胚培养脱毒c.微尖嫁接脱毒.
6、脱毒苗鉴定:只有经检测后被鉴定为无病毒的苗，才能确认为脱毒苗，方可用于扩大繁殖。方法：a.植物病毒症状检测（目测法）---随时观察植株茎、叶、芽是否出现该种病毒所特有的可见症状 b.指示植物检测法---
指利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类标准的方法。c. 血清学检测法--把提纯的病毒（抗原）注射到动物体内（家兔等），则在体液特别是血液中产生抗体d.电子显微镜检测法----可观察到有无病毒及病毒颗粒大小、形状和结构。e.分子生物学鉴定法.
7、无病毒苗的保存和繁殖---无病毒苗的保存：A.隔离保存B.长期保a.低温保存b.冷冻保存。无病毒苗的繁殖:A.无病毒苗的繁殖方法①嫁接繁殖②扦插繁殖③压条繁殖④匍匐茎繁殖⑤微型块茎繁殖。B.无病毒苗繁殖生产体系
第五章原生质体培养与体细胞杂交
1、原生质体的概念：指植物细胞除去细胞壁以外的部分。
2、原生质体的用途：①体细胞杂交②由于原生质体没有细胞壁，所以不同的原生质体可以相互靠近，发生融合，进行细胞杂交。2个不同植物体细胞发生融合、形成新细胞的过程，称为体细胞杂交。所得到的融合细胞为杂种细胞，再通过植株再生就可能创造出新的植物个体。
3、原生质体的分离方法：①机械法：通过对植物组织进行切割、研磨等方法破坏植物细胞壁，使原生质体游离出来的一种方法。缺点:效率极低、原生质体破碎严重，完好的原生质体数量少。优点：对原生质体以后的负面影响小。②酶解法：利用一些酶分解植物细胞壁而获得原生质体的方法。优点：分离原生质体的效率很高，用少量的材料就可以得到大量完整的原生质体，已成为分离原生质体的最主要方法。
4、原生质体培养：发育过程：原生质体在培养过程中，首先形成细胞壁（原生质体由圆形变为一定形状），后来进行分裂、形成细胞团、愈伤组织、完整植株。
5、体细胞杂交：2个不同体细胞发生融合的过程，称为体细胞杂交。
6、体细胞杂交概念：即原生质体融合，使分离下来的不同亲本的原生质体，在人工控制条件下，像性细胞受精作用那样相互融合成一体。
7、原生质体融合的意义：◆使植物无性杂交成为可能◆使有性杂交根本无法获得的种间、属间、科间远缘杂种成为现实◆打破了物种间的界限
8、原生质体融合的类型：?自发融合?诱发融合
9、融合时可能出现的融合形式：A、异核体或异核细胞（细胞质融合，细胞核没有融合）B、杂种原生质体或合子细胞（双核异核体的细胞核融合产生的）C、同核体（相同原生质体融合产生）D、非对称杂种或细胞质杂种10、诱发融合的主要方式有：?化学融合方法：采用化学融合剂，促使原生质体相互靠近、粘连融合。常用的化学融合剂主要有PEG、NaNO3等。?物理融合方法
11、原生质体融合过程：?原生质体在诱融剂或正弦电场作用下凝集，彼此靠近；?两个相邻原生质体之间的质膜相互融合，随后两个亲本原生质体质膜上的受体、糖蛋白、糖脂等成分也在融合后的质膜上重新分布；?细胞质发生融合；?细胞核发生融合，形成单核融合细胞。
12、影响原生质体融合的因素：A、原生质体质量对细胞的融合起着至关重要的作用，高质量的原生质体是细胞融合的首要条件B、融合方法C、融合参数
各种融合液都应选择适当
13、互补选择：利用两个亲本具有不同遗传和生理特性，在特定培养条件下，只有发生互补作用的杂种细胞才能生长的选择方法。
14、互补选择方法：A、白化互补选择法B、营养缺陷型互补选择C、抗性互补选择D、代谢互补抑制选择
15、机械选择法：利用融合细胞所具有的可见标记，在倒置显微镜下，用微管将融合细胞吸取出来进行选择的方法。
植物组织培养练习题 1.植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞， 进行离体培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件； 植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞 脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质 体等。 4.脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的 全部操作过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类 物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。 二填空 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。
植物组织培养报告内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
大蒜茎尖的组织培养 谢婷婷江宋青万嫣文吕凌宇一、实验目的 掌握植物组织培养的相关理论知识及操作方法； 通过自行设计并完成实验，提高动手能力和思维能力； 利用植物细胞的全能性，使大蒜茎尖经过脱分化作用形成愈伤组织，再分化为有结构的组织和器官，最终增殖培育出大量品质优良的大蒜试管苗。二、实验原理 植物组织培养是利用植物细胞的全能性原理。植物组织培养是在无菌环境下，将离体的植物器官、组织以至单个细胞，在人工配置的培养基上培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化”。已经脱分化的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化”。 三、实验材料、试剂和器材 1 供试材料 以购于府前菜场的大蒜为实验材料，实验在丽水学院生态学院组培实验室进行。 2 仪器与设备 超净工作台、培养事、电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、量筒、移液
管。 3 试剂 70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、蔗糖、琼脂条、6-BA（1.5 mg/L；2.0 mg/L）、2,4-D（2.0 mg/L）、NAA（1.0 mg/L；）、IBA（2.0 mg/L）、10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物。 四、实验步骤 1.培养基的配制及灭菌 诱导培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L 出芽培养基：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L 生根培养基：MS+IBA 2.0 mg/L （1）将MS母液（10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物）按顺序排列、检查是否失效。 （2）在装有3/4蒸馏水的容器中加入0.7%琼脂和3%蔗糖，加热溶化。（3）依次吸取适量各种母液移到容器中。 （4）用蒸馏水定容到相应体积。 （5）调节pH值(用0.1M的NaOH或HCl调节)至5.8-6.0。 （6）向培养基中加入适量激素。 （7）将配制好的培养基进行分装（20-30ml/瓶）。 （8）用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（烧杯、培养皿、灭菌水等），需同时灭菌。 （9）将灭菌后的培养基于常温下放置一星期，观察有无污染。
植物组织培养考试复习题 植物组织培养 绪论P1 第一章植物组织培养的基本原理P3 第二章植物组织培养的基本原理P6 第三章植物器官和组织培养P口 第四章胚胎培养及离体授粉P16 第五章花药和花粉培养P20 第六章植物细胞培养P24 第八章原生质体培养P27 第九章植物离体繁殖P30 第十章无病毒苗木培育P33 植物组织培养基本操作P35 1 绪论 植物组织培养的概念植物组织培养是在无菌和人工控制的环境条件 下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、 由于培养的植物材料已脱离母体，乂称为植物离体培养(Plant culture in vitro)o 广义：对植物的器官、组织、细胞及原生质体进行离体培养技术植物组织培养
狭义：对植物的组织(分生组织、表皮组织、薄壁组织等)及培养产生 的愈伤组织进行离体培养。 1.无菌：使培养器皿、器械、培养基和培养材料等处于无真菌、细菌、病毒等微生物的状态，以保证培养材料在培养器1111中正常生长和发育。 2.人工控制的环境条件：对光照、温度、湿度、气体等条件进行人工 控制，以满足植物培养材料在离体条件下的正常生长和发育。 3.外植体：由活体（in vivo）植物体上提取下來的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。（植物组织培养中，使用的各种器官、组织和 细胞统称为外植体。） 4.愈伤组织：外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分 化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。 （在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。）植物组织培养的特点 植物组织培养的主要特点是采用微生物学的实验手段来操作植物离体 的器官、组织和细胞。具体特点表现在： 1）组织培养的整个过程都是在无菌条件下进行的，外植体、培养基、接种环境都须经过无菌处理。 2）组织培养在多数情况下是利用成分完全确定的人工培养基进行的, 除少数特殊情况（进行营养缺陷型突变细胞的筛选）夕卜，素、微量元素、有机物和植物激素，培养基的PH和渗透压也是人为设定的。因此，在组织下也能再生完整植株。14）组织培养物通过连续继代培养可以不断增殖，
植物组织培养实验报告 一、实验目的 1．掌握无菌操作的植物组织培养方法； 2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、 叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通 过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理 解。 二、实验原理（一）植物组织培养 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下， 能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分 化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称 为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统 以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。（二）植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一 定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。（三）组织的分化与器官建 成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具 有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组 织而直接诱导出芽、根。 （四）培养基的组成 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成 功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维 生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验器材 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻 璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。 四、实验材料 豌豆种子 五、实验药品 药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂 等。 六、实验步骤 （一）培养基母液的配制 表1.ms培养基个成分的含量（单位：mg/l） 表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数 名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素 扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l 20 20 20 20 20 10 10 5 （注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积） 表3.配制母液所需的药品及称取量
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植物组织培养试题库 一、名词 外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子 等器官以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。 热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病 植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。 平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培 养基底上的培养方法。 消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。 玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水
渍状，这种现象称为玻璃化。 脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在 表现阴性反应的苗木。 灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，
即把所有生命的物质全部杀死。 褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化
成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响 材料的培养。 微尖嫁接：指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技 术。主要程序：无菌砧木培养—茎尖准备—嫁接—嫁接苗培养—移栽。 植物细胞全能性：一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会 有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在适当的条件下可以通过分裂、分化 再生成一个完整的植株。 人工种子：将组织培养产生的体细胞胚或不定牙包裹在能提供养分的胶囊里，再 在胶囊的外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜，形成一种类似自然 种子的结构。 试管苗驯化：植物组织培养中获得的小植株，长期生长在试管或三角瓶内，体表 几乎没有保护组织，生长势弱，适应性差，要露地移栽成活，完成由“异养”到 “自养”的转变，需要一个逐渐适应的驯化过程。 器官培养：植物的根、茎、叶、花器（包括花药、子房）和幼小果实的无菌培 养。 微体嫁接：指将 0.1-0.2mm 的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无菌 实生砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的的植株。 快速繁殖(微繁殖): 用组织培养的方法,使植物的部分器官,组织迅速扩大培养, 并移植到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法. 脱分化:将已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体的抑制性影响下解脱出来, 恢复细胞的分裂活性.一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化. 原生质体融合(体细胞杂交):就是使分离下来的不同亲本的原生质体,在离体条 件下通过诱导发生的质膜融合进而细胞核融合,像性细胞受精作用那样互相融合 成一体的现象. 愈伤组织培养:是指将母体植株上的外植体,接种到无菌的培养基上,进行愈伤组 织诱导,生长和发育的一门技术
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第1章复习测试题 二、填空题 1．根据外植体的不同，一般可以将植物组织培养分为：植株培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、细胞培养和原生质体培养。 2．在植物组织培养中，外植体脱分化后，再分化形成完整植株的途径有两条：一是器官发生途径，二是胚状体途径。 3．通过器官发生再生植株的方式有三种：第一种最普遍的方式是先分化芽，再分化根；第二种是先分化根，再分化芽，这种方式中芽的分化难度比较大；第三种是在愈伤组织块的不同部位上分化出根或芽，再通过维管组织的联系形成完整植株。 4．体细胞胚发生的途径可分为间接途径和直接途径。 5．植物组织培养的整个历史可以追溯到19世纪末和20世纪初。一个多世纪来，植物组织培养的发展大致可以分为探索、奠基和迅速发展三个阶段。 6．在Schleiden和Schwann所发展起来的细胞学说推动下，1902年德国植物生理学家G．Haberlandt提出了细胞全能性的设想，并成为用人工培养基对分离的植物细胞进行培养的第一人。 7．White、Gautheret和Nobecourt在1939年确立的植物组织培养的基本方法，成为以后各种植物组织培养的技术基础，他们三人被誉为植物组织培养的奠基人。 8．1958年英国人Steward等将胡萝卜髓细胞培养成为一个完整植株，首次通过实验证明了植物细胞的全能性，成为植物组织培养研究历史中的一个里程碑。 9．1960年Cocking等人用酶分离原生质体获得成功，开创了植物原生质体培养和体细胞杂交工作。同年Morel培养兰花的茎尖，获得了快速繁殖的脱毒兰花。其后，国际上相继把组织培养技术应用到兰花的快速繁殖上，建立了“兰花工业”。 10．花药培养在20世纪70年代得到了迅速发展，获得成功的物种数目不断增加，其中包括很多种重要的栽培物种。烟草、水稻和小麦等的花培育种在我国取得了一系列举世瞩目的成就。 三、是非题 （×）1．从理论上说，所有的植物细胞与组织材料都能培养成功，其培养的难易程度基本相同。 （√）2．愈伤组织是一种最常见的培养类型，因为除了茎尖分生组织培养和少数器官培养外，其它培养类型都要经历愈伤组织阶段才能产生再生植株。 （√）3．在组织培养中可采用愈伤组织诱变、花粉培养诱变等方法来进行植物育种等。 （×）4．单倍体育种已成为改良植物抗病、抗虫、抗草、抗逆性、品质等特性的新的重要手段。 （√）5．利用植物组织或细胞大规模培养，可以从中提取所需的天然有机物，如蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱、天然色素以及其它活性物质。 四、选择题 1．在A中培养物生长过程中排出的有害物质容易积累，由此造成自我毒害，所以必须及时转移。
植物组织培养实验报告 学院：生命科学技术学院 班级：11生物技术(制品) 学号：2011192017 姓名：李鹏
植物组织培养实验报告 实验一植物组织培养母液的配制 一、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 ,CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O,H 3 BO 3 ,KI,Na 2 MoO 4 ·2H 2 O CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸， 蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。
农业生物技术第二章植物组织培养试卷 班级___________ 姓名___________ 得分______________ 一、单项选择题（60） 1．植物组织培养是（） A．离体的植物器官或细胞培育成愈伤组织B．愈伤组织培育成植株 C．离体的植物器官、组织或细胞培养成完整植物体 D．愈伤组织形成高度液泡化组织 2．由于培养物脱离母株在试管内培养,故将植物组织培养又叫（） C．器官培养 D．离体培养 A.初代培养 B.继代培养 3．细胞形态和功能发生永久性变化过程称为（） A.分生 B.分化 C．脱分化 D．再分化 4．对外植体进行的第一次培养称为（） A.初次培养 B.器官培养 C．初代培养 D．继代培养 5．在人工培养基上通过诱导外植体而形成的一团无序的薄壁细胞团叫（） A.分生组织 B.保护组织 C．同化组织 D．愈伤组织 6．大量生产实践证明,通过（）可以有效地去除植物体内的病毒,获得无毒种苗. A.茎段培养技术 B.茎尖脱毒技术 C．组织快繁技术 D．转基因技术 7．植物体因受伤或生理上分离而失掉组织或器官后,恢复或复制失去的部分,形成新的完整植株的能力,称为（） A.植物细胞全能性 B.植物的极性现象 C．植物的再生功能 D．细胞的分化 8．下列关于细胞全能性叙述正确的是（） A.每个生物体内的所有细胞具有相同的功能 B.生物体内任何一个细胞可完成该生物体全部功能 C．生物体每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能 D．生物体每个细胞都经过产生、分裂、生长、衰老、死亡的全过程 9．构成胚的所有细胞几乎都保持着未分化的状态和旺盛的分裂能力，称为（） A.脱分化细胞 B.成熟细胞 C．胚性细胞 D．再分化细胞 10．愈伤组织表面和内部形成很多胚状体，称为（） B.胚泡C．体细胞胚D．合子胚 A.胚囊 11．植物再生功能的产生是由于植物受伤组织产生了（） A.细胞分裂素 B.赤霉素 C．创伤激素 D．生长素 12．草莓茎尖在4℃黑暗条件下，可以保持生活力达（）年之久 A.4 B.5 C．6 D．8 13．脱毒培养指的是（） A.种苗消毒后的培养 B.种苗及土壤消毒后的培养 D．无毒茎尖的培养技术 C．外植体消毒后的培养
1.（2014广东卷）（16分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下： 在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题： ⑴选用新生营养芽为外植体的原因是，诱导外植体形成PLBs的过程称。 ⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在，，。 ⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题： ①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基后按比例加入。②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。
【答案】（1）细胞分化程度低，容易诱导形成PLBs（2分）；细胞的脱分化（2分）（2）生长起始快（2分），快速生长时间较长（2分）；PLBs产量较高（2分）；（3）①灭菌、冷却（2分）；②75（2分）；③PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大（3分） 【解析】（1）新生营养芽分裂能力强，全能性容易表达；根据题干可知，PLBs类似愈伤组织，外植体形成愈伤组织的过程是脱分化。（2）据图分析，光照下PLBs的重量高于黑暗条件下，原因可能是光照有利于细胞增殖、叶绿体的形成和进行光合作用制造有机物。（3）①由于ABA受热易分解，所以各种液体培养基灭菌后，冷却，再加入不同浓度的ABA ②根据题干可知，实验50天完成，每10天取样，需要取样5次，4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复，因此每次取样需要记录15个样品中的数据，共需要测定样品数75 ③适量的ABA可提高生物碱产量，当样品的平均值最大时，所对应的ABA浓度和时间为最适。 2.（2014江苏卷）（9分）为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题： （1）外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为。 （2）在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如右图所示。细胞干重在12d后下降的原因有；培养液中蔗糖的作用是、。 （3）多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常采用纤维素酶和酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞（2n）经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是、。 （4）为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有（填序号）。 ①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋②必须在光照条件下培养
植物组织培养实验报告 摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。 关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织 1.材料与方法 1.1实验材料：大豆子叶 1.2实验试剂与仪器 （1）试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（NAA、2，4-D、KT、6-BA）、无菌水、升汞、NaOH溶液 （2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。 1.3实验方法 1.3.1培养基的配制与灭菌 1.3.1.1 配制培养基的准备阶段 （1）准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80；（2）在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g 琼脂4份，7.5g 蔗糖4份，在烧杯里用千分之一天平上称取1.185g MS干粉4份（烧杯不要清洗）；
（3）剪小圆纸片40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。 （4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。 1.3.1.2 配制培养基 （1）在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂 实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL 激素的加样量(ml) 编号培养基配置 6-BA NAA KT 2,4-D 1 MS+6-BA（1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L) 0.5 0.25 2 MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L) 1.0 0.5 3 MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 0.25 0.5 4 MS+KT（1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L) 0. 5 1.0 （2）用量筒量取250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖，混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml； （3）当温度降到60℃左右时，将溶液pH 调至5.8，一般加4滴NaOH溶液即可；（4）取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml 左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。 （5）用相同的方法配置2-4号培养基，并分装、捆扎。 1.3.1.3高压湿热灭菌 （1）将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭菌
植物组织培养技术所有填空题 填空题(每空1分，共20分) 1、去除植物病毒的主要方法是_组培法___和_理化法___两种方法，当把二者结合起来脱毒效果最好。 2、原生质体的融合可实现__ 体细胞___的杂交，其融合的方式分为_自然融合__和_人工诱导融合_两类。 3、在组织培养中，非洲菊是靠__丛生芽 ____的方式进行繁殖的，而蝴蝶兰是以__原球茎增殖_的方式进行快繁的。 4、单细胞培养的方法主要有 --看护培养--、 ---微室培养--- 及 ---平板培养----。 5、在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以 __0.3—0.5___mm、带__1—2__个叶原基为好。 6、植物组织培养按培养过程中是否需要光，可分为__ _光___培养和__ _暗__培养。 7、细胞的再分化有 ----器官发生--- 和 ---体胚发生---- 两种形式。 8、连续培养有 ----浊度恒定法---- 和----化学恒定法---- 两种方法。 9、通过茎尖培养脱毒苗的过程中，切取茎尖的大小与其成活率成__正比 __，而与脱毒效果成_反比 __。 10、一个已停止分裂的成熟细胞转变为_____未分化_____状态，并形成__未分化的愈伤组织___的现象称为"脱分化"。 11、植物的胚胎培养，包括____胚__培养、__ _胚乳____培养、____胚珠___培养、子房培养以及离体授粉的。
12、在组织培养中，IAA、ZT 和GA 必须用____过滤灭菌__法灭菌，而接种室空间采用_ __紫外线照射_或__甲醛熏蒸__法灭菌。 13、幼胚培养时，其发育过程有__ __早熟萌发__、_ _呸性发育____、_ __形成愈伤___三种方式。 14、原生质体的分离有__ _机械法___和__ 酶降解法____两种方法。 15、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为_普通茎尖培养__培养和__茎尖分生组织__培养两种类型。 16、花药培养是__ _器官__培养，花粉培养属于__ 细胞___培养，但二者的培养目的一样，都是要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞，最后发育成_单倍体植株_。 17、不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样，次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生 ___ClO-_______来杀菌的;升汞是靠__重金属________来达到灭菌目的。 18、一个已停止分裂的成熟细胞转变为__ 分生__状态，并形成_ 未分化的愈伤组织__的现象称为"脱分化"。 19、White 培养基__ _无机盐____浓度低，适合生根培养。 20、在无毒苗的组织培养中，外植体的大小与其成活率成__ ___正比_____，而与脱毒效果成___ _反比_____。 21、由胚乳培养可以获得__ _单___倍体植株，经秋水仙素处理可以获得___二_倍体植株。 22、使单倍体植株染色体加倍的途径主要有 ---自然加倍--、 ----人工加倍---- 和 ---通过愈伤组织再生加倍。。 23、细胞悬浮培养有 ----成批培养--- 和 ----连续培养------ 两种类型。
试卷编号NO： 高等函授教育《植物组织培养》试题 学号：姓名： 一名词解释：（10*2分=20分） 1、植物细胞组织培养 2、细胞全能性 3、脱分化 4、外植体 5、试管苗驯化 6、间接不定芽发生 7、双极性 8、微体嫁接 9、人工种子 10、体细胞无性系变异 二填空：（30*1分=30分） 1、目前植物组织培养应用最广泛的方面是 和。 2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做，另一种叫做。 3、培养用具的常用灭菌方法有、、 。 4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行，而要进行。 5、一般来说，黑暗条件下有利于的增殖，而往往需要一定的光照。 6、植物离体授粉技术通常包括、、 三个方面。 7、一般液体培养的继代时间较短，继代一次；而固体培
养继代时间可以长些，继代一次。 8、外植体器官发生的三种途径包括、、。 9、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生植株，胚 培养通常产生植株，通常产生三倍体植株。 10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、 、。 11、在生长素中，对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性作用，但是对却有抑制作用。 12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时，常用 来衡量细胞培养效果。 13、用药剂处理是诱导染色体加倍的传统方法。 三计算题（1*10分=10分） 某培养基的配方是MS＋BA 2.0mg/L＋NAA 0.5mg/L＋2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素２０倍，微量元素500倍，铁盐100倍，有机物５０倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.1mg/ml。要配制400ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）四简答题（5*5分=25分） 1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？ 2、简述外植体消毒的一般步骤。
0．填空 1.根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、(器官培养、细胞格养、原生质体培养(悬浮培养 2.植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段，快速发展和快速发展和应用阶段 3，1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年, White出版了《植物组织培养手册》培养等类型从而使植物组织培养为一门新兴学科。 一．填空、 1，组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、调机、_天平、显微镜、_蒸馏水，发生器，酸度计 养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分)、_③植物生长调节物质、_④碳水化合物、⑤其它物质 3、培养基最常用的碳源是_蔗糖,使用浓度在1%-5%常用3% 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织棱以生长的碳源而且还能维持培养基渗透压 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物般用量6-10g/L之间 6.驯化的目的:在于于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使试健壮,提高苗的移裁成活 7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向,其比值高:有利于根的形成和愈伤组织的形成:低:有利于芽的形成 8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下,锅内温度达_121℃C,维持_20-30min、 9.选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。 10、诱导胚状体比诱导芽的优点:(1)数量多、(2)速度快、_(3)结构完整 11、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌 12、培养基中加入活性炭的目的:利用其吸附能力,减少一些有害物质的影响大 13、筛选培养基的方法:单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法 14、植物培养技术:灭菌、接种种、培养、驯化四个环节 15、试管苗的驯化注意:基质、温、光、水、肥、气的综合管理 二．填空 1.绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段 2.愈伤伤组织形成大致经历诱导期、分裂期一和分化期三个时期 3、愈用植物生长调节物质时要注意:种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值4.愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式 5.组织培养细胞再分化包括四个水平:细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化(器宣发生)和植株水平的分化 三．填空: 1.植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过,最小只有几十微米的茎尖进行培养,目的是获得无病毒植株:后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养,目的是离体快繁 3.不定芽产生的途径一是从外植体上直接产生二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生 4.离体叶培养是指包括叶原基、叶栖、叶鞘、叶片、子吐等叶组织的无菌培养 5.在离体叶培养中,6-BA和KT利于芽的形成;24D利于愈伤组织的形成 四．填空 1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养 2、离体胚的培养分为二种类型:。成熟胚培养和_幼胚培养六
植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。 三实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA 或 2 ，4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ） MS 培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三实验步骤 1. 配制培养基 （1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为10 g/L ，2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂10 g/L ）。 （2 ）试验培养基：在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。 吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 三角烧瓶中，每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，
植物组织培养复习题（习题） 一、名词解释 愈伤组织：在培养基上由培养物产生的无序生长且没有一定结构的薄壁细胞团。 外植体：在组织培养中，由植物体上取下来进行离体培养的那部分组织或器官. 脱分化：由高度分化的植物器官，组织或细胞经过离体培养，产生愈伤组织的过程。 半连续培养：利用培养罐进行大量细胞培养的一种方式。 无性系变异：由任何形式的细胞培养所产生的植株所表现出来的差异。 胚状体：在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 看护培养：用同种或异种材料的愈伤组织作为看护组织培养细胞的一种方法。 无融合生殖：由配囊中卵细胞以外的其他细胞发育成的单倍体植株。 种质：亲代通过生殖细胞活体细胞直接传递给子代并决定固有生物性状的遗传物质。 悬浮培养：将游离的植物单细胞或小细胞团，按一定的细胞密度在受到不断拉动或摇动的液体培养基中进行培养的一种方式。 早熟萌发：在培养后迅速萌发为幼苗，不继续进行胚状生长，超过正常发育阶段。 选择压：在2个相对性状之间，一个性状被选择而生存下来的优势。 细胞全能性：任何有完整细胞核的植物细胞具有全部的遗传信息，在一定条件下，均具有分化，发育成完整植株的潜在能力。 条件培养基：在培养集中加入高密度的细胞进行培养，经过一段时间后，这些细胞向培养基中分泌一些促进细胞生长的活性物质，使培养基条件化，使原来在合成培养基上不能分裂的细胞发生分裂。 离体授粉：将未授粉的胚珠，子房或柱头从母体上分离下来，进行无菌培养，并通过一定的方式授给无菌花粉，使其在试管实现受精的技术。 同步化培养：培养基多数细胞都能同时通过细胞周期的各个阶段。 植板率：(每个平板上形成的细胞团数/ 每个平板上接种的细胞总数) * 100%、 继代培养：对来自于外植体所增殖的培养物通过更换新鲜培养基及不断切割分离进行的连续多代的培养。 无性系：由任何形式的细胞培养所产生的植株。 细胞融合：在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。 二、填空题 1、根据外植体的的种类不同，组织培养可以分为组织培养、细胞培养、器官培养、原生质培养和胚胎培养五种类型。根据培养基的物理性状，组织培养可以分为固体培养基和液体培养基两种类型。 2、对高温高压条件下易降解变质的物质，在灭菌时应采用过滤灭菌方法。 . .
月季植物组织培养实验报告 姓名：张恒玉 （天津师范大学10生乙10517085） 摘要：月季（Floribunda roses）为蔷薇科蔷薇属木本植物,其花姿优美，花 型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一。植物组织培养主要以绿色植物细胞或组织块为研究主要对象，把植物体上的生活器官、组织块活细胞从整体上离体下来进行人工培养。以细胞全能性为理论基础对最适月季培养的培养基、激素、培养基质进行筛选，使离体组织经过脱分化和再分化而发育成新的植物个体。为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。 关键词：月季组织培养 Rose Plant Tissue Culture Lab Report Name: ZhangHengyu （Tianjin Normal University college of Life Science, Biological Sciences 300387） Abstract:Rose (Floribunda roses) for the woody Rosaceae Rosa, the beautiful flower position, abundant flowers, colors available, easy to trim the tree, planting small difficulty; its flowers large, beautiful, elegant, noble. Applications in the flowers, the status and the proportion rose growing is the world's leading one of the four cut flowers. Plant Tissue Culture main object of the green plant cells or tissue blocks for research, Of life on the plant organ, tissue block living cells isolated from the whole down the artificial culture, Cell totipotency theory based on the optimum rose culture medium, hormones, culture media filter, Isolated tissue and develop into new individual plants after dedifferentiation and redifferentiation. breeding of new varieties offer a new way, in the rose show a significant improvement potential applications. Keywords: Rose tissue culture 1 月季介绍
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植物组织培养试题库 一、名词 外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子 等器官以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。 热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病 植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。 平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培 养基底上的培养方法。 消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。 玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水
渍状，这种现象称为玻璃化。 脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在 表现阴性反应的苗木。 灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，
即把所有生命的物质全部杀死。 褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化
成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响 材料的培养。 微尖嫁接：指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技 术。主要程序：无菌砧木培养—茎尖准备—嫁接—嫁接苗培养—移栽。 植物细胞全能性：一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会 有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在适当的条件下可以通过分裂、分化 再生成一个完整的植株。 人工种子：将组织培养产生的体细胞胚或不定牙包裹在能提供养分的胶囊里，再 在胶囊的外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜，形成一种类似自然 种子的结构。 试管苗驯化：植物组织培养中获得的小植株，长期生长在试管或三角瓶内，体表 几乎没有保护组织，生长势弱，适应性差，要露地移栽成活，完成由“异养”到 “自养”的转变，需要一个逐渐适应的驯化过程。 器官培养：植物的根、茎、叶、花器（包括花药、子房）和幼小果实的无菌培 养。 微体嫁接：指将 0.1-0.2mm 的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无菌 实生砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的的植株。 快速繁殖(微繁殖): 用组织培养的方法,使植物的部分器官,组织迅速扩大培养, 并移植到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法. 脱分化:将已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体的抑制性影响下解脱出来, 恢复细胞的分裂活性.一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化. 原生质体融合(体细胞杂交):就是使分离下来的不同亲本的原生质体,在离体条 件下通过诱导发生的质膜融合进而细胞核融合,像性细胞受精作用那样互相融合 成一体的现象. 愈伤组织培养:是指将母体植株上的外植体,接种到无菌的培养基上,进行愈伤组 织诱导,生长和发育的一门技术
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