高效液相色谱-蒸发光散射检测法
同时测定四君子丸中的5种有效成分
四君子丸为四君子汤的现代剂型，由党参、白术、茯苓、炙甘草组成，被《中华人民共和国药典》(2005版)收载［1］。现代药理学研究证明，四君子汤可增强机体的抵抗力，调节机体各方面的功能，对垂体、心血管功能、消化道运动功能和免疫功能有明显的改善作用［2］。四君子丸含有党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ等主要活性成分［3－7］。对于党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的定量分析方法，已有的文献报道均是对其中的一种或两种成分进行测定［8－14］，尚未见对上述5种活性成分同时测定的报道。按照药典［1］的规定，对四君子丸的鉴定仅依靠薄层色谱法进行，结果比较粗放。本文对四君子丸中的上述5种活性成分同时进行了含量测定，可为四君子丸的全面质量控制提供实验依据。
1实验部分
1.1仪器与试药
LC7000高效液相色谱仪(海能仪器)，包括LC7011输液泵，LC7070蒸发光散射检测器;HanonClatity色谱工作站。HIQ SIL C18V色谱柱(250mm× 4.6mm，5μm)。甲醇(色谱纯)，二次蒸馏水(自制)，冰醋酸(分析纯);党参炔苷、苍术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、茯苓酸和甘草酸铵对照品;党参、白术、茯苓、甘草均购于济南漱玉平民药店;用于方法优化的四君子丸样品为自制，每丸平均质量为3.0g，符合中国药典对丸剂的各项规定要求。测定的四君子丸实际样品分别为5个药品生产厂家的产品。
1.2对照品溶液的制备
分别精密称取党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ对照品适量，分别配制质量浓度为6. 03，3.78，12.24，3.62，7.80g/L的储备液。将上述5种储备液各取500μL混合、摇匀，即得含党参炔苷1.21g/L、茯苓酸0.76g/L、甘草酸2.45g/L、苍术内酯Ⅲ0.72g/L和白术内酯Ⅰ1.56g/L的混合对照品储备液。
1.3供试品溶液的制备
取丸剂研碎，并称取1.00g，加入乙醇15mL，超声提取30min，过滤。滤渣再重复提取2次。合并提取液并浓缩，转移至10mL容量瓶中，用乙醇定容，摇匀;取其中1mL于16000r/min速率下离心10min，上清液作为供试品溶液。
1.4色谱条件
色谱柱:HIQ SIL C18V柱(250mm× 4.6mm，5μm);流动相:0.5%冰乙酸水溶液为流动相A，甲醇为流动相B;梯度洗脱程序:0－40min，80%A－20%A;流速: 1.0mL/min;进样量:10μL;漂移管温度:55℃;喷雾器加热级别:60%;载气:氮气，压力0.2MPa;信号增益值:50。
2结果与讨论
2.1色谱条件的优化
2. 1.1检测器的选择
由于欲测定的样品中苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的紫外吸收比较弱，且苍术内酯Ⅲ含量较低，为了提高检测的灵敏度，本文采用蒸发光散射检测器检测。以信噪比(S/N)为指标，分别对蒸发光散射检测器的漂移管温度和载气压力进行了优化。结果在漂移管温度55℃、载气压力0.2MPa(30psi)时，可以获得最佳的信噪比。
2. 1.2流动相及洗脱程序的优化
本文的前期研究工作发现，四君子丸提取物的组成复杂，干扰成分多，欲测定的各组分的保留因子范围较宽，不适宜等度洗脱，因此选择了梯度洗脱。流动相分别选择甲醇-水(含冰乙酸)、甲醇-水(含磷酸)体
系进行梯度洗脱试验，相对来说，前者比后者的分离度好，灵敏度高。应用不同梯度陡度(T)的甲醇-水(含冰乙酸)体系进行试验的结果表明，在0
－40min，甲醇的体积比从20%升至80%，即T=0.015时，可在40min内使所测定的组分分离。
为了考察冰乙酸的浓度对测定组分色谱行为的影响，在T=0.015条件下，分别用0～ 1.5%(体积分数)的冰乙酸进行梯度洗脱。结果表明，当以甲醇和0.5%冰乙酸水溶液为流动相时，各色谱峰的对称性较好，峰形尖锐，且各峰与相邻峰的分离度均大于1.2，所以选择了1.4节所述的流动相条件。
2.2系统的适用性
取供试品溶液10μL进样，记录色谱图，党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的保留时间分别为7.1，11.6，17.2，23.4和26.5min，各峰与相邻峰的分离度均大于1.2。供试品及对照品的色谱图见图1。
2.3方法学考察
2. 3.1线性方程、检出限及精密度
将对照品储备液稀释成不同的浓度，按前述色谱条件测定峰面积，分别以各分析物色谱峰面积(Y)的对数值为纵坐标、质量浓度(X，g/L)的对数值为横坐标绘制标准曲线，得到党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的线性方程、相关系数和线性范围(见表1)。取混合对照品储备液不断稀释后进样分析，以3倍信噪比确定检出限，结果
见表1。
取一定浓度的混合对照品溶液，分别进行峰面积和保留时间的日内及日间测定的精密度(以相对标准偏差(RSD)计)考察。在同一天连续进样6次，计算日内精密度;每份样品连续测定6d，计算日间精密度;结果亦列于表1。表1的结果表明，5种分析物峰面积和保留时间的RSD均较小，表明方法的重复性良好。
按1.3节的方法平行制备6份供试品，测定并计算5种有效成分的含量，党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ含量的RSD分别为2.25%，1.87%，1.58%，1.65%和1.72%，表明方法的重现性良好。
2. 3.2供试品溶液的稳定性
取新制备的同一份供试品溶液，分别在室温下放置0，1，2，4，8，12，24h后进样分析。党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ峰面积的RSD分别为1.25%，1.67%，1.19%，1.43%和1.38%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2. 3.3加标回收率
精密称取自制的丸剂12份，分为4组，每组3份。每组样品中分别精密加入混合对照品储备液0，20，50，100μL，按所建立的方法进行供试品溶液的制备和测定，计算党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的含量，计算各组分的回收率，结果见表2。
表2结果表明，所有组分的加标回收率在97.13%～100.25%范围内，RSD均小于2.44%，说明本方法准确可靠。
2.4样品的测定
分别取5个厂家生产的四君子丸，按1.3节的方法操作，取供试品溶液10μL进样分析，并计算丸剂中5种成分的含量，结果见表3。
3结语
本文所建立的反相高效液相色谱-蒸发光散射检测梯度洗脱方法能够准确、灵敏地同时测定四君子丸中党参炔苷、茯苓酸、甘草酸、苍术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的含量，测定结果可靠，为四君子丸的质量控制提供了简单、有效的检测手段。
蒸发光散射检测器(ELSD)3300 原理与操作 一.操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理包括以下三个步骤:首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 雾化(Nebulization)： 雾化(Nebulization) 经HPLC 分离的柱洗脱液进入雾化器, 在此与稳定的雾化气体(一般为氮气)混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成,液滴大小取决于分析中采用的气体流量.气体流量越低形成的液滴越大,液滴越大则散射的光越多,从而提高了分析灵敏度,但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为 2.1mm 的微径柱代替内径为4.6mm 标准型分析柱,能大大降低流动相流速,因而提高分析的灵敏度。 蒸发(Evaporation)： 蒸发(Evaporation) 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发.为特定应用设置适当的漂移管温度,取决于流动相组成和流速,以及样品的挥发性.高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度,以获得最佳灵敏度.最佳温度需要通过观察各温度时的信号噪音比率来确定。在ELSD 3300 漂移管中,距离雾化器3 英寸处有一个PTFE 涂层的不锈钢撞击器.气溶胶与撞击器相遇,大的液滴从废液管排出。余下的液滴从撞击器周围通过并经过漂移管进入到光散射检测池被检测。除去大的液滴就允许在低温模式下操作ELSD3300,适用于分析半挥发性样品。流动相和雾化气体中的非挥发性杂质会导致噪音。采用高品质的气体,溶剂和挥发性缓冲液(经过过滤的) ,会很大程度上降低基线噪音.若流动相没有完全挥发会导致基线噪音上升。仔细选择设置检测器的参数保证流动相完全挥发。 检测(Detection)： 检测(Detection) 悬浮于流动相蒸汽中的样品颗粒从漂移管进入到光散射检测池。在检测池中,样品颗粒散射激光光源发出的光而蒸发的流动相不散射。散射光被硅光电二极管检测,产生电信号输送模拟信号输出端口, 被用于模拟输出的数据采集.。ELSD 3300 光路元件的先进设计为您的HPLC 分析提供了优异的灵敏度。 二.软件界面指导 (Navigating the Software Interface) 3300 软件界面的特点是位于液晶显示屏左上角有一个可展开的菜单。下面的部分将详细描述这个软件菜单. 2.1 主菜单(Main Screen) 操作界面是在仪器使用期间显示的主界面。主界面为当前载入方法提供如下信息: 1. 谱图(Chart):当处于"运行"和"清洁"模式时，谱图显示被激活,界面显示谱图长度可达60min. 2.方法名称(Method Name) :当前载入方法的名称. 3.温度(Temperature):漂移管温度的设定值和实际读数,用"℃"表示。温度范围是从25 至120℃.。注: 漂移管共有两个加热区, 分别位于漂移管前端和后端。主界面显示的是这两个区的平均值。
蒸发光散射检测器ELSD 蒸发光散射检测器(ELSD)的原理及特点 蒸发光散射检测器(Evaporative Light-scattering Detector)是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。1993才由Alltech公司商业化生产。 一、ELSD原理: 洗脱液的雾化——流动相的蒸发——含有待测物的剩余颗粒的光散射检测 恒定流速的色谱仪(高效液相、逆流色谱、高效毛细管电泳等)洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管，drift tube)，流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。 当载气从雾化室把液滴运送到加热漂多管时，蒸发开始。在加热漂移管溶剂被除去，产生微粒或纯溶质的小滴，为了维持颗粒大小的均匀性，在这个步骤中尽量采用低的温度是相当重要的。此外，低温蒸发增强溶质结晶化，溶质颗粒越大，检测光散射的强度就越大。还有，这已被清楚的证明，相同大小的固体颗粒比液体颗粒对散射光更有效。在高的温度下，太剧烈的溶剂挥发会导致颗粒的大小不均匀，或者抑制结晶的形成，反过来又影响液体散射过程。 在这个阶段，洗脱液颗粒或液滴从加热漂移管出来进入检测池，散射入射光从光源到达这里。散射光通过光检测器(光电倍增管或光电二极管)加以定量。光检测器产生的电信号与通过检测池的颗粒数量和大小成比例。在Chromachem检测器，通过居中在可见区的多色光源(卤素灯)产生入射光束。这入射光束集中在光检测池的中间，使光检测器的灵敏度最优化。光检测器是强大的光电倍增管，与入射光束
高效液相色谱法简介 “色谱”一词是由俄国科学家斯威特提出的。色谱法是基于补充物质在相对运动物的两相之间分布时，物理或物理化学性质的微小的差异而使混合物相互分离的一类分离或分析方法。发展与上世纪初，飞速发展于五十年代，有超过30位科学家家因为它而获得诺贝尔奖，其有自己的理论和研究方法，同时也有众多的应用领域。 色谱法常见的方法有：柱色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。 柱色谱：柱色谱法是最原始的色谱方法，这种方法将固定相注入下端塞有棉花或滤纸的玻璃管中，将被样品饱和的固定相粉末摊铺在玻璃管顶端，以流动相洗脱。常见的洗脱方式有两种，一种是自上而下依靠溶剂本身的重力洗脱，一种是自下而上依靠毛细作用洗脱。收集分离后的纯净组分也有两种不同的方法，一种方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一种方法是烘干固定相后用机械方法分开各个色带，以合适的溶剂浸泡固定相提取组分分子。柱色谱法被广泛应用于混合物的分离，包括对有机合成产物、天然提取物以及生物大分子的分离。 薄层色谱：薄层色谱法是应用非常广泛的色谱方法，这种色谱方法将固定相图布在金属或玻璃薄板上形成薄层，用毛细管、钢笔或者其他工具将样品点染于薄板一端，之后将点样端浸入流动相中，依靠毛细作用令流动相溶剂沿薄板上行展开样品。薄层色谱法成本低廉操作简单，被用于对样品的粗测、对有机合成反应进程的检测等用途。
气相色谱：GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气，也叫流动相）带入色谱柱，柱内含有液体或固体流动相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于载气是流动的，这种平衡实际上很难建立起来。也正是由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解吸附，结果是在载气中浓度大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的组分后流出。当组分流出色谱柱后，立即进入检测器。检测器能够将样品组分的与否转变为电信号，而电信号的大小与被测组分的量或浓度成正比。当将这些信号放大并记录下来时，就是气相色谱图了。气相色谱被广泛应用于小分子量复杂组分物质的定量分析。 高效液相色谱：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9-107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。高效液相色谱（HPLC）是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效
E L S D蒸发光散射检测器 的原理 Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998
HPLC蒸发光散射检测器的原理 简介 蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化，并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定，与梯度洗脱不相容。另外，示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰，并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器，ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线，使得分辨率更好、分离速度更快。另外，因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为，首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 步骤1：雾化 雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器，在此与稳定的雾化气体（一般为氮气）混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成，液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大，液滴越大则散射的光越多，从而提高了分析灵敏度，但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为的微径柱代替内径为标准型分析柱，能大大降低流动相流速，因而提高分析的灵敏度。 步骤2：蒸发 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度，取决于流
2015 年版药典高效液相色谱法、质谱法
2015 版药典 --- 高效液相色谱法、质谱法 0512 高效液相色谱法 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。 注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处 理色谱信号。 1.对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱内径一般为 3.9 ～ 4.6mm，填充剂粒径为 3～lOμm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约 2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 （1）色谱柱 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物 等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰 基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。 离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。 手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。 色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残 留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。 温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当 提高色谱柱的温度，但一般不宜超过 60℃。 残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相 pH 值一般应在 2～8 之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚 合物色谱柱可耐受更广泛 pH值的流动相，适合于 pH 值小于 2 或大于 8 的流动相。 （2）检测器最常用的检测器为紫外 - 可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、 蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。 紫外- 可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与被测物质的量有关，还与 其结构有关；蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用检测器，对所有物质均有响应，结构相似的物质在蒸发光散射 检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。 紫外 - 可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一定范围内呈 线性关系，但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量通常呈指数关系，一般需经对数转换。 不同的检测器，对流动相的要求不同。紫外 - 可见分光检测器所用流动相应符合紫外 - 可见分光光度法（通则 0401）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测 器和质谱检测器不得使用含不挥发性盐的流动相。 （3）流动相反相色谱系统的流动相常用甲醇 - 水系统和乙腈 - 水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈 - 水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动 相中有机溶剂一般不低于 5%，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。
XXXXXXXXXXXXX仪器设备标准操作规程 1 目的：建立ELSD 2000ES蒸发光散射检测器标准操作规程。 2 范围：ELSD 2000ES蒸发光散射检测器。 3 责任：化验室操作者。 4 内容： 4.1 接通电源：打开仪器后面板上的电源开关，接通ELSD2000ES电源。操作窗口出现，窗口给出仪器为“待机状态”，并有一个计时器显示仪器在此状态下有多少时间。仪器将自动显示上一次运行关机前最后所采用的方法设置。 4.2 操作窗口：操作窗口是仪器运行时主显示窗口。此窗口提供当前运行方法的以下信息： ·方法：当前加载方法的名称。 ·漂移管温度：漂移管的设定温度及当前实际温度读数，单位为℃。 ·气体流量：雾化器气体的设定流量及当前实际流量，单位为L/min。 ·放大系数：当前放大系数的设定值（可能的数值为1、2、4、8和16）。设定为1代表信号没有放大，随每次放大系数的增大信号基于原数值放大两倍。 ·撞击器：当前撞击器的位置，依据当前使用的方法为开或关。 ·输出值：当仪器处于“运行”状态时，显示以mV为单位的信号值。当仪器处于“待机”状态时，显示“Standby”和待机时间。
·满量程电压：满量程电压的设置（根据所用数据采集系统设定为10mV或1000mV）。 ·出错总数：当前发生的操作错误的总数（如果有的话）。 ·窗口键：用于改变仪器状态或进入其他窗口的功能。 【Edit】：快捷键，从“运行”窗口直接切换到“编辑方法”窗口。 【Menu】：从“待机”或“运行”窗口切换到“菜单”窗口。 【Standby】：将仪器从“运行”窗口切换到“待机”状态。 【Zero】：在“运行”窗口下将输出信号调零。 【Run】：运行当前方法的设置，将仪器从“待机”状态切换到“运行”状态。 4.3 仪器状态：ELSD 2000ES有两种不同的操作状态：“待机”（‘Standby’）和“运行”（‘Run’），仪器当前的状态显示在操作窗口上。 4.3.1 待机状态：检测器通电后立即进入“待机”状态。在此状态下，激光，气流，和漂移管加热器都处于关闭状态。操作窗口显示“待机”字样和计时器表示的待机时间。可执行的窗口键是【Menu】和【Run】。 4.3.2 运行状态：在运行状态下，激光，气流，和漂移管加热器都处于打开状态，撞击器状态与设置状态相吻合。输出信号值会有显示。操作窗口会以mV 为单位显示信号输出值。【Edit】，【Menu】，【Standby】和【Zero】窗口键是可执行的。 5日常操作： 5.1 安全： 请遵守以下条例保证ELSD 2000ES操作安全： 1. 实验室保持良好通风以防止溶剂蒸汽积聚。 2. 使用通风柜或其他通风设备以防止吸入排气管逸漏的溶剂烟雾。
蒸发光散射技术讨论 1、蒸发光检测器属于质量检测器，理论上可以检测到挥发性低于流动相的任何物质，但对有紫外吸收的 样品组份检测灵敏度比较底，重现性比较差（出厂要求重现性RSD<6%即可），现常用于检测没有紫外吸收的物质。 主要原理是，流动相及组份在蒸发室，先被雾化，流动相蒸发，组份形成气溶胶，然后进入检测室，用激光照射照射气溶胶而产生光散射，测定光散射的光强而获得信号。 组份质量（m）与散射光强（I）的关系为：lgI=b·lgm+lgk k和b是与蒸发室温度及流动相性质等试验条件有关的常数。 剩下的就是一些注意事项和简单保养的问题，比如流动相中不能有盐，使用前先升温给气，再进流动相，使用完后先停流动相，后降温，最后停气，光机。 最后说明一下，使用完毕后可将流动相改为水及甲醇，调节温度及气流量冲洗蒸发室，这样可以增加使用寿命，降低噪音。 2、zzz79朋友所说“我们有一台Alltech ELSD 2000，也许是因为蒸发光散射技术本身的问题，重现性特别 差。在方法学学研究时，更是没法做。” 我想您指的重现性较差，可能是说峰面积的重现性比较差吧。如果在每天测定中均采用随行对照品进行校对，含量的重现性还可以说得过去。 我个人认为气体的流速对峰面积的影响非常大，所以如果您使用纯净的气源，精准的气体流速控制，至少在一天内的重现性不成问题。 根据ELSD的工作原理，必须使用对数方程外标两点法进行计算。但是，在实际应用过程中，如果对照品浓度和被测样品浓度较为接近，直接采用峰面积计算也不会有显著性的影响（尽管其不是合理的方法）。 3、比较赞成楼主的说法，ELSD很多人都说它重现性很差，其实我根据我自己的经验，重现性差一般应该 是指其峰面积重现性较差（和UV比较），但其色谱条件的重现性还是比较稳定的。至于标准曲线的做法，我曾经做过一系列的比较实验，也查询了一些资料，目前尚没有定论到底以峰面积和浓度直接做线性还是用自然对数还是以常用对数，三种方法都有。至于我们在实验中应该如何做线性，个人认为：不必拘泥，首先用峰面积和浓度直接做线性，如果相关系数不好，再尝试用对数关系（自然对数或常用对数）。一般都可以解决问题，不象那位同学说的方法学根本没法做，应该还是可以做的。至于楼主所说的，对照品和供试品溶液接近时可直接用峰面积计算，我不是很认同，当很接近时，可以考虑做一个比较窄的范围做线性，你如果直接用两点法做计算的话，必须得有一些数据支持，否则文章是很难发表的，也没有说服力，很容易被人质问，至于做随行对照的问题，按正规要求，不只ELSD，其他检测器的液相也应该这样做，只是因为仪器相对的稳定性所以大家都不做，对于ELSD当然做随行对照最好，至于是否一定要做，我觉得如果是仪器一直都是你一个人在用，而且条件没有变，预热也够充分，那么不做也行，但是这只是考察了自己的一个实验而已，不敢建议大家都不做，在您自己做实验时建议你还是做随行对照的好，也好心里面有底，免得造成不好的影响，呵呵。建议做随行对照。 谈到ELSE仪器的使用上，也有一些体会，但一时难以细细道来，主要就是雾化温度和气体流速的设置上，如果这两个参数设置合理，一般情况下都不会有什么问题，大部分的问题都是出在温度和流速设置不合理上。基线噪音的出现也多是因为两个参数设置不合理而导致雾化器漂移管污染那就只好清洗了，也有个别人因为操作失误而导致问题的但不多见，一般仪器厂商提高的参数设置只能用来参考，实际实验时很少完全和他提供的条件一致的，多比他提供的参数稍微高些，开始设置温度建议高些，
此帖与GC版的对应，是为了让大家更好的学习和了解LC 主要内容包括： 1.高效液相色谱法（HPLC）的概述 2. 高效液相色谱基础知识介绍（1——13楼） 3. 高压液相色谱HPLC发展概况、特点与分类 4. 液相色谱的适用性 5.应用 高效液相色谱法（HPLC）的概述 以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。 由于高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）、色谱柱可反复使用的特点，在《中国药典》中有5 0种中成药的定量分析采用该法，已成为中药制剂含量测定最常用的分析方法。 高效液相色谱法按固定相不同可分为液-液色谱法和液-固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液-液色谱）和吸附色谱法（液-固色谱）等。 目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，不易流失是其特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。C18（ODS）为最常使用的化学键合相。 根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相
的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。 在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。 系统组成： （一）高压输液系统 由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。 1.贮液罐 由玻璃、不锈钢或氟塑料等耐腐蚀材料制成。贮液罐的放置位置要高于泵体，以保持输液静压差，使用过程应密闭，以防止因蒸发引起流动相组成改变，还可防止气体进入。2.流动相 流动相常用甲醇-水或乙腈－水为底剂的溶剂系统。 流动相在使用前必须脱气，否则很易在系统的低压部分逸出气泡，气泡的出现不仅影响柱分离效率，还会影响检测器的灵敏度甚至不能正常工作。脱气的方法有加热回流法、抽真空脱气法、超声脱气法和在线真空脱气法等。 3.高压输液泵 是高效液相色谱仪的关键部件之一，用以完成流动相的输送任务。对泵的要求是：耐腐蚀、耐高压、无脉冲、输出流量范围宽、流速恒定，且泵体易于清洗和维修。高压输液泵可分为恒压泵和恒流泵两类，常使用恒流泵（其压力随系统阻力改变而流量不变）。 （二）进样系统 常用六通阀进样器进样，进样量由定量环确定。操作时先将进样器手柄置于采样位置（L OAD），此时进样口只与定量环接通，处于常压状态，用微量注射器（体积应大于定量环体积）注入样品溶液，样品停留在定量环中。然后转动手柄至进样位置（INJECT），使定量环接入输液管路，样品由高压流动相带入色谱柱中。 （三）色谱柱 由柱管和填充剂组成。柱管多用不锈钢制成。柱内填充剂有硅胶和化学键合固定相。在化学键合固定相中有十八烷基硅烷键合硅胶（又称ODS柱或C18柱）、辛烷基硅烷键合硅
高效液相色谱仪简介 系统组成、工作原理 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 高效液相色谱 （high performance liquid chromatography, HPLC）也叫高压液相色谱（high pressure liquid chromatography）、高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高分离度液相色谱（high resolution liquid chromatography）等。是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。 高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。 使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。 发展历史
一、目的：规范PL-ElS2100型蒸发光散射检测器的使用。 二、依据：PL-ElS2100型蒸发光散射检测器说明书。 三、责任人：仪分操作人员 四、内容： 4.1系统组成：本系统由1个溶剂输送泵、7725i手动进样阀、PL-ElS2100型蒸发光散射检测、N2000色谱数据工作站和电脑等组成。 4.2工作准备：PL-ElS2100型蒸发光散射检测器要求氮气纯度98%以上。打开氮气供给装置，设定压力为60-100psi。 4.2.1打开PL-ElS2100型蒸发光散射检测器电源开关，仪器开启时处于“STANDBY”模式，加热块关闭，雾化气流速设定为较低的1.2SLM。此模式下可设定仪器参数（EVAP、NEB、GAS）或者加载合适的方法； 4.2.2将工作模式设定为“RUN”，使仪器加热平衡在加热或冷却过程中，仪器会显示“NOT READY”。仪器平衡完毕后会显示“READY”并检查基线。在洗脱液未接入是噪音应低于0.2mv，这表明雾化气洁净干燥。如基线毛刺一般是由于雾化气中的粒子或水分造成的。引入洗脱液并待其平衡15min。 4.2.3再次检查基线，应不超过1mv。如是纯水应不超过0.25mv，纯有机溶剂也应不超过1mv。缓冲体系和稳定剂会明显增加噪音。 4.2.4连接色谱柱，旋开“排气阀”，“purg”键排气至管路无气泡，点击“pump”键停止排气，“排气阀”旋紧，点击“pump”键使泵运行，点击“func”功能键由低至高设定流速。 4.2.5接通电脑和ELSD检测器，然后设定实验分析所需的条件(温度和气体流速) “MODE”键为仪器运行模式；“METHOD”键显示和改变仪器方法；“EVAP”键显示和改变蒸发温度（0-120℃）；“NEB”键显示和改变雾化温度（0-90℃）；“GAS”键显示和改变雾化气流速（0.80-3.25SLM）或者加载合适的方法；将工作模式切换为“RUN”，仪器平衡完毕后会显示“READY”。 4.3进样 4.3.1色谱柱连接到ELSD检测器上且系统已达到平衡。 4.3.2 进样点击检测器“ZERO”键调零，工作站中“零点校正”按钮校正基线零点，再按一下查看基线。 4.3.3 用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以注入进样阀，扳下进样阀，工作站采集数据。 4.4清洗管路及进样口 4.4.1分析完毕后，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后以甲醇-水用分析流速冲洗，特殊情况应延长冲洗时间。 4.4.2冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。 4.4.3 关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、使用时间，仪器完好状态等。 4.5注意事项 4.5.1 应用ESLD检测器时禁止用含盐的流动相,气源调节开关一旦调整好就不要随便调动。 4.5.2随时注意排气管口和液体收集瓶。
HPLC蒸发光散射检测器的原理 简介 蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化，并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定，与梯度洗脱不相容。另外，示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰，并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器，ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线，使得分辨率更好、分离速度更快。另外，因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为，首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。
步骤1：雾化 雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器，在此与稳定的雾化气体（一般为氮气）混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成，液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大，液滴越大则散射的光越多，从而提高了分析灵敏度，但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为2. 1mm的微径柱代替内径为4.6mm标准型分析柱，能大大降低流动相流速，因而提高分析的灵敏度。 步骤2：蒸发 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度，取决于流动相组成和流速，以及样品的挥发性。高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度，
液相色谱仪的原理及分析方法 高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9′107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万)；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 特点： 1．高压：液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。 2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。 3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。 5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400 以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的75% ～80% )原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。 高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行。 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理
ELSD检测器原理 2.1蒸发光散射检测器原理 ELSD原理适用所有待测物的挥发性低于流动相的分离，事实上，新一代ELSD检测器在操作上提供更低的温度，允许半挥发性被分析物的定量，即使检测器的灵敏度可能较低。不挥发溶质，在分析柱的检测极限可以达到毫微克(ng)水平。 采用SFC，超临界流体（通常是二氧化碳）在周围环境大气压和温度条件大气中进行减压和膨胀，不像HPLC，流动相在减压作用下蒸发，形成气流，运载样品以微小颗粒喷雾的形式采用光散射检测。 应用于SFC的限制和其它形式的液相相同，也就是说，溶剂修饰物必须比被分析物具有更高的挥发性。 图1阐明蒸发光散射检测器依次发生的三个主要步骤： 色谱洗脱液的雾化 色谱流动相的蒸发 对含有待测物的剩余颗粒的光散射 每个步骤都具有明确的功能但也会改变，或者是受其它步 骤的影响，所有市场上的蒸发光散射检测器都包含以上步 骤，但在他们操作方法上会有所不同。 因为ELSD易受非线性响应的影响，所以这篇文章的 一部分专门谈到检测器的响应和定量。 图1 2.1.1雾化 这个步骤把大量体积的液体流动相转变成细小的液滴，从而溶剂更易于蒸发；较大的液滴，在蒸发步骤中需要更高的温度。剩余溶质颗粒越大，散射光的强度就更大。 在所有商业上的ELSD，雾化都是用惰性载气通过文丘里管流动，采用载气同轴包装柱洗脱液，使之通过小孔。液滴的大小和均匀性对于检测的灵敏度和重复性非常重要。在一些型号的ELSD，雾化洗脱液立即进入加热的蒸发管，一般情况下是漂移管，在这里开始进行第二步骤。但是，另一型号的则包含一个雾化室（图1）它被认为可以在三个方面增强检测器的操作。 可形成一个窄的液滴尺寸分布，最大的液滴通过在室的内壁冷凝，然后直接到废物出口或排出，在这里连续地虹吸冷凝液体。所以，用于蒸发保留的液滴所需要的蒸发温度大大降低。 柱洗脱液直接通过蒸发管的比例变化为，以纯水溶液作为淋洗液的小于10%，以有机溶剂混合液作为正相色谱洗脱液的为90-100%。这个比例与原子光谱和连接红外光谱（FTIR）和感应耦合等离子体（ICP）不同检测系统的液相作出的雾化情况非常一致。 雾化过程的温度与漂移管的蒸发温度可以各自进行独立的调节。这使得检测器很容易与SFC系统结合，在SFC系统流动相的快速减压具有很大的吸热性，通常会造成固态二氧化碳的形成。通过准确的调节雾化室的温度，可以避免由于大的温度波动影响重现性和流动相的沉淀。采用HPLC，半挥发性分析物的定量检测也可通过降低雾化室的温度来得以增强。相反的，在凝胶渗透色谱（GPC）中，高温度允许采用非常低挥发性的溶剂。雾化室的加入使得检测器的清洁简单化。 2.1.2 蒸发 当载气从雾化室把液滴运送到加热漂多管时，蒸发开始。在加热漂移管溶剂被除去，产生微粒或纯溶质的小滴，为了维持颗粒大小的均匀性，在这个步骤中尽量采用低的温度是相当重要的。此外，低温蒸发增强溶质结晶化，溶质颗粒越大，检测光散射的强度就越大。还有，这已被清楚的证明，相同大小的固
蒸发光散射检测器的工作原理和主要优势 点击次数：407 发布时间：2009-6-9 10:22:27 蒸发光散射检测器已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测。 蒸发光散射检测器工作原理 雾化： 液体流动相在载气压力的作用下在雾化室内转变成细小的液滴，从而使溶剂更易于蒸发。液滴的大小和均匀性是保证检测器的灵敏度和重复性的重要因素。 UM 3000蒸发光散射检测器，通过对气压和温度的精确控制，确保在雾化室内形成一个较窄的液滴尺寸分布，使液滴蒸发所需要的温度大大降低。 蒸发： 载气把液滴从雾化室运送到漂移管进行蒸发。在漂移管中，溶剂被除去，留下微粒或纯溶质的小滴。UM 3000蒸发光散射检测器采用低温蒸发模式，维持了颗粒的均匀性，对半挥发性物质和热敏性化合物同样具有较好的灵敏度。 检测： 光源采用650nm激光，溶质颗粒从漂移管出来后进入光检测池，并穿过激光光束。被溶质颗粒散射的光通过光电倍增管进行收集。溶质颗粒在进入光检测池时被辅助载气所包封，避免溶质在检测池内的分散和沉淀在壁上，极大增强了检测灵敏度并极大地降低了检测池表面的污染。 蒸发光散射检测器主要优势 1）可检测挥发性低于流动相的任何样品；
2）流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度；3）广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰； 4）辅助载气提高了检测灵敏度，保持检测池内的清洁，避免污染； 5）高精度雾化和蒸发温度控制，保证高精度检测； 6）可与任何HPLC系统连接。 ELSD与几种常用的检测器之间的对比 ELSD UV RID MS 应用范围通用有光吸收的化合物通用通用 响应质量相关化学相关折光度相关质量相关 灵敏度高高低高 未知物检测能不能能能 流动相影响/梯度不影响本底影响影响不影响 基线稳定性好较好差好
实验四高效液相色谱法测定V E含量 1 实验目的 1.1了解高效液相色谱仪的基本操作； 1.2了解高效液相色谱仪测定V E的原理。 2 实验原理 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。 V E（维生素E）又名生育酚或产妊酚，在食油、水果、蔬菜及粮食中均存在。有抗氧化作用，能增强皮肤毛细血管抵抗力，并维持正常通透性；有改善血液循环及调整生育功能、抗衰老作用等。V E通过高效液相色谱柱进行分离，PDA检测器检测，外标法定量。 3实验器材 3.1 实验样品 V E样品溶液 3.2 实验试剂 浓度为50μg/ml的V E标样 3.3 实验仪器 高效液相色谱仪附PDA检测器 4 色谱条件 色谱柱：C18柱；流动相速度：0.3ml/min； 进样量：5μl；柱温：30℃。
5 实验结果与讨论 5.1实验结果 本次实验采用的是单点法测定。实验结果见表1。 表1. 液相色谱仪测定苹果的VE含量 样品中VE的浓度=乙烯标样的总量×苹果的峰面积/乙烯标样的峰面积 =5μl×50μg/mL×17369/（5μl×42217）=20.57μg/mL 5.2实验讨论 本次实验中，测定标样溶液V E含量时，在指定的保留时间内并未出峰。讨论分析原因：样品溶液在上周实验后，一直置于离心管中，未避光低温保存，导致样品中V E氧化，液相测定时没有在相应的时间出峰。本次实验时间较短，且主要目的是了解高效液相色谱仪的基本操作，以及液相色谱仪测定V E的原理，故结合前组同学对V E含量的测定数据进行讨论与分析。 因时间有限，实验采用了单点法进行测量分析，且无平行重复，这样误差较大。我们以后实验时，V E标样可以选择5个浓度，每个浓度分别测定3-4次，取其峰面积的平均值后作标准曲线，这样误差更小。 6知识扩展 6.1高效液相色谱仪包括哪几个部分组成？ 答：高效液相色谱仪主要由输液系统、进样系统、色谱分离系统、检测器这四个部分组成，其流程图见图1。 输液系统包括贮液槽和输液管道、高压泵和梯度洗脱装置。贮液槽，通常是由玻璃或不锈钢等材料制成的，用来存贮足够数量、符合分析要求流动相的容器。输液管道是管道内径很小的用于连接高效液相色谱仪各主要流路系统。高压泵是将流动相在高压下连续送入色谱柱，使样品在色谱柱内完成分离过程。高效液相色谱仪采用的是往复式恒流泵，是具有输出压力高、流量稳定、流量可调范围宽、泵内死体积小、具有梯度洗脱及耐酸碱腐蚀、溶剂更换迅速等性能。梯度洗脱装
◆目的：制定ELSD-UM3000蒸发光散射检测器标准操作规程。 ◆范围：适用于ELSD-UM3000蒸发光散射检测器操作。 ◆职责：检验人员对本规程的实施负责。 ◆内容 1仪器组成、电源 1.1仪器组成：ELSD-UM3000蒸发光散射检测器，配件：XWK-Ⅲ型空气压缩机，相关 连接设备：岛津LC-15C泵、ZW色谱柱柱温箱。 1.2接通电源：将各仪器电源插头插入插座内，依次打开检测器、柱温箱、压缩机、 泵及计算机开关。 2操作 2.1开空气压缩机电源，阀门开一圈半，压力调为指定值。 2.2接柱子：褐色管接柱子入口，透明管接检测器，内部干燥珠必须保持干燥状。 2.3如果使用单泵，开岛津A泵“power”键，仪器由红灯转换为绿灯，更换所需要的流动相，然后将排液阀旋钮逆时针旋转180°以打开排液阀。 2.4按“purge”键运行，开始冲洗。如果排液阀旋钮旋转的度数超过180°，任何排出的流动相都可能包含气泡。这是正常现象。 2.5清洗完成后，以顺时针方向尽量旋转排液阀旋钮，关闭排液阀。按下“pump”键，开始泵的运行。 2.6如果使用双泵，打开两个泵的电源开关，分别更换所需要的流动相、冲洗、运行。 2.7设定泵的最高压力及流速，将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏，初始平衡时间一般需30分钟。
2.8开蒸发光散射器检测电源，设置仪器参数。 2.8.1MENU:设温度（T），室温最高到130℃。用方向键的上、下、左、右进行调节。设置完成后按“Enter”。 2.8.2 设流量（F）：雾化器流量（1-4L）；一般设为每分钟2.5，设置完成后按“Enter”。 2.9设置完成上面步骤后，按“RUN”键运行，“RUN”指示灯亮，再按“VALVE”键，“VALVE”指示灯亮。 2.10设置完成。 3工作站 3.1 打开电脑启动N2000在线工作站，选择通道1，OK。 3.2 设实验信息，方法，条件，保存路径。 3.3方法：采集时间第一次可设长些（默认60分钟），但是必须先设定，之后能够调节，设定后的到时间会自动停止。采集也可以手动停止。采样后勾选自动积分。3.4 文件保存名字：自动方式：前缀+计数。保存路径设置 3.5积分：最小面积500-100.设置完成后点击右下角的“采用”完成设置。 3.6报告编辑：勾选系统评价，谱图显示，网格线（背景），实验简介，完成后点击采用。 3.7谱图显示：设定时间，电压。 4 数据采集 4.1点击“查看基线”，待基线平衡后，点击“零点校正”，调整时间，电压到合适范围。 4.2 进样：吸取不少于60μl的样品，插入进样口，打开进样阀至“load”，将样品全部摄入进样口，打下进样阀至“inject”。在电脑上点击“采集数据”，即完成采集。 4.3采集时间完成后。点击“停止采集”，输入实验名称保存即可。 5 谱图处理（离线） 5.1打开离线工作站，打开文件，设置坐标，点击“显示设置”，设置电压时间。 5.2 积分方法：设最小面积，除去杂峰点采用，如有杂峰没有去处，点击“手动”—删除峰。最后调节峰的起落点。