实验室常用缓冲液配置方案
1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)
组份浓度：1 M Tris-HCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
浓HCl
PH
值
7.4 约70ml
7.6 约60ml
8.0 约42ml
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer(pH7.4, 7.6, 8.0)
组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA
配制量：1 L
配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
100ml
1M Tris－HCl Buffer
（PH7.4，7.6，8.0）
500mM EDTA(PH8.0) 20ml
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
组份浓度：1.5 M Tris-HCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M醋酸钠(pH5.2)
组份浓度：3M 醋酸钠
配制量：100ml
配制方法：
1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer
组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4
配制量：1 L
配制方法：
1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
NaC
8g
l
KCl 0.2g
1.42g
Na2
HPO
4
0.27g
KH2
PO4
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6)10 M醋酸铵
组份浓度：10 M 醋酸铵
配制量：100 ml
配制方法：
1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。
4. 密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
7)苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)
配制方法：
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
8）10％(W/V) SDS
组份浓度：10％(W/V)SDS
配制量：100ml
配制方法：
1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解
2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2
3.将溶液定容至100ml后，室温保存。
9）2 N NaOH
组份浓度：2 N NaOH
配制量：100 ml
配制方法：
1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。
4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
10）2.5 N HCl
组份浓度：2.5 N HCl
配制量：100 ml
配制方法：
1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。
2. 室温保存。
11）5 M NaCl
组份浓度：5 M NaCl
配制量：1 L
配制方法：
1. 称取29
2.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
11）20％(W/V) Glucose
组份浓度：20％(W/V) Glucose
配制量：100 ml
配制方法：
1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
12）SolutionI(质粒提取用)
组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
配制量：1 L
配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
25ml
1M
Tris-HCl
（PH8.0）
0.5M EDTA20ml
（PH8.0）
45ml
20％
Glucose
（1.11M）
dH2O 910ml
2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。13）SolutionII(质粒提取用)
组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS
配制量：500ml
配制方法：
1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中
10％SDS 50ml
2N NaOH 50ml
2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀
3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌
14）SolutionIII(质粒提取用)
组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH
配制量：500 ml
配制方法：
1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
KOAc 147g
CH3COOH 57.5ml
2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
15）0.5 M EDTA(pH8.0)
组份浓度：0.5 M EDTA
配制量：1 L
配制方法：
称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
16）1 M DTT
组份浓度：1 M DTT
配制量：20 ml
配制方法：
1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
17）10 mM ATP
组份浓度：10 mM A TP
配制量：20 ml
配制方法：
1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml 水中（为减少变性，
须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg 的二硫苏糖醇
至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g 的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。
100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶
解后用水定容至1L。
10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。
100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
2％聚蔗糖（Ficoll，400型）2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）
2％BSA（组分V）
水2g
2g
2g
加水至总体积为100ml
依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl
100mmol/L MgCl2
100mmol/L DTT
2mmol/L ATP
5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）水5ml 1mol/L 贮液
1ml 1mol/L 贮液
1ml 1mol/L 贮液
200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。
100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP混合液
成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul
20％PEG 8000/2.5M NaCl
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20％聚乙二醇
2.5mol/L 氯化钠
水20g
50ml 5 mol/L 氯化钠或14.6g 固体氯化钠补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20×SSC
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）
3mol/L 氯化钠
水88.2g 175.3g 补足1L
溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100ul DEPC 于100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺（deionized formamide）
直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。
磷酸缓冲液（phosphate buffer）
按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L 磷酸二氢钠
（ml）1mol/L 磷酸氢二钠
（ml）
最终pH值
877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123
150
185
225
265
315
375
435
490
550
610
670
720
6.0
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
7.0
7.1
7.2
TE（用于悬浮和贮存DNA）
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA
水1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
98.8ml
Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积（ml）pH
8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76
9.0
8.8
8.6
8.4
8.2
8.0
7.8
7.6
7.4
7.2
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L 乙酸
100 mmol/L EDTA 水242g
57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L
5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA 水54g
27.5g 硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L
染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。
凝胶上样液（gel loading solutions）
6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠
6 mmol/L EDTA 18％聚蔗糖（400型）0.15％溴甲酚绿
0.25％二甲苯青FF
水300ul 10N 氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g
15mg
25mg
补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA 15％聚蔗糖（400型）水1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g
补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝
0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型）水2.5ml 1％溴酚蓝
2.5ml 1％二甲苯青FF 1.5g
补足到10ml
6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油
水1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）3ml
3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖
水1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g
补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝
0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS
50％甘油
水20mg
20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％SDS
5ml
补足到10ml
三.常用培养基
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨10g
酵母提取物5g
氯化钠10g
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨20g
酵母提取物5g
氯化钠0.5g
1 mol/L 氯化钾 2.5ml
用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um 的滤膜过滤除菌）。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨12g
酵母提取物24g
甘油4ml
各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨16g
酵母提取物10g
氯化钠4ml
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨20g
酵母提取物10g
葡萄糖20g
用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
四.常用抗生素
氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～
50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
实验室常用缓冲液配置方案 1)1 M Tris-HCl , , 组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。 2)10×TE Buffer , , 组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法： 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 3)1.5 M Tris-HCl 组份浓度：1.5 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调节pH值至。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。 4)3 M 醋酸钠 组份浓度：3M 醋酸钠 配制量：100ml 配制方法： 1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至 3.加去离子水将溶液定容至100ml 4高温高压灭菌后，室温保存。 5)PBS Buffer 组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6)10 M 醋酸铵 组份浓度：10 M 醋酸铵 配制量：100 ml 配制方法：
53种常见缓冲液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)取5 mol/L醋酸溶液15.0 ml，加乙醇60 ml和水20 ml，用10 mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14 g，加水800 ml，搅拌溶解，并稀释至1000 ml，用6 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294 g，加0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06 g，加盐酸赖氨酸3.65 g、氯化钠5.8 g、乙二胺四醋酸二钠0.37 g，再加水溶解使成1000 ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液取乌洛托品75 g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2 ml，再用水稀释至250 ml，即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42 g，加水使溶解并稀释至400 ml，用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52 g与巴比妥钠30.9 g，加水使溶解成2000 ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05 g，加氯化钠3.7 g及水适量使溶解，另取明胶0.5 g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2 mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.8，再用水稀释至500 ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2 mol/L甲酸溶液25 ml，加酚酞指示液1滴，用2 mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2 mol/L甲酸溶液75 ml，用水稀释至200 ml，调节pH值至3.25～3.30，即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10 g，加水900 ml，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000 ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液取枸橼酸4.2 g，加1 mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40 ml使溶解，再用20％乙醇稀释至100 ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。
常见缓冲溶液的配制 缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH 值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。 在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH 值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。 由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。 柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。 磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。 三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4℃时是8.4，在37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。 缓冲液的pH值由哪些因素决定？ 设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式： 根据此式可得出下列几点结论： （1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。 （2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。 （3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。 从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。 经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。 所以500ml 0.1M磷酸缓冲液需要Na2HPO4量为: 需Na2HPO4量为 : 计算好后，按计算结果称好药品，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，便得所需的缓冲液。 各种缓冲溶液的配制，均按下表按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确的浓度才能进行，如醋酸、NaOH等 常用体系 1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05M） X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M盐酸再加水稀释至200ml pH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml 2.2 50 44.0 3.0 50 11.4 2.4 50 32.4 3.2 50 8.2 2.6 50 24.2 3.4 50 6.4 2.8 50 16.8 3.6 50 5.0
【引用】常用pH缓冲溶液的配制和pH值 2011-05-13 20:01:24| 分类：生物|字号订阅 本文引用自DSC《常用pH缓冲溶液的配制和pH值》
一、常用溶液的配制（文章来自：医药园(https://www.doczj.com/doc/8311763404.html,) 整理：zfg） （一）溶液配制注意事项 1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。 2．药品称量要精确。 3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。 ４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。 （二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液 1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。 2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g （或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。 3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 24 Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 687·H2 柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12 ，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。 7．磷酸盐缓冲液
2 4·2H 2Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 24·2H 2KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）
10．Tris –盐酸缓冲液（0.05M ，25℃） C HOCH2 NH2 分子量=121.14; 0. 1M 溶液为12.114克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 247·H 2硼酸H 2BO 3,分子量=61.84,0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
247·10H 2硼酸H 2BO 3，分子量=61.84, 0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂 易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（ 0.05M ） 13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根） 2 47·10H 2 14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+22·10H 2
各种缓冲液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 pH X Y pH X Y 2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.8 3.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升 pH(20℃)X Y pH(20℃)X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 5 5 5 5 5 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 3.2 3.4 3.6 3.8 5 5 5 5 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升）0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。 Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液：取5mol/L醋酸溶液，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取氯化钙0.294g，加L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L 盐酸溶液调节pH值至，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至，滤过。 巴比妥缓冲液：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用L盐酸溶液调节pH值至，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至～。 邻苯二甲酸盐缓冲液：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液：取％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液与乙液混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约调节pH值至，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液～：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液：取硼酸3.09g,加L氯化钾溶液500ml使溶解，再加L氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠18g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.4g，加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至，再加水稀释至100ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml。 醋酸－醋酸钾缓冲液：取醋酸钾14g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸铵缓冲液：取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml。
各种缓冲液的配制方法 24 Na2HP6 2H2O,分子量=178.05 0.2mol∕L 溶液含35.61g∕L 柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol∕L 溶液含21.01g∕L 柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol∕L 溶液含21.01g∕L 柠檬酸钠.2HO,分子量=294.12; 0.1mol∕L溶液
(1)醋酸盐溶液的配制： 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.6) 取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml ,再加水稀释至250ml,即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.7) 取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60?80ml ,至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml ,即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH3.8) 取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml ,即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH4.5) 取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH4.6) 取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节PH值至4.6,再加水稀释至100ml, 即得。 醋酸—醋酸钠缓冲液(pH6.0) 取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml ,即得。 用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAC)K在此，C(HAC指醋酸的 浓度，C(NaAC指醋酸钠的浓度，Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5 (1.8乘10的-5次方)，PKa=-IgKa=4.75,将PH=5.5代入，可得C(NaAC)/C(HAc)=5.6通常我们配制时会使C(HAC)=0.1mol∕L,或是C(HAC)=0.2mol/L 等。若是配制C(HAC)=0.1mol/L,则C(NaAC)=0.56mol/L 称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取冰醋酸体积为0.1*1000∕17.5=5.7mL。将称好的 醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。当然若想配制其它的浓度， 也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，否则缓冲能力要下降，太浓的话又浪费试剂。
不同缓冲液的缓冲范围 pH缓冲液 六十一秒的常用缓冲溶液的配制&缓冲溶液原理（2007年6月16日更新）（一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。（三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。
C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 ①使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。
（八）磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L） Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。 NaH2PO4·H2O分子量＝138.01；0.2 mol/L溶液为27.6 g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03；0.2 mol/L溶液为31.21 g/L。 （九）巴比妥纳-盐酸缓冲液 巴比妥钠分子量＝206.18；0.04 mol/L溶液为8.25 g/L。 （十）Tris-HCl缓冲液（0.05 mol/L） 50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100
缓冲溶液 缓冲溶液是一类能够抵制外界加入少量酸和碱的影响，仍能维持pH值基本不变的溶液。该溶液的这种抗pH变化的作用称为缓冲作用。缓冲溶液通常是由一或两种化合物溶于溶剂（即纯水）所得的溶液，溶液内所溶解的溶质（化合物）称之为缓冲剂，调节缓冲剂的配比即可制得不同pH的缓冲液。 缓冲溶液的正确配制和pH值的准确测定，在生物化学的研究工作中有着极为重要的意义，因为在生物体内进行的各种生物化学过程都是在精确的pH值下进行的，而且受到氢离子浓度的严格调控，能够做到这一点是因为生物体内有完善的天然缓冲系统。生物体内细胞的生长和活动需要一定的pH值，体内pH环境的任何改变都将引起与代谢有关的酸碱电离平衡移动，从而影响生物体内细胞的活性。为了在实验室条件下准确地模拟生物体内的天然环境，就必须保持体外生物化学反应过程有体内过程完全相同的pH值，此外，各种生化样品的分离纯化和分析鉴定，也必须选用合适的pH值，因此，在生物化学的各种研究工作中和生物技术的各种开发工作中，深刻地了解各种缓冲试剂的性质，准确恰当地选择和配制各种缓冲溶液，精确地测定溶液的pH值，就是非常重要的基础实验工作。下表列出某些人体体液的pH值： 7.1 基本概念 ⑴Br?nsted-Lowry酸碱理论（又称酸碱质子理论）。1923年由
丹麦化学家J.N.Br ?nsted 和英国化学家T.M.Lowry 同时提出了酸碱质子学说，发展了酸碱理论，被后人称为酸碱质子理论或Br ?nsted-Lowry 酸碱理论。他们认为凡能释放质子的分子或离子（如：H 2O ，HCl ，NH 4+，HSO 4— 等）称为酸，凡能接受质子的分子或离子（如：H 2O ，NH 3，Cl —等）称为碱。因此，一种酸释放质子后即成为碱，称为该酸的共轭碱，同样一种碱与质子结合后，形成对应的酸，称为该碱的共轭酸。 A —H ＋ B — A ＋ B —H 酸1 碱2 碱1 酸2 酸1 是 碱1的共轭酸， 碱2 是 酸2 的共轭碱。 如盐酸在水中的解离： HCl Cl — ＋ H + HCl 是酸，Cl —是它的共轭碱。 ⑵ 缓冲体系的设计： 强电解质溶于水几乎全部解离为正负离子，弱电解质溶于水时，则不完全解离，只有部分的分子解离出正负离子，其馀以分子形式存在于溶液中。例如弱酸（HA ）及其盐溶于水时，只有部分HA 解离为 H + 和 A —离子，其平衡方程式如下： K 1 HA A — ＋ H + (1-1) K2 ][]][[HA A H K a -+= ∴ ][] [][-+=A HA K H a (1-2) (1-2)式两边取负对数： ][] [lg lg ]lg[HA A K H a -+ =＋－－ (1-3) (1-3)式中： [HA] — 为弱酸的浓度 [H +] — 为HA 解离出的氢离子浓度 [A —] — 为HA 的共轭碱的离子浓度 K 1 — 为酸解离的速度常数 K 2 — 为A —与H + 缔合的速度常数
常用缓冲液的配制（TBS，PBS） 科研探索2007-04-23 13:25:54 阅读728 评论0 字号：大中小订阅 这是各种缓冲液的配制方法 1. 0.01MPBS(PH7.2)液 NaCl 8g Na2HPO4 1.15g KH2PO4 0.2g （NaH2PO4） 加双蒸水至1000ml 2. 0.05MTBS(PH7.4)液 Tris(三羟甲基胺基甲烷) 12.1g Nacl 17.5g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH7.4，再加双蒸水至2000ml。 3. 0.02MTBS（PH8.2）液 Tris 4.84g Nacl 17.5g BSA 2.0g NaN3 1.0g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH8.2，再加双蒸水至2000ml。 （BSA—牛血清白蛋白；NaN3—叠氮钠，为防腐剂）。 4. 0.05MTB液（PH7.6） 先配制0.05MTB液： Tris 60.75g 1N HCL 约420ml 双蒸水至1000ml 配制方法：先以少量双蒸水（300ml）溶解Tris，加入HCL后，再用1N HCL 或1N NaOH将PH值调至7.6，再加双蒸水至1000ml。 用时将0.5MTB稀释10倍，即为0.05MTB液（PH7.6）液 磷酸缓冲液(Gomori缓冲液)
最通用的磷酸盐缓冲液是以其发明者Gomori命名的。该缓冲液是由单价磷酸二氢盐和双价磷酸一氢盐的混合物组成的。通过变化每种盐的量，就可配制出pH 5.8至pH8.0之间缓冲液(见表A1-3A和A1-3。磷酸盐有很高的缓冲能力，在水中高度可溶。但是，它们也有不少潜在的缺点： ?磷酸盐缓冲液抑制许多酶促反应和步骤，而这些酶促反应和步骤恰恰是分子克隆的基础，其中包括许多限制酶对DNA的切割，DNA的连接和细菌转化等。 ?因为磷酸盐在乙醇中沉淀，不能用于沉淀DNA和RNA。 ?磷酸盐螯合像Ca2+和Mg2+这样的阳离子。 表A1-3A 25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制 pH 1 mol/L K2HP04的体积/mL 1 mol/L KH2PO4的体积/mL 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 2 7.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4 7.8 90.8 9.2 8.0 94.0 6.0 注：根据Green(1933)的资料汇编。 用蒸馏水将混合的两种1mol/L的贮存液稀释至1000mL。根据Henderson-Hasselbaleh方程计算其pH值： pH=pK'+Log ，在此，pK'=6.86(25℃) 表A1-3B 25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制 pH 1mol/L Na2HPO4的体积/mL 1mol/L NaH2P04体积/mL 5.8 7.9 92.1 6.0 12.0 88.0 6.2 1 7.8 82.2 6.4 25.5 74.5 6.6 35.2 64.8 6.8 46.3 53.7
常用缓冲溶液的配制方法 磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 24Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含35.01克/ 升。 C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。 pH 4.0 20mL ：Na2HPO4 0.219g + C4H2O7·H2O 0.258g 柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/毫升。 pH 4.0 20mL ： C4H2O7·H2O 0.275g + Na3 C6H5O7·2H2O 0.203g
乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ） Na 2Ac·3H 2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。 pH 4.0 20mL ：NaAc 0.098g + HAc 0.282mL 甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M ） 甘氨酸分子量=75.07; 0.2M 溶液含15.01克/升。 pH 10.0 20mL ：甘氨酸0.075g + NaOH 0.013g 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+ 无水Na 2CO 2分子量=105.99;0.1M 溶液为10.60克/升。 Na 2CO 2·10H 2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为28.62克/升。 Na 2HCO 3分子量=84.0;0.1M 溶液为8.40克/升。 pH 10.0 20mL ：无水碳酸钠 0.127g +碳酸氢钠0.067g
常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)：取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)：取氯化钙0.294g，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml 使精品文档，你值得期待 溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液(pH7.4)：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.4，滤过。 巴比妥缓冲液(pH8.6)：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g 加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)：取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml 混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液(pH8.0)：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0。 氨－氯化铵缓冲液(pH10.0)：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液(pH8.0)：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约2.5ml调节pH值至8.0，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液(pH10.8～11.2)：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液(pH9.0)：取硼酸3.09g,加0.1mol/L氯化钾溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L 氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液(pH3.5)：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0)：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至3.0，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6)：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7)：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.8)：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml，再加水稀释至1000ml。
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的 配制方法 欧阳家百（2021.03.07） 50×TAE Buffer (pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 2. 3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。 4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 2. 3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer 组份浓度 200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。 2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。 3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 4. 5.用 6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。 7.室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。 溴乙锭 (10 mg/ml) 组份浓度 10 mg/ml溴乙锭
配制量 100 ml 配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。 2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。 3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。 注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 Agarose凝胶 配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE 或1×TAE)。 2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微 波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾 后，请戴上防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂糖 充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全 熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长， 每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液 过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微 波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔 化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶 液(终浓度0.5 μg/ml)。并充分混匀。 注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。 6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳 子。凝胶厚度一般在3~5 min之间。 7.在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。 注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存2~5天。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围
常见缓冲液配制大全 缓冲液 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml,用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解，并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸 3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液 取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml,即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4) 取巴比妥钠4.42g,加水使溶解并稀释至400ml，用 2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6) 取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成 2000ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8) 取巴比妥钠5.05g,加氯化钠3.7g及水适量使溶解,另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L 盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3) 取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L 氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH 值至3.25～3.30,即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6) 取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6,加水稀释至1000ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液 取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml，即得。
磷酸盐缓冲液 取磷酸二氢钠38.0g，与磷酸氢二钠5.04g,加水使成1000ml,即得。 磷酸盐缓冲液(pH2.0) 甲液:取磷酸16.6ml，加水至1000ml，摇匀。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH2.5) 取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5,用水稀释至1000ml。 磷酸盐缓冲液(pH5.0) 取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量,用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，即得。 磷酸盐缓冲液(pH5.8) 取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH6.5) 取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2ml，用水稀释至100ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH6.6) 取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g，加水使溶解成400ml，即得。磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8) 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后,加水稀释至1000ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH6.8) 取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.0)
取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至100ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.2) 取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50ml与0.2mol/L氢氧化钠溶液35ml，加新沸过的冷水稀释至200ml，摇匀，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.3) 取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.4) 取磷酸二氢钾1.36g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至200ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.6) 取磷酸二氢钾27.22g，加水使溶解成1000ml，取50ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液42.4ml，再加水稀释至200ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.8) 甲液：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml。 乙液：取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml。取上述甲液91.5ml 与乙液8.5ml混合，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.8～8.0) 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使溶解成1000ml，即得。