菌种及抗生素的保存方法
1.目的：
规范四川宜宾横竖生物科技有限公司微生物检测实验室对菌种和抗生素保存，同时为技术人员提供可操作的技术标准。
2．范围：
适用于四川宜宾横竖生物科技有限公司猴场内所有涉及菌种和抗生素保存的工作人员。
3．标准菌株的来源和保存
3．1 标准菌株的来源
标准菌株是指具有典型的、稳定的生理生化特征，并被国际社会所认可的菌株。这些菌株可来源于专门的机构。本文件规定公司所采用的标
准菌株从中国卫生部药物制品鉴定所菌种保藏中心采购。
3．2 标准菌株的保存
3．2．1 一般保存方法
将细菌种于半固体培养基中，35℃培养18-24小时后封盖1cm厚的无菌石蜡油，置4℃保存。
适用于肠杆菌科等细菌的保存；对链球菌、脑膜炎奈瑟菌等苛养菌在血平板上或血清培养基中移种培养。由于细菌经多次移种，性状
可能发生变异，所以本文件规定本公司范围内使用的菌种传代次数不
超过15次。
3．2．2 常见细菌的保存方法及保存时间见表-1
本公司使用的菌种保存的方法和保存时间，由质量监督小组监督执行。
表-1 常见细菌的一般保存方法及保存时间
菌种保存用培养基保存条件及时间
葡萄球菌链球菌普通琼脂半固体培养基
血清半固体培养基
加封石蜡油4℃保存3个月
加封石蜡油4℃保存3个月
肺炎链球菌
脑膜炎奈瑟菌
流感嗜血杆菌
百日咳鲍特菌
结核分支杆菌
白喉棒杆菌
大肠埃希菌
志贺菌属
沙门菌属
肺炎克雷白菌属
变形杆菌属
肠道杆菌科其他菌属铜绿假单胞菌
含Vi的沙门菌
肠致病性大肠埃希菌
血清半固体培养基
血琼脂斜面
巧克力琼脂斜面培养基
血琼脂斜面培养
血清半固体培养基
巧克力或血琼脂斜面
鲍-金氏培养基
罗-琴氏培养基
吕氏血清培养基
普通琼脂斜面培养基
琼脂半固体培养基
鸡蛋斜面
半固体4℃保存14天
斜面4℃保存2-4天
37℃，斜面2-4个月
半固体7-10天
37℃，4-5天
4℃，14天
4℃，2月
4℃，14-30天
4℃
斜面：1个月，加封石蜡油3个月
半固体：2个月，加封石蜡油6个月
4℃，1-2个月，加封石蜡油6个月
3．2．3 冷冻干燥法：需要长期保存的菌种采用冷冻干燥法保存。需进行冻干保存的菌种报质量监督小组审批执行。
4、抗生素使用和保存
本公司使用的抗生素的标准品或参考品必须来自国家权威鉴定机构，如中国药品生物制品鉴定所，或来自生产厂商提供的标明效价的标准品或参考品。不能使用口服药、外用药的制成品做药敏试验。
许多种抗菌药物粉剂状态比配制成溶液稳定，但自生产日期起保存时间一般不超过一年。已配制成溶液的抗生素应尽快使用，保存条件及时间见表-2
表-2抗菌药物溶液的保存条件及时间
抗菌药物保存条件及时间
4℃-20℃
青霉素类（包括所有青霉素、半合成青霉素、头孢菌素）四环境素类氨基糖苷类（丁胺卡那霉素、庆大霉素、链霉素、妥布霉素）新生霉7天
14天
3个月
3个月
抗生素的分类 由细菌、霉菌或其它微生物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类物质。自1943 年以来，青霉素应用于临床，现抗生素的种类已达几千种。在临床上常用的亦有几百种。其主要是从微生物的培养液中提取的或者用合成、半合成方法制造。其分类有以下几种：（一）（3 -内酰胺类：青霉素类和头抱菌素类的分子结构 中含有3 -内酰胺环。近年来又有较大发展，如硫酶素类（th ienamycins ）、单内酰环类（monobactams）， 3 - 内酰酶抑制 剂（3 -lactamadeinhibitors）、甲氧青霉素类（methoxypenic iuins）等。 （二）氨基糖甙类：包括链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小诺霉素、阿斯霉素等。 （三）四环素类：包括四环素、土霉素、金霉素及强力霉素等。 （四）氯霉素类：包括氯霉素、甲砜霉素等。 （五）大环内脂类：临床常用的有红霉素、白霉素、无 味红霉素、乙酰螺旋霉素、麦迪霉素、交沙霉素等、阿奇霉 素。 （六）作用于G+细菌的其它抗生素，如林可霉素、氯林可霉素、万古霉素、杆菌肽等。 （七）作用于G菌的其它抗生素，如多粘菌素、磷霉素、卷霉素、环丝氨酸、利福平等。
（八）抗真菌抗生素：如灰黄霉素。 （九）抗肿瘤抗生 素：如丝裂霉素、放线菌素D、博莱霉素、阿霉素等。 （十）具有免疫抑制作用的抗生素如环孢霉素。 链霉素 是从链霉菌（灰色链丝菌）培养液中提取出来的一种抗生素。链霉素的硫酸盐是白色或微黄色的粉末或结晶，易溶于水，比较稳定，对某些杆菌，特别是结核杆菌，具有显著的抑菌乃至杀菌作用。链霉素主要用于治疗结核病、鼠疫、百日咳、细菌性痢疾和泌尿道感染等。 金霉素 也叫做“氯四环素”，是从金霉菌（金色链丝菌）培养液中提取出的一种抗生素。金霉素的盐酸盐是金黄色的结晶，味苦，能溶于水中。金霉素主要用于治疗对青霉素产生了抗药性的细菌性感染，以及斑疹伤寒、异型肺炎、沙眼、阿米巴痢疾等疾病。 灭瘟素 又叫“稻瘟散”、“布拉叶斯”，是一种从放线菌培养液中提取出来的抗生素，用于防治稻瘟病、稻胡麻斑病、水稻菌核病等。但是，番茄、烟草、茄、桑、豆类等植物对灭瘟素较敏感，不能使用。
1 头霉素类抗生素 头孢西丁 头孢美唑 头孢替坦 2 氧头孢烯类抗生素 拉氧头孢（Shiomarin）：对厌氧菌效果好 氟氧头孢（Flomocef）：类似头孢二代，对革兰氏阴性活 性强。 3第四代头孢菌素 头胞匹罗Cefopirome Cefrom 1992 头孢吡肟Cefopime Maxipime 1993 头孢唑兰Cefozopran Firstcin 1995 头胞瑟利Cefoselis Wincef 1998
β-内酰胺酶抑制剂 1棒酸（Clavularic Acid） 2舒巴坦（Sulbactam 青霉烷砜） 3他唑巴坦（Tazobactam） 目前上市的复合制剂有： 1 Augmentin Amoxicillin+CA 1.2g/支 2 Timentin Ticarcillin+CA 3.2g/支 3 Unasyn Amipicillin+SBT 0.75g/支 4 Sulperazon Cefoperazon+SBT 1.0g/支 5 Tazocin Piperacillin+Tazobactam 4.5g/支
其他β-内酰胺类抗生素 1碳烯类青霉素 1）伊米配能（Imipenem）超广谱抗生素，稳定性差，易被肾肽酶水解“Imipenem+Cilastatin”即Tienam。 2）美洛配能Meropenem Merren 1994 3）培尼配南Panipenem Carbenin 1994 4）比阿配南Biapenem --- 5）呋罗配南Fropenem Farron 1997 6）利替配南酯Ritipenem acexil -- 2单环类β-内酰胺类抗生素 1）氨曲南（Aztreonam）对G-菌作用强，对BLA稳定。2）卡芦莫南(Carumonam)
菌种保藏方法 中国工业微生物菌种保藏管理中心 微生物菌种保藏对于微生物菌种的研究和利用至关重要。以下是中国工业微生物菌种保藏管理中心整理的目前国际国内常用的菌种保藏方法，包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法，各种菌种保藏方法都有详细的步骤说明。 定期移植法 亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。 操作步骤如下： 1 培养基制备 1.1 器皿准备 培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。 1.2 溶解培养基配料 先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加足水量，搅拌均匀。 1.3 调pH值 配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。 1.4 加凝固剂 配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断
搅拌至融解，再补足所蒸发水分。 1.5 过滤分装 在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。 1.6 包扎标记 将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。 1.7 灭菌 根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。 1.8 斜面摆放 灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。 1.9 无菌检查 将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。 2接种 2.1 斜面接种 2.1.1 点接 把菌种点接在斜面中部偏下方处。适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌（如毛霉、根霉等）。 2.1.2 中央划线 从斜面中央自下而上划一直线。适用于细菌和酵母菌等。 2.1.3 稀波状蜿蜒划线法 从斜面底部自下而上划“之”字形线。适用于易扩散的细菌，也适用于部分真菌。2.1.4 密波状蜿蜒划线法
1、青霉素类 注射用美洛西林钠舒巴坦钠 成人每次２。5~3.75g,每８或１2小时一次,疗程７～１４天。１~14岁儿童及体重超过３ｋｇ得婴儿,每次75mg/kｇ,每日２~3次。体重<3kg者,每次7５mｇ／ｋｇ,每日2次。 注射用苄星青霉素 临用前加适量灭菌注射用水使成混悬液。肌内注射,成人一次60万～120万单位,2~４周1次;小儿一次30万~ 60万单位,2~4周1次。 注射用阿莫西林钠克拉维酸钾 本品成份与12岁以上儿童每次1、2g,３个月－１2岁儿童每次每公斤30mg,溶于５0—100mｌ生理盐水(新生儿酌减),静脉滴注30分钟,每日２—3次,疗程7～1４日。 注射用奈夫西林钠 肌注或静注,成人4g～6g/日,分４次。 2、头孢菌素类 注射用头孢哌酮钠 可供肌内注射、静脉注射或静脉滴注、成人常用量:一般感染,一次1～2g,每1２小时1次;严重感染,一次2~ 3g,每8小时1次。接受血液透析者,透析后应补给1次剂量、成人一日剂量不超过9g,但在免疫缺陷病人有严重感染时,剂量可加大至每日1２g、小儿常用量:每日50～２00mｇ/kg, 分2～３次静脉滴注。制备肌内注射液,每1g药物加灭菌注射用水2.８mｌ及ｌ2％利多卡因注射液１ml,其浓度为250mｇ／ｍl。静脉徐缓注射者,每1g药物加葡萄糖氯化钠注射液４0mｌ溶解;供静脉滴注者,取1~2ｇ头孢哌酮溶解于1０0~2０0ml ,最后药物浓度为５～２５ｍg/ml。每1g头孢哌酮得钠含量为1.５mmol(3４mg)。 注射用头孢尼西钠 肌肉注射、静脉注射或静脉滴注:成人一般每日0、5g－1.０g, 分1—２次;对重症、难治感染,成人可增至每日2g;儿童根据感染程度,每日2５mg-1５０ｍg/ｋg。 注射用头孢她啶 成人: 泌尿道或较轻得感染:每日１～２克,分２次静滴或静注; 大多数感染:每日2~4克,分2～3次静滴或静注; 非常严重得感染:每日４～6克,分2~3次静滴或静注。疗程:7～1４天。 婴幼儿(出生2个月以上):常用剂量为每日３0~１00ｍｇ/kg,分２~3次静脉滴注。 注射用头孢唑肟钠 1．成人常用量:一次1～２g,每８~１2小时1次;严重感染者得剂量可增至一次3～4ｇ,每8小时1次、治疗非复杂性尿路感染时,一次0、5g,每12小时１次。 2.6个月及6个月以上得婴儿与儿童常用量:按体重一次50mg/kｇ,每6～8小时1次。３。肾功能损害者:肾功能损害得患者需根据其损害程度调整剂量。在给予0.5～1g得首次负荷剂量后,肾功能轻度损害得患者(内生肌酐清除率Cｌcr为５0～7９ml/分钟)常用剂量为一次0、5g,每8小时1次,严重感染时一次0、75～１.５g,每8小时1次;肾功能中度损害得患者(Clcr 为5～49ml/分钟)常用剂量为一次0。２５～0。５g,每1２小时１次,严重感染时一次0。5~1ｇ,每１2小时1次;肾功能重度损害需透析得患者(Cｌｃr为0～4ml/分钟)常用剂量为一次0、５ｇ,每48小时１次或一次0、2５g,每2４小时１次,严重感染时一次0.5~1ｇ,每48小时1次或一次0。5g,每2４小时1次。血液透析患者透析后可不追加剂量,但需按上述给药剂量与时间,在透析结束时给药。本品可用注射用水、氯化钠注射液、５％葡萄糖注射液溶解后缓
妇产科抗生素使用指南中华医学会妇产科学分会感染性疾病协作组 为提高细菌性感染的抗菌治疗水平，保障患者用药安全及减少细菌耐药性，２００４年８月１９日卫生部颁布了《抗生素临床应用原则》，对感染性疾病中最重要的细菌性感染的治疗原则及预防性应用指征以及合理给药方案的制订原则进行了阐述，并列出了常用抗生素的适应证及注意事项、各种常见细菌性感染的病原体治疗。中华医学会妇产科学分会感染性疾病协作组根据妇产科感染性疾病的特点，制定《妇产科抗生索使用指南》（《指南》），希望能更好地帮助妇产科临床医师上Ｅ确使用抗生素。各类抗生素的适应证和注意事项请参照卫生部颁布的《抗生素临床应用原则》。《指南》为临床应用抗生素获取最佳疗效，并最大程度避免或减少不良反应而制定，不是教材或参考书，也不涉及具体的给药方案。《指南》主要限于治疗细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、真菌等病原微生物所致感染性疾病的抗生素，不包括各种病毒性疾病和寄生虫病的治疗药物。《指南》中抗生素临床应用的基本原则在临床治疗中必须遵循．各类抗生素临床应用的适应证和注意事项以及各种感染的病原体治疗原则供临床医师 参考。《指南》仅涉及国内临床常用抗生素的部分品种，重点介绍各类药物的抗菌作用、适应证和注意事项，有关抗生素临床应用的详细内容仍应参考有关专业书籍。在医疗丁作中，临床医师仍应结合患者
具体情况，制汀个体化给药方案。除《指南》所列通常选用的药物品种外。临床医师可根据患者临床情况、病原体耐药性及当地药物供应情况选用最合适的抗生素。第一部分临床应用抗生素的基本原则抗生素临床应用是否正确、合理，基于以下两方面：（１）有无指征应用抗生素；（２）选用的品种及给药方案是否正确、合理。一、治疗性应用抗生素的基本原则（一）细菌性感染的抗生素应用根据患者的症状、体征及实验室检查结果，初步诊断为细菌性感染或经病原微生物检查确诊为细菌性感染者方有指征应用抗生素；由真菌、衣原体、螺旋体及部分原虫等病原微生物所致的感染也有指征应用抗生素。如果缺乏细菌及上述病原微生物感染的证据，诊断不能成立者，以及病毒性感染者，均无指征应用抗生素。ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｔｒｎｊ．ｉｓｓｒＬ０５２９－５６７ｘ．２０１１．０３．０１８通信作者：刘朝晖，１０００３４北京大学第一医院妇产科，Ｅｍａｉｌ：ｘｙｘｌｚｈ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｔｏｍ．临床指南．（二）根据病原微生物种类及细菌药物敏感试验结果应用抗生素抗生素应用的原则是根据病原微生物种类及其对抗生素的敏感性或耐药程度而定，即根据细菌的药物敏感（药敏）试验的结果而定。因此有条件的医疗机构，住院患者必须在开始抗生素治疗前，先留取相应标本，立即送细菌培养加药敏试验，以尽早明确病原微牛物和药敏结果。危重患者在未获知病原微生物及药敏结果前，可根据患者的发病情况、发病场所、原发病灶、基础疾病等凭经验推断最可能的病原微生物，并结合当地细菌耐药状况先给予经验性的抗生素治疗，获知细菌培养及
什么是抗生素药及使用说明 抗生素药能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。那么你对抗生素药了解多少呢?以下是由我整理关于什么是抗生素药的内容，希望大家喜欢! 什么是抗生素药 抗生素(antibiotic)是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。现临床常用的抗生素有转基因工程菌培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成的化合物。目前已知天然抗生素不下万种。 抗生素的种类 由细菌、霉菌或其它微生物在生活过程中所产生的具有抗病原体不同的抗生素药物或其它活性的一类物质。自1943年以来，青霉素应用于临床，现抗生素的种类已达几千种。在临床上常用的亦有几百种。其主要是从微生物的培养液中提取的或者用合成、半合成方法制造。其分类有以下几种： (一)-内酰胺类：青霉素类和头孢菌素类的分子结构中含有-内酰胺环。又有较大发展，如硫酶素类(thienamycins)、单内酰环类(monobactams)，-内酰酶抑制剂(-lactamadeinhibitors)、甲氧青霉素类(methoxypeniciuins)等。 (二)氨基糖苷类：包括链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小诺霉素、阿斯霉素等。
(三)酰胺醇类：包括氯霉素、甲砜霉素等。 (四)大环内酯类：临床常用的有红霉素、白霉素、无味红霉素、乙酰螺旋霉素、麦迪霉素、交沙霉素等、阿齐红霉素(阿奇霉素)。 (五)多肽类抗生素：万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁，后者在抗菌活性、药代特性及安全性方面均优于前两者。 (六)：硝基咪唑类：甲硝唑、替硝唑、奥硝唑。 (七)作用于G-菌的其他抗生素，如多粘菌素、磷霉素、卷霉素、环丝氨酸、利福平等。 (八)作用于G+细菌的其他抗生素，如林可霉素、克林霉素、杆菌肽等、 (九)抗真菌抗生素：分为棘白菌素类、多烯类、嘧啶类、作用于真菌细胞膜上麦角甾醇的抗真菌药物、烯丙胺类、氮唑类。 (十)抗肿瘤抗生素：如丝裂霉素、放线菌素D、博莱霉素、阿霉素等。 (十一)抗结核菌类：利福平、异烟肼、吡嗪酰胺、利福布丁等。 (十二)具有免疫抑制作用的抗生素：环孢霉素等。 (十三)四环素类：包括四环素、土霉素、金霉素及强力霉素等。 抗生素药使用说明 使用原则 临床应用抗生素时必须考虑以下几个基本原则： (一)严格掌握适应证凡属可用可不用的尽量不用;而且除考虑抗生素的抗菌作用的针对性外，还必须掌握药物的不良反应和体内过程与疗效的关系。 (二)发热原因不明者不宜采用抗生素(除病情危重且高度怀疑为细菌感
关于抗生素的合理应用指南 1.合理应用抗生素的概念 合理使用抗生素的临床药理概念为安全有效使用抗生素，即在安全的前提下确保有效，这就是合理使用抗生素的基本原则。 正常情况下，大多数新启用抗生素在若干年内都会因病菌产生耐药性而失去原有效力，然而不正确的使用，更加重了耐药细菌的急剧增长。由于抗生素在临床上应用量大、品种多、更新快、各类药品之间相互关系复杂，联合用药日趋增多，预防用药日趋广泛。因此临床上抗菌药物的不良反应发生率及耐药性仍逐年上升势头。 合理使用抗生素需具体病人具体分析，制定出个体化治疗方案。没有一个固定方案可在不同情况下套用。笔者认为合理选用与合理用药是合理使用抗生素的两个至关重要的问题。 2.抗生素的临床选择 2.1首先要掌握抗生素的抗菌谱各种抗生素都有不同的作用特点，因此所选的药物的抗菌谱务必使其与所感染的微生物相适应，否则就无的放矢，既浪费钱财，又延误病情。
2.2肺炎克雷伯氏菌对氨苄青霉素、氨曲南和羧苄青霉素耐药率较高，分别为89.3%、86.7%和76.2%；对氧氟沙星、泰能、舒普森敏感率最高，均为100%；其次是头孢哌酮和丁胺卡那，敏感率均为96.8%. 金黄色葡萄球菌对交沙霉素、青霉素、复方新诺明、红霉素耐药率较高，分别为87.5%，86.7%，86.7%，84.7%；对万古霉素敏感率为100%，对丁胺卡那的敏感率为81.8%. 铜绿假单胞菌对西力欣、先锋霉素Ⅴ号耐药率均为100%，其次对氯霉素、卡那霉素的耐药率，分别为91.2%、87.5%；对环丙沙星、舒普森的敏感率最高，均为100%，对丁胺卡那、头孢哌酮、复达欣的敏感率，分别为93.5%、88.9%、83.9%. 2.3根据感染疾患的规律及其严重程度选择抗生素重症深部感染选择抗菌作用强，血与组织浓度均较高的抗生素。对于早期金葡球菌败血症，头孢唑啉血浓度与组织浓度均比头孢噻吩高，其半衰期也较长，因此感染部位可达到较高浓度，所以深部感染时应选用头孢唑啉。 2.4根据抗菌药物的药动学特点选择抗生素。 2.4.1吸收过程口服吸收完全的抗生素有氯霉素、氯洁霉素、氯林可霉素、头孢唑啉、头孢立新、阿莫西林、利福平等；青霉素类易被胃酸破坏；氨基甙类、头孢菌素类的大多数品种、万古霉素，口服吸收甚少。近年一些新的长效口服抗生素如新型头孢霉素/新大环内酯类；还有第4代喹诺酮类：妥舒沙星、斯帕沙星、左氟沙星等抗菌谱广、活性强、组织渗透性好的品种上市。
实验15 微生物菌种保藏方法 一、实验原理 为了保持微生物菌种原有的各种优良特征及活力，使其存活，和丢失，不污染，不发生变异。根据微生物自身的生物学特点，通过人为的创造条件，使微生物处于低温、干燥、缺氧的环境中，以使微生物的生长受到抑制，新陈代谢作用限制在最低范围内，生命活动基本处于休眠状态，从而达到保藏的目的。 常用简易保藏法包括常规转接斜面低温保藏法、半固体穿刺保藏法、液体石蜡保藏法、含甘油培养物保藏法及沙土管保藏法等。由于这些保藏方法不需要特殊实验设备，操作简便易行，故为一般实验室及生产单位所广泛采用。 常规转接斜面低温保藏法和半固体穿刺保藏法是将在斜面或半固体培养基上已生长好的培养物置于4-5℃冰箱中保藏，并定期移植。这两种方法都是利用低温抑制微生物生长繁殖，从而延长保藏时间。 液体石蜡保藏法是在新鲜的斜面培养物上，覆盖一层已灭菌的液体石蜡，再置于4-5℃冰箱中保藏。液体石蜡主要起隔绝空气的作用，使外界空气不与培养物直接接触，从而降低对微生物氧的供应量。培养物上面的液体石蜡层也能减少培养基水分的蒸发。故此法是利用缺氧及低温双重抑制微生物生长，从而延长保藏时间。 含甘油培养物保藏法是在液体的新鲜培养物中加入15%已灭菌的甘油，然后再置于-20或-70℃冰箱内保藏。此法是利用甘油作为保护剂，甘油透入细胞后，能强烈降低细胞的脱水作用，而且，在-20或-70℃条件下，可大降低细胞代谢水平，但却仍能维持生命活动状态，达到延长保藏时间的目的。 沙土管保藏法，将待保藏菌种接种于适当的斜面培养基上，经培养后，制后孢子悬浮液，无菌操作将孢子悬浮液滴入已灭菌的沙土管中，孢子即吸附在沙土上，将沙土管置于真空干燥器中，通过抽真空达到吸干沙土管中水分，然后将干燥器置于4℃冰箱中保存。此法利用干燥、缺氧、缺乏营养、低温等因素综合抑制微生物生长繁殖，从而延长保藏时间。 二、操作步骤 (一) 斜面传代保藏法 l．贴标签取各种无菌斜面试管数支，将注有菌株名称和接种日期的标签贴上，贴在试管斜面的正上方，距试管口2～3cm处。 2．斜面接种将待保藏的菌种用接种环以无菌操作法移接至相应的试管斜面上，细菌和酵母菌宜采用对数生长期的细胞，而放线菌和丝状真菌宜采用成熟的袍子。 3．培养细菌37℃恒温培养18～24h，酵母菌于28～30℃培养36～60h，放线菌和丝状真菌置于28℃培养4～7d。
菌种保藏 （一）、菌种保藏的目的 微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，因而常常造成菌种的衰退，并有可能使优良菌种丢失。菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。 （二）、菌种保藏的原理 无论采用何种保藏方法，首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等。其次，应根据微生物生理、生化特点，人为地创造环境条件，使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。这些人工造成的环境主要是干燥、低温和缺氧，另外，避光、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂也能有效提高保藏效果。 （三）、菌种保藏的方法 1、斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种。放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保存6个月左右，无芽孢的细菌可保存1个月左右，酵母菌可保存3个月左右。如以橡皮塞代替棉塞，再用石蜡封口，置于4℃冰箱中保藏，不仅能防止水分挥发、能隔氧，而且能防止棉塞受潮而污染。这一改进可使菌种的保藏期延长。该法的优点是简便易行，容易推广，存活率高，故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。其缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。 2、石蜡油封藏法 此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端lcm，使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。使用的液体石蜡要求优质无毒，化学纯规格，其灭菌条件是：150～170℃烘箱内灭菌lh；或121℃高压蒸汽灭菌60～80min，再置于80℃的烘箱内烘干除去水分。 由于液体石蜡阻隔了空气，使菌体处于缺氧状态下，而且又防止了水分挥发，使培养物不会干裂，因而能使保藏期达1～2年，或更长。这种方法操作简单，它适于保藏霉菌、酵母菌、放线菌、好氧性细菌等，对霉菌和酵母菌的保藏效果较好，可保存几年，甚至长达10年。但对很多厌氧性细菌的保藏效果较差，尤其不适用于某些能分解烃类的菌种。 3、砂土管保藏法
抗菌药物超说明书用法专家共识 中国医药教育协会感染疾病专业委员会 中华结核和呼吸杂志编辑委员会 中国药学会药物临床评价研究专业委员会 中华结核和呼吸杂志, 2015,38(06): 410-444. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-0939.2015.06.005 前言 药品说明书是临床医师处方的最重要依据，但因药物在临床应用中不断有新的发现与经验积累，再加上药物临床注册试验周期长、药品说明书更新相对滞后，因此，超说明书用药有其科学性与合理性，在临床中往往是不可避免的，甚至有时也会成为挽救生命的唯一手段。与其他类药物相比，抗菌药物用于敏感细菌的超适应证用法或用于不够敏感细菌的超剂量用法更普遍、更常见。文献报道，在25个研究共7亿2千余万处方中，成人重症患者抗菌药物超说明书用法处方占19%～43%，普通门诊也占23%@[1]。可见抗菌药物的超说明书用法是一种在临床业已存在的较普遍的现象。 超说明书用法也称未注册用法(off-label uses，unlabeled uses，out of label usage or outside of labeling)，其内容包括超适应证、超剂量、超疗程、超适应人群及改变说明书中规定的用药途径与用药间隔时间等。 2013版"赫尔辛基宣言"[2]在最后一节中强调指出："医生在治疗患者时，如无已证实的有效方法或其他已知方法均无效时，当医生判断有挽救生命、恢复健康、减轻痛苦的可能，在征得患者或监护人同意后，参考专家建议可采用未经证实的方法"。而本共识推荐的用法均是经过临床实践证明较为安全有效的用法。目前，我国有关超说明书用药的法规尚不完善，医师选择超说明书用药将承担更大的风险。本共识的主要宗旨是给读者提供有参考价值的、常用且重要的抗菌药物超说明书应用的科学信息，并不涉及超说明书用法的批准程序，也不涉及婴幼儿、孕妇及哺乳期妇女等特殊人群。 临床医师应自始至终时刻权衡治疗对象的获益和风险，在遵守国家、地方政府和所在医院有关法律规定的基础上，参照本专家共识提供的信息，针对不同的治疗对象制定具体治疗方案，同时本共识也强调，当遵照说明书就能达到安全有效的治疗目的时，应尽量避免选择超说明书用法。 本共识推荐的证据等级划分参照以下原则：A级：国外说明书已载入或国内外权威指南作为A级推荐；B级：本共识制定者认可的指南中作为B级推荐或有循证医学证据支持、发表在权威学术期刊上的研究结果；C级：学术刊物发表的有一定科学根据的研究结果。本共识不收录以个案报告及专家个人意见为依据的用法。 第一章β-内酰胺类 β-内酰胺类抗生素在结构上的共同特点是均具有一个典型或非典型的β-内酰胺环，该环如被破坏则失去抗菌活性。根据结构上的差异与抗菌特点，β-内酰胺类又分为青霉素类、头孢菌素类、头霉素类、碳青霉烯类、单环类及酶抑制剂等。该类抗生素在临床应用广泛，毒性相对较低，大多数属于典型的时间依赖性抗生素，也有些品种具有较长的抗生素后效应(postantibiotic effect，PAE)，在日剂量不变的前提下，增加用药次数、缩短间隔时间或延长静脉滴注时间，可增加疗效。本章只介绍比较常见的药物超说明书用法。 青霉素G
菌种保存方法： 一.菌种保藏方法大致可分为以下几种： 1．传代培养保藏法 又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。 2．液体石蜡覆盖保藏法 是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。 3．载体保藏法 是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。 4．寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。 5．冷冻保藏法 可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。常用的有甘油菌保存： 取灭过菌的1.5ml EP管，按照60%—80%甘油的加入量，保存零下80度。例：取37°培养过夜的菌液2-4ml甘油6-8ml，充分混匀后分装于1.5ml EP管中，置于-80°冰箱即可。 6．冷冻干燥保藏法 先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。 有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。二.常用的器材 所要保存的微生物； 肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙； 灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。 三.各操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点 1．斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。 保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。 此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、
抗生素使用指南 摘要： 1.能用窄谱不用广谱：查明病因（致病菌是什么）对症施（窄谱）药，查不出 再用广谱。 2.能用低级不用高级：参见文中分级管理部分 3.能用口服不用输液：口服效果差是谣言，只是达峰时间稍多一些。静脉给药 风险大，尤其对于儿童。只有在昏迷、严重腹泻或其他一些非常情况下才考虑输液。肌肉注射只适用于部分抗生素。 4.能用一种不用换药：避免产生抗药性。 5.吃药不要见好就收，而是要斩尽杀绝：避免残留菌反弹并产生抗药 性。但要注意，不要连续使用超过一周。 6.病毒性疾病不要用抗生素：医院里查血，如果白细胞和中性粒细胞指标都 正常，说明不是细菌感染，不要服用抗生素。 7.不要长期使用广谱抗菌药：会破坏人体正常菌群，造成身体紊乱，并有其 它副作用。 窄谱＆广谱：抗菌范围不同 抗生素有窄谱和广谱之分，它们各有长处和短处，所以，使用起来也很有讲究。 抗生素通常是指由细菌、霉菌或其他微生物在繁殖过程中产生的、能够杀灭或抑制其他微生物的一类物质，用于治疗敏感细菌所致的感染。 在抗生素类药中，又分为窄谱和广谱两种。引起我们人体感染的病原微生物种类繁多，有的抗生素是只针对其中个别的细菌可以产生杀菌或抑制作用，而有的抗生素是可以针对比较多的病原微生物进行抑制和杀灭。针对的细菌越少，它的抗菌谱就越窄，反之，针对的细菌越多，抗菌谱就越广。 抗生素能够帮助我们将体内致使我们感染的细菌杀灭，但是，在消灭危害我们身体的细菌时，我们体内正常的菌群同样也会被抗生素杀灭或抑制。正常菌群受抗生素影响的大小，和选用抗生素的抗菌谱有关系，也就是说，和抗菌谱的广与窄有关系。抗生素的抗菌谱越广，受影响的细菌谱也越广，被杀灭或抑制的正常菌群也就越多。 实例： 蔡先生说，老伴8年前因中风引起肺炎，抢救时使用了大量的抗生素。之后，每次用抗生素都会引起肠道菌群紊乱。现在她患有尿路感染，一用抗生素就出现肠道紊乱。蔡先生的问题实际上是临床中比较常见的问题，引起肠道菌群失调的原因主要有机体内部和外界影响两个方面。机体内部方面主要有急慢性疾病（如胃酸缺乏症、慢性肾炎、肝硬化等）、手术（如
抗生素的使用原则-部分 （一）选用抗生素的基本原则 1.病毒性疾病或估计为病毒性疾病者不宜使用抗生素。因此，除肯定为细菌引起或有细菌继发感染外，一般不采用抗生素。 2.对病情严重的细菌感染者，有条件时应尽早分离出其病原菌并测定药敏，再根据药敏结果选择和调整抗生素。 3.发热原因不明者不宜使用抗生素，尽可能作出病原学诊断，再根据疾病情况考虑在细菌培养和药敏试验完成后再使用抗生素。 4.除眼科、耳鼻喉科、皮肤科等专科需要外，应避免在皮肤、粘膜等局部应用抗生素，因其易引起过敏反应和产生耐药菌株，有碍于这些抗生素日后的全身应用。 5.严格控制应用抗生素作为预防措施。预防性应用抗生素目的若在于防止某一二种特殊细菌侵入人体或血液循环中而发生感染，可获得相当效果；若其目的在于防止多种细菌的侵入而发生感染，常劳而无功。避免无针对性地以广谱抗生素作为预防感染的手段。 6.选用抗生素应严格掌握适应症。常用抗生素的主要适应证如下。 （1）青霉素G：链球菌、肺炎球菌、敏感金黄色葡萄球菌、肠球菌所致的感染性心内膜炎、气性坏疽，炭疽杆菌、厌氧球菌感染以及梅毒、淋病等。 耐青霉素的半合成青霉素：耐青霉素G金黄色葡萄球菌所致的各种感染。 广谱半合成青霉素：流感杆菌、奇异变形杆菌、沙门氏菌属、肠球菌及敏感革兰氏阴性杆菌所致的各种感染。 （2）头孢菌素类：对青霉素G耐药或敏感金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌以及敏感革兰氏阴性杆菌所致各种感染。 第一代头孢菌素：对革兰氏阳性菌具有高度敏感性，对革兰氏阴性细菌的抗菌活性则较差。 第二代头孢菌素：除对革兰氏阳性细菌具有较强活性外，对革兰氏阴性细菌的抗菌活性有所扩大，对第一代头孢菌素耐药的细菌一般也可有效。 第三代头孢菌素：比第二代头孢抗菌作用更广、更强，特别对革兰氏阴性细菌的作用更为广泛，对绿脓杆菌感染更为有效。 （3）氨基糖苷类：革兰氏阴性杆菌所致的各种感染。 （4）四环素类：立克次氏体病、布氏杆菌病、支原体肺炎、霍乱、回归热、衣原体感染。
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 素而设计的。 一、保藏方法大致可分为以下几种： 1、传代培养保藏法 2、液体石蜡覆盖保藏法 是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。 3、载体保藏法 是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。 4、寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。 5、冷冻保藏法 6、冷冻干燥保藏法 先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。 有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 二、器材: 细菌、酵母菌，放线菌和霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙； 灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。 三、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点 下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。 1、斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保
《抗菌药物临床应用指导原则》 ?《指导原则》的四个部分： 1、抗菌药物临床应用的基本原则； 2、抗菌药物临床应用的管理； 3、各类抗菌药物的适应症和注意事项； 4、各类细菌性感染的治疗原则及病原治疗 2009年3月25日卫办医发〔2009〕38号 《卫生部办公厅关于抗菌药物临床应用管理有关问题的通知》 ?以严格控制Ⅰ类切口手术预防用药为重点，进一步加强围手术期抗菌药物预防应用的管理 ?严格控制氟喹诺酮类药物临床应用 ?严格执行抗菌药物分级管理制度 ?加强临床微生物检测与细菌耐药监测工作，建立抗菌药物临床应用预警机制 医学微生物种类 ?细菌 ?真菌 ?病毒 ?支原体、衣原体和立克次体 ?原虫 常见致病菌的分类 ?1、球菌 ?1、1革兰阳性球菌葡萄菌属凝固酶阳性金葡菌 凝固酶阴性-表皮、腐生、溶血 链球菌属（肺炎、化脓、草绿色） ?1、2革兰阴性球菌奈瑟菌属脑膜炎、淋病 莫拉菌属卡他 常见致病菌的分类 ?2、杆菌 ?2、1革兰阳性杆菌无芽胞杆菌 需氧或兼性厌氧菌（李斯特、分枝、棒状） 厌氧菌（双歧、丙酸） 产芽胞杆菌 需氧菌（炭疽、腊样） ?2、2革兰阴性杆菌肠杆菌科（埃希、志贺、沙门、克雷伯） 非发酵菌（铜绿、不动、嗜麦芽窄食） 弧菌科细菌（弧菌属、气单胞） 其他（军团、嗜血、弯曲、螺旋） 常见致病菌的分类 ?3、厌氧菌 有芽孢的厌氧菌破伤风梭菌
产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 艰难梭菌 无芽孢的厌氧菌（球菌、杆菌均有） 几个概念 ?抗感染药物（抗微生物药物+抗寄生虫药物） ?抗微生物药物（抗菌药物+抗真菌药物+抗病毒药） ?抗菌药物（抗生素+人工合成的抗菌药物） ?抗生素 ?抗菌素 一、常用抗菌药物 抗菌药物的作用机制 根据主要作用靶位不同，作用机制可分为: ?干扰细菌细胞壁的合成，使细菌不能生长繁殖 β-内酰胺类、糖肽类、磷霉素 ?损伤细菌细胞膜，破坏其屏障作用 多粘菌素 ?影响细菌蛋白质的合成，使细菌丧失生长繁殖的物质基础 30S:氨基糖苷类、四环素 50S:大环内酯类、林可霉素、氯霉素 ?抑制细菌核酸的合成，阻碍遗传信息的复制， DNA：喹诺酮类、呋喃类、咪唑类 RNA：利福平 ?其他 叶酸二氢叶酸合成酶（磺胺类） 二氢叶酸还原酶（甲氧苄啶） 一、青霉素类 ?1、青霉素G和青霉素V——用于不产酶的革兰氏阳性菌） ?2、耐酶青霉素（苯唑、氯唑、双氯、氟氯）——用于产酶葡萄球菌所致的各种感染 ?3、氨基青霉素（氨苄西林、阿莫西林）——用于革兰氏阴性杆菌、肠球菌所致感染 ?4、广谱青霉素（羧苄、替卡、阿洛、美洛、哌拉）——用于各种革兰氏阴性菌的感染 ?5、美西林——仅对于革兰氏阴性菌有作用 青霉素类 ?注意事项：1、无论何种给药途径，用药前均需询问青霉素过敏史并需先做皮试。 ?2、间隔时间3天以上，应重新做皮试； ?3、换批号后，应重新做皮试 头孢菌素的分代及其抗菌活性比较 第一代头孢注射品种比较 第一代头孢口服品种比较 第二代头孢菌素 ?V￡oí·????Dá?￠í·?????à?￠í·??ì?°2?￠í·???á?÷ ?头孢呋辛：1、对酶稳定；2、几无肾毒性；3、通过血脑屏障；4、既有注射制剂又有口服制 剂 ?头孢孟多：戒酒硫样反应、低凝血酶原血症
抗生素及激素合理使用制度 一、根据细菌培养和药敏结果选用毒副作用小的抗生素。 二、尽量避免应用广谱抗生素，以防止引起宿主自身药群失调，而导致耐药菌株的产生。 三、对于感染特别严重者，可选按临床估计的病原菌选择抗生素。 四、（一）、对新生儿、老年人、孕妇及肝肾功能障碍者，应谨慎选用抗生素及酌情调整给药方案。 （二）、严格控制抗生素的预防使用。 1、禁止无针对性地、以广谱抗生素作为预防感染的手段。 2、对无感染迹象的昏迷、非感染性休克、恶性肿瘤、脑血管意外、糖尿病及接受侵袭性操作者，不必预防性使用抗生素。 3、风湿性或先天性心脏病患者手术前后，可预防性使用抗生素，防止感染性心内膜炎的发一、严格掌握抗生素的适应症。 流行性脑膜炎流行期间，为了减少带菌者，如果不能使用磺胺类药物，可考虑应用抗生素。 4、外科手术的预防性用药，主要用于手术中组织损伤严重或疑为受细菌污染的手 术。患者身体衰弱及免疫低下且对院内感染易感者，手术前可预防用。 （三）、已确定为病毒性疾病或疑为病毒性疾病的不使用抗生素。 （四）、发热原因不明者，在弄清病原学诊断前，不用抗生素，以免影响临床典型症状的出现和病原体的检出。对于病情特别严重的细菌感染患者，可适当选用相 应抗生素，若作出细菌培养结果来，再按药敏指导用药。
五、尽量避免皮肤、粘膜等局部应用抗生素。抗菌药物的局部应用，易造成耐药菌株的产 生，引起皮肤的过敏反应，尤以青霉素类、头孢菌素类、氨基糖甙类等不宜使用。必要时，可用新霉素、杆菌肽、磺胺嘧啶银等。 六、联合使用抗菌素，必须有严格的指征。联合使用抗生素，应能达到协同或相加的作用， 并达到减少药量、减少毒副作用，防止或延缓耐药菌株产生的目的。不可无根据地随意联合用药，特别是起无关作用和拮抗作用的。抗生素联合用药的指征是单用一种抗生素不能控制的严重感染（包括败血症、细菌性心内膜炎、化脓性脑膜炎等）、混合感染、顽固性感染及需长期用药防止细菌产生耐药的情况。一般以二联为宜，β-内酰胺类与氨基糖甙类宜联合应用。 七、使用抗生素应注意配伍禁忌及合理给药。静脉滴注时，抗生素之间，抗生素和激素， 维生素及血管活性药物之间，均可发生配伍禁忌或相互作用，使抗生素的活力受到影响，甚至产生毒性反应。抗生素的给药时间及方法要视其血药浓度，毒副作用而定。 八、药剂科应定期统计各科抗生素消耗量及使用类型。按规定对某些抗生素实行限制性使 用，并根据本院常见病原菌的耐药谱，调整用药，以保证抗生素的活力和减少耐药菌株的产生。 九、一般感染时，抗生素使用至体温正常或症状消失后72~96小时停药，对于急性感染采 用抗生素治疗的病人，用药后72小时临床疗效不显著者，应根据药敏结果选用其它敏感药物。 十、预防抗生素过敏反应的发生。在使用β-内酰胺类、青霉素类、头孢菌素类等抗生素 前，要询问有无过敏史，并做皮内试验。氨基糖甙类除非有特殊指征，一般使用前不行皮内试验。 十一、严格把握激素使用的适应症，杜绝滥用激素类药物，使用时本着总量不大、时间不
菌种保藏的方法 菌种是国家重要的生物资源，鉴于其自身的遗传性和变异性，在菌种保藏过程中，如何降低菌种的衰亡速度，防止杂菌污染，保持菌种遗传性状不变异，使优良高产菌株长期在生产中应用，成为食用菌领域一项重要的课题。为适应群众性生产的需要，为适应群众性生产的需要，本文介绍了几种简单易行、实用效果好的菌种保藏方法。 一、菌种保藏基本原理 通过低温、干燥、缺氧和饥饿等手段来达到最大限度降低菌丝体的生理代谢。首先要挑选优良纯菌种，包括菌丝体和它们的孢子；其次，根据其生理、生化特点，人为创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的性状，防止变异。 二、菌种保藏的方法 试管斜面菌种系列保存方法 1低温定期移植保藏法 将需要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3~5℃低温干燥处或4℃冰箱中保藏，每隔3~6个月移植转管1次，具体应根据菌种特性决定。保藏时要注意环境湿度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。因此，若用棉塞，可用干净的塑料薄膜或牛皮纸包扎棉塞，也可用无菌的白胶塞，并用石蜡涂封，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。除草菇外，大多食用菌菌种都能采用此法保藏。 2液体石蜡保藏法
取化学纯液体石蜡装于三角瓶中高压灭菌后，放入40℃恒温箱中，蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，28～30℃下培养2～3d，证明无杂菌生长方可使用。然后将母种接在斜面培养基上，当菌丝在斜面上生长丰满后，将液体石蜡注在斜面上，注入量以高出斜面1cm为宜，使菌种与空气隔绝，降低其新陈代谢能力。管口用灭过菌的白胶塞塞紧，并用石蜡涂封，直立放在室内干燥处或冰箱内保藏。一般可保存1年以上，在低温下保藏时间还可延长。使用时从斜面上挑取菌丝少许，移接到新鲜斜面培养基上，经培养即可。由于菌丝体沾有液体石蜡而影响其生长，需再经1次移接才能恢复正常生长。 3白胶塞封口保存法 选择与试管口径相符的白胶塞，用%煤酚皂溶液洗涤，浸泡在酒精内待用。当试管斜面长满菌丝后，在无菌条件下拔去棉塞，取浸泡的白胶塞1个，通过火焰迅速塞入试管口内，并用石蜡熔封。此法能达到与石蜡油封存相似的效果。用该法保存菌种可存活1～3年，但以每年移植1次为好。 4蒸馏水保藏法 将8成熟试管菌种放在接种箱内，注入蒸馏水，将培养基斜面全部淹没至管口2cm。管口用白胶塞塞紧，并用石蜡涂封，常温下置于阴凉处立放，可以保藏1年左右。 非斜面固体菌种系列保存法 1麦麸保藏法 将麦麸和水按∶1充分拌匀后，装入试管高压灭菌，经无菌检查合格后接种，适温下培养至菌丝体发育好后，将试管放入真空干燥器内，用真空泵将麦麸培养基内水分抽干，然后移入盛有硅胶的干燥器内，用凡士林密封在常温下保存，可保藏3～5年。