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HYK免疫细胞治疗技术
HYK免疫细胞治疗技术是通过对单个核细胞，在GMP实验室内经过添加细胞因子，使细胞数量扩增、杀瘤活性增强，再通过静脉、介入等方式分次回输给病人，从而激发和增强患者的免疫力，能有效清除微小残留肿瘤细胞，延长生存期，是防止肿瘤术后和放化疗后复发和转移的新方法。常用的肿瘤免疫细胞手段包括ECIK细胞、DC细胞、DC-CIK细胞、DCIK细胞、T细胞。
HYK免疫细胞治疗的途径有哪些？
HYK免疫细胞治疗的途径可分为静脉注射、皮下注射，瘤体内注射和淋巴结注射。
HYK免疫细胞治疗技术的优势
HYK免疫细胞治疗是20世纪80年代以来随着免疫生物学、肿瘤免疫学和细胞分子生物学的发展而形成的第四种治疗手段，它克服了传统治疗“易转移，易复发，副作用大”的缺点，具有传统治疗无法比拟的优势，具体如下：
低毒：无明显毒副作用
靶向：作用方向明确，仅针对体内异常肿瘤细胞进行杀伤，不会破坏正常的组织细胞
全面：清除微小病灶和残余肿瘤细胞，对原发灶、转移病灶和耐药肿瘤病灶均有疗效，能有效预防肿瘤复发
高效：增强机体免疫功能，改善症状，提高生存质量，延长生存期。
HYK免疫细胞治疗的适应症：
手术后的肿瘤患者，可防止肿瘤复发转移；
无法进行手术、放疗、化疗的中晚期肿瘤患者；
放疗、化疗失败的肿瘤患者；
肿瘤患者放化疗后的综合治疗，可减轻放化疗的副作用；
骨髓移植后或化疗缓解后的白血病患者；
癌性胸、腹腔积液患者；
部分暂不适宜做手术、介入或其他治疗的患者。
HYK免疫细胞治疗的禁忌症
1、孕妇或者正在哺乳的妇女；
2、 T细胞淋巴瘤患者；
3、不可控制的严重感染患者；
4、对IL-2等生物制品过敏的患者；
5、艾滋病患者；
6、正在进行全身放疗、化疗的患者；
7、晚期肿瘤造成的恶病质、外周血象过低患者；
8、器官功能衰竭者；
9、脏器移植者；
10、长期使用或正在使用免疫抑制剂的患者。
ECIK细胞治疗技术
增强型细胞因子诱导的杀伤细胞（Enhanced cytokine induced killer cell, ECIK）是在普通型CIK 的基础上，通过优化培养体系而获得的较CIK细胞数量更多、杀瘤活性更强的细胞。其通过采集分离到患者外周血中的单个核细胞，在体外用多种进口的细胞因子共同培养而获得的一群异质性细胞，其中以CD3+和CD56+双阳性细胞为主要效应细胞，兼具有T细胞特异性杀肿瘤和NK细胞非MHC限制性杀瘤的特点。
E-CIK细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、非MHC限制性、对正常骨髓造血影响轻微等优点。E-CIK细胞除具有普通型CIK细胞的特性外，其显著的特征是增殖能力是普通型CIK细胞的3～5倍，回输的细胞数量达到100亿以上，有利于形成杀瘤的量效优势。
ECIK细胞可以通过多种机制发挥抗肿瘤免疫效应？
1．通过释放穿孔素、颗粒酶等物质直接杀伤肿瘤细胞。
2．通过Fas/FasL途径诱导肿瘤细胞的凋亡。
3．通过分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等多种细胞因子，发挥直接或间接的抗肿瘤免疫效应。
ECIK细胞抗肿瘤免疫治疗的优势？
1． ECIK细胞增殖速度快，可以在短期内大量扩增，满足临床治疗的需要。
2． ECIK细胞具有特异性识别肿瘤细胞的机制，对正常细胞无毒副作用。
3． ECIK细胞杀瘤活性高，杀瘤谱广，对多种耐药肿瘤细胞同样敏感。
4． ECIK细胞杀瘤活性不受CsA（环孢霉素A）和FK506（普乐可复）等免疫抑制剂的影响。
5． ECIK细胞是活化的自体细胞，安全性好，不会产生排斥等反应，副反应小。
ECIK 的治疗范围
ECIK细胞能治疗哪些肿瘤？
由于ECIK细胞对任何一种肿瘤均有杀伤作用，在多种肿瘤的治疗中展示了应用前景。如各种肉瘤、黑色素瘤、恶性淋巴瘤、肾癌、非何杰金氏淋巴瘤及高分化腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、消化道肿瘤（如胃癌、结肠癌、食道癌）、胰腺癌、喉癌、头颈部肿瘤、淋巴瘤（T细胞淋巴瘤除外）、白血病、多发性骨髓瘤等。
有些肿瘤，如各种肉瘤、黑色素瘤、肾癌、非何杰金氏淋巴瘤及高分化腺癌等对放化疗不敏感，因此ECIK细胞是这些肿瘤的首选。
ECIK细胞治疗可用于哪一阶段（期）的肿瘤？
ECIK细胞治疗可用于任何一期的肿瘤患者，早期、中晚期的病例均有较好的近期疗效。手术切除、介入、射频、氩氦刀等治疗的同时或治疗后的病人疗效更佳。ECIK细胞能够杀伤清除不能用手术切除的极微小瘤灶或是体内散存的肿瘤细胞，起到延缓或阻止肿瘤的转移或复发的作用。部分暂时不适宜做手术、介入或其它治疗的患者，也可以先进行免疫细胞治疗，提高身体机能状况，改善生活质量，争取其它治疗机会。
DiKaT细胞治疗技术
载瘤抗原树突状细胞（Tumor associated antigen-Dendritic cell, TAA-DC）激活CIK及特异T 细胞整合技术（Integrated dendritic cell induced killer cell and T cell, DiKaT），根据病人HLA-a2分型检测阳性的病人，选用病人肿瘤相应的特异性抗原（TSA）负载DC，并分别用DC来激活病人的CIK、T细胞，DiKaT技术是综合了DC疫苗、CTL细胞治疗等技术，进行序贯联合设计的一种个性化细胞治疗技术。
DiKaT技术采用多种免疫细胞联合作用，克服了单一免疫细胞治疗的局限性，结合了特异性杀伤和非特异性杀伤肿瘤细胞的效果，可全面提高病人的免疫功能，对免疫原性较强的肿瘤效果更好。另外接受本治疗前必须进行HLA-a2分型检测，检测结果阳性患者适合该技术治疗。
γδT细胞治疗技术
γδT细胞是介于特异性免疫与非特异性免疫之间的一种特殊类型的细胞，主要分布于皮肤和粘膜组织，一般不超过T细胞总数的5%。活化后的γδT细胞具有强大的特异性和非特异性杀伤肿瘤细胞的双重特性，此外γδT细胞还具有DC的抗原递呈能力，可高效激活T细胞形成CTL细胞；HYK的专利技术能在体外高效扩增γδT细胞，从而解决有效细胞量不足和DC 抗原递呈细胞无法扩增的缺点。
D-CIK细胞治疗技术
树突状细胞调节的细胞因子诱导的杀伤细胞（Dendritic cell activated and cytokine induced killer cell, D-CIK），是将人体外周血单个核细胞分别诱导培养成DC和CIK细胞，DC培养成熟后再与CIK细胞共培养而获得的异质性细胞群体。二者共培养时，T细胞促使DC进一步成熟后释放大量IL-12、IFN-γ等细胞因子，使CIK细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性明显增强，CIK细胞扩增倍数上升；DC分泌高水平的IL-2、IL-12诱导Th1型细胞免疫应答，有利于清除肿瘤细胞，达到1+1>2的效果。
一、TIL细胞治疗技术
肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte, TIL细胞）是一群存在于肿瘤间质中的异质性淋巴细胞，一般从肿瘤组织、肿瘤引流淋巴结、癌性胸腹水中分离出的淋巴细胞经IL-2培养得到，其肿瘤杀伤活性为MHC限制性，即为自体肿瘤特异性杀伤细胞，具有CD3+CD8+或CD3+CD4+表面标志。TIL细胞对癌性胸、腹腔积液患者疗效显著。
TIL细胞治疗肿瘤的优点
增殖性及杀伤性强；
IL-2量用量小；
取材于肿瘤组织。
对癌性胸水和腹水治疗效果较好。
二、CTL细胞治疗技术
CTL细胞技术
CTL(cytotoxic T lymphocyte)细胞即细胞毒性T淋巴细胞，它在T细胞免疫应答中起重要作用。CTL的功能特点是可以在MHC限制的条件下，直接、连续、特异性的杀伤靶细胞。CTL对靶细胞的杀伤过程可以分为三个时相：（1）接触相：CTL通过TCR及粘附分子与靶细胞接触。此过程只需要几分钟。（2）分泌相：CTL与靶细胞紧密结合，CTL活化并使细胞颗粒性内容物呈现极化分布，随即启动胞吐机制，分泌细胞毒性物质，作用于靶细胞。（3）裂解相：靶细胞死亡的过程。
CTL的杀伤特点：（1）杀伤力强；（2）反复杀伤靶细胞，而且在杀伤靶细胞的过程中本身不受损伤；（3）MHC限制性。
CTL的杀伤机制：（1）穿孔素：穿孔素以单体形式释放后，插入靶细胞膜，形成管状多聚穿孔素（孔道），容许Na+和水分子进入靶细胞，使靶细胞渗透压改变，最终导致靶细胞溶解。（2）颗粒酶：CTL细胞通过胞吐作用释放的颗粒酶，可通过穿孔素构建的管状结构穿越靶细胞膜进入其胞浆中，激活caspase10（半胱天冬氨酸蛋白酶10），引发caspase级联反应，使靶细胞凋亡。（3）肿瘤坏死因子：包括TNFα-和TNF-β，它们可以与靶细胞表面的相应的受体结合，启动靶细胞的凋亡。
CTL疗法
1. Tc细胞简介
CD8+T细胞又称细胞毒性T（Tc或CTL）细胞，能直接攻击带异抗原的靶细胞，因此在抗病毒感染、同种异体移植排斥反应和抗肿瘤免疫中起重要作用。
2. Tc细胞的作用机制
Tc细胞对靶细胞的杀伤作用是抗原特异性的，只杀伤相应靶细胞而对其它细胞无损伤作用。Tc细胞杀伤靶细胞的过程分为两个阶段。
（1）效靶细胞结合阶段
Tc细胞到达抗原所在部位后，通过TCR-CD8复合物与靶细胞表面抗原肽-MHCI类分子复合物紧密结合，并在多种粘附分子、细胞因子等参与下，完成复杂的识别、粘附、信号传递等过程，触发细胞活化释放溶细胞介质。
（2）致死性打击阶段（杀伤主要机制）
Tc细胞主要通过三种方式杀伤靶细胞。
①穿孔素-颗粒酶系统途径
Tc细胞释放颗粒中预先合成的穿孔素和颗粒酶。穿孔素以单体形式释放后，插入靶细胞膜，形成管状多聚穿孔素（孔道），容许Na+和水分子进入靶细胞，使靶细胞渗透压改变，最终导致靶细胞溶解。另一方面为颗粒酶进入靶细胞提供通道。颗粒酶是一类丝氨酸酯酶，具有核酸酶效应。从颗粒中释放后经多聚穿孔素进入靶细胞，在靶细胞内触发引起DNA断裂的机制，导致靶细胞调亡。由于颗粒中的物质是预先合成的，所以这一途径引起的杀伤是非常迅速的。效应细胞颗粒中储存的穿孔素和颗粒酶数量使得一个效应细胞足以连续杀伤许多细胞。
②FasL/Fas系统途径
效应Tc细胞杀伤靶细胞的另一种方式是通过与靶细胞的直接接触，活化的CTL膜上表达FasL，它与靶细胞膜上的Fas结合，导致靶细胞调亡。
③细胞因子途径
效应Tc细胞分泌TNF-α和TNF-β，杀伤靶细胞。
3. Tc细胞的临床应用
Tc细胞在抗肿瘤和抗病毒性感染（如肝炎）治疗方面有很好的应用。Tc细胞是杀伤白血病细胞的关键性效应细胞，因而将体外诱导并扩增的白血病细胞特异性Tc细胞回输给患者，是一种有效的白血病治疗方法。
精密制导、精准打击的抗癌生物导弹
——合一康CAR-T技术
技术背景：
生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段——2012年国际细胞治疗协会年会。免疫细胞治疗是采集患者外周静脉血，在GMP实验室内分离外周血单个核细胞，在多种细胞因子诱导下，大量扩增出具有高效抗瘤活性的免疫效应细胞，再通过静脉、皮内注射、介入等回输到患者体内，达到增强患者免疫功能和杀伤肿瘤细胞的目的，常用的免疫细胞治疗手段包括CIK、DC、TIL、DC+CIK 细胞等。
但是，在临床上发现肿瘤时，一般已是中晚期，此时病人体内肿瘤细胞占优势，严重损害了机体的免疫功能，在这样的免疫系统微环境下，DC细胞功能受损，激活T细胞效率较低，攻击癌细胞能力不够，也不够精准；另外，肿瘤细胞通过低表达或不表达MHC分子的逃逸机制，逃脱免疫细胞的攻击。这就需要制造精密制导、精准打击的免疫细胞武器，克服MHC介导的杀瘤机制。于是，靶向性抗肿瘤细胞CAR-T技术应运而生。
2011年8月10日，美国《生物转化医学》和《新英格兰医学期刊》权威杂志报道，宾夕法尼亚大学基因治疗专家卡尔·朱恩利用患者改造后的自身T细胞治愈了两位晚期慢性淋巴细胞白血病（血癌）患者，开创了肿瘤生物治疗的新纪元。
美国科学家们对以往的治疗方式做了一点小改动：首先抽出患者体内的部分T细胞，在体外进行了基因改造，导入识别肿瘤的基因，形成识别肿瘤的“记忆”，并在体外短时间内大量繁殖，最后回输到病人体内，长期待续杀灭全部恶性肿瘤细胞。治疗进行得非常成功，一名不愿透露姓名的64岁病人在接受T细胞植入仅仅23天后，体内的癌细胞奇迹般的全部消失了。一年之后，其中两位体内的癌细胞均已全部杀灭，另外一位受试者体内的白血病细胞数量也大幅度减少。
CAR-T技术原理：
嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）是将能识别某种肿瘤抗原的抗体的抗原结合部与CD3-δ链或FcεRIγ的胞内部分在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基
因转导的方法转染患者的T细胞，使其表达嵌合抗原受体(CAR)。患者的T细胞被“重编码”后，生成大量肿瘤特异性的CAR-T细胞。
图一
第一代CAR由识别肿瘤表面抗原的单链抗体（single chain fragment variable，scFv）和免疫受体酪氨酸活化基序（immunoreceptor tyrosine-based activation motifs，ITAM，通常为CD3-δ和FcεRIγ）组成。早期的实验证明了CAR-T的可行性，然而第一代CAR只能引起短暂的T细胞增值和较低的细胞因子分泌，不能提供长时间的T细胞扩增信号和持续的体内抗肿瘤效应。依照T 细胞活化的双信号学说，T细胞的激活和增殖需要共刺激信号；
第二代、第三代CAR引入了共刺激分子信号序列（costimulatory molecule，CM），旨在提高T细胞的细胞毒活性、增殖性与存活时间，促进细胞因子的释放（如图二）。
图二
CAR-T技术优势：
CAR-T细胞治疗技术具有如下优势：
? 治疗更精准。由于CAR-T 细胞是应用基因修饰病人自体的T细胞，利用抗原抗体结合的机制，能克服肿瘤细胞通过下调MHC分子表达以及降低抗
原递呈等免疫逃逸，让肿瘤细胞无所逃遁；
? 多靶向更精准。CAR既可以利用肿瘤蛋白质抗原，又可利用糖脂类非蛋白质抗原，扩大了肿瘤抗原靶点范围，CAR-T细胞作用过程不受MHC的限
制；
? 杀瘤范围更广。鉴于很多肿瘤细胞表达相同的肿瘤抗原，针对某一种肿瘤抗原的CAR基因构建一旦完成，便可以被广泛利用；
? 杀瘤效果更持久。新一代CAR结构中加入了促进T细胞增殖与活化的基因序列，能保证T细胞进入体内后还可以增殖，CAR-T细胞具有免疫记忆
功能，可以长期在体内存活。
卡尔·朱恩说，这些T细胞的好处在于不必像化疗药物那样持续给药，细胞是“活的、动态的、不断分裂的药”，一次注射，持久保护，这种前沿肿瘤生物治疗技术让全球的科学家们震惊。
合一康CAR-T技术
合一康生物通过选择不同的共刺激分子及其组合，优化CAR的结构，成功构建了基于慢病毒载体转染体系的靶向特定肿瘤抗原的第三代CAR，掌握了新一代高效、精确、可控的CAR-T细胞治疗技术。
同时，合一康生物联合中科院深圳先进技术研究院成立了肿瘤免疫细胞与基因治疗技术联合实验室，积极寻求更为安全的基因修饰载体，开发出了基于微环DNA（MC）技术的MC-CAR-T细胞治疗技术。微环DNA是世界上最好的基因载体，与现有的基于病毒载体的技术相比，具有转染率高、基因表达持久的优点、同时具有非病毒载体毒性低、免疫反应低，携带基因不整合至宿主细胞基因组等优点。
由此，可以发展出一系列安全、高效、广谱的、可负担的抗癌产品，成为治疗几乎所有癌症的利器。产业化的实施将大大降低治疗的成本，提高治疗的效果，不仅可以彻底治愈癌症，甚至可以将人类带入到一个无癌的世纪。
合一康CAR-T技术适应症
? 适用条件
一、肿瘤标志物或免疫组化检测的某种或数种肿瘤相关抗原为阳性（参见《肿瘤患者筛选标准》）；
二、肿瘤组织的HLA-Ⅰ类抗原阳性；
三、停止化疗或放疗，外周血细胞恢复至正常值或接近正常值（使用升白细胞药物达到的正常值除外）；
四、无重度贫血，全身器官衰竭和恶病质状态；
五、肝肾功能正常，生命体征基本正常；
六、无严重过敏体质；
患者符合以上条件即可接受合一康CAR-T技术治疗。
? 适用治疗
⑴早期患者术中或术后的治疗
⑵晚期患者放化疗同时治疗或放化疗后的序贯治疗
⑶晚期患者的独立治疗
合一康CAR-T技术应用范围广泛，针对某种或数种肿瘤相关抗原阳性的肺癌、乳腺癌、大肠癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、鼻咽癌、食道癌、肾癌、膀胱癌、胃癌、黑色素瘤、淋巴瘤等恶性肿瘤均可治疗。
第二篇
CAR-T技术原理
嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）是将能识别某种肿瘤抗原的抗体的抗原结合部与CD3-δ链或FcεRIγ的胞内部分在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基因转导的方法转染患者的T细胞，使其表达嵌合抗原受体(CAR)。患者的T细胞被“重编码”后，生成大量肿瘤特异性的CAR-T细胞。
图一
第一代CAR由识别肿瘤表面抗原的单链抗体（single chain fragment variable，scFv）和免疫受体酪氨酸活化基序（immunoreceptor tyrosine-based activation motifs，ITAM，通常为CD3-δ和FcεRIγ）组成。早期的实验证明了CAR-T的可行性，然而第一代CAR只能引起短暂的T细胞增值和较低的细胞因子分泌，不能提供长时间的T细胞扩增信号和持续的体内抗肿瘤效应。依照T 细胞活化的双信号学说，T细胞的激活和增殖需要共刺激信号。
第二代、第三代CAR引入了共刺激分子信号序列（costimulatory molecule，CM），旨在提高T细胞的细胞毒活性、增殖性与存活时间，促进细胞因子的释放（如图二）。
图二
CAR-T技术优势
CAR-T细胞治疗技术具有如下优势：
? 治疗更精准。由于CAR-T 细胞是应用基因修饰病人自体的T细胞，利用抗原抗体结合的机制，能克服肿瘤细胞通过下调MHC分子表达以及降低抗
原递呈等免疫逃逸，让肿瘤细胞无所逃遁；
? 多靶向更精准。CAR既可以利用肿瘤蛋白质抗原，又可利用糖脂类非蛋白质抗原，扩大了肿瘤抗原靶点范围，CAR-T细胞作用过程不受MHC的限
制；
? 杀瘤范围更广。鉴于很多肿瘤细胞表达相同的肿瘤抗原，针对某一种肿瘤抗原的CAR基因构建一旦完成，便可以被广泛利用；
? 杀瘤效果更持久。新一代CAR结构中加入了促进T细胞增殖与活化的基因
序列，能保证T细胞进入体内后还可以增殖，CAR-T细胞具有免疫记忆
功能，可以长期在体内存活。
卡尔·朱恩说，这些T细胞的好处在于不必像化疗药物那样持续给药，细胞是“活的、动态的、不断分裂的药”，一次注射，持久保护，这种前沿肿瘤生物治疗技术让全球的科学家们震惊。
CAR-T技术治疗肿瘤的适应症
? 适用条件
一、肿瘤标志物或免疫组化检测的某种或数种肿瘤相关抗原为阳性（参见《肿瘤患者筛选标准》）；
二、肿瘤组织的HLA-Ⅰ类抗原阳性；
三、停止化疗或放疗，外周血细胞恢复至正常值或接近正常值（使用升白细胞药物达到的正常值除外）；
四、无重度贫血，全身器官衰竭和恶病质状态；
五、肝肾功能正常，生命体征基本正常；
六、无严重过敏体质；
患者符合以上条件即可接受合一康CAR-T技术治疗。
? 适用治疗
⑴早期患者术中或术后的治疗
⑵晚期患者放化疗同时治疗或放化疗后的序贯治疗
⑶晚期患者的独立治疗
合一康CAR-T技术应用范围广泛，针对某种或数种肿瘤相关抗原阳性的肺癌、乳腺癌、大肠癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、鼻咽癌、食道癌、肾癌、膀胱癌、胃癌、黑色素瘤、淋巴瘤等恶性肿瘤均可治疗。
免疫细胞治疗现状 一、免疫细胞治疗概念和分类 细胞治疗分为干细胞治疗和体细胞治疗（免疫细胞治疗）。前者包括ES、神经干细胞、骨髓干细胞、外周造血干细胞、间充质干细胞、脐带血干细胞、脂肪干细胞治疗等。后者体细胞治疗一般是指免疫细胞治疗。干细胞治疗是通过干细胞移植来替代、修复患者损失的细胞,恢复细胞组织功能,从而治疗疾病。 免疫细胞治疗技术是通过采集人体自身免疫细胞，经过体外培养，使其数量扩增成千倍增多，靶向性杀伤功能增强，然后再回输到患者体内，从而来杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞。免疫细胞治疗技术具有疗效好、毒副作用低或无、无耐药性的显着优势，成为继传统的手术疗法、化疗和放疗后最具有前景的研究方向之一。 免疫细胞治疗主要包括非特异性疗法LAK、CIK、DC、NK 和特异性TCR、CAR。（非特异性没有明确的免疫细胞靶点，是从整体上提高人体免疫力而达到缓解肿瘤症状，特异性治疗具有明确的靶点和机制，能通过激活或者抑制明确靶点来实现免疫系统对肿瘤的免疫激活）。 目前，国际最领先的是CAR-T细胞治疗，辉瑞、诺华等巨头与生物技术公司合作从事CAR或TCR开发，国内这块还没出成果，还处在临床试验阶段。而我国广泛使用的是非特异性细胞疗法，主要涉及CIK，DC-CIK治疗，比如双鹭药业，北陆药业，中源协和等公司已经运用于临床治疗中，还有些处在临床试验阶段。 二、传统非特异性细胞治疗 CIK细胞（细胞因子诱导的杀伤细胞），是将人体外周静脉血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养而获得的一群异质性细胞，其中CD3+和CD56+双阳性细胞为其主要效应细胞，兼具T细胞特异性杀肿瘤和NK细胞非MHC限制性杀瘤的特点。目前CIK细胞主要用于手术后、放化疗后微小残留病灶的清除及调节患者免疫能力。 CIK 细胞具有提高机体免疫功能，清除肿瘤微小残余病灶，防止复发的作用，主要通过以下3 种途径发挥抗肿瘤作用。 （1）直接杀伤肿瘤细胞：CIK 细胞表面含有与靶细胞（肿瘤细胞）表面分子结合的受体，启动细胞溶解反应释放一些细胞毒颗粒或因子，从而溶解肿瘤细胞。 （2）释放细胞因子抑制或杀伤肿瘤细胞：CIK 细胞可分泌IL-2、IFN-γ、TNF-
过继性细胞免疫治疗 过继性细胞免疫治疗通过体外激活和扩增肿瘤特异或非特异性杀伤细胞达到抗瘤效果，又可分为过继性NK细胞治疗和过继性T细胞治疗。该疗法优势在于起效快，体内因素影响相对较小。 过继性T细胞治疗是过继性细胞免疫治疗研究的重点，但对MHCⅠ类分子阴性的肿瘤细胞无效。而NK细胞由于表达MHCⅠ类分子的抑制性受体——杀伤细胞抑制性受体(KIR)，可以杀灭MHCⅠ类分子阴性的肿瘤。随着对NK调节分子机制研究的深入，目前NK细胞逐渐受到了关注。过继性细胞免疫治疗已经完成了一批随机对照临床研究(表2)，从中可以看出，既往的过继性细胞免疫治疗疗效并不乐观。不过新型过继性免疫细胞治疗的出现，如CIK、Xcelerated cell等，给肿瘤治疗带来了新的希望，目前正在对其进行随机对照研究。 目前过继性细胞免疫治疗最成功的例子是供者淋巴细胞输注(DLI)治疗异基因骨髓移植后复发的慢性髓性白血病(CML)、EB病毒(EBV)相关淋巴瘤。DLI介导抗肿瘤效应的机制目前尚不明确，可能有T细胞和(或)DC参与，其靶抗原是次要组织相容性抗原或白血病特异性抗原。其临床缓解有迟发性特点，通常发生在DLI后数周到数月间，符合T细胞介导的典型获得性免疫应答特点。Schmid等的研究表明，DLI 治疗后，超过60%异基因造血干细胞移植后复发的CML患者可获得分子生物学完全缓解(CR)，急性髓性白血病(AML)患者2年存活率可提高约10%。DLI治疗的最严重副作用是诱发移植物抗宿主病(GVHD)，可通过调整淋巴细胞的输注次数和数量减轻该副作用。 病毒引起的淋巴瘤保留了病毒基因表达，是过继性细胞治疗的理想靶点，因为患者体内的T细胞受体库中具有病毒蛋白高亲和力受体。Haque等进行的Ⅱ期临床试验表明，采用异基因EBV特异性CTL，治疗传统治疗无效的EBV阳性的移植后淋巴增殖性疾病患者，治疗后6个月客观缓解率(ORR)为52%，CR为44%，提示该疗法具有很好的应用前景。 过继性T细胞治疗的主要缺陷是部分肿瘤的抗原性弱，造成肿瘤特异性抗原高亲和力T细胞缺乏，或患者化疗后体内残存的T细胞缺乏肿瘤特异性。为解决这个问题，采用基因修饰T细胞增强抗肿瘤能力是目前的一个研究热点。例如，Morgan等通过逆转录病毒，用T细胞黑素瘤相关抗原MART-1的特异T细胞受体(TCR)转染自体T细胞，治疗17例标准治疗无效的转移性黑素瘤患者，结果显示15例患者体内的基因修饰T细胞存活超过90天，2例患者达CR并持续超过18个月。 （此文档部分内容来源于网络，如有侵权请告知删除，文档可自行编辑修改内容， 供参考，感谢您的配合和支持） 编辑版word
免疫细胞疗法联合化疗 化疗即用化学合成药物治疗疾病的方法。化疗是目前治疗肿瘤的主要手段之一。其优点在于化疗药进入人体后能很快分散到全身，既可杀死局部的癌细胞，也能杀死转移的癌细胞，全身减少肿瘤负荷，见效快，并能抑制肿瘤生长与扩散，对原发灶，转移灶，亚临床转移灶均有暂时控制的作用。 但化疗对杀灭癌细胞并无特异性，杀灭癌细胞的同时也杀死正常细胞，造成机体免疫损伤，而且过度化疗会缩短患者生存时间；部分肿瘤对药物不敏感，化疗不可能彻底杀死体内所有癌细胞，所以在一定的时间内癌细胞还会出现复发或转移。同时化疗还会产生很多的毒副作用。 免疫细胞疗法联合化疗，可以达到如下效果： 杀灭对化疗不敏感的肿瘤细胞； 增强机体对化疗的耐受性； 迅速恢复化疗对机体造成的免疫损伤，并进一步提高机体免疫功能， 减轻化疗的毒副作用和并发症； 有效预防肿瘤的复发和转移。 化疗对免疫细胞进一步发挥作用也能起到协同作用： 部分化疗药物如环磷酰胺、氟尿嘧啶、阿霉素等治疗病人后，可提高肿瘤的抗原分子和FAS等肿瘤凋亡受体表达，有助于免疫细胞识别肿瘤细胞，更易引起肿瘤细胞的凋亡；在线咨询医生请访问中国生物治疗网
https://www.doczj.com/doc/816121312.html,另外吉西他滨、环磷酰胺等化疗药物治疗后，可抑制病人体的MDSC、Treg等免疫抑制细胞，有利于免疫细胞引发病人自主的免疫应答； 还有蒽环类、丝裂霉素等化疗药物治疗后，可非特异性的激活病人的巨噬细胞，来杀灭肿瘤细胞； 另外化疗药物可提高肿瘤细胞膜的通透性，使免疫细胞分泌的杀灭肿瘤细胞的因子进入未与之结合的肿瘤，引起肿瘤细胞的崩解，导致"旁观"的肿瘤细胞死亡。 同时肿瘤细胞在化疗时被杀伤，释放抗原入血，对于生物免疫治疗中提取抗原进行DC疫苗和效应细胞的制备起到很好的推动作用。 联合应用方案设计： 免疫细胞治疗与化疗联合应用：将单纯化疗、间断性治疗转变为综合治疗及连续性治疗，从而提高肿瘤治疗效果。广州肿瘤医院https://www.doczj.com/doc/816121312.html,治疗方案是： 1、可以在整个化疗疗程前期应用免疫细胞治疗； 2、在化疗间期应用，比如患者采用的是21天化疗方案，可以于每次化疗前1天采集细胞，化疗后约一周左右开始回输。 3、整个化疗结束后，也可应用免疫细胞治疗，可于化疗后约一周采集细胞，培养10-14天进行回输。 免疫细胞治疗与化疗交替应用，既可以杀伤对化疗不敏感的肿瘤干细胞和其它处于非增殖期的肿瘤细胞，又能提高机体的免疫力，有效缓解化疗所引起的副
自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术管理规范 国家卫生部医政处第三类技术准入制管理 免疫细胞治疗技术是使用体外培养获得免疫活性细胞作为治疗手段的医疗技术。本管理规范适用于在临床上已完成安全性和有效性认证，并符合伦理要求，只涉及T细胞和NK细胞作为治疗手段的医疗技术。这类新技术已在世界多个国家开展，目前基本处于临床试验阶段。为规范细胞免疫治疗技术临床应用，保证医疗质量，保障人体健康，保障公民的合法权益，并促进我国相关生物治疗技术的发展，特制定本规范。 第一部分自体免疫细胞治疗技术的范畴 自体免疫细胞治疗技术：从自体外周血中分离的单个核细胞经过体外激活和扩增后输入患者体内，直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞，或调节和增强机体的免疫功能。这类细胞免疫治疗技术主要包括： 一. 自体CIK细胞（自体细胞因子诱导的杀伤细胞） 二. 自体TIL细胞（自体肿瘤浸润淋巴细胞） 三. 自体DC-CIK细胞（自体树突状细胞刺激的CIK细胞） 四. 自体CTL细胞（细胞毒T淋巴细胞） 五. 自体γδT细胞（自体伽马德尔塔T细胞） 六. 自体NK细胞（自然杀伤细胞）
第二部分自体免疫细胞治疗技术临床应用机构要求 一、临床应用机构基本要求 （一）开展自体免疫细胞治疗技术应当与该医疗机构功能、任务相适应。 （二）具有卫生部门核准登记的三级甲等医院或省级及省级以上专科医院。 （三）具有与免疫细胞治疗相关的科室。科室人员组成包括有从事人体免疫细胞治疗相适应的执业医师、执业护士、具有免疫学专业背景的专家和免疫细胞制备技术人员。该科室职责包括接受体细胞免疫治疗患者的选择，治疗方案的制定，患者的管理和随访，疗效评估体系的建立，规范治疗的程序建立，以及在治疗过程中处理可能出现的问题等。具备从事体细胞治疗质量控制的专业检验科室和人员。（四）具有人体免疫细胞治疗所需要的场地、设备和设施。（五）医院设有管理规范、运作正常的临床伦理委员会，该委员会中从事人体细胞免疫治疗的相关人员不超过委员人数的1/4。 二、从事自体免疫细胞治疗技术的人员基本要求 （一）免疫细胞治疗临床医师 1. 从事免疫细胞治疗的临床医师应取得《执业医师证书》、有5年以上相关临床诊疗工作经验。负责人应具有副主任医师及以上专业技术职务，主管医师应具有主治医师及以上专业技术职务任职资格。
附件3 自体免疫细胞（T细胞、NK细胞） 治疗技术管理规范 （征求意见稿） 为规范自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用，保证医疗质量和医疗安全，制定本规范。本规范为医疗机构及其医师开展自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术的最低要求。 自体免疫细胞治疗技术是指从自体外周血中分离的单个核细胞经过体外激活和扩增后输入患者体内，直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞，或调节和增强机体的免疫功能。本管理规范适用于在临床上已完成安全性和有效性认证，并符合伦理要求，只涉及自体T细胞和NK细胞作为治疗手段的医疗技术。 一、医疗机构基本要求 （一）医疗机构开展自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术，应当与其功能、任务相适应。 （二）三级甲等医院，具有卫生行政部门核准登记的与应用自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术有关的诊疗科目。 （三）具有与自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相关的科室，科室人员组成包括有与开展人体免疫细胞（T细
胞、NK细胞）治疗技术相适应的执业医师、执业护士、具有免疫学专业背景的专家和自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）制剂制备技术人员；具备开展自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术的场地、设备和设施；具备从事自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗质量控制的专业检验科室和人员。 （四）医院设有管理规范、运作正常的由医学、法学、伦理学等方面专家组成的自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用与伦理委员会。 （五）有至少2名具备自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用能力的本院在职医师，有经过自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相关知识和技能培训的、与开展的自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相适应的其他专业技术人员。 二、人员基本要求 （一）自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗医师 1.取得《医师执业证书》，执业范围为开展本技术应用相关专业。 2.有10年以上开展本技术临床应用相关专业临床诊疗经验，具有副主任医师及以上专业技术职务任职资格，在本医院连续工作不少于2年。 3.经过卫生行政部门认可的自体免疫细胞（T细胞、NK 细胞）治疗技术系统培训并考核合格。
【414】肿瘤免疫疗法介绍 2014-12-21张斌肿瘤免疫细胞治疗资讯 肿瘤免疫疗法是当前肿瘤治疗领域最具前景研究方向之一，各大药企纷纷寻求 与其他公司合作研发肿瘤免疫相关治疗方法。初步的临床试验结果表明其治疗 有效率非常高，Science杂志也将肿瘤免疫疗法评为2013年十大科学突破第一位。 本文首先介绍肿瘤免疫疗法在肿瘤治疗中的地位，然后是作用机制和具体分类，已经上市或在研药物、市场预测，最后列举各公司之间的收购合作及国内部分 参与相关研发的公司。 1肿瘤治疗发展历程 1.1传统疗法 手术切除、化疗、放射线治疗。其具有局限性：手术切除的方式常因为癌细胞入侵蔓延到邻近组织或远端转移而效果有限；化疗受限于对体内其他正常组织的毒性；放疗辐射也同样会对正常组织造成伤害。传统疗法都是对身体有极大负担，并且在发生恶性转移后，无论是何种方式都是很难彻底治愈。 1.2靶向疗法 20世纪末出现的靶向疗法是在细胞分子水平上，针对已经明确的致癌位点 来设计相应的治疗药物，药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，而不会伤及肿瘤周围的正常组织细胞。包括小分子靶向药物和单抗。 小分子靶向药物：针对可能导致细胞癌变的环节，如细胞信号传导通路异常、过度表达某些受体蛋白、抗肿瘤血管形成等，从分子水平来一转这些恶性生物学行为，从而抑制肿瘤细胞生长。 单抗：诱导机体产生抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用；作为靶向治疗的载体，将化疗药物、放射性同位素、毒素等细胞毒性物质特异性地运送到目标部位，而选择性杀伤靶细胞。 但靶向药物存在不足：主要有分子靶向药物有效性低，某种药物只能对特定突变基因型肿瘤产生作用；肿瘤基因突变产生药物耐受性导致长期的治疗效果下降；存在严重的不良反应；部分肿瘤不能通过靶向药物得到有效治疗。 1.3免疫疗法 最新的肿瘤免疫治疗是通过调动机体的免疫系统，增强肿瘤微环境抗肿瘤免疫力，从而控制和杀伤肿瘤细胞。
免疫细胞过继转移在肿瘤临床治疗中面临的挑战 徐迎新教授中国人民解放军总医院普通外科研究所 近来随着CAR-T治疗复发的急性B淋巴细胞白血病取得重大进展，以及保护体内T细胞的PD-1单克隆抗体临床试验取得一定疗效，吸引了众多国际知名大药厂和资本市场向肿瘤免疫治疗领域进发。人们开始认识到免疫治疗特别是免疫细胞过继转移在抗肿瘤治疗中的巨大前景。虽然免疫治疗突然热起来了，给一直以来坚持在该领域耕耘的科学家带来了发展的机会；但另一方面，我们必须保持清醒的头脑，客观的分析免疫细胞过继转移在肿瘤临床治疗中面临的挑战。 肿瘤免疫治疗的复杂性 实体肿瘤的治疗是集手术（包括各种微创术）、化疗、放疗、生物免疫治疗、中医药、心理治疗、营养代谢调整于一体的综合治疗。要使生物免疫治疗获益，首先要重视对每一肿瘤患者首诊时的总体治疗方案的顶层设计，生物免疫治疗与其它治疗方法的交互作用和相互协调。选择何种手段处理局部病灶，生物免疫治疗的时机，如何将免疫细胞过继转移与靶向抗体结合应用,如何利用化疗或抗体减低抑制性免疫因素（包括Treg等）都对免疫治疗的疗效产生影响。根据我们的经验，免疫细胞过继转移应从围手术期开始，贯穿术后全程。要获得长期生存还要不断进行免疫功能监测随访，以便在必要时进行加强免疫。因此，负责实施免疫细胞过继转移治疗的医师，应该对肿瘤综合治疗的各个方面有一个完整的认识,并能提出适合病人具体情况的建议方案. 在免疫细胞治疗过程中，我们发现，细胞制备使用统一培养体系，每个患者的细胞会反应不同，包括数量和表型。这与肿瘤的病种，疾病分期，是否合并
其它病毒感染，是否进行过其它治疗，免疫细胞初始治疗还是继代治疗，以及心理状态等因素有密切关系。因此，一方面需要从临床角度分析和把握；另一方面需要在细胞制备过程中，对不同患者的细胞培养条件进行必要的调整。 肿瘤免疫细胞治疗的靶向性问题 当前解决肿瘤免疫细胞过继转移治疗的靶向性或特异性问题主要依靠荷载肿瘤抗原的DC在体内诱导或在体外诱导并扩增特异性细胞毒性T细胞（CTL），直接从肿瘤内浸润淋巴细胞（TIL）或引流区淋巴结内淋巴细胞（TDLN）中扩增CTL，基因工程技术构建CAR-T和T细胞受体工程化T细胞（TCRT）。目前治疗复发的急性B淋巴细胞白血病获得了90%的完全缓解率，治疗慢性B淋巴细胞白血病也获得了87%的完全缓解率，说明经基因修饰的CAR-T具有强大和比较持久的杀瘤效果。但细分析起来，其靶向的分子CD19和CD20是人体正常B 淋巴细胞的表面标志。这就意味着该治疗的目标是清除血液甚至骨髓中所有的B 细胞，包括淋巴瘤细胞。该治疗的实质相当于清髓。当然，B淋巴细胞的重要生理功能可以长期由外源性补充免疫球蛋白来部分替代。然而，对实体肿瘤来说，它们缺乏具有普遍意义的特异性靶点。已发现的实体肿瘤细胞的一些相关抗原表位与正常组织细胞相比只是表达量的高低不同。CAR-T对具有低表达量靶点的正常组织细胞的攻击会产生“脱靶效应”，其副作用是很严重的。特别要指出的是实体肿瘤组织细胞的高度异质性（包括具有不同干性或不同分化程度的肿瘤细胞，支持肿瘤生长的可能异化的间质细胞和血管内皮细胞）、多基因改变、在免疫压力下的自我调变等生物学特性，使得抗单一靶点的治疗在临床上很难大范围奏效。因此，笔者认为： 1）从特异性免疫源头的抗原提呈细胞（如DC）切入，打破免疫耐受，恢复正
中国肿瘤生物治疗杂志http ：//www．biother．org Chin J Cancer Biother ，Apr．2015，Vol．22，No．2 doi ：10．3872/j．issn．1007-385X．2015．02．009 ·专家论坛· 肿瘤过继免疫细胞治疗靶抗原选择的新视野 魏枫，任秀宝（天津医科大学肿瘤医院免疫室，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室，天津300060） ［基金项目］国家科技支撑计划资助项目（No．2015BAI12B12）；天津市应用基础与前沿技术研究计划资助项目（No．13JCYBJC41400，No．14JCTPJC00476）。Project supported by the Key Technologies Ｒ＆D Program of China （No．2015BAI12B12），and the Tianjin Application Foundation and Advanced Technology Ｒesearch Prgram （No．13JCYBJC41400，No．14JCTPJC00476 ） 魏枫2007年毕业于天津医科大学，获得肿瘤学博士学位，导师为郝希山院士。2008 年至2012年作为博士后访问学者赴美国国家癌症研究所（NCI ）分子免疫调节实验室（LMI ），在警报素（alarmin ）概念的提出者Oppenheim 博士和杨德博士直接指导下开展警报素在抗肿瘤免疫中作用的研究，参与发现已知最强的刺激Th1类免疫反应的警报素HMGN1，并证明警报素HMGN1可以作为肿瘤疫苗佐剂诱导强大的抗原特异性免疫反应。这些发现提示了警报素在肿瘤生物治疗领域广阔的应用前景。现主要从事肿瘤生物治疗应用基础研究，研究方向为以警报素为佐剂的新型肿瘤疫苗的研发和以基因 修饰T 细胞为代表的免疫细胞治疗新策略的研究。先后主持国家科技重大专项子课题、国家自然科学基金、天津市科委面上项目等多项课题，在Cancer Ｒesearch 等高水平期刊发表第一作者学术论文多篇。E- mail ：iwhiffle@hotmail． com 任秀宝博士，教授，主任医师，博士生导师。现任天津医科大学肿瘤医院生物治疗科 主任，天津市医学生物技术应用研究中心主任，中国医药生物技术协会医药生物技术临床应用专业委员会副主任委员兼秘书长，中国免疫学会肿瘤免疫与生物治疗分会副主任委员，中国抗癌协会肿瘤生物治疗专业委员会常委，天津市抗癌协会肺癌专业委员会常委。多年来从事肿瘤生物治疗和肿瘤免疫方面的临床与应用基础研究，先后主持国家科技攻关计划、国家973专项课题、国家自然科学基金、天津市科委重点项目等十余项。近5年发表学术论文50余篇，其中SCI 收录论文30余篇；获得省部级科研奖励3项；获得“国家特支计划”百千万工程领军人才等荣誉称号。E-mail ：rwziyi@yahoo．com ［摘 要］过继免疫细胞输注（adoptive cell transfer ，ACT ）属于肿瘤的被动免疫疗法。转移性黑素瘤患者在接受了ACT 治疗 后，部分患者肿瘤出现了持久的完全消退，显示了ACT 在肿瘤治疗中的强大潜力。基因修饰淋巴细胞技术进一步为我们打开了肿瘤ACT 治疗新领域的大门。肿瘤ACT 治疗成功的关键在于如何鉴定出肿瘤细胞上合适的具有免疫原性的靶点，从而使得肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte ，TIL ）或基因修饰淋巴细胞只攻击肿瘤细胞而不损伤正常组织。肿瘤组织过表达的分化抗原、共有非突变的肿瘤抗原以及肿瘤间质来源的抗原等大多在正常组织上有低水平表达，并非肿瘤ACT 治疗的合适靶点。相反，共有突变的肿瘤特异性抗原、病毒癌基因编码的抗原以及个体肿瘤的独特驱动性突变产物有望成为肿瘤ACT 治疗的理想靶点。越来越多的证据显示，未来肿瘤免疫治疗的进展很可能来自于免疫靶向个体肿瘤的独特的突变抗原，尤其是对肿瘤致癌性至关重要的基因的突变产物。［关键词］肿瘤；抗原；过继性细胞；突变［中图分类号］Ｒ730．54；Ｒ392．12；Q78 ［文献标志码］A ［文章编号］1007- 385X （2015）02-0191-06New horizons in target antigen selection in adoptive cell therapy of cancer Wei Feng ，Ｒen Xiubao （Department of Immunology ，Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital ；National Clinical Ｒesearch Center for Cancer ；Tianjin Key Laboratory of Cancer Immunology and Biotherapy ，Tianjin 300060，China ） · 191·
细胞免疫疗法 一、概念 细胞免疫治疗疗法是采集人体自身免疫细胞，经过体外培养，使其数量成千倍增多，靶向性杀伤功能增强，然后再回输到人体来杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞，打破免疫耐受，激活和增强机体的免疫能力，兼顾治疗和保健的双重功效。细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）疗法、树突状细胞（DC）疗法、CLS生物免疫治疗、DC+CIK细胞疗法、自然杀伤细胞(NK)疗法、DC-T细胞疗法等。 二、步骤介绍 1、在GMP实验室里，分离单个核细胞置于培养瓶中，加入培养液和细胞因子刺激细胞活化增值。 2、经过7~14天细胞培养，细胞数增至原有数量的几百到上千倍，免疫杀伤能力增加20~100倍。 3、采血后的第7~14天，开始回输DC、CIK细胞。 4、经过多个疗程的治疗，有效杀除患者体内肿瘤细胞，促进康复，改善患者的生活质量。 三、适应人群及适应症 适应症：肿瘤自体细胞免疫疗法适用于多种实体肿瘤，包括恶性黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、喉癌、鼻咽癌、胰腺癌、肝癌、胃癌等实体瘤手术后防止复发，也可以用于多发性骨髓瘤、B淋巴瘤和白血病等血液系统恶性肿瘤的复发，对于大多数细胞免疫治疗的适应人群还可以用于上述肿瘤的进一步巩固治疗，达到延长生存期、提高生活质量和抑制肿瘤恶化的目的。但生物治疗不适用于T细胞淋巴瘤患者、器官移植后长期使用免疫抑制药物和正在使用
免疫抑制药物的自身免疫病的患者 1.早期肿瘤者：生物治疗能精准杀灭肿瘤细胞，提高康复成功率; 2.术后治疗者：生物治疗能清除残余肿瘤细胞，防转移，确保长久带瘤生存; 3.联合治疗者：生物治疗联合手术、放疗、化疗，减少毒副作用，增强治疗效 果; 4.病情较重者：对不能承受手术、放疗、化疗者，生物治疗因其安全、高效， 成功率高; 5.晚期肿瘤者：生物治疗能延长生存时间，提升生命质量，提高5年生存率近 一倍。 四、与传统治疗方法的区别 传统疗法分手术、放疗和化疗等，这些传统的治疗方法并不能很好的做到杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤活性，导致肿瘤病人的转移复发率非常高，但各种治疗各具意义： ①手术治疗对肿瘤的有效时间是早期，并且需要考虑患者的年龄以及身体健康状况，同时手术以及放疗只能去除肉眼看得见的肿瘤组织，无法对付那些微小的肉眼看不见的肿瘤组织，所以肿瘤病人做完手术后经常担心复发的问题； ②化疗是用化学药品进行治疗，说是药品，其实从另外一层含义讲也是毒药，既杀灭癌细胞，同时也杀伤正常细胞，因此很多病人无法耐受化疗的治疗方法，会有很严重的副作用，严重的情况下可以加速病人的死亡。 ③放疗是用射线消除病灶，是作为治疗恶性肿瘤的一个重要手段，但放疗不能减轻化疗的毒性作用，化疗也不能减少放疗的损伤作用，如化疗抑制全身的骨髓，放疗也产生局部的骨髓抑制，病人常常因骨髓抑制血相低而无法继续治疗。
? 综述 ? T细胞受体基因修饰在过继免疫治疗中的应用 邰文，刘东博，吴疆，潘明佳，陈常青 天津药物研究院，天津 300193 摘要：T细胞过继性转移可以增强免疫系统介导的对肿瘤细胞的消除，是近年来获得较高关注的一种特异性、无毒性的癌症新疗法，此方法对于治疗血液性和实体恶性肿瘤具有一定效果。对T细胞进行基因修饰能够增强其免疫能力，保持T细胞的持久活性，同时也可以克服肿瘤自身的免疫逃避机制，潜在提高免疫治疗应用于多种肿瘤疾病的成功率。在T细胞过继转移中，T细胞受体（TCR）基因转移作为一种发展迅速的免疫治疗方法，可以在体外产生大量的具有已知抗原特异性和功能亲和性的T细胞，应用于病毒感染或病毒相关恶性肿瘤的过继细胞免疫治疗。TCR基因转移利用逆转录病毒或慢病毒作为载体，其中包含了从所需抗体特异性T细胞群中克隆得到的TCR-α和TCR-β链基因序列，然后应用TCR编码载体转导体外的原始T细胞。为产生带有所需功能特异性的转导T细胞，引入的TCR-α和TCR-β链必须形成异源二聚体，与CD3复合体结合从而在T细胞表面稳定表达。 关键词：T细胞；基因修饰；T细胞受体；基因转移；过继免疫治疗 中图分类号：R73-362 文献标志码：A 文章编号：1674 - 6376 (2011) 02 - 0105 - 05 Application of T cell receptor gene modification in adoptive immunotherapy TAI Wen, LIU Dong-bo, WU Jiang, PAN Ming-jia, CHEN Chang-qing Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China Abstract: T cell adoptive transfer could enhance immune-mediated elimination of tumor cells with high concerns for providing a specific and non-toxic cancer therapy,. This approach has been effective in treating some hematologic and solid malignancies. Moreover, genetic modification of T cells could improve their immunopotency, maintain their persistence, and overcome the tumor immune evasion mechanisms as well, so as to potentially increase the achievement rate of immunotherapy in a wide range of tumors. In T cell adoptive transfer, T cell receptor (TCR) gene transfer, a rapid developing strategy of immunotherapy, can generate a number of T cells with a given antigen-specificity and functional avidity in vitro and is used to treat viral infectious diseases and virus-associated malignancies and caner. TCR gene transfer utilizes retrovirus or lentivirus as vectors which contain gene sequences of the TCR-α and βchains. TCR-α and -β chains were cloned from a T-cell population with the desired antigen specificity. Then the TCR encoding vector is used to transduce primary T cells in vitro. To generate a transduced T cell with the disired functional specificity, the introduced TCR-αand -β chains must form a heterodimer and combine with the CD3 complex in order to be stably expressed at the T-cell surface. Key words: T cell; gene modification; T cell receptor; gene transfer; adoptive immunotherapy 体外扩增T细胞的过继转移能够修复骨髓移植后免疫系统对病毒的免疫反应，并增进其对肿瘤的免疫反应。病毒特异性的细胞毒T淋巴细胞（CTL）或肿瘤特异性T细胞的转移是治疗人类疱疹病毒（EBV）相关恶性肿瘤的一种安全有效的方法，如霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌[1-2]和黑色素瘤[3]等。由于无效抗原的存在，很多肿瘤不能首先诱导T细胞产生强烈的免疫反应，因此这种免疫疗法在广泛应用于肿瘤治疗时还受到一定限制。近期研究表明，基因转移技术能够操纵T细胞进行基因修饰，从而使过继T细胞疗法对多种肿瘤维持较强的功能效果。10年前，以逆转录病毒为载体的T细胞受体（TCR）基因转移首次在黑色素瘤抗体特异性TCR研究中实现[4]，当时只有少数的转导T细胞具有较低功能[5-6]。目前对TCR基因转移的研究已取得了实质性进展，其中包括TCR基因传递的载体和转导步骤的改 收稿日期：2010-12-09 作者简介：邰 文（1986—），女，天津人。Tel: (022)27474913 E-mail: taiwen0526@https://www.doczj.com/doc/816121312.html,
过继性细胞免疫治疗 Jenny was compiled in January 2021
过继性细胞免疫治疗 过继性细胞免疫治疗通过体外激活和扩增肿瘤特异或非特异性杀伤细胞达到抗瘤效果，又可分为过继性NK细胞治疗和过继性T细胞治疗。该疗法优势在于起效快，体内因素影响相对较小。 过继性T细胞治疗是过继性细胞免疫治疗研究的重点，但对MHCⅠ类分子阴性的肿瘤细胞无效。而NK细胞由于表达MHCⅠ类分子的抑制性受体——杀伤细胞抑制性受体(KIR)，可以杀灭MHCⅠ类分子阴性的肿瘤。随着对NK调节分子机制研究的深入，目前NK 细胞逐渐受到了关注。过继性细胞免疫治疗已经完成了一批随机对照临床研究(表2)，从中可以看出，既往的过继性细胞免疫治疗疗效并不乐观。不过新型过继性免疫细胞治疗的出现，如CIK、Xceleratedcell等，给肿瘤治疗带来了新的希望，目前正在对其进行随机对照研究。 目前过继性细胞免疫治疗最成功的例子是供者淋巴细胞输注(DLI)治疗异基因骨髓移植后复发的慢性髓性白血病(CML)、EB病毒(EBV)相关淋巴瘤。DLI介导抗肿瘤效应的机制目前尚不明确，可能有T细胞和(或)DC参与，其靶抗原是次要组织相容性抗原或白血病特异性抗原。其临床缓解有迟发性特点，通常发生在DLI后数周到数月间，符合T细胞介导的典型获得性免疫应答特点。Schmid等的研究表明，DLI治疗后，超过60%异基因造血干细胞移植后复发的CML患者可获得分子生物学完全缓解(CR)，急性髓性白血病(AML)患者2年存活率可提高约10%。DLI治疗的最严重副作用是诱发移植物抗宿主病(GVHD)，可通过调整淋巴细胞的输注次数和数量减轻该副作用。 病毒引起的淋巴瘤保留了病毒基因表达，是过继性细胞治疗的理想靶点，因为患者体内的T细胞受体库中具有病毒蛋白高亲和力受体。Haque等进行的Ⅱ期临床试验表明，采用异基因EBV特异性CTL，治疗传统治疗无效的EBV阳性的移植后淋巴增殖性疾病患者，治疗后6个月客观缓解率(ORR)为52%，CR为44%，提示该疗法具有很好的应用前景。 过继性T细胞治疗的主要缺陷是部分肿瘤的抗原性弱，造成肿瘤特异性抗原高亲和力T细胞缺乏，或患者化疗后体内残存的T细胞缺乏肿瘤特异性。为解决这个问题，采用基因修饰T细胞增强抗肿瘤能力是目前的一个研究热点。例如，Morgan等通过逆转录病毒，用T细胞黑素瘤相关抗原MART-1的特异T细胞受体(TCR)转染自体T细胞，治疗17例标准治疗无效的转移性黑素瘤患者，结果显示15例患者体内的基因修饰T细胞存活超过90天，2例患者达CR并持续超过18个月。
前言 癌症已成为当今世界威胁人类健康的主要疾病之一，根据中国卫生部公布的最新统计数据显示：我国癌症发生率正处于快速上升期，每年新增癌症病例260万，有180万人因癌症去世，癌症已成为中国城市和农村居民的第一死因。 对于癌症的治疗，几乎每个患者和家庭都在沿着手术、放疗、化疗这条路艰难前行。“三分之一的癌症病人是病死，三分之一的癌症病人被吓死，三分之一的癌症病人被放、化疗治死”的说法形象表达了常规治疗手段的特点：虽然能暂时遏制肿瘤的发展，却无法从根本上解决其复发、转移和扩散问题；同时，巨大的毒副作用让自身免疫力下降，残存癌细胞迅速死灰复燃，反而加速了病情恶化。 近年来，随着肿瘤免疫学、分子生物学、生物工程技术的发展，如何从免疫和细胞这些癌症发病的根本原因入手，防止癌细胞的转移和扩散，提高癌症患者的生存时间，已经成为世界各国科学家治疗癌症的方向，这也是癌症治疗的根本出路。 生物免疫细胞治疗是继手术、放疗、化疗后的第四种抗肿瘤治疗模式，是从提高人体免疫系统（抗肿瘤平衡系统）入手，具有高度特异性、没有任何毒副作用，在降低肿瘤患者术后复发、转移几率，提高对放化疗的敏感性及耐受性，改善生活质量，延长生存期等方面发挥着重要的作用。 （4）第2页起 一、什么是癌症？ 肿瘤（Tumor）是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的新生物。一般认为，肿瘤细胞是单克隆性的，即一个肿瘤中的所有瘤细胞均是一个突变的细胞的后代。一般将肿瘤分为良性
和恶性两大类。所有的恶性肿瘤总称为癌症（cancer）。 二、癌症产生的原因？ 在知道生物治疗之前，我们需要知道肿瘤的产生到底是如何而来，为什么一个身体看似正常的人也会突然患上肿瘤突变？ 在成年人体内，每天都有3000-6000个肿瘤细胞产生，几乎都被人体自身的免疫细胞杀灭。但是，往往在自身免疫系统失衡、遭到了破坏的时候，免疫细胞便不能有效识别肿瘤细胞，任由肿瘤细胞滋生，最终产生肿瘤。而这个过程一般需十几年或几十年的积累，然后一旦形成恶性肿瘤，其细胞分裂会以2 的n次方的速度快速发展。 三、传统的癌症治疗方法 手术、放疗、化疗是肿瘤治疗的常规手段，几乎每个癌症患者和家庭都经历过这个阶段。 手术治疗： 通过局部快速切除肿瘤组织，达到根除肿瘤的作用，见效快，实用性很强，是目前大多数肿瘤临床治疗的首选方法，但对机体损伤大，仅适用于肿瘤初期，术后也容易遗漏微小病灶或转移病灶（残余肿瘤细胞），引起肿瘤复发，对晚期肿瘤公认不可治愈。 放射治疗：通过放射线的辐射效应来达到杀伤局部肿瘤的效果，适用性强，见效快，是目前治疗恶性肿瘤最有效的治疗方法之一，但是对消化系统肿瘤（肠癌、胃癌、肝癌、胰腺瘤）起不到根除效果，同时产生很强的毒副作用，对受到损伤的器官导致不可逆转，给患者带来极大痛苦，导致晚期患者加速死亡。 化学治疗：通过化学合成药物机理作用于癌细胞，达到抑制肿瘤的作用，针对性强，见效快，但是会带来明显的毒副作用，严重抵制骨髓的造血功能。同时，大多数患者进行化疗
过继性细胞免疫治疗文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
过继性细胞免疫治疗 过继性细胞免疫治疗通过体外激活和扩增肿瘤特异或非特异性杀伤细胞达到抗瘤效果，又可分为过继性NK细胞治疗和过继性T细胞治疗。该疗法优势在于起效快，体内因素影响相对较小。 过继性T细胞治疗是过继性细胞免疫治疗研究的重点，但对MHCⅠ类分子阴性的肿瘤细胞无效。而NK细胞由于表达MHCⅠ类分子的抑制性受体——杀伤细胞抑制性受体(KIR)，可以杀灭MHCⅠ类分子阴性的肿瘤。随着对NK调节分子机制研究的深入，目前NK细胞逐渐受到了关注。过继性细胞免疫治疗已经完成了一批随机对照临床研究(表2)，从中可以看出，既往的过继性细胞免疫治疗疗效并不乐观。不过新型过继性免疫细胞治疗的出现，如CIK、Xcelerated cell等，给肿瘤治疗带来了新的希望，目前正在对其进行随机对照研究。 目前过继性细胞免疫治疗最成功的例子是供者淋巴细胞输注(DLI)治疗异基因骨髓移植后复发的慢性髓性白血病(CML)、EB病毒(EBV)相关淋巴瘤。DLI介导抗肿瘤效应的机制目前尚不明确，可能有T细胞和(或)DC参与，其靶抗原是次要组织相容性抗原或白血病特异性抗原。其临床缓解有迟发性特点，通常发生在DLI后数周到数月间，符合T细胞介导的典型获得性免疫应答特点。Schmid等的研究表明，DLI治疗后，超过60%异基因造血干细胞移植后复发的CML患者可获得分子生物学完全缓解(CR)，急性髓性白血病(AML)患者2年存活率可提高约10%。DLI治疗的最严重副作用是诱发移植物抗宿主病(GVHD)，可通过调整淋巴细胞的输注次数和数量减轻该副作用。 病毒引起的淋巴瘤保留了病毒基因表达，是过继性细胞治疗的理想靶点，因为患者体内的T细胞受体库中具有病毒蛋白高亲和力受体。Haque等进行的Ⅱ期临床试验表明，采用异基因EBV特异性CTL，治疗传统治疗无效的EBV阳性的移植后淋巴增殖性疾病患者，治疗后6个月客观缓解率(ORR)为52%，CR为44%，提示该疗法具有很好的应用前景。 过继性T细胞治疗的主要缺陷是部分肿瘤的抗原性弱，造成肿瘤特异性抗原高亲和力T细胞缺乏，或患者化疗后体内残存的T细胞缺乏肿瘤特异性。为解决这个问题，采用基因修饰T细胞增强抗肿瘤能力是目前的一个研究热点。例如，Morgan等通过逆转录病毒，用T细胞黑素瘤相关抗原MART-1的特异T细胞受体(TCR)转染自体T细胞，治疗17例标准治疗无效的转移
细胞免疫治疗分析 为何有医生不认可“过渡性免疫治疗”技术？ 1国内免疫治疗处于“非特异性细胞免疫”阶段，美国等发达国家研究偏向“单克隆抗体”和“特异性细胞免疫”阶段 a国内免疫性治疗研究多处于第二代细胞技术和第三代细胞技术，如DI-CIK细胞治疗等 b国外研究偏向于“单克隆抗体”（比如PD-1或PD-L1抑制剂）和第四代细胞技术，如CAR-T和TCR-T（CAR-T已发展到第4代技术） 备注：目前上市及处于临床阶段的PD-1或PD-L1抑制剂 2和肿瘤传统治疗手段相比，疗效差异不大 a截止2014年，唯一通过FDA批准的是DC细胞的免疫治疗用于治疗晚期前列腺癌。国内大范围使用的第一，二代技术在国外已经淘汰，即使是第三代技术中的DI-CIK细胞治疗数据仅支持“延长疾病无复发两周”。 b最新的CAR-T疗法，短期数据很好，但很快复发。JCAR015的一期临床数据显示，在急性淋巴细胞白血病的缓解率是87%，但6个月后有60%患者的复发。
3目前细胞免疫治疗法适用病人群少 a目前DI-CIK细胞治疗适用于实体瘤术后治疗以及已复发的转移的晚期肿瘤患者，对治疗癌性胸腹水以及不能施行手术和放化疗的患者有较好疗效。 b目前CAR-T技术目前只能治疗部分血液性肿瘤。其次，治疗过程中产生的“细胞因子风暴”是能导致患者死亡的严重不良反应。 C整体而言，目前细胞免疫治疗对胰腺癌、淋巴癌此类免疫系统缺陷性癌症效果不容乐观，对肺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、食道癌，白血病、胰腺癌、淋巴瘤等十八个病种效果较好。 为何临床反馈不佳的情况下国内医院和医生仍追逐“过继性免疫疗法”？ 1临床存在未被满足的治疗需求 a传统肿瘤治疗方案能一定程度抑制肿瘤细胞增殖，但无法根除。放化疗易造成肿瘤细胞耐受。但免疫疗法能避免很多不良反应，能给治疗带来新的希望。 b免疫疗法历经“非特异性的肿瘤过继免疫治疗”“特异性肿瘤过继免疫治疗”“肿瘤的异体免疫细胞移植治疗”发展，尽管目前面临重重阻力，但随着肿瘤免疫学、基因工程、肿瘤分子生物学研究的不断进步，以及对脐带血的不断重视和深入研究，针对过继性免疫治疗存在的问题，通过改善细胞的培养方法、增强细胞功能、优化组成成分以及联合治疗方面等方法，使过继性行免疫治疗效果不断提高成为可能。 2商业驱动 a 2009年卫生部《医疗技术临床应用管理办法》，自体免疫细胞治疗技术被卫生部列为首批允许临床应用的第三类医疗技术，不少地方进入医保报销，报销比例达到80-90% b一个疗程大概1.2-3万RMB一般4-8疗程，所以一般治疗费用在10万-30万RMB左右 3精准医疗趋势 相对于其它精准医疗策略，细胞免疫治疗（Precision Cell Immunotherapy, PCIT）具有开发周期相对较短、投入相对较低的优势，适合我国的国情，具有巨大的应用前景，有望成为我国恶性肿瘤精准医疗的一大突破口。（吴孟超，钱其军语）
细胞因子在免疫治疗中的应用概述 细胞因子一般就是由受到刺激的细胞产生,主要为免疫细胞。细胞因子具有高效性,在微摩尔甚至皮摩尔都可以起作用。单个细胞因子对免疫的作用取决于如下的条件:局部细胞因子浓度、其受体表达的模式及多个信号通路在免疫应答细胞中的整合。细胞因子作为分子信使,允许免疫系统细胞彼此通信,以产生对靶抗原的协调,在许多疾病中具有调节与效应功能,因此细胞因子及其受体可用于免疫治疗。 在免疫治疗过程中,细胞因子直接刺激肿瘤部位的免疫效应细胞与基质细胞,增强细胞毒性。通过对动物肿瘤模型研究,发现细胞因子具有广泛的抗肿瘤活性,已经有很多细胞因子用于癌症的治疗。获得FDA批准上市的细胞因子药物已有多个,如高剂量的IL-2用于治疗黑素瘤与肾细胞癌,IFN-α用于III期黑素瘤的辅助治疗。还有更多的细胞因子已经进入临床试验阶段,如GM-CSF、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18与IL-2。 细胞因子作为一种免疫调节剂,可以用于激活免疫疗法、抑制免疫疗法等,包括各种重组、合成与天然的制剂。如白细胞介素类(IL-2、IL-7、IL-12),趋化因子(CCL3、CCL26、CXCL7)及其它细胞因子(干扰素、粒细胞集落刺激因子)等。 在激活免疫疗法中 如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)可以刺激外周血干细胞(从病人血液中提取)产生淋巴细胞,经过体外与肿瘤抗原共培养后,再输回到病人体内,并结合刺激性的细胞因子以增强免疫效应,这样的细胞就可以摧毁携带相同抗原的肿瘤细胞,从而达到治疗的效果。 白细胞介素-2可以与抗CD3与同种异体反应性细胞融合,生成过继T细胞。这种细胞可以转移到患者体内,可以进一步提高IL-2的抗癌活性。白细胞介素-7与白细胞介素-2可以用来恢复免疫功能缺陷患者的免疫系统,这一研究已经进如临床试验阶段。 在抑制免疫疗法中