微生物实验问题与答案
一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察
1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大？
答：油镜能减少光的折射，进而提高视野的亮度；通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。
2、数值口径的表达公式？
答案：N.A=n ×sin α，n为介质折射率；α为光线最大入射角的半数。
3、显微镜数值口径与分辨力的关系？
答案：分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力，它与光的波长成反比，与数值口
径成正比。
4、油镜的使用与普通物镜有何不同？
答案：油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂，如香柏油等才能使用，而普通物
镜则不需要；油镜是由100×物镜与香柏油构成，而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。
5、使用油镜时应特别注意什么？答案：上下调节镜头时应使用微螺旋，否则容易损坏镜头；应使油镜始终浸泡在香柏油中，否则就不是油镜；使用完毕后，必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹，否则会玷污油镜。
6、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。
7、根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观
察
答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。
答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40 倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000 倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。
二、微生物染色
1、单染色的原理是什么？答案：主要基于微生物细胞能与各种染料进行不同程度地结合。
2、单染色过程中，为什么干燥固定？
答案：因为通过干燥可以使菌体蛋白变性，细胞质凝固，进而可以使菌体紧密地附着于载玻片表面。
3、单染色过程中，为什么水洗时水流要缓慢地从载玻片上端流下？答案：因为如果水流直接冲洗有菌部位，容易使菌体被冲洗掉。
4、为什么载玻片要完全干燥后，才能使用油镜？
答案：因为香柏油与水不相溶，容易造成光线发生折射或散射，一方面无法构成油镜，另一方面也会降低视野的亮度。
5、革兰氏染色的原理是什么？
答案：对于G+ 细菌来说，当用乙醇脱色时，由于肽聚糖含量高，网孔小，再加上脂量低，所以乙醇脱色后，进一步地缩小了网孔，结晶紫-碘复合物无法脱出，第二次用番红染色时
无法着色，进而呈紫色；对于G- 细菌来说，当用乙醇脱色时，由于肽聚糖含量低，网孔大，再加上脂量高，所以乙醇脱色后，进一步地扩大了网孔，结晶紫-碘复合物被脱出，第二次
用番红染色时着色，进而呈红色。
6、革兰氏染色时，为什么要加碘液？
答案：碘可以与结晶紫染料形成较大的复合物，从而可以阻止结晶紫向细胞外渗透；另一方面也可以增加结晶紫与细胞质的亲和力。
7、革兰氏染色时，为什么要用酒精冲洗？答案：加酒精是为了溶解细胞壁中的脂类和脱去细胞内的有机染料。
8、革兰氏染色时，为什么不能涂片太厚？答案：涂片太厚，容易使菌体重叠，造成假阳性。
9、革兰氏染色时，为什么说脱色（乙醇脱色）是最关键的一步？
答案：如果脱色时间较短，则容易使革兰氏阴性细菌脱色不完全，造成假阳性；如果脱色时间较长，则容易使革兰氏阳性细菌内的染料被脱出，造成假阴性。
10、革兰氏染色时，如何证明你的染色操作是正确的？
答案：将革兰氏阳性细菌—葡萄球菌与革兰氏阴性细菌--大肠杆菌制成混合涂片，经革兰氏染色后，如果葡萄球菌呈紫色，而大肠杆菌呈红色，则说明染色操作是正确的。
11、固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
12、不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G ＋），被酒精脱色为革
兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
三、无菌操作（补充）
1、无菌操作过程中，为什么试管或三角烧瓶在开塞或回塞之前，口部要过火几次？答案：这样可以烧去管口或瓶口的微生物。
2、开塞后的试管或三角烧瓶口部微生物要平放？答案：如果口部向上或朝下，则容易通过空气对流污染培养物。
3、接种针接种前后微什么要过火焚烧？答案：主要防止微生物培养物之间交叉污染，也防止污染操作台面。
4、. 试述高压蒸汽灭菌的操作方法和原理。答：高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa 的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
操作方法：加水——装料、加盖——排气——升压、保压、和降压——取料
5、如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。答：通过观察菌落特征；单个菌落再次划线分离。
6、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高时间长？
在湿热条件下，有水蒸汽的作用：
a 高温水蒸汽导热比干空气要快；
b 高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程；
c 高温水蒸汽能穿透细菌的细胞膜，直接进入细胞内破坏细胞；
c 高温水蒸汽能水解一部分细胞结构，加速导热。（湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的穿透力比干热大；湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时
可放出2．26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。）
8、人工培养基：人工配制的供微生物生长繁殖并积累代谢产物的一种营养基质。
9、.天然培养基：由化学成分不完全清楚的天然物质如马铃薯,麸皮等配制而成的培养基。
10、巴氏消毒：巴氏消毒是法国微生物学家巴斯德发明的一种消毒方法。是在62-63℃的条
件下,保温半小时杀死微生物的营养体（主要是病原菌）的方法。
11、间歇灭菌：利用100℃的温度杀死微生物的营养体.每次1 小时连续三天,中间的空隙时间让未杀死的芽胞萌发成营养体,在下一次100℃的温度下被杀死。如此反复两次可将培养基的微生物
（包括芽胞）全部杀死。该方法适用于没有高压灭菌器的地方进行灭菌处理。
12、过滤除菌:利用一定孔径的滤膜阻止微生物的通过而除去溶液中或者空气中微生物的除菌方法
13、消毒:只杀死微生物的营养体（主要是病原菌）,而不能杀死微生物的芽胞的除菌方法。
14、灭菌:利用物理或化学方法杀死所有微生物包括细菌的芽胞的除菌方法称为灭菌。
四、细菌的染色及活细菌的运动性观察
1、细菌的鞭毛染色的原理
答案：细菌的鞭毛较细，在普通光学显微镜下无法观察。但可以通过对鞭毛进行染色，再结合染料堆积使鞭毛加粗，从而便可以在普通光学显微镜下观察鞭毛的形态。一定要充分洗净A 液后再加
B 液，否则背景很脏，影响观察效果。
2、鞭毛染色时，应注意哪些环节？
答案：用新培养的并且转接2-3 次的菌种为易，因为老化菌种的鞭毛易脱落；载玻片要干净，防止鞭毛变态；挑菌时应不带培养基；干燥后应尽快染色防止鞭毛脱落。
3、细菌运动性观察时，菌液中的细菌与灰尘颗粒的运动有什么区别？答案：菌液中的细菌常常会由一个位置运动到另一个位置，而灰尘颗粒的运动属于布郎运动，位置基本不变。
4、一般运动性细菌的运动方式有几种？答案：细菌运动主要包括直线、波浪或翻滚式运动。
5、如何用悬滴法观察细菌运动？
答案：悬滴法观察细菌运动。取干净的凹玻片与盖玻片个一块，并在盖玻片的四角涂少许凡士林。加一滴变形杆菌菌液于盖玻片中央，并轻轻翻转，使菌滴直对凹玻片凹陷处，轻压于凹玻片上。镜检，观察细菌的运动情况。在观察细菌运动时，应注意区分非菌颗粒与细菌细胞，前者的运动属于原地布朗运动，而后者做移位运动。
6、芽孢染色的原理是什么？用单染色可以看到芽孢吗？答案：由于芽孢壁厚，不易着色，所以须采用着色力强的染色剂，并需加热，以便提高芽孢壁的透性，使染料易于进入菌体。用单染色可以将看到芽孢，但是无色的。
7、芽孢染色加热时，为什么染料不能沸腾？答案：因为染料沸腾后，容易时菌体从载玻片上脱落。
8、荚膜染色时，为什么荚膜不易着色？
答案：荚膜主要成分是多糖，很难着色，同时水洗时多糖易溶于水，因而只能采用衬托的方
法将背景与菌体染色，而衬托出白色而透明的荚膜。
9、荚膜染色时，为什么不允许加热？答案：荚膜很薄，加热容易变形。
10、如何观察细菌荚膜？
答案：采用衬托法进行。取干净的普通载玻片，并在载玻片的一端滴加蒸馏水，将巨大芽孢杆菌轻
沾于水滴中。加少许墨汁于菌滴中，加盖玻片，轻轻挤压，除去多余的液体。镜检，可以观察到菌体周围的白色荚膜。
11、细菌与酵母菌的菌落有何区别答：细菌菌落光滑，易于基质脱离；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚且酵母菌的菌落较湿润
12、能否用血球计数板在油镜下进行计数？为什么？答：不能。计数时滴在血球计数板上的是菌悬液，相当于在镜头和计数板直接加了一层水。
13. 菌种保藏中，石蜡油的作用是什么？答：作用是密封。防止空气进入，降低菌种的生理活性。
14. 经常使用的细菌菌株，使用哪种保藏方法比较好？答：用甘油冷冻保藏方法保存，在液体培养基中加入百分子十五的甘油，然后低温冷冻（-7 度）左右。
五、酵母菌形态观察及死活细胞鉴别
1、吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了，代谢不太活跃的活细胞也会被染色，从而使观察到的死细胞较多，活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
2、显微镜下细菌放线菌酵母菌和霉菌的主要区别是什么？放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可看到。细菌：为细而短的单细胞微生物（个体微小），主要形态有：球、杆、螺旋状等。（部分杆菌还可形成芽孢）
放线菌：存在分枝丝状体和菌丝体，革兰氏阳性菌，有孢子丝和孢子（球形、椭圆形、杆状、
柱状）。
酵母菌：单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。菌体比细菌大几倍到几十倍，部分处于出芽繁殖过程中菌体还可观察到芽体，大多数菌体上还有芽痕。
霉菌：菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍到几十倍，在低倍镜下即可看到，并还可看到孢子囊梗、囊轴、孢子囊、包囊孢子等。
3、测定细胞数目的方法有直接计数法（如血球计数板计数计数）和间接计数法（如平板菌落计数法）
显微镜计数的优点是直观、快速、操作简单，缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对活动性强的活菌进行计数。
其中血细胞计数板较厚，不能使用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞，霉菌孢子等计数。4、稀释平板计数法
将一定量的样品经十倍稀释后,用平板培养最后三个稀释度的样品稀释液。待菌落长出后,计
数出某一稀释度的菌落数后再乘以稀释倍数,即为样品中的含菌数。
5、显微直接计数利用血球计数板或细菌计数板在显微镜下测计出每小格的微生物细胞数量后,再换算出单位
体积中微生物细胞总数的测数方法。
六、环境因子对微生物生长的影响
1、pH 对微生物生长作用的原理是什么？细菌、真菌和放线菌所需要的最佳pH 为多少？
答案：pH 对微生物生长作用的原理是：使蛋白质和核酸等大分子物质的电荷发生变化影响微生物活性；影响细胞膜表面电荷，进而影响微生物对营养物质的吸收；改变环境中营养物质的可给性及有毒物质的毒性。细菌要求pH 为7.0-7.2 ，真菌pH 自然，放线菌pH 为7.2-7.4。2、重金属对微生物影响的机理是什么？答案：使菌体变性或与-SH 基结合，导致微生物酶失活。
3、氯化钠等盐类对微生物的影响机理？答案：通过调节微生物细胞的渗透压影响微生物。
七、培养基的配制、消毒、灭菌与土壤微生物分离
1、培养基配制原则是什么？答案：目的明确；根据微生物的营养需要；注意各种营养物质的浓度配比；要控制具体pH 、渗透压、水活度和氧化还原电位；经济。
2、培养基配制应注意什么？
答案：称取药品蛋白胨时要迅速，防止吸潮；培养基融化时要不断搅拌以防烧焦；针对不同的培养基要调节适当的pH ；培养基灭菌时应按高压蒸汽灭菌锅的操作过程进行，以免危险发生。灭菌后培养基要及时处理，防止凝固或污染。
3、为什么培养微生物时，平板培养基要倒置？
答案：第一培养基倒置可以防止冷凝水落到培养基表面，使菌落分散开；第二可以防止空气
对流，污染培养基。
4、为什么高压蒸汽灭菌效果好？
答案：因为在湿热情况下，湿热的穿透力强，菌体吸收水分使蛋白质容易凝固，而且当蒸汽与菌体接触后冷凝成水时可以放出热量，进而提高锅内的温度。
5、如何使用高压蒸汽灭菌锅？
答案：首先检查灭菌锅内的水是否没过电阻丝，然后放上装有物品的内桶。注意物品不要过多。将盖子上的通气管插入内桶壁上的管槽内，盖上盖子，用对角的方式旋紧螺扣，接通电源，开始灭菌。当压力指针达到0.05KPa 时打开放气阀放气，反复放气三次以便排除锅内的冷空气。放气结束后，使指针升到压力为0.1KPa ，并通过人为控制电源的开闭，在0.1KPa 压力下维持20-30min 。灭菌结束后，通过冷却使锅内的压力下降到0.05，打开压力阀放气，
待压力为0 时，对角旋开螺扣，取出物品即可。
6、分离土壤微生物时，细菌、酵母、真菌和放线菌的培养基分别是什么？答案：细菌：营养琼脂培养基PH 7.0-8.0
放线菌：高氏一号培养基PH 7.5-8.5
酵母菌：麦芽汁培养基PH 3.8-6.0 YPDA 培养基
霉菌：马铃薯培养基PH 4.0-5.8
7、做空白对照实验的目的? 答：目的是检验培养基是否受到污染，验证无菌操作。
8、半固体穿刺法
将待检细菌穿刺接种在半固体试管培养基中,若细菌仅沿穿刺线生长,说明细菌不运动。若细
菌沿穿刺线向周围扩散生长,说明细菌有运动性。
9、为什么分装于三角瓶中的培养基装量不能过多？
答：①分装量太多，三角瓶内培养极易沾染瓶口及棉塞而造成污染；②分装量太多不利于震荡摇匀；③分装量太多会使培养基灭菌不彻底。
10、选择培养基:根据使用的目的,控制培养基的组成成分,使之有利于某种微生物的生长而限制其它微生物的生长,从而能从自然界混杂的群体中分离出某一种单一的微生物。如无氮培养基用来分离土壤中的自生固氮菌。
11、加富培养基:在基本培养基中加入血清,动植物组织液或者其它生长因子而配制出来的营养特别丰富的培养基。
12、鉴别培养基:根据微生物的代谢特点,通过指示剂的显色反应,用以鉴别不同微生物的培养
八、细菌的生理生化反应
1、你如何解释淀粉酶是胞外酶？答案：淀粉酶是胞外酶可以通过观察固体培养基表面的淀粉降解圈或透明圈的大小来解释。
2、糖发酵过程中如何证明有气体产生？
答案：在糖发酵过程中，有些微生物可以利用糖产生有机酸并产生气体，我们可以在发酵管中加入得汉氏小管，如果产气，小管内就会有气泡存在。
3、吲哚实验的原理是什么？
答案：吲哚实验的原理是：某些微生物可以分泌色氨酸酶，该酶将蛋白质中的色氨酸分解为吲哚和丙酮酸，吲哚可以与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚，进而证明色氨酸的分解。
4、甲基红实验的原理是什么？
答案：甲基红在pH 中性时呈现橘黄色，而在酸性条件下则为红色，所以当葡萄糖被分解产生有机酸时，可以甲基红在酸性条件下则为红色。
5、伏-普实验的原理是什么？答案：伏-普实验的原理是：该实验是用来检验某些细菌利用葡萄糖时可产生中性末端产物，如丙酮酸，丙酮酸进行缩合、脱羧生产乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被氧气氧化成二乙酰。二乙酰可以与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。
6、硫化氢实验原理是什么？
答案：硫化氢实验原理是：某些肠道细菌可以分解含硫有机物，并形成硫化氢，该气体与醋酸铅反应形成黑色的硫化铅沉淀。
34. 大肠菌群检验中为什么首先要用乳糖胆盐发酵管？答：因为乳糖胆盐发酵管中的成分有溴甲酚紫，
中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色
变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群；胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖；看杜氏小管
中是否有气体，判断是否为分解乳糖产酸产气的大肠菌群。
九、营养缺陷型的筛选与鉴定
1、紫外诱变的机理是什么？答案：紫外诱变的机理是紫外线引起胸腺嘧啶二聚体，从而导致DNA 结
构改变，进而引起机体突变或死亡。
2、紫外线诱变后，为什么不能马上见光？答案？由于紫外线诱变后，如果马上给以可见光照射，则
菌体中会产生光复活酶，进而对突变进行修复。
3、什么是营养缺陷型？答案：营养缺陷型是指用物理或化学诱变使其基因发生突变从而丧失某种生长
因子的合成能力，必须在基本培养基中加入相应的营养成分才能正常生长的突变型菌株，与之相对的
是野生型菌株。
4、淘汰野生型的原理是什么？
答案：淘汰野生型也叫营养缺陷型的浓缩，由于抗生素（如青霉素等）可以抑制细菌细胞壁
的形成，所以野生型在基本培养基中生长过程中，被杀死，而营养缺陷型则不能在在基本培养基中生长，但仍然存活，所以当再次转接到完全培养基中时，便可淘汰野生型。
5、筛选营养缺陷型时，为什么要不停搅拌？答案：这样可以使微生物细胞均匀地接受紫外线辐射，提高突变率。
十、菌种的保藏
1、菌种保藏的原理是什么？答案：采取不同手段使微生物的代谢活性处于最低状态。
2、菌种保藏的意义？答案：菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。
3、斜面和液体石蜡保存菌种法所需的温度为多少？答案：斜面和液体石蜡保存菌种法所需的温度均为零上4℃
4、斜面保存菌种法利弊？
答案：前者在斜面培养基表面接种培养后，储存在零上 4 ℃冰箱中，简单、方便，不需要特
殊设备等，但由于微生物与空气接触，所以保存时间短、需要定期接种传代，易污染，菌种特性易改变
5、液体石蜡保存菌种法利弊？答案：该方法也具有简便实用，不需要经常移种。但保存时需直立放置，占用空间较大，不便携带。
临床微生物学与检验测试题及答案——细菌感染的实验室检查与诊断及细菌生理 一、名词解释 1.血清学诊断 2.培养基 3.基础培养基 4.选择培养基 5.鉴别培养基 6.菌落 二、填空题 1.实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选 择、、有直接关系。 2.辅助诊断风湿热的抗“O”实验属于。 3.血清学试验一般需作两次，其血清分别取自疾病 的和.第二次抗体效价比第一 次时方有诊断意义。 4.对流行性脑炎患者进行细菌学检查，可采集的标本 有、和。 5.进行病原菌的分离培养时，从有正常菌群部位采取的标本应接种 于培养基或培养基。 6.细菌感染实验室检查中，常用的血清学方法 有、和三大类。 7.属于直接凝集反应的血清学试验有和。 三、单项选择题 1.目前在传染病的预防接种中，使用减毒活疫苗比使用灭活疫苗普遍，关于其原因下述不正确的是 A.减毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗 B.减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长 C.减毒活疫苗能在机体内增殖或干扰野毒株的增殖及致病作用，灭活疫苗则不能 D.减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型IgA，故适用于免疫缺陷或低下的患者 E.减毒活疫苗一般只需接种一次即能达到免疫效果，而灭活疫苗需接种多次 2.白百破三联疫苗的组成是
A.百日咳类毒素，白喉类毒素，破伤风类毒素 B.百日咳死疫苗，白喉类毒素，破伤风类毒素 C.百日咳死疫苗，白喉死疫苗，破伤风类毒素 D.百日咳活疫苗，白喉活疫苗，破伤风死疫苗 E.百日咳活疫苗，白喉死疫苗，破伤风死疫苗 3.使用时要注意防止Ⅰ型超敏反应的免疫制剂是 A.丙种球蛋白 B.胎盘球蛋白 C.抗毒素 D.白细胞介素 E.干扰素 4.关于胎盘球蛋白的叙述，错误的是 A.由健康产妇的胎盘和婴儿脐带中提取制备 B.一般含IgM C.一般不会引起超敏反应 D.主要用于麻疹，甲型肝炎和脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预防 E.免疫效果不如高效价的特异性免疫球蛋白 5.伤寒病人发病第一周内，分离病原菌应采取的标本是 A.血液 B.尿液 C.粪便 D.呕吐物 E.脑脊液 6.咽喉假膜标本涂片染色后，镜检出有异染颗粒的棒状杆菌，其临床意义在于诊断 A.结核病 B.军团病 C.白喉
《卫生及微生物知识》培训试卷 姓名部门岗位 日期审阅人得分 一名词解释：每题3分，共12分） 1.微生物：是指广泛存在于自然界，体形微小，具有一定形态结构，能在适宜的环境中生长繁殖以及发生遗传变异的一大类微小生物。 2.灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法 3.消毒：系指用物理或化学的方法杀灭致病的微生物的方法。 4.无菌：不存在活菌的意思。 二、选择题：（每题3分，共24分） 1.观察细菌的运动性最好采用下列哪种仪器？( ) A.电子显微镜； B.光学显微镜； C.放大镜； D.以上三种仪器均可。 2.制药过程中最大的污染源是？( ) A.人； B.水； C.空气； D.表面。 3.判断灭菌是否彻底的依据是（）。 A.芽孢被杀死 B.细菌菌毛蛋白变性 C.细菌繁殖体被完全杀死 D.鞭毛蛋白变性 4、微生物获得与利用营养物质的过程称为( ) A.吸收 B.排泄 C.营养 D.繁殖 5、霉菌是（）的俗称 Ａ.细菌 B.病毒 C.放线菌 D.真菌 6.下列属于污染的形式是哪种（）。 A.微生物 B.空气 C.表面 D.水
7.下列哪种不属于致病菌？( ) A.乳酸菌 B.大肠杆菌 B.金黄色葡萄球菌 C.伤寒杆菌 8.紫外线杀菌的最佳波长是（）。 A.200nm B.265nm C.300nm D.650nm 三填空题：（每题3分，共30分） 1.非规定灭菌制剂微生物限度检查包扩染菌量检查和控制菌检查，其中控制菌包括大肠埃希菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌等。 2.微生物的特点：种类多、分布广，个体小、胃口大，繁殖速、转化快， 适应强、变异易。 3.传播污染的四大媒介：空气、水、人、表面。 4. 人是药厂中最不清洁的成份，是最常见的、永不休止的污染源。 5.75% 的酒精用于表面及手部的消毒； 6.微生物生长的五大营养要素包括碳源、氮源、无机盐、水、生长因子。 7.常用的灭菌方法有湿热灭菌法、干热灭菌法、辐射灭菌法、气体灭菌法、过滤除菌法。 8. 影响微生物生长的因素有营养、温度、pH、氧气 9.洁净区（室）相对室外大气的静压差应大于≥10Pa 空气洁净级别不同的相邻洁净房间之间的静压差应保持适当的压差梯度洁净区的温度应控制在18℃～26℃，相对湿度应控制在45％～65％，主要工作室的照明度宜为300 勒克斯； 10.最常见的污染形式为尘粒污染、微生物污染。 四、判断题（每题2分，共10分） 1.消毒与灭菌的概念是不同的，消毒是指杀灭所有的微生物而灭菌不然。错 2.《中国药典》2015版中复方丹参滴丸的微生物限度检查标准为细菌总数：1000个/g，酵母菌数10个/g，不得检出大肠杆菌。错 3.手的表皮与毛囊中都有常居菌群的存在，所以即使手部经过清洗消毒也不可以裸手触药。对 4.紫外线灯是一种非常安全的灭菌方法，可以用来对各种物品的整体灭菌。错
微生物实验问题与答案 一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察 1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大？ 答：油镜能减少光的折射，进而提高视野的亮度；通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。 2、数值口径的表达公式？ 答案：N.A=n ×sin α，n为介质折射率；α为光线最大入射角的半数。 3、显微镜数值口径与分辨力的关系？ 答案：分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力，它与光的波长成反比，与数值口径成正比。 4、油镜的使用与普通物镜有何不同？ 答案：油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂，如香柏油等才能使用，而普通物镜则不需要；油镜是由100×物镜与香柏油构成，而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。 5、使用油镜时应特别注意什么？ 答案：上下调节镜头时应使用微螺旋，否则容易损坏镜头；应使油镜始终浸泡在香柏油中，否则就不是油镜；使用完毕后，必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹，否则会玷污油镜。 6、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？ 答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。 7、根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察 答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。 答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。
微生物基础知识培训试题（卷） 姓名部门得分 一、填空题（每空2分、共50分） 1．微生物（microorganism, microbe）是一些肉眼看不见的微小生物的总称。 2．微生物按其结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类：真核细胞型、原核细胞型、非细胞型。 3．微生物按形态结构分为：细菌、霉菌、酵母菌、放线菌、病毒。 4．微生物的营养：水分、碳源、氮源、无机盐类、生长因子。 5．洁净室对温湿度、压差及微生物和尘粒进行严格的控制。 6．辐射灭菌法：辐射有两种类型：一种是电磁波辐射，如紫外线、红外线、微波； 一种是电离辐射，如可引起被照射物电离的X射线、γ射线。 7．过滤除菌的效果与滤膜的性能、孔径的大小、密度、滤膜的厚度等因素有关。 8．高压蒸汽灭菌法：超过一个大气压时，水的沸点高于100℃，反之亦然。此法适用于耐高温和潮湿的物品。 二单项选择题（每题2分、共16分） 1．真菌属于___A__型微生物。 A. 真核细胞型 B. 原核细胞型 C. 非细胞型 D.多核细胞型 2.下列不属于原核细胞型的是____D__ A.细菌 B.衣原体 C. 放线菌 D.病毒 3. 杀灭芽胞最可靠的方法是___C___ A.干热灭菌法 B. 流通蒸汽灭菌法 C. 高压蒸汽灭菌 D. 巴氏灭菌法 4. 下列那个是构成细胞的重要物质__B____ A.水 B.碳源 C. 细胞核 D.无机盐 5. 滤过除菌法要求最终过滤的滤膜孔径为__A____ A.0.22μm B.0.36μm C.0.45μm D.0.65μm 6. 紫外线杀菌的常用波长为 D A.80-100nm B.120-140nm C.160-195nm D. 253.7nm 7. 新洁尔灭为常用消毒剂，其浓度为____B__ A. 0.01% B.0.1% C.1% D.10% 8．常用乙醇消毒剂的浓度为____A__ A. 55% B.65% C.75% D.85% 三多项选择（每题4分、共16分） 1.下列哪些是我们常用的消毒剂 ABCD A. 75%乙醇水溶液 B. 37%~40%甲醛溶液 C. 新洁尔灭 D. 过氧乙酸 2. 高压蒸汽灭菌常用条件为：ABC A. 115.5℃ 30min B. 121.5℃ 20min C. 126.5℃ 15min D. 200℃ 45min 3.下列哪些属于微生物的特点ABCD
微生物实验思考题参考答案及知识要点 一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别 1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝,不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。 二.细菌的简单染色和革兰氏染色 1.革兰氏染色中那一步是关键？为什么？你是如何操作的? 革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间）。如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s)。 2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同? 自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变。固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。 ３. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？ 能。在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋),被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。 4．涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题? a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b增加其对染料的亲和力。 固定时应注意：手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。 三. 霉菌、放线菌的形态观察 1．镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？ 一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状,比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮,可看到横
微生物基础知识试题及答案 北京中农发药业有限公司黄冈分公司 微生物基础知识及卫生管理测试 所在部门: 姓名: 题号一二总分 得分 一、填空题:(每题4分，共60分) 1、GMP 中的“卫生管理”主要是指( )卫生、( )卫生、( )卫生。 2、“卫生”是防止( )和( )的重要措施之一，卫生管理涉及到各职能部门，贯穿生产制造各个环节，是一项系统工程。 3、环境卫生包括( )卫生、( )卫生和( )卫生等。 4、自然界的微生物通常可分为( )和( )。 5、使用后的清洁卫生工具要及时( )并及时干燥，并置于通风良好洁具清洗间内( )的位置;进入无菌室内的清洁工具应先进行( );消毒剂要( )使用。 6、兽药GMP中规定厂房、设备、管道、容器等清洁操作规程的内容应包括:清洁方法、( )、( )、( )、( )、( )。 7、进入洁净区的人员不得( )、不得( )。 8、生产中使用的各种器具、容器应清洁，表面不得有( )。 9、人员卫生包括了生产人员的( )要求、工作服装要求及生产人员( )的要求等。 10、生产人员必须( )体检一次，并建立员工健康档案。 11、随时注意保持个人清洁卫生，做到“四勤”;即 ( )。 12、兽药生产中常用的消毒方法是:紫外灯消毒、( )、( )。 13、需要进行微生物基础知识和洁净区作业培训的人员包括:( )、( )、( )。
14、生产区不得存放( )和( )。生产中的废弃物应及时处理。 15、我厂文件规定，三十万级洁净区人员的工作服应( );清洗还必须( )。 二、简答题:(每题10分，共40分) 1、微生物的特点是什么, 2、消毒与灭菌的区别。 3、洁净区清洁的要求是什么, 4、人员进入洁净区的更衣程序是怎样的, 微生物基础知识培训试题答案一、填空题: 1、环境、工艺、人员 2、污染，交叉污染 3、厂区环境，厂房环境，仓储区环境 4、非细胞形态微生物，细胞形态微生物 5、清洗干净、消毒，规定，灭菌，定期交替 6、程序、间隔时间、使用的清洁剂或消毒剂、清洁工具的清洁方法、存放地点。 7、化妆和佩带首饰、裸手直接接触兽药 8、异物和遗留物 9、健康，个人卫生。10、每年 11、勤剪指甲，勤理发剃须，勤换衣服，勤洗澡洗头12、臭氧消毒、消毒剂 13、生产性人员、设备维修人员、其他需要进入的管理人员。 14、非生产物品，个人杂物 15、每周清洗两次，记录。 二、 1、 1)种类繁多:微生物可分为非细胞形态和细胞形态。非细胞形态通常指病 毒，细胞形态的微生物又可分为细菌、放线菌、真菌、藻类、原生动物。 )分布广:微生物通常在阴暗潮湿、空气不流通、人群聚集的地方分布广。 2 3)繁殖快:微生物在适宜的条件下。采用分裂繁殖法，速度惊人。 4)易于变异;
微生物学实验复习题 一、选择题 1、革兰氏染色得关键操作步骤就是: Ａ、结晶紫染色 B、碘液固定 C、酒精脱色 Ｄ、复染 2、放线菌印片染色得关键操作就是： A、印片时不能移动 B、染色 C、染色后不能吸干 D、A与C 3、高氏培养基用来培养： Ａ、细菌 B、真菌 C、放线菌 ４、肉汤培养基用来培养: A、酵母菌 B、霉菌 Ｃ、细菌 ５、无氮培养基用来培养: Ａ、自生固氮菌。 B、硅酸盐细菌 Ｃ、根瘤菌 D、A、Ｂ均可培养 E、Ａ、B、C 均可培养 ６、在使用显微镜油镜时,为了提高分辨力，通常在镜头与盖玻片之间滴加： A、二甲苯 B、水 C、香柏油 7、常用得消毒酒精浓度为： A、 7５％ Ｂ、 5０% C、 90％ 8、用甲醛进行空气熏蒸消毒得用量就是： A、 20ml/M3 B、 6ｍl/M3 C、１ml/M3 9、实验室培养基高压蒸汽灭菌得工艺条件就是： A、 1２１℃／30miｎ B、 115℃／３0mｉn C、130℃／3０min
1０、巴氏消毒得工艺条件就是： Ａ、６2-6３℃／30ｍiｎ Ｂ、71-72℃／15min C、Ａ、Ｂ、均可 1１、半固体培养基得主要用途就是: A、检查细菌得运动性 B、检查细菌得好氧性 C、 A、Ｂ、两项 １2、半固体培养基得琼脂加入量通常就是: A、 1% B、0、5％ C、0、1% 13、使用手提式灭菌锅灭菌得关键操作就是: A、排冷气彻底 Ｂ、保温时间适当 Ｃ、灭菌完后排气不能太快 D、A-C 1４、目镜头上得“K”字母表示: A、广视野目镜 B、惠更斯目镜 Ｃ、补偿目镜 1５、目镜头上得“P”字母表示: A、平场目镜 B、广视野目镜 C、平场补偿目镜 16、物镜头上得“PL”字母表示: A、正低相差物镜 B、正高相差物镜 C、负高相差物镜 17、物镜头上得“UVＦL”字母表示。 Ａ、无荧光物镜 B、照相物镜 Ｃ、相差物镜 18、镜头上标有“TC”字母得镜头就是: Ａ、相差调整望远镜 B、摄影目镜 C、相差目镜 １９、“ＰA”表示: A、马铃薯培养基 B、高氏培养基 C、肉汤培养基 20、无菌室空气灭菌常用方法就是： A、甲醛熏蒸 B、紫外灯照射
临床检验试题—微生物检验考试试题及答案(1)——肝炎病毒 一、概念 1.HBsAg 2.HBcAg 3.HBeAg 二、填空题 1．肝炎病毒有、、、和五种类型。 2．肝炎病毒中，由粪-口途径传播的有、；由血液和垂直途径传播的有、、；属于DNA病毒的有；属于缺损病毒的是；已有疫苗可主动免疫的是和；可进行细胞培养的是。 3．HBV的外衣壳由、和蛋白组成，构成HBV的；内衣壳由组成；核心由和组成。 4.甲型肝炎的传染源主要为和，猩猩和猿猴作为传染源的意义不大。 5.甲型肝炎的血清抗体中，表示现症感染的抗体是，而表示既往感染的抗体是。 6.乙型肝炎表面抗原（HbsAg）阳性者血清标本，在电子显微镜下可观察到3种不同 形态结构的颗粒，其传染性也不同，即小球形颗粒和以及。 7.乙型肝炎基因组为双股环壮DNA，内含4个开放读框（ORF），分别称为S 区，C区，和。 8.乙型肝炎病毒感染主要经4种传播途径，即血液传播，日常生活密切接触传播，和。 三、单选题 1.乙型肝炎病毒的核酸类型是 A.单股RNA B.双股RNA C.双股线状DNA
D.双股环状DNA E.单股DNA 2.可致慢性肝炎或肝硬化的病毒为 A. HAV，HBV和HCV B. HBV，HCV和HDV C. HCV，HDV和HEV D. HDV，HEV和HAV E. HEV，HAV和HBV 3.可传播乙型肝炎病毒的途径有 A.分娩和哺乳 B.共用牙刷，剃须刀等 C.输血，血浆及血液制品 D.性接触 E.以上均可 4.不符合血清HBsAg（+）， HbeAg（+）和抗HBc（+）的解释是 A.急性乙型肝炎； B.慢性乙型肝炎； C.乙型肝炎恢复期； D.无症状抗原携带者； E.血清有强传染性。 5.关于HAV，错误的是 A.是单股正链RNA病毒； B.能在体外细胞中培养； C.特异性预防可接种疫苗；
微生物检验员理论知识培训课程 试卷1 食品部培训部完成
试卷部分 1: 满分40分 一、选择题（单选） 从以下每题的几个答案中选择一个你认为最合适的，并将答案代号填入（）内。每题2分，共20分。 1、平板计数法的培养周期一般为（） A、24h B、36h C、 48h D、72h 2、霉菌的培养周期一般为（） A、2天 B、3天 C、4天 D、5天 3、GB 4789.2中大肠菌群检测复发酵试验所用试剂为（） A、BGLB B、LST C、VRBA D、PCA 4、以下不是常用的高温灭菌方法是（） A、湿热灭菌法 B、气体灭菌法 C、加热煮沸法 D、干热灭菌法 5、大肠菌群是革兰氏（）菌 A、G+，杆菌 B、G - ，杆菌 C、G + ，球菌 D、G - ，球菌 6、洁净区的温湿度应该为（） A、温度13~15℃，相对湿度50~70% B、温度15~18℃，相对湿度50~70% C、温度18~26℃，相对湿度45~65% D、温度15~18℃，相对湿度45~65%
7、检样稀释时，应以无菌操作称取或量取有代表性的样品（）g/mL置（）mL灭菌稀释液中，制成1:10的样品匀液。 A、10，90 B、25，225 C、50，450 D、100，900 8、以下哪个不是高压灭菌锅常用的条件（） A、115℃，30min B、121℃，20min C、126℃，15min D、200℃，45min 9、菌株传代次数不超过（）次。 A、3 B、4 C、5 D、6 10、以下不属于实验室内部质量控制的方法是（） A、能力验证 B、阳性加标 C、人员比对 D、质控样品 二、判断题 下列各题中，你认为正确的在（）内划“√”，错误的划“×”。每题1分，共10分。 （）1、实验设备应定期进行检查或检定(加贴标识），维护和保养，以确保工作性能和操作安全。（）2、鼓风干燥箱灭菌适用于高温下不变质、不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器等。 （）3、凝固后的培养基应立即使用或存放在4℃～12℃冰箱的密封袋中，最多存放1个月。 （）4、10倍系列稀释时，每递增稀释一次，不需要另换1支吸管。 （）5、为防止细菌增殖及产生片状菌落，在加入样液后，应在20min内倾注培养基。 （）6、采样不需要无菌操作。 （）7、压力表(灭菌锅)每半年必须检定一次。 （）8、食品样品检验应在洁净区域进行。 （）9、霉菌的培养温度为36±1℃，培养时间为5天。 （）10、实验室布局宜采用单方向工作流程，避免交叉污染。
实验一、微生物的简单染色思考题 1油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？ 答：油镜在使用时必须在载玻片与物镜之间滴加镜头油。油镜使用过程中要注意两点：（1）、使用后镜头的清洁：镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度，用完油镜必须进行“三擦”（观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯（或者乙醇乙醚溶液）擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原）。 （2）、.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 2、使用油镜时，为什么必须用镜头油？ 答：在使用普通显微镜时，当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 3、镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？ 答：低倍镜视野比较大，能看到的范围大，容易找到观察的目标，然后在用放大倍数高的高倍镜或油镜有目的的观察。 实验二、革兰氏染色 （1）为什么必须用培养24 h以内的菌体进行革兰氏染色？ 答：24h以内的菌体处于活跃生长期，菌体细胞壁具有典型特征，而处于老龄的革兰氏阳性细菌壁结构开始发生变化，染色时会被染成红色而造成假阴性 （2）要得到正确的革兰氏染色结果，必须注意哪些操作？哪一步是关键步骤？为什么？答：应注意如下几点： 其一，选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性； 其二，涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性； 其三，脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性 （3）当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠？ 答：当要确证未知菌的革兰氏反应时，可用已知菌进行混合涂片，使二者染色条件保持一致，如果已知菌的结果与预期相符，则证明操作操作正确，结果可靠。 实验三、微生物的显微镜直接计数法 1、在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？ 答：1）优点：直观、快速、操作简单。 2）缺点：
专题二微生物的培养和应用 课题1微生物的实验室培养 【目标定位】 了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。 【自主预习】 一、培养基： 1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。 2．营养构成：各种培养基一般都含有、、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。 3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。 〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分 二、无菌技术： 阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： (一)获得纯净培养物的关键是，具体操作如下： 1．对实验操作的、操作者的和进行。 2．将用于微生物培养的、和等器具进行。 3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。 4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。 (二)消毒和灭菌 1．消毒是指。 常用的方法有、、消毒法。 2．灭菌是指。 常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具 〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么 〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么 〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止。 三、实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
本实验所用的培养基是，本实验可分成和 两个阶段进行。 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是： 、、、、。 〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么 〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质 2．倒平板：待培养基冷却至℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。 其过程是： ①在火焰旁右手拿，左手； ②使锥形瓶的瓶口； ③左手将培养皿，右手，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板。 〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么 〖思考8〗平板倒置的目的是什么 〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物为什么 （二）纯化大肠杆菌 微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。 1．平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 其操作步骤是： ①将在酒精灯火焰上灼烧直至。 ②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。 ③将菌种试管口通过火焰达到的目的。 ④将冷却的接种环伸入到。 ⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。 ⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培养基。 ⑦灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程， 完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。 ⑧将平板培养。 〖思考10〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是
微生物基础知识考试试题 部门姓名得分 一、填空题（共30分，每空1分） 1.药品污染的主要途径、、、、。 2.引起药品腐败的微生物有、、、等。 3.常用的灭菌法有、、、 、。 4.细菌的形态有、、。 5.常用的消毒剂有、、、、等。 6.细菌生长最适宜的温度为；霉菌、酵母菌最适宜生长温度是℃；大肠杆菌最适宜生长温度为℃。 7.形体最微小，结构最简单的微生物是。 8.干热灭菌常用 2小时。 9.用乙醇进行消毒时，最佳浓度是。 10.细菌细胞由、、、核质组成。 二、判断（共20分，每题2分） 1.微生物数量多、分布广，但繁殖不快，适应性不强。（） 2.被微生物污染的药品可能会使其失去有效性。（） 3.无菌操作的目的是保证所生产药品不被环境中的微生物污染。（） 4.热致死点越高，说明微生物对温度的抗性越强。（） 5.食品中添加抑菌剂，可以杀灭含有的全部微生物。（） 6.病毒形体微小，必须用普通光学显微镜才能观察形态。（） 7.消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。（）
8.高压蒸汽灭菌可以最为有效地除去物品内外的微生物. （） 9.霉菌不属于单细胞微生物。（） 三、名词解释（共30分，每题10分） 1.微生物： 3.消毒： 四、简答题（共20分） 1.微生物按结构划分的种类及微生物特点。（10分） 2.紫外线辐射和60Co灭菌的特点。（10分）
一、填空题（共30分，每空1分） 1.药品污染的主要途径空气、原辅料、水、设备与建筑、人员。 2.引起药品腐败的微生物有细菌、真菌、病毒、细菌内毒素及热原等。 3.常用的灭菌法有干热灭菌法、湿热灭菌法、气体灭菌法、滤过灭菌法、辐射灭菌法。 4.细菌的形态有球菌、杆菌、螺旋菌。 5.常用的消毒剂有乙醇、甲醛、苯扎溴铵、过氧乙酸、碘酒等。 6.细菌生长最适宜的温度为；霉菌、酵母菌最适宜生长温度是25～28℃； 大肠杆菌最适宜生长温度为36±1 ℃。 7.形体最微小，结构最简单的微生物是病毒。 8.干热灭菌常用160℃-170℃2小时。 9.用乙醇进行消毒时，最佳浓度是70%-75％。 10.细菌细胞由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质组成。 二、判断（共20分，每题2分） 1.微生物数量多、分布广，但繁殖不快，适应性不强。（×） 2.被微生物污染的药品可能会使其失去有效性。（√） 3.无菌操作的目的是保证所生产药品不被环境中的微生物污染。（√） 4.热致死点越高，说明微生物对温度的抗性越强。（√） 5.食品中添加抑菌剂，可以杀灭含有的全部微生物。（×） 6.病毒形体微小，必须用普通光学显微镜才能观察形态。（×） 7.消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。（√） 8.高压蒸汽灭菌可以最为有效地除去物品内外的微生物.（√） 9.霉菌不属于单细胞微生物。（√） 三、名词解释（共30分，每题10分） 1.微生物：一般地说是指一群形态上、结构上都很简单的生物体。它们是一群在光学显微镜或电子显微镜下放大几百倍，几千倍甚至几万倍才能看到的微小生物，因为人类肉眼无法觉察或辨清，故称之微生物。 2.灭菌：用物理方法或化学药品杀灭物体上所有的微生物，包括致病菌和非致病菌，繁殖体和芽孢。 3.消毒：消毒是指杀灭病原微生物的繁殖体，但杀不死芽孢等全部微生物。 四、简答题（共20分） 1.微生物按结构划分的种类及微生物特点。（10分） 微生物按种类划分： （1）非细胞型微生物：即生命现象不以细胞的形式表现。如病毒。 （2）原核细胞型微生物：虽有细胞结构，但仅有原始核。如细菌。 （3）真核细胞型微生物：有细胞结构，细胞核分化程度较高。如霉菌、酵母菌。 微生物特点： （1）体积小、面积大。（2）数量多、分布广。（3）新陈代谢旺盛、繁殖速度快。 （4）变异快、适应性强。（5）代谢强，转化快。 2.紫外线辐射和60Co灭菌的特点。 紫外线辐射穿透力很弱，不能穿透正常的包装物质，即使是一层纸、塑料薄膜等。主要用于空气灭菌、物体表面灭菌。 60Co灭菌穿透力强，可穿透数厘米厚的铅。辐射能量可直接作用于细胞蛋白质分子，伤害细胞导致死亡。 全等三角形提高练习
江南大学微生物实验部分试题库及标准答案 一、名词解释题 1.电子显微镜：电子显微镜是利用电子波波长短,分辨力高的特点以电子流代替光学显微镜的光束使物体放大成象的超显微镜检装置。 2.普通光学显微镜：用自然光或者灯光作光源镜检物体的显微镜。 3.合成培养基：由化学成分已知的营养物质配制而成的培养基。 4.人工培养基：人工配制的供微生物生长繁殖并积累代谢产物的一种营养基质。 5.天然培养基：由化学成分不完全清楚的天然物质如马铃薯,麸皮等配制而成的培养基。 6.半合成培养基：由化学成分已知的化学物质和化学成分不完全清楚的天然物质配制而成的培养基。 7.革兰氏染色法：革兰氏染色是细菌的一种鉴别染色法,细菌首先用结晶紫染色,再用碘液固定,然后用95%的酒精脱色,最后用蕃红复染。凡是菌体初染的结晶紫被酒精脱去了紫色后,又被蕃红复染成红色的细菌称为革兰氏负反应细菌；凡是菌体初染的紫色不能被酒精脱色,也不能被蕃红复染成红色的细菌称为革兰氏正反应细菌。 8.简单染色：用单一染料使微生物细胞染上所用染料颜色的染色方法。 9.稀释平板计数法：将一定量的样品经十倍稀释后,用平板培养最后三个稀释度的样品稀释液。待菌落长出后,计数出某一稀释度的菌落数后再乘以稀释倍数,即为样品中的含菌数。10.显微直接计：利用血球计数板或细菌计数板在显微镜下测计出每小格的微生物细胞数量后,再换算出单位体积中微生物细胞总数的测数方法。 二、选择题 01.革兰氏染色的关键操作步骤是: A.结晶紫染色。 B.碘液固定。 C.酒精脱色。 D.复染。答:(C) 02.放线菌印片染色的关键操作是: A.印片时不能移动。 B.染色。 C.染色后不能吸干。 D.A-C。答:(A)。 03.高氏培养基用来培养: A.细菌。 B.霉菌。 C.放线菌。D酵母菌答:(C)。 04.肉汤培养基用来培养: A.酵母菌。 B.霉菌。 C.细菌。D放线菌答:(C)。 05.无氮培养基用来培养: A.自生固氮菌。 B.硅酸盐细菌。 C.根瘤菌。 D.A,B均可培养。答:(D)。 06.在使用显微镜油镜时,为了提高分辨力,通常在镜头和盖玻片之间滴加: A.二甲苯。 B.水。 C.香柏油。D甲苯答:(C)。 07.常用的消毒酒精浓度为: A.75%。 B.50%。 C.90%。D70% 答:(A)。
微生物学基础知识试题 及答案 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
微生物学基础知识试题 部门姓名成绩 一. 判断题 1、消毒可以杀灭物体上的所有微生物，而灭菌只杀死物体上的病原微生物。（×） 2、微生物数量多、分布广，但繁殖不快，适应性不强。（×） 3、多数细菌的最适培养温度时30~35℃. （√） 4、药品中存在微生物并不一定会引起药品变质。（×） 5、洁净区中的所有操作均不应大幅度或快速动作。（√） 6、一个不锈钢托盘擦拭得非常光亮，因此它不存在微生物污染。（×） 7、药品中添加抑菌剂，可以杀灭含有的全部微生物。（×） 8、常用于消毒的乙醇浓度为70%~75%。（√） 9、酵母菌为多细胞真菌。（×） 10、洁净室（区）的工作人员不能化妆，但可以戴戒指和项链。（×） 二. 填空题 1. 细菌按其形态不同，主要分为球菌、杆菌和螺旋菌三类，多以二分裂方式繁殖。 2. 洁净室（区）应定期消毒。使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。 消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。 3. 细菌的生长曲线包括四个生长时期为延滞期、对数期、稳定期、衰亡期。 4. 形体最微小，结构最简单的微生物是病毒。
5. 微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子等。 6.酵母菌最最主要的繁殖方式是芽殖。 7. 大肠杆菌在合适的生长条件下， ~20 分钟便可繁殖一代 三、选择题 1 不属于细胞生物的微生物（ B ） A、细菌 B、病毒 C、真菌 D、放线菌 2 抗生素产生菌中，其主要产生菌是（ C ） A、真菌 B、酵母菌 C、放线菌 D、病毒 3. 细菌的测量单位。( B ) B.μm 4. 酵母菌在自然界中分布很广，尤其喜欢在的环境中生长。( A ) A.偏酸性且含糖较多 B.偏酸性且含糖较少 C.偏碱性且含糖较多 D.偏碱性且含糖较少 5. 真菌生长最适的温度为℃。( B ) A. 16～22， B. 23～28， C. 30～35， D. 28～35 6. 下列不属于辐射灭菌的是。( D ) A.紫外线灭菌法 B.电离辐射灭菌法 C.微波灭菌法 D.高压蒸汽灭菌法 7. 细菌液体培养过程中哪一个阶段细菌数以几何级数增加（ B ） A、延迟期 B、对数期 C、稳定期 D、衰亡期 8. 波长为的紫外线最具有杀菌作用。（ C ）
食品微生物学技术思考题答案1.如何区别高倍镜和油镜 答：（1）油镜更接近标本片（2）油镜与标本间的介质是香柏油（3）油镜刻有“oil”或“Hi”字样，也刻有一圈红线或黑线为标记。 2．为什么在使用高倍镜及油镜是应特别注意避免粗调节器的错误操作答：使用高倍镜及油镜时镜头距离标片很近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的错误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。 3.用油镜观察时应注意哪些问题在载破片和镜头之间加滴什么油起什么作用 答：（1）应该先用擦镜纸将镜头擦干净，以防止上次实验的污染，操作时，先低倍再高倍，用完要擦掉油。（2）在转换油镜时，从侧面水平注视镜头注视镜头与玻片的距离。使镜头浸入油中而不以压破载玻片为宜。（3）从目镜内观察，把孔径光阑开到最大，使其明亮。然后用微调将镜台下降，直至视野内物象清晰。如油镜已离开油面仍未见物象，需重复操作。加的是香柏油。作用是增加折光率，增加显微镜的分辨率。 4.在调节焦距时，往往出现一些疑似观察标本的物象点，物象点可能是目镜或物镜上的杂质，也可能是标本片上的观察对象，如何通过操作判断这些物象点是否在标片上 答：移动标本片，看物象点是否移动，如果不移动，则不在标本片上。 5．如果涂片未经热固定或固定温度过高、时间过长，会出现什么现象答：固定时间是杀死菌体，使菌体蛋白质凝固黏附于载玻片上，增加菌体对染色剂的结合力，易于着色。但是如果没固定，不容易着色，且容易被清水冲走。
温度过高会使细胞收缩变形，时间过长会导致菌体变形或形态破坏，难以着色，从而导致难以着色。 6.为什么要培养18-24h的细菌菌体进行革兰氏染色 答:此时菌体进入比较活泼的繁殖生长期，细胞壁比较好着色。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应，关键在于细胞壁的通透性的改变。如果菌龄过老，不便于显微镜下观察时阴性还是阳性菌。 7．如何操作才能保证革兰氏染色结果正确，其中的关键环节是什么答：具体操作步骤为（1）涂片，与简单染色法相同，要求薄而均匀。（2）干燥、固定，在空气中自然晾干，或将涂面朝上，在酒精灯微小火焰上干燥；在酒精灯火焰上通过3-4次，温度不宜过高。（3）染色，用结晶紫进行初染1min,然后水洗。用碘液进行媒染，用碘液覆盖染色部位1min,水洗。在涂有细菌的部位连续滴加95%乙醇，约30s，水洗脱色。用番红溶液复染1min,水洗。（4）干燥，自然干燥或用吸水纸吸干，也可以用电吹风吹干。（5）镜检。 关键环节是酒精脱色。 8．为何常用插片法培养放线菌观察个体形态 答：放线菌的营养菌丝生长在培养基表面或插入培养基里面，不易被接种针挑取制片。采用插片法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长时期的形态。 9.在显微镜下，如何区分基内菌丝和气生菌丝 答：一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。 10.放线菌与细菌的菌落最显着的差异是什么
微生物实验室_高二生物微生物的实验室培养知识 点整理 高二生物微生物的实验室培养知识点 一、配制时的质量控制 (1)容器：配制和分装培养基的烧瓶、平皿或试管等器材应为中性，无酸、碱抑制物残留，平皿底部要平，以免琼脂厚薄不一，影响药敏试验结果。 (2)成分来源：各种成分来源可靠，不含对目的菌生长有抑制的物质。特殊要求的培养基，如葡萄糖氧化发酵试验(O/F试验)，除加入葡萄糖外，不能含有其他糖类，指示剂不能用乙醇溶液，避免O/F试验的假阳性。培养基配制用水应是蒸馏水。 (3)pH值调整：根据培养基的不同要求调整pH值，控制在要求范围的±0.2之内。应当注意，培养基在高压灭菌后其pH值降低0.1～0.2，故矫正时应比实际需要pH值高0.1～0.2。 (4)灭菌：根据培养基所含成分及配制数量的不同，选择不同的灭菌方式，既要达到灭菌效果，又不破坏培养基成分。一般对稳定的培养基，如MH琼脂、营养琼脂可用高压灭菌，即121℃15min;而含糖的培养基则以108℃灭菌为好，以防止糖类破坏。不耐高热的物质如血清、牛乳等，可采用间隙灭菌法灭菌。 (5)分装：根据使用的目的和要求决定分装量。分装培养基所用的平皿、试管要求清洁，不残留酸碱;制备平板培养基时，操作台要水平，以避免琼脂平板厚薄不一，同时确保无菌操作。 二、配制后质量控制 (1)培养基外观情况：包括颜色、透明度、有无沉淀和凝固。如发现培养基表面有裂纹或与培养皿的边缘分离，说明培养基有脱水现象，必须丢弃。
(2)无菌试验：每一批配好的培养基均须进行无菌试验。先灭菌 后分装的培养基，可采用抽样方法试验，少于100个样本通常选取5%～10%的量，如果配制大量培养基，则任意选取10个培养基;无菌 分装培养基则需全部做无菌试验。样本在35℃或其他适宜的温度下 隔夜培养，如培养基含有血液，则需再置于室温1天，以检查嗜冷菌。选择性培养基因含有抑制物质，能抑制许多微生物，因此，可 加入10倍量的无菌液体培养基，稀释抑制物质，以利于检出污染菌。即使做过无菌试验，接种时，也要检查每个平板上的可见菌落。 (3)性能测试：每一批新制或新购的培养基，使用前均须取已知 性质的库存菌种进行性能测试。培养基按目的不同可分为增菌培养基、分离培养基和鉴定培养基。 ①增菌培养基：接种少量难以生长的细菌，在一定时间内观察增菌情况，细菌能生长的最小接种浓度越小，说明增菌培养基性能愈好。 ②分离培养基：要求目的菌生长良好，非目的菌被抑制。一般要求生长的目的菌接种量不可过多，较好的方法是将测试菌调成0.5 麦氏浊度的菌悬液，再用0.001ml的标准接种环涂划在培养基上， 观察菌落生长。 ③鉴定培养基：应选择具有典型特征的菌株作性能试验。如三糖铁琼脂，须用弗劳地枸橼酸杆菌、福氏志贺菌及铜绿假单胞菌3种 菌分别接种3支培养基，若反应结果为斜面产酸/高层产酸、硫化氢 阳性，斜面产碱/高层产酸，斜面产碱/高层产碱，质量才算合格。 1.高二下册生物微生物的实验室培养期中复习要点 2.高二下册生物微生物的培养与应用知识点
微生物基础知识培训试题（答案） 部门：姓名：分数： 一、填空题（每空3分，共60分） 1、从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。 2、真菌包括单细胞与多细胞两类。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为酵母菌；多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或霉菌。 3、药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆虫和其它啮齿动物、生产操作人员。 4、选择填空： A 无菌 B 抑菌 C 消毒 D 灭菌 E 防腐 (1)消毒：杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细菌的芽胞。 (2)灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。 (3)抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。 (4)防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。 (5)无菌：不存在活的细菌。 5、影响微生物的物理因素有温度、辐射、干燥、渗透压、超声波、滤过；化学因素有pH值、重金属及其化合物、有机化合物、抗生素。 二、问答题（共2题，共40分） 1、简述微生物的特点。（10分） 个体小，面积大；分布广，种类多；代谢强，转化快；生长旺，繁殖快；适应性强，易变异。 2、为什么说土壤是微生物生长最适宜的环境？（30分） 土壤具备微生物生长繁殖的各种条件： （1）营养土壤中的动植物遗体是最好的食料。 （2）微量元素土壤含有大量微生物所需要的矿质元素，如：钙、钾、铁、镁、硫、磷等。 （3）pH值土壤的酸碱度接近中性，适宜微生物生长。 （4）渗透压土壤的渗透压在3～6个大气压之间，对于大多微生物都适宜。 （5）温度土壤温度一年四季温差不大，适宜生存。 （6）水分土表深处保墒（水分），为微生物生存提供了保障。