YRGene 慢病毒包装试剂盒说明书
产品编号：LPK010 产品规格：10个10cm 皿 产品简介：
赢润生物的慢病毒包装试剂盒包括如下成分：
（1） 优化配比的慢病毒包装辅助质粒混合物，可兼容大多数慢病毒表达载体。
（2） 高效转染试剂（Invitrogen Lip2000原装产品分装，293T 细胞转染效率接近 100%）。
（3 ）高效率的慢病毒浓缩液，无需超速离心，也不需要价格昂贵的过滤柱，快速富集病毒粒子，其优 势在于操作安全简单，对设备要求低，产毒效率高，能够快速、高效地收获高滴度病毒。
产品组成：
1. 转染前，传代 293FT 细胞于10cm 培养皿中（例如，接种 1 x 107
细胞于10cm 培养皿中，使用完全 培养基DMEM+10%FBS
培养），当细胞密度能够达到 90-95%即可进行转染。 Tips :培养基里面不要添加抗生素。 2. 转染前1-3小时，更换培养基，加入
7ml 新鲜的完全培养基（DMEM+10%FBS ）,注意不要添加抗
生素。 3. 准备转染。
在5ml 离心管中，分别配制 A 管与B 管试剂（Tube A and Tube B ）
配好后，放置5min ，然后将A 管缓慢加入B 管，混合均匀。 室温放置20min ，使得脂质体-DNA 混合物形成。
Tips :混合后可能会出现淡淡的乳白状，不会影响转染。 然后将混合液逐滴均匀加入 10cm 培养皿，轻微混匀。置于
37C, 5% CO ?培养箱中培养过夜。
4. 第三天，更换培养基，加入 10ml 的完全培养基，同样注意不要加抗生素。
5. 转染后48-72h 后收取上清，转移至 15ml 离心管。
Tips :上清里面含有病毒，请小心操作。 6. 3000rpm 在4C 离心15min ，去除沉淀。
7. 上清液用0.45卩m 滤器过滤后转移到新的离心管中。
慢病毒浓缩：
1. 每10ml 过滤后的病毒初始液，加入 Concen Solution 3ml ，每20-30min 混合一次，共进行 3-5次。
2. 4C 放置过夜。
3. 4C, 3000 g,离心 45min 。
4. 去掉上清，静置管子1-2min ，吸走残余液体。
5. 加入无血清DEME 充分溶解慢病毒沉淀。
6. 病毒悬液分装成200卩l 每份，保存在离心管中，速冻后储存在
-80 C 。
慢病毒包装步骤
慢病毒滴度测定：
进行慢病毒感染实验之前，我们强烈建议您进行慢病毒滴度检测。
4
1.
在滴定测定的前一天取 48孔板，每孔接种 3X 10 293FT 细胞。
2. 加polybrene 到新鲜的完全培养基中，使其终浓度为
8卩g/ml 。
3. 加含有polybrene 的完全培养基10倍稀释病毒。具体操作如下：取一个 1.5ml 离心管（或96孔板）,
加入90卩l 培养基和10卩l 待测病毒原液，混合均与后吸取10卩l 病毒混合液至第二个离心管 （或96
孔板第二个孔），混合时尽量不要产生气泡，如此稀释至第八个孔（即稀释 105
倍）。
5.转染后72h ，用荧光显微镜技术荧光细胞数量（如果观察不清晰可以先用
PBS 换液后再进行观察）。
一般情况下，在最高稀释度10m
的孔数出现N （N<10 ）个带荧光的细胞，则病毒滴度为N X 10m
TU/ml （10m
为稀释倍数），若N>10，则需要继续稀释。
注意事项:
1. 细胞的生长状态对于病毒包装至关重要，因此需保证良好的细胞生长状态和较少的细胞传代次数。
2.
病毒切勿反复冻融，如果实在需要冻融，次数尽量不要超过 3次，每冻融一次大约有 10%左右的病
毒损失，应按照每次使用的病毒量来分装，保存于 -80C 。保存时间尽量不要超过
6个月。
Y
4.各
取
（1
l 毒 释 到
10
病
稀
液
对
的48孔中，置于37C, 5% CO ?培养箱中培养过夜，16h-24h 后用新鲜的完全培养基换液。