二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮
【目的】
1. 掌握二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验方法。
2. 熟悉二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验原理。
3. 了解血清尿素氮测定的临床意义。
【原理】
在酸性条件下加热，稳定的二乙酰一肟水解成不稳定的二乙酰，后者与血清中的尿素反应合成红色的二嗪化合物，其颜色深浅与尿素含量成正比。与同样处理的尿素标准液比色可求得血清中的尿素含量。其反应式如下：
【器材】
1 ．血清；
2 ．微量移液器；
3 ．刻度吸量管；
4. 沸水浴；
5. 分光光度计。
【试剂】
1 ．血清
新鲜人或动物血清，无溶血。
2 ．酸性试剂（或称尿素氮试剂）
在三角烧瓶中加蒸馏水约 100ml ，再加浓硫酸 4ml 及 85% 磷酸 66ml 。冷至室温，加入氨基硫脲 50mg 及硫酸镉（CdSO 4 ·8H 2 O ） 2g （提高尿素与二乙酰反应灵敏度），溶解后用蒸馏水稀释至 1L 。置棕色瓶在冰箱保存。可稳定半年。
3 ．二乙酰一肟溶液
称取二乙酰一肟 20g 。加蒸馏水约 900ml ，溶解后，再用蒸馏水稀释至 1L 。置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年不变。
4 ．尿素氮标准液（ 14mmol/L ， 19.6mg/dl ）
称取干燥纯尿素 4 2mg ，加少量蒸馏水溶解后，移入 100ml 容量瓶，加氯仿数滴防腐，再加蒸馏水至刻度，在冰箱中可稳定半年。如用 8mmol/L 苯甲酸溶液代替蒸馏水配制，此标准溶液防腐效果更好。
【操作】
取 3 支试管，标明测定管、标准管及空白管，按下表操作。
混匀后，置沸水浴中加热 12min ，取出，置冷水中冷却 5min 后，用于波长540nm ，以空白管调 0 ，读取并记录标准管及测定管吸光度值。
【计算】
【注意事项】
1 ．本法线性范围达 40mg/dl 尿素氮，即吸光度 0.7 。果遇高于此浓度标本，必须用生理盐水作适当的稀释后重测，然后乘以稀释倍数为结果。
2 ．虽有氨基硫脲和镉离子，但仍有轻度褪色现象（每小时小于 5% ），故加热显色冷却后，应及时比色。
3 ．世界卫生组织推荐用 mmol/L 尿素表示，但我国仍习惯用尿素氮（ mg/dl 或mmol/L ）表示。二者换算关系是， 1mmol/L 尿素氮等于 1/2mmol/L 尿素，
1mg/dl 尿素氮等于 2.14mg/dl 尿素。
4 ．血清尿素氮的正常值参考范围为 3.6 ～ 14.2mmol/L 。
【思考题】
1 ．若肝功能正常，而肾功能下降时，血中尿素氮含量会发生怎样的变化？为什么？
2 ．将尿素氮换算成尿素时， mmol/L 浓度除以 2 ，而 mg/dl 浓度乘以 2.14 ，为什么？
实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法） 一、实验目的与要求 1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。 2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。 二、实验原理 尿素在脲酶作用下分解生成氨。在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2 氨 NH3+OCl-NH2Cl+OH- 次氯酸氨胺催化剂 NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2 苯酚P胺基苯酚 HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O 酚靛三、实验仪器与试剂 1 仪器 （1） AT648半自动生化分析仪1台； （2） 4孔恒温水浴锅1个； （3）振动摇床1台。 2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括： （1）试管架1个； （2） 2ml试管10个； （3） 20μl微量加样器1个； （4） 1ml移液管1个； （5） 5ml移液管2个； （6）吸耳球1个； （7）搪瓷盘1个； （8）微量加样滴头； （9）吸水纸。 3 本试剂盒内含5种试剂： （1）脲酶（冻干） 2瓶 （2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml （3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml （4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml （5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml 四、实验步骤 1 血清 （1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。 （2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。表131系列反应管中所加溶液的量 空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。 （4）再于37℃水浴中保温20min，取出冷却至室温，于721分光光度计/ AT648半自动生
实验十七 实验名称：尿素的测定 实验目的与要求：掌握测定血清尿素的基本原理 实验仪器、试剂：半自动生化分析仪、尿素测定试剂盒 实验原理： 尿素经脲酶水解生成NH3与CO2,在谷氨酸脱氢酶（GLDH）的作用下，氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶Ⅰ（NADH）反应生成谷氨酸和NAD+，NADH在340nm 处的吸光度下降速率与待测样品中尿素的含量成正比。 操作方法： 1、将试剂R1：R2=4：1混合，即为工作液 2、按下列顺序加入各试剂 单位ml 空白标准样本 蒸馏水0.01 —— 样本－－0.01 标准液－0.01 － 工作液 1.0 1.0 1.0 3、混匀各管，340nm,空白管调零，延时30秒，读取初始吸光度A1，60秒后读取A2，计算ΔA 实验现象与数据：记录ΔA 结果分析与结论：尿素＝ΔA样/ΔA标×C标（8.32 mmol/l） 参考范围：1.7-8.3mmol/l 临床意义： 实验十八 实验名称：血清尿酸的测定 实验目的与要求：掌握尿酸酶-过氧化物酶耦联法测定尿酸的基本原理 实验仪器、试剂：尿酸测定试剂盒，722E/723分光光度计 实验原理：尿酸酶氧化尿酸，生成尿囊素和过氧化氢，在过氧化物酶催化下，过氧化氢使ESBmT和4－氨基安替比林缩合成有色化合物，其在546nm吸光度与尿酸浓度成正比。 操作方法： 按以下步骤操作 单位ml 标准测定空白 样本－0.025 － 标准液0.025 －－ 蒸馏水－－0.025 酶试剂 1.0 1.0 1.0 混匀37℃温浴5min，以空白管调零。546nm，0.5cm比色杯，测定各管的A 实验现象与数据：记录各管的A 结果分析与结论：血清尿酸浓度＝A样/A标×C标（357μmol/l）参考值：男202－416μmol/L，女142-339μmol/L
科普一下：临床医学检验中“尿素”与“尿素氮”的正确使用！ 发表时间：2019-12-04T11:09:47.143Z 来源：《健康世期界》2019年15期作者：徐登波 [导读] 四川省成都市武侯区人民医院 610041 我国经济建设以来，医疗行业得到较快发展，其中医学检验技术在此过程中得到不断优化，成为临床诊断中较为重要的一种检测方法，能够有效提升临床诊断准确性，不但能够使临床工作顺利开展，而且对患者疾病情况实施全面的测定，为采取针对性治疗方案奠定良好的基础。随着人们生活质量的不断提高，生活与工作压力逐渐增加，肾病发生率逐年提升，主要是受一些因素的影响，比如饮食习惯、生活习惯以及环境等，对患者生活质量造成不同程度的影响，这就需要采用科学、有效的检验方法对疾病实施有效评价，以此能够提升临床诊断准确性，从而提高患者治疗的效果，为提升患者生活质量奠定良好的基础。本文以尿素与尿素氮为例，首先阐述尿素氮与尿素的临床检验与尿素氮临床检验意义，而后对尿素氮检验使用与常见问题进行探究，最后着重探讨尿素在临床中的使用与两者之间检验方法的正确选择，分析在临床治疗过程中检验方法的正确使用，这对选择正确的治疗方法具有加大促进作用。 一、尿素氮与尿素的临床检验 在对患者肾功能医学检验的过程中，尿素临床检验在其中较为重要，但是因传统书籍中把尿素编写为尿素氮，导致临床医生在对两者检验区别与分析的过程中，很难对两者有全面的理解，致使无法深入分析尿素氮与尿素检验之间存在的差异性，这对临床科学判定产生不同程度的影响，所以为了提高肾功能患者诊断正确性，需要对尿素氮与尿素临床检验进行深入分析与应用，这提供患者治疗效果，恢复肾功能具有较大促进作用。 二、尿素氮临床检验意义 在对尿素氮进行临床检验的过程中，会出现数值增高的情况，这在较大程度上与肾前性少尿、肾功能损伤以及摄入过多等因素有关。此外，在对尿素氮进行临床检验期间，能够有效提升临床诊断准确率，但是在一些情况下检验报告很难对患者具体病情进行准确反应，这就需要通过化验单实施针对性判断，以此对患者实际病情与病情发展得出有效结论。除此之外，还需要采用科学的临床检验方法，能够为尿素氮数值的有效控制奠定良好的基础，并且在此基础上也是提高治疗方法疗效的重要标准。尿素氮数值降低在检验的过程中也时有发生，主要是与患者怀孕、肝脏功能等因素有较大关系，若出现数值降低的情况，应当对肝功能进行全面检查，并在此基础上对此进行全面分析，以此采取针对性治疗措施，这对疾病治疗具有较大的促进作用，为患者生活质量的提升意义重大。 三、尿素氮检验使用分析 1、尿素氮检验使用 目前我国临床在对尿素氮检验的过程中，一般情况下正常值为3.3 mmol/L-6.0mmol/L之间为正常，其检验的主要目的是对患者肾功能情况进行准确判断，由此可以看出尿素氮在使用的过程中，对患者疾病诊断与治疗尤为重要。此外，在一些情况下对患者进行痛风检验实施评定的过程中，主要使用血尿素氮检测方法，在检验的过程中首先需要对患者近期饮食情况、身体状况以及服用药物类型等进行全面了解，以此为提升检验结果的准确性奠定良好的基础，能够有效提高检验结果分析的准确性，与此同时对检验结果产生的不良影响的有效降低具有较大促进作用。在对尿素氮临床检验的过程中，对检验结果进行评定分析，能够为患者临床诊断与针对性治疗提供有利的数据依据。 2、尿素氮临床检验常见问题 我国尿素氮在进行临床检验的过程中存在一些问题，比如抗凝剂使用不当、稳定性差以及NADH不足等问题，所以需要对患者临床实际检验中存在的问题进行深入分析，并在此基础上采取针对性解决方法，不但能够避免问题的发生，而且还可为检验准确性的提高奠定良好的基础，这对提高患者生活质量尤为重要。但是，因尿素氮中NADH稳定性相对较差，并且易被氧化，根据目前医疗技术很难对此问题进行解决，这就需要在检验期间应采取有效措施，最大程度降低环境因素的影响，并且在此基础上还需要对检测偏差进行纠正，以此确保将偏差降至最低，可有效提升检验结果的准确性，从而使尿素氮临床医学检验具有较高的科学性与可靠性。 四、尿素在临床医学检验中的使用 尿素与尿素氮之间能够相互转换，并且有固定的转换公式：mg/dL尿素氮0.0357=mmol/L尿素。尿素在临床医学检验的过程中，与尿素氮之间需要进行转换，在转换的过程职工能够通过计算来完成，但是在实际检验的过程中，不能只通过简单计算对尿素实施有效检验，其中与尿素氮检验相比较为全面，并且在此基础上具有较高的准确性，能够针对患者疾病情况收集评价信息。目前，尿素医学临床检验一般情况下采用尿素酶方法与直接方法实施有效测定，其中直接方法是通过尿素与相关试剂之间的有效作用，而对肾功能测定的方法主要使用二乙酰胯方法，尿素酶在医学检验的过程中，主要是将尿素转换成氨，再实施测定的一种方法，两者方法相比，直接方法在检测的过程中相对简单，并且在此基础上具有较高的灵活性，但是在检验期间加热环节会出现不同程度的异味，对检验过程产生一定影响，随着医学技术的不断发展逐渐被尿素酶替代。尿素酶所采用的方法具有较高的特异性，并且反应专一，不受外界因素的影响，具有较高的准确率，其缺点是检测过程需要花费大量时间来完成，并且会受到氨的影响。这就需要在临床实际应用的过程中，根据患者实际情况针对性选择检测方法。在检测的过程中，还应采取有效措施降低外部因素与内部因素造成的影响，从而为检测准确率的提升奠定良好的基础，也为临床医师进行准确诊断提供有利依据。 五、正确选择尿素与尿素临床检验方法 尿素氮与尿素两种临床检验方法在检验期间会受到较多因素的影响，这就需要在检测期间对影响因素与实际检测情况进行深入分析，以此选择科学合理的检验方法。此外，检验工作人员需要认识到检验方法选择的重要性，并且检验方法选择完成后需要对患者实际疾病情况进行全面了解，同时此基础上对医院医疗技术进行分析，针对性选择制备检测过程中所使用到的材料与试剂，能够确保检验结果的正确性，以此避免因一些材料与试剂存放不正确导致检验结果出现偏差。除此之外，检验工作人员还应采取有效措施对检验结果产生的偏差与
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书 1.实验原理 脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。 脲酶 尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－ 谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O 2 标本： 2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用
无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。 3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml） 6.1.1 试剂组成 试剂1： Tris缓冲液pH7.8 120mmol/L α-酮戊二酸7mmol/L ADP 0.6mmol/L 谷氨酸脱氢酶≥1000U/L
脲酶≥6000U/L 试剂2： NADH 0.25mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品
血尿素氮(BUN)的正常值是多少，其增高和减低的临床意 义是什么？ 文章来源：有问必答健康社区2005-1-24 17:07:12 血尿素氮(BUN)的正常值为：3.2 ～6.0mmol/L。尿素分子结构式为 CO(NH2)2，分子量为60，其中含氮28，故BUN约为尿素之半(28/60)，血尿素氮的正常值为 SUN×28/60。 增高的临床意义： (1)肾前性：①生成增加(假性氮质血症Pseudoazotemia)：高蛋白饮食；消化道出血；组织分解加快(感染、高热、外伤、手术、用皮质类固醇、饥饿早期)；蛋白合成受抑制(用四环素)。增高程度与原有肾功能有关，例如肾功能正常时，消化道出血达800mL时才增高，而肾功能损害时，远低于此数，如200mL时即可增高。②肾血流灌注减少(低灌注性氮质血症hypoperfusion azotemia)：由于重吸收增加，小球滤过减少。a 绝对血溶量减少(脱水，失血，肾上腺皮质功能减低)；b 有效血容量减少(严重心衰，急性心梗，心包填塞症，肝硬化，肾病综合征)。 (2)肾性(肾实质性氮质血症parenchyma l azotemia)：各种肾实质性病变，如肾小球肾炎、间质性肾炎、急慢性肾衰竭、肾内占位性和破坏性病变等。 (3)肾后性：尿路梗阻导致滤过减少和重吸收增加。 由上可见，一些肾外因素可使BUN增高，如能除外肾前因素，BUN>21.4mmol/L(60mg/dl)即为尿毒症诊断指标之一。 减低的临床意义： (1)生成减少(低蛋白饮食、肝衰竭)。 (2)排出增多(吐、泻、多尿)：肾衰竭经透析后，由于尿素分子量较肌酐为小，易于透析出去，故血尿素氮较肌酐相对低；如饮食减少或合并吐泻时也相对较低，此时称低氮质血症(hypoazotemia)，二者之比<1/10。 编辑词条尿素氮 血尿素氮—肾功能主要指标之一。所以尿素氮的变化对非蛋白氮数值的影响较
检查肾功能的各项指标，可诊断有无肾脏疾病、疾病的程度以及评估临床治疗效果和预后，并要以此决定下一步治疗时使用药物的剂量以及选择透析、手术等治疗方案。下面简单介绍临床最常用的几项肾功能检查项目。 血清尿素氮：尿素几乎全部由蛋白质分解代谢而形成，主要经肾脏排泄。肾脏病变如急慢性肾炎、肾动脉硬化、肾结核、肾肿瘤、严重肾盂肾炎等均可引起血清尿素氮增高。 正常人尿素氮一般在5.36微摩尔/升(15毫克/分升)以下，不超过7.14微摩尔/升(20毫克/分升)。如果尿素氮超过8.9微摩尔/升(25毫克/分升)，临床上称为氮质血症，提示肾小球功能受损;如果超过28.6微摩尔/升(80毫克/分升)，患者可出现各种尿毒症症状。 血清尿素氮的浓度受食物蛋白质的影响，因此必须空腹抽血。引起体内蛋白质分解代谢增强的疾病，如急性传染病、大面积烧伤、高热、甲状腺机能门进等也可使尿素氮增高;上消化道出血患者因蛋白质吸收增多，也常见尿素氮增高。因此，仅以尿素氮评估肾功能损害程度还不准确，还要做血清肌酐检查。肾病时尿素氮改变比血清肌酐早而且显著。 血清肌酐：肌酐主要由肌肉代谢产生，极小部分来自食物。血清肌酐浓度实际上取决于肾的的排泄功能的好坏。 健康男性血清肌酐值为70-106微摩尔/升(0.8-1.2毫克/分升)，女性53-80微摩尔/升(0.6.0.9毫克/分升)。根据血汪豳酐浓度可将肾功能损害分为：(1)轻度损害132.6-221微摩尔/升(1.5-2.5毫克/分升);(2)中度损害229.8-397.8微摩尔/升(2.6-4.5毫克/分升);(3)重度损害大于397.8微摩尔/升。 由于肾的代偿能力很大，在肾疾病的初期，血肌酐浓度一般不升高，只有当肾小球滤过能力下降一半或更多时，血肌酐浓度才见增高，所以其灵敏性较差。一旦出现肌酐增高，常提示预后严重。 需要指出，血清肌酐和尿素氮正常值并不随年龄改变。由于老年人体内的脂肪增国，肌肉养活，蛋白质分解减少，尿素氮、肌酐亦随之减少。所以当老年人的尿素氮或肌酐增高时，说明肾脏损害已比较明显，应进一步检查发病原因。
血清尿素氮的测定 一.实验原理 血清中尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸溶液中共煮时，可生成双乙酰和尿素形成的红色复合物(二嗪衍生物)，其颜色深浅与尿素含量成正比，与同样处理的尿素标准液比色。即可求得血清中尿素的含量。 由于反应在强酸中进行，所产生的羟胺是干挠物质，所以必须用氧化剂将其氧化除去。 在呈色反应中产生的有色复合物对光不稳定．加入氨基硫脲可增加其稳定性，还可提高尿素与双乙酰反应的灵敏度。 二.实验操作 取试管3支，注明空白管、标准管、测定管，按下表操作 540nm比色，以空白管调零，测定各管吸光度值。 三.计算
血清尿素氮（mmol / L ）=——————— X 17.85 测定管吸光度标准管吸光度 正常值参考范围3．57～14．28mmol ／L 四.临床意义 血液中非蛋白含氮化合物包括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、 胆红素及氨等。其中尿素含量约占l ／3～1／2。尿素是蛋白质代谢的产物．通过肾脏排出，故测血清尿素氮可作为检测肾脏功能的试验，并且其增高程度与病变的严重程度呈平行关系。 五.试剂 1.尿素氮试剂：蒸馏水lOOml ，浓硫酸44ml ，85％磷酸66ml ，冷却至室温后，加氨基硫脲50mg ，硫酸镉(3CdSO ４·8H 2O)2g ，溶解后稀释至1000ml 。 2.20g ／L 二乙酰一肟试剂：称取二乙酰一肟20g ，加入蒸馏水约900ml ，溶解后稀释至1000ml. ３.尿素氮标准贮存液(357mmol ／L)：称取尿素1.072g 溶解于蒸馏水中定容至1000ml 。 ４.尿素氮标准应用液(17.85mmol ／L)；取贮存液5ml ，加蒸馏水至100ml 。
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法 1.实验原理 脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。 尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。NADH 的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。 脲酶 尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－ 谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD ＋+H 2O 2 标本： 2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：奥林巴斯尿素测定试剂盒试剂1：＋试剂2：6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的
ICS 11．020 C 50 VS 中华人民共禾口国卫,--l=行业标准 WS／T 345—20 11 血清尿素测定参考方法 Reference procedure of the measurement of urea in serum 201 1-09-30发布2012—04—01实施 中华人民共和国卫生部发布
目次 前言 1范围· ·Ⅲ， 2规范性引用文件● 3术语和缩略语·● 4测定原理·· ··0 5测定样品 0 6测定试剂.0 6．1警示与安全注意事项.0 6．2试剂原料- 0 6．3试剂眭能要求.0 6．4试剂制备 0 6．5标准液的制备·0 7测定条件·，7．1仪器· 7．2最终反应混合液的浓度 7．3血清尿素测定条件，如7．4校准的扩展不确定度u 8测定······u 8．1无蛋白滤液的制备··· 8．2试剂准备 8．3标准曲线制作··· 8．4测定方法······ 8．5测定范围u他挖地n 8．6误差的来源 8．7测定样品要求 9结果计算·····- 9．1计算实际吸光度值···n¨¨n 9．2标准曲线的制作·一n 9．3样品测定结果的计算·-‘H 9i 4卓岔换算·····- M 附录A(规范性附录)L一谷氨酸脱氢酶催化活性浓度测定 附录B(规范性附录)脲酶催化活性浓度测定···¨n
前言 本标准修改采用由国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)批准的《CDC人血清尿素参考方法(分光光度法)》，并参考ISO 15193：2009《体外诊断器具生物源样品中量的测定参考测定程序的表述》适当增加内容。 本标准按照GB／T 1．1—2009给出的规则起草。本标准由卫 生部临床检验标准专业委员会提出。本标准起草单位：卫生部 临床检验中心。本标准主要起草人：杨振华、陈宝荣、邵燕、陈 琦、孙慧颖、胡滨。 Ⅲ
血清尿素氮的测定 【目的要求】 1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。 2.复习尿素的生成机理及其意义。 【实验原理】 血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。 【实验材料】 1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计 2.试剂 （1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液 【操作步骤】 取试管三支按下表操作 1：4稀释血清（或0.1
血浆） 尿素氮标准液 0.1 （0.02mg/ml） 蒸馏水0.1 二乙酰-肟0.5 0.5 0.5 尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。 计算及结果分析Array 尿素（mg%） ×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml) 【注意事项】 1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即 可）。本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取 0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5” 2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色 泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。 3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮 化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。 4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务 必准确。
血尿素氮早期诊断上消化道出血1例 于闯周珩张晓慧呙青松 世界急危重病医学杂志2004；1（３）：206 我院对一来院急诊患者采用血尿素氮检查，在其黑便出现前十二小时做出上消化道出血诊断，报道如下。 1临床资料 患者男性，20岁，既往体健，于来诊前三日出现空腹时胃区不适伴饥饿感，进食可稍缓解，大便成形无黑便。于来诊前一日晚自感恶心，呕吐一次胃内容物，无呕血，来诊当日晨起，坐起时出现颜面苍白，出冷汗，两眼上视，无意识障碍、抽搐、口吐白沫等。平卧后好转，逐渐坐起后能自行行走。来急诊后再次出现上述症状。查体：P 86 /min, BP 117/59 mmHg，神清，皮肤粘膜略潮湿，无苍白及黄染，颈软，心肺未见异常，腹平软，无明显压痛点，移动性浊音(-)，肠鸣音8次/分，神经系统检查未见异常。辅助检查：Hb134g/L，Hct 0.42，BUN14.6mmol/L，Cr 57.6umol/L，尿常规未见异常，比重1.020，血糖正常。初步诊断：上消化道出血，消化性溃疡？给予留观，禁食，平卧，静点706代血浆，法莫替丁20mg 静滴Bid，静脉补液共3450ml。留观后生命体征平稳，8h 后复查Hb降至98g/L，12h后排黑便一次，量50g，化验潜血(+++)，全天尿量共980ml。第二日查胃镜示食道未见异常，胃底、胃体粘膜、十二指肠球部粘膜轻度弥漫性充血水肿；十二指肠球部前壁见1.0cm×1.3cm溃疡，底部白厚苔，周边隆起发红水肿，降部未见异常，Hp(±)。临床诊断：十二指肠球部溃疡，上消化道出血。 2 讨论 上消化道出血是常见急症，大多以呕血、黑便为首发症状而就诊，有时可见血压下降、血色素降低等，严重者危及生命，尽早诊断、及时治疗是改善预后的重要手段。本例患者来诊时无以上症状，容易误诊。患者无明显失血失液病史，随着体位变化出现低血容量表现，应考虑到有内出血的可能，结合病史体征排除腹腔出血，考虑以胃肠道出血的可能性大。该患者血尿素氮明显增高，有报道，血尿素氮与肌酐比值可作为上下消化道出血简便易行的鉴别指标之一。上消化道出血后可出现肠源性氮质血症，一般在出血数小时血尿素氮就开始上升，多数不超过14.3mmol/L，BUN/Cr比值在55.0以上，若血尿素氮超过17.85mmol/L须考虑并发急性肾衰的可能，而下消化道出血大多不会导致氮质血症［1］，有研究表明，血尿素氮升高的水平与上消化道出血的严重程度呈正相关，且早于呕血、黑便等症状的出现［2］，该患者BUN14.6mmol/L，BUN/Cr=62.84，结合其临床表现，支持上消化道出血诊断。本例患者虽然临床表现不典型，由于靠血尿素氮升高作出了及时正确的诊断，未延误治疗，病情很快控制平稳。由此可见血尿素氮升高对上消化道出血早期诊断是可行的，且有重要意义，应引起足够重视。（注：计算比值时BUN和Cr单位取mg/dL） 参考文献 1周宁 血尿素氮与肌酐的比值对消化道出血的鉴别意义 山西临床医药杂志2001；5:376-377 2翟晓辉郝伟 血尿素氮预警重型颅脑损伤并发消化道出血的临床研究 中华创伤杂志2001；7:424-425 （收稿日期：2003-02-10） （本文编辑：扬帆）作者单位：102200北京，北京市昌平区中医医院急诊科 作者简介：于闯，男，主治医师 BUN 14.6mmol/L →14.6×28＝408.8 mg∕L →40.88 mg∕dL Cr57.6umol/L →57.6×113×10-3＝6.5088 mg∕L → 0.65mg∕dL BUN∕Cr40.88÷0.65＝62.89
血清尿素UREA测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 在下述反应中，NAD+生成速率与样本中尿素（尿素氮）的浓度成正比。通过在340 nm处测定固定时间间隔内吸光度的下降速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。 尿素酶 尿素 + 2H2O 2 NH4＋ + 2 HCO3－ 谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH+H+ L-谷氨酸+NAD＋+H2O 3 标本： 3.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 3.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子
的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。 3.3标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 3.4 标本运输：常温条件下保存运输。 3.5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 4 实验材料 4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成 试剂1（R1）：α-酮戊二 酸 7.5mmol/ L 谷氨酸脱氢 酶 ＞800U/L NADH 0.35mmol /L 二磷酸腺苷 1.5mmol/L Tris缓冲液
115mmol/L 试剂2（R2）： Tris缓冲液115mmol/ L 尿素酶＞40000 U/L α-酮戊二酸7mmol/L 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。 4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 4.1.5 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。 4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的UREA校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
尿素氮正常值是多少 一般情况下，正常成人空腹尿素氮为3．2-7.1mmol／L(9-20mg／d1)。尿素酶靛酚法参考值：M（男）：2．89－7．85mmol/LF（女）：2．78－7．32mml/L；尿酶－钠氏试剂显色法参考值：3．21－6．07mmoI/L 尿素氮是了解肾脏机能是否正常的重要指标。当尿素氮超过正常值，就很有可能是肾脏出现了问题。正常情况下，血尿素氮与肌酐之比(尿素氮／Scr)值约为10，高蛋白饮食、高分解代谢状态、缺水、肾缺血、血容量不足及某些急性肾小球肾炎，均可使比值增高，甚至可达20～30；而低蛋白饮食，肝疾病常使比值降低，此时可称为低氮质血症。血肌酐〈Scr〉和尿素氮〈尿素氮〉两者分别为含氮的有机物和蛋白质代谢的终末产物，在肾功能正常的情况下，这些小分子物质从肾小球滤出，故可用作肾小球滤过功能的诊断和过筛指标。当肾小球滤过功能减低时，血肌酐和尿素氮因潴留而增高。 尿素氮的正常值在不同地方略有不同，一般认为尿素氮的正常值是2.86-7.14mmol/L。各种肾实质性病变，如肾小球肾炎、间质性肾炎、急慢性肾功能衰竭、肾内占位性和破坏性病变均可使血尿素氮增高。多肾外因素也可引起血尿素氮升高，如能排除肾外因素，尿素氮)，21.4mmol／L(60mg
／d1)即为尿毒症诊断指标之一。尿素氮的高低较易受饮食、肾血流量的影响，如有蛋白质分解因素—感染，肠道出血、甲亢等可使尿素氮升高。肾小球滤过率下降至正常的1/2-1/3时，尿素氮逐步升高，一般情况下血尿素氮与血肌酐的比值是10：1，比值生高的原因有胃肠道出血，溶血，心功能不全和组织分解增强（烧伤、高热、肾上腺皮质激素治疗等），多为肾前因素引起，比值降低见于蛋白质摄入过少，严重肝肾功能不全等。 尿素氮浓度受多种因素的影响，分为生理性因素和病理性因素二个方面。 1、生理性因素：高蛋白饮食可引起血清尿素氮浓度升高，男性比女性平均高2－3mg/dL。 2、病理性因素： a．肾前性：剧烈呕吐、幽门梗阻、消化道大量出血、 肠梗阻和长期腹泻等。 b．肾性：急性肾小球肾炎、慢性肾炎、慢性肾盂肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭及中毒性肾炎。 c．肾后性疾病：前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、 膀胱瘤导致的尿路受压等。 血尿素氮易受到尿量及氮负荷的影响，如上消化道出血、
二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮 【目的】 1. 掌握二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验方法。 2. 熟悉二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验原理。 3. 了解血清尿素氮测定的临床意义。 【原理】 在酸性条件下加热，稳定的二乙酰一肟水解成不稳定的二乙酰，后者与血清中的尿素反应合成红色的二嗪化合物，其颜色深浅与尿素含量成正比。与同样处理的尿素标准液比色可求得血清中的尿素含量。其反应式如下： 【器材】 1 ．血清； 2 ．微量移液器； 3 ．刻度吸量管； 4. 沸水浴； 5. 分光光度计。 【试剂】 1 ．血清 新鲜人或动物血清，无溶血。 2 ．酸性试剂（或称尿素氮试剂）
在三角烧瓶中加蒸馏水约 100ml ，再加浓硫酸 4ml 及 85% 磷酸 66ml 。冷至室温，加入氨基硫脲 50mg 及硫酸镉（CdSO 4 ·8H 2 O ） 2g （提高尿素与二乙酰反应灵敏度），溶解后用蒸馏水稀释至 1L 。置棕色瓶在冰箱保存。可稳定半年。 3 ．二乙酰一肟溶液 称取二乙酰一肟 20g 。加蒸馏水约 900ml ，溶解后，再用蒸馏水稀释至 1L 。置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年不变。 4 ．尿素氮标准液（ 14mmol/L ， 19.6mg/dl ） 称取干燥纯尿素 4 2mg ，加少量蒸馏水溶解后，移入 100ml 容量瓶，加氯仿数滴防腐，再加蒸馏水至刻度，在冰箱中可稳定半年。如用 8mmol/L 苯甲酸溶液代替蒸馏水配制，此标准溶液防腐效果更好。 【操作】 取 3 支试管，标明测定管、标准管及空白管，按下表操作。 混匀后，置沸水浴中加热 12min ，取出，置冷水中冷却 5min 后，用于波长540nm ，以空白管调 0 ，读取并记录标准管及测定管吸光度值。 【计算】 【注意事项】 1 ．本法线性范围达 40mg/dl 尿素氮，即吸光度 0.7 。果遇高于此浓度标本，必须用生理盐水作适当的稀释后重测，然后乘以稀释倍数为结果。 2 ．虽有氨基硫脲和镉离子，但仍有轻度褪色现象（每小时小于 5% ），故加热显色冷却后，应及时比色。
血肌酐、尿素氮水平升高的意义 *导读：在肾病检查诊断中，通常肾病患者能看懂的是尿蛋 白及血尿情况。对于肾病检查化验中的肾功能检查指标如血肌酐、血尿素氮、尿尿酸等指标的升降意义不了解。…… 在肾病检查诊断中，通常肾病患者能看懂的是尿蛋白及血尿情况。对于肾病检查化验中的肾功能检查指标如血肌酐、血尿素氮、尿尿酸等指标的升降意义不了解。对于血肌酐和尿素氮指标升高的情况，相对应的患者的肾脏有何问题?以下为您做一详细解答。 血肌酐(Scr)是肌肉内磷酸肌酸经水解产生的。正常成人肌酐产生速度比较稳定，男性每24小时每公斤体重约20毫克，女性约15毫克，肌酐以同样的速度双肾脏清除。血肌酐从肾小球滤过，不以肾脏代谢，肾小管不回吸收，但肾小管可以排泄一部分肌酐，其排泄量与血肌酐浓度成正比，肾近曲小管通过主动转运有机阳离子过程分泌肌酐，一些药物可抑制其分泌，如：甲氰咪呱、三甲氧苄氨嘧啶及丙磺舒。血肌酐多用碱性苦味酸法或生化仪检测，正常值为小于132.6微摩尔/升,有人认为才年人,妊娠妇女及长 期卧床者,因肌容量减少或机体正氮平衡(孕妇)使血肌酐产生减 少血浓度降低,正常什值应小于88.4微摩尔/升。当肾小球滤过 率低于每分钟60毫升时，血肌酐才会升高，用血肌酐来推断肾 小球滤过率，其特异性100%，敏感性60%，也就是说血肌酐升高者肾小球滤过率肯定低于正常;血肌酐画龙点睛常者其肾小球滤
过率可能正常也可能降低。如用血肌酐的倒数(如：884微摩尔/升为10毫克/百毫升其倒数为10毫升/分钟)来估计肾小球滤过 率的话，则因小管的排泄而高估之。 血尿素氮(BUN)是人体蛋白质代谢的终末产物。肝脏是生成尿素 的最主要器官。体内尿素的生成量取决于饮食中蛋白质摄入量、组织蛋白质分解代谢以及肝功能情况。尿素主要经肾脏排出，小部分经皮肤由汗液排出，每24小时由肾排出尿素10～30克。血液中尿素全部从肾小球滤过，正常情况下约30%～40%被肾小管 重吸收;肾小管也可排泌少量尿素，严惩肾功能衰竭时排泌量增加。血中尿素氮的测定虽可反应肾小球队的滤过功能，但肾小球滤过功能必须下降到画龙点睛常的一半以上时，尿素氮才会升高。其正常值2.9～7.5毫摩尔/升，尿素氮水平受诸多因素影响，如感染、高热、脱水、消化道出血、进食伉蛋白餐等因素的影响; 而低蛋白饮食或长时间不能进食或多饮水大量排尿时，尿素氮水平降低。故尿素氮对估计肾小球滤过功能而言即不敏感又不准确。
血清尿素的测定标准操作规程 【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法，了解其意义。 【原理】血清尿素（Urea）是蛋白质的正常代谢产物。它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一。肾性血清尿素含量增加，提示肾小球损伤。是研究药物肾毒性的重要指标之一。 【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴 【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水 【动物】家兔2只 【方法】取家兔2只，1只注射氯化高汞5ml/kg（0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg)，另1只注射等量的生理盐水。48小时后，从家兔耳静脉取血1ml，制取血清，按血清尿素测定方法测定血清尿素含量。 【结果】记录2只家兔血清尿素含量，比较并分析其差别。 附血清尿素(Urea)测定方法 【原理】尿素与二乙酰在酸性反应环境中加热，缩合生成色素原二嗪化合物。因二乙酰不稳定，不宜直接加入，可由化学反应生成。通常由反应系统中二乙酰一肟与强酸作用，产生乙二酰。二乙酰和尿素反应，缩合生成红色的二嗪。根据颜色深浅确定尿素含量的多少。 【试剂】 (1)酸性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml。冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g。溶解后用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中冰箱保存，可稳定6个月。 (2)二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml，溶解后，再用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年。 (3)尿素标准贮存液（100mmol/L）:称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g，溶解于蒸馏水中，并稀释至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内可稳定半年。 (4)尿素标准液应用液(5mmol/L)：取5.0ml贮存液用无氨蒸馏水稀释至100ml. 【操作】按表T4-1进行 混匀后，置沸水中加热12分钟，置冷水中冷却5分钟后，用分光光度计在波长540nm，以空白管调至零点。比色读取标准管及测定管的吸光度。 【计算】 【正常参考值】 2.86~8.20mmol/L 尿素
肾功能化验单—入门 肾功能检测项目很多，如血清肌酐、血清尿素氮、肌酐清除率、尿酸、尿酶和微量白蛋白等。 根据检测结果，临床上一般把肾功能分为四期；（１）正常期检测结果均正常；（２）肾功能不全代偿期肝酐清除率降至正常值的５０％，肌酐和尿素氮正常；（３）失代偿期肌酐清除率常降至正常值的５０％以下，肌酐大于１３２．６微摩尔／升（１．５毫克／分升），尿素氮增高；（４）尿毒症期尿毒氮大于２８．６微摩尔／升（８０毫克／分升）检查肾功能的各项指标，可诊断有无肾脏疾病、疾病的程度以及评估临床治疗效果和预后，并要以此决定下一步治疗时使用药物的剂量以及选择透析、手术等治疗方案。 下面简单介绍临床最常用的几项肾功能检查项目。 （一） 项目：血尿素氮（BUN） 参考值：正常情况：二乙酰－肟显色法 1.8～6.8mmol／L 尿素酶－钠氏显色法 3.2～6.1mmol／L。 临床意义：增高：急慢性肾炎、重症肾盂肾炎、各种原因所致的急慢性肾功能障碍，心衰、休克、烧伤、失水、大量内出血、肾上腺皮质功能减退症、前列腺肥大、慢性尿路梗阻等。 以上是对血尿素氮正常值以及偏高的。 生理：它主要是经肾小球滤过，并随尿液排出体外。当肾实质受损害时，肾小球滤过率降低，血液中血清尿素氮的浓度就会增加。 通过测定尿素氮，可以了解肾小球的滤过功能。 成人的血清尿素氮的正常值为3.2～7.2 mmol/L(9～20mg/dl)。 肾功能轻度受损时，尿素氮检测值可以无变化。当此值高于正常时，说明有效肾单位的60％～70％已受到损害。 因此尿素氮测定不能作为肾病的早期功能测定的指标，但对肾功能衰竭，尤其是尿素症的诊断有特殊的价值。检测值增高的程度与病情的严重程度成正比，所以对判断肾病和疾病的发展趋向有重要的意义。 其他疾病如脱水、水肿、腹水、血循环功能衰竭、尿结石或前列腺增生等引起的尿路梗阻引起尿量显著减少或尿闭时，也可造成血清尿素氮检测值增高。 血尿素氮—肾功能主要指标之一 尿素氮是人体蛋白质代谢的主要终末产物。氨基酸脱氨基产生NH3，和C02，两者在肝脏中合成尿素，每克蛋白质代谢产生尿素0．3g。尿素中氮含量为28／60，几乎达一半。通常肾脏为排泄尿素的主要器官，尿素从肾小球滤过后在各段小管均可重吸收，但肾小管内尿流速越快重吸收越少，也即达到了最大清除率。和血肌酐一样，在肾功能损害早期，血尿素氮可在正常范围。当肾小球滤过率下降到正常的50％以下时，血尿素氮的浓度才迅速升高。正常情况下，血尿素氮与肌酐之比(BUN／Scr)值约为10，高蛋白饮食、高分解代谢状态、缺水、肾缺血、血容量不足及某些急性肾小球肾炎，均可使比值增高，甚至可达20～30；而低蛋白饮食，肝疾病常使比值降低，此时可称为低氮质血症。 项目：血尿素 参考值：正常情况：3.2～7.0mmol／L。 临床意义：升高表示急慢性肾炎、重症肾盂肾炎、各种原因所致的急慢性肾功能障碍，心衰、休克、烧伤、失水、大量内出血、肾上腺皮质功能减退症、前列腺肥大、慢性尿路梗
尿素氮（BUN）试剂盒使用说明 微量法货号：BC1535 规格：100T/96S 产品内容： 标准品：液体1mL×1支，4℃保存。 试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加4mL蒸馏水充分溶解。 试剂二：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。 产品说明： 尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物，在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。在碱性条件下，尿酶水解尿素产生氨，氨与次氯酸反应生成氯胺，再与酚衍生物作用生成绿色吲哚酚，在630nm处有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器： 天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。 操作步骤： 一、样品处理 1.组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL 蒸馏水），匀浆后于25℃，12000rpm离心10min，取上清待测。 2.细胞：按照细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万
个细胞加入1mL蒸馏水），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，12000rpm离心10min，取上清置于冰上待测。 3.血清或其它液体：直接检测。 二、测定操作 空白管标准管测定管样品（μL）20 标准品（μL）20 H2O（μL）20 试剂一（μL）404040 充分混匀，于37℃反应10min 试剂二（mL）707070 试剂三（mL）707070 充分混匀，于37℃显色10min，于微石英比色皿/96孔板，双蒸水调零，测定630nm处吸光值，记为A空白管、A标准管和A测定管 三、计算公式： 1.按样本质量计算： 尿素氮含量（mg/g）=（A测定管-A空白管）/（A标准管-A空白管）×C标准品÷W =0.005×（A测定管-A空白管）/（A标准管-A空白管）÷W 2.按细胞数计算： 尿素氮含量（mg/104cell）=（A测定管-A空白管）/（A标准管-A空白管）×C标准品÷ 细胞数量 =0.005×（A测定管-A空白管）/（A标准管-A空白管）÷细胞