药学及制药工程专业实验
化学化工学院
药学系
药学和制药工程专业实验是药学及相关专业学生的一门专业课程，该实验涉及生理学、生物化学、药物化学、药物分析、药物合成、天然药物化学、药理学、药剂学和药用植物及生药学等专业内容。学生在修完普通化学实验后应修读本课程，可与相关的药学专业课程同时修读。
药学和制药工程专业实验课程注重药学相关操作技能和科研思维的训练，含有适量验证性实验，增加了一些应用性较强的设计性、综合性、研究型实验。在使学生掌握相关领域的基本知识、基本技能和基本操作的基础上，培养其分析、思考能力。专业实验课程注重加强人才培养的适应性，调整学生的知识能力和素质结构，拓宽基础，整合课程，使学生具有独立工作的实践能力，能应用所学的知识、结合实践，解决实际问题，培养学生创新能力。专业实验课程是较高水平的专业综合能力的训练，知识点多，耗时长，难度大，可以更有效的培养学生解决复杂实验问题的综合能力，熟悉药物研究开发的基本流程，有利于拓展同学们的思路，将各科知识灵活运用，充分发挥实验教学的功能，使专业课的实验教学真正起到培养创新能力和提高综合素质的作用。
本实验讲义由徐溢老师负责统编，药学系专业实验的多位任课老师参加了部分讲义的编写工作。
本实验讲义是按照教学大纲要求，结合我院多年来教学改革的经验，将各专业课的实验综合起来单独设课，从全方位考虑制订实验课程框架，参考众多其他院校的药学和制药工程专业实验课程的设置的实验内容基础之上编写而成的。虽然我们投入了很大精力，可能仍然有不足和不妥之处，还需要在实践中不断改进、完善和提高。请各位不吝指教。
药学系
2011年7月
学生实验守则.............................................................................................................................. - 1 -实验室安全守则.......................................................................................................................... - 2 -实验一药理实验的基本技能操作.......................................................................................... - 3 -实验二家兔的静脉注射、采血及解剖 (6)
实验三腓肠肌与坐骨神经—腓肠肌标本的制备 (8)
实验四刺激强度与骨骼肌收缩反应的关系 (10)
实验五细胞的溶解——溶血作用 (12)
实验六血型鉴定与配血实验 (14)
实验七豨签草对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 (17)
实验八枸椽酸钠的抗凝血作用 (17)
实验九人体动脉血压的测定及其影响因素 (19)
实验十阿斯匹林的制备 (22)
实验十一安息香的辅酶合成 (23)
实验十二亚丙基双甲酮 (25)
实验十三药物的杂质检查 (26)
实验十四阿司匹林片的鉴别及含量测定....................................................错误!未定义书签。实验十五常见中药生药的性状观察............................................................错误!未定义书签。实验十六氨基酸的纸上层析法....................................................................错误!未定义书签。实验十七3，5一二硝基水扬酸(DNS)法测定还原糖 ................................错误!未定义书签。实验十八肉桂酸的制备................................................................................错误!未定义书签。实验十九贝诺酯（扑炎痛）的制备............................................................错误!未定义书签。实验二十8-羟基喹啉制备 ............................................................................错误!未定义书签。实验二十一2-叔丁基对苯二酚——食品抗氧剂TBHQ的合成................错误!未定义书签。实验二十二硼氢化钠还原法合成二苯甲醇................................................错误!未定义书签。实验二十三相转移反应催化合成苦杏仁酸................................................错误!未定义书签。实验二十四苦杏仁酸的拆分........................................................................错误!未定义书签。实验二十五维生素B1片的分析 .................................................................错误!未定义书签。实验二十六药房制剂的快速检验................................................................错误!未定义书签。实验二十七马来酸氯苯那敏片重量差异检查及含量均匀度检查 ............错误!未定义书签。实验二十八维生素C片的含量测定 ...........................................................错误!未定义书签。实验二十九诺氟沙星胶囊的含量测定........................................................错误!未定义书签。实验三十葡萄糖酸钙口服溶液的含量测定............................................错误!未定义书签。实验三十一安乃近片的含量测定................................................................错误!未定义书签。实验三十二给药剂量对药物作用的影响....................................................错误!未定义书签。实验三十三肝脏功能状态对药物作用的影响............................................错误!未定义书签。实验三十四拟胆碱药和抗胆碱药对家兔瞳孔的影响................................错误!未定义书签。实验三十五巴比妥类药物的催眠作用时间和强度的比较........................错误!未定义书签。实验三十六药物的镇痛作用——热板法....................................................错误!未定义书签。实验三十七硫酸镁、生大黄对小鼠肠管推进性作用的影响....................错误!未定义书签。实验三十八香烟对小白鼠的毒性................................................................错误!未定义书签。实验三十九不同给药途径对药物作用的影响............................................错误!未定义书签。实验四十中药化学成份的预试验............................................................错误!未定义书签。
实验四十一聚丙烯酰胺凝胶电泳实验........................................................错误!未定义书签。实验四十二可待因的镇咳作用....................................................................错误!未定义书签。实验四十三芦丁的提取、分离与鉴定........................................................错误!未定义书签。实验四十四从三棵针中提取、分离小檗碱与小檗胺................................错误!未定义书签。实验四十五柱层析—分光光度法测定益母草中总黄酮含量....................错误!未定义书签。实验四十六维生素K3的制备......................................................................错误!未定义书签。实验四十七抗生素的定性鉴定....................................................................错误!未定义书签。实验四十八玉米抗氧化物的提取................................................................错误!未定义书签。实验四十九绿豆芽中氨基酸的提取及含量测定........................................错误!未定义书签。实验五十大黄中蒽醌类物质的提取分离................................................错误!未定义书签。实验五十一聚酰胺薄膜层析法分离核苷....................................................错误!未定义书签。实验五十二大黄素甲醚和大黄酚的分离....................................................错误!未定义书签。实验五十三乙酰苯胺的制备........................................................................错误!未定义书签。实验五十四苯佐卡因的制备........................................................................错误!未定义书签。实验五十五常用安眠镇静类药物和鉴别....................................................错误!未定义书签。实验五十六气相色谱法测定酊剂中乙醇含量............................................错误!未定义书签。实验五十七血浆中苯妥英浓度的高效液相色谱法测定............................错误!未定义书签。实验五十八三苯甲基正离子试验................................................................错误!未定义书签。实验五十九环乙酮的制备............................................................................错误!未定义书签。实验六十传出神经药对蛙腹直肌的作用................................................错误!未定义书签。实验六十一吗啡的镇痛作用........................................................................错误!未定义书签。实验六十二玉米抗邻苯三酚自氧化性能的测定........................................错误!未定义书签。实验六十三有机磷药物的中毒及其解救....................................................错误!未定义书签。实验六十四糖皮质激素对化学刺激性结膜炎的防治作用和对毛细血管通透性的影响错误!未定义书签。
实验六十五药物的安全性试验....................................................................错误!未定义书签。实验六十六液体药剂的制备........................................................................错误!未定义书签。实验六十七注射剂的制备............................................................................错误!未定义书签。实验六十八散剂、颗粒剂的制备................................................................错误!未定义书签。实验六十九片剂的制备及片剂溶出度和溶出速度的测定........................错误!未定义书签。实验七十滴丸的制备................................................................................错误!未定义书签。实验七十一包合物的制备............................................................................错误!未定义书签。实验七十二软膏剂的制备............................................................................错误!未定义书签。实验七十三水杨酸壳聚糖纳米粒的制备....................................................错误!未定义书签。实验七十四显微镜的使用和显微化学鉴别................................................错误!未定义书签。实验七十五一般显微实验技术....................................................................错误!未定义书签。实验七十六中药材灰分、水分、浸出物测定及杂质检查法....................错误!未定义书签。实验七十七根及根茎类中药的鉴别............................................................错误!未定义书签。实验七十八茎木类及皮类中药的鉴别........................................................错误!未定义书签。实验七十九花、叶、果实、种子类中药的鉴别........................................错误!未定义书签。实验八十未知中药粉末的鉴定................................................................错误!未定义书签。实验八十一大黄酸的制备及评价................................................................错误!未定义书签。实验八十二黄连中小檗碱的提取分离及鉴定............................................错误!未定义书签。实验八十三药物的抗惊厥作用....................................................................错误!未定义书签。
实验八十四穿心莲内酯的提取、分离、鉴定............................................错误!未定义书签。附录Ⅰ实验室常用缓冲液pH范围.............................................................错误!未定义书签。附录Ⅱ元素周期表........................................................................................错误!未定义书签。附录Ⅲ常用酸碱浓度....................................................................................错误!未定义书签。附录四pH通用显示控制器使用说明书......................................................错误!未定义书签。附录五单冲压片机的调试与使用................................................................错误!未定义书签。附录六片剂四用仪的调试与使用................................................................错误!未定义书签。附录七包衣机的调试与使用........................................................................错误!未定义书签。附录八溶出试验仪的调试与使用................................................................错误!未定义书签。附录九显微镜的基本知识............................................................................错误!未定义书签。
1．学生必须按规定的时间参加实验课，不得迟到早退或无故缺课。
2．实验前必须认真预习实验内容，明确实验目的、原理、方法和步骤，准备接受指导教师提问没有预习或提问不合格者，须重新预习，方可进行实验。
3．学生进入实验室必须衣着整洁，保持安静，遵守实验室各项规章制度，严禁高声喧哗、吸烟、随地吐痰或吃零食，不得随意动用与本实验无关的仪器。
4．实验准备就绪后，须经指导教师检查同意，方可进行实验。实验中应严格遵守仪器设备操作规程，认真观察和分析现象，如实记录实验数据，独立分析实验结果，认真完成实验报告，不得抄袭他人实验结果。
5．实验中要爱护实验仪器设备，注意安全，节约水、电、药品、试剂、元件等消耗材料，凡违反操作规程或不听从指挥而造成事故、损坏仪器设备者，必须写出书面检查，并按学校有关规定赔偿损失。
6．实验中若发生仪器故障或其他事故，应立即切断相关电源、水源等，停止操作，保持现场，报告指导教师，待查明原因或排除故障后，方可继续进行实验。
7．实验完毕后，应及时切断电源，关好水、气，将所用仪器设备、工具等进行清理和归还，经指导教师同意后，方可离开实验室。
8．应按实验要求及时、认真完成实验报告。
1、实验室工作人员要把实验室安全工作列为一项重要的经常性工作。确保实验室安全运行，
牢固树立"安全第一"的思想。
2、在实验室工作的任何人员，都必须自觉遵守安全制度，确保进行实验的学生和有关人员
的人身安全。对无视安全规定，可能导致人身安全或国家财产的行为，要及时阻止。对不听阻止者，实验室人员有权停止其实验，并向实验室主任报告。
3、实验室工作人员对实验室的固定资产以及水、电、气供应管道极其附属设施的情况要熟
悉，要做到责任到人，妥善管理，严禁超负荷运转。对稀贵金属必须实行双人双锁，领用、回收、消耗、结算等要严格控制。对剧毒品必须执行双人、双锁保管。使用钢瓶气体要遵守安全规定，严禁混用，回避危险品、火种，不得沾污油脂，严禁在烈日下和高温下操作。空调设备和电热设备（包括电炉）的使用按校电管科规定进行使用。下班时必须切断电源、气源、水源、火源，关好门窗等。
4、实验室要保持安静、整洁的环境和良好的工作秩序，不得打闹戏耍，不准闲杂人员随意
出入。外来参观人员进入实验室要经实验室主任或上级领导的同意，由专人陪同，参观时不要妨碍实验室工作的正常进行。
5、未经批准，不得随意动用、拆改大型精密仪器设备及其附件，任何人不得擅自拿走实验
室的工具、仪器和其它器材物资。除连续运行实验外，未经批准任何人不得在实验室过夜。
6、消防器材和设施必须按学校安全科规定配置并保持在随时可以使用的良好工作状态，安
全员和有关人员应会正确使用。
7、对违反上述规定造成事故者，视其情节给予批评教育、行政处分或经济处罚。情节恶劣、
后果严重者，要追究责任。
实验一药理实验的基本技能操作
一、实验目的
1、熟悉实验动物的捉持和辨认方
法。
2、掌握实验动物的给药方法。
二、实验材料
动物：蛙或蟾蜍小白鼠3～4只
试剂：生理盐水氯化钾溶液福
尔马林溶液
器材：注射器针头鼠笼天平
灌胃针头小鼠尾静脉注射用固定筒
兔固定箱兔开口器磅称导尿管
三、实验内容
（一）蛙和蟾蜍的捉持和给药方法
1、捉持法通常以左手握持，用食指和中指夹住左前肢，用拇指压住右前肢，将下肢拉直，用无名指及小指夹住。（图1-2）
2、淋巴囊内注射法蛙及蟾蜍皮下有多个淋巴囊（图1-1），注入药物后易于吸收，通常将药物注射于胸、腹或淋巴囊。蛙及蟾蜍的皮肤很薄，缺乏弹性，注射后药物易自针服漏出，故作胸部淋巴囊注射时应将针头插入口腔，由口腔底部穿过下颌肌层而达胸部皮下（图1-2）；作股淋巴囊注射时，应由小腿皮肤刺入，通过膝关节而达大腿部下。这样才可避免药液外漏。
注入药液量一般为0.25~0.5ml。试以生理
盐水作胸淋巴囊和股淋巴囊注射练习。
（二）小白鼠的捉持和给药方法
1、捉持法以右手提鼠尾，将小白鼠
放于粗糙面上，将鼠尾轻轻向后后拉，这
样可使小白鼠固定在粗糙面上。以左手的
拇指及食指捏其双耳及头部皮肤，无名
指、小指和掌心夹其背部皮肤和尾部，
便可将小白鼠完全固定。
2、灌胃以左手捉持小白鼠，使腹
部朝上，颈部拉直。右手持配有灌胃针
头（以16号输血针头磨去针头后制成）
的注射器，自口角插入口腔，再从舌面
紧沿上腭进入食道（图1-3）。如手法正
确，不难成功。若遇阻力，应退出后再
图1-1 蛙的皮下淋巴囊
图1-2 蛙的胸淋巴囊注射法
图1-3 小白鼠的灌胃法
图1-4 小白鼠的皮下注射法
插，不能用强力猛插，以免剌破食道或误入气
管，使动物致死。灌胃的药液量一般为
0.1~0.3ml/10g 。试以生理盐水作灌胃练习。
3、皮下注射 可由两人合作。一人左手
抓住小白鼠头部皮肤，右手拉住鼠尾。另一人
左手捏起背部皮肤，右手持注射器（选用5号
或6号针头），将针头剌入背部皮下（图1-4）。
如由一人操作，可将小白鼠置于铁丝网上，左
手抓住小白鼠，以拇指和食指捏起背部皮肤，左
手持注射器剌入背部皮下小白鼠皮下注射的药
液量一般为0.05~0.20ml/10g 。试以生理盐水进
行练习。
4、肌内注射 可由两人合作，一人左手抓
住小白鼠头部皮肤，右手拉拄鼠尾。另一人持注
射器（选用4或5号针头）将针头剌入后肢外侧
部肌肉，如一人单独操作，以左手拇指和食指抓
住小白鼠头部皮肤，小指、无名指和掌部夹住鼠
尾及一侧后肢，右手持住注射器给药。注射量每
腿不宜超过0.1ml 。试以生理盐水作肌内注射练
习。
5、腹腔注射 以左手抓小白鼠（方法同灌胃），右手持注射器（选用5或6号针头），取
30角将针头从下腹部向头端刺入腹腔（图1-5）。
进针部位不宜太浅，刺入不能太深，以免伤及内脏。注射量一般为0.1~0.3ml/10g 。试以生理盐水作腹腔注射练习。
6、尾静脉注射 将小白鼠置特制的固定筒内或倒置的大漏斗（或乳钵）下，使鼠尾露出在外。用酒精或二甲苯棉球涂擦尾部，或将鼠尾在50℃热水中浸泡半分钟，使血管扩张。用左手拉住尾尖，选择一条扩张最明显的尾静脉，右手持注射器（图1-6）。如推注时有阻力，且局部变白，表明针头没有刺入血管，应拔针后重新穿刺。穿剌血管时宜从鼠尾末端开始，以便失败后可以第一次穿刺点的上方重新进行。小白鼠静脉注射的药液量一般为0.1~0.2ml/10g 。试以生理盐水作尾静脉注射练习。
（三）家兔的捉持和给药方法
见实验二
（四）大白鼠的捉持和给药方法
1、捉持法 将大白鼠放于粗糙面上，用右手拉其尾部，左手的拇指和食指捉其头部，其余三手指夹住背腹部，对于身体特别大或凶狠要咬人的大白鼠，可先以布巾包囊其身（露出口、鼻），然后进行操作。
2、给药法 大白鼠的各种药方法基本上同小白鼠，唯所用的给药工具可稍大，给药量也可稍多。
（五）豚鼠的捉持和给药方法
1、捉持法 豚鼠性温和，不咬人，用手握住身体即可。
2、皮下、肌内及腹腔注射 方法基本上同小白鼠，给药量可稍多。
3、静脉注射 可选用后脚掌外侧的静脉或外颈静脉进行注射。作后脚掌外侧静脉注射时，由一人捉豚鼠并固定一条后腿，另一人剪去注射部位的毛，用酒精棉球涂擦后脚掌外侧图1-5 小白鼠的腹腔注射法 图1-6 小白鼠的尾静脉注射法 图1-7 家兔的灌胃法
的皮肤使血管显露，再将连在注射器上的小儿头皮静脉输液针头刺入血管。作外颈静脉注射时需先剪去一点皮肤，使血管暴露，然后将连在注射器上的头皮静脉输液针头刺入。豚鼠的静脉管壁比较脆弱，操作时需特别小心。
（六）猫的给药方法
皮下、肌内及腹腔注射方法基本上同家兔。给性情暴燥的猫注射麻醉药时，可先将猫装在布袋内，然后逐渐收缩布袋，将猫推到袋角，按住头部和躯体，隔着布层作腹腔内注射。
（七）狗的给药方法
对于未经驯服的狗，需先以特制铁钳夹住头颈，将其按倒，以绳索捆扎狗嘴，然后才可作给药操作。但是对于已经驯养，用于慢性实验的狗，不宜用铁钳夹头。否则狗的性情将由此变坏而不听指挥。
灌胃，皮下，肌内和腹腔注射方法基本上同家兔，用具和给药量应相应增大。
静脉注射常用的注射部位是后肢小隐静脉，该血管由外踝前侧走向外上侧。也可选用前肢的皮下头静脉，该血管在脚瓜上方背侧的正前位。注射时先局部剪毛，以酒精涂擦皮肤，一人捏紧注射肢体的上端，阻断血液回流，使静脉充盈，以便看清其走向。另一人持注射器进行静脉穿刺。将药液注入。
（八）狗、猫、兔、豚鼠等动物的处死
1.空气栓塞法：向动物静脉内注入一定量的空气，使之发生栓塞而死。当空气注入静脉后，可在右心随着心脏的跳动使空气与血液相混致血液成泡沫状，随血液循环到全身。如进入肺动脉，可阻梗其分支，进入心脏冠状动脉，造成冠状动脉阻塞，发生严重的血液循环障碍，动物很快致死。一般兔、猫等静脉内注入20-40ml空气即可致死。每条狗由前肢或后肢皮下静脉注入80～150ml空气，可很快致死。
2.急性失血法：先使动物轻度麻醉，如狗可按每公斤体重静脉注射硫喷妥纳20-30mg，动物即很快入睡。暴露股三角区，用锋利的杀狗刀在股三角区作一个约10cm的横切口，把股动、静脉全切断，立即喷出血液。用一块湿纱布不断擦去股动脉切周围处的血液和血凝块，同时不断的用自来水冲洗流血，使股动脉切口处保持畅通，动物3～5分钟内即可致死。采用此种方法，动物十分安静，对脏器无损伤，对活杀采集病理切片标本是一种较好的方法。
3.破坏延脑法：如果急性实验后，脑已暴露，可用器具将延髓破坏，导致动物死亡。对家兔也可用木锤用力锤击其后脑部，损坏延脑，造成死亡。
4.开放性气胸法：将动物开胸，造成开放性气胸。这时胸膜腔的压力与大气压力相等，肺脏因受大气压缩发生肺萎陷，纵隔摆动，动物窒息而死。
5..化学药物致死法：静脉内注入一定量的氯化钾溶液，使动物心肌失去收缩能力，心脏急性扩张，致心脏驰缓性停跳而死亡。每条成年兔由兔耳缘静脉注入10％氯化钾溶液5～10ml；每条成年狗由狗前肢或后肢下静脉注入20～30ml。即可致死。
6. 静脉内注入一定量的福尔马林溶液，使血液内蛋白凝固，动物由于全身血液循环严重障碍和缺氧而死。每条成年狗静脉注入10%福尔马林溶液20ml即可致死。也可将福尔马林与酒精按一定比例配成动物致死液应用。
皮下注射士的年致死：豚鼠剂量为 3.0-4.4mg/kg体重，兔0.5-0.5mg/kg体重，狗0.3-0.42mg/kg体重，猫1.0-2.0mg/kg体重。
经口或注年DDT致死：（LD50）：豚鼠：经口0.4g/kg体重，皮下0.9g/kg体重。兔：经口0.3g/kg体重，皮下0.25g/kg体重；静脉0.043g/kg体重。狗：静脉0.067g/kg体重。
参考文献：
1.曾南. 药理与中药药理实验.北京.科学出版社,2008.
2.姚泰.生理学.人民卫生出版社,第6版,2004.
实验二 家兔的静脉注射、采血及解剖
一、实验目的
熟悉家兔的耳缘静脉注射、耳缘静脉采血方法，了解家兔的解剖操作，掌握实验动物脏器系数计算方法。
二、实验材料
动物：家兔
器材：天平、注射器、手术刀、手术剪、手术台、盘子、细麻绳、烧杯
试剂：酒精棉球、 1％戊巴比妥钠溶液、生理盐水
三、实验内容及步骤
1、捉持法 用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臂部，使兔呈坐位姿势。
2、灌胃 需由两人合作进行。一人取坐位，用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头，并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时易误入气管，区别之法主要在于谨慎观察插观察插管后动物的反应。插入气管时可引起剧烈挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。在判明导尿管确实插在食道内以后，取注射器接在导尿管上，将药液推入。再推注少量空气，使导尿管中不致有药液残留（图1-7），慢慢抽出导尿管，取出开口器。家兔灌胃给药时的药液量一般为5－20ml/kg 。试以生理盐水进行练习。
3、皮下、肌肉及腹腔注射 给药方法基本上同小白鼠，唯针头可稍大（选用6号或7号针头），给药量可稍多（皮下与肌内0.5-1.0ml/kg ，腹腔1.0-5.0ml/kg ）。
4、静脉注射 将家兔置固定箱内，拔去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持住注射器（选用6号针头），从近耳尖处将针头刺入血管。如见到针头确在血管内，即以左手使针头和兔耳固定，将药液推入（图2-1，图2-2）。如推注时有阻力，局部发生肿胀，表明针头不在血管内，应立即拔针重新穿刺。家兔的静脉注射量一般药液为0.2-2.0ml/kg ，等渗药液可达10ml/kg 。试以生理盐水进行练习。
图2-2兔耳的静脉注射法
图2-1 家兔耳壳的血管分布
5、耳缘静脉采血：操作同注射给药法，穿刺成功后即可抽血。此外，针头可不连接注射器，直接让血液滴在有抗凝剂的容器内。（草酸盐抗凝剂的配制：草酸钾0.8g加草酸铵1.2g，再以蒸馏水加至100ml）。每1ml血液可用0.1ml上述溶液。
6、动物处死：见实验一。
7、家兔的解剖及脏器系数的计算：将处死的家兔，仰躺固定于兔台上，用清水沿腹中线两侧向外湿润兔毛，用手术剪剪开皮肤，依次分离肌肉及腹膜，打开胸腔和腹腔，不得损坏内脏器官。分离出心、肺、脾、肾、肾上腺、卵巢、子宫、睾丸、前列腺、分别称重各器官，计算脏器系数：
脏器系数＝器官重/活体重*100％
实验三腓肠肌与坐骨神经—腓肠肌标本的制备
一、目的要求
1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。
2、学习并掌握蛙类排肠肌与坐骨神经—腓肠肌标本的制备方法。
二、动物与器材
动物：蛙或蟾蜍
器材：常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针和玻璃分针）、蜡盘、蛙板（木质或硬泡沫塑料）、玻璃板、固定针、锌铜弓、培养皿或不锈钢盘、污物缸、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。
三、方法与步骤
1、蛙或蟾蜍的单毁髓与双毁髓
一手握住蛙或蟾蜍（或用纱布包裹蟾蜍躯干部），背部向上。用拇指压住蛙或蟾蜍的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低垂；另一手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后触划，当触及到两耳中间的凹陷处（此处与两眼的连线成等边三角形）时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由凹陷处垂直刺入，即可进入枕骨大孔。然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以捣毁脑组织。如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。此时的动物为单毁髓动物。再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉，此时的动物为双毁髓动物。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。操作过程中应注意使蟾蜍头部向外侧（不要挤压耳后腺），防止耳后腺分泌物射入实验者眼内（如被射入，则需立即用生理盐水冲洗眼睛）。
2、坐骨神经—腓肠肌标本制备
（1）剥制后肢标本
如果动物个体较大，可将双毁髓的动物腹面向上放入蜡盘中。一手持手术镊轻轻提起耻骨联合上方的皮肤，另一手用手术剪横向剪开皮肤，再剪开体壁肌肉（开口要大）。然后用手术镊轻轻提起内脏，自耻骨部剪断（勿损伤脊神经）。一手轻轻托起蟾蜍后肢，使头部及内脏向下，看清支配后肢的脊神经发出部位，于其前方用金冠剪横向剪断脊柱。然后再沿脊柱两侧到横向切口剪断体壁，一手用蘸有任氏液的
拇指和食指捏住断开的脊柱后端，另一手向后撕剥
皮肤并除去断开脊柱以上部位肢体及内脏。如果下
肢撕皮困难，可在撕皮至股部时，用手勾住双股中
间后再行撕剥（图3-1）。将剥干净的后肢放入任氏
液中备用。清洗手及用过的手术器械。
如果动物个体较小，可将其背面向上放入蜡盘
中。用手术镊轻轻提起两前肢之间的背部皮肤，并
图3-1 剥去后肢皮肤的方法
用手术剪横向剪开皮肤，用金冠剪剪断脊柱。然后
再用手术镊提起断开的脊柱后端，用金冠剪沿着脊
柱两侧剪开体壁并剥皮（方法同上）。
注意：操作过程中不可将剥皮后的标本同皮肤、
内脏等弃物放在一起。
（2）分离两后肢
将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端
在左侧，用左手拇指和食指固定标本的股部两侧肌肉，
右手持手术刀，于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨
联合。然后用手托起标本，用金冠剪剪开两后肢相连的
肌肉组织，并纵向剪开脊柱（尾柱骨留在一侧），使两后
肢完全分离。将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一
只放入任氏液中备用。
（3）分离坐骨神经
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底向上，用固定针将标本固定在玻璃板下方的蛙板（木板或硬泡沫塑料板）上。用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经（图3-2）。股部沿腓肠肌正前方的股二头股和半膜肌之间的肌缝，找出坐骨神经。坐骨神经基部（即与脊神经相接的部位），背部有一梨状股盖住神经，用玻璃分针轻轻挑起肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。剪断（或用玻璃分针扯断）梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经。再用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的神经分支，将坐骨神经分离至腘窝处。取下脊柱端的固定针，保留神经发出部位的一小块脊柱骨，用金冠剪剪去其余部分脊柱骨及肌肉。再用手术镊轻轻提起连有神经的脊柱骨片，将神经移开股骨。
（4）游离腓肠肌
一手捏住趾端，另一手用手术镊（尖头镊）在腓肠肌跟腱下面穿线，并用结线扎紧。提起结线，游离腓肠肌。
（5）分离股骨头或胫腓骨头 如果所用动物个体小，可分离股骨头。方法是：一手
捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，再用金冠剪自
膝关节向前刮干净股骨上的肌肉，保留1cm 股骨头并剪断
股骨。提起腓肠肌的扎线，剪去膝关节下部的后肢，仅保
留腓肠肌与股骨的联系。
如果所用动物个体大，可分离胫腓骨头。此方法简便
而易于操作。即在分离出腓肠肌的基础上，移开腓肠肌，
用金冠剪剪去胫腓骨上的肌肉，自膝关节以下保留1 cm
长的胫腓骨并剪断后肢，然后自膝关节剪断股骨。
制备完整的坐骨神经—腓肠肌标本应包括：连有坐骨
神经的脊柱骨、坐骨神经、腓肠肌、股骨头或胫腓骨头四
部分。（图3-3）
（6）检验标本
用手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开玻璃
板。再用经任氏液蘸湿的锌铜弓，将其两极接触神经，如
排肠肌发生迅速收缩，则表示标本机能正常。提起腓肠肌
上的结扎线，不使神经受到牵拉，轻轻将标本放入任氏液
中保存。稳定15-20min 后即可进行实验。此标本可以用
于神经干兴奋的传导、神经—肌肉接点的传递以及骨骼肌的收缩等实验研究。
注意：制备标本过程中需经常用任氏液湿润标本。
3、骨骼肌标本制备
（1）取蛙或蟾蜍双毁髓（方法同1）
（2）用手术剪环切股部皮肤并将后肢剥皮，剪断膝关节以上的股骨。在腓肠肌肌腱上穿线并结扎，游离腓肠肌（方法同前）。剪去胫腓骨上附着的肌肉后，自膝关节以下1cm 处剪断肢骨。完整的腓肠肌标本应包括腓肠肌、胫腓骨头（如果动物个体小，可分离股骨头代替胫腓骨）。
三、思考题
1、剥去皮肤的后肢能用自来水冲洗吗？为什么？
2、金属器械碰压或损伤神经与腓肠肌，可能引起哪些不良后果？
3、如何保持标本的机能正常？
四、创新与探索
1、你认为该标本的制作方法有哪些需要改进的地方？请说出你的想法。
2、试想该标本可以进行哪些实验研究？试设计实验内容。
3、试设计一下新的、更简便的制作坐骨神经-腓肠肌标本的方法。
4、试自行设计制作较长神经干的方法。
附
刺激的极性法则
图3-2 分离坐骨神经法 图3-3 蛙坐骨神经－腓肠肌标本
使用直流电刺激可兴奋细胞，之所以能使细胞产生兴奋，从根本上讲是电刺激改变了细胞原来膜内外之间的电位差。细胞的静息膜电位为外正内负，如果刺激使膜电位差值减小（去极化），细胞则兴奋；如果使膜电位差值增大（超极化），细胞则兴奋性降低（抑制）。因此在细胞膜外使用直流电刺激细胞，通电时兴奋只发生在负极，正极的兴奋性下降；在持续通电期间不形成刺激；断电时产生反向电流，兴奋只发生在正极；通电的刺激强度大于断电。
刺激神经干最简单的方法就是使用锌铜弓。锌铜弓在溶液中沾湿以后，锌的表面电离出正离子，里面形成负离子；而铜的表面电离出负离子，里面形成正离子。当锌铜弓接触活组织时，电流便沿着锌—活组织—铜的方向流动而产生刺激效应。所以锌相当于正极，而铜相当于负极发挥刺激作用。当断开时，则发生相反的效应。使用锌铜弓就可以在剥离的蟾蜍坐骨神经干（也可在在体的蟾蜍神经干）上进行这一实验。
方法步骤如下：
1、在坐骨神经腓肠标本的神经干中间部位用干棉线结扎，以阻断其传导兴奋的能力。
2、用锌铜弓跨越结扎线结刺激坐骨神经干。使锌极在腓肠肌一端刺激，观察腓肠肌收缩发生在通电（接触神经干）时还是断电（离开神经干）时。
3、调转锌铜弓的极性，使铜极在腓肠一端刺激，观察腓肠收缩发生在通电时还是断电时。注意比较实验步骤2和3引起腓肠肌收缩的强度是否一样，哪个收缩强度比较大？
4、可以多个同学手拉着手串联起来，第一个同学用锌铜弓的铜极接触结扎结一端的神经干，最后一同学拿另一只锌铜弓用锌极接触扎线结另一端的神经干，即使中间有5个以上同学拉手串联起来，也能得到良好的实验效果。
5、解释各项实验结果。
注意：
1、用锌铜弓刺激时，一定要使神经干悬定，且勿接触其他物体。
2、如果神经干结扎不好，通电和断电时都会引起腓肠肌收缩，需重新结扎。
参考文献：
1.曾南. 药理与中药药理实验.北京.科学出版社,2008.
实验四刺激强度与骨骼肌收缩反应的关系
一、目的要求
1、学习肌肉实验的电刺激方法及肌肉收缩的记录方法。
2、观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。
二、基本原理
腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大。可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激强度。
三、实验材料
动物：蟾蜍（或蛙）的腓肠肌标本、
器材：常用手术器械、计算机采集系统、张力传感器（100g）、双针形露丝刺激电极、支架、双凹夹、肌槽、不锈钢盘或培养皿、滴管、任氏液、橡皮泥、棉线。
四、方法与步骤
1、实验仪器用品的准备
打开计算机采集系统，连接张力传感器（100g）与刺激输出。将标本的骨头固定在肌槽的骨头固定孔内，腓肠肌肌腱上的扎线与张力传感器的应变梁相连，双针形刺激电极密切接触近膝关节处的腓肠肌，电极接头与刺激输出线接通，方法见图4-1。调节好扎线的张力，不可过松或过紧，以使肌肉自然拉平为宜（保证肌肉一旦收缩，即可牵动张力传感器的应变梁）。
2、计算机采集系统的准备
开通与张力传感器相连的通道，选择张力信号输入，然后启动波形显示图标，此时显示通道中出现扫描线。调节刺激装置的设置，将延时、波宽及刺激强度调至最小，选择单刺激
方式刺激。启动刺激图标，调节扫描基线接近刺激标记线后即可进行实验。
3、实验观察
（1）启动刺激图标，观察肌肉收缩反应。如果肌肉无收缩反应，则适当增加刺激强度，其他刺激参数保持不变。间隔少许时间，同法进行第二次刺激，直到出现肌肉的最小收缩。测量收缩幅度并记下刺激强度，此时的刺激强度为阈强度。
（2）同法逐渐增加刺激强度，观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。
（3）当刺激强度达到某一数值后，肌肉收缩幅度不再随刺激强度的增加而升高。记录3~4次同等高度的收缩曲线和刺激强度（图4-2）。
（4）将实验结果填入表4-1。 表4-1 刺激强度与收缩反应的关系
实验次数 刺激强度/mV 收缩幅度/mm
五、思考题
1、如何保持标本在实验过程中机能稳定？
2、何为标本的最适刺激强度？
3、你所制作的标本兴奋性如何？其指标是什么？
4、同一标本的阈刺激强度与最适刺激强度是否会发生变化？为什么？
六、创新与探索
1、试设计一个新的实验方法，观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。
2、试设计不同实验条件，观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。
3、试设计实验，观察同等刺激强度下波宽对肌肉收缩反应的影响。
参考文献：
1.曾南. 药理与中药药理实验.北京.科学出版社,2008.
2.姚泰.生理学.人民卫生出版社,第6版,2004.
图4-1 刺激与反应实验装置 图4-2 蟾蜍腓肠肌刺激强度与骨骼肌收缩反应的关系
3.解景田,赵静.生理学实验指导.高等教育出版社,第2版,2002.
实验五细胞的溶解——溶血作用
一、目的要求
1、学习引起红细胞溶解的各种实验方法。
2、观察红细胞的溶血现象。
二、基本原理
红细胞在高渗氯化钠溶液中，会失去水分发生皱缩；在低渗氯化钠溶液中，会因过多水分进入红细胞而膨胀，甚至破裂，使血红蛋白释出，此即红细胞溶解。红细胞对低渗溶液具有不同的抵抗力，这种抵抗力与红细胞表面积/体积比值有关，也即红细胞有不同的渗透脆性，表现积/体积比值小者抵抗力小（渗透脆性大）；反之，抵抗力大（渗透脆性小）。
各种有机溶剂、酸、碱等都会使红细胞膜发生溶解或破坏，血红蛋白释出，此即红细胞的化学性溶血。
发生溶血后，残留的红细胞膜碎片被称为“血影”。
三、实验材料
动物：家免
器材：离心机、5ml试管（12支）、试管架、吸耳球、2ml吸管、注射器（2ml或5ml）、针头（6号或6.5号）、滴管、
试剂：0.9%氯化钠溶液、0.1mol/L盐酸溶液、0.1mol/L氢氧化钠溶液、乙醚或氯仿、3.8%柠檬酸钠溶液、75%酒精棉球、171mmol/L氯化钠溶液。
四、方法与步骤
方法1：渗透性溶血——红细胞渗透脆性的测定
（1）配制不同浓度的低渗氯化钠溶液取12支试管，分别按表4—1加入171mmol/L 氯化钠溶液和蒸馏水。
头滴入各管中，每管一滴，轻轻摇匀后于室温下静置2h后观察各试管之溶血情况。也可用
生理盐水配制5%红细胞混悬液代替静脉血进行此步实验。5%红细胞混悬液制备方法见本实验方法2。
（3）结果判断从高浓度管开始观察：
不溶血：上层浅黄、透明，下层红色、不透明；
开始溶血：上层红色、透明，下层红色、浑浊而不透明；
完全溶血：全部液体变红且透明。
方法2：化学性溶血
(1) 5%红细胞混悬液制备取兔血2ml，加入盛有3.8%柠檬酸钠溶液0.2ml的离心管中,
充分混合,放入离心机中,按3000r/min,离心5min.取出后,弃去上清液,加入生理盐水,混合后再离心,然后再弃去上清液.同法重复一次,即得洗涤之红细胞.用生理盐水配成5%红细胞混悬液.
(2) 取试管4支,各盛5%兔红细胞混悬液2ml,分别加入下列溶液,并观察红细胞在各试管
中的溶解现象:
1)0.9%氯化钠溶液1ml
2)乙醚或氯仿0.2ml
3)0.1mol/L盐酸溶液1ml
4)0.1mol/L氢氧化钠溶液1ml
(3) 半小时后,观察并记录各试管溶液溶血情况,注意颜色与透明度.
注意事项
1、试管编号排列顺序切勿弄错、颠倒。
2、在进行渗透性溶血—红细胞渗透脆性的测定时，要求所吸氯化钠溶液和蒸馏水的量要准确、无误。
3、加入血液后，轻轻摇匀溶液，切勿剧烈震荡。
4.应在光线明亮处观察结果，必要时吸取试管底部悬液一滴，在显微镜下观察。
五、思考题
1、为什么在获取活细胞进行细胞培养的科研实验或在医学临床上需要各种生理盐水溶液？
2、产生渗透性溶血和化学性溶血的机制有什么不同？
3、如何判定红细胞最大脆性和最小脆性？
4、红细胞温育渗透脆性实验的基本原理是什么？有什么意义？
[附]
171mmol/L氯化钠溶液的制备：
氯化钠 1.0g
蒸馏水1000ml
参考文献
1.姚泰.生理学.人民卫生出版社,第6版,2004.
2.解景田,赵静.生理学实验指导.高等教育出版社,第2版,2002.
实验六血型鉴定与配血实验
一、目的要求
1、学习鉴别血型的基本方法。
2、观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型和Rh血型鉴定的原理。
3、熟悉交叉配血的方法，复习输血的一般原则。
二、基本原理
血型通常是指红细胞的血型，是根据存在于红细胞膜外表面的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的特异性糖蛋白）来确定的，这种抗原或称凝集原是由遗传基因决定的。血清中的抗体或称凝集素，可与红细胞膜上不同的相应抗原结合，产生凝集反应，最后发生红细胞溶解。由于这种现象，临床上的输血前必须进行血型鉴定，以确保安全输血。在血型系统中最重要的ABO血型系统（只要ABO血型系统相合，输血安全率可达91.4%），其次为Rh系统。
三、实验材料
器材：显微镜、三凹玻片（或载玻片、白瓷砖片）、一次性刺血针、消毒牙签、玻璃棒、试管架及37℃水浴、试管、滴管、移液管、消毒的5ml（或10ml）注射器及针头、小试管、碘酒棉球
试剂：标准血清（A、B、O血型）、生理盐水、75%酒精棉球、抗D（完全抗体）血清。
四、方法与步骤
1、ABO血型鉴定
据受试者红细胞上是否含有凝集原和所含凝集原种类的不同，可将血型分为A、B、AB 和O四种基本血型。ABO血型鉴定是将受试者红细胞分别加入标准A型血清（含足量的抗B凝集素）、标准B型血清（含足量的抗A凝集素）、O型标准血清（含足量的抗A和抗B 凝集素）。
（1）在三凹玻片上左、中、右3个凹陷或格子旁，用蜡笔依次注上A、B和AB字样。
（2）用3个小滴管分别依次吸A型、B型和O型标准血清各一滴，分别滴在三凹玻片上注有A、B和AB字样的相对应凹陷或格子部位，并依次用3个玻璃棒分别将血清涂匀而呈直径1—2cm的圆形。
（3）制备5%红细胞生理盐水悬液常规消毒，穿刺采血部位（手指或耳垂）并取血。取试管1支，加生理盐水1ml，加入受检者血液1~2滴，混合均匀即可。
（4）在三凹玻片的A、B、AB3处分别加入5%红细胞悬液1滴，慢慢转动三凹玻片，也可用牙签搅拌，使抗血清和红细胞县液充分混合（图6-1）。在室温下静置10~15min后，观察凝集结果。
2、Rh血型鉴定——盐水法
用抗C、抗D、抗E、抗c和抗e，5种血清将Rh血型分为18个型别，若仅用抗D血清则只可定为Rh血型阳性或Rh血型阴性。抗D血清属于温抗体，检测用抗D血清若为完全抗体，用盐水法即可检查Rh血型。
图6-1 ABO血型的鉴定
（1）同上法制备5%红细胞生理盐水悬液。
（2）观察凝集现象取小试管1支，滴加抗D标准血清及受检者5%红细胞生理盐水悬液各1滴，混匀，置37℃水浴1h后，手持试管倾斜转动以观察凝集结果。凝集者为Rh 阳性，不凝集者为Rh阴性。
3、交叉配血试验
血型鉴定后的交叉配血试验是输血和组织血源的必须步骤，应坚持同型输血，且输同型血也必须事先作交叉配血试验。检测血型和交叉配血均可分为玻片法和试管法，两种方法类似，但后者较灵敏。本文仅介绍玻片法。配血试验主要是用来检查受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，这是配血试验的“主”侧；对于供血者血清中是否有破坏受血者红细胞的受体也应给予注意，这是配血实验的“次”侧。两者合称交叉配血（图6-2）。交叉配血后，观察有无凝集现象，同时也可以进一步鉴定所鉴定的血型是否正确。
图6-2 交叉配血试验示意图
（1）制备受血者的5%红细胞悬液和血清以碘酒、酒精消毒皮肤，用消毒的注射器抽取受血者静脉血2ml。取其中的2滴加入装有2ml生理盐水的小试管中，制成红细胞悬液；待其余血液凝固后，将血液离心，得上清液备用。
（2）制备供血者的5%红细胞悬液和血清（方法同上）
（3）玻片法在玻片两侧分别注上“主”、“次”字样。在主侧分别滴加受血者的血清及供血者的红细胞悬液各一滴，于次侧分别滴加受血者的红细胞悬液及供血者的血清各一滴。分别用不同的牙签将主侧和次侧和液体混匀，置室温下15mins后观察结果。为安全起见，有必要在低倍镜下观察有无凝集及溶血现象（图6-2、6-3）。
（4）试管法主、次侧管内所加内容物同玻片法（滴量可按比例适当增加），混匀后离心（1000r/min）1min后，取出并观察结果。此法比玻片法迅速。