2012年周未班复习要点
第一部分名词解释
1、IHC 免疫组织化学(Immunohistochemistry;IHC)或称免疫细胞化学(ICC)是根据特异性抗原抗体反应的原理来定位组织或细胞内的抗原或抗体成分。
2、CB 柠檬酸缓冲液（0.01mol/L pH6.0,CB）,主要用于免疫组织化学抗原修复的缓冲液。
3、AR 抗原修复(antigen retrieval;AR)是以高温、高压对常规固定石蜡切片进行抗原修复，可以提高抗原抗体阳性检测率的方法。
4、TBS Tris-HCI缓冲液,常用浓度为0.02M,pH7.8 主耍用于IHC的冲洗和底物溶液的配制。
5、PBS 为0.01mol/L,pH7.4磷酸盐缓冲液,主耍用于免疫组织化学的洗涤。
6、酶消化酶消化主耍用于IHC前暴露抗原决定簇,有利于抗原抗体的检测,提高阳性检测率的方法。
7、抗原决定簇抗原决定簇（antigenic determinant）又称抗原表位（epitope），是可与相应抗体或淋巴细胞抗原识别受体相结合的部位，是决定和控制抗原特异性的特殊化学基因。
8、基因工程抗体基因工程抗体又称重组技术，它是在充分认识Ig基因结构与功能基础上，应用DNA重组技术和蛋白质工程技术，按照客观需求在基因水平上对Ig分子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的新型抗体分子。
9、功能性决定簇在一个具有三维空间结构的天然蛋白质抗原分子中,由于存在于抗原分子表面的抗原决定簇易被免疫细胞所识别,故此称为功能性决定簇。
10、单克隆抗体单克隆抗体是通过细胞融合技术使小鼠脾免疫细胞与小鼠骨髓瘤细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，在体外培养的条件下分泌产生的针对单一抗原决定簇,由单个B淋巴细胞增殖而形成的细胞纯系产生的抗体。
11、多克隆抗体多克隆抗体(polyclonal antibodies,PcAb)为免疫动物的全血清(抗血清)含有多个抗原决定簇。
12、隐蔽性抗原决定簇抗原决定簇则被抗原分子本身包绕掩盖在内部，正常情况下不能被免疫细胞所识别，称此为隐蔽性抗原决定簇。
13、免疫优势决定簇在某些因素的影响下，这些隐蔽性抗原决定簇可以暴露出来，刺激机体免疫系统发生免疫应答，称此为免疫优势决定簇（immuno-dominant determinant）。
14、抗体抗体(antibody)是机体通过体液免疫应答，由B淋巴细胞活化增殖、分化的浆细胞合成和分泌，并能与刺激抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白（Ig）。
15、抗原抗原是指进入机体能刺激机体的免疫系统发生反应，从而引起机体产生或形成致敏淋巴细胞，并能和这些抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
16、石蜡切片新鲜经适当固定、脫水、透明、浸蜡后用石蜡包埋的组织蜡块，用石蜡切片机切成一定厚度（2-5um）的组织切片形式，是常规病理中的重要切片形式，也是免疫组化研究中较常用的切片形式，它能满足免疫组化的连续切片要求。
17、冰冻切片将新鲜组织置于-25℃左右的恒温箱中，待组织完全冷冻后，即可连续切片。优点是能较完整地保存抗原性。
18、细胞涂片是将细胞培养的活细胞或穿刺细胞,通过一定方式转移到干净的载玻片上的过程。
19、切片粘合剂免疫组化染色时间长，需高温、高压抗原修复或酶消化等前处理，并要反复洗涤，切片在试剂中长时间浸泡经多次洗涤，极易造成脱片而影响实验的成败。因而需截玻片上涂一层具粘附力的化学试剂,例如多聚赖氨酸、APES等。
20、PLP液PLP液(过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液), 该固定液适于含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
21、PFG液PFG液含对苯醌、多聚甲醛、25%戊二醛、0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液,适于多种肽类抗原的免疫细胞化学，尤其是免疫电镜的研究。
22、载体把一个目的DNA 片段从基因组或DNA 中切割下来以后,在连接酶作用下和外源DNA 片段或基因拼接，起运送的DNA 称载体。
23、引物所谓引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，两引物的5’端决定扩增产物两端的位置。
24、探针在化学及生物学意义上的探针，是指能与特定的靶分子发生特异性相互作用的分子，并可以被特殊的方法所探知。
25、EnVision法又称ELPS法，EnVision复合物是利用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)，将HRP或AKP和第二抗体标记在一个多聚化合物上，即形成酶-多聚化合物-第二抗体巨大复合物。
26、Epos法是采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)为骨架，将特异性抗体和HRP结合在一起，形成HRP—多聚化合物—特异性抗体巨大复合物，该复合物内不含第二抗体及亲和素。
27、CSA法也称酪胺信号放大，主要原理是酪胺的过氧化物酶反应,即HRP在H2O2存在下催化酪胺盐,形成共价键结合位点,而产生大量的酶促产物，如经几次这样的循环放大，可以网络许许多多的酶分子，最后通过显色反应，其敏感性得到几何级放大。
28、UIP法其基本原理及工作流程与EnVision法相似。不同的是UIP复合物为HRP-氨基酸-抗鼠或抗兔IgG复合物（N-Histofine复合物），因N-Histofine复合物分子量较EnVision 复合物分子量稍小，理论上具有更强的穿透力。
29、PowerVision法原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密，形成串珠状多聚物,因此分子量较小。其特点是简便、敏感。
30、免疫荧光直接法用已知特异性抗体与荧光素结合，制成特异性荧光抗体。直接用于细胞或组织抗原的检查，此法特异性高，其缺点是一种荧光抗体只能检查一种抗原，敏感性较差。
31、免疫荧光间接法先用特异性抗体与组织标本反应，随后用缓冲盐水洗去未与抗原结合的抗体，再用间接荧光抗体与结合在抗原上的抗体结合，形成抗原-抗体-荧光抗体的复合物。由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体显著多于直接法，从而提高了敏感性。
32、PAP法抗HRP抗体与HRP交联，制备成五环的PAP复合物(3个HRP和2个IgG分子), PAP复合物中的抗HRP抗体和第一抗体必需为同一种属动物的IgG，这样桥抗体才能作为“桥”将PAP复合物连接在第一抗体上,如特异性一抗为鼠来源的,那么PAP 复合物必须用鼠的。
33、APAAP法抗AKP抗体与AKP交联，制备成五环的APAAP复合物(3个HRP 和2个IgG分子), A P A AP复合物中的抗HRP抗体和第一抗体必需为同一种属动物的IgG，这样桥抗体才能作为“桥”将AP A AP复合物连接在第一抗体上,如特异性一抗为鼠来源的,那么APAAP复合物必须用鼠的。
34、ABC法 ABC是亲和素、生物素、过氧化酶复合物法（avidin biotin-peroxidase complex，ABC）在BAB法和LAB法的基础上改良的，其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。生物素标记的第二抗体与ABC复合结合，酶显色反应。
35、LSAB法LSAB法或称S-P法、SABC法，它是采用生物素标记的第二抗体与结合有HRP或AKP酶的链霉亲和素（streptavidin）连接来测定细胞及组织中的抗原,与ABC法最大的区别是将酶直接连到链霉亲和素上。
36、 APAAP一种碱性磷酸酶(AKP)抗碱性磷酸酶方法,先制备成抗AKP酶抗体,该抗体再与AKP结合，形成APAAP复合物,用于IHC-APAAP法的检测。
37、酶标记抗体法酶标记抗体法是将酶(HRP或AKP)结合在特异性一抗或二抗上，制备成酶标记抗体，通过抗原抗体反应使抗原抗体复合物上带有酶分子，再借助酶对底物的特异性催化作用，在抗原抗体反应部位形成不溶性有色产物。
38、酶标直接法直接法是将酶标记在特异性抗体上，然后用酶标记抗体直接与组织细胞内相应抗原特异性结合，形成抗原-抗体-HRP复合物，最后用酶底物显色。
39、酶标间接法间接法是将酶标记在二抗上, 再与第一抗体(已与相应抗原反应形成复合物的IgG)反应，然后进行显色反应。此法要求第二抗体与特异性抗体（一抗）应是不同种属的动物产生。
40、非标记抗体免疫酶法该方法先用酶(HRP或AKP)去免疫动物(羊,兔和鼠等),使其产生高效价、特异性的抗酶抗体,再将该抗酶抗体与酶结合,是酶标记抗体法的重大改进。
41、酶桥法酶免疫动物制备成效价高，特异性强的抗酶抗体。在特异性抗体与抗酶抗体之间利用第二抗体作“桥梁”，将他们连接起来，再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的定位。
42、DAB/H2O2为HRP免疫组化染色的底物(H2O2)和供氢体(DAB),其浓度为0.05%DAB和0.03% H2O2最终产生棕黄色或棕褐色,如在DAB/H2O2加入一定量的重金属离子,可改变终产物的颜色。
43、AEC/H2O2 AEC(3－氨基－9－乙基卡吧唑)为HRP的显色液,AEC为供氢体,H2O2为底物,终颜色为红色，不能用醇溶性胶封片。
44、NBT/BCIP 主要用于IHC(AKP)或ISH碱性磷酸酶检测的底物-供氢系统,终产物为紫蓝色。NBT即四氮唑蓝(Nitro-Blue-Tetrazolium)。BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(5-bromo-4-chioro-3-indolyl-phosphate)。
45、HRP为辣根过氧化物酶是免疫酶组织化学常用酶，其供氢体/底物有好几种类型，常用DAB、AEC/H2O2。
46、AKP 碱性磷酸酶是IHC显示系统常用的酶，NBT/BCIP是该酶的底物-供氢系统,终产物为紫蓝色。
47. SPA葡萄球菌A蛋白主耍用于免疫组化的连接二抗。
48. PAG15nm金标记葡萄球菌A蛋白(SPA),颗粒大小为20nm的金标复合物，主要用于光镜和免疫电镜IGS和IGSS法的主要标记探针。
49. IGSS 免疫金银染色(Immunogold-silver staining)，是免疫组织化学最为敏感的方法之一,首先用金标抗体与特异性一抗或抗原特异性结合,再用银进行增强。
50. 荧光有些物质，当用紫外线照射时，它吸收了某种波长的光后还会发射出各种顔色和不同强度的光，而当紫外线停止照射后，这种光也随之消失，这种光称为荧光(fluorescence)。
51、荧光抗体用一定的方法将荧光素或荧光蛋白结合到特异性一抗或二抗上,用于免疫荧光组化染色的直接法或间接法。
52、自发性荧光组织在短波长光照射下自行发射出的荧光。组织中的蛋白质和脂类在紫外线照射下能发射出微弱的淡蓝色荧光。
53、stokes移位光子能量hv EM发射后，返回荧光团基态So。由于在激发态寿命过程中能量损耗，光子能量降低，因此波长比激发态光子hV EX更长。用(hV EX－hV EM)表示的能量或波长的不同称为stokes移位
54、免疫荧光组化免疫荧光组化技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。
55. 荧光色素能够产生荧光并能作为染料的化合物称为荧光色素，荧光色素必须具备吸收激发光的光能并发射荧光，具有吸收一定频率光能的生色团和能产生一定光量子的荧光团。.
56、 FITC 异硫氰酸荧光黄(Fluorescicn isothiocyanatc, FITC)纯品为黄色粉末，最大吸收光谱为490～495nm，最大发射光谱为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。
57、TRITC 四甲基异硫氰酸罗达明(Tetramethyl rhodamine isothiocyanate, TRITC)是一种紫红色粉末，较稳定，是罗达明(Rhodamine)的衍生物，易溶于水。最大吸收光谱为550nm，最大发射光谱为620nm，呈橙红色荧光。
58、藻红蛋白藻红蛋白或称藻胆蛋白是一种来源于藻青菌（Cyanobacteria）和真核菌类相当稳定的具有很强溶解性的荧光蛋白
59.F/P值F(荧光素)和P(抗体蛋白)的克分子比值反映荧光抗体的特异性染色质量，一般要求F/P的克分子比值为1～2。过高时，非特异性染色增强；过低时，荧光很弱，敏感性低。
60.DAPI DAPI是经典的免疫荧光组化细胞核复染剂,为蓝色。工作浓度为1/1000,直接用于甘油封片介质中。
61. Hoechst 33342染料该染料已经广泛用于活细胞细胞核、免疫荧光组化和FISH 后的衬染，其工作浓度为0.2μg/ml, 为蓝色。
62. PI 碘化丙锭（propidium iodide, PI）是细胞核和染色体首选的红色荧光复染剂。PI是进行绿色荧光标记，例如Alexa Fluor 488、俄勒冈绿、Bodipy FL、荧光黄等荧光素的复染剂。
63.胶体金胶体金是指金的水溶胶，它具有一般溶胶的特性,一种物质以或大或小的微小粒子分散在另一种物质中所形成的体系。
64.IGS 免疫金染色(Immunogold staining;IGS是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗与特异性抗体结合，形成抗原抗体、金标抗体复合物，在光镜(10×100倍)下可见红色颗粒物,即为抗原抗体结合物。
65. 双重或多重免疫组化染色应用IHC的方法在同一张组织切片上同时或先后显示两种或两种以上的抗原成分。显示的水平可以是光镜，也可以是电镜。
66.双重或多重免疫荧光染色采用呈现不同颜色的荧光色素配伍，分别标记不同的抗体，再通过各自与同一切片上的相应抗原特异性结合而加以区别显示所建立起来的双重或多重免疫荧光组化染色技术。
67. 双重或多重免疫酶染色指以酶催化不同底物呈现不同颜色产物标示同一切片内两种或两种以上抗原为理论基础所建立起来的多重免疫标记染色方法。
68.阳性对照阳性对照是指用已证实含靶抗原的标本片与待检标本片同时作同样处理、染色的组织对照，其目的在于证实所用免疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能。
69.阴性对照阴性对照是指证实不含靶抗原或缺少免疫试剂的同步处理和标记染色的免疫组化染色对照，包括有阴性组织对照和阴性试剂对照二类。
70. 阴性组织对照指以确知不含有靶抗原的组织(或细胞)标本片与待检标本片同时染色的对照，结果应为阴性，以排除假阳性情况。
71.试剂阴性对照指用于证实免疫组化染色所用试剂，尤其是特异性抗体试剂的有效性和可靠性的同步对照标本片染色，它是每一批免疫组化染色中绝不可缺少的对照设置，目的在于除外假阳性和证实所用免疫组化试剂及其技术方法的有效性和待检标本片阳性结果的可靠性。
72. 空白或替代对照指以缓冲液(如PBS、TBS等)或以第一抗体同源动物未免疫的正常血清取代第一抗体，其他各步不变的对照染色，结果应为阴性。必要时还可分别对第二抗体、桥抗体作相应的空白或替代对照试验。
73. 吸收试验第一抗体经用相应的过量纯化抗原中和吸收，使其结合点全部被外源性抗原结合封闭，不能再与组织内的靶抗原反应，用这种吸收后的上清液替代原先的第一抗体作免疫组化染色的对照，结果应为阴性。
74. 抑制试验指待检标本先与未标记的特异性抗体反应而影响了再与标记的特异性抗体结合，使染色结果明显减弱或转阴的对照，该试验对照适用于直接法。
75.自身对照在同一标本片上，靶抗原的阳性反应与其他无关结构或成分的阴性结果可形成鲜明对照，谓之自身对照。
76. IHC非特异染色非特异染色是指免疫组化染色过程中产生的非靶抗原(或抗体)的呈色结果，属假阳性，又称背景着色,它的存在干扰着对特异性靶抗原显色结果的判断。
77. 完全阴性，组织片中所有细胞均为阴性染色，提示组织细胞中缺乏目标抗原；
78. 部分阴性，部分细胞标记阴性，仅少数细胞阳性或弱阳性，提示这些细胞低度表达目标抗原，也可能丢失了目标抗原。组织片中显示目标细胞阴性，而非目标细胞阳性，这在淋巴瘤中最为常见。
79 、替代对照指以缓冲液(如PBS、TBS等)或以第一抗体同源动物的正常血清取代第一抗体，其他各步不变的对照染色，结果应为阴性。
80. TMA:组织微阵列(tissue micro-array，组织芯片)是用大量组织样本高密度排列在载体上，组织芯片的特点是信息含量大，具有高通量的优势，可用于组织细胞内DNA、RNA和蛋白质的检测和定位，可供常规染色、组织化学染色、免疫组化染色、原位杂交、荧光原位杂交及原位PCR等实验用。
81、肿瘤标记物是指与肿瘤发生相关的一类大分子物质,可以通过各种方法检测到,主要是大分子蛋白质，包括肿瘤相关抗原、异位激素、酶和宿主抗肿瘤免疫级联反应的改变等
82.PCK广谱细胞角蛋白(PCK)中既含高分子角蛋白，又含低分子角蛋白，故它可标记所有上皮细胞，即所有单层上皮、复层上皮、尿路上皮细胞及各种上皮细胞来源的良恶性肿瘤。
83. HCK 高分子角蛋白(HCK)主要标记复层鳞状上皮及鳞状细胞肿瘤，此外HCK（34βE12）常用于标记前列腺基底细胞，通常前列腺良性增生病变，其基底细胞保存完整，而前列腺癌基底细胞消失，因此借助于34βE12来观察基底细胞存在与否有助于前列腺癌的诊断。
84. LC K 低分子细胞角蛋白（LCK）主要存在于单层上皮及腺上皮细胞，鳞状上皮及角化鳞状上皮和这些细胞发生的肿瘤表达极弱或呈阴性表达。因此，LCK主要用于内脏腺上皮肿瘤的诊断，并有助于腺癌与鳞状细胞癌的鉴别诊断。
85.ESA 上皮特异性抗原（Epithelial Specific Antigen, ESA）为分子量40KD的细胞表面糖蛋白，属较广谱的上皮细胞标志，大多数上皮细胞为阳性反应，在肿瘤细胞中，腺癌细胞表达强于鳞状细胞癌细胞。ESA标记谱系似EMA。
86.P65 p63属p53家族成员，其蛋白表达于复层鳞状细胞的基底细胞和前期细胞。它定位于细胞核。前列腺、乳腺和唾液腺肿瘤的诊断与鉴别诊断中，常用p63显示基底细胞或肌上皮细胞。它特异性强，敏感性高，定位准确，是十分理想的上皮标志。
87.Villin Villin是一种肌动蛋白相关钙调节蛋白，定位于细胞质和胞膜，尤见于腺腔面。
88. APO-D 载脂蛋白D（Apolipoprotein-D，APO-D）作为人血浆脂质转运系统的一种糖蛋白，参与胆固醇酯化及其产物的转运，定位于胞质．表达于类固醇反应组织，在早期前列腺癌和进展期前列腺癌中表达。
89. HPC 肝细胞标志物（Hepatocyte，HPC）是肝细胞特异性标志，定位于胞质，阳性颗粒呈粗颗粒状。正常肝细胞阳性，肝胆管上皮阴性。约80％肝细胞癌为HPC阳性，不足5％非肝细胞癌表达HPC。
90. Vimentin 波形蛋白（Vimentin）主要分布于间叶细胞及其起源的肿瘤组织，而上皮细胞及其肿瘤一般不含此蛋白。常用于间叶来源的恶性肿瘤如间皮瘤、滑膜肉瘤、脑膜瘤等诊断，该抗体对癌与肉瘤、恶性黑色素瘤与癌、胸腺瘤与淋巴瘤、未分化癌与小细胞间叶肿瘤的鉴别诊断具有重要参考意义。
91. Desmin结蛋白（Desmin）是一种中间丝蛋白，广泛分布于平滑肌细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞和肌上皮细胞。主要用于平滑肌肿瘤、横纹肌肉瘤和肌上皮肿瘤、部分肌纤维母细胞肿瘤的诊断和鉴别诊断。
92. MSA 肌特异性肌动蛋白（Muscle Special Actin;MSA）是一种具有收缩能力的微丝蛋白，广泛分布于几乎所有的肌型细胞中。主要表达于骨骼肌、平滑肌、心肌和肌上皮细胞、肌纤维母细胞，肌源性肿瘤包括平滑肌瘤，平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤以及肌上皮肿瘤、肌纤维母细胞肿瘤等均可呈阳性反应。
93. MyoD1 横纹肌核蛋白（MyoD1）是MyoD1基因所编码的45KD的磷酸化蛋白，只在胚胎横纹肌细胞中表达，正常成人横纹肌细胞不表达，是横纹肌肿瘤的一种非常特异的标志。免疫表型为胞核型。主要用于横纹肌肉瘤的诊断。
94.肌生成素因子Myf-3 是横纹肌肉瘤有用的标志物，有助于横纹肌肿瘤与神经母细胞瘤、Wilm's瘤、肝母细胞瘤、淋巴瘤和平滑肌肉瘤的鉴别。
95. 肌红蛋白（Myoglobin）肌红蛋白存在于骨骼肌和心肌中，是横纹肌的特异性标记物。主要用于横纹肌肿瘤的诊断与鉴别诊断，少数恶性中胚叶混合瘤，睾丸畸胎瘤、肾母细胞瘤中肌母细胞亦可见阳性表达。
96. TPO 甲状腺过氧化物酶(TPO)是一种分子量为107 KD转膜蛋白，是甲状腺素合成的主要酶。TPO是甲状腺良恶性肿瘤鉴别诊断的早期标记物，恶性甲状腺肿瘤细胞中TPO 表达水平下降，若TPO低表达则强烈提示异型增生。
97. TTF-1甲状腺转录因子-1（TTF-1）定位于胞核，表达于肺和甲状腺上皮细胞及其肿瘤。肺小细胞癌，非典型类癌，腺癌常为TTF-1阳性，而肺鳞状细胞癌和类癌则阴性反应。甲状腺乳头状癌和滤泡癌阳性。
98.SP-A/B 肺表面活性蛋白A（SP-A/B）是II型肺泡上皮细胞分泌的一种表面磷脂，在呼气末期具有保持肺泡扩张的作用。是肺泡上皮特异的标志物，定位于胞质。有助于恶性间皮瘤和肺腺癌的鉴别。
99. PSA前列腺特异抗原（PSA）表达于正常前列腺腺泡细胞、导管上皮细胞及腔内分泌物。它是目前认为具有特异性的肿瘤标记物之一。主要用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断，但不能作为良、恶性前列腺疾病的鉴别诊断。
100. PSAP前列腺酸性磷酸酶（PSAP）是由前列腺上皮细胞分泌的一种酸性磷酸酶的同功酶。常用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断，但不能作为良、恶性前列腺疾病的鉴别诊断。
101. AMACR（P504S）AMACR是脂肪酶支链β氧化酶中重要的酶。前列腺腺癌和不典型增生，P504S均为阳性表达。34βE12或p63观察基底细胞是否存在，则有助于前列腺癌的诊断与鉴别诊断。
102. PIP 前列腺抑制肽(PIP)在前列腺增生上皮、原发及转移的前列腺癌中表达，低分化癌阳性程度较高分化者弱，可作为前列腺癌诊断的肿瘤标志物，且不受雄激素减少和缺乏的影响，但在前列腺良恶性鉴别中不如P504S重要。
103. Myogenin肌细胞生成素为肌细胞生成调节家族成员，是横纹肌及其肿瘤较特异的标记物，与MyoD1有一定互补作用。是横纹肌肿瘤最理想的标志。
104.Tropomysion 原肌球蛋白与肌细胞细丝和非肌细胞微丝相关，定位于胞质。它强表达于横纹肌，包括心肌α原肌球蛋白和骨骼肌α和β原肌球蛋白。主要用于横纹肌肿瘤的诊断。
105.α-SMA 平滑肌肌动蛋白（Smooth muscle Actin）是一种标记平滑肌的肌动蛋白，主用于检测血管平滑肌、平滑肌瘤和平滑肌肉瘤、肌上皮细胞和肌上皮瘤等。可作为乳腺肿瘤的一个重要的参考指标。在平滑肌肿瘤的诊断中应结合其它标记物联合应用。
106.平滑肌肌球蛋白平滑肌肌球蛋白（Smooth muscle myosin）主要用于标记血管和内脏平滑肌细胞以及肌上皮细胞，它被认为是平滑肌较为特异和可靠的标记，有助于间叶肿瘤的诊断和分类，亦可用于乳腺肌上皮细胞的标记，有助于原位癌和浸润癌的区别。
107. Caldesmon钙调素结合蛋白是一种与肌动蛋白和原肌球蛋白结合的钙结合蛋白，具有调节平滑肌收缩的功能。用于良恶性平滑肌肿瘤的诊断与研究。
108. Calponin（CALP）是一种34KD的多肽，与肌动蛋白、原肌球蛋白及肌钙蛋白相互作用,定位于胞质，肌上皮亦阳性，有助于乳腺癌和硬化性腺病的鉴别诊断。
109. CD31 主要表达于内皮细胞、血小板、单核细胞、粒细胞、B淋巴细胞。常用于良恶性血管源性肿瘤的诊断和鉴别诊断，亦可用于各种肿瘤间质中血管生成的研究。
110. CD34表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、内皮细胞、胚胎纤维母细胞和某些神经组织细胞。现多用于标记血管内皮细胞，良恶性血管源性肿瘤的诊断和鉴别诊断。亦可用于各种肿瘤间质中血管生成的研究。也是胃肠道间质瘤较理想的标志物。
111. 血栓调节素(Thrombomodulin)是一种内皮细胞跨膜糖蛋白，分布于内皮细胞、间皮细胞、滑膜细胞、合体滋养叶细胞、巨核细胞和血小板。间皮瘤与肺腺癌的鉴别中是较理想的标记物。
112. RCCM 肾细胞癌标志物(Renal Cell Carcinoma Marker，RCCM) 定位于近端小管曲部及直部的刷状缘，Bowman's囊腔缘有局灶表达。该抗体主要用于肾细胞癌的标记。
113. Mesothelin间皮素(Mesothelin)表达于间皮细胞、间皮瘤、卵巢上皮性癌和某些鳞状细胞癌。有助于以上肿瘤与其它实体瘤的鉴别。
114. ON 骨连接素(Osteonectin,ON）也称BM-40或SPARC(富于半胱氨酸的酸性分泌蛋白)，是一种多功能的糖蛋白。ON由发育中骨的骨母细胞和发育中牙齿的成牙质细胞大量分泌。肿瘤组织中，肝细胞癌表达,正常肝无表达。骨肉瘤特别是骨母细胞型骨肉瘤表达ON，而软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤均无表达。
115. Nestin 巢蛋白(Nestin)
是一种新型中间丝蛋白，较为特异神经干细胞标记物。该抗原定位于胞质，在PNET、星形胶质细胞瘤中常呈阳性反应。
116. 外周蛋白(Peripherin)外周蛋白是一种57KD的III型中间丝蛋白，是外周神经包括肠神经节细胞的特异性标志物,定位于胞质。也是诊断神经嵴来源的肿瘤，如神经母细胞瘤、节细胞神经母细胞瘤的有用标志物。
117. GFAP 胶质纤维酸性蛋白（GFAP）为中间丝蛋白之一，主要用于星形胶质瘤包括星形细胞瘤、星形母细胞瘤、混合性胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、多数室管膜瘤等中枢神经系统肿瘤的诊断和鉴别诊断。
118. 星形细胞Astrocytes Astrocytes定位于细胞膜，适用于星形细胞及星形胶质细胞瘤的诊断与鉴别诊断，该抗体特异性强。
119. NF神经纤维细丝蛋白（NF）是神经元特异性中间丝蛋白,其阳性见于节细胞神经瘤，副节瘤，小脑或外周神经母细胞瘤，肾上腺嗜铬细胞瘤，亦有助于某些神经内分泌肿瘤的诊断。
120. CgA铬粒素A (CgA) 是人类肾上腺髓质中含量最高的一种可溶性酸性蛋白，广泛存在于神经元、神经内分泌细胞及其肿瘤细胞中。主要用于神经内分泌肿瘤如垂体肿瘤、胰岛细胞瘤、嗜铬细胞瘤、甲状腺髓样癌、类癌等的诊断。
121. SY 突触素(SY)存在于神经元突触前囊泡膜上，肾上腺髓质细胞和神经内分泌细胞的胞浆内，主要用嗜铬细胞瘤、节细胞神经瘤、副节瘤以及APUD系统肿瘤的诊断和鉴别诊断。
122. NGFR 神经生长因子受体(NGFR)定位于细胞膜和胞质。我们发现多数神经纤维瘤和神经鞘瘤为NGFR阳性,而肌源性肿瘤和纤维源性肿瘤不表达。
123. MBP 髓磷脂碱性蛋白(MB)是髓鞘结构蛋白的主要成分。主要用于颅内少突胶质细胞及其肿瘤，外周雪旺细胞等脑神经系统疾病以及相应肿瘤的诊断和鉴别诊断。
124. 胰多肽（Pancreatic polypeptide, PP）PP是由胰岛PP细胞分泌的一种激素。主要用于胰岛细胞瘤的功能性分类和多发性内分泌肿瘤的辅助诊断。是胰腺神经内分泌细胞及其肿瘤的广谱标记物。
125.胰岛素（Insulin）Insulin是由胰岛B细胞分泌的一种激素,主要用于胰岛细胞瘤的功能性分类和多发性内分泌肿瘤的辅助诊断。
126 .生长抑素（Somatostatin）生长抑素是胰岛D细胞分泌的一种多肽激素。主要用于胰岛细胞的功能性分类和消化道粘膜中内分泌细胞及肿瘤的研究。
127. 胰高血糖素（Glucagon）胰高血糖素是胰岛A细胞合成和分泌的一种激素,主要用于胰岛细胞瘤的功能性分类和胰高血糖素瘤的诊断。
128. 血管活性肠肽（VIP）VIP是胰岛D1细胞分泌的一种激素，有调节水电解质平衡的作用。主要用于胰岛细胞瘤的功能性分类和诊断。
129. 胃泌素（Gastrin）胃泌素是一种多肽激素，主要用于胃泌素瘤和G细胞增生症的诊断以及部分神经内分泌肿瘤的检测,是胰岛细胞瘤常用的标记物。
130.降钙素(Calcitotin, CT)CT是血液中能够降低钙含量的一种多肽，主要用于C细胞增生和甲状腺髓样癌的诊断。
131.甲状旁腺激素(PH)正常甲状旁腺细胞阳性表达，甲状腺滤泡上皮阴性表达，常用于甲状旁腺肿瘤的诊断与鉴别诊断。
132.TdT 末端脱氧核酸转移酶(TdT)是一种核酶,定位于胞核，主要用于诊断淋巴母细胞淋巴瘤（LL）或淋巴母细胞白血病的诊断，而其它淋巴瘤常不表达。
133. LAT T细胞活化连接子(LAT),在正常组织中，胸腺、淋巴结、脾脏的T细胞区及小肠、骨髓的T细胞区、NK细胞、肥大细胞阳性表达。肿瘤组织中，主要表达于T细胞淋巴瘤。其敏感性非常高，T淋巴母细胞淋巴瘤也可阳性，优于CD3。
134. CD1a CD1a表达于皮质胸腺细胞、表皮朗格罕细胞，真皮树突网状细胞，它还表达于真皮汗腺导管和小肠上皮细胞，定位于胞质和胞膜，主要用于朗格罕氏组织细胞增生症（LCH）和T淋巴母细胞淋巴瘤的诊断。
135. CD2 T细胞CD2定位于胞膜，表达于外周淋巴组织的大部分T细胞、NK细胞。大部T细胞淋巴瘤为CD2阳性。鼻腔和肠型的NK/T细胞淋巴瘤，CD2优于其它细胞标记。
136. CD10 急性淋巴母细胞性白血病共同抗原(CD10)表达于滤泡中心母细胞及其相应的滤泡性淋巴瘤。CD10是B淋巴母细胞淋巴瘤和滤泡性B细胞淋巴瘤有用的标志物。
137. CD11a（LFA-1）CD11a是LFA-1（淋巴细胞功能相关抗原-1）异二聚体糖蛋白的α-1链，表达于单核细胞、粒细胞和NK细胞膜表面，可用于白血病和淋巴瘤的鉴别诊断。
138. CD13CD13表达于粒细胞-单核细胞系的前体细胞以及成熟细胞、淋巴细胞，血小板和红细胞均不表达,可用于标记急性粒细胞白血病和骨髓增生不良综合症等疾病。
139. CD14 单核细胞(CD14)表达于单核细胞、巨噬细胞，弱表达于粒细胞，主要用于标记单核细胞，为急性髓性白血病的免疫分型诊断提供依据。
140. CD15粒细胞相关抗原(CD15)，表达于霍奇金氏病中R-S细胞，主要用于霍奇金淋巴瘤和少数大细胞性淋巴瘤的诊断。
141. CD19 CD19是B细胞标记物,表达于早期B细胞和成熟的B细胞膜表面，与B 细胞活化调节和发育调节相关,主要用于标记正常B细胞及肿瘤性B细胞。
142. CD20 CD20是B细胞标记物，主要分布在外周B细胞、前B细胞后期和浆细胞之前的B细胞，一般不与T细胞呈交叉反应。对B细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病等有较好的细胞特异性，因此在恶性淋巴瘤尤其是T或B细胞淋巴瘤的分类上，CD20是最常用的B细胞标记
143. CD21 B细胞标记物，主要用于标记B细胞及其来源的肿瘤。CD21是淋巴结中树突网状细胞的标记物，可与CD35联合标记树突网状细胞及其肿瘤。
144. CD23 CD23是B细胞标记物，为膜型表达。它是B慢性淋巴细胞白血病/小B细胞淋巴瘤诊断与鉴别诊断有用的标记物。
145. CD30/Ki-1 Antigen主要用于检测霍奇金淋巴瘤中的R-S细胞和不典型R-S细胞，故认为CD30是霍奇金淋巴瘤的一个特异性标记。
146. CD43 CD43主要标记T细胞，颗粒细胞、部分单核细胞和B细胞亦可阳性。该抗体用于T细胞淋巴瘤的辅助诊断，但应与其它T细胞标记如CD3或CD7联合应用。
147. CD45 CD45为白细胞共同抗原(LCA)，是造血细胞的特异性标记，主要分布在T、B细胞、单核细胞、粒细胞和前体细胞表面。是区别淋巴瘤，白血病和非造血组织肿瘤的一个良好的标记物。值
148. CD45RB CD45RB主要标记B细胞（80％）和少数T细胞（10％）。常与其它B细胞标记如CD20或CD79a联合检测，用于B细胞淋巴瘤的辅助诊断。
149. CD45RO CD45RO主要标记T细胞（80％）和少数B细胞（10％）。常与其它T细胞标志如CD3或CD43联合标记，用于T细胞淋巴瘤的辅助诊断。
150. CD56CD56为神经细胞粘附分子，也称为肺小细胞癌(SLCL)标记，主要分布于大多数神经外胚层来源的细胞和组织中，这些细胞来源的肿瘤可呈阳性表达，是NK细胞肿瘤的重要标记物。
151. CD57 CD57为自然杀伤细胞（NK细胞）标记，或称Leu-7，NK细胞淋巴瘤常阳性反应，某些神经内分泌细胞瘤亦呈阳性表达。CD57主要用于NK细胞肿瘤和神经内分泌肿瘤的诊断与研究。
152. CD68CD68为骨髓和各神经组织中的巨噬细胞，包括肝脏的Kuffer细胞，常用于粒细胞性白血病、各种单核组织细胞来源的肿瘤，包括恶性纤维组织细胞瘤的诊断。
153. Oct-2 Oct-2是属于POU同源家族的一种转录因子，是诊断B细胞淋巴瘤和鉴定B细胞有用的标志物
154. 乳腺癌抗原（CA15-3）CA15-3是一种粘液样糖蛋白，主要用于乳腺癌的研究，对诊断转移性乳腺癌有参考价值。
155.消化道癌抗原（CA19-9）CA19-9是一种肿瘤相关的糖类抗原。是胰腺癌诊断的一种较好的标记。
156.癌相关粘液抗原（CA50）CA50主要用于各种上皮源性癌包括胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌、卵巢癌、子宫癌、肺癌和乳腺癌等的鉴别诊断。
157.卵巢癌抗原（CA125）CA125是一种糖蛋白，是卵巢浆液性腺癌的重要标记。对浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌的鉴别诊断有参考价值。
158. 黑素A （Melan-A）Melan-A亦称T细胞1识别的黑色素瘤抗原。主要用于恶性黑色素瘤和伴有黑色素细胞分化肿瘤的诊断与鉴别诊断。
159.黑色素瘤（Melanoma, HMB45）HMB45是黑色素瘤相关抗原，主要用于恶性黑色素瘤,以及软组织透明细胞肉瘤的诊断和鉴别诊断。
160. TAG-72 TAG-72是一种高分子量的肿瘤相关糖蛋白，定位于细胞质及腺腔缘。对于肺腺癌与间皮瘤及胸腺瘤之间的鉴别诊断是理想的标记物。
161.EBC 胚胎性癌（EBC）是一种细胞表面糖抗原,主要用于胚胎癌和其它生殖细胞肿瘤的鉴别诊断。
162.CyclinA 周期素A(Cyclin A)是周期素依赖激酶的调节因子，不同的细胞周期素控制着细胞周期中不同的特定阶段。Cyclin A为S期和G2期的周期素，它在S期和G2期高水平表达。主要用于各种恶性肿瘤的增值活性研究。
163. CyclinB1 周期素B1(Cyclin B1)是周期素依赖基酶的调节因子，不同的细胞周期素控制着细胞周期中不同的特定阶段。Cyclin B1为G2期和M期的周期素，G2期和M期高度表达。主要用于各种恶性肿瘤的增殖活性研究。
164.Cyclin D1 周期素D1(Cyclin D1)是细胞周期关键因子，在多种人类肿瘤中过表达。定位于胞核，用于套细胞淋巴瘤（MCL）的诊断和细胞周期的研究。
165. Cyclin E 周期素E (Cyclin E)为细胞周期中G1期进入S期的一个重要调控因子，正常组织一般不表达。主要用于各种恶性肿瘤的增值活性研究，可作为一种预后判断指标。
166. Ki-67 Ki67Antigen为细胞增殖的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期则缺如。Ki-67增殖指数高低与许多肿瘤的分化程度、浸润、转移以及预后密切相关,作为各种恶性肿瘤的必检项目之一。
167. PcNA 增殖细胞核抗原(PCNA)是一种仅在增殖细胞中DNA合成或表达的核内多肽，其表达和合成与细胞周期有关。主要表达于增殖细胞的S期、G1期和G2初期。主要作为判断各种恶性肿瘤（包括胃肠道癌肿、乳腺癌、肝癌、膀胱癌等）细胞增殖和其恶性度的一种指标。
168. Cdk家族 CdK为周期素依赖激酶家族（Cyclin-Dependent Kinase），主要参与细胞周期的调控，在细胞分化、有丝分裂中起重要作用。目前主要用于各种肿瘤的研究。
169.Bcl-2Bcl-2是B细胞淋巴瘤-2的缩写，是细胞凋亡的一种抑制因子，参与细胞凋亡的调控。目前主要用于滤泡性淋巴瘤的诊断及其与反应性滤泡增生的鉴别诊断，亦可用于各种恶性肿瘤细胞凋亡的研究。
170. BCL-6Bcl-6是一个转录调节基因蛋白，具有诱导细胞凋亡的作用。抗体定位于胞核。Bcl-6主要用于淋巴结反应性增生、滤泡性淋巴瘤的诊断和恶性肿瘤细胞凋亡的研究。
171. Bcl-10 是一种凋亡调节因子，与存在t(1;14)易位的MALT淋巴瘤相关。主要用于MALT型边缘区B细胞淋巴瘤的诊断与鉴别诊断。
172. RB 视网膜母细胞瘤基因蛋白(Rb Gene Protein)是一种肿瘤抑制基因,Rb基因的突变可能与许多恶性肿瘤的发生发展有关。目前主要用于食管癌、胃癌、膀胱癌等恶性肿瘤的研究。
173. p27Kip1p27Kip1是一种细胞周期调节有丝分裂抑制因子和肿瘤抑制基因，目前主要用于各种恶性肿瘤的研究。
174. p53是一种抑癌基因，有野生型和突变型两种亚型。免疫组化所检测的p53为突变型p53。主要用于各种恶性肿瘤的研究，可作为一种预后指标。P53阳性者强烈提示细胞有异型增生或恶性变。
175. MDM2 Protein MDM2广泛分布于人体正常组织中，能与突变型和野生型p53结合，抑制p53介导的反式活化作用，使p53失活，并与肿瘤细胞的耐药有关。
176. p16INK4a/MTSI p16INK4a/MTS1是一种肿瘤抑制基因，定位于细胞核和胞质。是宫颈鳞状皮肿瘤性增生的重要标记物。是子宫颈上皮性肿瘤首选标志，与p53联合应用可以明确诊断。
177. BRCA1BRCA-1是一个乳腺癌易感基因，定位于染色体17q21，在细胞核中表达，为肿瘤抑制蛋白。BRCA-1主要用于肿瘤研究，检测BRCA-1可用于预测患乳腺癌危险和早期乳腺癌个体，并对患者的长期存活非常重要。
178.C-erbB-2C-erbB-2亦称neu或p185，其结构类似上皮生长因子受体EGFR。C-erbB-2阳性者预后不良，可作为恶性肿瘤的一个预后判断指标。是临床药物靶向冶疗的重要靶点。
179.C-fos c-fos是一种转录活化因子（AP-1），与C-jun原癌基因产物形成一种复合物，参与多个基因的转录和调节。主要用于各种类型的恶性肿瘤的研究。
180. C-kit（CD117）CD117是一种跨膜酪氨酸激酶受体，定位于细胞质，主要用于胃肠道间质瘤的诊断与鉴别诊断，它是GISTs最特异和敏感的标志。
181.GSTπ谷胱甘肽-S转移酶(GSTπ)是GST家族中的一种主要的同工酶，具有解毒功能，是肿瘤细胞产生耐药的一种标记，所介导的抗癌药物主要为顺铂等。对判断肿瘤细胞是否产生耐药更具有临床意义。
182. P-gp P-糖蛋白(Pgp)是多药耐药（MDR）基因编码的分子量为170KD的一种膜型糖蛋白，肿瘤细胞P170高度表达，提示肿瘤细胞对部分亲脂性药物产生耐药性。对肿瘤病人选择化疗方案和预后的判断具有重要的临床意义。
183.LRP 肺耐药相关蛋白(LRP)其作用通过细胞核与细胞间药物运转障碍，或药物进入胞质囊泡成房性分隔，使靶点药物有效浓度下降而产生耐药,对药物的选择具有重要意义。
184. 5-FU耐药标记5－Fu耐药标记亦称为胸苷酸合酶（TS），是广泛用于治疗实体瘤的抗癌药物氟尿嘧啶的重要靶点，TS的表达与5-Fu药物疗效明显相关，主要用于结、直肠癌、胃癌、头颈癌和乳腺癌的研究。
185. Laminin 层粘蛋白（Laminin）是基底膜中的一种糖蛋白，正常分布于基底膜和细胞外基质内，成纤维细胞、内皮细胞和平滑肌细胞,间接区分血管内皮和外皮源性肿瘤,间接提示该肿瘤的分化程度和浸润情况。
第二部分填空题
1．目前免疫荧光组化标记染色中应用最多的荧光素是，在荧光显微镜下呈现明显的色荧光。
2．常用的免疫酶组化标记染色的方法有和两大类，前者又可分和法，后者又可分为和。
3．单克隆抗体主要是应用技术制备的，其制备过程包括、
、、、和
。
4．原位PCR的基本步骤包括、、、和。
5．免疫酶组化常用的酶有和。
6．免疫组化前处理的方法之一，酶消化最常用的酶有、
和。
7．EnVision法检测组织抗原A，采用的主要试剂为a.DAB/H2O2; b.EnVision试剂; c. 抗A 抗原特异性抗体; d.苏木精。其滴加顺序为：第一步加，第二步加，第三步加，第四步加。若切片中抗原存在，则呈现。
8．请叙述常用的免疫组化方法、、
、和。
9．IHC抗原暴露常用有哪几种酶、和。以及胰酶的消化条件和。
10．免疫组化前处理的方法之一，酶消化最常用的酶有、
和。
11．EnVision法检测组织抗原CK，采用的主要试剂为a.DAB/H2O2; b.EnVision试剂; c. 抗CK抗原特异性抗体 d.苏木精。其滴加顺序为：第一步加，第二步加，第三步加，第四步加。若切片中抗原存在，则呈现。
12．用LsAB间接法检测组织抗原x，采用的主要试剂为：a.BCIP/NBT; b.抗x特异性抗体McAb; c.Streptavidin-AKP结合物和 d.b-SAMIgG，在切片上滴加试剂的顺序为：第一步加，第二步加，第三步加，第四步加。若切片中有抗原x存在，则呈现。
13. 常用的免疫组化对照染色有、和等。
14. 上皮源性肿瘤标志物、、和
等。
15．原位PCR的设计思想是将与相结合，原位检测组织细胞中低拷贝或单拷贝的特定序列，目前常用的技术有、、等。
16. S-P法检测组织抗原CK，采用的主要试剂为a.streptavidin-HRP；b.NBT/BCIP；c.CK;
d.b-SAMIgG 和
e. 核固红。其滴加顺序为：第一步加，第二步加，第三步加，第四步加，第五步加。若切片中抗原存在，则呈现。
17. T细胞淋巴瘤标记的常用抗体、、、、和等。
18. 常见的非特异性染色染色有、、和
等。
19．用LsAB法检测组织抗原x，采用的主要试剂为：⑴. AEC/H2O2；⑵.抗x特异性McAb；
⑶.Streptavidin-HRP；⑷b-SAMG；⑸苏木素；⑹抗原修复；⑺0.3%H2O2 ；⑻非免疫正常血清；⑼Bio-HRP在切片上滴加试剂的顺序为：第一步加，第二步加，第三步加，第四步加 ,第五步加 ,第六步加 ,第七步加 ,第八步 ,第九步加 ,等。若切片中有抗原x存在，则呈现颜色。20．原位PCR的设计思想是将与相结合，原位检测组织细胞中低拷贝或单拷贝的特定序列，目前常用的技术有、、等。
21．一个抗原往往有个抗原决定簇，用它免疫动物得到的抗体是抗体，用其免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓细胞融合的杂交瘤技术筛选产生的是抗体。22．按照抗原抗体反应的结构步骤，免疫荧光染色中以分为和
。
23.免疫组织化学常用的组织固定液主要有，和
。
24. 免疫组化染色中，其所用抗体的稀释度（工作浓度）主要与，
，，，和
等因素相关。
25. 免疫组化假阴性染色主要与，，
和等因素有关。
26. 按照抗原抗体反应的结构步骤，免疫荧光染色中以分为和
。
27.原位杂交技术的基本方法步骤分固定、玻片和组织切片的处理、
、,对照实验和结果的判断。
28. 目前原位杂交组化常用的探针有、
,和29. 目前原位杂交组化探针的标记方法有
,,,和化学修饰标记法。
30.在进行RNA原位杂交时,必须注意以下几点: ,
,,,,， , ，。
31. 细胞凋亡的形态学检测方法有、、、
、和透射电镜观察方法。
32. 荧光显微镜可以观察到、、
、等染色阳性的凋亡细胞。
33.细胞凋亡的形态学检测方法有、、、
等方法。
34.常用广谱上皮标志有、、、、
, 、、、
、等.
35.常用广谱间叶标志有Vimentin、Desmin, ,
、、
、和a-SMA等。
36. 常用的血管内皮标志有、、、
、,和D2/40、CD31等。
37. 常见神经性标志有、、、和Nestin 等。
38.广谱淋巴细胞标志有、、、、
和CD138、CD5等。
39. 中间丝由不同的蛋白质组成，依据其化学组成可分为六类，其中Ⅲ型有四种蛋白组成，分别为、、、。
40. 利用人体的某些细胞存在特定的细胞表面抗原，而在该细胞系之外很少表达。它具一定特异性，这些细胞发生肿瘤时，可高表达特异性抗原，成为肿瘤特异性抗体的结合标靶，利用肿瘤单抗可有效抑制和杀伤肿瘤细胞。这些标靶有、、、、和CD52等。
41. 用免疫组织化学CSA法检测组织中P16抗原，采用的主要试剂和步骤为：①McAbP16;
②.10%正常羊血清;③AR;④HRP标记兔抗小鼠IgG;⑤FITC标记酪胺--H2O2;⑥Streptavidin-AKP;⑦NBT/BCIP；⑧2%卵蛋白;⑨0.05M pH9.0 TBS(内含氯化镁和左旋咪唑);⑽羊抗FITC二抗;⑾2%核固红;⑿生物素化AKP;⒀生物素化马抗羊IgG,在切片上滴加试剂的顺序和操作流程为：第一步，第二步，第三步，第四步 ,第五步，第六步，第七步，第八步 ,第九步 ,第十步 ,第十一步 ,第十二步 ,第十三步 , 若切片中有P16抗原存在，则呈现 ,背景为。
42. 用免疫组织化学CSA法检测组织中P53抗原，采用的主要试剂和步骤为：①FITC标记酪胺--H2O2;②.10%正常羊血清;③AR;④HRP标记兔抗小鼠IgG;⑤McAbP53;⑥Streptavidin-AKP;⑦NBT/BCIP；⑧2%卵蛋白;⑨0.05M pH9.0 TBS(内含氯化镁和左旋咪唑);⑽羊抗FITC二抗;⑾2%核固红;⑿生物素化AKP;⒀生物素化马抗羊IgG,在切片上滴加试剂的顺序和操作流程为：第一步，第二步，第三步，第四步 ,第五步，第六步，第七步，第八步 ,第九步 ,第十步 ,第十一步 ,第十二步 ,第十三步 , 若切片中有P53抗原存在，则呈现 ,背景为。
43. 依据IHC阳性标记的显色程度常分为、和三种。
第三部分选择题(单选五选一)
1．免疫组化的主要任务是（）
A.对疾病进行分类
B.了解疾病机体的代偿功能
C.描述疾病病体内变化
D.示踪体内大分子或外来致病物质，辅助疾病诊断和预后评估
E.揭示疾病发生发展规律和机制
2．抗原的特异性决定于（）
A.抗原的分子量
B. 抗原决定簇的性质，数目的空间构型
C. 抗原的化学性质
D.抗原的免疫反应性
E.抗原异物性
3．下列有关免疫球蛋白与抗体关系叙述中，哪一种说法是正确的（）
A.抗体就是免疫球蛋白
B.抗体不是免疫球蛋白
C.抗体就是免疫球蛋白，而免疫球蛋白也就是抗体
D.所有抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白不一定都是抗体
E.免疫球蛋白与抗体无关
4．下列哪一项不属于肌源性肿瘤标记物（）
A．SMA B. EMA C. Myosin D. Desmin E. MSA
5．哪种酶不能用于抗体免疫球蛋白的标记（）
A. 辣根过氧化物酶
B.碱性磷酸酶
C.葡萄糖氧化酶
D.胰蛋白酶
E.酸性磷酸酶．
6．CSA法的叙说哪项不正确（）
A.其原理完全不同于LSAB法
B.可用于原位杂交和免疫组化的检测
C.其敏感性要高于PAP法和IGSS法
D. 是目前免疫酶组化最为敏感的方法之一
E.CSA法是一种催化信号放大系统
7．胃蛋白酶常用的条件（）
A.0.4%浓度，酸性, 37℃
B.1％浓度，中性，37℃
C.0.4%浓度，中性，37℃
D.0.4%浓度，碱性，37℃
E.0.01%浓度，酸性，室温
8．为免疫组化制作石蜡包埋组织块，哪项操作不合适？（）
免疫组织化学技术在病理诊断中的应用题 库2-0-8
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列标记可用来鉴别上皮样淋巴瘤和上皮样肉瘤的是（） A.CK B.calretinin C.LCA D.CgA E.CD68 CK为上皮性标志物；calretinin为间皮细胞肿瘤标志；CgA为神经内分泌标志物；CD68为组织细胞标志物。LCA为淋巴细胞标志物，因此可用来鉴别上皮样淋巴瘤和上皮样肉瘤。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]AFP为下列哪种肿瘤的标记物？（） A.宫内膜癌 B.黑色素细胞瘤 C.肝细胞癌 D.乳腺癌 E.鼻咽癌 AFP为肝细胞癌和内胚窦瘤的标志物；HMB45和S-100为黑色素细胞的标志物；ER和PR为乳腺癌和子宫内膜癌的分化标志物。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]关于小圆细胞肿瘤的描述，下列错误的是（） A.是一类细胞形态为小圆形的细胞 B.常规诊断基本可以明确诊断 C.免疫组化诊断胚胎性横纹肌肉瘤首选Desmin D.原始间叶性肿瘤诊断困难，可采取排除法 E.免疫组化诊断尤因肉瘤首选CD99 小圆细胞恶性肿瘤是病理学从镜下形态的分类，不能说明肿瘤的组织来源，需要免疫组化进一步诊断。 (吉林快3 https://www.doczj.com/doc/7b13876218.html,)
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列免疫组化结果有助于诊断皮肤Merkel瘤的是（）。 A.Vimentin（+），CK（+），NSE（-） B.Vimentin（-），CK（-），NSE（+） C.Vimentin（-），CK（+），NSE（-） D.Vimentin（-），CK（+），NSE（+） E.Vimentin（+），CK（-），NSE（+） 皮肤Merkel瘤可同时表达CK、NSE，而Vimentin常呈阴性反应。
免疫组化方法（冰冻切片） A. 所需溶液和试剂 1.二甲苯 2.无水乙醇（100% 和95%，变性无水乙醇，组织学级） 3.苏木精（可选） 4.固定剂：请参考产品说明书选取合适的固定剂。 a.10%中性福尔马林 b.丙酮 c.甲醇 d.3%甲醛溶液：配制时，将18.75 ml 16%甲醛溶液加入到81.25 ml 1X PBS中。 5.10X Tris缓冲盐水（10X TBS）：在800 ml蒸馏水中加入24.2 g 三羟甲基氨基甲烷（Trizma base ，C4H11NO3）和80 g 氯化钠（NaCl）。用浓盐酸将pH调节到7.6。 6.漂洗（缓冲）液：1 X Tris缓冲盐水（TBS）。100 ml 10 X TBS加900 ml水至1L。 7.甲醇/过氧化氢：配制时，将10 ml 30% H202加入到90 ml甲醇中。保存在-20°C。 8.封闭液：1X TBS / 0.3% Triton-X 100 / 5%正常山羊血清。 9.配制时，将500 μl山羊血清和30 μl Triton-X 100加入到9.5 ml 1X TBS中。 10.检测系统：根据厂家说明书使用。已有的检测系统*。 11.DAB试剂或合适的底物：按产品说明配制。 B. 切片 1.对于保存在-80°C的样品：切片前先从冰箱中取出放在-20°C平衡15分钟左右。这可以避免切 片时样品断裂。 2.将样品切成大约6-8 μm厚，铺在带正电性的玻片上。 3.固定前，可以把切片摊开放在实验台上风干几分钟。（这有助于切片贴紧玻片） C. 固定 注意：参考产品说明书（抗体）选择合适的固定剂 1.玻片上的切片风干后，选用如下合适的固定剂进行固定。 a.10%中性福尔马林：室温10分钟。立即进行染色操作。 b.冰丙酮：-20°C 10分钟。风干。立即进行染色操作。 c.甲醇：-20°C 10分钟。立即进行染色操作。 d.3%甲醛溶液：室温15分钟。立即进行染色操作。
免疫组织化学抗体试剂及检测试剂盒注册申报资料的基本要求 2013-01-04 01:48 免疫组织化学抗体试剂及检测试剂是指一类利用免疫学原理结合酶催化底物显色的化学方法，检测组织标本中抗原的检测试剂。此类试剂为待测抗原特异性单克隆或多克隆抗体，或抗体与显色系统、对照试剂、质控片及其它辅助试剂一同包装成试剂盒形式的检测试剂盒。该类产品检测项目繁多，应用广泛，检测过程为多步骤检测，影响因素多，在临床上主要用于检测细胞的特异性抗原以确定细胞的表型。该类产品的预期用途与诊断、鉴别诊断、预后判断、指导用药相关，按照三类体外诊断试剂管理。 基于该类产品临床应用的重要性及特殊性，根据目前注册申报工作的需要、依据《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》、《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》以及《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的相关规定，结合临床及病理检测中的应用实践、临床病理专家和生产企业的建议，现对免疫组织化学抗体试剂及检测试剂盒注册申报资料提出以下基本要求（对于本要求未提及的部分，申请人均应依据相关法规要求提交注册申报资料）。 本《要求》是在目前科学技术认识水平及现阶段免疫组化类产品技术审评基础上形成的，审评人员会密切关注相关技术的最新进展，随着认识的提高将适时调整。由于该类产品种类繁多，《基本要求》不能涵盖所有该类产品的特殊情况，如某些要求不适用，申请人也可采用其他方式证明产品的技术性能，建议申请人对此进行详细说明，并
提交相应的性能验证资料。 依据免疫组化不同标志物的临床应用情况，将其分为二个大类：A类：Her2/Neu、ER、PR、ALK、CD117、c-met、CD20、EGFR等与临床治疗、用药密切相关的标志物；其他全新标记物，具有新的临床意义。 B类：临床使用多个指标综合诊治的标志物之一，与辅助诊断、鉴别诊断、病情监测、预后相关标志物：如：Ki67、CK5/6等。 一、产品说明书 1. 【产品名称】：单独的第一抗体试剂通用名称建议采取以下命名方式：待测抗原特异性抗体+试剂（免疫组织化学法）。抗体与显色系统、对照试剂、质控片及其它辅助试剂一同包装成试剂盒形式的检测试剂盒通用名称建议采用以下命名方式：待测抗原+检测试剂盒（免疫组织化学法）。如：雌激素受体抗体试剂（免疫组织化学法）、孕酮受体检测试剂盒（免疫组织化学法）。 2. 【预期用途】：应明确检测的样本类型（冰冻和/或石蜡包埋等）；明确抗体的类型、克隆号、阳性着色特点；明确临床用途（诊断、鉴别诊断、预后判断、指导用药）；指明“对任何阳性或阴性结果的解读，应
免疫组化技术全程原理 一、概念和常用方法介绍 1、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 2、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。 3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。 4、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1）免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。 2）免疫酶标方法
免疫组织化学 傅琦博 引言 酶工程是生物工程的重要组成部分，近几十年来，随着研究手段的更新和技术水平的提高，产生了一门以研究酶在细胞内的存在及其动态，以阐明组织细胞的结构和功能为主要内容的科学——酶组织化学。酶组织化学是利用酶化学反应的产物可在光学显微镜或电子显微镜下被识别的特性，借以从形态学角度判定酶在组织细胞内的存在的部位的一门技术，其基础是组织化学。它具有将形态学、生物化学和生理学联系起来的特点，在生物学、生物化学、医学生物领域内日益发挥着重要的作用。研究组织细胞内特定酶分布的酶组织化学方法大致分为：（1）利用酶的活性反映的方法；（2）利用抗原抗体反应（免疫应答）证实酶的存在部位的方法。后者也被称之为免疫组织化学。 免疫组织化学概述 免疫组织化学简称免疫组化，是应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分，进行原位的定性、定位或定量的研究。这种技术称为免疫组织化学技术。免疫组化是利用抗体与抗原的结合具有高度特异性的特点，采用一直的抗体检测组织或细胞的抗原物质，以期确定组织或细胞是否存在未知抗原，并进行定性、定位或定量的研究。抗原与抗体结合形成的免疫复合物是无色的，故必须借助组织化学方法，将抗体抗原反应部位显示出来。它的主要研究方法是免疫组织染色法（简称免疫染色法），食用该方法检测细胞内物质，必须具备两个条件：①作为检测对象的物质须具有抗原性，能制作出与之相应的特异、高效价的抗体；②在免疫反应发生之前，目标物质要保持抗原性，同时还要保持在组织细胞内的稳定状态。要检测抗原，就要用与之相应的抗体进行免疫反应，同时要用可视的标记标出抗原或抗体，采用这种方法的免疫染色法称为标识抗体法或标识抗原法，常用的表示抗体法有直接法、间接法、补体结合法以及多重染色法等。直接法是标识要检出的抗原的抗体，然后进行反应的方法，其特异性高，但检出的敏感度不如间接法，标识抗体的食用范围手局限。间接法是以未标识的第一抗体进行反应，接着标识以第一抗体为抗原所制作的抗体（即第二抗体）进行重叠反应，间接的证明抗原，这种方法的缺点是容易出现非特异性反应，但敏感度较高，标识抗体的用途也广；补体结合法是将间接法中的第二抗体作为标识抗补体抗体食用；多重染色法则是在同一标本上检出多种抗原物质的方法，可以用反复进行的重复标记的直接法，也可以用酶标记的重复进行的间接法。此外，还有后标识抗体的免疫染色法，此法先采用未标识的抗体进行反应，反应结束后，通过免疫化学反应或其他化学反应，用适当的标记物质来识别已与组织细胞内抗原发生结合的抗体。 免疫组织化学技术的发展 免疫组织化学技术是形态学研究领域一门新兴方法学。自它问世以来发展迅猛,用“日新月异”一词形容它毫不过分。酶标免疫组织化学技术是由Nakane 等人于60 年代末期创立的最早的免疫酶组织化学技术,之后Sternberger 等人于70 年代初期便在此基础上建立了非标记抗体酶法(又称间接法) 和PAP 法(过氧化酶抗过氧化酶法) 。80 年代初期美籍华人Hsu 又建立了卵白素生物素复合物法(ABC法) ,自此之后,免疫金银染色法、免疫电镜等技术相继问世。80 年代末期人们又发现链霉菌抗生物素蛋白(或译成链霉菌亲合素,St reptavidin) 与生物素结合力极强,遂用它标记过氧化酶建立起了SP 法,或称LSAB 法(链霉菌亲合素生物素过氧化酶法) 。由于链霉菌亲合素不与人组织中的内源性生物素起非特异性结合反应,故背景染色更加清晰,且敏感性比ABC 法高4～8 倍,比PAP 法高8～16 倍。进入90 年代,免疫组织化学又向基因水平深入发展,与分子生物学技术的结合日益紧密。如原位杂交后信 号的放大与显示便是采用了免疫组织化学显色技术,因而又可称之为原位杂交免疫组织化学技术。而图象分析、流式细胞仪的运用，是免疫细胞化学定量分析技术提高到更精确的水平。现就该技术的发展及其应用作一概述。 1利用免疫荧光标记技术可以分辨出标记抗原抗体所在的位置及其性质, 并可利用荧光定量技术计算抗原(或抗体) 的含量, 以达到对定性、定位、定量测定的目的[2 ]。如黄祥瑞等人(1999) 利用免疫荧光细胞化学技术研究西藏环状病毒细胞生物学特性和敏感细胞范围(CPE) , 成功地观察到该病毒的细胞病变效应特异荧光发生的部位、细胞数量和病毒的形态发生。辛德毕斯热是由辛德毕斯病毒Sindbis V irus (SiN ) 引起的人兽共患虫媒病毒病, 1974 年南非发生辛德毕斯热大流行。1991年梁国栋等通
文读懂 免疫组化步骤、结果分析及注意事项 导语实验室花花师姐正在教导新来的师弟：想拿高分 文章，不学免疫组化怎么行？” 免疫组化王子毛博旁边插话： 是这个理，今天我就豁出去，将我十多年的心得和经验奉献给小师弟你了。”小师弟感激涕零，唯诺细听两位前辈的教诲免疫组化，免疫组织化学技术（immunohistochemistry ），是 项利用抗原抗体反应，通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对蛋白定位，定性的实验技术。免疫组化主要用的是组织标本和细胞标本两大类，组织标本包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片。石蜡切片，对组织形态保存好，保存时间也长，虽然对组织抗原暴露有影响，但可以抗原修复，所以石蜡切片仍然是首选的标本制作方法。免疫组化步骤详解免疫组化结果分析很多时候，我们千辛万苦地染出了一张张漂亮的免疫组化片子。但是却不知道如何正确地分析，得出理想的结果。这实在是一件憾事。 如下图，正常的结果应该是这样的：镜下细胞核呈蓝色，阳性结果呈深浅不一的棕色。结果分析主要有两种方法，阳性着色细胞计数法和评分法。前者是在40*光镜下，随机10 个视野下计数阳性着色细胞；后者则是在光学显微镜下按染色程度（0 分阴性着色，1 分淡黄色，2 分浅褐色，3 分深褐色）
和阳性范围（1分0-25%，2分26-50%，3分51-75%，4分76-100%）评分，最终分数相加。 免疫组化结果分析是毛博的特长，以下是他传授的独门绝技。 1.对照染色 和做实验的时候必须设立对照组一样，免疫组化也必须设立对照染色。没有对照染色的免疫组化结果是不可信的。对照 般有阳性组织对照，阴性组织对照，阴性试剂对照，自身 对照。般来说，有一个阳性组织对照和一个阴性组织对照 就足够了。 2.定位 抗原表达必须在特定部位。如LCA 应定位在细胞膜上；CK 应定位在细胞浆内；PCNA 及p53 蛋白应定位在细胞核内等等。不在抗原所在部位的阳性着色，不能视为确切的阳性结果。有可能是非特异性染色或者假阳性。不能确定怎么办？这就要用到上一段提到的对照染色了。 3.半定位 现在一般用图像分析系统进行定量。如果你的实验室不幸没有那么高大上的话，就只好赶鸭子上架，用肉眼定一下量了。 因为人为主观性比较强，所以只能称作半定量。免疫组化的 半定量一般就分为三级：弱（+ ），中++ ），强（+++ ）。以绿色免疫荧光为例，则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和
《酶组织化学与免疫组织化学技术》习题第一部分组织学技术和免疫组织化学技术 一、选择题 （一）A1型题(标准型) 1.C 2.B 3.A 4.C 5.A 8.B 9.C 10.D 14.A 23.D 1.免疫组化技术的关键步骤是 A.标本处理 B.抗体的处理与保存 C.免疫染色 D.设立对照试验 E.结果判断 2.免疫组化技术的首要试剂是 A.抗原 B.抗体 C.标记物 D.固定剂 E.洗涤液 3.酶免疫组化技术中，关于标本处理的说法正确的是 A.充分洗后于室温用0.3%H2O2和80%甲醇处理20～30min。 B.充分洗后于室温用0.3%H2O2和80%甲醇处理40～50min。 C.充分洗后于室温用0.5%H2O2和90%甲醇处理20～30min。 D.充分洗后于4℃用0.3%H2O2和80%甲醇处理20～30min。 E.充分洗后于4℃用0.3%H2O2和80%甲醇处理40～50min。 4.PAP法是Sterberger等于哪一年建立的 A.1950 B.1960 C.1970 D.1980 E.1990 5.PAP复合物中的酶是 A.辣根过氧化物酶 B.碱性磷酸酶 C.葡萄糖氧化酶 D.胃蛋白酶 E.胶原酶 8.PAP法中的“桥”是 A.第一抗体 B. 第二抗体 C. 第三抗体 D.亲和素 E.第四抗体 9.ABC技术由美籍华人Hsu于哪一年建立，已广泛应用于免疫学检测技术 A.1961
B.1975 C.1981 D.1985 E.1990 10.ABC法中的“桥”是指 A.第一抗体 B. 第二抗体 C. 第三抗体 D.亲和素 E.链霉素亲和素 14.免疫组化法吸收试验是用过量已知抗原与抗体在多少度以下充分反应，离心后再行免疫组化染色 A.4℃ B.20℃ C.40℃ D.37℃ E.50℃ 23．PAS反应是检测组织内的： A.核酸 B.脂 C.蛋白质 D.多糖 E.抗原 一、填空 1、免疫组织化学中最常用的标记物是__荧光素________、___酶_________ 、____生物素和亲和素_______、___________。原位杂交组织化学中常用的标记物有___________和___________两大类。 2、常用的粘附剂有__________、____________ 、__________等。 3、抗原决定簇是指_____________分子表面的、具有活性的___________。 4、一般组织化学是利用化学或物理反应，在组织标本上加入一定的_____________，使其发生反应，形成_____________，能在显微镜下观察。常用于检测__________、____________ 、__________等。 5、酶组织化学是利用酶对其____________的催化作用，生成__________，再与某种__________反应，形成____________沉淀，检测___________分布及活性的方法。常用的方法有___________ 、___________、____________、__________和____________。 6、最常用于显示细胞、组织内的多糖和蛋白多糖的方法是过碘酸-雪夫反应PAS。 7.、免疫染色对特殊标本的进一步处理常用________和________法。 8、免疫组化中最常用的制片方法是________和________。 9、免疫组化染色后，阳性细胞的染色分布有三种类型，分别是_________、_________ 和_______。
免疫组化技术 免疫组化技术
业精于勤而荒于嬉 行成于思而毁于随
免疫组化技术
原理
抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色 来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。 众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取 出来，以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并 用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物，将抗原放大，由于抗 体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂 DAB 显示 为棕黄色颗粒） 。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产 物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨 基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
分类（常用）
1、免疫荧光方法
最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内 的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某 种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较 广。
2、免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后， 60 年代发展起来的技术。 于 基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用， 然后加入酶的底物， 生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标 技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种 标记方法，目前在病理诊断中广为使用的当属 PAP 法（过氧化物酶-抗过氧化物酶） 、ABC 法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物） SP 、SP 、即用型二步法（聚合物链接）等。 法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶） 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）
3、免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白 的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌 A 蛋白)等作为 探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免 疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银 加强的免疫金银法则更便于光镜观察。
4、免疫铁蛋白法 5、放射免疫自显影法
标本
1、组织标本：石蜡切片 石蜡切片（病理切片和组织芯片） 、冰冻切片 石蜡切片 2、细胞标本：组织印片、细胞爬片、细胞涂片
---------------------------------------------------------------------------------华中科技大学同济医学院
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病理学技术(主管技师)：免疫细胞化学技术考点 考试时间：120分钟 考试总分：100分 遵守考场纪律，维护知识尊严，杜绝违纪行为，确保考试结果公正。 1、单项选择题 与ABC 法有关的复合物是（ ）A.抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物 B.过氧化物酶-抗过氧化物酶 C.碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶 D.链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物 E.抗体-亲和素-生物素过氧化物酶复合物 本题答案： 2、单项选择题 凝集素是指（ ）A.一种从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因能凝集红细胞，因而得名 B.一种从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提纯的脂蛋白或 能与脂类结合的脂蛋白lE.以AS-MX 为底物、FB/FR 为发色剂时呈蓝色／红色 本题答案： 4、单项选择题 下列有关HRP 的描述，错误的是（ ）A.ICC 染色最为常用的醇 B.特异底物为AS-MX C.在酶反应部位呈棕褐色 D.常用戊二醛作为耦联剂 E.最适pH5～5.5 本题答案： 5、单项选择题 姓名：________________ 班级：________________ 学号：________________ --------------------密----------------------------------封 ----------------------------------------------线----------------------
EPOS法（）A.把生物素耦联到特异性第一抗体上，将生物素化抗体直接和ABC复合物结合 B.先用PAP法，然后用ABC法 C.先用PAP法，后用LAB法 D.抗体亲和素-生物素-过氧化物酶复合物的一步法 E.HRP-多聚化合物-特异性抗体复合物一步法 本题答案： 6、单项选择题 免疫组织化学染色Envision法的原理是（）A.将亲和素-生物素-过氧化物酶复合物中的亲和素替换为链亲和素，特异性更高 B.利用线状的葡聚糖分子与大量的AP或HRP酶结合，再将葡聚糖-酶复合物连接到第二抗体上，形成酶-葡聚糖-第二抗体复合物，灵敏度高 C.用AP取代PAP法的过氧化物酶而成，显色对比好 D.将游离酶和抗酶抗体制成稳定的酶-抗酶抗体复合物 E.通过复合物中亲和素的桥梁作用，将亲和素-生物素-过氧化物酶复合物与生物素化的抗体结合在一起，达到检测抗原的目的 本题答案： 7、单项选择题 酶桥染色法中的桥抗体是指（）A.免疫反应系统中的特异性抗体 B.显色系统中的抗酶抗体 C.第二抗体 D.第一抗体 E.以上均不对 本题答案： 8、单项选择题 PAP-ABC法（）A.把生物素耦联到特异性第一抗体上，将生物素化抗体直接和ABC复合物结合 B.先用PAP法，然后用ABC法 C.先用PAP法，后用LAB法 D.抗体亲和素-生物素-过氧化物酶复合物的一步法 E.HRP-多聚化合物-特异性抗体复合物一步法
免疫组织化学及其应用 浙江大学病理学与法医学研究所 周韧 1．免疫组织化学的历史、现状和发展 1．1．历史 ●人类的历史有多长，医学的历史也就有多长.医学的任何一个进步都是建立在当 时科学与技术发展的相应水平上的. ●医学的目的: 解除人体的病痛 ●核心: 诊断和治疗。 任何疾病的有效治疗均来源于正确的诊断。●疾病的诊断手段准确性，首推病理诊断准确性高，即病理组织学诊断。更准确、 更可信、更有权威性。 ●免疫组织化学（以下简称免疫组化）已成为病理诊断中的一种常用手段。 病理诊断发展过程的主要事件 年代作者事件 1632年 Severino 肿瘤切开后观察的书 1661年 Malpighi 放大镜观察后的报告 1761年 Morgagni 肿瘤与外科方面的书 1829年 Horner 首篇病理论文 1832年Hodgkin 报告7例尸检结果的论文 1858年Virchow 发表《细胞病理学》 1863年 Paget 发表《外科病理学》 1897年 Mallory和Wright 发表组织学技术的书 1914年 Mallory 发表《细胞组织学原则》 1919年 Ewing 发表《肿瘤病》 1924年 McFarland 发表《外科病理学》 1926年 Karsner 发表《人体病理学》 1928年 Papanicolaou 发表细胞学方面的书 1951年电镜应用于病理诊断 1974年免疫组化用于病理诊断 ●诊断病理学开始于19世纪 ●20世纪的第二个25年中达到光学显微镜诊断的辉煌。随之而起的电子显微镜 ●20世纪第三个25年中成为诊断病理的发展高峰。
●进入20世纪最后25年，取而代之的便是免疫组化了。 1．2．免疫组织化学的发展 1．2．1．免疫学的发展 1．2．2．单克隆技术的出现 ●病理诊断的确立：是找到“特征性”形态表现。 常规苏木素伊红（HE）染色 几百种的“特殊染色” ●免疫组织化学产生： 抗原抗体结合原理 ●从组织细胞水平进行抗原抗体反应，于是就了免疫组织化学技术。 主要的发展过程 年代研究者事件 1941年 Coons 实用免疫荧光技术 1948年 Fagraeus 进一步发展免疫荧光技术 1970年 Sternberger 抗体酶标记技术 1974年 Taylor 证实组织中的浆细胞免疫 1975年 Kohler和Milstein 单克隆抗体技术 1981年 Hsu ABC法 90年代以来 SP法，原位杂交及原位PCR免 疫组化法
免疫组织化学技术（ABCxx） 大鼠脊髓冰冻切片或细胞爬片依次入含3%Triton-x100 和 0.03%H 2O 2的 0.01%磷酸盐缓冲液（PBS, pH 7.4 ），室温30min ;含3%牛血清白蛋白（BSA, Sigma的PBS室温30 min; 豚鼠抗HAP1抗体（1:300）, 4C孵育48h; PBS漂洗3次，每次10min;生物素化羊抗豚鼠IgG（1:200）室温2小时；PBS漂洗3次，每次10min; ABC复合物（1:100）, 2小时；PBS漂洗3次，每次10min ;含 0.03%DAB 和 0.006%H 2O 2 的Tris 盐酸缓冲液（pH 7.6）室温13mi n;常规脱水、透明、树脂封片，显微镜观察、拍照。以上免疫染色以PBS缓冲液替代一抗作阴性对照。 鞘内注射HAP1-siRNA后大鼠脊髓HAP1表达水平的变化。A示对照组大鼠脊髓背角HAP1免疫反应性，B示RNAi组大鼠脊髓背角HAP1免疫反应性强度减弱。C示RNAi后大鼠脊髓HAP1表达水平的免疫印迹检测。D示RNAi后大鼠脊髓背角免疫反应强度变化的统计学分析, *示与对照组比较, P< 0.01。比例尺为100 am。E示RNAi后大鼠脊髓HAP1蛋白含量变化的统计学分析, ▲示与对照组比较, P< 0.01。 免疫荧光双标技术
脊髓切片或生长在盖玻片上的PC12细胞依次入含3%Triton-100的PBS室温30min，含2%正常羊血清(NGS和3%BSA的PBS室温30min,入豚鼠抗HAP1 抗体(1:3000)和兔抗NK1R(1:100) 4C 孵育48h; PBS漂洗 3 次，每次10 min，加入RodamineRed或FITC标记的驴抗豚鼠或兔IgG (1:500),室温闭光2h, PBS闭光漂洗3次，每次10min，含10%甘油的PBS封片。荧光显微镜观察，FITC用488nm 氩氪激光激发，用530-560nm滤光片检测；Rodamine Red用543nm 氩氪激光激发,用570nm 滤光片检测。 HAP1和NK1R在大鼠脊髓背角中的定位关系。A示荧光标记的脊髓灰质背角浅层表达的HAP1, B示荧光标记的脊髓灰质背角浅层表达的NK1R C示A和 B的重叠图像。箭头示HAP1和NK1R双标细胞。 比例尺为20 am。 细胞进行处理后,弃培养基,用 0.01MPBS漂洗3遍。加入4%多聚甲醛固定30min。PBS漂洗3遍。 加入3%Triton-x 100的PBS室温30 min;含2%正常驴血清(NGS和3%BSA 的PBS室温30 min;分别加入小鼠抗MAP2单克隆抗体(1:200, Neuro-Marker 公司)或兔抗mGluR5多克隆抗体(1:1000, sigma公司)或兔抗NSE多克隆抗体 (1: 100,北京中山生物技术公司)4C孵育48h; PBS漂洗3次，每次 10min;入Rodamine Red标记的驴抗兔/小鼠IgG (1:500, Jackson ImmunoResearch Laboratories，室温闭光3h; PBS闭光漂洗3 次，每次10 min;含10%甘油的PBS封片。激光共聚焦显微镜(Olympus FV500观察，EGFP用 488nm氩氪激光激发，用530-560nm滤光片检测；RodamineRed用543nm 氩氪激光激发,用570nm 滤光片检测。
免疫组织化学技术题 库1-2-10
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫组化技术的优点不包括（）. A.高特异性 B.高敏感性 C.形态学的直观性 D.精确定量分析 E.能对抗原表达情况进行分析 免疫组化技术重要的特点是形态学的直观性，用于抗原表达的定性分析，不能精确定量。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫组织化学技术中，必须保证组织材料（）. A.取材新鲜 B.形态保存良好 C.抗原物质的抗原性不被破坏 D.以上均包括 E.以上均不包括 取材必须新鲜、形态保存良好、抗原性不被破坏。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫细胞组织化学技术包括（）. A.酶免疫组织化学技术 B.荧光免疫组织化学技术 C.亲和素免疫细胞组织化学技术 D.以上均包括 E.以上均不包括 免疫细胞组织化学技术包括以上所有。 (NBA总冠军 https://www.doczj.com/doc/7b13876218.html,/)
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫标记电镜技术获得成功的关键是（）. A.对细胞超微结构完好保存 B.保持被检细胞或其亚细胞结构的抗原性不受损失 C.选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合 D.以上叙述都正确 E.以上均不正确 上述均为免疫标记电镜的成功关键。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]胶体金是氯金酸在何者的作用下聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态（）. A.还原剂 B.氧化剂 C.变构剂 D.化学物质 E.以上都不对 氯金酸在还原剂如白磷、维生素C等的作用下还原为金颗粒。
免疫组化的相关知识！ 一、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC) 免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组织化学染色技术不仅有较高的敏感性和特异性，其特点是将形态学改变与功能、代谢变化结合起来，直接在组织切片，细胞涂片或培养细胞爬片上定位一些蛋白质和多肽类物质的存在，并可精确到亚细胞结构水平，结合电子计算机图像分析系统或激光扫描共聚集显微术等技术，对被检物质进行定量分析。 二、免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些？ 实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。 三、石蜡切片为什么要做抗原修复？有哪些方法？ 石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。 常用的抗原修复方法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等，常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。 四、免疫组化实验用抗体的选择 1、一抗选择要点 (1)选择单克隆还是多克隆抗体。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体，单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合，就象导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对较低；而多克隆抗体特异性稍弱，抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色(可以通过封闭等有所避免)。 (2)种属来源。一般家兔来源的抗体多是多克隆；而小鼠来源的抗体多是单克隆，但也有另外。这条主要要与后面的二抗来源相匹配。 (3)实验目的是检测什么种属的抗原，即species reactivity。这一点很重要，一般说明书
免疫细胞化学技术题 库9-2-10
问题： [单选,A1型题]应用尚无文献报道的抗血清或自己制备的抗血清进行免疫酶组织细胞化学染色时，必须设置的对照是（） A.交叉实验 B.替代实验 C.吸收实验 D.置换实验 E.阳性对照
问题： [单选,A1型题]可引起免疫酶组织化学染色假阳性的是（） A.组织内待检抗原过多 B.内源性过氧化物酶丰富 C.洗液用TBS缓冲液 D.抗体浓度过低 E.抗体特异性高
问题： [单选,A1型题]免疫酶组织化学染色中过氧化氢液的作用是（） A.提高抗原抗体的识别能力 B.减少内源性过氧化酶的活性 C.修复抗原 D.提高敏感性 E.激活抗原 https://www.doczj.com/doc/7b13876218.html,/ 月子病
问题： [单选,A1型题]ABC法的基本原理是（） A.利用抗卵白素分别连接卵白素标记的第二抗体和卵白素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原 B.利用抗卵白素分别连接卵白素标记的第一抗体和卵白素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原 C.利用抗生物素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原 D.利用抗生物素分别连接生物素标记的第一抗体和生物素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原 E.利用抗地高辛分别连接生物素标记的第一抗体和生物素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原
问题： [单选,A1型题]BRAB法的基本原理是（） A.用生物素标记抗体，然后与生物素和酶形成复合物 B.用生物素分别标记抗体和酶，然后以抗生物素为桥，把两者连接起来 C.用卵白素标记抗体，然后与卵白素和酶形成复合物 D.用卵白素分别标记抗体和酶，然后以抗卵白素为桥，把两者连接起来 E.用亲和素分别标记抗体和酶，然后以抗亲和素为桥，把两者连接起来
编号：１－２ 主题：免疫组化技术 概述： 免疫组织化学（Immunohistochemistry）是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测的技术。凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。 免疫组织化学染色方法分类： 1、按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。 2、按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）；与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。 3、按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等。 目的： 对所研究的大分子如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等进行
定位，进而深入研究其功能。 原理： 1、免疫荧光方法 免疫荧光方法是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。 2、免疫酶标方法 免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。 3、免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至
免疫组织化学技术题 库1-0-8
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫组织化学技术中，对固定剂的要求不包括（）. A.能快速固定抗原 B.能防止抗原物质扩散 C.固定后的抗原能被抗体识别 D.具有氧化活性 E.以上均不正确 固定剂的要求为快速固定抗原、防止抗原物质扩散、固定后的抗原能被抗体识别。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]不同的胶体金颗粒有不同的适用范围，其中5nm以下颗粒适用于（）. A.标记抗原或组织化学法检测 B.液相免疫检测 C.免疫沉淀试验 D.以上都对 E.以上都不对 5nm以下的胶体金颗粒较小，可以用于标记抗原或用于组织化学检测。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫组化技术的优点不包括（）. A.高特异性 B.高敏感性 C.形态学的直观性 D.精确定量分析 E.能对抗原表达情况进行分析 免疫组化技术重要的特点是形态学的直观性，用于抗原表达的定性分析，不能精确定量。(gta5手机版 https://www.doczj.com/doc/7b13876218.html,/)
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫组织化学技术中，必须保证组织材料（）. A.取材新鲜 B.形态保存良好 C.抗原物质的抗原性不被破坏 D.以上均包括 E.以上均不包括 取材必须新鲜、形态保存良好、抗原性不被破坏。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫细胞组织化学技术包括（）. A.酶免疫组织化学技术 B.荧光免疫组织化学技术 C.亲和素免疫细胞组织化学技术 D.以上均包括 E.以上均不包括 免疫细胞组织化学技术包括以上所有。
目录： 1.常用于免疫荧光组织化学染色的荧光素 (1) 2.免疫荧光组织化学基本原理及荧光抗体再染色 (2) 3.免疫荧光组织化学技术的荧光…………………………………….3,4 4.免疫组织化学染色结果评价 (4) 5.免疫组织化学对照实验 (5) 6.免疫组织化学技术应用的基本原则……………………………….5,6 7.SABC法与其他免疫组织化学染色方法比较…………………….6,7 8.免疫组织化学技术疑难问题剖析………………………………….7,8 9.免疫荧光组织化学基本原理及荧光抗体再染色…………………8,9 10.非特异性荧光染色的消除 (9) 11.荧光显微镜的基本操作及注意事项……………………………..9,10 12.补体法免疫荧光组织化学染色步骤……………………………11,12 13.双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤 (11) 14.间接法免疫荧光组织化学染色步骤 (12) 15.双重免疫荧光标记法 (13) 16.免疫荧光组织化学直接法 (13) 17.免疫荧光组织化学间接法 (14)
1.常用于免疫荧光组织化学染色的荧光素 常用于免疫荧光组织化学染色的荧光素有：异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)、四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rhodamine isothioeyanate，TRITC)、四乙基罗丹明(tetraethyl rhodamine B200，RB200)、得克萨斯红(Texas red)、藻红蛋白(phycoerythrin，PE)、花青类(cyanine，如Cy3、Cy5)等。此外还有一些新型荧光染料，如量子点。 (1)异硫氰酸荧光素(FITC)：FITC性质稳定，易溶于水和乙醇，能与蛋白质结合，是检测组织细胞内蛋白质最常用的荧光探针。它还能标记抗体，可用于免疫组织化学单染或多重染色。缺点是在光照下易淬灭，易受自发荧光影响。最大激发光波长为490nm；最大发射光波长为525nm，呈现黄绿色荧光。 (2)四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)：该荧光素能与细胞内蛋白质结合，比FITC稳定性好，在生理条件下对pH值变化不敏感，荧光强度受自发荧光干扰小。最大激发光波长为550nm；最大发射光波长为 620nm，呈橙红色荧光，与FITC发出的黄绿色荧光对比鲜明，常用于免疫荧光组织化学双重染色。 (3)四乙基罗丹明(RB200)：能与细胞内蛋白质结合，不溶于水，易溶于乙醇和丙酮，性质稳定，可长期保存，广泛应用于双标记示踪染色。最大激发光波长为570nm，最大发射光波长为595-600nm，呈橙红色荧光。 (4)花青类染料：常用的有Cy3、Cy5等，能与细胞内蛋白质结合。这类染料的荧光特性与传统荧光素 类似，但水溶性和对光稳定性较强，荧光量子产率较高，对pH等环境不敏感。常用于多重染色。Cy3最大激发光波长为570nm，最大发射光波长为650nm，呈绿色荧光。但是，在绿光光谱波长激发下，Cy3也可出现红色荧光。Cy5的最大激发光波长为649nm，最大发射光波长为680nm，呈红色荧光。由于Cy5的最大发射波长为680nm，很难用裸眼观察，而且不能使用高压汞灯作为理想的激发光源，因此，使用普通荧光显微镜时，不推荐使用Cy5。通常观察Cy5时需使用激光扫描共聚焦显微镜。 (5)乙酸甲酯：其本身不发荧光，但透膜进入细胞质后，在酯酶的作用下转变为具有荧光特性的乙酸甲酯。其激发光谱有pH依赖性，是使用最多的细胞内pH荧光指示剂。最大激发光波长为505nm，最大发射光波长为530nm，呈绿色荧光。 (6)Indo-1：是典型的双发射荧光探针。无钙时在485nm左右有发射峰，结合钙后，则在405nm处有发射峰，两者的比值与细胞内游离钙离子浓度成线性关系，将此比值与标准曲线相比即可得出细胞内游离钙浓度，因此，可利用此探针定量检测细胞内游离钙离子浓度。最大激发光波长为330/346nm，最大发射光波长为405/485nm，呈紫色(405nm)或青色(485nm)荧光。 (7)量子点(quantum dot)：是近年来研制的一种新型荧光染料，又称半导体纳米晶体(semiconductor nanocrystal)，是由几百或几千个纳米级颗粒构成的半导体材料，性质稳定，溶于水，细胞本身不能合成和组装。量子点具有荧光时间长、产生多种颜色、检测方便和应用范围广等优点。当某一波长的激发光对多种大小不同的量子点进行照射时，可以同时观察到多种颜色，因而可同时进行多个目标的观察和检测。量子点可与抗体、链霉亲和素等多种分子进行耦联，检测靶分子的分布和功能。