实验一质粒的提取酶切
实验目的
掌握质粒小量快速提取法。用琼脂糖凝胶电泳法鉴定其纯度。
实验原理
质粒是一种染色体外的稳定遗传因子。大小在1~200kb之间，具有双链闭合环状结构的DNA分子。主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。他可独立游离在细胞质内，也可整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能却赋予宿主细胞的某些表型。
采用溶菌酶可破坏菌体细胞壁，十二烷基磺酸钠（SDS）可使细胞壁裂解，经溶菌酶和阴离子去污剂（SDS）处理后，细菌DNA缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒DNA则留在上清液中。用酒精沉淀洗涤，可得到质粒DNA。
在细胞内，共价闭环DNA（cccDNA）常以超螺旋形式存在。若两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫作开环DNA（ocDNA）。在电泳时，同一质粒如以cccDNA形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度都快，因此在本实验中，质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。
限制性内切酶是一种工具酶，这类酶的特点是具有能够识别双链DNA分子上的特异核苷酸顺序的能力，能在这个特异性核苷酸序列内，切断DNA的双链，形成一定长度和顺序DNA片段。EcoR I和Bgl II的识别序列和切口是：EcoR I：G↓AATTC
Bgl II: A↓GATCT
G，A等核苷酸表示酶的识别序列，箭头表示酶切口。限制性内切酶对环状质粒DNA有多少切口，就能产生多少酶切片段，因此鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断酶切口的数目，从片段的迁移率可以大致判断酶切片段大小的差别。用已知分子量的线状DNA为对照，通过电泳迁移率的比较，就可以粗略推测分子形状相同的未知DNA的分子量。
实验步骤
（一）质粒的提取
ɑ的大肠杆菌接种于5ml含100μg/ml氨苄青霉素的1.培养细菌将带有质粒DH
5
1×LB中，37℃培养过夜。
2.取液体培养菌液1.5ml置塑料离心管中，10 000r/min离心lmin，去掉上清液。加入150μl溶液I，充分混匀，在室温下放置10min。
3.加入200μl新配制的溶液II，加盖后温和颠倒5~10次，使之混匀，冰上放置2min。
4.加入150μl冰冷的溶液III，加盖后温和颠倒5~10次，使之混匀，冰上放置10min。
5.用台式高速离心机，10 000r/min离心5min，将上清液移入干净的离心管中。
6.向上清液中加入等体积酚/氯仿（1：1，v/v），振荡混匀，转速10 000r/min，离心2min，将上清液转移至新的离心管中。
7.向上清液加5mol/LNaCl至终浓度为0.3mol/L，混匀，再加入2倍体积无水乙醇，混匀，室温放置2min，离心5min，倒去上清乙醇溶液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。
8.加0.5ml 70%乙醇，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或室温自然干燥。
9.加入50μl含RNase A 20μg/ml的TE缓冲液溶解提取物，室温放置30min
以上，使DNA充分溶解待用或置-20℃备用
（也可用试剂盒按操作步骤提取质粒）
10.将抽提出来的质粒进行琼脂糖凝胶电泳
（二）质粒的酶切和鉴定
质粒DNA酶切的加样
重组质粒5μL
10× buffer1μL
Bgl II1μL
EcoR I1μL
ddH2O 2μL
加样后的进行金属浴 4h ℃
再进行琼脂糖凝胶电泳
结果与分析
实验二阳性重组质粒的抽提及双酶切鉴定 实验目的：练习质粒的抽提及双酶切的实验过程，熟悉相关操作。 实验材料及设备 pMD-T重组质粒；内切酶Xba I 及Pst I；10×M Buffe r；琼脂糖；电泳仪及电泳所需试剂。 实验步骤 A 大肠杆菌的扩繁及质粒DNA碱裂解法抽提 挑取筛选平板上的白色菌落， 接种到5ml LB液体培养基(含100μg/ml Amp)中， 37℃振荡培养约12小时至对数生长后期 ↓ 取培养液倒入2 ml eppendorf管中，4℃下12000 rpm离心2分钟，去上清 ↓ 沉淀中加入150 μl溶液I（50 mmol/L 葡萄糖,25 mmol/L Tris.Cl (pH8.0),10mmol/L EDTA (pH8.0)）， 剧烈振荡使菌体悬浮，室温下放置5分钟 ↓ 加入250 μl新配制的溶液II (0.2 mol/L NaOH, 1％SDS, 临用前配制) 盖紧管口，快速温和颠倒eppendorf管数次， 以混匀内容物(千万不要振荡)，室温下放置5分钟 ↓ 加入180 μl预冷的溶液III （5 mol/L KAc 60ml, 冰醋酸11.5ml, H2O 28.5ml, 定容至100ml , 并高压灭菌） 盖紧管口，并倒置离心管，温和振荡10秒，使沉淀混匀 ↓ 冰浴10分钟，4℃下12000rpm离心10分钟 ↓ 上清液移入干净eppendorf管中，计算体积 ↓ 加入各1/2体积的Tris-饱和酚以及氯仿/异戊醇(24：1)，混匀 20℃下12000 rpm离心10分钟，取上清, 计算体积 ↓ 加等体积的氯仿/异戊醇（24：1），12000 rpm离心10分钟 ↓ 将上清移入干净eppendorf管中，计算体积 ↓ 加入2倍体积的无水乙醇 ↓ 混匀后置于-20℃冰箱中30分钟
word基本操作实验报告 一、实验目的与要求 1．掌握word的基本操作； 2．掌握字符格式、段落格式和页面格式等排版技术； 3．掌握图文混排、表格处理和邮件合并技术； 4．熟悉个人名片或毕业论文的设计与制作； 5．学会自己提出问题，并得出解决问题的方法。 二、实验内容与方法 1．word的基本操作，通过上机摸索，并查阅书籍网络了解。 2．word的字符格式，段落格式和页面格式等排版技术，通过上机摸索，并查阅书籍网络了解。 3．word的图文混排、表格处理和邮件合并技术，通过上机摸索，并查阅书籍网络了解。 4. 通过word进行个人名片或毕业论文的设计与制作，通过上机摸索，并查阅书籍网络了解。 三、实验步骤与过程 1.word的基本操作：①启动word软件 (1) 启动“开始”菜单中的microsoft word程序 (2) 双击资源管理器或“我的电脑”中的c:\program files\microsoft office\office11\winword.exe程序 (3) 双击word 文档文件（*.doc） (4) 双击桌面上的word图标 (5)开始-运行-输入“winword”②认识word2003窗口（1）标题栏位于屏幕最顶端的是标题栏，由控制菜单图标、文件名、最小化按钮、最大化（还原）按钮、关闭按钮组成。（2）菜单栏 菜单栏位于标题栏下面。使用菜单栏可以执行word的许多命令。菜单栏共有九个菜单：文件、编辑、视图、插入、格式、工具、表格、窗口、帮助。当鼠标指针移到菜单标题上时，菜单标题就会凸起，单击后弹出下拉菜单。在下拉菜单中移动鼠标指针时，被选中的菜单项就会高亮显示，再单击，就会执行该菜单所代表的命令。如“文件”—“打开”，就会弹出“打开”文件对话框。（3）工具栏 标题栏下面的是工具栏，使用它们可以很方便地进行工作。通常情况下，word会显示【常用】和【格式】两个工具栏。 “常用”工具栏：新建、打开、复制、粘贴、打印、撤消、恢复等“格式”工具栏：字体、字号、下划线、边框、对齐方式等 如果想了解工具栏上按钮的简单功能，只需将鼠标指针移到该按钮上，过一会儿旁边会出现一个小框，显示出按钮的名称或功能。 word窗口中可以有许多工具栏，可以根据需要在“视图”—“工具栏”中增加或减少工具栏。每一个工 具栏都可以用鼠标拖动到屏幕的任意位置，所以又称为浮动工具栏。工具栏内图标按钮体现了“菜单栏”中的一些主要功能。我们可以利用这些按钮进行相应操作。如我要打开一个文件，除了可以使用菜单栏外，还可以使用工具栏上的按钮。 （4）编辑窗口 再往下的空白区域就是word的编辑窗口，输入的文字就显示在这里。文档中闪烁的竖线称为光标，代表文字的当前输入位置。（5）标尺 在编辑窗口的上面和左面有一个标尺，分别为水平标尺和垂直标尺，用来查看正文的高度和宽度，以及图片、文本框、表格的宽度，还可以用来排版正文。（ 6）滚动条在编辑窗口的右面和下面有滚动条，分别为垂直滚动条和水平滚动条，用来滚动文档，显示在屏幕中看不到的内容。可以单击滚动条中的按钮或者拖动滚动框来浏览文档。（7）显示方式按钮
实验报告 实验名称 课程名称 ___电子技术基础实验 院系部:专业班级：学生姓名：学号 :同组人:实验台号 :指导教师：成绩：实验日期 : 华北电力大学
实验报告要求： 一、实验目的及要求 二、仪器用具 仪器名称规格/型号数量备注 实验箱1 示波器1 数字万用表1 交流毫伏表1 信号放生器1 三、实验原理 四、实验步骤（包括原理图、实验结果与数据处理） 五、讨论与结论（对实验现象、实验故障及处理方法、实验中 存在的问题等进行分析和讨论，对实验的进一步想法或改进意见。） 六、实验原始数据
一、实验目的及要求： 1.学会放大器静态工作点的调试方法，分析静态工作点对放大器性能的影响。 2.掌握放大器电压放大倍数和最大不失真输出电压的测试方法。 3.悉常用电子仪器及模拟电路实验设备的使用。 二、仪器用具：略 三、实验原理 图 1.2.1为电阻分压式工作点稳定单管放大器实验电路图。 图 1.2.1共射极单管放大器实验电路 在图 1.2.1电路中，当流过偏置电阻R B1和 R B2的电流远大于晶体管VT 的基极电流I B时（一般 5～ 10 倍），则它的静态工作点可用下式估算： R B1U CC I E U U I C CE＝U CC－I C（R C＋R F1+ R E） U B R B2B U BE R B1R E R F1 电压放大倍数： A Vβ R C //R L 其中 r be＝ 200+26 (1+β)/I E r be(1)R F 1 输入电阻： R i＝ R B1 // R B2 // [r be+(1+β)R F1 ] 输出电阻： R O≈ R C 四、实验方法与步骤: 1.调试静态工作点 接通＋ 12V 电源、调节R W，使 U E＝ 2.0V ，测量 U B、 U E、U C、 R B2值。记入表 1.2.1 。 表 1.2.1U＝ 2.0V E 测量值计算值U B（ V）U E（ V）U C（ V）R B2（KΩ） U BE（ V） U CE（ V） I C（ mA） 2.665 2.07.8530.865 5.2 2.0 根据表格测量数据，计算得到： U=U -U E =0.665V，U = U - U E =5.8V,I ≈ I = U /R =2/(1.1)=1.82mA BE B CE C CE EE 实验数据显示，Q点的值满足放大电路的静态工作点要求，BJT 处于放大区。 2.测量不同负载下的电压放大倍数
广东商学院华商学院 实验报告 课程名称计算机应用基础 实验项目名称Word综合练习 班级 实验室名称（或课室） 专业 任课教师黄晓兰 学号： 姓名： 实验日期：年月日
姓名实验报告成绩 评语： 指导教师（签名） 年月日说明：指导教师评分后，实验报告交院（系）办公室保存。
实验报告 一、实验目的 运用Word 2003的整个章节中各知识，综合对文档进行编辑排版。 二、实验原理 （实验教程P41，使用那些功能） 三、实验设备和软件 （1）硬件要求： P4微型计算机，内部组成局域网。 （2）软件要求： 操作系统：中文Windows XP、中文Office Word2003。 四、实验步骤 （自己根据你的完成过程，列出步骤，参照实验教程P42四） 五、实验结果 （另附一页） 六、实验总结 （通过这次实验你学到什么）
实验报告要求： ●实验报告可参照如下内容格式写作：实验目的、实验原理、实验设备、 实验步骤、实验结果。 ●题材自定，但要求内容健康向上。要求内容要有一定主题，体现一定 风格。可参考实验结果内容。
专访：访美国华人金融协会理事、芝加哥机构资本副高海 华网芝加哥3月29日电 （记者 朱诸 张保平） 国华人金融协会理事、芝加哥机构资本副总裁高海29日在接受新华社记者专访时表示，这次日本大地震对日本经济更多的是一种短期的干扰，不会对日本经济的长期走势产生重大影响；同时，由于日本对目前世界经济增量的贡献有限，因此也不会对全球经济的发展产生太大影响。 高海说，由于地震会造成当地厂房的破坏，因此可能会使得日本某些制造行业——如汽车和汽车零配件、半 导体及芯片等——短期压力加剧。 但历史经验表明，这些行业通常会在地震发生之后的两至三个季度内出现下滑，之后又会迎来一轮强劲反弹，因为日本制造业的需求主体主要分布在世界其他国家，这些需求并没有太大变化，因此在厂房检修或者重建之后，那些被滞后的需求还会回来，所以短期之内会呈现明显的“V”型反弹。 高海说，具体来看，在这些受到影响的行业中，日本核电行业受到的冲击最大，因为这次核危机给日本以及 全球发展核电的国家敲响了警钟。目前日本电力供应有约30％依赖于核电，此外，作为一个以出口为主的经济，日本的制造业对电能的依赖也比较大，如果三分之一的供电受到影响，那么短期内对这些制造业的冲击也是很严重的。 另外，对于一些替换性较高的行业，如重型机械制造业，如果调整的周期过长，导致客户需求转移，也会对这些行业造成冲击。“比如日立和小松，如果耽误的时间太长，而国外的客户又急需使用，因此只能转向其他国家的生产商购买，而且这些产品均伴随相关配套产品和服务，如维修保养，一旦转移，就很难改变，”高海说。 “长远来看，”长期投资亚洲金融市场的高海说，“对日本经济影响最大的两个因素，一个是人口增长，一个是生产力，而这两方面现在都在朝着不利于经济的方向发展。首先是日本的人口数量一直在下降，同时日本的生产力也在上世纪80年代达到顶峰之后开始走下坡路，而且正在被其他国家赶超。”高海说，改变不了的，因此，日本经济长期来看还会维持向下走的趋势。 另外，这次地震也对世界其他国家的一些行业造成了一定影响。据报道，美国通用汽车公司已经关闭了路易斯安那的一家卡车制造工厂，者削减产量。 对此，高海说方面出现问题，可能会影响到美国今年的汽车生产和销售。” “但是这种供应方面的短缺都不会是大问题，只要需求方面保持稳定，高海说。 全球GDP 增量里，日本占的比重并不是很高，也不会产生太大影响。 同时，高海还说，由于日本外债比例不高，大部分债券被本国企业和居民持有，所以即使地震重建需要从国外借债，也不会对日本的主权信用产生实质性的影响，所以不会引发类似欧洲的债务危机。 美
一、实验目的 1、掌握PCR基因扩增的原理和操作方法； 2、掌握碱裂解法提取质粒的方法； 3、了解紫外吸收法检测DNA浓度和纯度的原理、方法； 4、学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作。 二、实验原理 1.PCR： PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以DNA为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制DNA 的过程。 ①延伸：溶液反应温度升至中温72℃，在 Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链； ②变性：加热使模板DNA在高温下90℃-95变性，双链解链； ③退火：降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃左右），与模板DNA互补退火形成部分双链。 2. 质粒DNA的提取与定量——碱裂解法： A、基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异； B、高碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA变性；
C、当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA复性并保存在溶液中，染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心形成沉沉淀去除。 D、定量检测原理：物质在光的照射下会产生对光的吸收效应； 而且物质对光的吸收是具有选择性的； 各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。 3.酶切鉴定：利用限制性内切酶。 4、琼脂糖凝胶电泳： A、琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度； B、DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动； C、DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带(迁移速度与分子量的对数值成反比关系)。 三、材料与方法： (一)、材料 1、样品： 菌液(大肠杆菌DH5a菌株)、引物、2*Premix Taq、灭菌离子水、含pMD19-T质粒的大肠杆菌DH5α 2、试剂： LB培养基、AXYGEN试剂盒(溶液S1、S2、S3、去蛋白液W1、漂洗液W2、洗脱液EB)、电泳指示剂、Gelview、TBE、琼脂糖、DNA Marker 500、无菌水、10*M酶切缓冲液Buf R、HindⅢ(15U/ul)、EcoR I (12U/ul) 3、仪器与器材： PCR仪、台式离心机、微量加样枪、灭菌的薄壁离心管、凝胶电泳系统、凝胶成像系统、
竭诚为您提供优质文档/双击可除word20XX的实验报告 篇一：word实验报告 实验报告 课程名称计算机应用基础实验项目名称word综合练习班级与班级代码12级新闻1班实验室名称（或课室）ss1-201专业新闻学任课教师刘松学号：12251204102姓名：蔡晓童实验日期：20XX-04-11 广东商学院教务处制 姓名实验报告成绩 评语： 指导教师（签名）年月日 说明：指导教师评分后，实验报告交院（系）办公室保存。 一、实验目的 1、2、 掌握常用的word编辑方法 综合运用word桌面排版功能（字符排版、段落排版、
页面排版、图文混排、艺术字等）进行实际文档的处理。 二、实验设备 1、2、 计算机word20XX软件 三、实验步骤 1、新建一个word文档，输入文章。 2、选择“插入”→“图片”→“艺术字”，选择艺术字样式→在对话框中设置字体、字号。 3、选择“插入”→“图片”→“来自文件”，选择所要插入的图片，在合适的位置插入相应的图片，并对图片的格式进行定义。 4、选中要分栏的段落，选择“格式”→“分栏”命令，显示“分栏”对话框，在预设类型中选择一种类型，单击“确定”按钮。 5、将第一段的“潮”字首字下沉，点击【格式】→【首字下沉】→【下沉】，单击“确定”。 6、选择“编辑”→“查找”，输入要查找的内容，然后选择“你”，再进行字体变换。 7、进行字符格式设置，如改变字型，大小，颜色等。8、进行页眉（学号和姓名）和页脚（页码）格式设置。 四、实验结果 如下页所示
五、实验分析与体会 通过本次实验，我了解了word字符格式、段落格式和 页面格式等排版技术和图文混排等技术的使用，今后可以更好的运用word在生活中工作中制作文档。而且通过这次试验，我觉得自己动手排版非常有趣。因为我对word文档的 操作的不熟悉，所以，我的速度一直很慢，而且，还不可以更具自己想要的效果自由的进行操作，但是在经过一边查书，一边操作的过程中，经过自己的努力，终于完成了我的文档。我越来越熟悉它的操作，并且能够运用其中大部分的工具，来完善自己的文档。而且我也明白了，word文档的操作是很基础的计算机运用，也是使用范围非常广泛的程序。因此，学习这一门课程是非常重要和必要的。 广□播站潮州市高级中学云里之音○ 作为校园文化的传媒机构，以丰富学生的校园生活，传播校园资讯为目的，以＂努只为把声音传得更远＂为口号，力，陪伴高级 走过了许多风风雨雨。在高级中学团中学 学生会的管理下，委会、广播站一如既往地坚持发扬广播不怕苦，不怕累的精神，努力唱响青春，唱响热情。 mondaysunshineAfternoon：品味生活点滴享受午后阳光；为你带来新鲜的生活资讯，介绍生活小常识。Tuesdaywindow：ListeningListeningwindow，
实验报告讲稿格式 篇一：实验讲稿 目录 1、有机实验室常识与常压蒸馏操作（4节课时） 2、重结晶操作（4节课时） 3、熔点测定操作（4节课时） 4、水蒸汽蒸馏操作（4节课时） 5、分子模型搭建（4节课时） 6、分馏操作与环己烯合成（8节课时） 7、己二酸的合成（8节课时） 8、萃取、乳化、盐析效应与正溴丁烷的合成（8节课时） 9、无水操作与2-甲基-2-己醇的合成（8节课时） 10、三种乙酸烷酯的合成与装置比较（8节课时） 11、文献实验与阿斯匹林的合成（4节课时） 12、低温反应与对位红的合成（4节课时） 13、实验操作考核与实验技术笔试（4节课时） 实验一有机实验室常识与常压蒸馏（4节课时） 一、实验目的 1、了解有机实验的地位、目的、重要性与管理要求。 2、了解有机实验室的特性与安全知识。
3、了解实验室常用玻璃的种类和特性。 4、熟悉有机实验报告的书写要求。 5、了解沸点测定的意义和常压蒸馏的原理。 二、讲授内容 （一）介绍有机实验的地位、目的、重要性与管理要求。 有机化学实验课可视为有机化学理论知识教学的一个应用与验证过程，是理论知识的一个形象化与深化的过程。 主要目的是深入理解有机化学基本理论与概念，进一步熟悉各类有机化合物的重要性质，训练学生进行有机化学实验的基本操作技能和若干单元操作的实验技能，验证有机化学中所学的理论，培养学生正确选择有机化合物的合成、分离与鉴定的方法以及分析和解决实验中所遇到问题的思维和动手能力。学习预防与处置化学实验事故的方法，以及正确使用与处置教学中所涉及的一些化学危险品；学习有机化学科学研究的工作方法，培养严谨的科学精神，还可以培养学生的初步科研能力。 认真预习，完成作业；认真操作，仔细观察，详细记录，一丝不苟；写好实验报告。保持实验室整洁、同学要轮流值日。 （二）实验室安全知识。 1. 火灾与急救有机化学实验中使用的原料、溶剂大多
实验七重组质粒DNA的提取及酶切鉴定 【实验原理】 分离制备质粒DNA的方法很多，其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法、羟基磷灰石层析法等。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。 本实验采用SDS碱裂解法提取重组质粒DNA，十二烷基磺酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性。 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。限制性内切酶识别序列长度一般为4～8个呈回文序列的特异核苷酸对。由于限制性内切酶的切割特性不同，分子生物学中主要用到Ⅱ型限制性内切酶（切割位置在识别序列内部）。 对质粒进行酶切，通过跑胶观察片段大小，从而鉴定质粒。 【实验步骤】 本次实验所用的质粒提取试剂盒为天根的质粒小提试剂盒，操作步骤按说明书进行。 1. 吸附柱中加500ul 平衡液(BL)，12000rpm离心1min ，弃收集管中的液体。 2.取1.5ml菌液至2ml离心管中，12,000rpm离心1min，弃上清。 3. 加250ul solution Ⅰ（P1），vortex。 4. 加250 solution Ⅱ（P2），上下颠倒混匀。操作时间不能超过5min 注：此步骤不宜超过5 min。 5. 加350 solution Ⅲ（P3），立即颠倒混匀几次。12000rpm离心10min。 6. 吸取上清加入吸附柱中，尽量不要吸出沉淀12000rpm离心1min ，弃收集管中的液体。注：此时4℃离心不利于沉淀沉降。 7. 加入600μL漂洗液（PW）于离心吸附柱中，12000rpm离心1min ，倒掉废液。 8. 重复上一步， 9. 空管离2min。将吸附柱放入1.5ml离心管中，在超净台中晾5min。10. 将700 μl的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30 sec，弃滤液。 10. 滴加50ul elution buffer（EB）至膜中央，室温放置2min后，12000rpm离心1min。离心管中即为纯化后的质粒。 11.构建重组质粒酶切体系，限制性内切酶反应一般在灭菌的15 ml PCR离心管中进行。 在冰浴上建立酶切反应体系（20 μl）
实验二十一质粒DNA的提取、酶切与鉴定 一、质粒DNA的提取 [原理]分离质粒DNA的方法包括三个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。 本实验采用碱变性法抽提质粒DNA，是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA 的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离。当以pH4.8的醋酸钾高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。 [试剂] 1.溶液I： 50mmol/L葡萄糖、10mmol/L EDTA、25mmol/L Tris-HCl pH8.0;用前加溶菌酶4mg/ml。 2.溶液II： 200mmol/L NaOH 、1% SDS。 3.溶液III： pH4.8醋酸钾缓冲液（60 ml 5mol/L 醋酸钾、11.5ml冰醋酸、28.5ml 蒸馏水） 4.TE缓冲液pH8.0 5.含RNaseA的TE缓冲液：TE缓冲液含20μg/ml RNaseA。 6.苯酚：氯仿（1：1，v/v）：酚需在160℃重蒸，加入抗氧化剂8-羟基喹啉，使体积分数为0.1%，并用Tris-HCl缓冲液平衡两次。氯仿中加入异戊醇，氯仿/异戊醇为24：1（v/v）。 7.1×LB溶液 8.100μg/ml氨苄青霉素 [器材] 1.TGL-16型台式高速离心机
2.1.5ml塑料离心管 3.离心管架 4.微量移液器 5.常用玻璃器皿 [操作步骤] 1.培养细菌将带有质粒pUC19的大肠杆菌接种于5ml含100μg/ml氨苄青霉素的1×LB中，37℃培养过夜。 2.取液体培养菌液1.5ml置塑料离心管中，10 000r/min离心lmin，去掉上清液。加入150μl溶液I，充分混匀，在室温下放置10min。 3.加入200μl新配制的溶液II，加盖后温和颠倒5~10次，使之混匀，冰上放置2min。 4.加入150μl冰冷的溶液III，加盖后温和颠倒5~10次，使之混匀，冰上放置10min。 5.用台式高速离心机，10 000r/min离心5min，将上清液移入干净的离心管中。 6.向上清液中加入等体积酚/氯仿（1：1，v/v），振荡混匀，转速10 000r/min，离心2min，将上清液转移至新的离心管中。 7.向上清液加5mol/LNaCl至终浓度为0.3mol/L，混匀，再加入2倍体积无水乙醇，混匀，室温放置2min，离心5min，倒去上清乙醇溶液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。 8.加0.5ml 70%乙醇，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或室温自然干燥。 9.加入50μl含RNase A 20μg/ml的TE缓冲液溶解提取物，室温放置30min以上，使DNA充分溶解待用或置-20℃备用。 二、质粒DNA 的限制性内切酶酶切及琼脂糖凝胶电泳分离、鉴定 [原理]限制性内切核酸酶（也可称限制性内切酶）是在细菌对噬菌体的限制和修饰现象中发现的。细菌内同时存在一对酶，分别为限制性内切酶（限制作用）和DNA甲基化酶（修饰作用）。它们对DNA底物有相同的识别顺序，但生物功能却相反。 Ⅱ型限制性内切酶，具有能够识别双链DNA分子上的特异核苷酸顺序的
实验五质粒DNA的微量提取及酶切鉴定 字体: 质粒是一类在细菌细胞内发现的独立于染色体外，能够自主复制的环形双链DNA 分子。 一、质粒DNA的提取，它们都包括三个基本的步骤：细菌的生长和质粒的扩增；菌体的收集裂解；质粒DNA的分离和纯化。 1、细菌的生长和质粒的扩增 从琼脂培养基平板上挑取一个单菌落，接种到含适当抗生素的液体培养基中培养。对于高拷贝的质粒（pUC系列）来说，只要将培养物放到标准的LB或TB培养基中生长到对数晚期，就可以大量提取质粒，而不必选择性地扩增质粒DNA。但对于拷贝数较低的质粒（如pBR322）来说，则需在得到部分生长的细菌培养物中加入氯霉素继续培养若干小时，以便对质粒进行选择性扩增。因为氯霉素可以抑制宿主菌的蛋白质合成，从而阻止了细菌染色体的复制，但是质粒则仍可继续复制，在若干小时内，其拷贝数持续上升。 （问题：提取质粒时，对于不同拷贝的质粒，应如何进行细菌的培养？为什么？）2、细菌的收集、裂解和质粒DNA的分离 细菌的收集可通过离心来进行，而细菌的裂解则可以采取多种方法，包括用非离子型去污剂、有机溶剂或碱处理及加热处理等。 质粒分离的基本原理是利用宿主菌（一般是大肠杆菌菌株）DNA与质粒DNA之间的两种主要性质差异： a.大肠杆菌的染色体较一般的载体质粒DNA大得多。 b.从细胞中提取得到的大肠杆菌DNA主体是变性的线性分子，而大多数质粒DNA 是共价闭合的环状分子。 利用溶菌酶和加热处理的方法，使细菌的线状染色体DNA变性，通过离心，可以使染色体DNA和变性蛋白质、RNA分子一起沉淀下来，而质粒分子仍留于上清中。问题1：某些大肠杆菌的菌株不能用加热的方法裂解。 （1）易产生多糖的如大肠杆菌菌株，如HB101和TG1等。尤其是HB101的一些变种和衍生物，在用去污剂或加热裂解时可释放处相对大量的糖，从而影响质粒的纯化，抑制多种限制性内切酶的活性。 （2）表达内切核酸酶A的大肠杆菌菌株（endA+），如HB101。因为煮沸不能完全灭活内切核酸酶A，以后在Mg2+存在下温育（如用限制酶消化）时，质粒DNA 会被降解。但通过一个附加步骤（用酚：氯仿进行抽提）可易避免此问题。 3、质粒DNA的纯化 纯化质粒DNA的方法很多，通常使用的方法都是利用了质粒DNA相对较小和共价闭合环状这两个基本性质。多年来，氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心一直是制备大量质粒DNA的方法，然而该过程既昂贵又费时，为此发展了许多代替方法，其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀（聚乙二醇和LiCI 分级沉淀法）等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚抽提、RNA酶消化和酒精沉淀等简单步骤除去残余蛋白和RNA，达到纯化的目的。
WORD文档的基本操作实验报告 一、实训目的 1．文档的建立、保存与打开。 2．文档的基本编辑操作。 二、实训所涉及的知识点 1、文档的建立及保存，文档的基本操作。 三、实训课时 2课时 四、实训内容 步骤1 打开实验素材文档 方法一：定位到文件所在位置，即打开“我的电脑”D盘，双击“羊蹄甲.doc”文档图标，如图2.3所示。即可启动word 2003应用程序，并打开素材文档。 方法二：从“开始”菜单→“所有程序”→“Microsoft office”→“Microsoft office word2003”启动word程序，选择“文件”菜单→“打开”，弹出如图2.4所示对话框。单击如图中标示1处“查找范围”列表框按钮，选择文件存放的位置，单击选中要打开的文件的图标(图2.4中标示2处，选中后的文件图标呈反选状态) ，单击“打开”按钮(图2.4中标示3处) 即可。 选择“视图”菜单→“页面”，将视图方式切换为页面视图。 图2.3文档图标 图2.4打开对话框 步骤2 根据需要添加或调整文档文字内容 对比图2.1及2.2，可以发现，原始文档的文字需要做一些相应调整。 (1) 输入缺失的文字部分。将鼠标指针移动到文档的最后一段文字的句号后，单击鼠标左键，将闪烁的光标定位于文档末尾。然后按下“enter”键，建立一个新的段落，此时闪烁的光标处于文档的最后一行的开始处。用鼠标单击任务栏上的语言指示器。从弹出菜单中选择自己惯用的输入法。或者，也可以使用组合键“ctrl+shift”在各种输入法之间切换。输入如下文字： 说明：
使输入的文字成为一个独立的段落。 (2) 将第一段和第二段互换位置。首先，将鼠标指针移动到第一段第一个文字的 最左边，按住鼠标左键不放拖动鼠标至第一段的最末尾处(包括回车标记“”在内) 。 此时第一段文字被选中呈反选状态；然后，选择“编辑”菜单→“剪切”，此时第一 段文字暂时“消失”(实际上该段文字存于系统剪贴板中) ；最后，将闪烁的输入光标 定位于原第三段文字的最左边(即文字“我们师专…”前) ，选择“编辑”菜单→“粘 贴”，此时，刚刚剪切的第一段文字即被置于第二段之后了。 步骤3 文档字符格式化 (1) 选中除标题文字和最后一段文字以外的所有内容，选择“格式”菜单→“字 体”，弹出如图2.5所示对话框。在对话框中标示1处单击下拉按钮“”选择中文 字体：楷体_GB2312；在对话框中标示2处列表框中选择字号(即字符大小) ：小四号； 在对话框中标示3处单击下拉按钮选择字体颜色：蓝色。 (2) 选中最后一段文字，用前述方法调出“字体”对话框，设置字符字体为“隶 书”，字号为“四号”，字体颜色为“粉红色”。在图2.5中标示4处单击下拉按钮为该 段字符设置下划线线型：“单波浪线”，选择了下划线线型后图2.5中标示5处会由不 可选的灰色框变成可选的黑色框，单击下拉按钮，选择下划线颜色：粉红色。 图2.5设置字体图2.6设置字符间距 (3) 选中标题文字中的“席慕容”，用前述方法调出“字体”对话框，设置字体成 黑体、二号字体、红色，在图2.5标示6处，选中“下标”前的复选框，将“席慕容” 三个字设置成下标效果。 (4) 选中最后一段中的“忽然觉得，人生也许真的就这样了，”，选择“格式”菜单→ “字体”弹出字体对话框，如图2.6所示，单击图中标示1处选择“字符间距”选项 卡。在图中标示2处设置文字位置：单击“位置”旁边的下拉按钮，在下拉列表中选 择“提升”项，设置“磅值”为3磅。在图中标示3处设置字符间距：单击“间距” 旁的下拉按钮，在下拉列表中选择“加宽”项，并设置“磅值”为2磅。 五、拓展练习： 1．自己获得更多的实验效果 六、实训（实验）心得、体会、收获（由学生填写）： 七、实训评分标准 A．能完成所有操作。 B．能完成至少一半以上的操作。 C．未能完成一半以上的操作。 八、作业 1、请写出实验步骤？ 九、实训（实验）成绩及教师评语： 如果需要输入特殊字符可以从“插入”菜单→“特殊符号”中插入。或者，单击输入法工
word实验报告格式 篇一：实验报告模板——word格式 实验2 一元线性回归模型 一、实验内容：利用一元线性回归模型研究我国经济水平对消费的影响 1、实验目的：掌握一元线性回归方程的建立和基本的经济检验和统计检验 2、实验要求： （1）对原始指标变量数据作价格因子的剔除处理；（2）对回归模型做出经济上的解释；（3）独立完成实验建模和实验报告。 二、实验报告 ----中国1978-XX年人均消费与经济水平之间的关系 1、问题的提出 居民的消费在社会经济发展中具有重要的作用，合理适度的消费可以有利的促进经济的平稳健康的增长。要充分发挥消费对经济的拉动作用，关键问题是如何保证居民的消费水平。根据宏观经济学理论，一国的GDP扣除掉折旧和税收就是居民的可支配的收入了，而居民的收入主要用于两个方面：一是储蓄，二是消费。如果人均GDP增加，那么居民的可支配收入也会增加，这样居民用于消费的应该也会增加。本次实验通过运用中国1978-XX年人均消费与经济水平（用
人均GDP这个指标来表示）数据，建立模型研究人均消费和经济水平之间的关系。 西方消费经济学者们认为，收入是影响消费者消费的主要因素，消费是需求的函数。消费经济学有关收入与消费的关系即消费函数理论有：（1）凯恩斯的绝对收入理论。该理论认为消费主要取决于消费者的净收入，边际消费倾向小于平均消费倾向。并且进一步假定，人们的现期消费，取决于他们现期收入的绝对量。（2）杜森贝利的相对收入消费理论。该理论认为消费者会受自己过去的消费习惯以及周围消费水准来决定消费，从而消费是相对的决定的。这些理论都强调了收入对消费的影响。 除此之外，还有其他一些因素也会对消费行为产生影响。（1）利率。一般情况下，提高利率会刺激储蓄，从而减少消费。但在现实中利率对储蓄的影响要视其对储蓄的替代效应和 收入效应而定，具体问题具体分析。（2）价格指数。价格的变动可以使得实际收入发生变化，从而改变消费。（3）生活环境，生活理念。有些人受传统消费观念的影响，对现在流行的超前消费很不赞同，习惯于把钱存入银行，这样势必会影响一个地区的消费水平。（4）人口结构。不同年龄段的人的消费率不同，青少年和老年人的消费率一般较高。一
实验报告：Word排版 内容：写一篇关于信息管理、信息技术或电子商务方面某方向的论文，内容尽量具体，针对某一问题撰写，可以总结若干篇自己查阅的文章，也可以自己根据手头资料自行书写，文中尽量包含图表、图片甚至公式，所使用排版功能越多越好。 格式： 1.论文题目：加粗小二号宋体字，居中。 2.作者姓名：在论文题目后另起一行，居中注明作者姓名。五号宋体字。 3.作者班级：在姓名下一行，加括号居中，五号宋体字。 4．论文摘要：字数在100字左右。概括反映论文的主要内容，力求语言精炼准确，要突出本论文的创造性成果或新见解。摘要内容用四字宋体字（顶格排）。 5.关键词：三到五个，用四字加粗宋体字，用空格隔开。 6．正文 正文是学位论文的主体和核心部分，不同学科专业和不同的选题可以有不同的写作方式。正文一般包括以下几个方面： ①引言：是论文主体部分的开端，要求言简意赅，不要与摘要雷同或成为摘要的注解。 ②各具体部分 论文标题的层次可根据字数、内容确定。层次不宜过多。章节标题层次及同级标题序码应段落分明，前后统一。如：第一章， 1.1，1.1.1，1.1.2，1.1.2.1……。 ③结论：是学位论文最终和总体的结论，是整篇论文的归宿。应精炼、准确、完整。着重阐述作者研究的创造性成果及其在本研究领域中的意义，还可进一步提出需要讨论的问题和建议。应严格区分研究生成果与导师科研工作的界限。 引言、各部分标题和结论几个字均为小四号加粗宋体字，其它正文部分为小四宋体字。 论文每部分之间设置段前段后间距为0.5行。正文用小四号宋体字，标准字间距，1.25倍行间距。 7．参考文献 凡有引用他人成果之处，均应按文中所引用的顺序列于文末。用五号宋体字。引用文献号采用阿拉伯数字连续编号，上标格式用中括号标注。例如：......[1]，...... [2], (3) 1 刘少奇. 论共产党员的修养. 修订2版. 北京：人民出版社，1962.76页 2 Morton L T, ed. Use of medical literature.2nd ed.London:Butterworths,https://www.doczj.com/doc/795617230.html,rmationsources for research and development. ISBN0-408-70916-2 3 张筑生.微分半动力系统的不变集：[学位论文] 北京：北京大学数学系数学研究所，1983 4 华罗庚，王元. 论一致分布与近似分析：数论方法（Ⅰ）.中国科学，1973（4）：
实验报告 课程名称计算机应用基础 实验项目名称WORD文档综合实验 班级与班级代码05经济（1）班 实验室名称（或课室）三水校区实验楼A-203 专业经济学 任课教师 学号：05250602142 姓名：梁艳 实验日期：2006 年6月6日 广东商学院教务处制
姓名论文成绩 评语： 指导教师（签名） 年月日说明：指导教师评分后，学年论文交院（系）办公室保存。
1．实验目的： 1）掌握常用的word编辑方法 2）综合运用Word桌面排版功能（字符排版、段落排版、页面排版、图文混排、艺术字等）进行实际文档的处理。 2．实验器材和实验环境：计算机，网络环境，投影设备。 实验相关软件：Window xp、office。 3．实验内容和步骤： 1、从网上搜索主题“钱要花在刀刃上”，选择一篇文档下载并进行简单编 辑。 2、页面排版：【文件】→【页面设置】菜单命令 ●纸张规格：A4(21cm*29.7cm),纸张方向：纵向 ●页边距调整： 上边距：2.54cm；下边距：2.54cm；左边距：3cm；右边距：2.2cm ●页眉页脚设置 在“页面设置”对话框的“版式”选项卡中选中页眉页脚“首页不同”； 执行【视图】→【页眉与页脚】菜单命令，在页眉的编辑区中，输入“班级：05经济（1）班姓名：梁艳学号：42”； 在页脚区插入页码，页码字体设置为五号粗黑体，设置居中对齐方式。 3、将标题“钱要花在刃上”居中。点击菜单格式→段落，对齐方式选择居 中，然后单击确定。（或单击格式工具栏中的居中按钮） 4、把标题设成小一号隶书、粗体、黑色字。点击菜单格式→字体，中文字 体选择隶书，字号选择一号，字体颜色选择黑色，文字效果选择“七彩霓虹”，单击确定。 5、给标题添加天蓝的底纹。单击菜单格式→边框与底纹，点击底纹，选择 填充颜色为天蓝，然后单击确定。 6、除标题外，全文设置宋体、四号字体。选中除标题外的所有文字，然后 在工具栏中的字号选择“四号”、字体选择宋体即可。 7、将第一段的“据”字首字下沉，点击【格式】→【首字下沉】→【下沉】， 单击“确定”。 8、将全文设置行距为固定值26磅。选中除标题外的所有文字，然后单击 菜单格式→段落，行距选择固定值，其设置值为26磅，单击确定 9、将全文的“钱”字设置成小二号宋体，阴文，红色字、礼花绽放动态效 果。在“编辑|替换”对话框中，单击“高级”按钮，先将插入点定位在“查找内容”文本框，输入“钱”字，然后将插入点定位在“替换为”文本框
质粒 DNA 的提取、定量、酶切与PCR 鉴定 一、实验目的 1.学习并掌握用碱裂解法提取质粒 DNA 的方法； 2.学习并掌握了解质粒酶切鉴定的方法； 3.学习并掌握紫外吸收检测 DNA 浓度和纯度的原理和方法； 4.学习并掌握 PCR 基因扩增的实验原理和操作方法； 5.学习并掌握水平式琼脂糖凝胶电泳的原理和使用方法。 二、实验原理 1.PCR(多聚酶链式反应 ) 在 DNA 聚合酶催化下，可以 DNA 为模板，以特定引物为延伸起点，以 dNTP 为原料，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外（缓冲液中）复制DNA ，使目的 DNA 按 2n方式呈指数形式扩增。 PCR一次循环的具体反应步骤为： A. 变性：加热反应系统至95℃，使模板 DNA 在高温下完全变性，双链解链。 B. 退火：逐渐降低溶液温度，使合成引物在低温（ 35－70℃, 一般低于模板 Tm 值的 5℃ 左右），与模板DNA 互补退火形成部分双链。 C. 延伸：溶液反应温度升至中温72℃，在Taq 酶作用下，以dNTP 为原料，引物为复 制起点，模板 DNA 的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。 2.质粒 DNA 的提取与制备 (1). 碱裂解法： 染色体 DNA 与质粒 DNA 的变性与复性存在差异： A. 高碱性条件下，染色体DNA 和质粒 DNA 均变性；
B. 当以高盐缓冲液调节其pH 值至中性时，变性的质粒DNA 复性并保存在溶液中，染色体 DNA 不能复性而形成缠连的网状结构，可通过离心形成沉沉淀去除。 (2). 离心层析柱： A. 硅基质膜在高盐、低 pH 值状态下可选择性地结合溶液中的质粒DNA ，而不吸附溶液中的蛋白质和多糖等物质； B.通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除； C.低盐，高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅基质膜上洗脱。 3.质粒 DNA 的定量分析（紫外分光光度法）： A.物质在光的照射下会产生对光的吸收效应，且其对光的吸收是具有选择性； B.各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱 : DNA 分对波长 260nm 的紫外光有特异的吸收峰 蛋白质对波长 280nm 的紫外光有特异的吸收峰 碳水化合物对 230nm 的紫外光有特异的吸收峰 C. A260/A280 及 A260/A230 的比值可以反应DNA 的纯度； A260/A280=1.8DNA 纯净 A260/A280<1.8表示样品中含蛋白质（芳香族）或酚类物质 A260/A280>1.8含 RNA 杂质，用 RNA 酶去除。 4.质粒 DNA 的酶切鉴定： 限制性内切酶是DNA 重组操作过程中所使用的基本工具。限制性内切酶能特异性地与 一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA 序列结合，或是与其附近的特异位点结合，并 在结合位点切割双链DNA 。
实验三质粒DNA的酶切鉴定 南京大学生命科学院 一、实验目的 1、学习和掌握限制性内切酶的特性 2、学习酶解的操作方法，初步理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具 3、进一步熟练掌握琼脂糖凝胶电泳的方法 二、实验原理 限制性核酸内切酶是一种工具酶，这类酶的特点是能够识别双链DNA分子特异性核酸序列，并能在这个特异性核苷酸序列内切断DNA双链，形成一定长度和顺序的DNA 片段。限制性核酸内切酶是体外剪切基因片段的重要工具，与核酸聚合酶、连接酶以及末端修饰酶等一起称为工具酶。限制性核酸内切酶不仅是DNA重组中重要的工具，而且还可以用于基因组酶切图谱的鉴定。 寄主控制的限制与修饰现象 限制与修饰系统是细胞的一种防卫手段。各种细菌都能合成一种或几种能够切割DNA双链的核酸内切酶，它们以此来限制外源DNA存在于自身细胞内，但合成这种酶的细胞自身的DNA不受影响，因为这种细胞还合成了一种修饰酶，对自身的DNA进行了修饰，限制性酶对修饰过的DNA不能起作用。这种现象被称为寄主控制的限制与修饰现象。 限制性核酸内切酶的类型及特性 按限制酶的组成、与修饰酶活性关系以及切断核酸的情况不同，分为三类： 第一类（I型）限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序，并在识别点附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的双链，但是切割的核苷酸顺序没有专一性，是随机的。这类限制性内切酶在DNA重组技术或基因工程中用处不大，无法用于分析DNA结构或克隆基因。这类酶如EcoB、EcoK等。 第二类(II型)限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序，并在该顺序内的固定位置上切割双链。由于这类限制性内切酶的识别和切割的核苷酸都是专一的。因此，这种限制性内切酶是DNA重组技术中最常用的工具酶之一。这种酶识别的专一核苷酸顺序最常见的是4个或6个核苷酸，少数也有识别5个核苷酸以及7个、8个、9个、10