应对血细胞分析显微镜复检
的措施及体会
重庆医科大学附属第一医院检验科
白垚
?需解决的问题：
?为什么要进行血细胞分析显微镜复检？?怎样制定显微镜复检规则？
?如何提高血细胞辨识能力？
目前血液细胞常规检查工作中
存在的问题
复检比率偏低甚至不镜检
未正确发挥自动化分析的筛检功能
各实验室制定的复检规则差异较大，实施过程中存在一些具体问题
原因分析
对复检的重要性认识不足，过分依赖仪器，弱化人的能力及责任
样本量大，人员数量与工作量不匹配
对人员的技术能力要求高
复检标准的建立及验证有一定难度
造成的后果
■漏诊：白血病、传单、寄生虫感
染等
■误诊：贫血、血小板减少性紫癜、
白血病
■丢失部分重要病理改变的信息
《医疗机构实验室管理办法
临床血液学部分）
）医疗机构实验室管理办法》
》（临床血液学部分第二十二条
应用细则
临床血液应用细则
ISO15189临床血液
▲血细胞分析的显微镜复检标准（检测结果出现异常计数，警示标志，异常散点图等情况时结果的确认方法和程序)
▲血涂片制备和检验的书面程序和过程
▲对患者血液检验的标本进行重复检验的标准及程序
血涂片复检概念
■浏览血涂片：或称涂片镜检，指将血涂片进行瑞氏染色后，用显微镜观察各种血细胞形态，尤其是CBC自动计数的报警阳性细胞，但无需分类计数
■人工分类计数白细胞：指将血涂片进行瑞氏染色后，用显微镜进行人工分类一定数量的有核细胞，并计算各类有核细胞所占百分比
血液细胞形态学检查的内容■细胞数量的验证
白细胞数量
血小板数量
■白细胞分类计数和形态观察
●白细胞分类计数
●粒细胞核象：核左移、核右移
●中毒性改变：中毒性颗粒、空泡变性、核固缩、核溶解
●原幼细胞
●异型淋巴细胞
●其他
红细胞形态
●大小
●形状
●血红蛋白含量
●细胞内包涵体
●红细胞异形性
血小板形态
●大小
●血小板聚集
●血小板数量评估
其他病理成分
●寄生虫
●细菌
树立树立““复检规则复检规则””的概念
制定一定的标准，当仪器分析的结果
不属于制定的标准范围时，可视为仪器所得结果能客观反映血象状况，无须镜检。反之，须进一步涂片镜检。因此，合理的复检规则的制定是正确使用仪器，保证结果质量的重要因素。
复检规则制定的原则
●根据该仪器对细胞形态的识别能力。
●复检规则涉及的参数该仪器均能提供。
●复检范围应涵盖仪器的所有参数及形态学特征。
●在确保病理细胞不漏检、保证筛选质量的基础上尽量降低复检率，使患者能在较短的时间内获得正确的检验报告。
●假阴性是制定复检规则的关键参数，具有诊断意义的重要参数不能出现假阴性，其他参数的假阴性率应<5%。
●在较低假阴性率的前提下降低假阳性率，假阳性率过高会增加工作量，延迟报告发放时间。
●白血病患者及临床医生提出阅片需求的样本必须镜检
复检规则制定的依据
●根据2005年国际血液学复检专家组推荐的41条自动血细胞分析和分类复检规则。
●根据本实验室的具体情况及Sysmex XE-2100的性能特点，参考国际41条复检规则，制定了适合本实验室的17条显微镜复检规则。
?与全血细胞计数相关的规则
?（1）WBC:<2.5或>30.0X109 ∕ L(首次结果）?（2）PLT:<50或>500 X109 ∕ L （首次结果，且直方图异常）
?（3）HGB:<60或>200g∕ L
?（4）MCV:<60fl或>120fl（首次结果）?（5）MCHC:>380
?（6）RDW-CV:>22%（首次结果）
血液检查 一、血液一般检查： 1、红细胞计数(RBC) [正常参考值] 男：4.0×10 12-5.3×10 12个/L(400万-550万个/mm3)。 女：3.5×10 12-5.0×10 12个/L(350万-500万个/mm3)。 儿童：4.0×10 12-5.3×10 12个/L(400万-530万个/mm3)。 [临床意义] 红细胞减少多见于各种贫血，如急性、慢性再生障碍性贫血、缺铁性贫血等。 红细胞增多常见于身体缺氧、血液浓缩、真性红细胞增多症、肺气肿等。 2、血红蛋白测定(Hb) [正常参考值] 男：120-160g/L(12-16g/dL)。 女：110-150g/L(11-15g/dL)。 儿童：120-140g/L(12-14g/dL)。 [临床意义] 血红蛋白减少多见于各种贫血，如急性、慢性再生障碍性贫血、缺铁性贫血等。 血红蛋白增多常见于身体缺氧、血液浓缩、真性红细胞增多症、肺气肿等。 3、白细胞计数(WBC) [正常参考值] 成人：4×109-10×109/L(4000-10000/mm3)。 新生儿：15×109-20×109/L(15000-20000/mm3)。 [临床意义] 生理性白细胞增高多见于剧烈运动、进食后、妊娠、新生儿。另外采血部位不同，也可使白细胞数有差异，如耳垂血比手指血的白细胞数平均要高一些。 病理性白细胞增高多见于急性化脓性感染、尿毒症、白血病、组织损伤、急性出血等。 病理性白细胞减少再生障碍性贫血、某些传染病、肝硬化、脾功能亢进、放疗化疗等。 4、白细胞分类计数(DC) [正常参考值] 中性秆状核粒细胞：0.01-0.05(1％-5％)。 中性分叶核粒细胞：0.50-0.70(50％-70％)。 嗜酸性粒细胞：0.005-0.05(0.5％-5％)。 淋巴细胞：0.20-0.40(20％-40％)。 单核细胞：0.03-0.08(3％-8％)。 [临床意义] 中性杆状核粒细胞增高见于急性化脓性感染、大出血、严重组织损伤、慢性粒细胞膜性白血病及安眠药中毒等。 中性分叶核粒细胞减少多见于某些传染病、再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等。
实验血涂片的制作与血细胞的观察一、引言 血涂片显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛， 特别是对各种血液病的诊断有很大价值，但血涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论，因此，制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。 二、实验目的 掌握血涂片的制作，观察血细胞的形态及在不同环境下的反应。 三、实验器材与试剂 器材：显微镜、医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片、盖玻片等。 试剂：瑞氏染液、％Nacl溶液、蒸馏水等。 四、实验步骤 1、消毒与采血 先按摩采血部位（人的指腹），使血流通畅，采血前用70%酒精消毒人的指腹，干燥后用采血针刺破指腹，使血液自然流出（第一滴血不要）。取干净载玻片，让血滴在离玻片一端中4-5mm处，注意手指持载玻片的边缘，不触电及表面，也不能使载玻片接触取血部位的皮肤。 2、推片 取一块边缘光滑的载玻片做推片。将其一端置于血滴前方，向后移动到接触血滴，使血液均匀分散在推片与载玻片呈30-40o 角，向另一端平稳地推出（图1）。涂片推好后，迅速在空气中摇，使之自然干燥。 图 1 推片示意图 3、染色 用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将瑞氏染色液（伊红- 亚甲基蓝）滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染30秒。加等量蒸馏水与染色液混合后再染 5 分钟。最后用蒸馏水把染色液洗掉，用吸水纸吸干，自然干燥后，即可观察。 4、封片 经染色的涂片完全干燥后，用中性树胶封片保存。 五、结果观察显微镜下观察血涂片结果如图 2 所示。血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。 1、红细胞：小而圆，没有细胞核，血涂片中最多，常被染成淡红色，细胞的边缘厚，中间薄，使细胞边缘的颜色比中间的深。 2、白细胞： 分为有粒白细胞和无粒白细胞，有粒白细胞包括嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞和嗜中性白细胞；无粒白细胞包括淋巴细胞和单核细胞。 （1）嗜酸性白细胞： 数量较少，但在血涂片中可以找到。细胞质中存在粗大的嗜酸性颗粒，胞质常被染成红色或玫瑰花色，细胞核分叶形，染成紫红色。 （2）嗜碱性白细胞：数量最少，在血涂片中很难找到。细胞质中存在粗大的嗜碱性颗粒，胞质常被染成兰紫色，细胞核分叶形，染色较深，但常被粗大的兰紫色颗粒掩盖。
?继续教育园地? 血细胞分析仪检测原理 乐家新 周建山 兰亚婷 传统的血细胞检查完全采用手工方法,不仅操作繁琐费时,而且由于多种原因,计数结果的准确性和精密度难以保证。1958年,库尔特采用电阻率变化与电子技术相结合的方法,发明了性能比较稳定的电阻抗法血细胞计数仪,开创了血细胞分析的新纪元。20世纪90年代以来,随着各种高新技术在血细胞分析仪中的应用,使其检测原理不断完善,检测水平不断提高,测量参数不断增加,各种类型的血细胞分析仪已在国内外各医院广泛使用。但从根本上讲,其检测原理大致分为两部分,即电阻抗法与光散射法。 图1 细胞计数电阻抗原理 作者单位:100853北京,解放军总医院临床检验科 一、电阻抗法血细胞分析技术 (一)电阻抗法白细胞计数和分类原理 电阻抗法白细胞计数原理是根据血细胞非传导性的性质,以对电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础,进行白细胞计数和体积测定。在等渗电解质溶液(稀释液)中,有一个用于细胞计数的小孔管,其内侧充满了稀释液,并有一个内电极,其外侧细胞悬液(稀释液)中有一个外电极,小孔两侧的电极之间有稳定的电流。细胞为相对不良导体,其导电性质比稀释液低,当有一个细胞通过小孔时,于瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。脉冲的数量与细胞的数量成正比,脉冲的高度与细胞的体积成正比。脉冲信号经放大、阈值调节、甄别、整形后,送入计数系统进行处理,得出被测细胞的数量。图1显示出血细胞计数仪应用电阻抗原理进行细胞计数及体积分析的方 法及过程。 目前,许多仪器除给出细胞数外,还同时提供可以表示细胞群体分布情况的图形———直方图。可显示出某一特定细胞群的平均细胞体积、细胞分布情况和是否存在明显的异常细胞群,由脉冲累积得到。如图2所示,左图为示波器显示的所分析细胞的脉冲大小,右图为相应的体积分布直方图,横坐标为体积,纵坐标为相对数量。 在进行白细胞分析时,仪器将体积范围从35～450fl 分为256个通道,每个通道约为1164fl ,并将每个白细胞的脉冲根据其体积大小分类并储存在相应的体积通道中。再由计算机拟合成一条平滑曲线,从而得到白细胞体积分布直方图(见图3),其纵坐标表示白细胞的相对数量(REL No 1),横坐标表示白细胞体积(单位:fl )。 电阻抗法得到的白细胞分类值是根据各群细胞在白细胞直方图上所占面积的大小计算得来的(见图4)。白细胞计数池中除加入一定量的稀释液外还加入了溶血剂,此溶血剂一方面使红细胞溶解;另一方面使白细胞浆经胞膜渗出,胞膜紧裹在细胞核或存在的颗粒周围,使白细胞成为“膜包核”。仪器将体积在35～450fl 的这种颗粒认定为白细胞,并根据其体积大小在直方图上从左至右初步确认其相应的三个细胞群。在正常白细胞直方图上,小细胞群是位于左侧又高又陡的峰,分布在35～90fl 范围,以成熟淋巴细胞(L YM )为主要特征细胞;大细胞群是位于右侧较低且分布宽的峰,
血常规是最一般，最基本的血液检验。血液由液体和有形细胞两大部分组成，血常规检验的是血液的细胞部分。血液有三种不同功能的细胞--红细胞(俗称红血球)，白细胞(俗称白血球)、血小板。通过观察数量变化及形态分布，判断疾病。是医生诊断病情的常用辅助检查手段之一。 1.红细胞计数（RBC）是指单位体积血液中所含的红细胞数目。 【正常参考范围】 新生儿：（6.0～7.0）×1012/L 婴儿：（5.2～7.0）×1012/L 儿童：（4.2～5.2）×1012/L 成人男：（4.0～5.5）×1012/L 成人女：（3.5～5.0）×1012/L 2.血红蛋白（Hb）是红细胞的主要组成部分，承担着机体向器官、组织运输氧气和运出二氧化碳的功能。其增减的临床意义基本上与红细胞增减的意义相同，但血红蛋白能更好地反映贫血的程度。贫血按严重程度可分为：极重度贫血，HbL<30g/L；重度贫血，Hb在31～60g/L；中度贫血，Hb在>61～90g/L；轻度贫血，Hb在>90g/L与低于正常参考的下限之间。 【正常参考范围】 男性120～160g/L 女性110～150g/L 新生儿170～200g/L 3.血细胞比容（HCT）是指抗凝血液在一定条件下离心沉淀，而测出红细胞在全血中所占体积的百分比。 【正常参考范围】 男40%～50%； 女35%～45%。 4.白细胞计数：指计数单位体积血液中含的白细胞数目。正常的外周血液中常见的白细胞有中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。 【正常参考范围】 成人（4.0～10.0）×109/L 新生儿（15.0～20.0）×109/L 5.白细胞分类计数（DC）是指对不同类型的白细胞分别计数并计算其百分比。 【正常参考范围】 中性粒细胞N0.5～0.7（50%～70%） 嗜酸性粒细胞E0.01～0.05（1%～5%） 嗜碱性粒细胞B0～0.0l（0～1%） 淋巴细胞L0.20～0.40（20%～40%） 单核细胞M0.03～0.08（3%～8%）
实验血涂片的制作与血细胞的观察 一、引言 血涂片显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对各种血液病的诊断有很大价值，但血涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论，因此，制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。 二、实验目的 掌握血涂片的制作，观察血细胞的形态及在不同环境下的反应。 三、实验器材与试剂 器材：显微镜、医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片、盖玻片等。 试剂：瑞氏染液、0.9%Nacl溶液、蒸馏水等。 四、实验步骤 1、消毒与采血 先按摩采血部位（人的指腹），使血流通畅，采血前用70%酒精消毒人的指腹，干燥后用采血针刺破指腹，使血液自然流出（第一滴血不要）。取干净载玻片，让血滴在离玻片一端中4-5mm处，注意手指持载玻片的边缘，不触电及表面，也不能使载玻片接触取血部位的皮肤。 2、推片 取一块边缘光滑的载玻片做推片。将其一端置于血滴前方，向后移动到接触血滴，使血液均匀分散在推片与载玻片呈30-40o角，向另一端平稳地推出（图1）。涂片推好后，迅速在空气中摇，使之自然干燥。 图1 推片示意图 3、染色 用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将瑞氏染色液（伊红-亚甲基蓝）滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染30秒。加等量蒸馏水与染色液混合后再染5分钟。最后用蒸馏水把染色液洗掉，用吸水纸吸干，自然干燥后，即可观察。 4、封片 经染色的涂片完全干燥后，用中性树胶封片保存。 五、结果观察 显微镜下观察血涂片结果如图2所示。血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。
1、红细胞： 小而圆，没有细胞核，血涂片中最多，常被染成淡红色，细胞的边缘厚，中间薄，使细胞边缘的颜色比中间的深。 2、白细胞： 分为有粒白细胞和无粒白细胞，有粒白细胞包括嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞和嗜中性白细胞；无粒白细胞包括淋巴细胞和单核细胞。 （1）嗜酸性白细胞： 数量较少，但在血涂片中可以找到。细胞质中存在粗大的嗜酸性颗粒，胞质常被染成红色或玫瑰花色，细胞核分叶形，染成紫红色。 （2）嗜碱性白细胞： 数量最少，在血涂片中很难找到。细胞质中存在粗大的嗜碱性颗粒，胞质常被染成兰紫色，细胞核分叶形，染色较深，但常被粗大的兰紫色颗粒掩盖。 （3）嗜中性白细胞： 在有粒白细胞中，它的数量最多，很容易找到。细胞质染成淡红色，胞质内含有细小的颗粒，一般不易看清，细胞核为兰紫色，核分杆状、蹄形和分叶形。 （4）淋巴细胞： 在白细胞中数目是最多的，大小不等，可分为大淋巴细胞、中淋巴细胞、小淋巴细胞。大淋巴细胞较少，占中小淋巴细胞的1/4～1/18。细胞质所占的比例较小，但随细胞体积增大而相应增多，核周围细胞质，染成天兰色，细胞核大，圆形，染成紫兰色。 （5）单核细胞： 数目不多，是血细胞中最大的细胞。核为肾形或马蹄形，颜色比淋巴细胞较淡，细胞质为淡灰兰色。 3、血小板： 为不规则的细胞质小块或碎片，形状象雪花，在血小板中有细小的紫兰色颗粒。血小板常聚集在红细胞之间（注意：在观察过程中注意染料、渣子和细胞及血小板等的区别）。 图2 血涂片中血细胞观察结果 五、注意事项： 1、载玻片的清洗：新玻片有游离碱质，因此应用10%盐酸浸泡24小时，然后再清水和蒸 馏水清洗。2、使用玻璃片时只能手持边缘，切忌触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥，无油腻。3、血涂片制好后，立即固定染色，以免细胞溶解和发生退行性变。3、血
用显微镜观察人血细胞涂片的实验教案 教师：李芸 教学目标 1.知识目标： 1）学会用显微镜观察人血的永久涂片和临时装片。 2）通过观察人血的永久涂片和临时装片、认识红细胞和白细胞 2.能力目标： 1）通过教师导学培养学生动手观察能力。 2）通过观察实验培养学生发现问题和解决问题的能力。 3）通过看血常规化验单，培养学生的综合分析能力及理论联系实际的能力。 3.情感态度与价值观目标： 1）通过对血液成分及各部分功能的认识，形成正确的血液观。 2）培养学生乐于探索生命的奥秘的精神和实事求是的科学态度。 教学重点与难点 1.教学重点：使用显微镜观察人血的永久涂片和临时装片，掌握血液的组成成分。 2.教学难点：使用显微镜观察人血的永久涂片和临时装片，掌握血液的组成成分。 教学准备：人血的永久涂片，显微镜 教学课时：1课时 教学过程
一、情境导入 首先，播放有关血液的图片，利用图像激发学生学习兴趣，对所学内容初步感知。紧接着教师通过提问，温故显微镜的使用方法引新，导出本节实验目的和实验器材，进一步提出实验要求。 二、实验步骤 （一）观察：将人血的永久涂片放在低倍显微镜下进行观察。 讨论：A.你所观察的人血永久涂片中数量最多的是哪种细胞？ B.你是如何分辨红细胞和白细胞的？（可从数量，形态结构等方面考虑） C.在普通光学显微镜下能不能直接找到血小板？猜一猜 这是什么原因？ 进行思路引导： 血液的其他组成部分又分别起什么作用？血细胞很“微小”，用什么来“明察秋毫”？（学生表达出“显微镜”一词），简单回顾显微镜使用步骤后，我巡视、指导学生进行分组实验（培养自主学习、局部合作的精神）。实验结束后，学生描述观察结果（我通过幻灯片展示人血涂片，引导学生进一步明辨红细胞和白细胞，并解释血小板在光学显微镜下看不见的原因） 1.红细胞 展示电镜下的红细胞图片并指导学生阅读课本相应内容，找出红细胞的形态特点及功能。之后通过发问：“红细胞为什么能运输氧？”引导学生描述血红蛋白的特性。
血细胞分析仪五分类检测技术与原理 血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一，随着近几年计算机技术的日新月异的发展，血细胞分析的技术也从三分类转向五分类，从二维空间进而转 向三维空间，而且我们也注意到现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了和当今非 常先进的流式细胞仪相同的技术，如散射光检测技术、鞘流技术、激光技术等等。本 文重点就五分类血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以阐述 1、电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法 这是Coutler公司1987年推出的新技术，血球悬浮在电解液中，用一定的电流通过传感器的内外两个电极，由于血细胞电阻抗很大，当血细胞通过两个 电极时，电极间阻抗瞬间增大，形成幅度与血细胞体积成正比的电脉冲，根据 脉冲的大小可测出细胞的体积。在测量红细胞时，利用一个脉冲甄别器，将幅 度较小的血小板脉冲去掉，保留红细胞和白细胞脉冲，因血液中白胞的数量不 及红细胞的1/500，故其总数据近似认为是对红细胞计数。在测量白细胞时， 利用溶血素，使红细胞溶解，再对剩下的白细胞计数。在对血小板计数时，调 低脉冲甄别器的阈值，计出总数，再减去红细胞的计数（其中已包括白细胞的 计数），即为血小板计数。由于不同类型但体积相同的细胞产生的脉冲幅度相 同，故仅靠体积是不能完全区分，利用高频电导法和激光散射分析白细胞内部 结构可以弥补这一缺陷。虽然细胞壁不能使低频电流通过，但能通过高频电流，细胞核的大小和密度不同，它们对高频电流的阻抗也不同，因此可以用来区分 白细胞。激光散射技术主要用来检查细胞膜表面特征和内部结构。激光散射对 细胞颗粒的结构和密度的区分能力强，粗颗粒产生的光散射比细颗粒强，借此 可将粒细胞区分开来，美国COULTER公司的STKS、MAXM系列血细胞分 析仪五分类就是利用电阻法、高频电导及激光散射联合检测法 2、光散射和细胞化学染色联合检测法 它利用激光散射和过氧化物酶染色技术进行细胞分类。嗜酸性粒细胞有很强的过氧化氢酶活性，中性粒细胞浆内含有较为丰富的过氧化氢酶，单核细胞 次之，原始细胞则极少，而淋巴细胞和嗜碱性细胞则缺管此酶。使用微量血液 经与含有清洗剂和甲醛的高渗液体进行适当稀释并孵育几十秒钟，此时细胞被 清洗剂所破坏，白细胞浆内酶固定，此后继续再进行第二次反应，加入过氧化 氢和四氢一萘酚加热，此时待测细胞中过氧化氢酶分解过氧化氢产生氧，后者 使四氯一萘酚显色并沉淀定位于含酶的颗粒中，此类细胞经激光束，由于光散 射及细胞大小不同而被分类。显然暑碱性细胞、淋巴细胞、原始细胞由于不含
低倍镜，增生活跃或明显活跃 (图一) 40倍，可见各阶段幼稚粒、有核红，粒系有核 左移，有的中性中幼粒有核浆发育不平衡；幼红细胞体积偏小，偏蓝 (图二) 100倍，幼红细胞胞体偏小，胞浆偏碱 外周血，成熟红细胞体积小，中心浅染去扩大 (图三) (图四) 低倍镜，增生活跃，细胞胞体偏大 (图五) 低倍镜，增生活跃，细胞胞体偏大 (图五) 40倍，可见各阶段巨幼红细胞 (图六)
高倍镜，杆状核巨型变(图七) 中巨幼红(图八) 大红细胞及H-J小体（100倍）(图九) 过分叶核粒细胞(图十) 低倍镜，增生明显活跃(图十一) 高倍镜，红系明显增生，中晚幼红为主， 成熟红细胞多嗜性(图十二)
低倍镜：成人CAA，髂骨：增生减低，高倍镜骨髓小粒：组织嗜碱细胞， 油滴较多，小粒空虚，细胞面积约20％浆细胞，网状细胞 (图十三) (图十四) 儿童（CAA)髂骨涂片，增生活跃（-）粒系晚幼一下阶段为主，炭核红，巨核巨核少见(图十五) 少（40倍）(图十六) 儿童SAA（胸骨）(图十七) 破骨细胞(图十八)
(图十九) (图二十) 核间桥（细胞内）(图二十一) 三核红(图二十二) 假性Pelge-Huet畸形(图二十三) 环形核(图二十四)
免疫酶标(图二十五) 环状铁粒幼红细胞(图二十六) 增生极度活跃 CML (图二十七) BM:以中心中晚幼粒为主，嗜酸， 嗜碱粒易见(图二十八) CML(PB) (图二十九) PV 增生活跃(图三十)
成熟红细胞堆积排列(图三十一)外周血可见泪滴红(图三十二) ET外周血，血小板大片状分布(图三十三) ET 骨髓成熟产板巨核，(图三十四) 幼稚浆细胞细胞形态(图三十五)
外周血细胞形态学检验及技巧 卫生部医院血液科天林 卫生部临床检验中心明婷谷小林陆红 一．血液学及血细胞形态学临床应用： ●是临床血液病诊断与治疗及临床医学检验学的基础工作。 ●血细胞形态学适用于临床血液病诊断快速简捷的要求。 ●近年来由于血细胞学及超微结构、免疫学、细胞遗传学、融合基因、造血干细胞及其细胞因子、骨髓造血微环境、基质细胞、树突状细胞、淋巴系细胞发生及其疾病表现，细胞增殖动力学与细胞凋亡以及骨髓组织病理学应用，推动了血液的临床与实验室的新知识迅猛发展。 ●当前血液病不能单凭临床与形态学作出诊断，必须以临床和血细胞形态学为基础，将免疫学、细胞遗传学及分子生物学新知识、新技术应用到血液学中，构成现代临床血液学与分子生物学诊断技术，弥补形态学的经验性与主观性带来负面缺陷，才能提高血液病的诊断与治疗水平。 ●进入90 年代以来，国外采用多学科联合技术综合诊断技术与方案： ○FAB-AL （1976 ）、NCL （美国国家癌症研究所）对FAB-AL 分型的补充（1995 ）、AL-MIC 分（类）型，MIC 及MICM 分型（1985-1990 ）； ○FAB-CL 分型（1989 ）、中国CL 分型（1997 ）； ○FAB-MDS 分型（1982 ）、MIC 协作组对FAB-MDS 分型提出补充建议（1987 ）； ○WHO 对造血系统及髓系恶性疾病和淋巴系恶性肿瘤WHO 分类（2000 ）； ●血细胞形态学诊断技术正在进入显微图象软件时期： ○创造出许多多功能软件，如血细胞形态学、细胞化学染色、血液病诊断与鉴别诊断、CL 诊断与治疗及教学系统多媒体软件等。 ○将显微镜与微机相连，应用储存、分类、检索软件，编辑、打印诊断报告，并可附多幅细胞图象。 二．血细胞形态学基本概念 血细胞形态学作为临床血液病基础诊断：
电阻抗法血液分析仪检测原理 电阻抗 电阻抗法血液分析仪检测原理 2009-8-7 9:52 【大中小】电阻抗法血细胞计数原理又名库尔特原理。 1. 红细胞检测原理：将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器红细胞检测原 理中，将小孔管（也称传感器）插进细胞悬液中。小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。当接通电源后，位于小孔管两侧电极产生稳定电流，稀释细胞悬液从小孔管外侧通过小孔管壁上宝石小孔（直径 <100um，厚度约75um）向小孔管内部流动，使小孔感应区内电阻增高，引起瞬间电压变化形成脉冲信号，脉冲振幅越高，细胞体积越大，脉冲数量越多，细胞数量越多，由此得出血液中血细胞数量和体积值。 三分类血球分析仪工作原理示意图 2. 白细胞分类计数原理根据电阻抗法原理，经溶血剂处理的、脱水的、不同体积的白细胞通过小孔时，脉冲大小不同，将体积为35～450fl 白细胞，分为256 个通道，其中，淋巴细胞为单个核细胞、颗粒少、细胞小，位于35～90fl 的小细胞区，粒细胞（中性粒细胞）的核分多叶、颗粒多、胞体大，位于160fl 以上的大细胞区，单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始细胞、幼稚细胞等，位于90～160fl 的单个核细胞区，又称为中间型细胞。仪器根据各亚群占总体的比例，计算出各亚群细胞的百分率，医学教育网整理并同时计算各亚群细胞的绝对值，显示白细胞体积分布直方图。 3.血红蛋白测定原理当稀释血液中加入溶血剂后，红细胞溶解并释放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物，在特定波长（530～550nm）下比色，吸光度变化与稀释液中Hb 含量成正比，最终显示Hb 浓度。不同类型血液分析仪，溶血剂配方不同，所形成血红蛋白衍生物不同，吸收光谱不同，如含氰化钾的溶血剂，与血红蛋白医学教育网整理作用后形成氰化血红蛋白，其最大吸收峰接近540nm。
用显微镜观察人血细胞涂片的实验教案 公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-
用显微镜观察人血细胞涂片的实验教案 教师：李芸 教学目标 1.知识目标： 1）学会用显微镜观察人血的永久涂片和临时装片。 2）通过观察人血的永久涂片和临时装片、认识红细胞和白细胞 2.能力目标： 1）通过教师导学培养学生动手观察能力。 2）通过观察实验培养学生发现问题和解决问题的能力。 3）通过看血常规化验单，培养学生的综合分析能力及理论联系实际的能力。 3.情感态度与价值观目标： 1）通过对血液成分及各部分功能的认识，形成正确的血液观。 2）培养学生乐于探索生命的奥秘的精神和实事求是的科学态度。 教学重点与难点 1.教学重点：使用显微镜观察人血的永久涂片和临时装片，掌握血液的组成成分。 2.教学难点：使用显微镜观察人血的永久涂片和临时装片，掌握血液的组成成分。 教学准备：人血的永久涂片，显微镜 教学课时：1课时 教学过程 一、情境导入
首先，播放有关血液的图片，利用图像激发学生学习兴趣，对所学内容初步感知。紧接着教师通过提问，温故显微镜的使用方法引新，导出本节实验目的和实验器材，进一步提出实验要求。 二、实验步骤 （一）观察：将人血的永久涂片放在低倍显微镜下进行观察。 讨论：A.你所观察的人血永久涂片中数量最多的是哪种细胞？ B.你是如何分辨红细胞和白细胞的？（可从数量，形态结构等方面考虑） C.在普通光学显微镜下能不能直接找到血小板？猜一猜这是什么原因？ 进行思路引导： 血液的其他组成部分又分别起什么作用？血细胞很“微小”，用什么来“明察秋毫”？（学生表达出“显微镜”一词），简单回顾显微镜使用步骤后，我巡视、指导学生进行分组实验（培养自主学习、局部合作的精神）。实验结束后，学生描述观察结果（我通过幻灯片展示人血涂片，引导学生进一步明辨红细胞和白细胞，并解释血小板在光学显微镜下看不见的原因） 1.红细胞 展示电镜下的红细胞图片并指导学生阅读课本相应内容，找出红细胞的形态特点及功能。之后通过发问：“红细胞为什么能运输氧？”引导学生描述血红蛋白的特性。 2.白细胞 播放白细胞吞噬细菌的视频录像，引导学生归纳出白细胞的特点和功能
血细胞分析仪五分类检测技术及原理 血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一，随着科学技术日新月异的发展，血细胞分析的技术也从几年前的三分类转向现在的五分类，从二维空间进而转向三维空间，同时现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了先进的技术，如鞘流技术、激光技术等。下面就五分类血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以说明。 1 采用阻抗、激光散射和荧光染色技术检测法 直流电阻抗法（DC）用于测量细胞体积大小。激光散射产生的前向散射光、侧向散射光和侧向荧光可用于探测白细胞体积大小、细胞内含物的情况（细胞核以及颗粒情况），侧向荧光则可以反映细胞内脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的含量，特有的嗜酸性粒细胞检测溶血剂Str-matolyzer-EO可将除了嗜酸细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜酸细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。在嗜碱细胞通道中，使用特殊溶血剂Strmatolyzer-BA可将除了嗜碱细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜碱细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。幼稚细胞检查通道（IMI）可以根据幼稚细胞膜比成熟细胞膜表面含有脂质较少的现象，在细胞稀释悬液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞表面的氨基酸较多，对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂后成熟细胞易被溶解，而幼稚细胞不易被破坏，可通过电阻法检测出来。综合各个测量方法，得到白细胞五分类的图形和数据。这种技术主要应用在Sysmex研制和开发的SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析仪中。 2 电阻抗和射频电导联合检测法 这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞:（1）淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入溶血剂使红细胞溶解，而使白细胞保持完整，细胞浆及核形态近似于生理状态，当这些细胞通过检测系统时，对白细胞进行电阻抗法（测量细胞体积）和射频电导法（检测细胞核和颗粒密度）的联合检测，结果将细胞分成淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞三个群体。（2）嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统:在细胞悬浮液中加入特殊的溶血剂，除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外，其他细胞均被溶解或萎缩，再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱性细胞进行计数。（3）幼稚细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂时，成熟细胞被溶解，只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。目前日本东亚公司的NE1500、SYSNEX公司的SE9000血细胞分析仪就是采用这种方法进行五分类的。 3 多角度激光偏振光散射检测法
第5章血液和血细胞发生 一、选择题 （一）A型题 1．观察血细胞常用的方法是 A. 石蜡切片、H-E染色 B. 冰冻切片、H-E染色 C. 涂片、H-E染色 D. 涂片、Wright或Giemsa染色 E. 石蜡切片、Wright或Giemsa染色 2．中性粒细胞的嗜天青颗粒内含有 A. 碱性磷酸酶 B. 吞噬素和溶菌酶 C. 酸性磷酸酶和髓过氧化物酶 D. 组胺酸 E. 芳基硫酸酯酶 3. 关于红细胞描述错误的是 A. 外周血红细胞无细胞器 B. 胞质中充满血红蛋白 C. 细胞呈双凹圆盘状 D. 细胞膜上有ABO血型抗原 E. 向全身的组织和细胞供给氧气，带走二氧化碳 4．关于嗜酸性粒细胞描述正确的是 A. 胞质的特殊颗粒含有组胺 B. 在发生急性细菌性炎症时显著增多 C. 来自多核巨细胞 D. 细胞核常分4～5叶 E. 在过敏性疾病和寄生虫病时增多 5．关于中性粒细胞描述错误的是 A. 占白细胞总数的比例最高 B. 细胞核呈杆状或分叶状 C. 胞质中含嗜天青颗粒和特殊颗粒 D. 在急性细菌性疾病时明显增多 E. 胞质的特殊颗粒含组胺、肝素和白三烯 6．关于嗜碱性粒细胞描述正确的是 A. 占白细胞总数的比例最高 B. 细胞质具有强嗜碱性 C. 胞核呈圆形 D. 胞质中含嗜碱性特殊颗粒 E. 在急性细菌性感染疾病时明显增多
7．关于血小板描述正确的是 A. 是有核的细胞 B. 细胞直径7～8μm C. 胞质中有嗜碱性的特殊颗粒 D. 胞质的特殊颗粒含组胺和肝素 E. 在止血和凝血过程中起重要作用 8．关于单核细胞描述错误的是 A. 占白细胞总数的3％～8％ B. 是最大的白细胞 C. 细胞核呈椭圆形或肾形，着色较浅 D. 胞质中含许多细小的嗜天青颗粒 E. 胞质分隔成许多小区，脱落后形成血小板 9．煌焦油蓝活体染色时网织红细胞中的蓝色细网或颗粒是 A. 残存的滑面内质网 B. 残存的多聚核糖体 C. 残存的溶酶体 D. 残存的线粒体 E. 残存的高尔基复合体 10．多能造血干细胞是 A. 发生各种血细胞的原始细胞 B. 是一种小淋巴细胞 C. 不能以自我复制的方式进行细胞繁殖 D. 起源于胚胎外胚层 E. 它的形态和结构与大淋巴细胞相似 11．血细胞最早出现的部位是 A. 卵黄囊血岛 B. 骨髓 C. 肝 D. 淋巴结 E. 脾 12．关于血细胞发生过程描述错误的是 A. 分原始、幼稚和成熟3个阶段 B. 胞体由大变小，巨核细胞由小变大 C. 细胞分裂能力从无到有 D. 细胞核由大变小 E. 红细胞核消失 13．红细胞的平均寿命是 A. 7天 B. 14天 C. 30天
正常血细胞形态观察 实验准备 一．器材： 载玻片 盖玻片： 滴管：4个 橡皮吸头：4个 玻璃棒：4根 烧杯：1000 ml，2个 量筒：100ml、500 ml、1000 ml各一 蜡笔 棕色小口瓶 碾钵 载玻片处理：一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸20分钟，用流水冲洗，再经清洁液浸泡过夜，用流水反复冲洗，最后入95%酒精浸泡约1小时。取出，以洁净布巾夹持玻片边缘擦干备用。 二．试剂： 瑞氏染液240ml 瑞氏染料粉剂 0.1g 纯甲醇（AR） 60ml 将粉剂放入洁净干燥碾钵内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，
然后将已溶解的染料倒入洁净的棕色玻璃瓶内，剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反复，直至染料完全溶解为止。新配制的染液需密封保存，室温放置1周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。 磷酸盐缓冲液 1%KH2PO4 30ml 1%Na2HPO4 20ml 加蒸馏水至800 ml，调PH值到6.5~7.0，定容至1000ml。 甲醇 二甲苯 实验步骤 一．涂片 （一）血液涂片的制作 （1）需载玻片2张，分别称为玻片1和玻片2（推片）。 （2）用玻片1一端接约3mm直径的血滴，将此玻片1保持水平。（3）取另一边缘平整的载玻片2（推片），将其前端放在血滴前，与片1保持30°角并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的宽度。 （4）立刻将推片与载玻片呈30°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推动涂抹，至血液铺完血膜为止。 （5）挥动片1使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。
（6）每只动物涂片一张。 （7）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。 （8）置30min～1hr后较利于观察红细胞的形态。 注意事项： ●如标本本身太短，可观察的部分会受局限，故以在离开载玻片 另一端2cm地方涂抹为宜。 ●载玻片、推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。 在涂抹贫血病人的血液时，将推片稍竖起（不是30°而是35°～40°左右），以较快的速度推比较好，而对红细胞增高的病人则相反。 ●如用力过猛白细胞容易破损。 二．染色 （一）血液涂片的染色 （1）将待染涂片平放于染色架上。 （2）用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放置1～3分钟。 （3）加入等量的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端放出，混匀为止，或用嘴来回轻轻
外周血细胞形态学检验及技巧 卫生部北京医院血液科郑天林 卫生部临床检验中心彭明婷谷小林陆红 一．血液学及血细胞形态学临床应用： ●是临床血液病诊断与治疗及临床医学检验学的基础工作。 ●血细胞形态学适用于临床血液病诊断快速简捷的要求。 ●近年来由于血细胞学及超微结构、免疫学、细胞遗传学、融合基因、造血干细胞及其细胞因子、骨髓造血微环境、基质细胞、树突状细胞、淋巴系细胞发生及其疾病表现，细胞增殖动力学与细胞凋亡以及骨髓组织病理学应用，推动了血液的临床与实验室的新知识迅猛发展。 ●当前血液病不能单凭临床与形态学作出诊断，必须以临床和血细胞形态学为基础，将免疫学、细胞遗传学及分子生物学新知识、新技术应用到血液学中，构成现代临床血液学与分子生物学诊断技术，弥补形态学的经验性与主观性带来负面缺陷，才能提高血液病的诊断与治疗水平。 ●进入90 年代以来，国内外采用多学科联合技术综合诊断技术与方案： ○FAB-AL （1976 ）、NCL （美国国家癌症研究所）对FAB-AL 分型的补充（1995 ）、AL-MIC 分（类）型，MIC 及MICM 分型（1985-1990 ）； ○FAB-CL 分型（1989 ）、中国CL 分型（1997 ）； ○FAB-MDS 分型（1982 ）、MIC 协作组对FAB-MDS 分型提出补充建议（1987 ）； ○WHO 对造血系统及髓系恶性疾病和淋巴系恶性肿瘤WHO 分类（2000 ）； ●血细胞形态学诊断技术正在进入显微图象软件时期： ○创造出许多多功能软件，如血细胞形态学、细胞化学染色、血液病诊断与鉴别诊断、CL 诊断与治疗及教学系统多媒体软件等。 ○将显微镜与微机相连，应用储存、分类、检索软件，编辑、打印诊断报告，并可附多幅细胞图象。 二．血细胞形态学基本概念 血细胞形态学作为临床血液病基础诊断：
低倍镜，增生活跃或明显活跃(图一) 40倍，可见各阶段幼稚粒、有核红，粒系有核 左移，有的中性中幼粒有核浆发育不平衡；幼 红细胞体积偏小，偏蓝(图二) 100倍，幼红细胞胞体偏小，胞浆偏碱外周血，成熟红细胞体积小，中心浅染去扩大(图三) (图四) 低倍镜，增生活跃，细胞胞体偏大(图五) 低倍镜，增生活跃，细胞胞体偏大(图五) 40倍，可见各阶段巨幼红细胞(图六)
高倍镜，杆状核巨型变(图七) 中巨幼红(图八) 大红细胞及H-J小体（100倍）(图九) 过分叶核粒细胞(图十) 低倍镜，增生明显活跃(图十一) 高倍镜，红系明显增生，中晚幼红为主， 成熟红细胞多嗜性(图十二)
低倍镜：成人CAA，髂骨：增生减低，高倍镜骨髓小粒：组织嗜碱细胞， 油滴较多，小粒空虚，细胞面积约20％浆细胞，网状细胞 (图十三) (图十四) 儿童（CAA)髂骨涂片，增生活跃（-）粒系晚幼一下阶段为主，炭核红，巨核巨核少见(图十五) 少（40倍）(图十六) 儿童SAA（胸骨）(图十七) 破骨细胞(图十八)
(图十九) (图二十) 核间桥（细胞内）(图二十一) 三核红(图二十二) 假性Pelge-Huet畸形(图二十三) 环形核(图二十四)
免疫酶标(图二十五) 环状铁粒幼红细胞(图二十六) 增生极度活跃 CML (图二十七) BM:以中心中晚幼粒为主，嗜酸， 嗜碱粒易见(图二十八) CML(PB) (图二十九) PV 增生活跃(图三十)
成熟红细胞堆积排列(图三十一)外周血可见泪滴红(图三十二) ET外周血，血小板大片状分布(图三十三) ET 骨髓成熟产板巨核，(图三十四) 幼稚浆细胞细胞形态(图三十五)
外周血细胞形态检验 1.外周血涂片检查步骤： （1）肉眼观察：涂片面膜大小、厚薄是否适中，染色好坏。（2）低倍镜观察全貌： ①涂片及染色好坏； ②了解白细胞数（可大体校对WBC直接计数是否正确）； ③了解白细胞大致分布及其各阶段大致比例，特别要注意由于涂片过力，把WBC及成熟粒细胞大多推于片尾部位，造成分类比值误差。片尾有无异常细胞。 ④选择具有代表性的细胞镜检区域。 （3）油镜观察：进行WBC分类计数，观察细胞形态、比例、有无巨大或异常细胞。 ①血涂片对WBC总数准确性估计：从低倍及油镜中估计WBC数及其分布。医|学教育网搜集整理一般区分WBC数几个等级（油镜视野中WBC密度、分散无重叠）。参见WBC形态诊断技巧节段。 ②白细胞分类计数：血中主要两大比例的中性成熟粒细胞与淋巴细胞及其他小比例细胞是否属正常范围及形态有 无异常。
③注意片尾端有无巨大或出现不成熟或异常细胞（如中晚幼粒、中晚幼红细胞、异常淋巴细胞、吞噬细胞、肿瘤细胞等）。 ④红细胞形态（群体、个体）、排列（重叠、缗钱状）。 ⑤血小板数量、形态及聚集性。⑥寄生虫。 ●注意事项 1．血膜呈舌状，头、体、尾分明 2.空气中晃动，尽快干燥；37℃恒温箱中促干 3．涂片的厚薄、长度与血滴大小（10~20μl）与血片质量4．1h内染色或在1h内甲醇固定 5.正确清洁玻片 6．抗凝血或毛细血管血涂片；EDTA能阻止PLT聚集 7．抗凝血液4h内涂片，先在低倍镜下浏览全片，了解染色好坏和细胞分布情况，观察有无异常细胞。选择涂片体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个白细胞，按其形态特征进行分类计数。求出各类细胞所占百分数。 8.分类时应从血膜体尾交界处边缘向中央依次上下呈城垛 状迂回移动，计数使不能重复和遗漏。
优缺点比较 SYSMEX：用户数量多，售后服务有保证，总体质量不错，采用生化染色结合散射光的方法，受一些异常细胞的干扰较少 库尔特：分析重复性和准确性最好，缺点：成本较高，维修成本也最高贝克曼-库尔特STKS甚至可以支持CD4和CD8的分类库尔特的GEN-S总体不错， 试剂种类少，分析上用的是VCS技术，还可以免保养，只是试剂消耗量大 ABX：价格便宜，缺点：故障高，稳定性差，分析精度不好 拜耳：Bayer ADVIA120血液分析仪血小板线性宽,重复性好;网织红细胞计数CHr对缺铁性贫血的疗效判断有重要意义.缺点用户少，Bayer ADVIA120的管道一体化,在一块透明板里面,堵塞拉就不知道怎么办，拜耳120所用的试剂种类多，出的项目也多（可分六类白细胞，引申的项目也不少），网织红几项参数也是由同一管血自动出的。有配套质控。缺点是试剂消耗也大（冲管道等），管路（很细又多）易出现堵塞等故障，自动进样也时有故障出现 市面上所讲的五分类血球计数仪其实可以分为两种：真五分类技术的血球仪与假五分类血球仪（例如意大利的血球仪，更多的使用电脑软件的分析而得出的结果）。我们一般区分这两种方法的仪器有下面经验。首先看检测法，如果是试剂法，那么溶血素不应该少于四种。如果是激光法，溶血素不少于三种。满足上面条件即是采用真五分类技术的血球仪。 常见的五分类技术一般采用如下的检测方法①:VOLUME或称为电阻抗法(即是利用细胞的体积).②:高频电磁波传导(Conductivitiy或称射频法.③:激光散射(LIGHT SCATTER或称光散射).④：激光散射+白细胞化学染色。即是在稀释液中加入过氧化酶（MPO）的底物及现色剂，根据白细胞的对MPO的反应分类。我们就按其方法学对一般常用的几种五分类血球仪作出评价与分析：库尔特-贝克曼（COULTER-BEKMAN);日本东亚（Sysmex);美国雅培（ABBOTT）；德国Bayer. 一、电阻抗、射频及激光散射检测方法 机型：美国库尔特-贝克曼（COULTER-BEKMAN)公司STK、MAXM等系列。 检测原理：悬浮的白细胞（不导电）通过宝石孔的电极时，电极间的电阻抗瞬间增大，然后按照其脉冲信号进行放大，再经电脑CPU处理可以进行不完全的区分。然后利用高频电磁传导的原理，即利用细胞壁可通过高频电流，对细胞内的颗粒大小及密度，核形状，细胞器不同而电导不同来区分，再用激光散射技术检测细胞的表面特征。通过后两种技术的弥补，配合溶血素的使用，可以对细胞进行五分类。 评价：属于高档次的血球仪，溶血素与稀释液、清洗液等有八种瓶瓶罐罐之多，其采用的技术在所有血球仪中当属前列。精度、准确性是SYSMEX，雅培不可比拟的。并且在分析上采用VBS技术，可以少保养，只是试剂消耗量比较大，使用了两年，效果还不错。一台库尔特的GEN-S报价可能是150万左右。 二、光散射和细胞化学染色检测方法 机型：德国Bayer的ADVIA 120等 检测原理：主要是用溶血素破坏红细胞，利用中性粒细胞浆里含有的MPO>单核>原始、淋巴、嗜酸、嗜碱的性质，用固定酶，然后加显色剂，沉淀定位酶，最后由光散射与细胞的大小进行分类。厂家说其用二维光散射方式分析血析血小板，使小红细胞、红细胞碎片与血小板更容易分辨，大大提高了血小板测定的准确度和精密度[1]。评价：拜耳ADVIA 120所用的试剂种类多，出的项目也多（可分六类白细胞，引申的项目也不少），网织红几项参数也是由同一管血自动出的。有配套质控。且其能辨别异常血小板。缺点是试剂消耗也大（冲管道等），管路（很细又多）易出现堵塞等故障，自动进样也时有故障出现。且为整体密封，维修比较困难。且其用光学法记数血小板，光学法就是染色后用激光识别，优点是能识别血小板；缺点是染色成本贵，单位时间内计数细胞少、重
外周血细胞形态学检验及诊断技巧主讲：卫生部北京医院 郑天林录制：卫星卫生科技教育网监制：卫生部科教司 一.概述 （一）血细胞形态学基本概念 （二）血细胞形态学检查方法 （三）血液学及血细胞形态学临床应用 （四）临床 /形态学诊断与血液学检验及专业人员素质问题二．形态学及血液检查与自身特性 （一）血常规检查 （二）白细胞分类 （三）骨髓外周血细胞形态学及分类 （四）血细胞涂片特性三．血细胞染色法 （一）细胞染色机理 （二）瑞氏染色 （三）姬姆萨染色 （四）瑞氏 - 姬姆萨染色液鉴定 （五）瑞氏 - 姬姆萨混合染色四．血细胞形态学采样、制片与检查程序 （一）采样、制片、染色工序至关重要 （二）涂片染色五．外周血细胞形态学检验技巧 （一）WBC 形态学 （二）红细胞形态学 （三）出现有核（内 /巨幼）红 / 幼粒细胞意义 （四）血小板巨核细胞六．外周血细胞形态学检查步骤、注意事项及检查报告书写内容 （一）注意事项 （二）外周血涂片检查步骤 （三）外周血涂片报告内容一、概述 （一）血细胞形学基本概念 血细胞形态学是血液病基础诊断与血液学检验的重要项目 ?正常人的血液及造血器官中，各种血细胞的数量有一定的正常范围，不同血细胞及细胞发育的不同阶段有一定形态结构特点。 ?观察血细胞形态和数量及其比例的变化来研究造血器官的结构和功能是血液学的重要组成部分，是诊断造血系统疾病最基本、被临床普遍应用的最简便实用的检查方法。 ?在造血系统疾病发生造血功能紊乱，引起血细胞形态学的量和质的改变。在临床各科某些原发性疾病患者出现继发性血液学形态学的病理改变，籍以了解患者机体状况如感染（细菌、病毒、寄生虫、药物）等反应。 ?血细胞形态学检查是为临床提供诊断依据，应备有患者的临床表现基础检查初步诊断的病历摘要，才能进行形态学检查。必要时还要做骨髓活检（切片、活检材料滚片、活检穿刺针残液图片）细胞化学染色 , 免疫学表型等检查的必备程序。 ?血细胞形态学检查应包括外周血和骨髓两部分组成，必须平行进行检查。外周血细胞改变往往反映骨髓病变的重要信息，有利于诊断。 ?疑似血液病和血液学检查异常情况不能只依赖使用分析仪做血常规检查而废弃镜下血涂片细胞形态学检查的错误倾向。 （二）细胞形态学检查方法 1．光镜细胞形态学；细胞形态学的基本内容和常用的检查方法，广泛用于临床方法。