七项呼吸道病毒检测试剂盒（鉴定）使用说明书
【产品名称】
通用名称：七项呼吸道病毒检测试剂盒
英文名称：D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screen & ID Kit
【包装规格】
鉴定试剂：80人份/盒
【预期用途】
用于临床定性检测7种呼吸道病毒：甲型（A型）流感病毒，乙型（B型）流感病毒，呼吸道合胞病毒，腺病毒，副流感病毒1、2和3型。
【检验原理】
荧光素（FITC）标记的单克隆抗体与病毒抗原结合，形成稳定的抗原-抗体复合物，在荧光显微镜下观察，呈现特异性绿色荧光。
【主要组成成份】
组份名称规格主要成分
1 DFA染色试剂鉴定试剂流感A试剂：
2 mL
每试剂瓶为一项与病毒
抗原相对应的荧光单克
隆抗体
流感B试剂：2 mL
腺病毒试剂：2 mL
呼吸道合胞病毒试剂：2 mL
副流感1试剂：2 mL
副流感2试剂：2 mL
副流感3试剂：2 mL
2 40X浓缩洗液25 mL PBS
3 固定液15 mL 甘油
4 阳性质控板5块包被病毒抗原
【储存条件及有效期】
2oC-8oC避光保存18个月。
【适用仪器】
荧光显微镜，激发波长490 nm，发射波长520 nm。
【样本要求】
鼻咽部取样后保存于生理盐水中，应在24小时内送检。
【检验方法】
1、取样：用鼻咽拭子从病人的鼻咽部取样或者使用鼻腔灌洗液，将鼻咽拭子放入储存管中（含有生理盐水）。
2、样本准备步骤：
①将样本充分震荡混匀约10-15秒。
②在400-600xg转速下离心5-10分钟。
③弃上清。
④在沉淀中加2-3 mL PBS缓冲液（不能使用试剂盒中的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。
⑤在400-600xg转速下离心5-10分钟。
⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。
⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。
⑧在沉淀中加0.5-1 mL的PBS缓冲液。
⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。
3、直接样本测试步骤：
①在8孔板上的孔内滴加25 μL的细胞悬浊液，每样本需滴加七孔。
②样本完全风干。
③在20oC到25oC，用预冷的100%丙酮固定细胞约5-10分钟。
④从丙酮中取出载玻片并风干。
⑤在固定并风干的细胞上，每一孔分别滴加不同的DFA鉴定染色试剂，试剂要完全覆盖细胞。
⑥可选步骤：在呼吸道病毒抗原对照板的每孔内滴加相对应的鉴定试剂。抗原对照板包含了被病毒感染的细胞和未感染的细胞（板上标有NEG的孔为阴性对照孔，但滴加的是DFA染色试剂（任选一种），检验试剂是否有假阳性）。
⑦将载玻片放于35oC到37oC的恒温箱内孵育15到30分钟，为保持其湿润最好放置于带盖的盒子内。
⑧用事先稀释好的洗液（试剂盒中40X浓缩洗液）漂洗染色细胞。为了更有效地洗涤，请将玻片在洗液中反复浸蘸4次左右。
⑨使用新的稀释洗液再洗一次。
⑩用去离子水再洗一遍。
4、观察实验结果
滴加2到3滴固定液，并加盖盖玻片，要注意避免产生气泡。在200倍放大荧光显微镜下观察结果。
【结果判断】
200倍显微镜下每视野找到≥2个绿色荧光细胞即为阳性，否则为阴性。阴性细胞被Evans Blue染成红色。【检验结果的解释】
建议在检测样本前，首先对对照进行检测，以保证测试的可靠性，当观察到被感染的细胞中的明亮的苹果绿荧光时为阳性反应。未感染的阴性细胞则被荧光试剂中所包含的伊文斯蓝染为暗红色。实验人员应注意不要将成团细胞吸附抗体而产生的荧光与病毒特异性的荧光染色相混淆。在少数情况下，因为中毒或不恰当的储存而导致的死细胞会非特异性的吸附抗体，呈现为灰暗和模糊的绿色荧光，充分洗涤可以帮助消除此类非特异性染色。
对于每种病毒，典型的苹果绿荧光染色样式如下：
流感病毒A型和B型：荧光染色为胞浆型，胞核型或两者皆有。胞浆型染色通常为带大块细胞包涵物的颗粒状荧光。而胞核型染色为均一的明亮荧光。
RSV：胞浆型荧光，为颗粒状并在合胞处有小块的细胞包涵物。
腺病毒：颗粒状的胞浆型荧光，明亮的胞核型荧光，或者两者皆有。
副流感病毒1、2、3型：胞浆型荧光，为颗粒状并有不规则的包涵物。2型和3型可引起合胞体的形成。
在很多研究中均报道在单份样本中发现超过一种以上的病毒的同时感染。如果在8孔玻片上多个孔中均发现有荧光细胞则表明有多重病毒同时存在。根据与针对单种病毒的荧光试剂反应后是否有荧光染色来确定样本中存在的病毒。在此类情况下，结果应报道为“直接样本检测发现某某病毒和某某病毒”或“细胞培养分离出某某病毒和某某病毒”。
A. 直接样本检测结果
样本的质量取决于其中所含上皮细胞的数量，通过在放大倍数200倍下对不同视野进行观察来评价样本的质量。合格的样本要求在每个视野下至少有两个上皮细胞。阴性结果为在至少含有20个柱状上皮细胞的样本中无荧光染色。如果样本中上皮细胞数量少于20个则为样本不合格，此类样本的检测结果被视为无效，应重新采样再进行检测，或者将剩余的样本进行细胞培养后再检测。
如对合格的样本检测后未发现荧光染色的细胞，结果应被报告为“可能为阴性，在直接样本检测中未发现流感病毒A型，流感病毒B型，副流感病毒1、2、3型，腺病毒和呼吸道合胞病毒”。但是这些阴性结果应通过细胞培养加以确认。
检测为阴性的样本，如果细胞培养后检测为阳性结果，则应被报告为“细胞培养后分理出某病毒”，此处的某病毒为所检测出的流感病毒A型，流感病毒B型，副流感病毒1、2、3型，腺病毒和呼吸道合胞病毒。（见【检测结果的解释】B部分）
如果样本中发现被荧光染色的细胞，则表明该试剂所对应的病毒为阳性。结果应被报告为“直接样本检测某病毒阳性”，此处的某病毒为所检测出的流感病毒A型，流感病毒B型，副流感病毒1、2、3型，腺病毒和呼吸道合胞病毒。
B.细胞培养分离/确认试验的检测结果
需对整个细胞点或单层细胞进行检查以确定是否有荧光染色的阳性细胞。如果未发现被荧光染色的细
胞，样本检测的结果应被报告为“细胞培养分离未发现流感病毒A型，流感病毒B型，副流感病毒1、2、3型，腺病毒和呼吸道合胞病毒”。
如果发现被荧光染色的细胞，则表明该试剂所针对的病毒为阳性。结果应被报告为“细胞培养分离发现某病毒阳性”，此处的某病毒为所检测出的流感病毒A型，流感病毒B型，副流感病毒1、2、3型，腺病毒和呼吸道合胞病毒。
【检测方法的局限性】
1、样本采集，保存及运输不当可能会导致假阴性结果。
2、本产品未建立对除呼吸道样本以外的样本进行直接检测的分析性能指标。如使用者对除呼吸道样本以外种类的样本进行检测，应自行建立相关分析性能指标。
3、采用不同于本操作说明中所明示的温度与反应时间，可能会导致错误的检测结果。
4、样本的质量或对样本的处理对病毒检测有比较大的影响。阴性检测结果并不排除病毒感染的可能。需结合流行病学研究，临床症状以及其他诊断方法对本产品的检测结果进行解释。
5、对于抗病毒治疗对本产品的检测性能的影响，未建立相关信息。
6、本试剂盒中所使用的单克隆抗体来源于以病毒感染细胞为免疫原建立的杂交瘤。对于特定病毒抗原能否被这些单克隆抗体所检测是未决的。
7、由于单克隆抗体是通过所限定的病毒株制备的，它们可能无法检测出所有病毒的变异型或新出现的病毒株。单克隆抗体可能无法检测出在靶区域有微小氨基酸变异的病毒株。
8、本试剂盒中所使用的单克隆抗体不是亚型特异性的，因此不能对腺病毒或RSV的不同亚型进行分型检测。
9、在直接样本中检测出的一些病毒抗原可能来源于死病毒，因此不能进行细胞培养分离。此类情况常见于RSV，因为RSV不稳定并且容易失活。
10、直接样本检测结果为阴性的样本应接种于适当的细胞进行病毒分离培养，以确定该样本中是否存在某种呼吸道病毒。
11、直接样本检测或细胞培养检测结果为阴性，并不能排除病毒感染存在的可能。
12、只有使用DHI公司提供的试剂组分，才能保证本试剂盒的检测性能。
13、将试剂盒过长时间保存于强光下会降低荧光强度。
如样本被含有大量蛋白A的金黄色葡萄球菌菌种污染，可能会导致明亮的荧光染色背景。蛋白A会非特异性的与标记抗体Fc段结合，但可以通过形态学特征将此类结合与病毒抗原的结合区别开。例如，金黄色葡萄球菌结合后的荧光通常为小亮点（直径为1 m）。因此，对被细菌污染的细胞培养物的检测结果进行解释需谨慎。
【产品性能指标】
检验的灵敏度：荧光标记的单克隆抗体平均能检测出病毒的最低浓度约为1.0 PFU。
检验的特异性：用筛查和鉴定试剂对多种细胞和微生物进行交叉反应测试，对64种病毒、18种细胞、19种细菌均没有交叉反应。
【注意事项】
1.40X 浓缩洗液在2oC-8oC储存过程中可能会有盐的结晶析出，需放置室温溶解后再稀释。
2.在处理样本时，应尽可能在二级生物安全柜内操作。
3.样本准备步骤中，在清洗样本时请使用普通PBS，不要使用试剂盒内配套的浓缩洗液。
4.样本准备步骤中，一定要将黏液去除干净，否则会造成非特异荧光从而影响实验结果。
5.丙酮是易挥发、可燃性物质，使用时请远离明火。
6.DFA染色试剂及40X 浓缩洗液中含有0.1%和4%的叠氮化钠。此试剂有毒，操作时请带手套。如试剂不
慎接触皮肤或眼睛，请用大量清水冲洗。
7.抗原对照板只能一次性使用。
8.在使用和储存DFA染色试剂时要避免接触明亮的光线。
9.请在保质期内使用。
【医疗器械注册证书编号】国食药监械(进)字2010第3401647号
附录：中英文对照表
英文名称缩写中文名称
Influenza A IA A型（甲型）流感病毒Influenza B IB B型（乙型）流感病毒Adenovirus AD 腺病毒
Respiratory Syncytial Virus RSV 呼吸道合胞病毒Parainfluenza 1 P1 副流感病毒1型Parainfluenza 2 P2 副流感病毒2型Parainfluenza 3 P3 副流感病毒3型英文名称中文名称
40X Wash Solution Concentrate
40X浓缩洗液Mounting Fluid 固定液Respiratory Virus
Antigen Control Slides
阳性质控板
九项呼吸道病毒检查 一、呼吸道九联检主要检测病原体的IgM抗体,包括嗜肺军团菌(LP)、肺炎支原体(MP)、Q热立克次体(COX)、肺炎衣原体(CP)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(IFA)、乙型流感病毒(IFB)和副流感病毒1、2和3型(PIVS)。 二、采用间接免疫荧光法，主要针对九项病原体的IgM 检测。由于机体受到抗原刺激后最早产生的抗体是IgM，但是IgM的半衰期短（约5天）若血清中特异性IgM类抗体含量增高，表明有近期感染，这有助于感染性疾病的早期诊断。以下是关于九项病原体名称及其潜伏期和产生IgM的时间。 九项病原体IgM抗体产生时间
三、临床意义 嗜肺军团菌 是社区获得性肺炎的重要致病菌。在欧洲和北美军团军肺炎占社区获得性肺炎前3,4位，ICU重症社区获得性肺炎的第三位，而医院获得性肺炎的1～5 %也由嗜肺军团菌所致。对人致病的嗜肺军团菌有16个血清型，80%军团菌肺炎有嗜肺军团菌血清Ⅰ型引起。然而军团菌细菌培养检出率低, 只有50%左右, 目前临床上血清特异性抗体检查是常用的诊断军团菌感染的主要手段。
肺炎支原体 是目前儿童呼吸道感染的重要病原体之一，占儿童肺炎感染病原体的15%左右，由于肺炎支原体传统培养难度大，单纯凭借患儿的临床症状不易确诊是否感染，支原体抗体于感染后7～9d出现，3～4周达高峰，可持续4～6月，采用血清特异性抗体检查是常用的诊断肺炎支原体感染的主要手段。 Q热立克次体 可引起Q热等全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎等。血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。 肺炎衣原体 广泛存在于世界范围内，人类是其唯一的宿主，仅1个血清型。实验室检测方法有分离培养、血清学检测、核酸扩增技术等，目前临床主要使用血清学检测方法。肺炎衣原体是呼吸道感染主要病原之一，人与人之间的传
第26章呼吸道病毒测试题 填空 1.呼吸道病毒包括流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒、风疹病毒、腺病毒、鼻病毒、呼肠病毒等。 2.流感病毒根据流感病毒核糖核蛋白和M抗原（NP和MP）抗原的不同,可分为甲、乙、丙三型。 3.决定流感病毒亚型的特异性抗原是HA（血凝素）和NA（神经氨酸酶）. 4.流感病毒的核酸类型是单股负链RNA, 其显著特点是分7～8个节段且容易发生基因重组 . 5.流感病毒的核心由RNA,核蛋白和RNA聚合酶组成. 6.流感病毒的结构由核心,内膜和外膜组成. 其吸附细胞的结构是HA , 成熟病毒自细胞膜上的释放依赖NA的水解作用. 7.流感病毒的包膜镶嵌着2种糖蛋白刺突,即呈柱状的 HA 和呈蘑菇状的 NA. 8.麻疹病毒感染除引起麻疹外,少数患者尚可并发严重中枢神经系统疾病,即麻疹迟发性脑炎和 SSPE亚急性硬化性全脑炎 . 9.腮腺炎病毒除引起患者双侧或单侧腮腺肿大炎症外,20%男性患者并发睾丸炎 ,5%女性患者并发卵巢炎. 10.孕妇在妊娠5个月内感染风疹病毒后临床表现多为轻微 ,而其胎儿或新生儿易患先天性风疹综合征. 11.腺病毒为双链线状DNA,无包膜病毒,其蛋白衣壳由240个六邻体壳粒和12个五邻体壳粒共同构成20面立体对称球状体,并在20面体每一顶角壳粒各伸出一纤维隆起. 12.少年儿童和成人普通感冒及上呼吸道感染大多由鼻病毒或冠状病毒感染引起. 三. 单选题 １.流行性感冒的病原体是 A.流行性感冒杆菌 B.流感病毒 C.副流感病毒 D.呼吸道合胞病毒 E.鼻病毒 ２.普通感冒的最常见病原是 A.流感病毒 B.副流感病毒 C.腺病毒 D.风疹病毒 E.鼻病毒和冠状病毒
上海复星医学科技发展有限公司 呼吸道病毒7项检测 试剂 2011-1-10
呼吸道病毒7项检测试剂 目录 1．概述 (2) 2．D3Ultra DFA试剂 (3) 2.1 D3Ultra DFA试剂规格 (3) 2.2 D3Ultra DFA试剂用途 (3) 2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势 (3) 2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤 (4) 2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读 (5) 3．D3Ultra DFA试剂竞争优势 (6) 3.1 检验的特异性和灵敏度 (6) 3.2 市场竞争 (6) 附录1 七种病毒检测的临床意义 (8) 附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含） (9) 附录3 进口荧光显微镜参数 (10)
1．概述 日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。 常见的呼吸道病毒包括：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型。在病毒检测方法中，抗原检测有其无法比拟的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要；2. 快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7种呼吸道病毒。 D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。
呼吸道病毒抗原检测进院可行性报告 美国DIAGNOSTIC HYBRIDS公司睿信?呼吸道病毒抗原检测系统 在儿童群体中，呼吸道感染是一种极为常见的疾病之一。相关数据显示，90%的呼吸道感染均由病毒引起。呼吸道感染的发病率极高，该疾病的临床表现主要为呕吐、头痛、腹泻、流涕、低热、咳嗽轻喘、呼吸困难等，严重者还会产生肺感染、肺炎、中耳炎、支气管炎、鼻窦炎等并发症，从而使患儿的身心健康遭到严重危害。 呼吸道感染分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，而上呼吸道感染基本上都是病毒感染，细菌性感染非常少。上呼吸道病毒感染发生比较频繁，儿童每年大约被感染6- -9次，青少年和成年人每年大约2-4次。目前，多数诊疗机构对呼吸道的感染未进行病毒检测，而直接使用抗生素进行治疗，而抗生素无法治疗病毒引起的呼吸道感染，造成抗生素滥用，同时造成相关细菌的抗药性增强。虽然下呼吸道感染发生的频率较少，但是这些感染对人体危害更加严重。患有下呼吸道病毒感染的1.8%学龄儿童和13%的学前儿童需要住院治疗，11%患有下呼吸道病毒感染的成年人需要住院，而且1.2%的感染者会导致死亡。同时，值得注意的是:RSV，细菌，腺病毒，和流感病毒是最大可能导致医生接触传染的病原体。因此，呼吸道病毒检测是非常必要和重要的。本产品采用免疫荧光法，直接检测病毒抗原，具有更好的临床意义。 公司介绍
DIAGNOSTIC HYBRIDS公司总部位于美国俄亥俄州，分支机构和合作伙伴遍布全球30多个国家。公司主要致力于研发,生产应用于检测呼吸道疾病,衣原体和疱疹感染,肠道病毒的细胞和分子诊断试剂。目前呼吸道病毒抗原荧光检测试剂占有美国55%到65%的市场，在全球28个国家得到广泛使用，比如澳大利亚(澳洲)，秘鲁(南美)，英国(欧洲)，加拿大(北美)，韩国(亚洲)等等。现已被美国Quidel 公司收购。Quidel China Ltd.是其在中国的全资子公司，营业地点设在中国（上海）自由贸易试验区盛荣路88弄1号3层315室。 DIAGNOSTIC HYBRIDS公司一贯秉承为客户提供优质产品和卓越服务的理念。在产品生产和服务中严格执行IS013485标准。每种产品生产都经过严格的质量验证，从抗体原材料、荧光标记抗体到最终成品都遵循质量第一的目标。自从上市以来，没有任何一次退货事件，没有任何一次回收或不良事件报告。 上海贝西生物科技有限公司是其中国区总代理，上海高新技术企业，公司具有专业且庞大技术团队，负责相关产品在中国的销售以及技术支持等工作。目前已开发医院客户超过80家，是国内最早做呼吸道病毒抗原检测产品的公司，与睿信产品生产企业美国DH公司保持长期有效合作。上海贝西生物科技有限公司对客户承诺承诺1小时之内情况响应，24小时赶到现场。 贝西生物与美国Quidel公司达成协议，任何未经过其中国子公司Quidel China Ltd公司授权的公司以及医院均无权销售以及使用睿信系列产品。任何未
上海复星医学科技发展有限公司 呼吸道病毒 7 项检测 试剂 2011-1-10
呼吸道病毒 7 项检测试剂 目录 1．概述 (1) 2．D3 Ultra DFA试剂 (2) 2.1D 3 Ultra DFA试剂规格 (2) 2.2 3 Ultra DFA试剂用途 (2) D 2.3D 3 Ultra DFA试剂特点和优势 (2) 2.4D 3 Ultra DFA试剂实验操作步骤 (3) 2.5 3 Ultra DFA试剂实验结果判读 (4) D 3．D3 Ultra DFA试剂竞争优 势 (5) 3.1检验的特异性和灵敏度 (5) 3.2市场竞争 (5) 附录 1七种病毒检测的临床意义 (7) 附录 2实验室所需设备清单（试剂盒中不含） (8) 附录 3进口荧光显微镜参数 (9)
1．概述 日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不 便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。 在医院和急诊室中， 这些呼吸道病毒也 常常是诊断和治疗的难题。 常见的呼吸道病毒包括： A 型（甲型）流感病毒， B 型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（ RSV ），腺病毒，副流感病毒 1 型，副流感病毒 2 型和副流感病毒 3 型。在病毒检测方法中， 抗原检测 有其无法比拟的优势： 1. 可以用于病 毒的早期诊断，这对治疗非常重要； 2. 快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。 DHI 公司的 D 3 Ultra DFA 试剂属于抗原检测 中的直接免疫荧光法 。该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的 7 种呼吸道病毒。 D 3 Ultra DFA 试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为： 儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。
某复星医学科技发展某 呼吸道病毒7项检测试 剂 2011-1-10 呼吸道病毒7项检测试剂 目录 1．概述1 2．D3Ultra DFA试剂1 2.1 D3Ultra DFA试剂规格1 2.2 D3Ultra DFA试剂用途2 2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势2 2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤3 2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读4 3．D3Ultra DFA试剂竞争优势5
3.1 检验的特异性和灵敏度5 3.2 市场竞争5 附录1 七种病毒检测的临床意义6 附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含）7 附录3 进口荧光显微镜参数8 1．概述 日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。 常见的呼吸道病毒包括：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型。在病毒检测方法中，抗原检测有其无法比拟的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要；2. 快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7种呼吸道病毒。 D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。 2．D3Ultra DFA试剂 2.1 D3Ultra DFA试剂规格 D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒鉴定试剂。检测病毒种类：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，1、2、3型副流感病毒。具体规格如下：
“呼吸道病原体抗原七项”检测的临床意义 一、呼吸道病毒简介 呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为侵入门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。据统计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起。常见的呼吸道病毒包括：A型流感病毒（甲型流感病毒）、B型流感病毒（乙型流感病毒）、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型,各种病毒在电镜下的形态见图1。 流感病毒呼吸道合胞病毒腺病毒副流感病毒 图1 各种病毒在电子显微镜下的形态 二、呼吸道病毒临床诊断 现有的主要方法：1、抗原检测；2、抗体检测；3、病毒分离培养；4、分子生物学方法等。现将上述检测方法的优劣小结于表1。目前临床上使用较多的是抗原检测和抗体检测。 表1 四种呼吸道病毒检测方法的比较 检测方法优点缺点 病毒分离培养特异性高，金标准培养条件要求高、灵敏度低，标本中病原体量少时，易致假阴性。 抗原检测 酶联免疫吸附法较快速有非特异性反应 间接免疫荧光法简便、快速 有非特异性反应需要使用荧光显微镜 直接免疫荧光法简便、快速、灵敏度和特异性均较高 且可用于疾病的早期诊断 需要使用荧光显微镜 抗体检测灵敏度、特异性较高对疾病早期诊断没有太大帮助 分子生物学方法灵敏度和特异性均很高操作繁琐，价格昂贵 三、呼吸道病原体抗原的优越性 1、从理论上讲，只要有病毒感染，通过抗原检测都能鉴定出，而抗体检测却要在人体产
生免疫应答以后才能进行鉴定。 2、机体产生IgM一般需要一周左右的时间，而有免疫缺陷或免疫系统不健全的个体如儿童，特别是3岁以下的小孩，其产生抗体往往需要更久，且抗体产生的水平也较低。若检测的是IgG，则不能很好地区分既往感染和急性感染。 因此，抗原检测的方法对婴幼儿和儿童的呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药指导比抗体法更有优势（详见表2）。 表2 呼吸道病毒抗体检测和抗原检测的比较 病原体抗体IgM检测病原体抗原检测 检测最佳时间一般在感染一周左右病毒感染出现症状后即可检测出 临床意义 回顾性诊断，适用于疾病后期的诊断， 多用于循证医学可用于疾病早期诊断 对患者的治疗有重要指导意义 检测灵敏度不能很好地检测变异的病毒 将多种抗体进行组合，能更好地应对变异 的病毒 检测方法 一般使用酶联免疫（ELISA）或者间接免疫 荧光法，有非特异性荧光一般使用直接免疫荧光法，几乎没有非特异性反应 四、为什么要早期全面检测？ 1、病毒治疗针对性强 2、病毒治疗有时效性 3、避免抗生素的滥用 五、项目开展的价值和社会效益分析 本项目可用于呼吸道病原学的研究；提高医院对呼吸道病毒的诊疗水平；还可用于呼吸道传染病流行的监控等。 六、呼吸道病原体检测 我们检验中心/遗传所于3月20日正式开展了“呼吸道病原体抗原7项”。该检验组合包含了甲型流感、乙型流感、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型7种抗原的检测。收费标准：326.0元/次，不接受单项申请。 临床意义：主要用于呼吸道感染病原体的早期诊断和鉴定诊断。 标本采集和报告时间：鼻咽拭子或下呼吸道分泌物。暂定于每周五4:30pm发出检验报告。 欢迎各临床保健科室踊跃开单，我们将竭诚地为临床服务。咨询电话：临床免疫学检验室，2313065（外线）；3065（内线）。 撰稿：罗桂香，编辑：周玉球
七项呼吸道病毒检测试剂盒（鉴定）使用说明书 【产品名称】 通用名称：七项呼吸道病毒检测试剂盒 英文名称：D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screen & ID Kit 【包装规格】 鉴定试剂：80人份/盒 【预期用途】 用于临床定性检测7种呼吸道病毒：甲型（A型）流感病毒，乙型（B型）流感病毒，呼吸道合胞病毒，腺病毒，副流感病毒1、2和3型。 【检验原理】 荧光素（FITC）标记的单克隆抗体与病毒抗原结合，形成稳定的抗原-抗体复合物，在荧光显微镜下观察，呈现特异性绿色荧光。 【主要组成成份】 组份名称规格主要成分 1 DFA染色试剂鉴定试剂流感A试剂： 2 mL 每试剂瓶为一项与病毒 抗原相对应的荧光单克 隆抗体 流感B试剂：2 mL 腺病毒试剂：2 mL 呼吸道合胞病毒试剂：2 mL 副流感1试剂：2 mL 副流感2试剂：2 mL 副流感3试剂：2 mL 2 40X浓缩洗液25 mL PBS 3 固定液15 mL 甘油 4 阳性质控板5块包被病毒抗原 【储存条件及有效期】 2oC-8oC避光保存18个月。 【适用仪器】 荧光显微镜，激发波长490 nm，发射波长520 nm。 【样本要求】 鼻咽部取样后保存于生理盐水中，应在24小时内送检。 【检验方法】 1、取样：用鼻咽拭子从病人的鼻咽部取样或者使用鼻腔灌洗液，将鼻咽拭子放入储存管中（含有生理盐水）。 2、样本准备步骤： ①将样本充分震荡混匀约10-15秒。 ②在400-600xg转速下离心5-10分钟。 ③弃上清。 ④在沉淀中加2-3 mL PBS缓冲液（不能使用试剂盒中的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。 ⑤在400-600xg转速下离心5-10分钟。 ⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。 ⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。 ⑧在沉淀中加0.5-1 mL的PBS缓冲液。 ⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。 3、直接样本测试步骤： ①在8孔板上的孔内滴加25 μL的细胞悬浊液，每样本需滴加七孔。 ②样本完全风干。
常见呼吸道病毒高灵敏度快速检测方法的研究 发表时间：2015-12-04T16:27:26.723Z 来源：《航空军医》2015年14期作者：彭丹霞1 张星星2（通讯作者） [导读] 1.湖南省人民医院 2.中南大学湘雅附二医院儿科医学中心常见的呼吸道病毒有人类偏肺病毒、流感病毒、腺病毒等，这些病毒具有传播速度快、发病急等特性。 1.湖南省人民医院湖南长沙 410005； 2.中南大学湘雅附二医院儿科医学中心 【摘要】经临床证实，当前有90%以上的呼吸道疾病是由细菌以外的病原体引起的，以呼吸道疾病最为常见。常见的呼吸道病毒有人类偏肺病毒、流感病毒、腺病毒、副流感病毒、呼吸道合胞体病毒等。呼吸道疾病是临床中最为常见的疾病，通常具有传播速度快、发病急、潜伏期短的特性，并且当前出现了越来越多的致命性呼吸道病毒，如非典型性肺炎、禽流感等。一旦发生这类病毒，通常会引起大范围的危害，对于呼吸道病毒的检测成为医院工作中的重要事项。由于呼吸道病毒引起的临床感染症状具有相似性，所以仅靠常规检测方法很难快速的确定病原，需要一种高度灵敏的快速检测方法。本文针对于此，研究常见呼吸道病毒的高度灵敏快速检验的方法，探究快速确定病原的途径。全文介绍了常见呼吸道病毒、以及检验病毒的方法。 【关键词】常见呼吸道病毒；高度灵敏快速检验方法；临场研究 常见的呼吸道病毒有人类偏肺病毒、流感病毒、腺病毒等，这些病毒具有传播速度快、发病急等特性。这些病毒可以通过呼吸道引发感染，爆发疫情。高度灵敏的快速检验方法可以有效的为患者提供诊断依据，使医师可以及时的对症下药，并且对卫生监督和疫情的防控具有重要的意义。通常呼吸道疾病通过空气传播，很难有效的预防，单体就能辐射很大的区域。所以研究出有效的检验方法至关重要。 1 常见呼吸道病毒 呼吸道病毒专指以呼吸道为入侵门户，在呼吸道粘膜上皮细胞组织增生，引起呼吸道局部感染病变或呼吸道以外组织气管病变的病毒。主要通过呼吸道传播，能反复感染，可在人群中暴发流行。当前主要的呼吸道病毒有流感病毒、副流感病毒、呼吸道合并胞体病毒、腺病毒四种。 流感病毒就是流行性感冒病毒，属于正粘病毒科，造成人体的上下呼吸道感染。通过空气传播，能引起大范围的疫情。具有鼻塞、流涕、咽痛等临床症状，并造成肺炎、支气管炎等下呼吸道疾病。根据抗原性，流感病毒分为甲型、乙型和丙型三种。甲型病毒易发生异变，造成大规模的流行，异型会引起肌炎和胃肠反应，较小规模，致死率较低，丙型会造成人类的轻微上呼吸道感染，很少造成流行。流感病毒的发病率较高，但致死率很低，但容易造成疫情的流行；副流感病毒属于副黏病毒科，能够引起下呼吸道感染，在儿童中较为常见，病死率略高。可以形成反复感染的肺炎、支气管炎、下呼吸道疾病等。副流感病毒主要分为四种类型，为Ⅰ型到Ⅳ型病毒。前两种主要会引起哮喘、喉炎、气管严和支气管炎。Ⅲ型的流感病毒会造成肺炎和细支气管感染，也能引起哮喘。Ⅳ型病毒会造成上呼吸道感染，检测率很低，一般会引起上呼吸道感染，不会引起肺炎。副流感病毒任何季节都可暴发流行，但以局部区域性为主，在儿科病房、小学、幼儿园等场所多见，爆发通常以Ⅲ型为主；呼吸道合胞体病毒属于副黏病毒科，也是常见的病原体，可通亲密接触、空气飞沫传播。这一病毒可造成任年龄段的人群感染，引起发热、咽炎、支气管炎、中耳炎等呼吸道病症。引起的流行性喘憋性肺炎是造成婴儿死亡的主要疾病之一。根据抗原性，可分为A、B两种类型；腺病毒属于腺病毒科，会造成呼吸道、肠粘膜上皮细胞的溶解性感染，淋巴样和腺样细胞的潜伏感染和啮齿动物细胞的转化感染。能够引起3岁以下儿童的急性咽炎热和较大儿童的咽结膜炎热、病毒性肺炎、急性呼吸道感染等疾病。还会造成非呼吸道组织的病变，如阑尾炎、急性胃肠炎等。当前检测到的腺病毒有52种，分A、B、C、D、E、F六个亚群。 除以上几种病毒外，还有偏肺病毒、人冠状病毒、风疹病毒、麻疹病毒、流行腮腺炎病毒等。呼吸道病毒虽然种类繁多，但引起的症状大同小异，引发的社会危害也不一样。所以，对于呼吸道病毒有效的甄别能够帮助我们有效的对疫情进行防治。 2 常见呼吸道病毒的高灵敏快速检测方法 当前，具有多种的呼吸道病毒检验技术，如聚合酶链反应技术、DNA探针技术、基因芯片技术以及其他分子生物学检验技术，但是均不能满足目前的需求，所以需要我们探索新型的常见呼吸道病毒检验技术。 2.1试验材料 准备的试验材料有病毒毒株，包括阳性毒株和阴性毒株；细胞培养液；主要的仪器有生物芯片便携式可视化扫描仪、超纯水仪、数显电热水浴箱、琼脂糖电泳仪、芯片杂交盒、精密微量移液器、自动化核酸提取系统等；试剂方面，有病毒基因组提取试剂盒、扩增试剂盒等，化学试剂包括氯化钠、磷酸氢化钠、甲酰胺等。针对常见病毒，提取六种特异性基因作为检测标靶。利用信息技术将Gene Bank数据库获取的呼吸道病毒毒株的核苷酸序列进行同源性分析，得到碱基对齐图和聚类分析结果。使用Primer5.0软件结合碱基对齐图查找相关特异性引物。根据引物设计原则、PCR扩增物片段对杂交动力学造成的影响，确定扩增物的长度在100~500bp之间。根据八种呼吸道病毒靶基因对比的结果，呼吸道合胞病毒、腺病毒、偏肺病毒在不同书的病毒之间具有较高的特异性，同属病毒之间的核酸序列进化相似。所以，探针的设计应可将待测毒株和其它近原属分开，探针的序列能代表本属内不同的毒株。探针的特性是帮助基因芯片确定假阳性和假阴性的关键，在设计好探针后利用在线Blast对探针进行特异性分析，确定探针和其它病毒和细菌无相似性后，截取最优长度作为备选探针。 然后合成引物和探针，运用标准亚林酰胺化学方法在自动合成仪上进行氨解、过滤、干燥等程序。可用可视化显色所用的下游引物5’端进行生物素标记。探针与氨基基团之间可用聚乙二醇磷酰化试连接。最后进行引物的纯化。用200μl纯水，溶解粗样，加入200mg的尿素，待充分溶解后，放入16%的聚丙烯酰胺变性凝胶中，用600V的电压电泳2h。然后将凝胶取出，放在有荧光背景下的硅胶板上，在紫外灯下取出有紫外吸收的条带。放到试管中捣碎，并用1M的NaCL溶液，用50°C的纯水水浴3h。水浴后用22ml纯水、1.5ml的20%乙腈溶液过滤，用1.5ml的离心管收集，并用冷冻干燥机抽干。将制造的引物用毛细管电泳检测，以紫外定量，冷冻保存。引物制做好后，制造基因芯片，用寡核苷酸探针以去离子水溶液稀释至100μM。取点样液和制好的寡核苷酸探针各10μL，混合，待用。进行病毒核酸的提取，以痰液标本13000rpm离心10min，灭菌处理。用4%的NaOH液化30min，漩涡震荡10min，4°C液化，再行13000rpm离心10min，弃上清，放至200μl的生理盐水保存。为了提高病毒核酸的提取质量，可用离心柱提取法、磁珠提取法、自动化提取法对比提取。为了保证试验的质量，可设人核糖核酸酶P基因编码中的Rnase gene作为靶基因，用4条引物和2条内标做对照探针。为了建立高灵敏度的快速检验方法，可以建立多重的RT-PCR扩增，将八种常见的呼吸道病毒中的6对特异性引物和2对内标引物分至2管，形成多重RT-PCR的组合。然后行芯片
医学微生物习题 第26章呼吸道病毒测试题 一. 名词解释 1.抗原漂移 2.抗原转变; 3. 神经氨酸酶 (neuraminidase,NA) 4. 血凝素 (hemagglutinin, HA) 二. 填空 1.呼吸道病毒包括、、、、、 、等。 2.流感病毒根据抗原的不同,可分为、、三型。 3.决定流感病毒亚型的特异性抗原是和 . 4.流感病毒的核酸类型是 , 其显著特点是 . 5.流感病毒的核心由 , 和组成. 6.流感病毒的结构由 , 和组成. 其吸附细胞的结构是 , 成熟病毒自细胞膜上的释放依赖的水解作用. 7.流感病毒的包膜镶嵌着2种糖蛋白刺突,即呈柱状的和呈蘑菇状的 . 8.麻疹病毒感染除引起麻疹外,少数患者尚可并发严重中枢神经系统疾病,即和 . 9.腮腺炎病毒除引起患者双侧或单侧腮腺肿大炎症外,20%男性患者并发,5%女性患者并发 . 10.孕妇在妊娠5个月内感染风疹病毒后临床表现多为 ,而其胎儿或新生儿易患综合征. 11.腺病毒为双链线状DNA,无包膜病毒,其蛋白衣壳由240个壳粒和12个 壳粒共同构成20面立体对称球状体,并在20面体每一顶角壳粒各伸出一纤维隆起. 12.少年儿童和成人普通感冒及上呼吸道感染大多由或感染引起. 三. 单选题 1.流行性感冒的病原体是 A.流行性感冒杆菌 B.流感病毒 C.副流感病毒 D.呼吸道合胞病毒 E.鼻病毒 2.普通感冒的最常见病原是 A.流感病毒 B.副流感病毒 C.腺病毒 D.风疹病毒 E.鼻病毒和冠状病毒 3.可引起全身感染的呼吸道病毒是
A.流感病毒 B.麻疹病毒 C.鼻病毒 D.冠状病毒 E.腮腺炎病毒 4.麻疹疫苗的接种对象为 A.新生儿 B.二月龄婴儿 C.四月龄婴儿 D.六月龄婴儿 E.八月龄婴儿 5.亚急性硬化性全脑炎(SSPE)是一种由 A.脊髓灰质炎病毒引起的亚急性感染 B.麻疹病毒引起的持续感染 C.疱疹病毒引起的隐伏感染 D.流行性乙型脑炎病毒引起的急性感染 E.狂犬病毒引起的慢性感染 6. 流感病毒的分型根据是 A.所致疾病的临床特征 B.RNA多聚酶抗原 C.核蛋白和内膜蛋白抗原 D.血凝素(HA) E.神经氨酸酶(NA) 7. 抗流感病毒感染的主要免疫因素是 A.干扰素 B.细胞免疫 C.粘膜局部神经氨酸酶抗体 D.粘膜局部血凝素抗体` E.血清中血凝素抗体 8. 流感病毒最易变异的结构是 A.甲型流感病毒的HA B.乙型流感病毒的HA C.核蛋白 D.M蛋白 E.RNA多聚酶 9. 造成流感世界性大流行的原因是 A.流感病毒型别多,毒力强 B.流感病毒抗原性弱,免疫力不强 C.HA和NA之间易发生基因重组 D.甲型流感病毒易形成新的亚型 E.HA和NA易发生点突变 10. 甲型流感病毒分型的依据是 A.核蛋白 B.血凝素 C.神经氨酸酶 D.血凝素和神经氨酸酶 E.多聚RNA 酶 11.流行性腮腺炎的常见并发症是 A.脑膜炎 B.肺炎 C.肝炎 D.肾炎 E.睾丸炎或卵巢炎 12.核酸类型为DNA的病毒是 A.流感病毒 B.副流感病毒 C.呼吸道合胞病毒 D.腺病毒 E.麻疹病毒 13.抗原型别最多的呼吸道病毒是 A.腺病毒 B.流感病毒 C.副流感病毒 D.麻疹病毒 E.鼻病毒 14.抗原只有一个型别的病毒是 A.流感病毒 B.副流感病毒 C.腺病毒 D.腮腺炎病毒 E.鼻病毒 15.可使感染细胞发生融合的病毒是
附件1 呼吸道病毒多重核酸检测试剂 技术审查指导原则 （征求意见稿） 本指导原则旨在指导注册申请人对呼吸道病毒多重核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对呼吸道病毒核酸测定试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。如申请人认为有必要增加本指导原则未包含的研究内容，可自行补充。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、范围 呼吸道感染（Respiratory tract infection，RTI）是人类最常见的一类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发生，是
全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。 本指导原则适用于呼吸道病毒多重核酸检测试剂，适用样本类型应为鼻咽拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物样本等。检测对象应可引发相似的临床表现，可包括但不限于： 甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、人偏肺病毒、腺病毒、呼吸道感染肠道病毒（肠道病毒/鼻病毒）、冠状病毒、博卡病毒。 本指导原则适用于利用荧光探针聚合酶链式反应（Real-time PCR）或其他分子生物学方法，以特定的呼吸道病毒基因序列为检测目标，对来源于人体样本中的呼吸道病毒核酸进行体外定性检测，临床用于辅助诊断呼吸道病毒感染相关性疾病。涉及其他临床用途的呼吸道病原体核酸检测试剂可参考本指导原则。 二、基本要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、有关产品主要研究结果的总结和评价以及其他内容，其中其他包括同类产品在国内外批准上市的情况。与预期用途相关的临床适应症应重点描述呼吸道病毒型别与临床适应症的相关性及相关病毒在我国的流行特征；产品
成人呼吸道感染病毒病原学检测 摘要: 目的了解哈尔滨医科大学附属第二医院成人呼吸道病毒感染的流行特征。方法采用直接免疫荧光法（DIF），对2007年4月-2008年6月住院的399名16-87岁呼吸道疾病患者痰标本进行七种病毒检测。结果399例患者中病毒检测阳性者54例，病毒总体阳性率13.53％。首位病毒为呼吸道合胞病毒29例（7.27％）和流感病毒A型27例（6.77％），其次为副流感病毒3型17例（4.26％）、副流感病毒1型13例（3.26％）、腺病毒5例（1.25％）、流感病毒B型2例（0.50％）和副流感病毒2型2例（0.50％），混合感染22例（5.51％）。64-87岁年龄组病毒检出率最高（18.12％），32-47岁年龄组病毒检出率最低（6.94％）。肺炎、支气管炎、支气管扩张、哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）均有病毒检出，其中以COPD检出率最高（16.67％），其次是哮喘（15.38％）。结论病毒在成人呼吸道感染中占有重要的地位，感染主要集中在48-87岁年龄阶段（15.38％），COPD 和哮喘病毒感染率最高，以呼吸道合胞病毒和流感病毒A型最为常见。 关键词呼吸道病毒感染；成人 Abstract: Objective To understand the epidemiologic feature of respiratory tract viral infection in the adults of Harbin Medical University The Second Affiliated Hospital.Methods From April 2007 to June 2008, a total of 399 hospitalized adults were studied.Sputum were screened for virus by direct immunofluorescent (DIF) assay.Results Virus was identified in 54 patients ( 13.53%) .The most prevalent was respiratory syncytial viruses (RSV) (29, 7.27%) , followed by influenza A (27, 6.77%) , parainfluenza 3(17,4.26%) , parainfluenza 1(13,3.26%) , adenovirus (5, 1.25 %) ，influenza B (2, 0.50 %) , parainfluenza 2 (2, 0.50%) , and mixed viral infection(22, 5.51%).The highest virus detection rate (18.12%) occur in adults between 64 and 87 years, virus detection rate of the lowest (6.94%) exist in 37-47-year-old.Pneumonia, bronchitis, bronchiectasis, asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD) have detected the virus, with the highest detection rate of COPD (16.67%), followed by asthma (15.38%).Conclusions Viruses still play an important role in respiratory tract infections in adults and was concentrated in the 48-87 age group(15.38%), the infection rate of COPD and asthma was the highest. Respiratory syncytial virus and influenza A virus was the most common types. Key words Respiratory tract viral infection;Adults 材料和方法 1.研究对象2007年4月-2008年6月随机选择哈尔滨医科大学附属二院呼吸 科住院病人399例。其中年龄16岁-87岁，男性214例，女性185例。 2.设备及试剂荧光显微镜（TS100），离心机（TGL20LM），漩涡混合器（XH-B）， 37℃培养箱（SKP-02.500），直接免疫荧光试剂盒（3137，chemicon）。 3.病毒抗原检测 标本收集和处理由专职护士将塑料导管经鼻腔插入7-8cm达到咽部以下诱导吸取1-2ml分泌物于10ml无菌离心管中[1]，-40℃冻存。实验时取出标本，向离心管中加入4-8ml冷PBS,4℃放置3-4个小时，用漩涡混合器震荡3-5分钟后，标本液转移入1.5mlEP管中，1000-6000r/min离心5-10分钟，弃去上清液，如果有粘液也一并弃去。沉淀物再加入1ml冷PBS震荡3-5分钟，1000-6000r/min
“呼吸道病毒抗原”检测的临床意义 一、呼吸道病毒简介 呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为侵入门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。据统计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起。常见的呼吸道病毒包括：A型流感病毒（甲型流感病毒）、B型流感病毒（乙型流感病毒）、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型。 二、呼吸道病毒临床诊断 现有的主要方法：1、抗原检测；2、抗体检测；3、病毒分离培养；4、分子生物学方法等。目前临床上使用较多的是抗原检测和抗体检测。 三、呼吸道病毒抗原检测的优越性 1、从理论上讲，只要有病毒感染，通过抗原检测都能鉴定出，而抗体检测却要在人体产生免疫应答以后才能进行鉴定。 2、机体产生IgM一般需要一周左右的时间，而有免疫缺陷或免疫系统不健全的个体如儿童，特别是3岁以下的小孩，其产生抗体往往需要更久，且抗体产生的水平也较低。若检测的是IgG，则不能很好地区分既往感染和急性感染。 因此，抗原检测的方法对呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药指导比抗体法更有优势。 四、为什么要早期全面检测？ 1、抗病毒治疗针对性强。
2、抗病毒治疗有时效性。 3、避免抗生素的滥用。 五、项目开展的价值和社会效益分析 本项目可用于呼吸道病原学的研究；提高医院对呼吸道病毒的诊疗水平；还可用于呼吸道传染病流行的监控等。 六、呼吸道病原体检测 检验科正式开展了“呼吸道病毒抗原7项”检测。该检验组合包含了甲型流感、乙型流感、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型7种抗原的检测。 临床意义：主要用于呼吸道感染病原体的早期诊断和鉴定诊断。 标本采集和报告时间：鼻咽拭子或下呼吸道分泌物。欢迎各临床科室踊跃开单，我们将竭诚地为临床服务。咨询电话：临床微生物室，6825621。
检验医学资讯(201403) “呼吸道病原体抗原七项”检测的临床意义 一、呼吸道病毒简介 呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为侵入门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。据统计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起。常见的呼吸道病毒包括：A型流感病毒（甲型流感病毒）、B型流感病毒（乙型流感病毒）、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型,各种病毒在电镜下的形态见图1。 流感病毒呼吸道合胞病毒腺病毒副流感病毒 图1 各种病毒在电子显微镜下的形态 二、呼吸道病毒临床诊断 现有的主要方法：1、抗原检测；2、抗体检测；3、病毒分离培养；4、分子生物学方法等。现将上述检测方法的优劣小结于表1。目前临床上使用较多的是抗原检测和抗体检测。 表1 四种呼吸道病毒检测方法的比较 检测方法优点缺点 病毒分离培养特异性高，金标准培养条件要求高、灵敏度低，标本中病原体量少时，易致假阴性。 抗原检测 酶联免疫吸附法较快速有非特异性反应 间接免疫荧光法简便、快速 有非特异性反应需要使用荧光显微镜 直接免疫荧光法简便、快速、灵敏度和特异性均较高 且可用于疾病的早期诊断 需要使用荧光显微镜 抗体检测灵敏度、特异性较高对疾病早期诊断没有太大帮助分子生物学方法灵敏度和特异性均很高操作繁琐，价格昂贵三、呼吸道病原体抗原的优越性
1、从理论上讲，只要有病毒感染，通过抗原检测都能鉴定出，而抗体检测却要在人体产生免疫应答以后才能进行鉴定。 2、机体产生IgM一般需要一周左右的时间，而有免疫缺陷或免疫系统不健全的个体如儿童，特别是3岁以下的小孩，其产生抗体往往需要更久，且抗体产生的水平也较低。若检测的是IgG，则不能很好地区分既往感染和急性感染。 因此，抗原检测的方法对婴幼儿和儿童的呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药指导比抗体法更有优势（详见表2）。 表2 呼吸道病毒抗体检测和抗原检测的比较 病原体抗体IgM检测病原体抗原检测 检测最佳时间一般在感染一周左右病毒感染出现症状后即可检测出 临床意义 回顾性诊断，适用于疾病后期的诊断， 多用于循证医学可用于疾病早期诊断 对患者的治疗有重要指导意义 检测灵敏度不能很好地检测变异的病毒 将多种抗体进行组合，能更好地应对变异 的病毒 检测方法 一般使用酶联免疫（ELISA）或者间接免疫 荧光法，有非特异性荧光一般使用直接免疫荧光法，几乎没有非特异性反应 四、为什么要早期全面检测？ 1、病毒治疗针对性强 2、病毒治疗有时效性 3、避免抗生素的滥用 五、项目开展的价值和社会效益分析 本项目可用于呼吸道病原学的研究；提高医院对呼吸道病毒的诊疗水平；还可用于呼吸道传染病流行的监控等。 六、呼吸道病原体检测 我们检验中心/遗传所于3月20日正式开展了“呼吸道病原体抗原7项”。该检验组合包含了甲型流感、乙型流感、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型7种抗原的检测。收费标准：326.0元/次，不接受单项申请。 临床意义：主要用于呼吸道感染病原体的早期诊断和鉴定诊断。 标本采集和报告时间：鼻咽拭子或下呼吸道分泌物。暂定于每周五4:30pm发出检验报告。 欢迎各临床保健科室踊跃开单，我们将竭诚地为临床服务。咨询电话：临床免疫学检验室，2313065（外线）；3065（内线）。
7项呼吸道病毒试剂盒操作流程 1、取样：（此步骤大多由临床医生完成。） 用特制的鼻咽拭子从病人的鼻咽部取样或者使用鼻腔灌洗液，将鼻咽拭子放入储存管中（含有缓冲液）。使用鼻咽拭子取样时，拭子进入鼻部后，应水平向鼻腔 伸入。伸入的深度约为耳垂到鼻尖的二分之一处，取样前可事先大致测量一下。 二岁一下的儿童，伸入深度约为拭子绒毛长度的二倍。拭子伸入至指定深度后， 缓缓贴壁旋转2-3周，约停留10秒钟，取出拭子。取样后一小时内向取样管中 加入生理盐水，样本最好在24小时内进行操作。 2、样本准备步骤：（此步骤除离心以外，建议都在二级生物安全柜内操作） ①将样本充分震荡混匀约10-15秒。 ②在3000rpm转速下离心10分钟。 ③弃上清。 ④在沉淀中加 5 mL PBS缓冲液（请使用普通PBS，不要使用试剂盒内配套的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。 ⑤在3000rpm转速下离心10分钟。 ⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。 ⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。 注意：一定要将黏液去除干净，否则会造成非特异荧光从而影响实验结果。以看不见粘液为准。一般重复两到三次即可，若肉眼不可粘液，洗一次即可。 ⑧在沉淀中加0.5到1 mL的PBS缓冲液。视沉淀的量而定，若无可见沉淀则加入 0.2mL. ⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。这个悬浊液可用 于直接样本测试。 3、直接样本测试步骤： 在操作前请将试剂盒内40×的高浓缩洗液稀释40倍后使用。 ①在8孔板上的每孔内滴加25 μL的细胞悬浊液。（若在之前步骤清洗沉淀中可明显见大块沉淀，则滴加15μL细胞悬浊液即可。
怀化医专《微生物学检验》教案编号：
第三十五章呼吸道病毒及检验 呼吸道病毒：是指主要以呼吸道为侵入门户，引起呼吸道以及全身感染。 临床上的急性呼吸感染中有90～95%是由这群毒引起的。 主要种类： 正粘病毒科：流感病毒 副粘病毒科：副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒； 其他病毒如：风疹病毒、冠状病毒、腺病毒、鼻病毒、呼肠孤病毒等。粘病毒（Orthomyxovirus）：是指对人或某些动物红细胞表面的粘蛋白有亲和性 的病毒。 正、副粘病毒的分别以其核酸是否分节段为标准，分节段者为正粘病毒，不分节段者为副粘病毒。 第一节流行性感冒病毒 流行性感冒病毒简称流感病毒，是引起流感的病原体，流感是一种上呼吸道急性传染病，它传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高，对人类的生命健康危害极大。 分为：甲、乙、丙三型。以甲型为例进行介绍。 一、生物学性状 （一）形态与结构 具有多形态，有的呈丝状、有的呈杆状，但一般为球形，病毒的直径为80～120nm，丝状体长短不一，长度有时可达4000nm，直径与球形病毒相同。 结构：由内向外分三个部分：核心 基质蛋白（M蛋白） 包膜 1、核心： 含：7-8段卷曲的单负股RNA（每段编码一种病毒蛋白）及包绕其周围的核蛋白（NP）、RNA多聚酶。 甲、乙型流感病毒为8个节段，丙型为7个节段，其基因组分节段的特点使本病毒在复制中易发生基因重组，导致基因编码的蛋白抗原发生变异而出现新亚型。 2、基质蛋白（M蛋白） 位于核心与包膜之间，具保护核心及维持病毒外形的作用，其抗原性稳定，
具有型特异性。 3、包膜 为脂质双层，来源于宿主细胞膜。其上嵌有两种刺突（糖蛋白）： （1）血凝素(Hemagglutinin HA) ： 有如病毒的钥匙，用来打开及入侵人类或动物的细胞。 是第4段RNA编码的糖蛋白，HA能与多种动物（如鸡、豚鼠）和人的红细胞表面的糖蛋白受体相结合，引起红细胞凝集。该凝集可被相应抗体抑制（血凝抑制试验）。 其抗原性最易发生变异。它是流感病毒亚型划分的另一依据。 （2）神经氨酸酶（Neuraminidase NA）： 是第6段RNA编码的糖蛋白，具有酶活性，可水解宿主细胞表面糖蛋白末端的N-乙酰神经氨酸，有利于成熟病毒的释放。 神经氨酸酶的抗原结构较易发生变异，它是流感病毒亚型的划分依据之一。目前已发现HA有15种（H1-H15），NA有9种（N1-N9），所有亚型均可从禽类中分离到，但带有病毒的禽鸟未必会发病。 至今人类流行的亚型主要是由H1、H2、H3和N1、N2几种抗原构成。 （二）分型与变异 1、分型： 根据核蛋白抗原、M蛋白抗原的不同，将流感病毒分为甲（A）、乙（B）和丙（C）三型；甲型流感病毒又根据其表面血凝素及神经氨酸酶抗原性的不同再分为若干亚型。 2、变异： 乙型和丙型流感病毒抗原性比较稳定；甲型的表面抗原HA、NA最易变异，二者可同时变异，也可分别发生。 自1934年分离出甲型流感病毒以来，已发生多次世界性的大流行，以及大流行期间的小流行。 其变异的幅度小，属于量变，可引起中小规模流感的流行，称抗原漂移（Antigen drift），（这种变易是核酸序列的点突变，致使HA或HA抗原决定簇发生某些改变，并在免疫人群中被选择出来）。 若变异幅度大，（即新毒株的HA和/或NA完全与前次流行株失去联系），形成新的亚型，系质变，可以引起大规模甚至世界性的流感流行，称抗原转变(Antigenic shift)。是由核酸序列不断的突变积累或外来基因片断重组所致。