参黄口服液中人参皂苷Rg1的含量测定
【摘要】目的用高效液相色谱（HPLC）法测定参黄口服液中人参皂苷Rg1的含量。方法色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶,流动相为乙腈0.05%磷酸。结果人参皂苷Rg1在0.251～ 2.15 μg之间呈良好的线性关系；制剂中人参皂苷Rg1的平均回收率为98.73 % (RSD=2.7 % ) 。结论该方法简便、准确、分离效果好 ,无干扰 ,可用于参黄口服液的质量评价。
【关键词】参黄口服液; 人参皂苷Rg1；高效液相色谱
Abstract：ObjectiveTo establish the quantitative method of ginsenoside Rg1 in Shenhuang Oral Liquid by HPLC. Methods
The column was packed with 5 μm Diamonsil C18 stationary phase. The mobile phase consisted of acetonitrile-water.ResultsThe linear range was 0.251～ 2.15 μg.The average recovery was 98.73%(RSD was 2.7%).ConclusionThe method was convenient and accurate. It can te used as a method of quality evaluation for Shenhuang Oral Liquid.
Key words：Shenhuang Oral; Ginsenoside Rg1； HPLC
参黄口服液是以人参、黄芪、柴胡等8味药材制成的中药复方制剂，系中药6类新药，具有健脾益气、解郁提神的功效。方中人参为主药，本实验以高效液相色谱法对参黄口服液中人参皂苷Rg1进行含量测定研究。
1 仪器与试剂
仪器：高效液相色谱仪：日本岛津公司（LC-2010A）,乙腈为色谱纯，Dikma 公司。对照品人参皂苷Rg1（批号0703－200118），为中国药品生物制品检定所提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；Dikma（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相为乙腈0.05%磷酸（20∶80）；检测波长203 nm。
2.2 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg1 0.2 mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液制备精密量取本品10 ml，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，10 ml/次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，10 ml/次，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，10 ml/次，取正丁醇液蒸干，残渣加1%氢氧化钠溶液2 ml使溶解，置已处理好的D101大孔吸附树脂柱（直径1 cm，长10 cm）上，用1%氢氧化钠溶液50 ml洗脱，再用水50 ml洗脱，继用40%甲醇50 ml洗脱，最后用80%甲醇80 ml洗脱，收集80%甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，得到参黄口服液的色谱分离图。见图1。
2.4 精密度实验取人参皂苷Rg1对照品溶液，按样品测定法测定，共进样5次，结果RSD＝0.7%。结果表明，本法的精密度良好。
2.5 线性关系考察精密称取人参皂苷Rg1对照品10.75 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，再精密吸取对照品溶液1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 ml分别置于10 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，分别精密量取上述对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y=2E+06x+3 724,r=1。
结果表明，人参皂苷Rg1在0.251～ 2.15 μg范围内呈良好的线性关系。
a对照品 b参黄口服液样品
图1 参黄口服液HPLC图（略）
2.6 稳定性实验取样品供试溶液，每隔1 h测定1次，共测定6 h，结果6次测定的含量均值为0.428 ml/支，RSD为0.8%。
2.7 重复性实验取同一批样品，按含量测定方法测定6次。6次测定的RSD＝0.9%，结果表明，本法的重复性良好。
2.8 回收率实验［1］分别精密最取已知含量的同一批供试品6份，每份5 ml，分别精密加入对照品溶液各1 ml ，按样品项下方法进行测定，结果平均回收率为98.73%，RSD＝2.7%。结果见表1。
2.9 专属性取相当于处方量1/10药材，按【制法】制成缺人参的阴性样品。取样品，对照品及阴性样品按含量测定方法实验，结果在与对照品相同保留时间未见色谱，本法的专属性好。色谱图如图2。
表1 回收率实验结果（略）
2.10 样品测定结果取3批供试品按含量测定方法进行实验，3批样品的含量分别为：0.422，0.432，0.425 mg/支。
按以上含量测定方法进行回收率实验表明，含量测定方法的回收率较好，采用的方法精密度高；稳定性实验表明，样品供试溶液的稳定性较好；重复性实验表明，重复性较好；线性实验表明，在0.251～2.51μg 浓度范围内浓度和峰面积线性关系好；专属性实验表明，阴性样品无干扰，该方法的专属性好。
图2 阴性样品色谱图（略）
3 讨论
实验中采用大孔吸附树脂柱对样品进行处理，可使人参中有效成分得到良好的提取，同时，流动相中加入少量磷酸，可使其中的皂苷类成分得到有效分离。
【参考文献】
［1］国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录115.
人参叶的功效与作用 人参叶的功效与作用有哪些？人参叶的功效与作用：具有养血，补胃气，泻心火，调中治气，消食开胃，治脾胃阳气不足及肺气促，短气、少气，补中缓中，泻肺脾胃中火邪等功效。人参叶可用于暑热口渴，用于热病伤津，用于肺燥干咳及虚火牙痛。下面小编就详细为您介绍人参叶的功效与作用及食用方法。 人参叶多年生草本，高30-70cm。根肥大，肉质，圆柱或纺锤形，末端多分歧，外皮淡黄色。叶为掌状复叶，具长柄；轮生叶的数目依生长年限而不同，一般1年生者1片三出复叶，2年复叶，最多可达6片复叶；小叶5，偶有7片， 考证 1.《本经》：主补五脏，安精神，止惊悸，除邪气，明目，开心益智。 2.《别录》：疗肠胃中冷，心腹鼓痛，胸肋逆满，霍乱吐逆，调中，止消渴，通血脉，破坚积，令人不 人参叶-原植物 忘。 3.《药性论》：主五脏气不足，五劳七伤，虚损瘦弱，吐逆不下食，止霍乱烦闷呕哕，补五脏六腑，保中守神。消胸中痰，主肺痿吐脓，冷气逆上，伤寒不下食，患人虚而多梦纷纭，加而用之。 4.《日华子本草》：调中治气，消食开胃。 5.《珍珠囊》：养血，补胃气，泻心火。 6.《医学启源》：治脾胃阳气不足及肺气促，短气、少气，补中缓中，泻肺脾胃中火邪。《主治秘要》：补元气，止泻，生津液。 7.《滇南本草》：治阴阳不足，肺气虚弱。 8.《本草蒙筌》：定喘嗽，通畅血脉，泻阴火，滋补元阳。 9.《纲目》：治男妇一切虚证，发热自汗，眩晕头痛，反胃吐食，寒疟，滑泻久痢，小便频数，淋沥，劳倦内伤，中风，中暑，痿痹，吐血，嗽血，下血，血淋，血崩，胎前产后诸病。 医学作用 【化学成分】 人参茎叶含三萜类及其皂甙成分：人参皂甙（ginsenoside）-Rb1、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rg4、-Rh1、-Rh2、-Rh3、-F1、-F2、-F3、-F4、-La,20
比色法测定总皂苷含量 1、仪器 紫外分光光度计、电热恒温水浴锅、电子分析天平、旋转蒸发器、大孔树脂柱(内径0．8 cm，长20 cm)。 试剂 无水甲醇、无水乙醇、正丁醇、冰醋酸、高氯酸和香草醛等均为分析纯；大孔树脂 DM-301、对照品、洋金花药品。 2、方法 2.1 对照品溶液的制备 取对照品 10 mg,加甲醇溶解定容至 10 ml，制成 1 mg／ml对照品溶液。 2.2供试品溶液的制备 取药材粉末(过4号筛)约0．2 g，准确称定，置于150 ml具塞锥形瓶中。精密加入50 ml 甲醇后，准确称重。浸泡60 min，超声提取30 min，再次称重，补加甲醇至超声前重量。过滤，精密移取续滤液25 ml于蒸发皿中，水浴蒸发至干，用5 ml水溶解残留物，所得溶液缓缓通过已处理好的大孔吸附树脂柱(径高比1：5)，以水50 ml洗脱，弃去水液，之后再以50 ml 95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干。用20 ml水分次将残留物溶解转移至60 ml分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取(4×20 ml)，合并正丁醇层，减压蒸干。残留物用70％甲醇溶解转移至10 ml量瓶中，定容，摇匀，即得。 2．3测定波长的选择 精密移取1．5 ml的对照品及l ml供试品溶液，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛一冰醋酸(临用新配)0．2ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15 min后流水冷却 lO min。加冰醋酸5 ml，摇匀。立即在紫外分光光度计于400～800 nm波长下扫描，同时空白溶液作参比。对照品及供试品的最大吸收波长均在475 nm，故选取475 nm为检测波长。 2．4线性关系考察 精密量取对照品溶液0．60，1．50，2．40，3．30，4．20 ml，置具塞试管中，于70℃水浴蒸发至干，加入5％香草醛-冰醋酸(临用新配)O．2 ml，高氯酸0．8 ml，于60℃水浴显色15min后流水冷却10 min。各加冰醋酸5 ml，摇匀，以同法平行处理的空白溶剂为空白，在475 nm处测定吸光度。以对照品质量c(mg)为横坐标，吸光度A为纵坐标，使用软件OriginPro 7．0进行回归分析，得到回归方程为：A=0．007 4+1．120 83c, r=0．999 97。在0．096—0．672 mg内线性关系良好。 2．5精密度试验 精密吸取对照品溶液1．5 ml，依“2．4”项下方法显色测定吸收度，连续测定5次，结果RSD为0．254％，说明仪器的测试性能良好。 2．6稳定性试验 取对照品和样品溶液，依“2．4”项下方法操作，按不同时间测定吸光度，结果见表1。2．7样品含量测定 取供试品溶液6份，每份精密吸取80 μ L，按“2．3”项的方法显色后，在540nm测定吸光度，计算样品含量。 2．8加样回收率试验 取供试品溶液8份，每份精密吸取80μL，加入0．2mg／mL齐墩果酸溶液50 u I。，按“2．3”项的方法显色后，在540hm测定吸光度，计算加样回收率。
人参三七皂苷化学成分及药理作用对比研究 王海静 严铭铭 邵 帅 赵大庆 (长春中医药大学·吉林长春·130021) 摘 要:对来源于五加科人参属近缘植物人参和三七的化学成分和药理作用进行了综合比较。两种药 材在化学成分上既具有相似性又存在着差异性,因而在药理作用上也表现出一定的相似性和区别。 关键词:化学成分;药理活性;人参皂苷;三七皂苷 人参、三七均为五加科人参属植物,是临床常用传统中药,二者均以皂苷为其药理活性成分,人参为补益药主要功能是大补元气,滋补强壮,复脉固脱,补脾益肺,生津安神;三七为止血药主要功能是止血、散瘀、消肿、止痛、补虚、强壮等功效。现代研究发现二者在神经系统、心血管系统、免疫系统以及在抗衰老、抗肿瘤等多方面有相似的药理活性,对照化学成分发现二者有许多相同的单体皂苷类成分,但由于各单体皂苷含量的不同又表现出不同药效作用,本文就从人参、三七化学成分及药理作用方面做以比较和综述。1 化学成分 皂苷类成分均为人参和三七的主要有效成分,主要分为三大类即原人参二醇型(P r o t o p a n x a d i o l),如人参皂苷R b1、R b2、R c、R d、R h2、M-R b1、M-R d等,原人参三醇型(P r o t o p a n x a t r i o l)如人参皂苷R e、R f、R g1、R g2、R h1等和齐墩果酸型(o l e a n o l i c a c i d)有人参皂苷R o、R i等;随着研究的深入,最近又有许多新的单体人参皂苷被发现,但主要集中在前两种类型并主要是对原有类型的进一步细化,如丙二酰类皂苷,20位不同构型异构体皂苷(类型A)以及17位不同取代模式的单体皂苷(类型D)[1～3]。据F u z z a t i[4]初步统计,迄今为止从人参的不同部位分离得到的皂苷成分已有80余种,而从三七的不同部位分离得到皂苷成分也有60余种,但未发现齐墩果酸型皂苷,其中在三七中分离得到了人参皂苷F2、R a3、R b1、R b2、R b3、R c、R d、R g3、R h2、R h3、M C、M-R b1、M-R d、R g3、R h2等,主要以人参三醇型为主。 2 药理活性 观察人参和三七的化学组成发现二者的皂苷组成有相同的成分,现代药理研究证明二者在许多方面呈现相同或类似的药理作用;同时,二者也因各单体皂苷所含种类和含量的不同而呈现不同的药效作用。 2.1 对中枢神经系统的作用 人参皂苷R g类有中枢兴奋作用,R b类呈镇静作用[5];R g1与学习过程有关,而R b1与记忆和安定作用有关;R g类和R b类皂苷都是人参和三七所含的主要皂苷成分,因而在药理作用上表现出很多相似性。2.1.1 益智作用 现代研究认为人参皂苷R g1和R b1是人参中益智作用主要成分。药理作用机制研究表明[6],人参皂苷R g1和R b1均可促进幼鼠身体发育,并易化小鼠成年后跳台法和避暗法记忆获得过程,可明显增加小鼠海马C A3区细胞突触数目。这是人参皂苷促进学习和记忆的组织形态学基础。另有报道,三七皂苷G-R b1和G-R g1能显著增强小鼠的学习和记忆能力,对亚硝酸钠及40%乙醇造成的小鼠记忆不良均有不同程度的对抗作用。 2.1.2 镇静、镇痛作用 三七地上部分对中枢神经有抑制作用,表现为镇静、安定与改善睡眠等功用。三七总皂苷(P N S)、三七单体G-R b1均有显著的镇静作用,并能协同中枢抑制药的抑制作用。同时,P N S、G-R b1对化学性和热刺激性引起的疼痛均有明显的镇痛作用。作为镇静、镇痛作用主要成分的人参皂苷R b1是人参的主成分之一,推测人参也应具有一定程度的镇静、镇痛作用。 2.1.3 对神经细胞的作用 江山等[7]研究发现,人参皂苷R b1对缺血性脑损伤有保护作用,但并不呈剂量依赖性;胡堂等[8]人通过实验发现低浓度人参皂苷R b l对雪旺细胞增殖有明显促进作用,高浓度则显示抑制作用。刘雯等[9]实验观察三七总皂苷对模型细胞的保护作用,发现三七总皂苷对能量代谢障碍引起的神经细胞损伤有保护作用。对照人参皂苷对神经细胞的保护作用怀疑三七皂苷G-R b1可能是三七对神经细胞起保护作用的主成分之一。 2人参研究 R E N S H E N Y A N J I U 2008年第1期
人参皂苷的神奇功效 人参提取物及其衍生物事人参发挥抗致癌作用的物质基础。研究人员对人参皂苷Rh1、Rh2、Rg3、Rg5成分进行了筛选： 1、人参皂苷Rh1预防和抗肿瘤： 人参通过醇类萃取人参总皂苷，再分离人参二醇皂苷和人参三醇皂苷，其中三醇组通过固定话醇素水解分离纯化稀有皂苷Rh1。 单体Rh1具有促进肝细胞增值的作用，治疗和预防肝癌、肝硬化的作用，促进DNA合成。 2、人参皂苷Rh2预防和抗肿瘤： 人参皂苷Rh2是从人参中分离得到的原人参二醇型低糖链皂苷单体。它是生晒参加工红参时,由于某些原人参二醇组人参皂苷受热分解，配基上糖链断裂降解产生的次皂苷人参皂苷Rh2的提取次级人参皂苷，通常只有降解的办法才能得以实现。 人参皂苷 Rh2单体对癌细胞的生长有抑制作用,能诱导肿瘤细 胞凋亡，逆转肿瘤细胞异常分化，抗肿瘤转移，与化疗药物联用能起到增效减毒的作用。 除去抗肿瘤作用外，人参皂苷具有提高机体免疫力、抗菌、改善心脑血管供血不足、调节中枢神经系统、抗疲劳、延缓衰老等作用。
3、人参皂苷单体Rg3预防和抗肿瘤： Rg3对肿瘤细胞的抑制，首先是通过抑制肿瘤新血管生成。此作用在小剂量应用时即可产生，最适合预防肿瘤发生和肿瘤的复发、转移，并且无其他抗癌药物常见的毒副作用，完全可以长期使用。 Rg3在较大计量时还能抑制肿瘤瘤细胞的增殖、浸润，诱导肿瘤细胞凋亡。因此，Rg3常常和放疗、化疗同时使用，可明显增强放疗、化疗效果，大大减轻其毒副作用，提高患者生活质量。 4、人参皂苷单体Rg5预防和抗肿瘤： 人参皂苷单体Rg5是二醇皂苷经过水解的产物。人参皂苷Rg5 可以显著降低肺癌的发生率。被认为是红参中抗癌的活性物质。
摘要 人参皂苷主要有原人参二醇(Protopanaxadiol, PPD) 型、原人参三醇( Protopanaxatriol, PPT) 型、齐墩果酸(Oleanic Acid, OA)型三种类型，其具有广泛的生物学活性，包括免疫调节、抗肿瘤、提高学习记忆、抗衰老、抗炎、抗痴呆、抗疲劳和促进造血等。但是人参皂苷本身不易被吸收，生物利用度较低。大量研究表明,人参皂苷在胃肠道去糖代谢后形成苷元或次苷，这些成分更容易被胃肠道吸收，且活性较皂苷增强。人参皂苷元混合物DS-1226系采用专有技术从人参茎叶中提取、水解、精制而成的一种类似人参皂苷肠代谢组合物的新型中药有效组份,该产品及技术已获得中国、美国、加拿大、欧盟、台湾等8个国家或地区的授权专利,其主要成分为PPT(33 %)和PPD (16 %)。行为学实验表明DS-1226对睡眠干扰所致的学习记忆障碍具有改善作用，此外其还对化疗所致的骨髓抑制有保护作用。 人参是五加科(Araliaceae) 人参属植物人参Panax ginseng C.A.Meyer的干燥根，是珍贵的中药材，始载于《神农本草经》，在我国药用历史悠久。人参主产于我国吉林的长白山等地区，具有大补元气、补脾益肺、生津、安神益智等功效-4。人参中含有多种类型的化学成分，如皂苷类、挥发油类、多糖类、氨基酸和多肽类、微量元素等，其中人参皂苷是主要的活性成分15]。人参皂苷属于三萜类皂苷，目前可分为三类6:-类为原人参二醇( Protopanaxadiol, PPD) 型，主要有人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rh2等;另一类为原人参三醇( Protopanaxatriol, PPT) 型，有人参皂苷Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1等;还有一类为齐墩果酸(Oleanic Acid, 0A)型，有人参皂苷Ro、Rh3、Ri、F4等。近年来，对于人参皂苷以及其代
王占峰,罗毅男,洪新雨,鞠砚,孙玉芹,韩海铃 吉林大学第一医院,吉林长春.北华大学附属医院,吉林吉林) 作者简介:王占峰(),男,硕士研究生,主要从事脑外伤及颅脑肿瘤地临床治疗及基础研究. 出处：北华大学学报自然科学版第卷第期 摘要:恶性肿瘤治疗至今尚无好地方法.传统化疗药因其缺乏特异性地细胞毒性作用,治疗中容易造成正常细胞地损伤,从而引起一系列地并发症.人参皂甙是人参中提取地天然活性成分,具有很高地抗肿瘤活性,而对正常细胞无毒副作用.文章从人参皂甙地抗肿瘤作用机制(抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、诱导分化、抑制肿瘤合成、提高荷瘤机体地免疫功能和抑制肿瘤转移、抗肿瘤耐药性增强、其他化疗药物对耐药肿瘤作用)等方面进行研究.文档收集自网络，仅用于个人学习 关键词:生物提取物;人参皂甙;抗肿瘤作用机制 文档收集自网络，仅用于个人学习 文档收集自网络，仅用于个人学习 ( )文档收集自网络，仅用于个人学习 . , , , . . . (, , , , ).文档收集自网络，仅用于个人学习 ; ; 文档收集自网络，仅用于个人学习 中图分类号文献标识码 人参作为中国传统中药,在中药史上占有重要地地位,具有大补元气,补气益肺,安神益智地功效,被用于多种古方验方地主药.人参为五加科多年生草本植物,其成分具有诸多生物活性成分,现代医学研究表明,人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性作用[].人参皂甙是人参中主要地有效成分,迄今已分离出多种单体,人参皂甙是从人参中提取地天然活性成分,属于十二醇皂甙,在体外对黑色素瘤细胞具有分化诱导作用.通过实验已证实可以通过诱导分化或凋亡,抑制多种肿瘤细胞地增殖和生长,并证明对正常细胞毒性作用甚低[].文档收集自网络，仅用于个人学习 肿瘤地常规治疗包括手术治疗、放射治疗、化学治疗.肿瘤化疗地目地在于通过化疗药物杀伤肿瘤细胞,促进肿瘤细胞地死亡或阻止其增殖.但绝大多数药物其细胞毒性缺乏特异性,造成正常细胞地死亡,特别是增生活跃地造血干细胞,导致骨髓移植及全身毒性等并发症,影响治疗效果.因此,迫切需要寻找新地方法弥补和完善常规治疗地不足.肿瘤细胞区别于正常细胞地一个主要特征在于分化障碍,因此,恶性肿瘤被看作是细胞分化异常地疾病.分化异常后,返回原始胚胎细胞表型,即去分化.近来地研究表明,引起细胞分化阻抑特异性地基因改变在一定条件下是可逆地.诱导分化治疗就是基于以上认识,应用分化诱导剂,使恶性肿瘤细胞向正常细胞分化转变,甚至完全转变为正常细胞,即再分化或肿瘤逆转,已成为抗肿瘤药物研究地新途径,从天然化合物中寻找分化诱导剂成为学者们研究地重点[].细胞凋亡是一个程序化死亡地过程,其与肿瘤发生、发展及其对治疗因子地反应关系密切.近年来,人们逐渐认识到凋亡可维持细胞地形态,减轻周围炎症反应,促进肿瘤细胞地凋亡,并成为恶性肿瘤化疗地新目标.大量研究表明,该药抗肿瘤作用与传统地化疗药物有所不同,深入研究地抗肿瘤作用机制具有重要地现实意义[].文档收集自网络，仅用于个人学习 抑制肿瘤细胞合成通过[]掺入实验检测人参皂甙对前列腺癌细胞株细胞核酸合成地影响,发现人参皂甙作用地细胞地[]掺入率明显少于对照组,这可能是人参皂甙作用于细胞后对合成复制有抑制作用,且作用文档收集自网络，仅用于个人学习 强度随药物浓度地增高而增强[]. 诱导肿瘤细胞地凋亡和分化 诱导肿瘤细胞地凋亡
保健食品中人参总皂苷的含量测定方法研究 发表时间：2014-08-26T15:20:35.077Z 来源：《医药前沿》2014年第20期供稿作者：张高飞于玥邬晓鸥李军 [导读] 本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。 张高飞于玥邬晓鸥李军 (深圳市药品检验所 518057) 【摘要】目的建立保健食品中人参总皂苷含量的测定方法。方法用水提取人参总皂苷类成分，经水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤除杂后，试样中的人参皂苷类成分在高氯酸的作用下与香草醛反应，产生特征的紫红色，在560nm下测定吸光度。结果人参总皂苷在0.0722～0.2165mg质量范围内与吸光度线呈良好的线性关系，平均回收率为95.9%。结论本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。 【关键词】保健食品人参总皂苷分光光度法 【中图分类号】R93 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）20-0217-02 皂苷类成分是参类中的主要活性物质, 具有滋补强壮，增强免疫，抗疲劳的功效[1]，常用的检测方法为紫外分光光度法[2-5]。目前市售含参类的保健食品有片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等，均是以总皂苷含量来评价其产品的质量和功效。其测定方法大多都是按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的方法检测[6]，在实际应用中，主要存在以下问题：1、固定的树脂柱载样量与不确定的样品总皂苷含量之间的矛盾，部分样品存在柱容量超载的情况，测定结果偏差严重。2、部分样品经过大孔树脂柱除杂后，仍存在干扰比色测定的杂质。3、操作步骤欠规范，导致测定结果重现性差。本文针对总皂苷的提取方式、以及测定过程中的参数进行研究，建立了保健食品中人参总皂苷的测定方法。 1 仪器、材料与试药 岛津UV2450紫外分光光度计；瑞士梅特勒XS105DU电子天平；上海一恒电热恒温水浴锅；人参皂苷Re(中检所，批号110754-200822，含量88.8%)；儿童装高丽红参液，舒灵胶囊，舒慰快牌胃肠液均购自市场；水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1供试品溶液的制备 固体试样：称取1 g样品，置100 mL容量瓶中，加水80 mL，超声提取30 min，放冷至室温，用水定容至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25 mL，进行萃取。 液体试样：吸取试样10 mL至分液漏斗中(含乙醇的保健食品，水浴挥尽乙醇)，加水至约25 mL，进行萃取。 在已处理好的试样中加入20 mL水饱和正丁醇，振摇萃取3次，取正丁醇层(必要时可离心)，合并提取液，用20 mL氨试液洗涤3次，置蒸发皿中100℃水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，甲醇定容，即得。 2.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取人参皂苷Re标准溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL于10 mL具塞比色管中，水浴挥干溶剂，加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液，再加入0.8 mL高氯酸，使残渣溶解，于60℃水浴加热10 min，冰浴冷却后，精密加入冰乙酸5 mL，摇匀，于560 nm波长处测定吸光度。取供试品溶液1 mL于10 mL具塞比色管中，自“水浴挥干溶剂”起操作。 3 方法学考察 3.1线性关系 取人参皂苷Re对照品0.01804 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，作为标准溶液，精密量取标准溶液0.4、0.6、0.8、 1.0、1.2 mL分别置10 mL比色管中，水浴蒸干，显色，以对照品的质量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程：y=4.4807x－ 0.0886，r=0.9997。结果表明，人参皂苷Re对照品质量在0.0722～0.2165 mg之间与吸光度呈良好的线性关系。 3.2 萃取次数 取舒灵胶囊、儿童装高丽红参液，按2.1制备样品水提取液，用水饱和正丁醇分别萃取3、4、5次，结果表明，萃取3次可将人参总皂苷提取完全(表1)。 表1 萃取次数比较结果 3.3热稳定性考察 由于正丁醇沸点较高，为此对人参皂苷的热稳定性进行考察，以便选取合适的水浴温度。取人参皂苷Re标准溶液0.6 mL，分别按60℃、100℃水浴蒸干、100℃水浴蒸干后继续放置30 min处理，测定结果分别为0.663、0.658、0.653，表明人参皂苷的热稳定性良好，因此水浴温度选为100℃。 3.4显色稳定性 取人参皂苷Re标准溶液0.3 mL，显色后每隔10 min测定其吸光度，结果表明，显色后的紫红色溶液不稳定，吸光度呈下降趋势，因此显色完成后需在10 min内完成测定。 3.5重复性试验 取舒灵胶囊按2.1下方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果表明本方法重复性良好(表2)。
浅谈中药人参的药理作用与应用研究 中药人参为五加科的干燥根，栽培品称“园参”，野生品称“山参”，主产于东北三省。秋季采挖。园参经晒干或烘干，称“生晒参”；蒸制后的干燥品，称“红参”。切片或研粉用。人参的化学成分主要是人参皂苷、多糖、维生素及人参黄酮类等。多数为达玛烷型皂甙，如人参皂甙Ral，Ra2，Rbl，Rb2，Rb3，Rc，Rd，Re，Rf，Rgl，Rhl，及20-葡萄糖人参皂甙Rf（20-glucoginsenoside Rf）等；少数为齐墩果酸型（C型）皂甙，如人参皂甙R[1]。 人参是我国特产珍贵药材之一，古代医药学书籍《神农本草经》对人参的功效有重要记载，人参药用部分主要为人参的根和须，现在也有将人参叶和人参花蕾作药用的。中医功效为大补元气、复脉固脱、补脾益气、生津、安神、益智。用于体虚欲脱、肢冷脉微、肺虚喘咳、惊悸失眠、神经衰弱、精神倦怠及各种气血津液不足症。 1人参的药理作用和临床功效 1.1对神经系统的作用 人参促进大脑对能量物质利用的有效成分为人参皂苷，其中人参皂苷Rb1，能调节中枢神经系统兴奋过程和抑制过程的平衡，对中枢神经系统均有小剂量兴奋，大剂量则转为抑制的作用。人参皂苷Rb1具有营养神经，促进轴突外生和神经再生的作用，人参皂苷；具有神经保护作用[2]，对脑缺
氧损伤的神经细胞有保护作用[3]，能作为脑细胞和神经细胞的保护剂，人参皂苷Rb1，对许多大脑细胞、神经细胞均有保护作用。姜正林[4]等用立体海马脑片模型研究发现，人参总皂苷对脑缺氧损伤的神经细胞有保护作用，人参皂苷Rb1，可促进抑制细胞死亡的基因产品的表达，抑制凋亡和凋亡细胞的死亡，对治疗或预防大脑和神经系统的疾病是有效的。近几年，人参皂苷抗神经细胞凋亡的作用受到人们的广泛关注，李军庆等[5]提出Rg，可抑制DNA断裂，从而防止细胞凋亡，人参能提高脑力与体力劳动的能力，提高工作效率，并有调节中枢神经系统抗疲劳作用；研究证明人参茎叶皂苷对电休克所致的大鼠较正常大鼠的不同脑区的单胺类递质含量明显增多，能改善大鼠的记忆学习功能[6]。海马与神经记忆活动有关，研究证明Rb1，能够促进海马苔藓纤维出芽等神经元的变化而提高神经元核内核糖核蛋白基因（Rdna）的转录活性，促进蛋白质的合成和增强海马突触的传递效应而增强学习记忆功能[7]，人参对不同记忆障碍的动物模式的记忆与学习能力的改善，充分说明人参在中枢系统的效应。 1.2对心血管系统的作用 人参有抗缺血作用，人参总皂甙（GS）对心肌梗塞和再灌注损伤均具有保护作用。人们对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用的研究，以20～80mg/L浓度范围内为宜，且该作用随浓度升高而增强，但当浓度达到160mg/L时，反而有加
人参皂苷Rg3 的抗肿瘤作用及研究进展 作者：江昌，缪雨青，周文丽，王杰军单位：上海长征医院王杰军教授，医学博士，博士研究生导师，第二军医大学附属长征医院肿瘤科主任医师。中国癌症康复与姑息治疗专业委员会主任委员、中国人民解放军肿瘤专业委员会主任委员、中国生命关怀协会副会长、上海癌症康复与姑息治疗专业委员会主任委员、上海综合性医院肿瘤防治专业委员会主任委员、上海市防癌抗癌事业发展基金会副理事长、中国临床肿瘤学会(CSCO )常务委员、美国临床肿瘤学会 (ASCO ) 委员( Active member )、国家药品监督管理局药物审评委员会委员、中华医学会上海分会肿瘤专科委员会荣誉主委肿瘤是全球致死率最高的恶性疾病，全球年发病率及死亡率还在不断增加，严重危害人类的生命与健康。我国传统中药中有很多都具有抗肿瘤功效，如半枝莲、薏米仁、石上柏、人参、黄芪等。紫杉醇、雷公藤甲素、喜树碱等植物类抗肿瘤药物在临床治疗中应用广泛。而人参同样具有抗肿瘤活性，作为最古老的传统中药之一，人参的使用已经有数百年历史。目前人参已广泛用作医疗用药，用于治疗糖尿病、心血管疾病、癌症等。人参皂苷Rg3 是从人参中分离出的一种有效成分，是一种四环三萜皂苷，因为C20 空间位置的差异，其分为20(R) 和20(S)2 种异构体。Rg3 可抑制肿瘤新生血管形成，诱导肿瘤细胞凋亡，并能选择性地抑制肿瘤细胞转移，提高机体免疫功
能。笔者将通过“人参皂苷Rg3”、“抗肿瘤”、“细胞凋亡”、 “血管生成”等作为关键词，计算机检索数据库PubMed 、EMBASE 、中国知网、维普中文科技期刊数据库，重点回顾近10 年关于人参皂苷Rg3 的作用机制及在胃癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌等实体肿瘤中的最新科研进展。诱导肿瘤细胞凋亡细胞的死亡和更新是多细胞生物整个生命过程中不可缺少的环节，可及时清除机体内的多余细胞和受损细胞，对各组织器官的发育及免疫系统的建立发挥重要作用。岩藻糖基化是肿瘤的特征之一，在肿瘤生物学中起着重要作用，许多癌症中已经报道了糖蛋白和糖脂的岩藻糖基化水平上升。岩藻糖基转移酶Ⅳ（FUT4 ）是催化LewisY 寡糖合成的必需酶，并受特异性蛋白1（SP1 ）和热休克转录因子1（HSF1 ）的调控。SP1 的高表达可抑制肿瘤的发生发展，而HSF1 则可促进肿瘤细胞增殖，二者的异常表达与肿瘤的预后不良相关。Aziz 等预先用幽门螺杆菌细胞毒素相关抗原A（CagA ）处理胃癌细胞，发现经CagA 处理的胃癌细胞中SP1 表达显著降低，而HSF1 、FUT4 表达明显增高。之后用Rg3 处理CagA 胃癌细胞，结果显示Rg3 可明显诱导胃癌细胞凋亡，同时caspase-8 、caspase-9 、caspase-3 和SP1 表达明显增高，而HSF1 和FUT4 表达明显降低。 进一步研究发现SP1 抑制剂处理胃癌细胞可导致Bax 的低表 达以及caspase-8 、caspase-9 和caspase-3 的失活，而 用
总皂苷检测方法-总皂苷含量测定法（香草醛法）：实验流程图2017.10 【文献】Xican Li, Qiuping Hu, Shuxia Jiang, Fei Li, Jian Lin, Lu Han,Yuling Hong, Wenbiao Lu, Yaoxiang Gao, Dongfeng Chen. Folium Sennae Protects against Hydroxyl Radical-induced DNA Damage via Antioxidant Mechanism: An in vitro Study. Botanical studies. 2014; 55:16. 【简介】皂苷广泛存在于中药及其他植物中，而且化学结构大同小异的皂苷往往同时存在。为了测定这些皂苷的总含量，便建立了总皂苷的检测方法。总皂苷的检测多使用分光光度法，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。 【溶液配制】 1.香草醛-冰醋酸溶液（测试液）配制：精密称取25mg香草醛，加冰醋酸定容至5mL。即制成5mg/mL 香草醛-冰醋酸测试液。 2.样品液配制：将待检测的样品用甲醇溶解，配成约5mg/mL的样品液。具体浓度视样品的溶解度而定， 但是必须有精确的数据。 3.齐墩果酸标准品溶液配制：精密称取齐墩果酸1mg，加甲醇定容至5mL，配成0.2mg/mL齐墩果酸标 准品溶液。（也可以使用其他的皂苷物质，如人参皂苷Rg3。但必须是纯的化合物） 4. 高氯酸：分析纯试剂。 5. 冰醋酸：即纯的无水乙酸（分析纯） 【检测方法与实验流程图】 【标准曲线绘制】（齐墩果酸） 取上述齐墩果酸溶液x μL （x=0，40，80，120，160，200），依“实验流程图”，在70℃水浴15mim 后呈桃红色。以第一份溶液（x=0）作为空白对照，测A540nm值。以“产物混合物”时的齐墩果酸的质量，为横坐标，A540nm值为纵坐标，绘制标准曲线。以此标准曲线计算，得线性回归方程。 【样品液的测定】 将上述“实验流程图”中的“齐墩果酸标准品溶液”换成样品液，进行实验，并测定其A540nm值。将此A540nm代入线性回归方程，即可计算出其总皂苷的含量（以齐墩果酸计）。 【说明】 1.此法是以齐墩果酸为标准品测得总皂苷的含量。所以，其结果应表示为，如：“某某提取物中含 有0.12mg/g的总皂苷（以齐墩果酸计）”。这并不意味着该提取物中真的就含有齐墩果酸。 2.“实验流程图”中，在“彻底挥干溶剂”一步中，如果溶剂挥干不彻底，哪怕是有一点点，都 会干扰。水也要彻底挥干。 1
第一章综述 人参皂苷的简介 人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。 人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。 人参皂苷成分 人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。 Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复. Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。 Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用。 Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。 Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。
人参皂甙体内代谢综述 方松 学号：201261930 人参又名人衔、棒锤，首载于《神农本草经》，被列为上品。系五加科植物人参Pana ginseng C．A．Mey．的干燥根。在我国的医药学中应用广泛，素有“中药之王”之称。主要产于吉林省长白山一带，是我国“东北三宝”之一。具有抗肿瘤、降血脂、促进细胞再生等多种生理活性。现就人参皂甙在体内代谢作简要综述。 1、人参皂甙分类 现代研究表明，人参中含有人参皂甙、多种氨基酸、糖类、低分子肽类、脂肪酸、有机酸、维生素B、维生素C、菸酸、胆碱、果胶、微量元素等。皂甙是人参生物活性的物质基础，从其皂甙元母核结构上主要分为以下三大类：（1）以原人参三醇为母体的糖甙，以Rg1为代表，为人参的主要成分。（2）以原人参二醇为母体的糖甙，以Rb1为代表，为西洋参的主要成分。（3）以齐墩果醇酸为母体结构的五元环皂甙Ro。 2、人参皂甙的药理活性 （1）对中枢神精系统的双向调节作用：人参能加强大脑皮质的兴奋过程和抑制过程，使兴奋和抑制二种过程达到平衡，使由于紧张造成紊乱的神经过程得以恢复，人参皂甙小剂量主要表现为对中枢的兴奋作用，大剂量则转为抑制作用。从人参所含的有效成分分折、人参皂甙Rb类有中枢镇静作用Rg类有中枢兴奋作用。 （2）人参的适应原样作用：人参对物理的、化学的、生物的各种有害刺激有非特异性的抵抗能力，可以使紊乱的机能恢复正常、主要表现为对血压、肾上腺、甲状腺机能和血糖等方面的双向调节作用。 （3）对免疫功能的用作：人参能增强机体的免疫功能。 在临床上人参主要用于休克、冠心病、心律失常、贫血、白细胞减少症、充血性心力衰竭，还常用于慢性阻塞性肺病、糖尿病、肿瘤、血小板减少性紫癜、早衰、记忆力减退等辅助治疗。 3、Rg1的体内代谢 早在1983年，日本学者Odani等在无菌大鼠灌胃实验中发现，原人参三醇型皂甙Rg1
作者简介:冯亮(1980-),男,正攻读药剂学专业的博士学位。3通讯作者(C orrespondent author ),jxh1013@https://www.doczj.com/doc/754172965.html, 三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进 冯 亮,蒋学华3,叶利民 (四川大学华西药学院,四川成都610041) 摘要:目的 用薄层扫描法(T LSC )和高效液相色谱法(HP LC )测定三七总皂苷中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参皂苷Rg 1(Rg 1)和三 七皂苷R 1(R 1)3种主要成分的含量,并对两种方法进行比较,为修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。方法 T LSC 法用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂,27%硫酸无水乙醇溶液为显色剂,测定波长λs =535nm ,λR =460nm ;HP LC 法用C 18色谱柱,以乙腈-水线性梯度洗脱,0min (25∶75)～15min (45∶55);流速1.5ml ?min -1;测定波长200nm 。结 果 T LSC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1、R 1的含量分别为31.07%、23.30%、9.35%;HP LC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、 Rg 1、R 1含量分别为30.46%、22.65%、5.83%。结论 HP LC 法能将多种皂苷很好地分离并检测,简便快速,减少了误差。其准 确度和测定结果的稳定性均优于T LSC 法。 关键词:薄层扫描法;高效液相色谱法;三七总皂苷;人参皂苷Rb 1;人参皂苷Rg 1;三七皂苷R 1中图分类号:R927 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2006)02-0187-03 Improvement of determination method of the main components in Panax notoginseng saponions FE NGLiang ,J I ANG Xue -hua 3,YE Li -ming (West China School o f Pharmacy ,Sichuan Univer sity ,Chengdu 610041,China ) Abstract :OBJECTIVE T LSC and HP LC were adopted to determine the contents of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions.And results of the tw o methods were compared ,which could provide the basis of revising the determination method in quality standard.METH ODS T LSC has been established with the upper layer of the mixture of butanol -ethyl acetate -H 2O (4∶1∶5)as developing s olvent ,and 27%sulphuric acid ethanol s olution as coloring reagent ,λs =535nm ,λR =460nm.HP LC was adopted with C 18column ,acetonitrile -H 2O (25∶75at 0min and 45∶55at 15min ,linear gradient elution )was used as m obile phase and detective wave 2length was set at 200nm.The flow rate was 1.5ml ?min -1.RESU LTS The content of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions determined by T LSC was 31.07%,23.30%and 9.35%;and that determined by HP LC was 30.46%,22.65%and 5.83%,respectively.CONC L USION HP LC could separate and determine various components in Panax notoginseng saponions and determine them.Its accuracy and stability are better than T LSC. K ey w ords :T LSC ;HP LC ;Panax notoginseng saponions ;G insenoside Rb 1;G insenoside Rg 1;Sanchinoside R 1C LC number :R927 Document code :A Article I D :1006-0103(2006)02-0187-03 三七是五加科人参属植物Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen 的干燥根;含有皂苷、多糖、氨基酸等多种化学成分。其中三七总皂苷(Panax noto 2 ginseng saponions )为其主要的有效成分,具有活血化 淤的功效。三七总皂苷含有人参皂苷Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、R f 、Rg 1、Rg 2、Rh 1和三七皂苷R 1、R 2、R 3、R 4、R 6等20余种皂苷成分,均属达玛烷型(Dammarane type )四环三萜皂苷。其中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参 皂苷Rg 1(Rg 1)是三七总皂苷中含量最高的两个成分,而三七皂苷R 1(R 1)则是三七总皂苷的特征化合物[1]。对于三七总皂苷原料及其口服制剂,文献[2]规定采用比色法测定总皂苷含量。而比色法在操作过程中存在操作烦琐、影响因素多及重复性差等问题[3],尤其是不能分别测定三七总皂苷中各主要成 分的含量。为此,特建立了薄层扫描法(T LSC )测定 三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1和R 1的含量[4];同时建立了HP LC 含量测定法,并与T LSC 法进行比较,为重新修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试药 LC -9A 高效液相色谱仪,SPD -6AV 紫外检测 器(日本岛津);CS -930薄层扫描仪;Dikma Diam on 2sil C 18色谱柱(200mm ×4.6mm ,5μ m ,美国Dikma 公司);硅胶G 板(大连化物所)。Rb 1、Rg 1和R 1对照 品(中国药品生物制品检定所);三七总皂苷(云南特 安钠制备厂);乙腈(色谱纯,美国Dikma 公司);水(超纯水);其余试剂均为分析纯。1.2 T LSC 法1.2.1 含量测定 取三七总皂苷样品约50mg ,精 华西药学杂志 W C J ?P S 2006,21(2):187～189
总皂苷的测定方法（分光光度法） 本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。 本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。 一、方法提要 样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。 二、仪器 1.722分光光度计。 2.PT—大孔吸附树脂柱（河北省津杨滤材厂）。 3.超声波振荡器。 三、试剂 1.甲醇（分析纯）。 2.乙醇（分析纯）。 3.人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品检定所）。 4.5％香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL。 5.高氯酸（分析纯）。 6.冰乙酸（分析纯）。 7.人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。 8.重蒸水。 四、测定步骤 1.样品处理： （1）固体样品 称取1.0g左右样品于100mL烧杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。 （2）液体样品 含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析；非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品（如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）直接进行柱分离。 2.柱层析
以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。 3显色 在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入l0mL比色管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。 4标准曲线的绘制： 吸取人参皂苷Re标准溶液（2.0mg/mL）0、20、40、60、80、100μL（相当于人参皂苷Re0、40、80、120、160、200μg），于10mL比色管中，用氮气吹干，同4.（3）显色步骤测定吸光度。并绘制标准曲线。 人参总皂苷浓度为20～200μg/mL之间与吸光度值呈线性关系，相关系数（r）0.999。 五、结果计算 式中X——样品中总皂苷（以人参皂苷Re计）（g/kg或g/L）； m——试样质量或试液体积（g或mL）； V1——样品提取液总体积（mL）； V2——样品提取液测定用体积（mL）； m1——从标准曲线查得待测液中人参皂苷Re量（μg）。