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菌落总数检测中的注意要点

菌落总数检测中的注意要点）

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菌落总数检测中的注意要点

菌落总数测定?一、菌落总数的概念和测定意义?菌落(colｏny)是指细菌在固体培养基上发育而形成的能被肉眼所识别的生长物,它是由数以万计的相同细菌聚集而成的,故又有细菌集落之称。?菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clｎi）内，、所含能于某种周体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。?菌落总数主要是作为判定食品被细菌污染程度的标记，也可以应用这一方法观察食一中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态．以便对被检样品进行卫生学评价时提供科学依据.?二、茵落总数测定的几项说明?1．菌落总数的测定。是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后,每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约２0%)，因而并不能测出每ｇ或ｍl检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制,因此所得结果,只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。

2．鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个,成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块,也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数,而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(coｌｏny forming uｎits，CＦＵ)报告之。

３．每种细菌都有它一定的生理特性，培养时,应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、PH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。因此,要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上,并培养在不同条件下，如温度,氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的,因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。?三、茵落总数的测定

测定食品中菌落总数时，是将食品检样做成几个不同的lＯ倍递增稀释液,然后从各个稀释液中分别取出一定量在平皿内与营养琼脂相混合，经培养后，按一定要求计算出皿内琼脂平板上所生

成的细菌集落数，并再根据检样的稀释倍数,计算出每g或m1样品中所含细菌菌落的总数。

四、菌落总数测定中的一些要求和规定?为了正确地反映食品中各种需氧和兼性厌氧菌存在的情况，检验时必须遵循以下一些要求和规定。

(一）所用器皿及稀释液?

1．检验中所用玻璃器皿,如培养皿,吸管、试管等必须是完全灭菌的,并在灭菌前彻底洗涤干净，不得残留有抑菌物质。?２．用作样品稀释的液体，每批都要有空白对照。如果在琼脂对照平板上出现几个菌落时,要追加对照平板，以判定是空白稀释液,用于倾注平皿的培养基,还是平皿吸管或空气可能存在的污染。? 3.检样的稀释液虽可用灭菌盐水或蒸馏水,但以用磷酸缓冲盐水特别是O.1％蛋白胨水为合适,因蛋白胨水对细菌细胞有更好的保护作用,不会因为在稀释过程中而使食品检样中原已受损伤的细菌细胞导致死亡。如果对含盐量较高的食品（如酱品等)进行稀释，则宣采用蒸馏水。

（=)检样稀释

1.检样稀释时,应以无菌手续称取（或量取)有代表性的样品25g(或m1)剪碎放于含有225ml灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠）,经充分振摇作成l：ｌO的稀释液。?如系肉、鱼等固体样品,最好剪细于灭菌乳钵内与稀释液研匀，或与稀释液同置于灭菌均质器杯中(国产均质器,目前以江苏武进郑陆医学仪器厂产品较简便而实用）,以8000一l000０ｒｐm速度搅拌1

2.根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，将上分钟,使做成均匀的1：10稀释液。?

述l:lＯ的检样稀释液再做成几个适当的lO倍递增稀释液。即取１：１0稀释液１ml与9mｌ稀释液混和做成l:lOO的稀释液,然后依次递增稀释，做成1:1 000、１:10０00等稀释液。注意每递增

3.从吸管筒内取稀释一次,必须另换１支l ml灭菌吸管,这样所得检样的稀释倍数方为准确。?

出灭菌吸管时,不要将吸管尖端碰着其他仍留在容器内的吸管的外露部分;而且吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶和试管时，也不要触及瓶口及试管口的外侧部分；因为这些部分都可能接触过手或其他沾污物。

4．在作10倍递增稀释中，吸管插入检样稀释液内不能低于液砸２.5cm;吸入液体时,应先高于吸管刻度,然后提起吸管尖端离开液面，将尖端贴于玻璃瓶或试管的内壁使吸。管内液体调至所要

求的刻度,这样取样较准确，而且在吸管从稀释液内取出时不会有多余的液体粘附于管外。?５.当用吸管将检样稀释液加至另一装有9mＬ空白稀释液的试管内时，应小心沿管壁加入，不要触及管内稀释液，以防吸管尖端外侧部分粘附的检液也混入其中。?(三)平板接种与培养

1.将稀释液加至灭菌平皿内时,应根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择２—3个适宜稀释度，分别在作1O倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移ｌml稀释液加入皿内(从皿侧加入，不要揭去皿盖)，最后将吸管直立使液体流毕，并在皿底干燥处再擦一下吸管尖将余液排出,而不要吹出。每个稀释度应作2个平皿。?

2.用于倾注平皿的营养琼脂应预先加热使融化，并保温于45±1℃恒温水浴中待用。倾注平皿时，每皿内倾入约１.5ｍl,最后将琼脂底部带有沉淀的部分弃去。?

3.为了防止细菌增殖及产生片状菌落，在检液加入平皿后,应在２0分钟内向皿内倾入琼脂，并立即使其与琼脂混和均匀。

4．检样与琼脂混和时，可将皿底在平面上先向一个方向旋转，然后再向相反的方向旋转,以使充分混匀。旋转中应加小心，不要使混和物溅到皿边的上方。为了保证混和均匀,而不溅及皿边的上方,可使用江苏省无锡县卫生防疫站童鹤泉设计制成的自动平皿旋转仪，直接将加有检样的平皿放在旋转仪上(可同时放４只平皿），加入琼脂后，开动电钮，在数十秒钟内即可自动左右旋转而使皿内的检样与琼脂混合均匀。

5.皿内琼脂凝固后,不要长久放置，然后始翻转培养；而应于琼脂凝固后,在数分钟内即应将平皿翻转予以培养，这样可避免菌落蔓延生长。必要时,可先将皿打开倒置(皿底向上)于温箱内经１5~６0分钟使琼脂表面干燥后，再将皿底移至盖内倒置于温箱内培养。这样可以阻止运动性强的

6.为了控制污染,在变形杆菌属、假单胞菌属和芽胞杆菌属中一些菌株在琼脂表面扩展生长。?

取样进行检验的同时，于工作台上打开一块琼脂平板,其暴露的时间，应与该检样从制备、稀释到加入平皿时所暴露的最长的时间相当,然后与加有检样的平皿一并置于温箱内培养，以了解检样在

7.培养温度,应根据食品种类而定。肉、，乳、蛋检验操作过程中有l无受到来自空气的污染。?

类食品用37℃培养，水产品用30℃培养。培养时间为48±２小时。其他食品,如清凉饮料,调味品,

糖果、糕点.果脯，酒类(主要为发酵酒)、豆制品和酱腌莱均系用３7℃24±2小时培养。培养温度和时间之所以有这种不同的区分，乃是因为在制定这些食品卫生标准中关于菌落总数的规定时，分别采用了不同的温度和培养时间所取得的数据之故。水产品因来自淡水或海水,水底温摩较低,因而制定水产品细菌方面的卫生标准时，系用3０℃作为培养的温度。

(四)对照试验

１.加入平皿内的检样稀释液(特别是１0＿1的稀释液）,有肘带有食品颗粒，在这种情况下,为了避免与细菌菌落发生混淆,可作一检样稀释液与琼脂混和的平皿,不经培养，而于４℃环境巾放置,以便在计数捡样菌落时用作对照。

2．为了防止检样中食品颗粒与菌落混淆，也可在已溶化而保温于４5℃水浴内的琼脂中,按每１00ml加ｌｍl Ｏ.５%氯化三苯四氮唑(2,3，５tripｈenｙlｔetrａzoliｕm chloride，TTC)水溶液之量加入适量的TTＣ。培养后,如系食品颗粒,不见变化，如为细菌,则生成红色菌落．配好的ＴTＣ溶液，应先用来与不加ＴＴC的作对照,以观察其对计数是否有不利的作用(ＴTC在一定浓度下对革兰氏阳性菌有抑制作用）。ＴＴC溶液要放冷暗处保存,以防受热与光照而发生分解。无色的TTC 是作为受氢体加入培养基中,如果有细菌存在,培养后，在细菌脱氢酶的作用下，TＴC便接受氢而成为红色的三苯基甲艏(ｆoｒmａｚan)，使菌落呈现红色，其反应式如图2-I：?(五)菌落计数?１.从温箱内取出平皿进行菌落计数时,应先分别观察同一稀释度的两个平皿和不同稀释度的几个平皿内平板上菌落生长情况。平行试验的2个平板与菌落数应该接近,不同稀释度的几个平板上菌落数则应与检样稀释倍数成反比,即检样稀释倍数越大，菌落数越低,稀释倍数越小，菌落数越高。

２.计数菌落时，应选取菌落数在30~３0０之间的平板作为菌落总数测定的标准。1个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数；如其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。如在一个稀释度的两个平板中,一个平板的菌落数在30一30０之间，另一个大于３０0或小于3０时，则以菌落数在３0—300

间的平板作为计数的标准。

3.菌落计数所得结果,可分别按以下几种不同情况作报告。

(1)若１个稀释度的平均菌落数在３0—300之间，则将该菌落数乘其稀释倍数报告之,如表2-1中例1,报告为１６４×１02=１６400，或1.6×104。

(2）若有两个稀释度,其生长的菌落数均在3０—3０0之间，则视二者之比如何来决定。若其比值小于２,应报告其平均数，如表2-１中例２：４60０0／29５00＝1.6<2，故报告为：（4６0０0＋295０0)／2=37７50或3.8×lO4。若大于2,则报告其中较小的数字,如表2-１中例3:60０0０／27lOO=2.２＞２,故报告为：27lＯO或２．７×１０４。若等于2，亦报告其中较小的数字，如表2-１中例4：3000／1500=2，故报告为:15０0或1.5×lＯ3.

(3)若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之，如表2-1中例５,报告为:313×108=313０００或3.1×105。

(4)若所有稀释度的平均菌落数均小于３０,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀表2-１稀释度的选择及菌落数报告方式

稀释液及菌落数

例次 lO-１ 10-2 ｌO－3 两稀释液之比菌落总数 (个/g或ｍ１) 报告方式 ~ （个/g 或m1）

ｌ 2 3 4 ５6 7 ８多不可计多不可计多不可计1５0多不可计2７O多不可计 164 ２95 271 ３0多不可计1l 0 305 2０4６60 8 313 5 O１２一１.6 2．2 2 一一一一16400 ３7750 2７100 １500 3l 30０0 27０‘＜ｌ×1０ 30500 1,６000或1.6×1０4 3８000或3.8×lＯ4 ２7000或2.7×104 1500或１.5×1０3 310000或3.１×105 2７0或2.7×lO。

释倍数报告之，如表２-1中例6，报告为：27×１0=２70或2.7×102。?(５)若所有稀释度均无菌落生长，则以小于l(<1)乘以最低稀释倍数报告之,如表2-1中例７，报告为：

(６）若所有稀释度的平均菌落数均不在30—3０0之间,其中一部分大于300或小于３0时,则以最接近30或3０0的平均菌落数乘以稀释倍数报告之，如表2-１中例8,报告为：30５×10。＝305或３.1×1０４。

４.注意事项

(1)如果稀释度大的平板上菌落数反比稀释度小的平板上菌落数高，则系检验工作中发生的差错，属实验室事故。此外,也可能因抑菌剂混入样品中所致,均不可用作检样计数报告的依据。?（2)如果平板上出现链状菌落，菌落之间没有明显的界限，这是在琼脂与检样混合时,一个细菌块被分散所造成。一条链作为一个菌落计，如有来源不同的几条链，每条链作为一个菌落计，不要把链上生长的各个菌落分开来数。此外，如皿内琼脂凝固后未及时进行培养而遭受昆虫侵入,在昆虫爬过的地方也会出现链状菌落,也不应分开来数。

(3)如果所有平板上都有菌落密布，不要用多不可计作报告,而应在稀释度最大的平板上,任意数其中2cm2个，除2求出每ｃm2内平均菌落数乘以皿底面积63.6cm2数，再乘其稀释倍数作报告。例如10-1~10-３稀释度的所有平板上均菌落密布,而在lO-３稀释的平板上任数２个cｍ2。内的菌落数是60个，皿底直径为9ｃｍ，则该检样每ｇ(或m1)中“估计”菌落数为:60／2×6３.６×1０00=190800０或１．9×1０6。

６3.6cｍ2数系按皿底直径为９cｍ时计算而得，即:(９／2)２×3.1４=63．６;如所用平皿的皿底直径不是９cｍ，则可按其直径的实际ｃｍ数代人圆面积公式求出。

（4)菌落计数中，如能使用国产JLQ—S。型菌落计数器(江苏武进郑陆医学仪器厂产品）,则比较方便,灯光由侧面射向平板,菌落易于观察。由于仪器带有电子音响讯号,用特制金属探笔点数中，在发出音响之下始显示数字增加，不会发生差错。且灯光与平板之间夹有多用方格玻质规板(方格面积为lcm2)，也有助于对菌落密布的平板进行计数。

(5)检样如系微生物类制剂（如酸牛乳、酵母制酸性饮料),则平板计数中应相应地将有关微生物（乳酸杆菌、酵母菌)排除,不可并入检样的菌落总数内作报告。一般在校正检样的pH7.6后,再进行稀释和培养，此类嗜酸性微生物往往即不易生长。并可用革兰氏法染色鉴别。染色鉴别时,要用不校

正pＨ的检样做成相同稀释度的稀释液培养所生成的菌落涂片染色作对照,以资辨别。酵母菌卵圆形，远比细菌大，大小为2~5×５~30μm,革兰氏阳性着色。乳酸杆菌在2４小时内，于普通营养琼脂平板上在有氧条件下培养,通常是不生长的。?(六)报告方式?１.当检样的菌落数为l一10０时，按实有数报告;大于１０0时,只记录左面头两位数字（用两位有效数字作报告，可避免产生虚假的精确概念)，左面第三位数字则用四舍五入法计算，从第二位数字之后都记为o,为了缩短数字后面的０数,也可用１0的指数来表示,例如菌落数为3７７5０时，即可写成3．８×l05(见表2-１中“报告方式”栏)。?2．检样的菌落数如系从菌落密布的平板上按比例计算而求得，报告结果时,应在菌落数前加上“估计”二字（见上述菌落计数注意事项“(3)”中所举之例)。?3．检样为固体,用重量法取样检验时,以g为单位报告其菌落数;检样为液体，用容量法取样检验时,以mｌ为单位报告其菌落数；如检样为样品表面的涂擦液，则应以cm2为单位报告其菌落数。

４．如检样为液体,在两个平皿内所加ｌｍl未经稀释的检样(原液)培养中,均无细菌集落生成，则报告为lml检样内未有菌落生长，或1m1检样内菌落数<1。

五、特殊的方法?(一)平板表面涂布法.

将营养琼脂制成平板，经50℃l一２小时或35℃18—２0小时干燥后，于其上滴加检样稀释液0．2m ｌ，用L捧涂布于整个平板的表面,放置片刻(约lＯ分钟),将平板翻转，移至36±1℃温箱内培养24±2小时(水产品用30℃培养4８±2小时)，取出，按前述方式进行菌落计数,然后乘以5（由O．2m１换算为１ｍ１),再乘以样品稀释的倍数，即得每g或m１检样所含菌落数。

此法较上述倾注法为优,因菌落生长在表面,便于识别和检查其形态，虽检样中带有食品颗粒也不会发生混淆,同时还可使细菌不必遭受融化琼脂的热力，不致因此而使菌细胞受到损伤而不生长,从而可避免由于检验操作中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低。但是本法取样量较倾注法为少(仅倾注法的五分之一),代表性将受到一定的影响。

(二)平板表面点滴法?与涂布法相似。所不同者，只是用标定好的微量吸管或注射器针头按滴（使每滴相当于０.025mi)将检样稀释液滴加于琼脂平板上固定的区域(预先在平板背面用标记笔划成四个区域)，每个区域滴1滴，每个稀释度滴两个区域，作为平行试验。滴加后，将平板放平片刻

(约5～1０分钟),然后翻转平板，如前移入温箱内培养６～8小时后进行计数,将所得菌落数乘以40(由o．0２5mｌ换算为1ｍｌ),再乘以样品稀释的倍.数，即得每g或ml检样所含菌落数。李兆普等利用此方法，与倾注法进行对比试验,经过六种食品，1536件检样的考核结果，倾注法低于点滴法及涂抹法。本法具有快速、节省人力物力,适于基层单位和食品厂内部测定细菌总数用。但此法取样量少，代表性可能受到影响。又食品中细菌数少于3００0/ｇ(mｌ)者受到限制。

油气回收答案

油气回收检测试题分数：_______________ 一、选择题（每小题3分，共30 分）1．加油站油气排放控制和限值标准的制定参考了（A ）。 A. 美国加州空气资源委员会发布的《油气回收认证方法》（CARB CP-201）、《油气回收检测方法》（CARB TP-201）的相关技术内容。 B. 澳大利亚相关方面的标准。 C.日本相关方面的标准。 2．加油站油气排放控制和限值标准规定了哪几方面的内容：（ B ）。 A．加油站油气排放控制要求和限值。 B．加油站油气排放控制要求和限值，并规定了检测方法。C．加油站油气回收检测方法。 3．加油站油气回收治理基本检测项目有（ C )。 A ．密闭性检测B．液阻检测 C ．密闭性、液阻和气液比检测 4．下面仪器哪些不用于密闭性检测（C）。 A ．氮气和氮气瓶。B．压力表和流量计。C．检测用油桶。 5．在密闭性检测中哪些说法是正确的（A）。 A 油气回收系统密闭性压力检测值应满足表 1 规定的最小剩余压力限值, 大于等于压力限值视为符．合油气排放要求。 B．密闭性压力检测时，可以用氮气或其它气体冲压。 C．密闭性压力检测时，可以进行正常的加油和卸油工作。6．气液比的检测时每次需要加油量为（C ）。 A. 5 ?20L。 B. 10 ?20L。 C. 15 ?20L。 7．在气液比检测中下面哪些说法是不正确的（ A ）。 A. 如果气液比不在标准限值范围内，而气液比检测值与限值的差小于0.1时，可再做2次气液比检测，但之间不能对加油系统和油气回收系统作任何调整。 B. 采用累进式流量计检测时，应记录每次检测之前气体流量计的最初读数。除非经过核查，不要将前一次测试的最终读数作为当前测试的最初读数。采用电子流量计时应先清零。 C. 采用电子流量计时应先清零。 8．加油站油气回收系统基本检测项目的检测顺序（ B ）。 A．气液比- 〉密闭性和液阻。B．密闭性和液阻-〉气液比。C．密闭性-〉气液比。9．对于液阻检测，下面哪些做法或判断是不正确的（

食品中菌落总数的测定

食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料 1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。 2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.2 3、检样：利乐包装鲜牛奶250ml 三、实验方法与步骤 1、检验程序菌落总数检验程序：检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告 2、检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。四、检样中细菌菌落总数的计算与报告 1、菌落计算方法（1）菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。（2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择选取菌落数在30～300 CFU之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， ②稀释度的选择应选择平均菌落数在30～300 CFU之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，按以下公式计算：

加油站油气回收现场检测作业指导书说课讲解

加油站油气回收现场检测作业指导书

加油站油气回收现场检测作业指导书 1.范围本标准规定了加油站汽油油气排放限值、控制技术要求和检测方法。本标准适用于现有加油站汽油油气排放管理，以及新、改、扩建加油站项目的环境影响评价、设计、竣工验收及其建成后的汽油油气排放管理。 2.引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。GB 20952－2007 《加油站大气污染物排放标准》 3.概述 3.1工作原理液阻检测方法，以规定的氮气流量向油气回收管线内充入氮气，模拟油气通过油气回收管线。用压力表或同等装置检测气体通过管线的液体阻力，了解管线内因各种原因对气体产生阻力的程度，用来判断是否影响油气回收。密闭性检测方法，用氮气对油气回收系统加压至 500Pa，允许系统压力衰减。检测 5min 后的剩余压力值与表 2 规定的最小剩余压力限值进行比较，如果低于限值，表明系统泄漏程度超出允许范围。

气液比检测方法，在加油枪的喷管处安装一个密合的适配器。该适配器与气体流量计连接，气流先通过气体流量计，然后进入加油枪喷管上的油气收集孔。所计量的气体体积与加油机同时计量的汽油体积的比值称为气液比。通过气液比的检测，可以了解油气回收系统的回收效果。 3.2计量器具控制计量器具控制包括首次检测和后续检测。 3.2.1检测条件环境温度（0-35）℃，常压。 3.2.2检测用设备 3.2.3检测项目

1.液阻检测方法 2. 密闭性检测方法 3. 气液比检测方法 4.检测流程 4.1检测前的准备 4.1.1、现场检测前先和被测单位取得联系，要求油气回收装置的施工、安装单位人员先期到达被测单位进行设备自检，要求管道无泄漏，对所有用于油气回收装置的各个零部件的工作状态进行调试，确定其工作正常、稳定。 4.1.2、检测工作具体时间需提前通知被测单位，要求做好满罐存油准备以有利于检测，在检测之前24小时内不允许进行气液比检测，在检测前3小时内和在现场检测过程中，不得有大批量油品进出储油罐，在检测前30分钟停止加油作业。用安全围栏圈定现场检测区域、油罐井操作区域，提出安全警示，现场准备消防设施（干粉灭火器、石棉毯等），非现场操作人员不得进入相关区域。现场工作人员需按照相关安全要求更换防静电工作服、关闭所有通讯设备、车辆熄火、不许携带火源等要求和严格遵守被检单位的其他要求。 4.1.3、现场检测人员先记录加油站内的实际库存油量，计算油气空间，查表得出最小剩余压力，了解被测油站油气回收装置的设计方式（集中式或分散式、有源阀门或无源阀门等），确定油罐是否连通，再确定相应的现场操作步骤。 4.1.4、若是集中式油气回收装置，检测开始前需打开卸油口处的油气回收总阀或打开量油口球阀，卸去油气回收管线和油罐内的负压，以利于检测（分散式则不需要），负压卸掉后关闭开启的阀门。

菌落总数、大肠菌群测定方法

菌落总数和大肠菌群测定（固体样品）药品： 1、平板计数琼脂 2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） 3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 4、氯化钠设备材料：烧杯、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。一、准备工作（指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加） 1、平板计数琼脂培养基准备----用于菌落总数测定将三角瓶放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加 200ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。 2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤----用于大肠菌群测定（a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加100ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。（b）用10ml（毫升）的吸管分装到9支（18*180规格）试管中，每支试管加10ml的月桂基溶液LST （合计90毫升）。（c）9支试管分别放入倒气管（开口向下），排气，盖上硅胶塞。

3、0.85%的生理盐水----用于样品稀释将广口瓶去皮，称取氯化钠1.91g加225ml蒸馏水，摇匀，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧；同样配制第二瓶。 4、准备2个空试管，盖上硅胶塞----用于样品稀释。 5、准备8个培养皿，用布包扎好。 6、准备至少3支5ml和1支10ml带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球）。 7、准备操作的工具：剪刀1把、镊子1个、勺子等打开产品包装所需工具，用布包扎好。二、使用灭菌锅灭菌 1、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。 2、将上面准备好的7步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口向下，有棉球的向上。 3、盖上火菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭），通电后，待排气阀放气3分钟后（锅内冷空气已经排完），关闭排气阀。 4、查看灭菌锅的压力表，当温度升到121°，压力升到0.1MP（兆帕）时，灭菌维持15分钟后（温度和压力不能过高或者过低），断电自然冷却到接近“ 0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。三、无菌操作进无菌室前的准备：放好工具（酒精灯，记号笔，消毒用75%酒精棉球，洗耳球，电子称），打开紫外线杀菌灯，杀菌30分钟后关闭，再等

油气回收检测方法

1 检测前的准备 1.1根据《检测委托书》中要求的检测时间提前1~2天通知受检单位，要求受检单位提前做好相关检测准备工作。 1.2检测人员到达检测现场后，应严格遵守加油站管理规定，使用隔离墩设置检测区域，防止无关人员、车辆进入检测现场。 1.3了解加油站油气回收系统的相关信息，包括加油站名称、系统配置、加油机台数、加油枪数量、油罐数量、油罐容积等，并填写在《原始记录》上。 1.4检测前要对测试设备状态进行检查确认，检查设备运行是否正常，设备运行正常才可进行检测。 1.5检测人员穿着防静电服，准备好防爆工具。设备连接时须使用防爆扳手，确保操作安全。 2 密闭性检测 2.1检测仪器和附件检测设备：智能测试仪（IW―HJZH－Ⅱ型）秒表

氮气和氮气瓶，储存氮气的高压氮气瓶应带有两级压力调节器。软管、地线、泄漏探测溶液 2.2.检测要求 2.2.1向系统充入氮气过程中应接地线。充入系统的氮气流量不应超过100 L/min。 2.2.2测试仪在使用前至少应有15 min的预热过程，且使用前要先对设备进行“0”点的校准。按《智能测试仪操作说明书》选择“设备自检”界面，打开设备的进气口和出气口，按“”键，对设备进行校准。设备每一次开关机，都需要做“0”点的校准。 2.2.3测试时油罐油气容积应满足：油罐为独立式油气回收系统的，埋地油罐的最小油气空间应为3800 L或占埋地油罐容积的25%，二者取较小值；气体空间连通式埋地油罐的最大合计油气空间不应超过95000 L。以上均不包括所有油气管线的容积。 2.2.4若油气回收管道上使用了单向阀或采用的真空辅助装置使气体在系统中不能反向导通而影响整个系统进行密闭性检测时，应设置一段带有切断阀的短接旁通管路。 2.2.5如果油气回收系统装有处理装置，检测时应关闭处理装置的电源及与处理装置相连通管道上的阀门。

油气回收检测方法

1检测前的准备1.1根据《检测委托书》中要求的检测时间提前1~2天通知受检单位，要求受检单位提前做好相关检测准备工作。 1.2检测人员到达检测现场后，应严格遵守加油站管理规定，使用隔离墩设置检测区域，防止无关人员、车辆进入检测现场。 1.3 了解加油站油气回收系统的相关信息，包括加油站名称、系统配置、加油机台数、加油枪数量、油罐数量、油罐容积等，并填写在《原始记录》上。 1.4检测前要对测试设备状态进行检查确认，检查设备运行是否正常，设备运行正常才可进行检测。 1.5检测人员穿着防静电服，准备好防爆工具。设备连接时须使用防爆扳手，确保操作安全。 2密闭性检测 2.1检测仪器和附件检测设备：智能测试仪（IW — HJZH 型）秒表氮气和氮气瓶，储存氮气的高压氮气瓶应带有两级压力调节器。软管、地线、泄漏探测溶液

22检测要求 2.2.1向系统充入氮气过程中应接地线。充入系统的氮气流量不应超过 100 L/min。 2.2.2测试仪在使用前至少应有15 min的预热过程，且使用前要先对设备进行0”点的校准。按《智能测试仪操作说明书》选择设备自检” 界面，打开设备的进气口和出气口，按“”键，对设备进行校准。设备每一次开关机，都需要做0”点的校准。 2.2.3测试时油罐油气容积应满足：油罐为独立式油气回收系统的，埋地油罐的最小油气空间应为3800 L或占埋地油罐容积的25%，二者取较小值；气体空间连通式埋地油罐的最大合计油气空间不应超过95000 L。以上均不包括所有油气管线的容积。 2.2.4若油气回收管道上使用了单向阀或采用的真空辅助装置使气体在系统中不能反向导通而影响整个系统进行密闭性检测时，应设置一段带有切断阀的短接旁通管路。 2.2.5如果油气回收系统装有处理装置，检测时应关闭处理装置的电源及与处理装置相连通管道上的阀门。 226在检测之前的24 h内不应进行气液比的检测。 227在检测之前3 h内或在检测过程中不应有卸油作业。

菌落总数检验操作规程

A.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤 A.1.1 成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g 氯化钠5.0 g 乳糖5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g 月桂基硫酸钠0.1 g 蒸馏水1 000 mL pH 6.8±0.2 制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH 。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL 。121 ℃高压灭菌15 min 。

菌落总数检验操作规程一、目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。二、适用范围适用于菌落总数的检验操作。三、职责 1.检验人员严格按检验操作规程进行检验。 2.QC主管监督检查执行情况。四、程序 1.范围本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定 2.术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 3. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 3.4天平：感量为0.1 g。 3.5均质器。 3.6振荡器。 3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 3.9无菌培养皿：直径90 mm。 3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 3.11放大镜或和菌落计数器。 4.培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。 4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2 4.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。 5.检验程序菌落总数的检验程序见图1。图1 菌落总数的检验程序 6.操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液 6.1.3用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支

加油站油气回收检测流程及检测记录表

油气回收检测流程（一）检测仪器自身密闭性检测 1、将针阀顺时针关闭，将快接球阀接到油气进气口，并打开球阀； 2、将硅胶软管接到出气口，并将堵头与硅胶软管另一端相连接； 3、将抽气筒放到快接球阀开口处，向外抽气，当压力表读数达到－ 1000Pa左右，快速关闭快接球阀； 4、等待大约3分钟气压值较稳定时，检查压力值，绝对值不减小即说明设备自身密闭性良好。（二）密闭性检测 1、加油站密闭性检测选择离油罐最远的加油机检测一次即可； 2、加油站暂时停止营业，将加油站油罐卸油口、回气口关闭； 3、通过氮气快速接头将针阀与氮气瓶连接； 4、将油气进气口与快接球阀连接，将油气出气口与硅胶软管连接；并将硅胶软管另一端与加油机下面预留的检测口连接（如果检测口下方有检测阀门，须将检测阀门打开）； 5、关闭油气进气口，打开针阀； 6、打开氮气瓶阀门，设置输出压力为35kPa（约0.357公斤压力）左右，轻微旋转针阀，调节氮气流量，控制流量表上显示的瞬时流量值在30～150L/min范围内；当压力表数值达到600Pa左右，关闭针阀，观测压力值是否降至某一值稳定，该稳定值不能小于100Pa；否则该加油站油气回收系统密闭性存在问题；（注意：充

压过程中压力值不能超过750Pa，否则油罐安全阀将开启） 7、如果步骤6中压力值能够最终稳定在某一数值，则再充压至约 550Pa时关闭针阀，调节快接球阀使压力降至500Pa；等压力值基本稳定后（一般会在某一压力值上下波动），开启秒表； 8、每隔1min记录1次压力示数，共记录5次；并将最后一次的压力示数值与标准规定值对照，如果低于限值，则表明油气回收系统密闭性不合格； 9、打开加油站油罐卸油口、回气口，安全规定释放油气回收系统压力； 10、密闭性检测完毕，检测通过可继续进行液阻检测，此时加油站可恢复营业。（三）液阻检测 1、保持上述连接状态，逆时针打开针阀，调节氮气流量，使流量表瞬时流量分别显示为18L/min左右、28L/min左右、38L/min左右，并分别记录三种流量时压力表示数，顺时针关闭针阀，将数值与标准对照，即可确定被检测加油机液阻检测是否合格； 2、拆除与加油机检测口连接处，然后与下一台被检测加油机检测口连接，打开针阀，重复步骤1进行该台加油机的液阻检测；依此类推，检测加油站内每台加油机； 3、所有加油机检测完毕后，关闭氮气罐阀门，拆除与针阀连接的氮气快速接头，拆除与油气进气口连接的快接球阀，拆除与加油机检测口的连接；

菌落总数的测定

实验九菌落总数的测定一、目的要求学习掌握菌落总数测定的基本原理和方法，了解食品上微生物的分布和繁殖动态。二、实验说明菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法去作。细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一君能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。三、实验材料（1）培养箱 36±1℃ （2）恒温水浴 46±1℃ （3）天平。（4）可调式电炉。（5）吸管 1.0ml、10.0ml,标有0.1ml单位刻度。（6）广口瓶 500ml，有盖。（7）玻璃珠直径5mm。

（8）平皿皿底直径9.0cm。（9）试管 18×200mm。（10）酒精灯。（11）试管架。（12）研钵。（13）灭菌刀和剪刀。（14）灭菌镊子。（15）酒精棉球。（16）玻璃蜡笔。（17）营养琼脂培养基。（18）灭菌生理盐水、分装于试管中，每管9.0ml。（19）食品检样。四、检验程序（图9-1）五、方法步骤（一）检验稀释和培养 1、以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液。 2、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，作成1：100的稀释液。 3、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，如此每递增

食品中菌落总数的测定实验

食品中菌落总数的测定实验一、实验目的：了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测三、试剂和材料 1.仪器恒温培养箱：（36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。）均质器或振荡器

无菌吸管：1 ml（0.01 ml 刻度）、10 ml（0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸头无菌锥形瓶：容量250 ml、500 ml、无菌培养皿：直径90 mm 菌落计数器 2.样品 1）平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基：蛋白胨 5.0 g 、酵母浸膏2.5 g 、葡萄糖1.0 g 、琼脂15.0 g、蒸馏水1 000 ml、pH 7.0±0.2。将所有成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。注：用平板计数琼脂，称取23.5 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121 ℃高压灭菌20min，冷却至45~47℃左右备用。 2）无菌生理盐水：氯化钠（NaCl）5.875g 蒸馏水(纯净水) 500ml 称取5.875ｇNaCl溶于500ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌20min。 3.器材 100ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、记号笔、酒精灯等。四、操作及实验步骤 1.样品的稀释：25 g(ml)样品+225 ml 稀释液，均质。 10倍系列稀释。每递增稀释一次，换用 1 次1 ml 无菌吸管或吸头。（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1 ml分别加入无菌培养皿内。吸取 1 ml 空白稀释液作空白对照。每皿中加入15 ml～20 ml 平板计数琼脂培养基，并转动平皿使其混合均匀。

菌落总数测定

菌落总数的测定基础知识：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每g（mL）检测样品所生长出来的细菌菌落总数。由于厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际其中的所有细菌总数，也不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数、需氧菌数等。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生长过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。中国国家标准是国内常用的检验方法。菌落总数测定的卫生学意义：食品本身的新鲜程度加工、贮存运输过程中是否受到污染卫生学指标：食品中菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全面的评价。细菌在平板计数琼脂上的菌落特征蔓延菌在平板计数琼脂上的菌落特征方法来源：

GB 4789.2-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 1、范围本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数的测定。 2、术语和定义菌落总数aerobic plate count 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 3、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 恒温培养箱：36℃±1℃。 3.2 冰箱：2℃~5℃。 3.3 恒温水浴箱：46℃±1℃。 3.4 天平：感量为0.1g。 3.5 无菌袋。 3.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。 3.7 无菌培养皿：直径90mm。 3.8 放大镜或/和菌落计数器。 4、培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基按照称取23.5g培养基溶于1000mL蒸馏水的比例进行配置，分装到锥形瓶，121℃高压灭菌15min。 4.2 0.85%无菌生理盐水称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水。一般用1000mL锥形瓶配置，称取6.8g的氯化钠，加入800mL蒸馏水，121℃高压灭菌15min。

食品中菌落总数的测定

【说明】蛋糕具有松软香甜，携带方便、食用简单等特点，因此成为人们居家生活特别是旅途中不可或缺的一种美食，深受人们的喜爱。测定蛋糕中的菌落总数可以用来判定其被微生物污染的程度及卫生质量，它反映蛋糕在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着蛋糕产品质量的优劣，因此，测定蛋糕中的菌落总数具有重要意义。目前应用于测定食品中菌落总数的方法有: 纸片法、电阻抗法等。本实验采用国标法(GB\T 对独立包装小蛋糕中菌落总数进行测定。并与GB 7099-2003糕点、面包卫生标准中规定的冷加工糕点中菌落总数≤10000（cfu/g）的数据对比初步判断样品是否符合卫生要求。一、实验目的 1、学习并掌握测定蛋糕中菌落总数的方法及原理。 2、通过对比实验验证冷藏对蛋糕的保鲜及抑菌作用。 3、了解菌落总数测定在食品卫生学评价中的意义。二、实验原理菌落总数即为食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法。细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。三、实验设备与材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36 ℃±1℃，30℃±1 ℃。冰箱：2 ℃～5 ℃。

加油站油气回收系统

加油站油气回收系统浅谈加油站油气回收系统鲁京湘张宇峰（中国石油北京销售公司100101北京市）摘要介绍了加油站油气回收系统改造、使用、检测、在线监控等环节应注意的主要问题及应对解决方法，为成品油销售系统响应国家环保部“十二五”全国推广加油站油气回收系统做好借鉴。关键词加油站油气回收系统问题引言为进一步改善大气质量，北京地区在奥运前率先组织了加油站等储运系统加装油气回收装置，2008年5月，改造工程全部完成，设备全面投入运行。在世博和亚运会之前，上海和广州也组织了加油站储运设施安装油气回收系统，集团公司将在“十二五”期间在全国有计划有重点推广加

装油气回收系统。本文阐述了加油站油气回收系统从改造、使用、检测、在线检测环节中需要注意的主要问题，为其他即将开展加装油气回收系统的单位提供借鉴。 1加油站油气回收系统基本情况 1.1加油站油气回收系统简介一次油气回收：汽油配送罐车卸油时，将产生的油气通过密闭方式收集到罐车内的系统（GB20953-2007。二次油气回收：给车辆油箱加注汽油时，将产生的油气通过密闭方式收集进入埋地油罐的系统（GB20953-200*。三次油气回收（即后处理装置）：针对加油油气回收系统部分排放的油气，通过采用吸附、吸收、冷凝、膜分离等方法对这部分排放的油气进行回收处理的装置（GB20953-2007。一次、二次、三次油气回收系统总称为：加油站油气回收系统。在线监控系统：实时监测加油油气回收过程中的气液比、油气回收系统的密闭性和管线液阻是否正常的系统，并能记录、储存、处理和传输监测数据。 1.2加油站油气回收系统主要设备简介 1.2.1 加油机油气回收型加油机基本构造与普通型加油机基本相同，主要区别是加油机内部加装了相关油气回收设备品牌二次回收泵及回气管路，更换了油气回收型加油枪、加油管。 1.2.2二次油气回收泵二次油气回收泵是二次油气回收系统的心脏，从形式上可分为分散式（安装在加油机内部）和集中式（靠近储油罐区独立安装）两种。分散式二次回收泵主要品牌型号包括OPW V HEAL丫德国ZVA三个品牌。集中式二次回气泵主要品牌型号包括富兰克林VP50Q HEALY Mini-jet9000 ，OPW-CVS-2 1.2.3三次油气回收尾气处理装置

国标-菌落总数测定

食品卫生微生物学检验菌落总数测定1主题内容与适用范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数的测定。 2术语菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 3引用标准 GB 4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 4设备和材料 4.1温箱：36±1℃。 4.2冰箱：0～4℃。 4.3恒温水浴：46±1℃。 4.4天平。 4.5电炉 4.6吸管。 4.7xx瓶或三角瓶：容量为500mL。 4.8玻璃珠：

直径约5mm。 4.9平皿：直径为90mm。 4.10试管。 4.11放大镜。 4.12菌落计数器。 4.13酒精灯。 4.14均质器或乳钵。 4.15试管架。 4.16灭菌刀或剪子。 4.17灭菌镊子。 5培养基和试剂 5.1营养xx培养基：按GB 4789.28xx4.7规定。 5.2磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28xx3.22规定。 5.3生理盐水。 5.475%乙醇。 6检验程序菌落总数的检验程序如下。（图略）

7操作步骤 7.1检样稀释及培养 7.1.1以无菌操作，将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～100r/min的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。 7.1.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。 7.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。 7.1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。 7.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于 46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照 7.1.6待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。 7.2菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 7.3菌落计数的报告 7.3.1平板菌落数的选择

微生物检测菌落总数测定方法(精)

微生物学检验菌落总数的测定 1 原理微生物活体数量的测定方法，常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液，再取一定的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内，最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克（或mL ）样品中的活菌数量。 2 材料和仪器 2.1 平皿：φ90mm 。 2.2 无菌锥形瓶：容量250mL ，500 mL 。 2.3 无菌吸管：1mL （具0.01mL 个度）,10mL （具0.1mL 刻度）或微量移液器及吸头。 2.4 灭菌锅。 2.5 恒温培养箱 2.6 涂棒。 2.7 酒精灯。 2.8 超净工作台。 2.9 磁力搅拌器。 2.10 漩涡振荡器 3 检验程序菌落总数的检验程序见下图。方法①↙ ↘方法② ↘ ↙

4 操作步骤 4.1 培养基和试剂的配制 4.1.1 平板计数琼脂培养基：LB培养基（最常用）牛肉膏5g 蛋白胨10g 氯化钠5g 琼脂20g 蒸馏水1L pH 7.0～7.2 将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH值，分装锥形瓶中，121℃高压灭菌30分钟。 4.1.2 无菌生理盐水的配制：称取8.5g氯化钠溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌30分钟。 4.2 样品的稀释： 4.2.1 固体样品：称取10g固体样品置于盛有90mL无菌生理盐水的无菌锥形瓶中（内装数粒无菌玻璃珠），在旋转式摇床上200r/min充分振荡30min，制成1：10的样品均液，即10-1稀释液。 4.2.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品均液1mL（吸取前需要摇匀1：10稀释液），缓慢加入盛有9mL无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不能触及稀释液面），用漩涡振荡器振荡，混合均匀，制成1：100的样品稀释均液。 4.2.3按照4.2.2操作程序，制备10倍系列样品稀释液，每递增稀释一次，换用一次1mL 无菌吸管或吸头。 4.2.4 根据对样品活菌数量的估计，选择3~4个适宜稀释度的样品均液（比如10-6，10-7，10-8，10-9稀释液）。 4.2 平板接种与培养接种方法1：用1mL无菌吸管或微量移液器分别吸取不同稀释度的菌悬液1mL于一个无菌培养皿中（每个稀释度做三个重复），再在培养皿中分别倒入10～15mL已融化并冷却至45~50℃的培养基，盖好平皿盖子，趁热轻轻转动培养皿，使菌液与培养基充分混合均匀，冷凝后在恒温培养箱中倒置培养24～２８ｈ，培养温度为36℃±1℃。同时以无菌水作空白对照。注：比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为：10-8，10-9，10-10。接种方法2：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取0.2ｍＬ稀释液均液于计数培养基平板上，将稀释液涂布均匀，吸附，在恒温培养箱中倒置培养24～２８ｈ，培养温度为36℃±1℃。同时以无菌水作空白对照。（计算时需要把0.2mL的倍数也计算在稀释倍数内）注：比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为：10-7，10-8，10-9。４.3 菌落计数可用肉眼观察，必要时借用放大镜或菌落计数器，以防遗漏。记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units,CFU）表示 4.3.1 选取菌落数在30~300之间，无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用3个平行平板的平均数。

食品中菌落总数的测定

蛋糕中菌落总数的测定【说明】蛋糕具有松软香甜，携带方便、食用简单等特点，因此成为人们居家生活特别是旅途中不可或缺的一种美食，深受人们的喜爱。测定蛋糕中的菌落总数可以用来判定其被微生物污染的程度及卫生质量，它反映蛋糕在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着蛋糕产品质量的优劣，因此，测定蛋糕中的菌落总数具有重要意义。目前应用于测定食品中菌落总数的方法有: 纸片法、电阻抗法等。本实验采用国标法(GB\T 4789.2-2010)对独立包装小蛋糕中菌落总数进行测定。并与GB 7099-2003糕点、面包卫生标准中规定的冷加工糕点中菌落总数≤10000（cfu/g）的数据对比初步判断样品是否符合卫生要求。一、实验目的 1、学习并掌握测定蛋糕中菌落总数的方法及原理。 2、通过对比实验验证冷藏对蛋糕的保鲜及抑菌作用。 3、了解菌落总数测定在食品卫生学评价中的意义。二、实验原理菌落总数即为食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法。细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。三、实验设备与材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 恒温培养箱：36 ℃±1℃，30℃±1 ℃。 3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 3.4 天平：感量为0.1 g。 3.5 均质器。 3.6 振荡器。 3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 3.9 无菌培养皿：直径90 mm。 3.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 3.11 放大镜或/和菌落计数器。 3.12范记原味蛋糕，烘烤类糕点（冷加工），执行标准（GB/T 20977）

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