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哺乳动物细胞全蛋白提取试剂盒说明书

哺乳动物细胞全蛋白提取试剂盒说明书
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INSTRUCTIONS

M-PER ?

Mammalian Protein Extraction Reagent

Number Description

78503 M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent , 25mL, sufficient reagent to extract protein from ~2.5g of cells

78501 M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent , 250mL, sufficient reagent to extract protein from ~25g of cells

78505

M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent , 1L, sufficient reagent to extract protein from ~100g of cells

Storage: Upon receipt store product at room temperature.

Introduction

The Thermo Scientific M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent extracts cytoplasmic and nuclear protein from cultured mammalian cells using a proprietary detergent in 25mM bicine buffer (pH 7.6). The simple composition of this reagent is compatible with many different applications, such as reporter assays (e.g., luciferase, β-galactosidase,

chloramphenicol acetyltransferase), protein assays (e.g., PKA, PKC, tyrosine kinase), immunoassays (e.g., Western blot, ELISA, RIA) and protein purification. M-PER Reagent enables rapid, mild and efficient lysis. The reagent is dialyzable and the cell lysate is compatible with protein assays such as the Thermo Scientific Coomassie Plus (Bradford) Assay and the Pierce BCA Protein Assay.

Important Product Information

?

Adherent Cells vs. Cell Pellets: M-PER Reagent effectively lyses both plated cells and cells pelleted from suspension cultures or scraped cells. For direct, in-plate lysis of adherent cells, protein extraction efficiency using M-PER Reagent is similar to freeze/thaw methods. For lysis of pelleted cells, either from cell suspension or scraped adherent cells, protein extraction efficiency is typically 25% higher than that achieved with freeze-thaw (three cycles) and 20% higher than sonication (2 minutes with 50% pulse) methods.

?

Cell Lines: M-PER Reagent has been tested on cell lines representing several different cell types. Complete lysis of adherent cells is observed with, but is not limited to, the following cell lines: COS-7, NIH3T3, Hepa 1-6, 293, CHO, MDA, MB 231 and FM2 cells. For protein extraction from tissues, greater efficiency may be achieved using Thermo Scientific T-PER Tissue Protein Extraction Reagent (Product No. 78510).

?

Additives: Protease inhibitors, such as Thermo Scientific Halt Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free (Product No. 87785) may be added to the reagent. For immunoassays, such as ELISA or RIA, extracts prepared in M-PER Reagent alone generate satisfactory results; however, adding 150mM NaCl to the cell lysate often improves results.

?

Volume for Cell Lysis: Volumes indicated in Table 1 are optimal for maximum cell lysis without scraping cells. If more concentrated extracts are preferred, use a smaller volume; however, scraping the cells is necessary for maximal recovery. If cell volume is unknown, it may be estimated. For example, 2 × 106 of HeLa cells equals ~10μL of a packed cell volume, which is equivalent to 20 mg of cells and requires 200 μl of M-PER Reagent.

? Compatibility with Protein Assays: M-PER Reagent is compatible with Coomassie Plus (Bradford) Assay (Protein No. 23236) and the Pierce ? BCA Protein Assay Kit (Product No 23225).

Procedure for Lysis of Monolayer-cultured Mammalian Cells

Note: M-PER Reagent does not contain protease inhibitors. If desired, add Halt? Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free (Product No. 87785) to the reagent.

1.Carefully remove (decant) culture medium from adherent cells.

Note: If the culture medium contained phenol red or other reagents that could interfere with subsequent protein analysis,

wash cells once in wash buffer (e.g., PBS).

2.Add the appropriate amount of M-PER Reagent to the plate or to each plate well (see Table 1). Shake gently for

5 minutes.

Table 1. Suggested volume of Thermo Scientific M-PER Reagent to use for different sizes of

standard culture plates.

Plate Size/Surface Area M-PER Reagent Volume

100mm* 500-1,000μL

60mm 250-500μL 6-well plate 200-400μL per well

24-well plate 100-200μL per well

96-well plate 50-100μL per well

*Cells grown in 100mm plates typically contain 10 cells (50mg) and yield ~3mg total protein depending on

cell type.

3.Collect the lysate and transfer to a microcentrifuge tube. Centrifuge samples at ~14,000 ×g for 5-10 minutes to pellet the

cell debris.

4.Transfer the supernatant to a new tube for analysis.

Procedure for Lysis of Suspension-cultured Mammalian Cells

1.Pellet the suspension of cells by centrifugation at 2,500 ×g for 10 minutes. Discard the supernatant.

2.Optional Wash: If the culture medium contained phenol red or other reagents that could interfere with subsequent protein

analysis, wash the cells once by resuspending the cell pellet in wash buffer (e.g., PBS). Pellet cells by centrifugation at

2,500 ×g for 10 minutes.

3.Add M-PER Reagent to the cell pellet. Use at least 1mL of M-PER Reagent for each 100 mg (~100μL) of wet cell pellet.

If a large amount of cells is used, first add 1/10 the final recommended volume of M-PER Reagent to the cell pellet.

Pipette the mixture up and down to resuspend pellet. Add the rest of the M-PER Reagent to the cell suspension.

Note: Total protein yield for 100mg of wet cell pellet is approximately 6 mg depending on cell type.

4.Shake mixture gently for 10 minutes. Remove cell debris by centrifugation at ~14,000 ×g for 15 minutes.

5.Transfer the supernatant to a new tube for analysis.

Troubleshooting

Problem Possible

Cause Solution

Protein expression was low Optimize the transfection procedure

Insufficient amount of M-PER Reagent was used Add more M-PER Reagent

Low protein yield

M-PER Reagent was unable to penetrate the cell membrane Increase incubation time and shake more vigorously during incubation

Unable to retrieve membrane protein M-PER Reagent extracts only nuclear and

cytoplasmic proteins

Use Thermo Scientific Mem-PER Membrane

Protein Extraction Reagent (Product No.

89826)

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23236 Coomassie Plus (Bradford) Assay

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26148 Pierce Direct IP Kit

34080 SuperSignal? West Pico Chemiluminescent Substrate, 500mL, Western blot substrate for HRP 34076 SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate, 200mL, Western blot substrate for HRP Product References

Campa, M.J., et al. (2003). Protein expression profiling identifies macrophage migration inhibitory factor and cyclophilin A as potential molecular targets in non-small cell lung cancer. Cancer Res63:1652-6.

Deng, W., et al. (2003). LPA protects intestinal epithelial cells from apoptosis by inhibiting the mitochondrial pathway. Amer J Physiol-Gastrointest L 284:821-9.

Phiel, C.J., et al. (2001). Differential binding of an SRF/NK-2/MEF2 transcription factor complex in normal versus neoplastic smooth muscle tissues. Biol Chem.276(37):34637-50.

Waite, K.A. and Eng, C. (2003). BMP2 exposure results in decreased PTEN protein degradation and increased PTEN levels. Hum Mol Genet12(6):679-84. B-PER? Technology is protected by U.S. Patent # 6,174,704.

SuperSignal? Technology is protected by U.S. Patent #6,432,662.

This product (“Product”) is warranted to operate or perform substantially in conformance with published Product specifications in effect at the time of sale, as set forth in the Product documentation, specifications and/or accompanying package inserts (“Documentation”) and to be free from defects in material and workmanship. Unless otherwise expressly authorized in writing, Products are supplied for research use only. No claim of suitability for use in applications regulated by FDA is made. The warranty provided herein is valid only when used by properly trained individuals. Unless otherwise stated in the Documentation, this warranty is limited to one year from date of shipment when the Product is subjected to normal, proper and intended usage. This warranty does not extend to anyone other than the original purchaser of the Product (“Buyer”).

No other warranties, express or implied, are granted, including without limitation, implied warranties of merchantability, fitness for any particular purpose, or non infringement. Buyer’s exclusive remedy for non-conforming Products during the warranty period is limited to replacement of or refund for the non-conforming Product(s).

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? 2010 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Unless otherwise indicated, all trademarks are property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. Printed in the USA.

高纯度质粒小量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.doczj.com/doc/7317641604.html, HighPure Plasmid Mini Kit 高纯质粒小量快速提取试剂盒 目录号:PL03 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存 50次 (PL0301) 100次 (PL0302) 200次 (PL0303) 平衡液室温5ml 10ml 20ml RNaseA(10mg/ml)-20℃150μl 250μl 500μl 溶液P1 4℃15 ml 25 ml 50 ml 溶液P2 室温15 ml 25 ml 50 ml 溶液P3 室温20 ml 35 ml 70 ml 去蛋白液PE 室温16ml 31.5 ml 63 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml 20ml 吸附柱AC 室温50个100个200个 收集管(2ml)室温50个100个200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时,将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml) 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA 残留,在溶液P1中补加RNase A即可。 2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分 钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍:

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点: 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附 量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.独有的去蛋白液配方,可以高效去除残留的核酸酶,即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机, 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒,建议 接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基,过夜培养14-16个小时,可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应适当加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按比例增加P1、P2、P3的用量,其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。 4. 质粒DNA确切分子大小,必须酶切线性化后,对比DNA分子量Marker才可以知 道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道其确切大小。 5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗 脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-

PH0311 细菌细胞总蛋白提取试剂盒操作手册

PH0311|细菌细胞总蛋白提取试剂盒 (Bacterial Cell Protein Extraction Kit) Catalog No:PH0311Size:?50T Storage:Store@4℃ ◆产品简介 1、总论:经典的细胞蛋白质分离流程由下述主要步骤组成:清洗组织或细胞;裂解细胞;离心去沉淀获得可溶性蛋白质粗提物(可依据目标蛋白质的理化特性特别的调配裂解缓冲液);通过有机溶剂或盐析等沉淀离心、层析、电泳等方法进一步纯化,得到目的产物蛋白。 2、本试剂使用温和的非离子型去污剂,适用于大肠杆菌表达的重组蛋白的蛋白提取。本产品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。所提取的蛋白保持了生物学活性,可进行IP,Western Blot,蛋白纯化等下游操作。 ◆产品存储 Store at4℃(本试剂在室温干燥条件下,可保存6个月。溶菌酶贮存液、100×蛋白酶抑制剂和50%甘油2-8℃保存) ◆试剂组成 试剂盒组成PH0311-50 细菌细胞蛋白裂解液50ml 细菌细胞漂洗液120ml 溶菌酶贮存液3ml 100×蛋白酶抑制剂0.6ml 50%甘油10ml 说明书1份 ◆使用说明 1、离心收集细菌细胞,按照每克湿菌取用5-6ml细菌细胞漂洗液的比例,于20℃~37℃将细胞悬浮起来后,4℃,12000g,1-2min离心除去细菌细胞漂洗液,漂洗2次。(离心只是收集细胞,转速、时间可自行调整。) *如果细菌细胞漂洗液不够,也可以用TE buffer(H=7.4--7.6)代替。 2、离心除去细菌细胞漂洗液后,按每克湿菌细胞,加入5ml细菌细胞蛋白裂解液,250ul溶菌酶贮存液和50ul100×蛋白酶抑制剂,混悬细菌细胞样品。

Annexin V-FITC PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 一、试剂盒说明 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS )只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS )由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素FITC 标记,以标记了的Annexin V 作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI )是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。 二、试剂盒组份 组份 (20 assays) (50 assays) (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC 100 μL 250μL 500 μL Propidium Iodide 100 μL 250μL 500 μL Binding Buffer 10.0 mL 25 mL 50 mL 注:1、Annexin V-FITC 组份建议按需分装小份冻存于-20 ℃,避免反复冻融; 2、Propidium Iodide 和Binding Buffer 组份不用时可放置于4℃保存,Propidium Iodide 需要避光。 3、Store at -20℃ for 12 months 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube 、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS 、不含EDTA 的胰酶消化液 四、使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-FITC ,Propidium Iodide (PI )避光保存及使用。对于Annexin V-FITC 这个组份,建议您在收到产品之后,分装为小份避光保存于-20℃,即用即取。 3. Propidium Iodide (PI )有毒,操作时要戴手套。 4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,不推荐用于检测组织样本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而 用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每 次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。 五、 操作方法 1. 悬浮细胞离心(2000rpm 离心5min )收集;贴壁细胞用不含EDTA 的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不 易过长,否则容易引起假阳性); -20℃避光 4℃避光 4℃

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书 货号:T2190 规格:20次 保存:-20oC保存,荧光标记液需避光保存。 产品简介: 细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP),从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织,只要经过一步染色反应,洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开,另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。极少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标。产品内容: 1.TdT酶100μl 2.荧光标记液900μl 3.TdT酶稀释液(选用)500μl

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆 樊克生物专业供应: 使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)含量。 试验原理: 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合 的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品:80ng/ml 1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型 标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型 洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀 释 底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型 自备材料 1.蒸馏水。 2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3.振荡器及磁力搅拌器等。 安全性

质粒提取试剂盒-说明书-翻译

精品文档 。 1欢迎下载 E.Z.N.A.? 质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文) (适用于No. D6942, D6943 & D6944) 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培 养基进行培养。37℃强力摇动(~300rpm )孵育12-16h 。使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉 淀对于获得高质量的DNA 非常重要。 4. 加入250μl 溶液II ,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。 可能需要孵育2min 。不要用力混合,以免使染色体DNA 断裂,减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min 。溶液II 不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl 溶液III ,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。为避免 形成局部沉淀,加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼.... 的吸取上清液,加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g 离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入500μl HB 缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清 洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。 注意:DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释(5倍稀释),如果DNA 清洗液稀 释液经过冷藏,则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤:重复清洗,加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ,使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作,不可 遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。将30-50μl (取决于终产物的期望浓度) 洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上,使之于室温下静置1-2min 。≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。可以进行二次洗脱,以收集残存的DNA 。 13. DNA 的产量和质量:分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA 的浓度计算如下: DNA 浓度=A 260×50×(稀释倍数)μg/ml A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者,DNA 的产量(及质量)有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式,但也可能存在串联体形式。 张小强 翻译

酵母蛋白快速提取试剂盒使用说明

酵?母蛋?白质快速微量提取试剂盒 Yeast Protein Miniprep Kit 常温运输、4℃保存(溶液B成分二需-20℃保存),有效一年。 自备酵母培养基 产品及特点 本产品用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法,适合于各种形态的 各种酵母材料。本产品的其主要特点是: 1.破壁效率高,能达到80-90%。 2.可以处理各种酵母样品。 3.操作简单,得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分 析。 规格及成分成份 50次包装 溶液A 100 mL 溶液B成分一 50 mL 溶液B成分二 1.5 g 玻璃珠,400μL 5 g 使用方法准备工作:将溶液B成分二(干粉)全部加到50mL溶液B成分一中,充分摇晃使之全部溶解,成为溶液B,然后分装成小分(体积根据每次实验的样 品数决定)并放-20℃长期保存。

1、 将酵母细胞接种到5mL YPD 培养基中,30℃摇晃(250rpm/分钟)过 夜培养使其OD600达到0.5~2.0。 2、 把酵母细胞培养物转到装有2mL 预冷溶液A 的10-15 mL 离心管中, 混匀。 3、 4℃ 5000g 离心5分钟沉淀酵母细胞,吸出上清液。 4、 用30μL 溶液B 悬浮酵母细胞,并快速转移到1.5mL 塑料离心管中。 5、 100℃下保温3分钟,使蛋白酶失活,样品存放于-20℃。 6、 加入0.1g 的玻璃珠。 7、 在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。 8、 加入70 μl 溶液B,稍加振荡,置100℃保温1分钟。 9、 取5-20μl 抽提液上样直接进行SDS-PAGE 凝胶电泳。 关联推荐 4X 蛋白上样缓冲液 BCA 蛋白检测试剂盒 蛋白marker ECL 发光检测液

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)(BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本) 使用说明书 一、TUNEL制品说明 凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况,其原理是生物素(biotin)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘-OH末端,并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH 形成,很少能够被染色。 本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。 本试剂盒特点 ●操作简便:使用Ready-to-Use型试剂,并配有Proteinase K 和DAB。 ●高灵敏度:可以单一检出初期的凋亡细胞。 ●高特异性:能特异性染色凋亡细胞。 ●快速操作:整体操作约需3小时。 ●用途广泛:可应用于组织切片、细胞样本等。 ●方便观察:使用光学显微镜观察实验结果。 ●高正确性:有阳性对照片的制备方法,可以确认试剂盒的有效性

使用注意事项 1.使用前请认真阅读本说明书,提前准备好相关试剂。 2.因本试剂盒中组分均为微量,使用前请离心集液。 3.为避免试验误差、降低试剂的损耗,建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。 4. TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制,再分别滴加于各样本片上,避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。 5. 为防止样本脱落,请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 6. 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜,以改善细胞的渗透性。 7. 使用PBS清洗细胞样本时,不要直接加在细胞样本上,以防止细胞样本的脱落。 8. 进行PBS清洗时,以5分钟清洗3次为标准。 9. DAB为固体粉末,使用前加入PBS配制成20×DAB(10 mg/ml)后,按说明书显色使用。 二、TUNEL试剂盒组分 试剂盒以外自备仪器和试剂

TPPA试剂盒说明书

T P P A试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

梅毒TPPA试书剂盒说明书 1、试验原理: 梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应。其原理如下:将梅毒 (Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体(TP)抗体进行反应发生凝集,产生粒子凝集反应(TP)抗体,并且可用来测定抗体效价。 2、样本收集和贮存: 血清或血浆1ml,标本应无溶血,无脂血,无微生物污染。不满足上述要求的标本拒收,标本的采集应使用清洁,无菌的一次性的干燥管。 标本用量最少50ul,七天内检测的标本应在2-8℃保存,贮存在-20℃可保存4W,同时避免反复冻融血清。 3、安全防范: 3.1此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原,丙型肝炎抗体,HIV抗体均为阴性;但仍认为它们具有潜在的感染性。 3.2移液过程禁止用口。 3.3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟,饮食。 3.4使用试剂盒和标本时,必须戴一次性手套,穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3.5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 3.6试剂的溶解液,血清稀释液和阳性对照血清含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积. 4、试剂: 4.1 储存与稳定性: 试剂应在2-10℃保存。 冻干试剂必须在复溶后的当天使用,如果保存在2-10℃最多可使用7天。 4.2 试剂盒组成:(由富士瑞士欧公司出产) (1)溶解液(液体) 8mL×1瓶 用于调制致敏粒子和未致敏粒子。 (2)血清稀释液 29mL×1瓶 用于样品的稀释。 (3)致敏粒子(冷冻干燥)

大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号:DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围: 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,如果不 能完全溶解,也不影响使用效果,直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍: 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点: 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定,产量高(典型的产量10ml全血可提取出150-500μg),OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9,长度可达50kb-150kb,可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2,500 x g,并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70%乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA(不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异也可能非常大)。 4.本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 (20μl-10ml),请联系我们索取其它处理量的操作手册。

小鼠cfos试剂盒使用方法

小鼠c-fos试剂盒使用方法 检测范围:96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的: 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中c-fos含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠c-fos水平。用纯化的小鼠c-fos抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入c-fos,再与HRP标记的c-fos抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的c-fos呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠c-fos 浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶 2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(960pg/ml)0.5ml×1瓶 3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份 5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张 6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 480pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 240pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 120pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 60pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 30pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。

高纯度质粒小提试剂盒使用说明书

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit (目录号:HS0103) 产品包装 试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml) 150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml) 50个 (注意:使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀,2 ~ 8℃保存) 保存条件 本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。 产品简介 本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱硅胶膜(Spin Columns PA )吸附。通过去蛋白液(Buffer PD )和漂洗液(Buffer PW )的清洗可去除蛋白及其他杂质,在低盐、高pH 条件下洗脱,最后得到高纯度的质粒DNA 。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.

使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA,可在30 min之内完成提取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 产品特点 1. 快速:步骤少,操作简便,节约时间。 2. 简便:离心吸附柱不需要预平衡,漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇,即开即用。 3. 纯度高:所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 操作步骤 1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液,室温12,000 rpm离心1 min,尽量将上清去除干净。 (注意:根据菌液的浓度决定取液量,浓度高时取1 ml菌液离心即可,浓度低时可多收集一次) 2. 加入250 ul Buffer P1,用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。 (注意:是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀;菌体沉淀是否悬浮充分,如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解,导致提取的质粒浓度及纯度降低) 3. 加入250 ul Buffer P2,温和颠倒混匀6 ~ 8次,直到溶液变得清亮粘稠。 (注意:不可剧烈震荡,以免造成基因组DNA片段的污染,所用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏,如未完全变得清亮,可能是菌体太多,可增加Buffer P2的用量,在后续的操作中Buffer P3的用量也要相应增加) 4. 加入350 ul Buffer P3,立即温和颠倒混匀6 ~ 8次,可见白色沉淀物产生,室温静置2 min,然后12,000 rpm离心3 ~ 5 min。 (注意:Buffer P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀,如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清) 5. 小心将上清液转移到离心吸附柱Spin Columns PA中,静置2 min,让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min,弃收集管中的废液。 6. 向吸附柱中加入500 ul去蛋白液,12,000 rpm离心1 min,弃收集管中废液。 (注意:如果宿主菌是endA-,如DH5α若TOP10,此步骤可省略。如果宿主菌是endA+,如TG1、BL21、HB101、JM101等,此步骤不可省略,因这些宿主菌含有大量的核酸酶,易降解质粒。如果提取低拷贝质粒

蛋白组分抽提试剂盒说明书

Overview ?Description ?References ?Product Information ?Applications ?Biological Information ?Safety Information ?Product Usage Statements ?Storage and Shipping Information ?Supplemental Information ?Prix & Disponibilité Prix & Disponibilité Référence DisponibilitéConditionnement QtéPrix Quantité 539790-1KIT En stock Contacter le Service Clients 1 kit à la validation de la commandePlus d'informations —Ajouter aux favoris Ajouter au panier Description

Overview Fast and reproducible extraction of subcellular proteomes from mammalian cells ProteoExtract? Subcellular Proteome Extraction Kit (S-PEK) is designed for fast and reproducible extraction of subcellular proteomes from adherent and suspension-grown mammalian cells. The S-PEK takes advantage of the different solubilities of certain subce compartments in the four selected reagents. In the case of adherent cells, the procedure is performed directly in the tissue culture dish without the need for cell removal. Cells or the parts of the cells remain attached to the plate during sequential extraction of subcellular compartments, until the appropriate extraction reagent is used. Thus, the early destruction the cellular structure by enzymatic or mechanical detachment of cells from the tissue cultu plate and any mixing of different subcellular compartments is prevented. For suspension-grown cells, extraction starts with gentle sedimentation and washing of the cel The stepwise extraction delivers four distinct protein fractions from one sample: ?Cytosolic fraction (F1) ?Membrane/organelle protein fraction (F2) ?Nucleic protein fraction (F3) ?Cytoskeletal fraction (F4) Proteins are obtained in the native state making the S-PEK suitable for many downstream applications such as 1D and 2D gel electrophoresis, immunoblotting, enzyme activity assa and protein microarrays. Sample size: 3-5x106or 25-50 mg tissue. Catalogue Number 539790 Brand Family Calbiochem? Synonyms S-PEK Kit Features and benefits ?Stepwise extraction resulting in four distinct subcellular proteomes from one sample ?Highly reproducible ?No ultracentrifugation steps ?Fast—needs just 2 hours with 45 minutes hands-on time ?Produces proteins suitable for functional studies

碧云天 细胞凋亡-一步法TUNEL检测试剂盒

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒 产品简介: 碧云天生产的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织,只要经过一步染色反应,洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP),从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。 注:FITC是fluorescein isothiocyanate的缩写,实际上大多数情况下所谓的FITC即为fluorescein。 本试剂盒有如下优点。(1) 高灵敏度:可以在单细胞水平检测到细胞凋亡,同时由于凋亡早期就有DNA断裂,可以检测到早期的细胞凋亡。(2) 特异性:TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞,而不容易标记坏死细胞。(3) 快速:仅需约1-2个小时即可完成。(4) 方便:只需一步染色反应,洗涤后即可观察,不必使用二抗等进行多步操作。(5) 应用范围广:可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开,另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。 极少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标。 本试剂盒足够检测20个样品。 保存条件: -20℃保存,荧光标记液需避光保存。 注意事项: 需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS,用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126),用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098),同时需自备含0.1% Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106)。 如果用于石蜡切片的检测,需自备蛋白酶K,二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明: 1.对于贴壁细胞或细胞涂片: a.PBS或HBSS洗涤一次。 b.如果细胞贴得不牢,可以干燥样品使细胞贴得更牢。 c.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。 d.用PBS或HBSS洗涤一次。 e.加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106),冰浴孵育2分钟。 f.转步骤5。 2.对于悬浮细胞或细胞悬液: a.收集细胞(不超过200万细胞),PBS或HBSS洗涤一次。 b.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成团,宜在侧摆摇床或 水平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。 c.用PBS或HBSS洗涤一次。

质粒提取试剂盒 说明书 翻译

E.Z.N.A.?质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文) (适用于No. D6942, D6943 & D6944) 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml的LB培养基进行培养。37℃强力摇动(~300rpm)孵育12-16h。使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml细菌室温10,000 x g离心1min。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。 4. 加入250μl溶液II,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。可能需要孵育2min。不要用力混合,以免使染色体DNA断裂,减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min。溶液II不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl溶液III,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。为避免形成局部沉淀,加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g离心10分钟。白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼 ....的吸取上清液,加入装配在2ml收集管中的小量纯化柱I中。确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液,重新使用2ml收集管;加入500μl HB缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g离心1分钟,使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液,重新使用2ml收集管;加入700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液清洗柱子,室温10,000 x g离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。 注意:DNA清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释(5倍稀释),如果DNA清洗液稀释液经过冷藏,则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤:重复清洗,加入另外的700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g离心2min,使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作,不可遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml微量离心管中。将30-50μl(取决于终产物的期望浓度)洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上,使之于室温下静置1-2min。≥13,000 x g离心1min洗脱DNA。可以进行二次洗脱,以收集残存的DNA。 13. DNA的产量和质量:分别在波长260nm和280nm处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA的浓度计算如下: DNA浓度=A260×50×(稀释倍数)μg/ml A260/A280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者,DNA的产量(及质量)有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA是超螺旋单体形式,但也可能存在串联体形式。 张小强翻译

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