枸杞多糖枸杞多糖属于糖缀合物,为多聚糖与多肽或蛋白质形成的结合物,是枸杞子中的主要活性组分。
Luo等[1]通过去脂、DEAE纤维素柱洗脱以及冷冻干燥等方法分离到一枸杞多糖组分,经过GC-MS分析表明其单糖组成为鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖和木糖,摩尔比为 4.22∶2.43∶1.38∶1.00∶0.95∶0.38,另外还含17种氨基酸,总氨基酸含量为8.46%。Duan等[2]分离得到4个均一枸杞多糖,其分子量在82～115kDa之间,其中2个多糖组分为1,6-连接的葡聚糖,另2个具有1,4-连接的多聚半乳糖醛酸主链以及微量的半乳糖和阿拉伯糖分支。
1.2类胡萝卜素枸杞子中的另一大类活性物质为类胡萝卜素。
Y ang等[3]通过固相萃取富集和预分离HPLC测定,表明枸杞子含总玉米黄素达1000 g/g以上,其含量超过黄玉米40倍,主要为玉米黄素二棕榈酸酯; -胡萝卜素的总含量也达150 g/g以上。枸杞子中还含叶黄素、 -隐黄素、堇菜黄素、玉米黄呋喃素、花药黄素等类胡萝卜素。
1.3其他成分枸杞子的保健作用与其他营养成分也有关系。枸杞子中还含核黄素、维生素C、维生素B1、尼克酸、牛磺酸、17种氨基酸以及铜、铁、锌、锰、镁、硒、钙等多种微量元素[1]。
Xie等[4]从枸杞子中分离到莨菪亭、 -谷甾醇、香豆酸、胡萝卜苷和甜菜碱等成分。
Toyode-Ono等[5]从枸杞子中首次分离到2-O-( -D-吡喃葡萄糖基)抗坏血酸,系维生素C 的前体化合物,在枸杞子中含量达0.5%,与新鲜柠檬中维生素C的含量相当。
2生物活性
2.1抗氧化抗氧化活性是枸杞子的研究热点,也与其多种生物活性密切相关。现已证明机体进行有氧代谢过程中不断产生活性氧种(ROS),造成核酸破坏,脂质过氧化和蛋白质氧化以及细胞损伤等不良后果。补充天然抗氧化剂有助于减少和消除ROS造成的氧化损伤,目前筛选天然抗氧化剂的研究十分活跃。在体外,Ni等[6]采用电子顺磁共振技术证实枸杞多糖清除羟自由基作用非常显著;Wang等[7]也发现枸杞多糖对Fe2+-H2O2产生的羟自由基具有强烈的清除作用,并呈明显的剂量相关。
Luo等[1]通过Trolox等价抗氧化能力(TEAC)及氧自由基吸收能力(ORAC)等实验来检测枸杞子提取物清除ROS的活性,发现枸杞子的甲醇-水粗提物的总抗氧化能力高于精制枸杞多糖,推测与粗提物中富含类胡萝卜素、核黄素、维生素C、维生素B1以及尼克酸等多种天然抗氧化剂有关。
Li等[8]证实枸杞子水提物在体内能显著升高急性缺氧小鼠心、肝、肺等器官组织中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性以及总抗氧化能力,提示枸杞子对小鼠由急性缺氧而造成的自由基损伤有保护作用。
2.2抗衰老民间视枸杞子为延缓衰老的滋补品,在许多著名养生方剂中都有使用。
Wang等[7]发现枸杞子提取物能显著延长雄性和雌性果蝇的最大寿命,且能延长雄性果蝇的平均寿命;在由半乳糖诱导的衰老小鼠模型中,20mg/(kg?d)的枸杞子提取物能显著提高血清和肝脏中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的水平,同时降低脂褐素和丙二醛的水平。
Deng等[9]给半乳糖诱导的衰老小鼠喂饲枸杞多糖后,发现其血清中晚期糖化终产物(advancedglycationendproducts,AGEs)以及皮肤中羟脯氨酸浓度显著下降,同时淋巴细胞增殖速度、IL-2活性、学习和记忆能力以及红细胞中的超氧化物歧化酶活性显著加强。 -淀粉样肽为神经毒性物质,在脑内堆积会形成淀粉样斑块沉积而损伤神经细胞,导致阿尔茨海默病的发生。
Y u等[10]利用 -淀粉样肽处理大鼠原代皮层神经元细胞,使其发生细胞凋亡而导致神经
元坏死,发现枸杞子提取物显著抑制由 -淀粉样肽激活的胱天蛋白酶(caspases)-3样活性,减少乳酸脱氢酶的释放,具有典型的剂量相关特征,其作用机制与抑制c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化途径有关。这表明枸杞子对神经元具保护作用,对于阿尔茨海默病等与衰老相关的神经变性疾病有潜在的治疗作用。以上研究表明枸杞子具有多方面的抗衰老作用机制。
2.3预防黄斑性病变老年黄斑性病变(ARMD)为眼老化所形成的疾病,常造成65岁以上老年人发生不可逆转的失明,患者血清以及视网膜中玉米黄素含量偏低是发病的重要原因。在一项随机、双盲、交叉实验中,12位志愿者分为2组,一组服用合成的非酯化玉米黄素,另一组服用来自枸杞子的玉米黄素二棕榈酸酯(与150g酸奶同时服用),每天5mg,共服用3周。随后3周排空期不服用任何玉米黄素,接下来2组换服不同形式的玉米黄素,也为期3周。志愿者服用枸杞子来源的玉米黄素二棕榈酸酯后,血浆玉米黄素浓度24h曲线下面积较对照组增加1倍[11]。在另一单盲、安慰剂对照实验中,14名志愿者每天服用15g枸杞子(约含3mg玉米黄素二棕榈酸酯),28天后血浆平均玉米黄素水平显著升高2.5倍,而对照组的13名志愿者则没有明显改变[12]。上述研究结果表明枸杞子中的玉米黄素不仅含量高,且生物利用度良好,服用一定量的枸杞子能显著提高受试者空腹血清玉米黄素水平,有利于维持正常的视网膜色素密度,保护视网膜免受光致氧化损伤。这为枸杞子保护视力,以及促进眼睛健康的传统用法提供了实验根据。
2.4防治糖尿病糖尿病也与机体所受的氧化损伤密切相关,患者过高的血糖和血酮水平可导致体内氧自由基增加,进而导致脂质过氧化、脂蛋白糖化反应以及细胞染色体DNA氧化损伤等不良后果。目前除传统治疗手段外,也使用合适的天然抗氧化剂控制糖尿病患者的病情。Luo等[1]利用四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠模型,研究枸杞子水煎剂、粗糖提取物以及精制多糖调节血糖与血脂的作用,结果3种枸杞子制剂均能显著降低糖尿病小鼠的血糖、总胆固醇和甘油三酯水平,同时增加HDL水平,机体的血脂和血糖代谢状况得到显著改善。Zhao 等[13]给大鼠喂饲高脂饲料同时腹腔注射链脲佐菌素建立非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)动物模型,研究枸杞多糖改善其胰岛素抵抗的作用。NIDDM大鼠服用枸杞多糖3周后,与对照组相比,空腹血清甘油三酯、胆固醇和胰岛素水平显著下降,糖耐量实验中口服葡萄糖30min后的血糖水平也明显下降,胰岛素敏感度显著上升,其作用机制与枸杞多糖增加细胞表面葡萄糖转运子4(GluT4)水平并促进细胞间胰岛素信号途径有关。上述研究结果表明枸杞子具有预防和治疗糖尿病的作用,与其富含天然抗氧化剂有关。
2.5抗肿瘤增强免疫功能、抗肿瘤是枸杞子的另一研究热点。在体外实验中,Gan等[14]发现在人外周血单核细胞培养液中加入枸杞多糖后,能以剂量相关的方式显著增加IL-2以及TNF- 的表达水平,推测枸杞多糖能促进机体的免疫应答,具有潜在的治疗肿瘤的作用。Gan 等[15]给接种S180肉瘤小鼠服用枸杞多糖,结果肿瘤组织生长受到显著抑制,同时巨噬细胞以及细胞毒T细胞活性明显增强,脾细胞分泌的抗体数量、脾淋巴细胞增殖速度以及IL-2的mRNA的表达量显著增加。Zhang等[16]研究枸杞子提取物对人肝癌细胞系QGY7703的增殖、细胞周期分布以及凋亡的影响,发现枸杞子提取物能将肝癌细胞系阻滞在细胞周期的S 期,并使其发生凋亡,进而抑制癌组织生长。
2.6增强造血功能Gong等[17]研究枸杞多糖增强骨髓抑制小鼠造血功能的作用。小鼠接受亚致死剂量550cGy的X射线的照射,或腹腔注射125mg/kg剂量的卡铂(carboplatin),引起血小板、红细胞和白细胞数量的减少,表现为骨髓活性受到抑制。其后每天皮下注枸杞多糖1次,共7次。与对照组相比,给予枸杞多糖的小鼠,其外周血红细胞、白细胞以及血小板数量减少的情况得到显著改善。在体外,将不同浓度的枸杞多糖与人外周血单核细胞以及植物凝集素一起保温后,枸杞多糖能显著促进粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的产生,这可能是其增强造血功能的作用机制。Hai等[18]发现小鼠经丝裂霉素诱导发生骨髓抑制后,给予枸杞多糖后也能恢复其造血功能。
2.7保护生殖系统升高温度可导致体外培养大鼠生精上皮细胞的结构破坏,Wang等[19]证实枸杞多糖能显著抑制这一过程,显示其潜在的保护生育系统的能力。由于氧化损伤是温度过高时精囊细胞发生变性和凋亡的主要原因,因此这种作用也可能与枸杞多糖的抗氧化活性有关。黄等[20]则发现枸杞多糖对H2O2导致的精囊细胞DNA损伤具有明显的抑制作用,且呈剂量相关。
2.8其他活性基质金属蛋白酶-1(MMP-1)系降解皮肤细胞外基质的蛋白酶,其活性升高与皮肤老化和癌变密切相关。Zhao等[21]发现枸杞多糖LbGp能显著抑制完整皮肤中MMP-1的活性,且不影响皮肤生存力。枸杞多糖LbGp能抑制机械压力下的皮肤扩张,而皮肤扩张需借助MMP-1活性升高来完成。在体外欠理想培养条件下,人纤维原细胞中Ⅰ型胶原蛋白的含量以及细胞的存活度均降低,加入LbGp能使这一情况得到显著改善。上述结果提示枸杞多糖对于皮肤的健康功效。Luo等[22]发现,在小鼠游泳实验中精制的枸杞多糖能显著提高小鼠体内糖原储备以及血液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,同时降低血尿素氮含量。这表明枸杞子对于提高机体负荷运动的适应能力以及消除疲劳具有十分明显的作用。
3结语枸杞子具有抗氧化、抗衰老、促进眼睛健康以及增强免疫功能等诸多功效,因此引起国内外研究者高度重视。但目前对其进行的生物活性研究大多处于临床前阶段,还需做大量临床试验以进一步确定其功效。此外,目前对于枸杞子的活性成分研究大多集中于多糖粗提物以及类胡萝卜素,而其他活性物质如甜菜碱、牛磺酸、 -谷甾醇、微量元素等也同样具有开发价值,值得进一步研究开发。自20世纪70年代以来的大量人体试验结果都表明,每天食用5～9份水果和蔬菜有助于预防高血压、糖尿病以及肥胖等许多慢性疾病,这与其中的维生素、矿物质、类胡萝卜素和其他植物营养素有关,然而调查也发现大多数人均未达到这个摄入水平。枸杞子富含各种营养素,能为机体提供广泛的保健功效,若公众能增强对枸杞子保健作用的认识并在日常饮食中增加摄入,将获得良好的效果。
不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析 摘要：目的：分析不同枸杞子中枸杞多糖的含量，探讨影响因素。方法：以不 同品种、不同产地、不同存储时间枸杞为材料，以葡萄糖标准溶液为对照品，测 定枸杞多糖含量，进行因素分析。结果：孕囊枸杞多糖含量最高，其后依次为宁 夏枸杞、柱筒枸杞、截萼枸杞、新疆枸杞、北方枸杞以及红枝枸杞；宁夏枸杞多 糖含量最高，其后依次为新疆、内蒙古、河北、青海、山西、甘肃；存储时间在 6个月以上多糖含量低于存储时间在6个月以下者（3.81±0.62）%，差异具有统 计学意义（P＜0.05）；品种、产地成为多糖含量影响因素。结论：宁夏枸杞宁夏原产多糖含量最高，该品种具有一定的比较优势，且具有一定的气候适应性。 关键词：杞子；枸杞多糖；含量 枸杞子为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实，主产于宁夏、甘肃、河北等地，被《神农 百草经》列为上品，味甘、性平，具有滋补肝肾、溢精明目至功效，常用腰膝酸软、虚劳精亏、阳痿遗精等症治疗，现代医学证实，枸杞子具有免疫调节、抗肿瘤、降脂保肝、降血糖、抑菌、抗氧化、抗辐射等多种药理作用，具有较大的医学保健价值，枸杞子一直是我国传统 药食两用材料之一[1-2]。枸杞多糖是枸杞子主要活性成分之一，但受品种、产地等因素影响，不同枸杞子其含有的多糖成分、病种存在一定差异，影响多糖的提取。本次研究试对比不同 枸杞子中枸杞多糖含量。 1材料与方法 1.1 仪器与试剂 枸杞主要包括宁夏枸杞、截萼枸杞、北方枸杞、新疆枸杞、红枝枸杞、柱筒枸杞、云南枸杞，共62份，均从市场购买或自行栽培，并经自然晾干或烘干保存，所有枸杞均有详细的品种、产地、采摘时间、存储时间。仪器主要包括：Mettler 电子天平、RE旋转蒸发仪、紫外线可 见光分光光度计、HW S26电热恒温水浴锅、离心机、高速粉碎机、标准筛等。 1.2方法 参照《中国药典》2010年版中有关于枸杞多糖含量测定方法进行测定[3]。取无水葡萄 糖25mg为对照组，置于250ml量瓶中，加适量蒸馏水溶解，稀释至刻度，摇匀，每1ml溶 液中含有无水葡萄糖0.1mg。供试品：精密称量粗粉，干燥至衡重0.5g，加乙醚100ml，60℃水浴脱脂，采用80℃水浴回流法浸体，1h，静置，自然冷却，取一米也，残渣水浴挥发至衡重，加入80%乙醇100ml，回流1h，趁热过滤，80%乙醇30ml洗涤，滤渣连同滤纸加水 150ml，回流2h，趁热滤过，去除小分子醇溶物，合并滤液与洗液，待冷却，移至250ml量 瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。分别取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分 别置入试管中，定容至2.0ml，加入蒽酮试剂8.0ml，蒽酮为现配现用，0.2%蒽酮＋80%硫酸 溶液，摇匀，沸水浴加热10min，待其冷却，10min后紫外-可见光分光光度法扫描，在 490nm处测定吸光度，以吸光光度值为纵坐标，供试品浓度为横坐标，绘制标准曲线。葡萄 糖对照品溶液标准曲线y=63.393x-0.0245，R2=0.9955。重复以上实验，进行重复性、精密度、回收率、稳定性试验。提取得到的多糖以乙醇沉淀法分级，色谱分离纯化，进行进一步鉴定。 1.3统计学处理 数据资料以SPSS18.0软件进行计算处理，以（ ±s）表示计量资料，采用t检验，多组间比较采用F检验，以P＜0.05表示检验水平。 2结果 2.1 不同品种枸杞多糖含量 宁夏枸杞，多糖含量为（5.43±0.31）%，截萼枸杞（4.58±0.41）%，北方枸杞（4.43±1.14）%、新疆枸杞（4.46±0.72）%、红枝枸杞（2.18±0.43）%、柱筒枸杞（5.40±0.42）%、云南枸杞（5.92±0.18）%，组间比较差异具有统计学意义（P＜0.05），孕囊枸杞多糖含量最高，其后 依次为宁夏枸杞、柱筒枸杞、截萼枸杞、新疆枸杞、北方枸杞以及红枝枸杞。 2.2 不同产地枸杞多糖含量
技术·食品工程＞＞＞ C EREALS AN D OILS PROCESSING 酶法提取枸杞多糖工艺研究 梁敏1邹东恢1，2郭建华1，2 （1．齐齐哈尔大学2．黑龙江省普通高校齐齐哈尔大学农产品加工重点实验室） 【摘要】本文研究了酶法提取枸杞多糖的最佳工艺条件以及枸杞中多糖的分离方法。采用木瓜蛋白酶处理，对作用温度、加酶量、最适pH值、作用时间进行正交试验。确定了酶法提取枸 杞多糖的最佳工艺：加酶量0．3％，酶解反应的pH值为7．0，温度为45℃，反应时间为2h，提取 率可达14．9％。 【关键词】枸杞多糖；酶法提取；正交试验；工艺 中图分类号：TS255．7文献标识码：A文章编号：1673-7199(2010)03-0104-03 枸杞子为茄科植物枸杞的成熟果实，是我国传统的滋补中药材。《本草纲目》中记载枸杞子具有坚筋骨、补精气诸不足、明目安神、令人长寿等功效。目前人们对枸杞子多糖进行了较广泛的研究，发现枸杞多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧等功效，且无任何毒副作用，因此枸杞多糖的分离纯化及其药理作用研究已成为一个热点课题。近年来生物酶广泛应用于各个领域，在国内也开始将其应用于药物提取中，枸杞多糖通常被包裹在植物细胞壁内，并且多糖往往和蛋白质结合在一起，以蛋白多糖的形式存在。研究表明中性蛋白酶能有效酶解与多糖结合在一起的蛋白质，从而将多糖释放出来而提高多糖的得率，提高了多糖的纯度，对枸杞多糖的研究开发具有现实意义。 1试验方法与工艺过程 1．1试验原料 从市场中购得新鲜枸杞，清洗干净，去除杂质，之后适当切块放入真空干燥箱干燥，待枸杞恒重，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的枸杞粉依次通过40、60、80、100目的筛，过筛之后把各级枸杞粉分别装到清洁干燥的烧杯中，置于真空干燥箱中待用。 1．2试验试剂与仪器 木瓜蛋白酶，北京世纪时尚科贸有限公司；Sephadex G－75，Pharmacia；苯酚，天津市科密欧化学试剂开发中心；葡萄糖、活性炭，天津市凯通化学试剂有限公司；使用试剂均为分析纯。真空干燥箱，上海益恒试验仪器有限公司；电热恒温水浴锅、离心机、透析袋、THZ－82A台式恒温振荡器，上海跃进医疗器械厂；HL－2S恒流泵，上海青浦沪仪器厂；九阳料理机，山东九阳小家电有限公司；SHZ－D（III）循环水式真空泵、722紫外分光光度计、PB－10pH计，北京赛多利斯仪器系统有限公司；BSZ－100自动部分收集器，上海沪西仪器厂；Lambda－35紫外可见分光光度计，美国PE公司。 1．3试验方法与步骤 称取80目的枸杞粉3g，放入到250mL的三角瓶中，然后加蒸馏水35mL混合均匀后置于40℃水浴锅中，水浴30min，调节pH值，加入一定比例木瓜蛋白酶混合，加入5mL蒸馏水溶解，枸杞溶液放在水浴中预热至酶解温度，将酶液加入到枸杞溶液中，在恒温振荡器上提取，反应结束，将三角瓶放到沸水锅中，10min沸水浴灭酶，灭酶结束，冷却至室温，将酶提取液放入到离心管中，调至5000r／min离心，取上清液，即得到酶提取多糖清液。 1．4葡萄糖标准曲线的制定 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，绘制标准曲线，获得线性回归方程。直线方程为：Y＝ 104
《枸杞多糖》行业标准简要编制说明 一、工作简况 （一）任务来源 根据工业和信息化部行业标准制修订计划（工信厅科[2014]114号），《枸杞多糖》列入2014年轻工行业标准计划，项目编号2014-0881T-QB，由全国食品发酵标准化中心提出并归口。主要起草单位：略；主要起草人：略。 （二）简要起草过程 标准任务下达后，中国食品发酵工业研究院针对制定枸杞多糖行业标准的具体工作进行了认真研究，确定了总体工作方案，于2015年2月发文征集起草单位并于同年5月组建了标准起草工作组，同时开展了相关技术资料的查询及收集。在上述工作的基础上，2015年6月，中国食品发酵工业研究院将拟定的标准草稿下发至各起草工作组成员。根据意见反馈情况，提出标准文本讨论一稿，并于2015年10月在北京召开标准研讨会，对标准中的技术指标、检测方法等内容进行了认真研究和讨论，会后形成标准文本讨论二稿。2015年12月～2016年1月完成样品征集、分发、测定及数据收集汇总工作。2015年4月，经进一步讨论沟通，起草组对标准中涉及的关键性技术内容达成共识，形成标准行业征求意见稿。 二、指标依据和对主要条款的说明 1 标准属性 本标准为推荐性标准 2 制标原则 a)确保食品安全； b)具有科学性、先进性和可操作性； c)结合国情和产品特点； d)与相关标准法规协调一致； e)促进行业健康发展与技术进步。 3 主要条款的说明 本标准规定了枸杞多糖的术语和定义、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输及贮存，包括上述各部分内容以及范围、规范性引用文件等七个部分。各部分说明如下 （1）范围：描述了本标准的主要技术内容和适用情况。 （2）规范性引用文件：描述了本标准中引用的标准文件。 （3）术语和定义：对枸杞多糖进行了定义 （4）感官要求：根据本产品的实际性状，确定了本产品的感官指标描述。
枸杞子中多糖含量的测定 柳婷，胡浩斌 (陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000) 摘要：本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物。用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量，本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。 关键词:枸杞子；多糖；紫外分光光度计 Detection of Polysaccharide in Lycium barbarum Liu Ting, Hu Hao-Bin (College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility. Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry 枸杞子（Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物，性状呈类纺锤形，略扁，长6～21 mm,直径3～10 mm。表面鲜红色或暗红色，顶端有小凸起状的花柱痕，基部有白色的果梗痕，果皮柔韧，皱缩，果肉肉质，柔润而有粘性，种子多数，类肾形，无臭，味甜，微酸，具有滋肾补肝、润肺明目等功能。 近年来，人们对枸杞子的药理作用进行了深人研究，发现枸杞子能增强机体免疫力[3]、抗肿瘤、抗辐射[4]、抗疲劳[5]、防衰老、增加造血功能等。临床医学研究还表明，枸杞子对糖尿病[6]、高血压[7]、视神经萎缩、肾炎、肝炎[8]等有显著疗效。对于枸杞子的上述功能的重要作用因子，一般认为与枸杞子中存在的枸杞多糖有关。因此，开始研究枸杞多糖，测定枸杞多糖的含量就显的非常重要。 鉴于枸杞多糖的分离纯化[9]困难,有关结构性质方面的研究报道甚少,枸杞多糖的生理活性,还必需从分离纯化、结构特征及药理作用3方面展开深入研究。这样,医学临床应用与保健型枸杞饮品[10]的开发才有坚实的理论基础。本试验主要完成枸杞多糖的分离与提纯，并对
目录 摘要 (1) 英文摘要 (2) 1 引言 (3) 2 材料与方法 (4) 2.1 实验材料与仪器设备 (4) 2.2.1 葡萄糖标准溶液的配制与曲线的绘制 (4) 2.2.2 枸杞多糖溶液的提取方法 (5) 2.2.3 苯酚-硫酸法测定多糖含量 (6) 3 实验结果与分析 (6) 3.1 单因素选择试验 (6) 3.2提取率与浸提温度之间的关系 (6) 3.3 提取率与料水比之间的关系 (7) 3.4 提取率与浸提时间之间的关系 (8) 3.5 正交试验优化工艺条件 (9) 4 结论 (10) 参考文献 (11) 致谢 (12)
枸杞子多糖提取工艺的探索 化学化工学院应用化学专业 摘要：利用正交分析法对枸杞多糖的提取工艺进行优化。以枸杞为主要原料，先采用单因素试验法分别对影响枸杞多糖提取率的主要因素进行分析研究，最后再利用正交试验法优化选取一个最佳的工艺条件。试验结果表明，枸杞多糖的热水浸提法最佳工艺条件为浸提温度90℃，料水比1:20，浸提时间2h。 关键词:枸杞多糖;水浸提取;单因素试验；正交试验
Exploration of Lycium Barbarum Polysaccharides Extraction Technology College of Chemistry and Chemical Engineering Applied Chemistry Specialty Chen Fei (20907031003)Director: Xu Han (Lecture) Abstract: To optizime the extraction technology of lycium barbarum polysaccharides by orthogonal methodoloy. The main factors were studied effecting the extraction of lycium barbarum polysaccharides by single factor experiments. And then, the optimum extraction conditions of lycium barbarum polysaccharides was studied by orthogonal experiment. The optimized conditions for the extraction of polysaccharides was obtained as follows: extraction temperature 90℃, material to water1∶35(W∶V) , extraction time 2 h. Keywords:lycium barbarum polysaccharides; flooding extraction; single factor experiments; orthogonal experiment
枸杞成分含量及功效 关于枸杞子的近代研究结果扼要叙述如下： 1. 枸杞子的现代分析： 分析表明枸杞子含有丰富的枸杞多糖、脂肪、蛋白质、游离氨基酸、牛磺酸、甜菜碱、维生素B1、B2、E、C,特别是类胡萝卜素含量很高。此外，还含有大量的矿物元素，如钾、钠、钙、镁、铁、铜、锰、锌、硒等。鲜枸杞果的营养活性成分分析数据见表1。 表 1 、鲜枸杞果的成分分析 成分单位数据成分单位数据 蛋白质G/100g 4.49 K Mg/kg 1502.4 脂肪G/100g 2.33 Na Mg/kg 55.55 粗纤维G/100g 1.68 Ca Mg/kg 212.22 总酸G/100g 0.04 Mg Mg/kg 317.46 碳水化合物G/100g 9.12 Fe Mg/kg 55.85 牛磺酸G/100g 0.32 Cu Mg/kg 7.46 甜菜碱G/100g 0.26 Mn Mg/kg 4.07 维生素B1 Mg/kg 0.53 Zn Mg/kg 7.05 维生素B2 Mg/kg 1.37 Se Mg/kg 0.05 维生素 C Mg/kg 198 类胡萝卜素Mg/kg 960 维生素 E Mg/kg 5.5 枸杞子仁中粗脂肪含量13.75%，粗蛋白质22.42% 。 粗枸杞子油中含亚油酸77.28% ,B -胡萝卜素0.24mg/kg，维生素E 211.00mg/kg，硒0.06mg/kg , SOD 92 NU/ml. 2. 枸杞多糖的理化特性本研究室通过DEAE－cellulose 和Sephadex gel 柱色谱以及氯化钠作洗脱剂从枸杞粗多糖中分离得到针形晶体LBP-I 、LBP-IIL BP-III 和
竭诚为您提供优质文档/双击可除枸杞子多糖含量的测定实验报告 篇一：实验三多糖含量的测定 实验三多糖含量的测定 一、实验目的 1、分光光度法测多糖的原理和方法 2、用officeexcel作标准曲线 二、仪器与试剂 1、仪器：7200分光光度计、水浴锅、电子天平 2、试剂：1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓h2so4、dh2o 3、器皿：50ml容量瓶、10ml量筒、玻棒、洗耳球、烧杯、试管 三、步骤 1、标准曲线的绘制 ①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶，加入蒸馏水溶解并小心稀释至刻度，再取5ml于50ml容量瓶，加蒸馏水稀释,即1.0mg/ml。 ②分别量取0.25ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml
分别置于已编号的50ml容量瓶，加蒸馏水定容。 ③分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，摇匀后，室温5min，90oc水浴15min，冷却至室温。 空白对照：2ml蒸馏水+1ml5%苯酚+5ml浓硫酸 吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=ax+b ④准确量取多糖溶液（待测）2.0ml于50ml容量瓶中，加蒸馏水定容，方法同上述。 四结果 ①计算浓度（待测液） 本组所测得多糖溶液（待测）的吸光度为的0.385，代入根据吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程 y=14.255x+0.0309，可得待测液的浓度为 0.025*25=0.625mg/ml.。②实验主要步骤（记录） 步骤记录： Ⅰ首先配制浓度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、 0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的葡萄糖溶液；然后取配好的溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，；不断震荡，溶液逐渐变为褐色，放出热量，且随着葡萄糖浓度的增加，溶液的颜色也不断变深；室温5min，90oc水浴15min，反应更为充分，溶液颜色有稍微加深，冷却至室温；最后用7200分光光度计一一测量其
枸杞多糖功效研究及应用状况 (作者：___________单位：___________ 邮编：___________ ) 【摘要】枸杞多糖是传统药食两用的枸杞子的主要功效成分，近年来研究表明其具有增加免疫能力、抗氧化和延缓衰老、抗肿瘤、神经保护、抗辐射、保护生殖系统等功能，作者对其功效研究、安全性和应用的研究进展进行了综述，并对今后的研究方向进行展望。 【关键词】枸杞多糖；功效；安全性；应用；综述 [Abstract] Lycium barbarum polysaccharide(LBP) is the main functional ingredient extracted from the Lycium barbarum, which is both tranditional food and medicine. Recent studies indicated that the LBPhad effects of elevating immuneability, anti ftioxidation and anti ftiaging, antitumour, neuroprotection, protecti on to gen ital system and etc. This paper reviewed the studies on the fun cti ons, sefety and applicati on of LBP in recent yeares, and further gave the predictive studying directi ons. [Key words] Lycium barbarum polysaccharide; function; safety; applicati on; review
第一章综述 1前言 1.1枸杞 1.1.1枸杞的自然属性 枸杞(Lycium barbarum)别名苟起子、甜菜子、地骨子等，是茄科植物枸杞(Lycium chinense Miller)的成熟果实。是我国重要的药用植物资源，是我国受原产地保护的药食两用的药材和传统出口创汇产品。早在2000多年前，人们已经开始了对枸杞的利用。《诗经》记载“陟彼北山，言采其杞”。宋?苏轼《小圃?五咏》赞枸杞曰“根茎与花实，收拾无弃物”。《本草纲目》中记：“久服杞子，坚筋骨，轻身不老，耐寒暑”。《本草汇言》记“枸杞能使气可充，血可补，阳可生，阴可长，火可降，风湿可去，有十全之妙焉”。《保寿堂方》载“春枸杞叶，名天精草；夏采花，名长生草；秋采子，名枸杞子；冬采根，名地骨皮”。根据《郭案驼种树书》记载，大约在1200多年前，我国就开始栽种枸杞了。此外，《神农本草经》、《食疗本草》、《本草纲目》和《本草备要》等古书中都有关于枸杞的记载。 枸杞具有滋补肝肾,益精明目的作用。作为我国常用中药，枸杞被广泛应用于临床，主治肝肾阴亏，头晕目眩，腰膝酸软，消渴遗精，目昏多泪，虚劳咳嗽。枸杞子又作为“药食同源”的植物性平补保健食品，被广泛用于泡酒、泡茶、泡水、煲汤、煮粥等。大量研究表明枸杞中含有多种可被利用的生物活性成分，其中最具有提取利用价值的是枸杞多糖，其次是枸杞色素和枸杞籽油。 枸杞的生长状况 枸杞属约有80个种，多数分布在南、北美洲。以美国的亚利桑娜州和阿根廷形成两个分布中心，南美洲种类最多。欧亚大陆约有10个种。约在17世纪中叶引到法国，后来在欧洲，地中海国家，韩国以及北美洲国家都有栽种。我国有7个种和3个变种，多数分布在西北和华北。目前我国人工栽培的构祀有宁夏枸杞及北方枸杞。枸杞原产我国北方，河北、内蒙古、山西、陕西、甘肃、宁夏、新疆和青海等省都有野生，而中心分布区域在甘肃河西走廊、青海柴达木盆地以及青海至山西的黄河沿岸地带。常生于土层深厚的沟岸、山坡、田埂和宅旁。据统计我国枸杞种植区面积已经由1996年的45万亩迅速增加到100万亩，年产量达3000万公斤以上，其中新疆、宁夏、内蒙古、河北等省地区的枸杞种植面积和产量居全国前列。有500多年栽培历史的宁夏，所产枸杞以粒大、皮薄、肉厚、营养丰富、药用价值高而享誉国内外，远销港澳、东南亚、西欧及北美等地区和国家。2001年，宁夏省枸杞种植面积达25万亩，占全国枸杞种植面积的17%，年产量达115.5万公斤，全区枸杞干果产量和出口量分别占全
枸杞多糖的生化分析和降血糖活性 摘要：本实验研究了枸杞多糖的纯化，表性特征和降血糖活性。通过超滤膜分离获得水溶性多糖（LBP），并通过DEAE纤维素柱和Sephadex的色谱法进一步纯化G-150得到LBP3a和LBP3b。分析表明LBP3b的平均分子量（Mw）为4.92kDa。单糖组成分析显示，LBP3b由摩尔比为5.52：5.11：28.06：1.00：1.70的甘露糖，鼠李糖，葡萄糖，半乳糖和木糖组成。并通过UV，FTIR，NMR和SEM研究了LBP3b的初步结构特征。体外细胞实验显示，LBP3b以剂量依赖的方式显著抑制葡萄糖的吸收。研究表明LBP3b具有作为抗糖尿病药物的潜在用途。 1.引言 糖尿病（DM）是指具有异常高水平的血糖的慢性代谢病，已经成为世界上主要的健康问题。它是由胰岛素分泌缺乏或器官对胰岛素的反应减弱引起的。包括1型和2型在内的DM在全球发病率急剧增加，到2030年估计超过4亿。许多口服降糖药，如双胍类和磺酰脲类可用于治疗糖尿病，但这些药物是化学合成的，缺乏多剂量方案，且高成本，具有不良副作用和毒性。因此，研究和发现新型更安全和更有效的替代品是至关重要的，其中传统的食用和药用资源已成为研究低血糖活性的焦点]。 枸杞，属于茄科，是中国著名的草药，已使用了2300多年。目前，枸杞受欢迎的功能食品已被广泛使用，其具有很大功效，如减少血糖和血清脂质，滋养眼睛，肾脏和肝脏，抗辐射，提高免疫力，抗衰老，抗癌，抗疲劳，增强血细胞生成，改善男性不育。据报道，枸杞果干中有胡萝卜素，氨基酸，微量矿物质，维生素，脂肪酸，多糖和甜菜碱与健康相关的生物活性成分。 在枸杞的这些化学成分中，最好研究的组分是水溶性的多糖（LBP）估计占干果的5-8％。许多关于药理学和光化学的研究已经证明LBP是以上的生物活性的主要成分之一[15-17]。然而，由于LBP的结构复杂性，不同的提取和纯化方法得到的LBP具有不同组分，结构和功能。而每种LBP的结构和功能从未进行过全面和深入的讨论。
枸杞多糖的提取工艺研究 [摘要]枸杞为茄科植物枸杞的干燥成熟果实，主产于河北与宁夏，是一种食药两用植物，味甘、性平、入甘、肾经，具有多种药理作用和生物功能。枸杞多糖是枸杞中的主要活性成分之一。其中有关枸杞多糖的化学、药理与临床研究十分瞩目，已有不少研究报道枸杞多糖具有增强免疫力、抗癌、防衰老、增强造血功能、防止遗传损伤、抑制肿瘤生长和细胞突变等作用。鉴于枸杞多糖具有多种药理作用和生理功能，引起了人们的广泛关注。本试验研究超声辅助提取法在枸杞多糖提取中的应用，采用正交实验的方法筛选出提取枸杞多糖的最佳提取条件。当加水量为20倍，提取时间为40min，提取温度为80℃，超声功率为250W 时枸杞多糖得率最高，可达到3.06%。 [关键词]枸杞多糖；超声辅助提取；正交实验 多糖（Polysaccharide）又称多聚糖，由是由十个以上的单糖基通过普键连接而成的一类结构复杂的大分子化合物。多糖类一般不溶于水，无甜味，不能形成结晶，无还原性和变旋现象。多糖可以水解，最终水解得到单糖。枸杞多糖是枸杞的有效成分之一，经研究发现，枸杞多糖既是保健功能因子，又是一种非特异性免疫增强剂，具有调节免疫功能、降血糖、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、增加造血功能、防止遗传损伤等作用。 本实验采用正交试验方法研究超声辅助提取法在枸杞多糖提取中的应用，并筛选出提取的最佳工艺条件。 1 实验材料与仪器 2实验步骤与方法 2.1 多糖含量标准曲线的绘制：采用H2SO4苯酚法对其加以改良。精密称取无水葡萄糖标准品25.0mg，置于25ml容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，配成1mg/ml的储备液，分别精密吸取储备0、0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml，置25ml 容量瓶中，加5%苯酚溶液1.0ml，摇匀，用移液管迅速垂直滴加浓硫酸各5.0ml，再用蒸馏水稀释至刻度，沸水浴中煮沸15min；冷却后用分光光度计在490nm波长处测定其吸光度值；以试样糖含量C（mg/ml）为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。 2.2 枸杞多糖得率计算：多糖得率=枸杞粗多糖质量（g）÷枸杞原料质量（g）×100% （公式2-1） 2.3 超声辅助提取枸杞多糖 2.3.1 枸杞多糖提取工艺流程：枸杞→粉碎→石油醚回流脱脂（水浴温度60℃）→过滤→滤渣风干→样品称重（预处理样）→超声波法提取→抽滤→粗
枸杞多糖枸杞多糖属于糖缀合物,为多聚糖与多肽或蛋白质形成的结合物,是枸杞子中的主要活性组分。 Luo等[1]通过去脂、DEAE纤维素柱洗脱以及冷冻干燥等方法分离到一枸杞多糖组分,经过GC-MS分析表明其单糖组成为鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖和木糖,摩尔比为 4.22∶2.43∶1.38∶1.00∶0.95∶0.38,另外还含17种氨基酸,总氨基酸含量为8.46%。Duan等[2]分离得到4个均一枸杞多糖,其分子量在82～115kDa之间,其中2个多糖组分为1,6-连接的葡聚糖,另2个具有1,4-连接的多聚半乳糖醛酸主链以及微量的半乳糖和阿拉伯糖分支。 1.2类胡萝卜素枸杞子中的另一大类活性物质为类胡萝卜素。 Y ang等[3]通过固相萃取富集和预分离HPLC测定,表明枸杞子含总玉米黄素达1000 g/g以上,其含量超过黄玉米40倍,主要为玉米黄素二棕榈酸酯; -胡萝卜素的总含量也达150 g/g以上。枸杞子中还含叶黄素、 -隐黄素、堇菜黄素、玉米黄呋喃素、花药黄素等类胡萝卜素。 1.3其他成分枸杞子的保健作用与其他营养成分也有关系。枸杞子中还含核黄素、维生素C、维生素B1、尼克酸、牛磺酸、17种氨基酸以及铜、铁、锌、锰、镁、硒、钙等多种微量元素[1]。 Xie等[4]从枸杞子中分离到莨菪亭、 -谷甾醇、香豆酸、胡萝卜苷和甜菜碱等成分。 Toyode-Ono等[5]从枸杞子中首次分离到2-O-( -D-吡喃葡萄糖基)抗坏血酸,系维生素C 的前体化合物,在枸杞子中含量达0.5%,与新鲜柠檬中维生素C的含量相当。 2生物活性 2.1抗氧化抗氧化活性是枸杞子的研究热点,也与其多种生物活性密切相关。现已证明机体进行有氧代谢过程中不断产生活性氧种(ROS),造成核酸破坏,脂质过氧化和蛋白质氧化以及细胞损伤等不良后果。补充天然抗氧化剂有助于减少和消除ROS造成的氧化损伤,目前筛选天然抗氧化剂的研究十分活跃。在体外,Ni等[6]采用电子顺磁共振技术证实枸杞多糖清除羟自由基作用非常显著;Wang等[7]也发现枸杞多糖对Fe2+-H2O2产生的羟自由基具有强烈的清除作用,并呈明显的剂量相关。 Luo等[1]通过Trolox等价抗氧化能力(TEAC)及氧自由基吸收能力(ORAC)等实验来检测枸杞子提取物清除ROS的活性,发现枸杞子的甲醇-水粗提物的总抗氧化能力高于精制枸杞多糖,推测与粗提物中富含类胡萝卜素、核黄素、维生素C、维生素B1以及尼克酸等多种天然抗氧化剂有关。 Li等[8]证实枸杞子水提物在体内能显著升高急性缺氧小鼠心、肝、肺等器官组织中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性以及总抗氧化能力,提示枸杞子对小鼠由急性缺氧而造成的自由基损伤有保护作用。 2.2抗衰老民间视枸杞子为延缓衰老的滋补品,在许多著名养生方剂中都有使用。 Wang等[7]发现枸杞子提取物能显著延长雄性和雌性果蝇的最大寿命,且能延长雄性果蝇的平均寿命;在由半乳糖诱导的衰老小鼠模型中,20mg/(kg?d)的枸杞子提取物能显著提高血清和肝脏中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的水平,同时降低脂褐素和丙二醛的水平。 Deng等[9]给半乳糖诱导的衰老小鼠喂饲枸杞多糖后,发现其血清中晚期糖化终产物(advancedglycationendproducts,AGEs)以及皮肤中羟脯氨酸浓度显著下降,同时淋巴细胞增殖速度、IL-2活性、学习和记忆能力以及红细胞中的超氧化物歧化酶活性显著加强。 -淀粉样肽为神经毒性物质,在脑内堆积会形成淀粉样斑块沉积而损伤神经细胞,导致阿尔茨海默病的发生。 Y u等[10]利用 -淀粉样肽处理大鼠原代皮层神经元细胞,使其发生细胞凋亡而导致神经
枸杞多糖的提取与鉴定 1242818杨立君实验原理 强酸可以使糖类脱水生成糠醛。生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。颜色的深浅可以作为定量的标准。这一方法具有很高的灵敏度，糖含量在30μg左右就能进行测定，所以可以作为微量测糖之用。 一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适]1[。 实验试剂 1.标准葡萄糖试剂：将葡萄糖105℃烘干至恒重（2h），准确称取50mg,无离子水定容至500mL,终浓度为0.1mg/mL. 2.蒽酮-浓硫酸试剂：称取0.1997g蒽酮，溶于100mL浓硫酸，现用现配。 3.葡萄糖，阿拉伯糖，甘露糖]3[],2[ 4.硫代硫酸钠溶液，活性炭，正丁醇，无水乙醇，丙酮。三氯甲烷，甲苯胺乙醇溶液 实验器材 分光光度计，超速离心机，电炉，烧杯，试管，干燥器，滤纸，层析缸以及其他相关玻璃仪器 实验流程 (一) 提取 枸杞干果粉碎，氯仿- 甲醇（2∶1）回流脱脂8~10 h 近无色，挥干溶剂以后将脱脂后的枸杞样品放入烧杯中，分3次加15、12、10 倍量的蒸馏水于90 ℃水浴提取，每次2 h；收集3 次的滤液减压浓缩至约200 mL，转移到大烧杯中，加4 倍量的95%乙醇，沉淀12 h 后抽滤，并依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚 洗涤，干燥后便得到枸杞多糖的粗制品。]4[ （二）纯化 多糖粗品加水溶解，4 000 r/min 离心10 min 后取上清液，加30%双氧水适量，40 ℃保温4～6 h 后，加三氯甲烷-正丁醇（4∶1，Sevag 法）溶液沉淀蛋白，取上清液；此步骤反复多次，直到无白色絮状沉淀出现。将除去蛋白的多糖溶液浓缩后，转移到分子排阻为8 000～10 000 Da 的透析袋中，流水透析24 h 后，蒸馏水透析过夜，溶液颜色变淡，浓缩后 真空干燥得枸杞多糖精制品。]4[ (三) 理化性质分析 将枸杞多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中，观察其溶解性。另在浓硫酸存在下观察枸杞多糖与α-萘酚的作用，于界面处观察颜色变化。 （四）蒽酮比色法测定含量
不同工艺的枸杞多糖提取率比较及其体外抗氧化性研究 枸杞多糖是一种优质的水溶性植物多糖，提取自宁夏枸杞的果实。现代药理研究已表明，枸杞多糖能够改善老年人易疲劳、食欲不振、视力模糊等症状，同时还是枸杞子中调节人体免疫、延缓衰老的主要活性成分。 枸杞多糖作为西安源森生物公司的主打产品，已被广泛应用于食品饮料以及保健品领域。为向客户提供更高品质的产品，日前，西安源森生物实验室就枸杞多糖的不同提取工艺进行对比研究，并对枸杞多糖体外抗氧化性进行了测定。 实验概述: 1. 西安源森生物实验室分别用三种提取方法：浸泡提取法、超声波提取法和微波提取法提取枸杞多糖；然后采用硫酸- 苯酚法对多糖含量进行定性定量分析，得出不同提取方法所得的枸杞多糖含量及提取率； 2. 根据枸杞粗多糖对自由基的清除率以及对超氧阴离子的清除作用的测定，比较同浓度条件下的VC 与枸杞多糖对抗氧化活性。枸杞多糖体外抗氧化性结论。 一、三种提取方法提取枸杞多糖的提取率研究 （一）实验材料与试剂 1. 材料 宁夏枸杞西安源森生物实验室自产地直接采购； 2. 试剂 （1）5% 苯酚； （2）8mmol/L HCl；25mmol/L 邻苯三酚溶液； （3）0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.2)；10%三氯乙酸； （4）邻苯三酚(焦性没食子酸，分析纯)； （5）三羟基甲基氨基甲烷(Tris)(分析纯)； （6）1,1-二苯基-2-苦基苯肼(1,1-dipheny1-2-picryl-hydrazyl, DPPH)。 （二）仪器与设备 （1）索氏提取装置，HH-S 数显恒温水浴锅； （2）YHW-102 型远红外干燥箱； （3）KQ3200 型超声波清洗仪； （4）WFJ-7200 型可见光分光光度计； （5）LDZ5-2 低速自动平衡离心机； （6）WP700 型微波炉； （7）TU-1900 双光束紫外可见分光光度计； （8）DL-1 万用电炉规格(单联电压220V，功率：LX/KW)； （9）ZDHW 型调温电热套(规格250ml，功率150W)； （10）JA2003 型电子天平。 （三）实验步骤 1.枸杞预处理 将宁夏枸杞放于60℃恒温箱中恒温干燥24h→称量→剪碎→回流脱脂（回流两次，每次3 h）→弃去溶剂，残渣风干，残渣即为经过预处理的枸杞。 2. 利用三种方法进行枸杞多糖的提取 （1）浸泡法提枸杞多糖 用电子天平称取等量经预处理后的枸杞，浸泡3h，然后用90℃的水浴提取1.5h，用脱脂棉过滤，重复提取3 次，弃去残渣，合并滤液，浓缩，离心(3000r/min，30min)，弃去残
申请科研资助项目申报书 项目或课题名称：枸杞多糖含量的准确检测 申请单位：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司 联系者姓名： 联系者电话： 宁夏瑞碧枸杞产业有限公司 二00八年二月
一、申请单位的基本情况： 宁夏瑞碧枸杞产业有限公司是由陕西方舟健康产业集团投资，以枸杞汁﹑枸杞干果﹑枸杞冻干粉﹑枸杞提取物等枸杞系列产品为主的专业供应商。目前，公司在宁夏枸杞原汁产业中属龙头企业。公司注册资本1800万，员工63人，与南梁农场等通过有机认证的基地建立了稳定的鲜果原料供应关系，并建成目前国内最大的枸杞原汁加工线，每榨季产量可达2000吨以上。公司严抓质量管理，已通过ISO 认证﹑HACCP认证及Kosher认证。 为加强公司技术力量，我们先后与中国科学院上海有机化学研究所、陕西师范大学生命科学院﹑北京食品研究所、西北大学生命科学学院、西安理工大学理学院、第四军医大学等建立了密切的合作关系，在科研开发上不断精进，以增强公司核心竞争力。 二、课题研究的目的及意义： 国内一些大专院校科研单位的科技工作者近几年来从事宁夏枸杞有效成份分析，认为枸杞多糖是宁夏枸杞最主要的生物活性物质。科学试验证明，枸杞里的一种特有成份能使P—24抗体测值增加，促进T淋巴细胞增高。所谓的一种特有成份就是指枸杞多糖(LBP)。研究表明，枸杞多糖是由阿拉伯糖、鼠李糖、术糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖及半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽链多糖，分子量均大于1万。 北京医科大学、华中农业大学和中科院上海有机化学研究所等单位对枸杞多糖进行了分离纯化，并且对分子量、结构、基本性质进行
一、植物多糖的提取 1 溶剂提取法 1．1 水提法 水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。 1．2酸碱提法 有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。 有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。 1．4 生物酶提取法 酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。 1．5 超声提取法 超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。另外，超声波的热效应使水温基本在57℃，对原料有水浴作用。超声
枸杞多糖测定 稀释至刻度，备用。 2.6 样品中多糖的测定 吸取适量样品液，加蒸馏水至2 ml，按标准曲线下的方法测吸光度A为0.2343，查标准曲线得样品液中葡萄糖含量4.69（μg/ml）。 2.7 结果计算 多糖含量%=p?D?F?100 m 式中：p：样液葡萄糖浓度（μg/ml）； D：样品液稀释因素； F：换算因素； m：样品质量（μg）。 测量结果代入得：多糖含量%=12.51% 3 实验讨论 （1）苯酚-硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸杞多糖成分在H2SO4的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，再用分光光度法测定其枸杞多糖含量。本法操作简单，显色稳定，灵敏度高，重现性好，可作为枸杞及其它多糖含量的测定方法。（2）枸杞子水提物中含有单糖、低聚糖等杂质, 且呈红色, 因此在测定之前要先用乙醇除去单糖、低聚糖等杂质并以
丙酮-石油醚脱脂脱色, 才不至于对测定产生干扰。 （3）试验中发现，浓硫酸的加入方式对实验的结果影响较大，采取移液管悬空，垂直加入浓硫酸，立即摇匀的方式，显色反应充分，且显色结果稳定。 （4）各种单糖的标准曲线均只在0～30 μg含量范围内呈较好的线形关系，因此制作标准曲线时，单糖浓度不宜太大。 （5）本法采用精制的枸杞多糖作为对照品，计算出枸杞多糖与葡萄糖的换算因子，再乘以用硫酸-苯酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量，这样可避免直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差，结果更准确。 (6) 多糖提取工艺以及分离、纯化方法决定了产品的纯度, 另外枸杞子产地的不同也可能对研究结果有影响。由于目前市场枸杞多糖产品主要作为保健产品,需较高的收率和较低的成本。而采用乙醇沉淀法提取的枸杞多糖含量较高,收率可达8%左右,并且乙醇可回收,既使成本进一步降低,又减少了对环境的污染，且取得了很好的经济效益。本实验所测得枸杞含糖量高，实验材料为上好的宁夏枸杞。
枸 杞 多 糖 的 提 取 与 含 量 测 定 2011级药学班 A6组 丁艺兰，冯霞
枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定 一、实验目的： 1、解中药品种品质研究的思路和方法 2、熟悉枸杞多糖的了化学性质和提取方法 3、掌握查阅文献和数据处理的方法 二、实验原理: 枸杞为茄科植物枸杞的成熟果实，它既可以作为药材，又可以作为保健食品。经研究发现其主要活性成分之一就是枸杞多糖。枸杞多糖是一种水溶性糖系蛋白多糖，主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。现代医学研究证明：它具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫力、降血脂等作用，能改善老年人易疲劳、食欲缺乏和视力模糊等症状。 萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。通过萃取，能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。它的基本原理是利用化合物在两种不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。经过反复的多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。在本次实验中，是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物，属于液-固萃取。本实验使用水提醇沉法提取宁夏枸杞的枸杞多糖。 三、实验步骤
1、枸杞多糖的提取 称取干燥的枸杞80g，用研钵研成粉末状，放入烧杯内，加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，过滤，得滤渣，再加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，合并滤液，采用旋转蒸发器真空浓缩，得到的浓缩物用乙醇(乙醇终浓度大于80%)沉淀，滤布过滤，得滤渣用丙酮。石油醚混合液(体积比1：1)于50～60℃回流0.5h，滤布过滤，得沉淀，烘干，得到枸杞粗多糖。 2、Sevage法脱蛋白 取一定量的粗多糖，加蒸馏水完全溶解，使其浓度约为100mg/m L，用Sevage法脱蛋白，按枸杞多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷，再加入三氯甲烷体积的20%的正丁醇，剧烈振摇20min，使其充分混匀，1000r/min离心，倾出上清液，除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，重复以上操作直至中间层无变性蛋白，得到脱蛋白多糖。 3、含量测定 （1）对照品溶液制备精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖对照品50 mg，置500 mL 量瓶中，用适量水溶解后，稀释至刻度，摇匀，即得0．1 mg·mL （2）样品溶液的制备枸杞子样品粉碎，备用。取各种枸杞子粗粉约0．5 g，精密称定。加乙醚100 mL，加热回流1 h，静置，放