当前位置:文档之家› 流式细胞仪操作规范流程-SOP

流式细胞仪操作规范流程-SOP

流式细胞仪操作规范流程-SOP
流式细胞仪操作规范流程-SOP

流式细胞仪操作规程目录

1:淋巴细胞亚群测定及绝对计数

2:活化淋巴细胞亚群、记忆T 及纯真T 的检测

3:HLA-B27 测定

4:CD55/CD59 测定

5:干细胞检测和绝对计数

6:白血病免疫分型测定

7:淋巴细胞T 细胞亚群细胞内因子IFN- γ /IL-4 测定

8:细胞周期分析

9:活化血小板检测

10:血小板抗体测定

11:红细胞抗体测定

12:粒细胞抗体测定

淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)

医院检验科

操作规程文件号:200 年月日起实施

第1 版

(共3 页)

本规程每2 年复审一次复审日期:年月日

复审人:

规程编写者:

审批者:

批准日期:年月日文件分发部门和/或个人院档案室保管者:

检验科主任:

检验科实验室:

淋巴细胞亚群测定

试剂

品牌

剂型 规格 贮存

贝克曼库尔特

成分

1:单克隆抗体

液体

2—8℃

(CD45/4/8/3 No.6607013 CD45/56/19/3

No.6607073

CD4/8/3 No.IM1650

同型对

IgG1/IgG1/IgG1 No.IM1672

CD3/19 No.IM1293

CD3/16+56 No.IM2076 CD19-PC5

No.IM2643

Flow-Count 荧光微

No.7547053)

2:全血溶血试剂 (Q-Prep) 液体 (No.7546946)

A :甲酸

液体 70ML 室温

B :碳酸钠等

液体 32ML 室温

C :多聚甲醛

液体

14ML

室温

(Optilyse C No.IM1401) 液体

室温

3:鞘液 (No.8546859) 液体 20L

室温

4:清洗液 (No.8546930)

液体

5L

室温

5:荧光微球 (No.6605359) 液

10ML

2-8 ℃(Flow-Check)

仪器

BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra

样本制备 :

参考值(百分数(绝对值) )

CD3+ 60.8-75.4%(1141-1880) CD4+ 29.4-45.8%(478-1072) CD8+ 18.2-32.8%(393-742) NK 9.5-23.5% (175-567)

Th/Ts 1.05-2.03

周血 NK 细胞增加。

点击

方案( Protocol )

1.选参数

I

L L 皇F 豈

-:-λ

j c 35d

9?4f

目常一

3?

??S Ξ

πI .E M L ?,

a

?=5≡

lgl _

一巻 左一

i

i 3-

*0

y ?

?3l ?*f

c l i ?.?

3

S

ElHd

Elii

i

?

?

3

J ?l ?

-

?≈LrJr>

* 巴IS 亡起 Ef N

φ

V

? 叩 沖

Λ

π 1 K

-S

S J

?

??

-f i ?

o v ?κ?- L ?s ? 口」

???SS

S 3?S

Λ

I u

-≡s s ?o o

- *5-

4-?≡ -1

?

5≡*?****??=la

?y ?M ^?

????

??

O

i Ln-

5 JJ

r F ?a ? H L m a l I X I F S l L f l

上J

D e w m ? ∣?S L m

工|

J

R t t m

P

T i M t

R 曲

Γ

I 善

L 5 t 4 L U l> L .ILL L 庇.U L L -

S

≡ b H

t

a

1 I

s

MSj

I t ?κ-

w -」 ?0??α Jl

L H ??f s

-

■舌圣 ?^E

C

O ???

AXBL

-

yfJAt ?i ?

S S

?

???^- -

- ≡

±

Ξ 二?-t ?*4=?■■ -I

<一 =.'.

I !'

:

J *?

c

' m □CB ?

S≡τ

(θ^θs 爭冲'多嬲)

d ?uMC ?∣L 嶂? buu APt ?H

∣Γ?Λ∣√I Hf ?Kffi ?o ? I

?v ???*5

ΓΞ∑Π 丽

LL F

F

L 1

F

?,

ωsΛu ?5(?l ΞU a

d 沁匣

MrtMODlHl ΠdiJd>Λ∣? °*≠[畑1S*S ]旺=IhWiF 亡?*Πψ≈?SlTS

平)+1* 0?i i

fc ?RES ?Λp3÷F ??j∣Φ=?5l∣J SS ^P≡ξ∣*

龙申盘α中£:回

Oadl

O ?M ,

IΦ=K -5=m WZlP■

Btid*R3lp O ?ΓfΠ 匡

竺竺匹J M≡*≡S

*

m$;Sl 1ffi ?5?Mc ??j Ig

叩 ?lj BFlwrW

叩H

Jl 」 Xn ?d Ir 玛1

3p3i9d I if ?

>Λ^p∣JWJ?I -I PMMH

≡np∣5

Llgf ,s ?-M -sl cf JI Γ--=1

J

」 ?1

∣ll H?|:UJ^ riUΛH ? -

IERIllIl l

瞄I 出 β?TS ? &31? ?uib

叩?? t

n ?j

____ ∏L ] rM ?F35rj4uj

期丄

JIJU

MrW

JJj JJQ

g

JJ□

3IU

JJO

55 m

!≡d

TTBUiteg

IlrgMl W un?K "

S

F

U

-

E

? i ,,,i∣ l ,??*??? I ? TTTTTn 10* 10, 1?l

FnC

貝F“SO

只FL4U^*L1 LOg

W *14 Io^U U?

IO a-Z

DI r

I

I

ιo,-I I

I

I

I

,(r-l IJ

?

π

I

M

? ■ ? ■ ? IIIA ? 4

IAeItftl ?

只FLl 8FL2 LOg

ItP

S W1

FffC

LlH^ao

g?∕9O1 Md P?l L 3rtDMH3!*l [p5∣pl≡M∩∣Ikd)

Oonl J,∏??01 II-Ij : QnT¢0^ Cfl3i?H≡1Q3 J

[?l1ILdI

901 ≡1 IlgiQI ri>13 :叮in∏ PQ□ CQO J l OP□ E

Ml Ldl

θoι HJ ∏wι >03 εa? E ?)>d)

Sd^S ■ OHT*aj EO□J≡R□ C-

[ρ?F fiu∏l∣ι? ιl

Dlld-&pa D

I Ob E Ob l DP I Db

勺口ι^π?0□ι ?ΠJ口HTel-g EnJ A≡ι^3

3?U∣i jJ

OIH £03

?LJJ ¢33

i p∣?I Ot A Dk

选中cell/ul 即可

活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定

方法

流式细胞仪(BeckmanCoulter ,贝克曼库尔特)

原理:

双/ 三色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中,与白细胞膜上相应的抗原结合,经过溶血、洗涤(和固定)等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,从而得到相应各亚群的百分数。活化淋巴细胞表面抗原为CD3+/CD25+ 和CD3+/HLA-DR+ 。

CD3+/CD45RO+ 是记忆型T 细胞。CD3+/CD45RA+ 是纯真型T 细胞。

标本采集与处理

受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态

采集部位静脉采血

试剂

品牌

剂型 规格

贮存

贝克曼库尔特

成分 1:单克隆抗体 液体

2—8℃

(CD3/HLA-DR No.IM1295 CD25-PC5 No.IM2646 CD3-FITC No.IM1281 CD45RA-PE No.IM1834 CD45RO-PE No.IM1307 CD4-PC5 No.IM2636 )

仪器

BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra

A :

甲酸

液体 70ML 室温 B :

碳酸钠等 液体 32ML 室温 C

多聚甲醛 液体

14ML

室温 (Optilyse C No.IM1401) 液体

室温 3:鞘液 (No.8546859) 液体 20L

室温 4:清洗液

(No.8546930)

液体

5L

室温

5:荧光微球 (No.6605359) 液

体 10ML

2-8 ℃(Flow-Check)

2:全血溶血试剂 (Q-Prep)

液体

(No.7546946)

样本制备:

参考值(百分数)

CD3+/HLA-DR+ 3.1±1.3% CD3+/CD25+ 15.9±3.7%

CD3+/CD45RO+ 3.3±1.55% CD3+/CD45RA+/CD4+ 20.51±3.64%

方案(Protocol ) 同淋巴细胞亚群检测结果(Result )

HLA-B27 测定

相关主题
文本预览
相关文档 最新文档