免疫球蛋白复习题
一、选择题
[A型题]
1.抗体和抗原结合的部位是D
A. 重链的C区
B. 重链的V区
C. 轻链的V区
D. 重链和轻链的V区
E. 重链和轻链的C区
2.血清中含量最高的Iｇ是D
3.关于抗体和免疫球蛋白,以下哪项是正确的? E
A. 免疫球蛋白就是抗体
B. 免疫球蛋白均为抗体,担抗体不一定都是免疫球蛋白
C. 免疫球蛋白与抗体不同也无关
D. 免疫球蛋白均为抗体,但两者特性不同
E. 抗体均为免疫球蛋白,但免疫球蛋白不一定都是抗体
4.脐带血中主要有哪类Ig？B
A. IgD
B. IgM
C. IgG
D. IgA
E. IgE
5.种系发育过程中出现最早的Iｇ是B
6.人类血清中各类Ig所含κ与λ链的比例大约是B
∶1 ∶1 ∶2 ∶1 ∶3
分子的独特型决定簇位于E
A.重链C区
B.轻链C区
C.重链V区
D.轻链V区
E.重链和轻链的超变区
ｇ分子的Fab片段的功能是 D
A.通过胎盘
B.激活补体
C.趋化作用
D.结合抗原
E.结合细胞
9.用绵羊红细胞免疫家兔最早产生的抗体是B
10.下列哪种物质不是抗体?C
A.抗破伤风血清
B.伤寒杆菌诊断血清
C.浆细胞瘤分泌的Ig
D.胎盘球蛋白
E.丙种球蛋白
11.木瓜蛋白酶水解IｇG的产物是C
段段段＋Fc段段(ab′)2＋Fc′
12.胃蛋白酶水解IｇG的产物是E
段+Fc段段段段+Fc段(ab′)2＋pFc′
有几抗原结合位点C
个个个个个
14.人Iｇ分成五类的主要依据是B
A.轻链抗原性
B.重链抗原性
C.二硫键的位置
D.单体数
E.分子量的大小
15.在粘膜局部主要起免疫作用的抗体是C
16.新生儿从母乳中获得的Iｇ是B
17.发生子宫内感染时,新生儿血液中应出现高滴度的C
18.天然血型抗体属于C
19.血清中各类Iｇ的浓度依次是A
A. IｇG＞IｇA ＞IｇM ＞IｇD＞IｇE Ｂ. IｇＭ＞IｇG＞IｇＡ＞IｇＤ＞I ｇＥ
C. IｇG ＞IｇM＞IｇＡ＞IｇＤ＞IｇＥ
D. IｇA＞IｇG＞IｇM＞IｇE＞IｇD
E. IｇＭ＞IｇA＞IｇG＞IｇE＞IｇD
20.免疫球蛋白多肽的可变区为C
端轻链的1/4与重链的1/2 端轻链的1/3与重链的1/4 端轻链的1/2与重链的1/4
端轻链的1/2与重链的1/2 端轻链的1/2与重链的1/3
21.免疫球蛋白多肽的稳定区为 B
端轻链的1/4与重链的3/4 端轻链的1/2与重链的3/4 端轻链的3/4与重链的1/2端轻链的1/2与重链的1/2 端轻链的3/4与重链的3/4
22.关于抗体的作用，下列哪项是错误的C
A.中和外毒素
B.中和病毒
C.清除细胞内寄生菌
D.免疫调理作用
E.参与超敏反应
23.五聚体IｇＭ,一般只有几个结合位点可结合抗原?E
个个个个个
24.具有CH4功能区的Ig分子是A
ｇG和IgA ｇM和IgE ｇM和sIgA ｇD和IgE ｇG和sIgA
25.特定B细胞对抗原的特异性D
A.是通过与抗原的相互作用后诱导的
B.是由L链的氨基酸序列决定的
C.是由同种型类别转换决定的
D.是由mIg的H链和L链的V区序列决定的
E.由H链的恒定区决定的
26.关于抗体，下列哪项是错误的?E
A.抗体是指具有免疫功能的球蛋白
B.抗体主要存在于血液、体液、黏膜表面及分泌液中
C.抗体是能与相应抗原特异性结合的球蛋白
D.抗体都是免疫球蛋白
E.抗体都是体内产生的
27.能与肥大细胞表面FcR结合，并介导I型超敏反应的Ig是C
E. IgG
28.合成SIgA分泌片的细胞是D
A.巨噬细胞
B.血管内皮细胞
C..浆细胞
D.黏膜上皮细胞
E.肥大细胞
29.下列分泌液中不含IgA的是 C
A.唾液
B.初乳
C..汗液
D..肠道分泌液
E.支气管黏液
30.人体内开始合成lgM的时间是B
A.胎儿早期
B.胎儿晚期
C.出生后1个月
D.出生后3个月
E.出生后6个月
31.下列哪种细胞具有IgE FcRB
A.平滑肌细胞
B.嗜碱性粒细胞
C.中性粒细胞
D.单核细胞
E.血管内皮细胞
分子能与细胞表面FcγR结合的区域是E
33.介导NK细胞、巨噬细胞、中性粒细胞发挥ADCC效应的Ig主要是C
C .IgG
的J链的合成细胞是E
A.黏膜下浆细胞
B.淋巴结中的浆细胞细胞 D.巨噬细胞 E.黏膜上皮细胞
35.关于IgG的错误叙述是E
A.可四个亚类
B.可通过胎盘
C.抗原结合价为二价
有补体C1q结合点 E.经木瓜蛋白酶水解后可获得一个F(ab′)2片段
36.关于IgE，下列哪项是错误的?E
A.在五类Ig中含量最低
B.有CH4g功能区
C.可介导I型超敏反应
D.有亲细胞性
E.在种系发育过程中最早发生
[X型题]
1.免疫球蛋白球的功能有
A.激活补体
B.调理作用
C.通过胎盘作用 E.参与超敏反应
存在于
A.血液中
B.尿液中
C.乳汁中
D.唾液中
E.某些细胞的细胞膜上
3.关于IｇE正确的叙述是
A.正常血中含量在五类免疫球蛋白中最低
B.分泌液中含量最大
C.多发性骨髓瘤最为常见
D.和肥大细胞的关系最为密切
E.是种系进化过程中出现最晚的Ig
具有下列哪些特点
A.靶细胞与特异性抗体结合φ、NK细胞、中性粒细胞在特异性抗体介导下杀伤靶细胞
C.对靶细胞的杀伤作用是非特异性的
D.需要补体参与
E.靶细胞上MHC分子参与ADCC
的特性包括
A. 是分子量最大的Ig，称为巨球蛋白
B. 无铰链区
C. 主要在血液中发挥抗感染作用
D. 是最早合成的Ig
E. 激活补体的能力比IgG强
的特性包括
A.性质不稳定，易被蛋白酶降解
B.为未成熟B淋巴细胞的主要标志
C.可以通过胎盘
D.血清IgD的功能尚不清楚
E.多数以多聚体形式存在
的结构包括
A.α链
B.κ或λ链链 E.糖基
能与下列哪些分子结合
γR
9.关于铰链区的叙述，下列哪些是正确的
A.铰链区是Ig的独立功能区、IgE无铰链区 C.富含脯氨酸，易发生伸展及转动
D.对蛋白酶敏感的铰链区位于CH1和CH2之间
10.关于Ig高变区的叙述，下列哪些是正确的
A.氨基酸组成与排列顺序具有高的变化程度
B.在结构上与抗原决定基互补
C.由HVR和骨架区组成
D.是Ig分子独特型决定基主要存在部位链与L链各有4个高变区
11.免疫球蛋白的抗原性包括
A.同种型
B.独特型
C.抗独特型
D.同种异型
E.亚型
12.抗体的调理机制是
A.抗体在抗原颗粒和吞噬细胞间“搭桥”
B.改变抗原表面电荷，降低抗原与吞噬细胞间静电斥力
C.抗体中和抗原表面的抗吞噬物质
D.抗原抗体复合物通过与FcR结合活化吞噬细胞
E.抗体刺激吞噬细胞产生粘附分子
13.关于单克隆抗体，下列哪项是正确的?
A.结构高度均一
B.特异性强，极少或不发生交叉反应
C.一种单克隆抗体，只能识别一种抗原表位
D.一种单克隆抗体，其独特型可以不同
E.单克隆抗体是由骨髓瘤细胞产生的
14.关于IgM的生物学功能，下列哪些是正确的?
A.在机体早期免疫防御中起重要作用
B.初次免疫接种后最先产生的抗体
淋巴细胞抗原受体的重要成分 D.数抗菌、抗病毒、抗毒素抗体都属于IgM E.能激活补体
二、填空题
1.五类Ig分别称为、、、、
；其H链分别是、、、、
链。
ｇ的血清型分为、、.
3.五类Ig的轻链均有两种型即型和型。
在血清中大多数以形式存在，少数以形式存在；而出现在外分泌液中的SIgA，则以形式存在。
5.基因工程抗体类型包括、、、
等．
三、名词解释
1.抗体ｇ 3.同种型4同种异型 5.独特型 6.多克隆抗体7.单克隆抗体
8.基因工程抗体
四、问答题
1.简述Iｇ的基本结构、功能区及功能.
2.试分析独特型、超变区、抗原结合部位的关系.
3.抗体具有哪些生物学活性?
4.抗体与免疫球蛋白是怎样的关系?
5.经木瓜酶和胃蛋白酶水解后,水解片段的特点有何异同?
与IgG结合抗原激活补体的能力哪一个更强些？为什么？
7.试比较单克隆抗体及多克隆抗体的不同?
参考答案
一、选择题：
A型题 1-15 DDECB BEDBC CECBC 16-30 BCCAC BCDBD ECDCB 31-36 BECAEE
X型题
二、填空题：、IgG、IgM、IgD、IgE、α、γ、μ、δ、ε 2.同种型、同种异型、独特型
3.κ、λ
4.单体、双体、双体
5.人-鼠嵌合抗体、人改型抗体、小分子抗体、双特异性抗体
三、名词解释：
1.抗体：是能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白，是机体免疫系统受抗原物质
刺激后，B淋巴细胞被活化、增殖、分化为浆细胞合成和分泌的球蛋白。
：具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白。
3.同种型：在同一种属中每个个体都具有的免疫球蛋白的抗原特性，称同种型。同种型免疫球蛋白抗原特异性因种而异，主要存在于Ig的C区。
4.同种异型：同一种属不同个体之间，免疫球蛋白也具有特异性不同的抗原决定基，因而出现同种异型抗原特异性。
5.独特型：在同一个体内，不同B细胞克隆所产生的Ig分子V区有不同的抗原特异性，由此而区分的型别称为独特型。
6.多克隆抗体：是用抗原物质免疫动物，刺激产生多种抗体形成细胞克隆，由其合成、分泌抗各种抗原决定基的抗体，所以多克隆抗体是由识别抗原分子上各种抗原决定基的多种抗体组成的混合制剂。
7.单克隆抗体：是由B淋巴细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子上一种特定的抗原决定基的纯抗体。不仅在抗体的特异性上是均一的，在类、亚类、型、亚型以及亲和力等都是均一的。
8.基因工程抗体：借助DNA重组技术和蛋白质工程技术，按人们的意愿在基因水
平上对Ig进行切割、拼接或修饰，重新组装成为新型抗体分子，称为基因工程抗体。
适应性免疫应答细胞：B淋巴细胞复习题
一、选择题
[A型题]
1. B细胞具有的特征是
受体受体
2. B细胞约占外周血中淋巴细胞总数的
% ～15% % ～25% % ～35% % ～45% % ～55%
3．与mIg共同组成BCR复合物的是
A. CDl9和CD21 B．CD28和CDl52 C．CD79a和CD79b D．CD80和CD86 E．CD40和CD40L 4．鉴别B-1细胞和B-2细胞的主要表面标志是
A．CD4 B．CD8 C．CD5 D．CD28 E．CD40
5. B细胞上的EB病毒受体是
A．CD5 B。CDl9 C．CD22 D．CD21 E．CD35
6．恒定地表达于成熟B细胞上的协同刺激分子是
A．CD40 B．CD40L C CDl52 D．CD28 E．CD5
7．B-1细胞接受碳水化合物刺激后，产生的抗体主要是
A. 高亲和力IgG类抗体
B. 高亲和力IgM类抗体
C. 低亲和力IgG类抗体
D．低亲和力IgM类抗体E．低亲和力IgA类抗体
8．B细胞作为APC可藉其表面的BCR结合
A. 可溶性抗原B．病毒抗原 C. 颗粒性抗原D．各种抗原E．细菌抗原
9．可刺激成熟B细胞增殖和(或)分化的细胞因子是
A．IL-12 B．IL-8 C．TGF-β D. G-CSF E．IL-4
10．不成熟B细胞表达的mIg主要为
A．mlgA B．mlgM C，mlgD D．mlgG E．mlgE
[X型题]
淋巴细胞摄取抗原的方式有：
A.通过BCR直接摄取
B.吞噬
C.胞饮作用
D.被动吸附
E.调理作用
2．B细胞辅助受体包括
A，CDl9 B．CD21 C CD25 D．CD225 E．CD86
3．Igα和Igβ异源二聚体的主要功能是
A. 识别和结合抗原B．转导抗原与BCR结合后产生的信号 C. 产生协同刺激信号
D．B细胞活化的辅助受体E．参与Ig从胞内向胞膜的转运
4．B1细胞主要存在于
A. 腹膜腔B．肠道固有层 C. 淋巴滤泡D．胸膜腔E．扁桃
体
5. B细胞的功能是
A. 产生抗体B．提呈抗原 C.参与细胞免疫 D. 参与免疫调节E．发挥细胞毒作用
6．与CD28结合的CD分子是
A．CD40 B．CD80 C．CD86 D．CD2l E．CDl52
7．与B细胞活化第二信号产生有关的膜表面分子是
A．CD40 B．CD40L C．CD28 D．CD80 E．CD86
8．成熟B细胞表达的mlg主要为
A．mlgA B．mlgM C mlgD D．mlgG E．mlgE
二、填空题1.参与特异性免疫的细胞包括___________、____________和_____________。
三、名词解释1. BCR复合物
四、问答题1．试述B细胞表面的重要分子及其作用。
参考答案
一、选择题A型题1-10 EACCD ADAE B
X型题2．ABD 3．BE 4．ABD 5．ABD 6. BC 7．AB 8．BC
二、填空题
细胞、B细胞、抗原提呈细胞
三、名词解释
1．BCR复合物：即B细胞抗原受体(BCR)复合物，是B细胞表面最主要的分子。BCR复合物由识别和结合抗原的膜免疫球蛋白(mIg)和传递抗原刺激信号的Igα(CD79a)和Igβ(CD79b)异源二聚体组成。mIg主要功能是结合特异性抗原。Igα和Igβ也属于免疫球蛋白超家族成员，主要功能是作为信号转导分子转导抗原与BCR结合产生的信号，参与Ig从胞内向胞膜的转运。
适应性免疫应答细胞：T淋巴细胞复习题
一、选择题
[A型题]
和CD4分子存在于
和Tｃ细胞Ｂ.Tｈ1和Tｈ2细胞和B细胞细胞 E.所有T细胞
分子存在于
ｈ和TD细胞表面ｈ和Tｃ细胞表面ｃ细胞表面 D.所有成熟T细胞表面细胞表面
细胞约占外周血中淋巴细胞总数的
%～55% %～65% %～75% %～45% %～85%
细胞约占胸导管内淋巴细胞总数的
A.>55%
B.>65%
C.>75%
D.>85%
E.>95%
细胞的功能不包括下列哪项?
A.免疫辅助功能
B.免疫抑制功能
C.细胞因子分泌功能
D.免疫记忆功能
E.吞噬功能
识别抗原的信号传递是通过
α、Igβ
7．所有T细胞特征性标志是
A．BCR B．CD2 C．CD4 D．CD8 E．TCR
8．T细胞活化的第二信号产生是
A. CD8与MHC-I类分子作用
B. CD4与MHC-Ⅱ类分子作用C．CD40与CD40L之间作用D．CD28与B7分子之间的作用E．CDl52与B7分子之间的作用
9．HIV壳膜蛋白gpl20受体是
A．CD2 B．CD3 C．CD4 D．CD8 E．CD25
10．CD4分子与MHC-Ⅱ类分子结合的区域是
A. α1功能区
B. β1功能区
C. α2功能区
D. β2功能区
E. α3功能区
11．与MHC-I类分子结合增强T细胞和靶细胞之间相互作用的CD分子是
A. CD3 B．CD4 C．CD8 D．CD28 E．CD40
12．胞质区含有ITIM，与B7结合后终止T细胞活化的CD分子是
A．CD3 B．CD28 C．CD4 D．CD8 E．CDl52
13．可促进Thl细胞进一步分化，同时抑制Th2细胞增生的细胞因子是
A．IL 2 B．IL-4 C．IFN-γD．TNF-βE．IL-13
14．关于TCRγδT细胞，描述错误的是
A. 不受MHC限制B．受体缺乏多样性C多为CD4—CD8—细胞D．识别非肽类分子
E．主要分布在外周血
15．CD8分子与MHC-I类分子结合的区域是
A.α1功能区
B. β1功能区
C.α2功能区
D.α2功能区E．α3功能区
16．细胞免疫应答引起的炎症反应主要由
A. Thl细胞分泌的细胞因子引起B．Th2细胞分泌的细胞因子引起 C. Th3细胞分泌的细胞因子引起
D．Trl细胞分泌的细胞因子引起E．CTL分泌的穿孔素引起
[X型题]
1.能杀伤靶细胞的细胞包括：
细胞 D.巨噬细胞细胞
2.能特异性识别抗原的细胞是：
细胞细胞 C.巨噬细胞 D.树突状细胞 E.中性粒细胞
3.淋巴结中可捕获抗原的细胞是
淋巴细胞细胞 C.巨噬细胞 D.树突状细胞细胞
淋巴细胞的生物学活性包括
A.介导细胞免疫
B.辅助体液免疫 D.参与免疫调节
5．T细胞的辅助受体
A．CD2 B．CD3 C．CD4 D．CD8 E．CD28
6．非特异刺激T细胞增殖的物质是
A．植物血凝素 B. 脂多糖 C. 刀豆蛋白 A D．美洲商陆E．葡萄球菌A蛋白
7．T细胞表面介导细胞间黏附的表面分子包括
A．CD2 B．ICAM-1 C．LFA-1 D. ISCO E．CDl52
8．CD8+CTL细胞直接杀伤靶细胞的机制是
A．分泌穿孔素 B. 颗粒酶 C. 淋巴毒素 D. 诱导靶细胞凋亡E．ADCC
9．Thl细胞通过分泌IL-2、IFN-γ等发挥其效应功能包括
A. 介导细胞免疫应答
B. 参与迟发型超敏反应
C. 抗细胞内寄生虫感染
D．参与器官特异性自身免疫性疾病E．介导体液免疫应答
10．通过FasL／Fas途径诱导细胞凋亡的细胞是
A. 活化的巨噬细胞B．NK细胞 C.活化的Th2细胞D．效应CTL E．活化的B细胞
11．细胞间相互作用受MHC限制的是
A. Th细胞与巨噬细胞B．NKT细胞与靶细胞 C. 活化的巨噬细胞与靶细胞D．CTL与肿瘤细胞
E．活化的巨噬细胞与B细胞
12．Th2细胞通过分泌IL-4、IL-5、IL-6等细胞因子发挥其效应功能包括
A. 介导体液免疫应答B．参与过敏性疾病 C. 介导细胞免疫应答D．抗寄生虫感染
E. 参与迟发型超敏反应
二、填空题淋巴细胞功能亚群包括__________、____________和____________等。
三、名词解释1. CTL 2. TCR. 5.粘膜伴随淋巴组织
四、问答题
1. T细胞表面重要的分子有那些及其功能?
2. 简述T淋巴细胞的亚群及其功能？
3. B细胞亚群的分类及区别。 4．简述T细胞辅助受体及其主要功能
参考答案
一、选择题
A型题1-16 BCCEE BEDCD CECEEA X型题5．CD 6．ACD 11．AD 12．ABD
二、填空题、Tc、Tr
三、名词解释 1. CTL：即细胞毒性T细胞，可介导细胞免疫应答，在抗病毒和抗肿瘤中起作用。
2. TCR：即T细胞抗原受体，是T细胞表面特异性识别抗原的结构。有两类TCRαβ，TCRγδ。
膜表面免疫球蛋白，是B细胞抗原受体，可特异性地识别抗原，也是鉴别B细胞的主要标志。4．APC：具有摄取、处理和传递抗原信息，诱导淋巴细胞发生免疫应答作用的细胞称为抗原递呈细胞。包括单核-巨噬细胞、树突状细胞、内皮细胞、B细胞等。
5.粘膜伴随淋巴组织：指存在于呼吸道、消化道和泌尿生殖道粘膜上皮下的散在淋巴组织和一些带有淋巴滤泡的器官化的淋巴组织。
主要组织相容性复合体及其编码分子复习题（免疫）
一、选择题
[A型题]
1．人或动物体内代表体特异性的能引起强烈而迅速排斥反应的抗原系统是
A. 组织相容性抗原
B. 移植抗原
C. 白细胞抗原
D. 主要组织相容性抗原
E. 主要组织相容性复合体
2．APC呈递外源性抗原的关键性分子是
A. MHC-I类分子
B. CD1分子
C. MHC-Ⅱ类分子
D. 粘附分子
E. MHC-Ⅲ类分子
3．一般来说，与靶细胞呈递内源性抗原有关的分子是
A. MHC-I类分子
B. MHC-Ⅱ类分子
C. CD1分子
D. 粘附分子
E. MHC-Ⅲ类分子
4. 关于MHC-I类分子的叙述，下列哪项是正确的
A. 主要存在于APC表面
B. HLA I类分子由人第6号染色体短臂上HLA复合体编码
C. 2条多肽链均为MHC编码
D. 参与B淋巴细胞的发育
E. 以上均是
5. 下列哪些细胞间相互作用受MHC-Ⅱ类分子限制
A. NK细胞杀伤肿瘤细胞
B. APC呈递抗原给Th细胞
C. Mφ吞噬靶细胞
D. Tc细胞杀伤靶细胞
E. B淋巴细胞识别外来抗原
6. HLA I类分子肽结合槽可容纳
A. 6～8个氨基酸残基
B. 8～10个氨基酸残基
C. 10～12个氨基酸残基
D. 12～14个氨基酸残基
E. 14～16个氨基酸残基
7. HLAⅡ类分子肽结合槽可容纳
A. 6～8个氨基酸残基
B. 8～10个氨基酸残基～13个氨基酸残基
D. 13～17个氨基酸残基
E. 17～25个氨基酸残基
8. 静止T淋巴细胞表达哪类MHC分子
A. 只表达MHC-I类分子
B. 只表达MHC-Ⅱ类分子
C. 同时表达MHC-I、Ⅱ类分子
D. 同时表达MHC-I、Ⅲ类分子
E. 同时表达MHC-Ⅱ、Ⅲ类分子
9. 关于MHC限制性的叙述，下列哪项是正确的
A. 是指TCR在识别抗原肽的同时必须识别自身MHC分子
B. Tc-靶细胞、Mφ-靶细胞间相互作用受MHC-I类分子限制
C. APC-Th、TH-B间相互作用受MHC-Ⅱ类分子限制
D. T淋巴细胞在胸腺内经过阴性选择获得MHC限制性
E. T淋巴细胞在识别同种属细胞的非己MHC抗原时也受MHC限制
10. 活化的T淋巴细胞表达哪类MHC分子
A. 只表达MHC-Ⅱ类分子
B. 只表达MHC-I类分子
C. 同时表达MHC-I、Ⅱ类分子
D. 同时表达MHC-I、Ⅲ类分子
E. 同时表达MHC-Ⅱ、Ⅲ类分子
11. 关于MHC的叙述，下列哪项是错误的
A. 人HLA复合体是位于第6号染色体短臂上一群紧密连锁的基因群
B. 编码的产物参与移植物排斥反应
C. 参与免疫应答及免疫调节
D. 不同种属的哺乳类动物其MHC有不同的命名
E. MHC分子实质上是异嗜性抗原
12. 下列哪项不是MHC基因编码的产物
A. MHC-I类分子α链
B. MHC-Ⅱ类分子α链类分子β链 D. MHC-Ⅱ类分子β链
E. C2、C4分子
13. HLAⅡ类分子表达于
A. 红细胞表面
B. 有核细胞和血小板表面
C. 神经细胞表面
D. 肥大细胞表面
E. 树突状细胞表面
14. 强直性脊柱炎病人中,90%以上具有
A. HLA-CW6
B. HLA-B7
C. HLA-B8
D. HLA-B27
E.
HLA-B35
15. 细胞癌变时,其表面HLA发生的变化是
A. I类分子表达缺失
B. I类分子表达增加
C. Ⅱ类分子表达缺失
D. Ⅱ类分子表达增加
E. I类和Ⅱ类分子表达缺失
16. 与Tc细胞表面CD8分子结合的部位是
A. MHC-I类分子轻连
B. MHC-Ⅱ类分子α1β1功能区
C. MHC-Ⅱ类分子α2β2功能区
D. MHC-Ⅰ类分子重链α1α2功能区
E. MHC-Ⅰ类分子重链α3功能区
17. 与Th细胞表面CD4分子结合的部位是
A. MHC-I类分子α1、β1功能区
B. MHC-Ⅱ类分子α1、β1功能区
C. MHC-I类分子α3功能区
D. MHC-Ⅱ类分子β2功能区
E. MHC-I类分子轻链
18. 关于MHC-I类分子的功能，下列错误的是
A. 为CD8+杀伤性T细胞的识别分子
B. 诱导对病毒感染细胞的杀伤
C. 诱导对肿瘤细胞的杀伤
D. 参与内源性抗原递呈
E. 参与外源性抗原递呈
19. 关于MHC-Ⅱ类分子的功能下列哪项是错误的
A. 参与免疫应答调节
B. 诱导对病毒感染细胞的直接杀伤
C. 参与外源性抗原递呈
D. 为CD4+辅助性T细胞的识别分子
E. 参与同种移植物排斥反应
20. MHC限制性表现于
A. NK细胞的杀伤作用
B. ADCC
C. 补体依赖细胞毒作用
D. T细胞与其他细胞互相作用
E. B细胞对TI抗原的应答
21. 对HLA基因复合体描述错误的是
A. 位于第6号染色体短臂B．专门编码人类白细胞抗原C．Ⅰ类基因包括A、B、C三个座位D．Ⅱ类基因由DP、DQ、DR三个亚区组成E. 每个Ⅱ类基因亚区又有二个或二个以上功能基因座位22．不属于MHC经典I类和Ⅱ类基因的是
A．HLA-A B．HLA-B C．HLA-C D．HLA-DR E. HLA-E
23．MHC分子中不构成Ag结合槽的结构域是
A. I类分子的α1
B. I类分子的α2
C. I类分子的α3
D. Ⅱ类分子的
αl E．Ⅱ类分子的β1
24．对MHC中LMP基因描述错误的是
A. 即低分子量多肽基因B．包括LMP2和LMP7两个座位C. 编码胞质溶胶中蛋白酶体相关成分
D．在APC中参与对内源性Ag的酶解 E．在APC中参与对外源性Ag的酶解
25．对MHC的TAP分子描述错误的是
A. 即抗原加工相关转运体B．为内质网上一个异二聚体分子
C. 双链分别由TAPi和TAP2两个座位基因编码
D．使内源性抗原肽从胞质溶胶进入内质网腔与MHCI类分子结合
E．使外源性抗原肽从胞质溶胶进入内质网腔与MHCII类分子结合
26．对内源性抗原作用的MHC抗原加工提呈相关基因是
A. LMP基因B．TAP基因 C. tapasin基因 D. 上列A和B两项E．上列A、B和C三项
27．对外源性抗原作用的MHC抗原加工提呈相关基因是
A. LMP基因和TAP基因B．LMP基因和tapasin基因 C. TAP基因和tapasln基因
D．HLA-DM基因和HLA-DO基因 E．HLA-DM基因和TAP基因
[X型题]
1. 编码HLA-I类分子的基因位点包括
A. HLA-A位点
B. HLA-B位点
C. HLA-C位点
D. HLA-D位点
E. HLA-F位点
2. 编码HLA-Ⅱ类分子的基因位点包括
A. HLA-A、HLA-B、HLA-C
B. HLA-DR
C. HLA-DP
D. HLA-Bf
E. HLA-DQ
3. 关于HLA的特性，下列哪些是正确的
A. HLA-I类分子的β2-m为非HLA基因编码产物
B. 分析亲代与子代的HLA表型可以进行亲子鉴定
C. HLA分子与很多疾病相关
D. HLA分子的肽结合区是肽链的多态性部位
E. HLA分子是引起移植物排斥反应的抗原
4. HLA分子结构包括下列哪些区域
A. 肽结合区
B. 免疫球蛋白样区
C. 胞外区
D. 跨膜区
E. 胞浆区
5. HLA-I类分子表达在哪些细胞表面
A. 所有有核细胞表面
B. 血小板
C. 网织红细胞
D. 成熟滋养层细胞
E. 神经细胞
6. HLA-Ⅱ类分子表达在哪些细胞表面
A. Tc细胞
B. B淋巴细胞
C. Mφ
D. 树突状细胞
E. 活化的Th细胞
7. MHC是
A. 主要组织相容性复合体的英文字头缩写
B. 特定染色体上一个DNA区段
C. 包含多个基因座位D．专司移植物的排斥E．专司外来抗原的提呈
8．MHC多样性是因其有
A. 多基因性B．多染色体性C多细胞性D．多态性E．多功能性
9. 经典的MHCⅠ类和Ⅱ类基因
A．产物有Ag提呈功能B．显示极为丰富的多态性
C. 直接参与T细胞的激活和分化D．调控免疫应答E．主要功能是决定移植物排斥
10. MHC免疫功能相关基因包括
A. 经典Ⅲ类基因B．抗原加工提呈相关基因 C. 非经典I类基因D．炎症相关基因
E．疾病易感或抵抗基因
11．对经典的HLA I类分子描述正确的是
A. 由α链和β2-m构成异二聚体B．I类基因仅编码α链 C．β2-m编码基因在15号染色体
D．表达在所有有核细胞表面 E．抗原结合槽两端开放
12．对经典HLAⅡ类分子描述正确的是
A. 是有α链和β链的异二聚体B．DRα-DRβ对应于小鼠的Eβ—Eα
C．DQα—DQβ对应于小鼠的Aβ—Aα D. DPα-DPβ在小鼠无对应物 E．抗原结合槽两端封闭
13. 对HLAⅠ类和Ⅱ类等位基因产物表述正确的是
A. 具有共显性B．I类分子表达于所有有核细胞表面 C．Ⅱ类分子仅表达于淋巴样组织中的细胞
D．同源染色体对应座位上两个等位基因不同时表达 E．只有在外来抗原存在时才表达
14．对经典HLAⅡ类分子描述正确的是
A. α、β链各有二个胞外结构域B．α1和β1共同形成Ag结合槽 C. α2和β2为IgSF 结构域
D. 有DR、DQ和DP三类 E．表达在所有有核细胞表面
15．对MHC的LMP基因描述正确的是
A. 包括LMP2和LMP7两个座位 B．编码胞质溶胶中蛋白酶体相关成分
C. 产物在APC中参与对内源性抗原的酶解
D. 产物在APC中参与对外源性抗原的酶解
E．产物为内质网膜上一个二聚体分子
二、填空题
分子根据其结构、功能及分布可___________、___________。
复合体Ⅰ类基因位点包括__________、_________、________和________；Ⅱ类基位点包括______、_______、________以及_________。
Ⅲ类基因产物主要有__________、_____________、___________、___________和___________等。
Ⅰ类分子的________区是结合抗原的部位，___________区是与T细胞表面CD8分子
结合的部位；HLA-Ⅱ类分子的________区是结合抗原的部位，_________区是与T细胞表面CD4分子结合的部位。
三、名词解释分子限制性
四、问答题 1. 试述HLA在医学上的意义. 2. HLA-Ⅰ类与Ⅱ类抗原在结构、分布上有何不同？ 3. 试述人类主要组织相容性抗原的主要功能。 4. 何为MHC限制性?在免疫应答中MHC分子是如何发挥其限制性的? 5. 何谓HLA基因复合体的多基因性和多态性？
参考答案
一、选择题
A型题1-15 DCABB BDAAC ECEDA 16-27 EDEBD BECEE ED
X型题7．ABC 8．AD 9．ABCD
10．ABCD 11．ABCD 12．ABCD 14．ABCD 15．ABC
二、填空题1.Ⅰ类、Ⅱ类、C、A、非典型HLA-Ⅰ类基因(E、F、G) DP、DQ、DR、非典型HLA-Ⅱ类(DN) ?、C2?、B因子、TNF、HSP 4.α1α2、α3、α1β1、β2
三、名词解释
：即主要组织相容性复合体，是位于脊椎动物某对染色体特定区域、紧密连锁的基因群，其编码产物主要分布在细胞膜表面，称MHC分子或MHC抗原。
分子：即主要组织相容性抗原，是MHC基因编码的产物，主要分布在细胞膜表面。
限制性：在免疫应答过程中，相关免疫细胞只有识别自身的MHC分子的一致性，才能彼此协作，发挥效应。：即人类白细胞抗原，是人类主要组织相容性抗原。编码HLA抗原的MHC又称为HLA复合体，位于人类第6号染色体短臂。
刚开始接触western，看了很多和内参有关的资料，越来越迷惑。 请教园子里的高手：1 内参的主要作用是什么，是必须的吗? 2 内参是和样品一起加，还是单独加，抗体孵育时是分着加，还是一起，条件一致吗？3 单是证明是否样品中存在某蛋白，不用内参可以吗？ 请赐教！ 1、在实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确；或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的 操作误差；这些误差需要通过测定每个样品中实际转到膜上的GAPDH 的含量来进行校正，所以一般的western实验都需要进行内参设置。具体校正的方法就是将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH 含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量。然后才进行样品与样品之间的比较。 所以有时候要用内参 2、和一抗一起加，按照内参的比例加 3、可以不用加内参 1.内参是样品中本身就有的，有其一定的分子量。一抗.二抗时得分开孵育。 2.只是定性的话不需要加内参 Western Blot除了能证明某样品中含有某种蛋白之外，其最为重要的作用是比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少。即为蛋白表达水平最直接的证据。 要衡量蛋白的表达水平，前提条件就是等量的上样量。内参的意义就是保证上样量的一致。内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。如果内参的条带亮度基本一致，那么就可以认为上样量也基本一致。 常用的蛋白质内参有GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）和细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin。最近发现tubulin的表达水平比其它看家基因更加恒定。因此人们越来越多的使用tubulin做为内参。 在Western Blotting实验过程中使用内参的方法有： 一、超级简便的标记内参使用法：只要在二抗孵育时加入HRP标记内参抗体，按照正常操作即可。 二、普通内参：当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时，可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测。然后使用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体，重新进行内参蛋白的抗体温育、显色检测。 三、（也是我们实验室用的方法）当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下，可以在转膜后预染，根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分，使内参蛋白与目的蛋白分开。然后两块膜分别与内参蛋白抗体以及目的蛋白抗体进行温育，二抗温育以及显色。 很感谢大家的帮助，现在总算明白了一些
要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定*分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳*啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活*的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定*的。所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量Marker（用来确定蛋白条带对应的分子量大小），空白载体对照（如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照），已知量标准产物的正对照；另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因，国内的不少人做Western Blot往往省略参照，导致结果出现问题时无法分析结果――即便有结果也可能影响结果的分析。 内参是最容易被忽略的一项。我们知道，要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。 内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要进行内参的检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确*。 在国外发表的文章中，Western Blotting 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是，国内仍有不少科研人员在Western Blotting实验中忽略了内参的使用，将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法。然而各种蛋白质浓度定量方法，都存在局限*，不能完全准确的确定各种样品的准确蛋白浓度。如UV法直接定量，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质，相对于比色法来说，操作简单，但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；且敏感度低，要求蛋白的浓度较高。比色法测定蛋白浓度一般有BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。BCA法与Lowry法都容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。Bradford 法敏感度最高，且与一系列干扰Lowry，BCA 反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的，其最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比*。另外，蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样，此步骤也存在操作误差。在Western blotting 实验时使用内参，即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。 在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。 实验结果分析其实很简单：如果样品蛋白量有限，只够进行一次电泳转膜实验时，分别检测样品的内参量和目的蛋白量。将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量，得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，再用此数值进行样品间的比较和分析，得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果。如果样品量充分，可以先检测内参，观测样品间内参显色条带是否一致，根据差异大小调整各样品的上样量重新进行Western Blotting实验，至内参量一致为止；若内参一致，即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。这样虽然麻烦一点，但是可以保证结果更有说服力，更可信。毕竟我们的实验是一种严谨的工作。
Western Blot内参选择 要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。 虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。 良好的参照体系通常包括分子量Marker(用来确定蛋白条带对应的分子量大小)、空白载体对照(如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照)、已知量标准产物的正对照，另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因，国内的不少人做Western Blot往往省略参照，导致结果出现问题时无法分析结果，即便有结果也可能影响结果的分析。 内参即是内部参照(Internal Control)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要进行内参的检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。 实际上内参是最容易被忽略的一项。我们知道，要用Western Blot 比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础，特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析，所以需要内参。在国外发表的文章中，Western Blotting 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是，国内仍有不少科研人员在Western Blotting实验中忽略了内参的使用，将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法。
甲状腺球蛋白抗体(TGAb) 甲状腺球蛋白抗体是自身免疫性甲状腺疾病病人血清中的一种常见自身抗体，具有高度种属特异性，是诊断自身免疫甲状腺疾病常用指标。TGAb的靶抗原是甲状腺球蛋白，甲状腺球蛋白是甲状腺组织的主要蛋白成分，占总蛋白70%～80%。它主要由IgG1、IgG2和IgG4组成，少部分为IgA和IgM。一般认为TGAb对甲状腺无损伤作用。体外实验证实TGAb也在抗体依赖的细胞介导细胞毒性作用(ADCC)中起一定作用。TGAb与甲状腺球蛋白结合后，可通过Fc受体与结合的抗体相互作用激活NK细胞，而攻击靶细胞，导致甲状腺细胞破坏。TGAb还影响TG抗原的摄取、加工，催化TG水解，因而可以影响非显著性T细胞抗原决定簇的自身免疫反应，从而导致自身免疫性甲状腺疾病（autoimmune thyroidism disease，AITD）发生恶化。 正常参考值：< 30％ 临床意义：TGAb是甲状腺滤泡胶质内的甲状腺球蛋白(TG)进入到血液后产生的抗体，是非补体结合性抗体。血清TGAb是诊断甲状腺自身免疫性疾病的一个特异性指标，桥本病(HT)及桥本GD患者可明显升高、GD和原发性甲减亦可见到升高，桥本甲状腺炎患者血清中TGAb检出率可达90%～95%;甲状腺功能亢进患者检出率40%～90%不等，检出率高的可能与部分病例属于桥本甲亢有关；但桥本GD与GD之间的升高幅度常有重叠，因此，要鉴别GD是否有并发HT 有一定的难度，需结合临床表现，必要时行针刺组织学或细胞学检查;原发性甲状腺功能低下症患者检出率65%左右。此外，甲状腺癌及部分自身免疫性疾病如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等亦可见升高,SLE等结缔组织病患者血清ATG检出率20%～30%。TGAb可作为甲状腺肿块鉴别诊断的指标，其阳性一般考虑为慢性淋巴细胞性甲状腺炎，而非甲状腺肿块。在正常人中，尤其是女性和老年人，约有2～10%可检出阳性结果，一般可提示为遗传易感性个体。正常妇女，随着年龄的增长，TGAb阳性检出率增加，40岁以上可达18%，这可能是自身免疫性甲状腺疾病的早期反应。 TGAb阳性尤其高水平阳性者，对治疗方法的选择应慎重。对部分TGAb低水平阳性者作甲状腺活检研究发现，这类患者甲状腺组织中均有局限性的淋巴细胞浸润。甲状腺功能亢进病人在治疗过程中，会发生一过性的甲状腺功能低下，此情况的发生，与TGAb密切相关。 值得注意的是：分泌TGAb的B淋巴细胞主要存在于甲状腺内，当甲状腺内TGAb 积累至一定浓度时，不仅TG分解增加，也可导致其他与TG无关的蛋白发生水解，从而可能造成全身性的蛋白分解作用增强及组织损害。 需检测人群：心悸、胃纳明显亢进，但体重下降，疲乏无力，怕冷、皮肤干燥少汗、泛黄、粗糙、发凉等人。 甲状腺微粒体抗体(TMAb) TMAb是由甲状腺微粒体抗原(TM)刺激产生，TM存在于甲状腺上皮细胞胞浆内，是一种补体结合性?IgG。在某种因子刺激下，TM进入血循环，形成一种特异性抗原，并产生TMAb。TMAb的临床意义与TGAb相同，但阳性检出率较TGAb高，二者联合检测可提高阳性率。近年的研究认为，TMAb就是甲状腺过
https://www.doczj.com/doc/6e4458847.html, GAPDH内参抗体，抗GAPDH单抗，GAPDH小鼠源单克隆抗体 Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody （ 2B5） 在Western Bloting实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确，或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参，比如内参GAPDH的含量来进行校正。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。 GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。 应用类型：WB（1:1000-1:10,000）、IHC（1:100-1:800） Fig.Western blot analysis (1:10,000) of GAPDH expression in Rat brain (lane A), HeLa cell lysate (lane B), Mouse brain (lane C), Rabbit muscle (lane D), Chicken muscle (lane E) and Pig heart (lane F) with Anti-GAPDH mouse monoclonal antibody (2B5).
https://www.doczj.com/doc/6e4458847.html, 免疫原：KLH偶联的GAPDH部分多肽序列 来源宿主：小鼠 反应性：该GAPDH内参抗体可识别人、小鼠、兔、大鼠、猴、狗、鸡、猪和绵羊等种属的GAPDH蛋白。 保存建议：能在-20℃保存1年。为最大限度的避免损失，请在打开管盖之前融化抗体并离心。建议使用前分装以避免反复冻融，分装后可在4℃保存1个月。 GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。因为GAPDH 作为看家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。 如何选择合适的GAPDH抗体？ 内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。首先，需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于GAPDH的检测分子量大约在36kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测30kD-40kD大小目标蛋白的WB实验中。另外，不同的组织来源的样本在选择内参时还有一定的区别。比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参。
常用免疫学检验技术的基本原理 免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答，在生物体内产生特异性和非特异性T 细胞的克隆扩增，并分泌特异性的免疫球蛋白（抗体）。由于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点，这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白（抗原或抗体）。免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。 最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩散，通过观察抗原－抗体相遇时产生的沉淀反应，检测抗原或抗体，最终达到诊断的目的。这种扩散可以是蛋白的自然扩散，例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散实验。单向免疫扩散试验就是在凝胶中混入抗体，制成含有抗体的凝胶板，而将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内，让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散，当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比。 利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性，可以利用人为的电场将抗原、抗体扩散，例如免疫电泳试验和双向免疫电泳。免疫电泳首先将抗原加入凝胶中电泳，将抗原各成分依次分散开。然后沿电泳方向平行挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原的混合抗体，让各抗原成分与相应抗体进行自然扩散，形成沉淀线。然后利用标准的抗原－抗体沉淀线进行抗原蛋白（或抗体）的鉴别。上述的方法都是利用肉眼观察抗原－抗体反应产生的沉淀，因此灵敏度有很大的局限。比浊法引入沉淀检测产生的免疫比浊法就是利用浊度计测量液体中抗原－抗体反应产生的浊度，根据标准曲线来计算抗原（或抗体）的含量。该方法不但大大提高了检测的灵敏度，且可对抗原、抗体进行定量的检测。
免疫系统：参与免疫反应的器官、组织和细胞统称为免疫系统。包括： 1. 中枢免疫器官：胸腺，骨髓，禽类的“腔上囊”，及其类同器官。2. 外周免疫器官：脾脏和淋巴结，如扁桃体、阑尾、肠道集合淋巴结、消化道和呼吸道粘膜下层的淋巴小结及全身各处弥散的淋巴结是T 细胞和 B 细胞定居的场所。3. 参与免疫反应的细胞：（ 1 ）吞噬细胞，（ 2 ）免疫活性淋巴细胞：T 细胞、 B 细胞、NK 细胞、K 细胞 抗体什么叫：机体接受抗原刺激后，在体液中出现的特异性免疫球蛋白叫做抗体 免疫是指机体识别和消除异物的功能。免疫功能与疾病的主要关系：免疫防御功能抵抗病原微生物过敏或反复感染免疫监视功能消除机体突变的细胞恶性肿瘤自我稳定功能消除衰老、死亡和受损的细胞自身免疫病以上三种功能的完整性是机体正常的基本保证，其中任何一个成分的缺失或功能不全、都可引发疾病 SM 是一位病人名字的缩写，在这位诊断为红斑狼疮的病人血清中，首次找到了这种抗体而命名。抗SM 抗体是诊断红斑狼疮的特异性抗体，其阳性率占30% ，具有辅助诊断意义，但与疾病的活动无关 抗双链DNA 抗体又称为抗天然DNA 抗体，是抗核抗体的一种类型，它在红斑狼疮的发病中起一定的作用。一般认为抗双链DNA 的效价与病情相平行，即病情活动时，抗（DNA ）抗体效价升高，病情缓解时，效价降低 抗核抗体（ANA ）是参与细胞核或者核的组成成分（DNA ）反应的自身抗体，主要出现在红斑狼疮等一类自身免疫病中，是诊断红斑狼疮的主要手段之一，但是偶尔也可以在老年人和使用某些药物后出现ANA 阳性，但效价很低 抗Rib-P抗体：抗核糖体P蛋白抗体主要见于SLE，常在SLE活动期中存在，阳性率在10%～20%左右，是诊断SLE的特异性抗体。如仅有抗Rib-P抗体阳性的SLE患者，ANA常为阴性。抗Rib-P抗体阳性患者中枢神经系统病变发生率高。抗Rib-P抗体与抗dsDNA抗体的消长相平行，但与抗dsDNA抗体不同的是不会随病情好转立即消失，可持续1～2年后才转阴。 抗dsDNA抗体（抗双链DNA抗体），在SLE病人中发现抗dsDNA抗体，因不同的疾病活动度，其发生率在60% -90%，对SLE的诊断具有高度特异性。其他结缔组织病阳性率低（<10%)，一般认为是红斑狼疮重叠综合征。 R0、SSA抗原在免疫学上是一致的，即有共同的抗原决定簇。SSA／Ro是小分子细胞浆核糖核蛋白（scRNPs），是蛋白和小分子核糖核酸形成的复合物。它更多的存在于胞浆中，分子量52KD的多肽条带与干燥综合征（SS）相关，而分子量60KD的多肽条带则更多存在于SLE 患者中。抗SSA抗体主要见于原发性干燥综合征，阳性率高达60％～75％。此外，抗SSA 抗体常与亚急性皮肤性红斑狼疮、抗核抗体阴性狼疮、新生儿狼疮等相关（SSA抗体可通过胎盘进入胎儿引起新生儿狼疮综合症）。SSA抗体与广泛光过敏性皮炎症状相关。 抗Smith抗体，是SLE的特异性抗体。Smith抗原是U族小分子细胞核核糖核蛋白（UsnRNP），具有抗原性的蛋白。在SLE中阳性。虽然敏感性较低，但特异性高。在全部抗Smith阳性的病例中，%为SLE。因此，抗Smith抗体为SLE的标记抗体。对早期、不典型的SLE或经治疗
β-A c t i n Actin即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。同时Actin在细胞分泌、吞噬、 β-Actin 移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，包括α-skeletalmuscleactin，α-cardiacmuscleactin，α-smoothmuscleactin，和 γ-smoothmuscleactin；其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin(β-non-muscle)和 γ-non-muscleactin。不同的actin之间同源性大于90%，但在N-terminal同源性仅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。β-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。具有收缩功能，分布广泛。 β-Actin用途 β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是WesternBlot很好的内参指数。内参即是内部参照（InternalControl），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH （glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）等。因此β-Actin抗体、β-Tubulin抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。Beta-actin 由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。 β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。在用作Western的参照时，Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。 GAPDH GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶 （glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）的英文缩写。该酶是糖酵解反应中的一个酶，由4个30－40kDa的亚基组成，分子量146kDa。该酶基因为管家（housekeeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提totalRNA，poly(A)+RNA，Westernblot等实验操作的标准化的内参。 GAPDH结构图
抗体相关信息
1 、Nrf2 外源性化合物进入机体后，经生物代谢转化，可能形成活性代谢物而引起机体化学 / 氧化应激的发生发展。转录因子 NF-E2 相关因子 2（Nrf2）是细胞防御这些应激的重要调节因子，可通过调节许多细胞保护性基因的表达，对细胞的毒性损伤起保护作用。在胞质中表达，受应激后由细胞质向胞核中转移。Nrf2 可 通过上调抗氧化物酶，减弱细胞的炎症反应和氧化损伤，Nrf2 的磷酸化过程可能是其激活和失活的一个重要信号传导事件，可分别促进Nrf2 的核蓄积和从细胞核中移出。 2 、Keap1 Keap1 对Nrf2 的抑制作用，即对Nrf2起负调节作用，是Cullin 依赖性 E3 泛素连接酶的作用底物，可致使 Nrf2泛素化并最终被 Cullin 依赖性 E3 泛素连接酶降解。Keap1 在哺乳动物细胞胞浆中以同源二聚体形式存在，并以这种形式与一个单分子 Nrf2 结合，在化学 / 氧化应激条件下，Nrf2 不再能被蛋白酶体降解，致使 Keap1 与 Nrf2 的结合处于饱和状态，任何新合成的 Nrf2 得以在细胞核蓄积，并激活细胞保护性基因，从而对细胞应激起解毒作用。 3、PKC 蛋白激酶C(protein kinase C) 4、ERK 细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase） 5、PI3K磷脂酰肌醇 3 激酶 6、Bcl-2
是细胞凋亡中最主要的抗凋亡因子。Bcl-2 表达增加、Caspase-3 表达减少可对细胞凋亡损伤起保护作用 细胞凋亡又称为程序化细胞死亡（Programmed cell death,PCD），细胞凋亡是指在外部诱发因素和内部调控因素的共同作用下，使决定细胞死亡的相关基因的表达上调，从而导致细胞死亡，是有别于细胞坏死的，以细胞核的 DNA 片段化、胞膜皱缩表面形成泡形成凋亡小体及染色质固缩边集为主要特征的细胞主动死亡过程，细胞凋亡中出现某些特征性标志，如染色体凝集和 DNA 断裂化等。 7、VEGFA（vascular endothelial growth factor A），中文名：血管内皮生长因子A。 血管生成刺激因素包括有一类称为“血管生成因子(antigenic growth factors)”的细胞因子，起着刺激新血管形成的作用。目前已经发现了一些血管生成刺激因子，如血小板源性生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)、转换生长因子(TGF)、血管内皮细胞生长因子A(VEGFA)等，其中在肿瘤血管生成中起关键作用的是VEGFA。 VEGFA蛋白由肿瘤细胞、巨噬细胞及纤维母细胞等分泌，广泛分布于人体许多组织，如腺体、肺、肝、肾、心肌等，但表达水平极低，其作用仅维持正常血管密度和基本渗透功能，维持营养物质。当出现肿瘤细胞之后，其表达水平一般会大大上升。有研究表明，VEGFA与肿瘤侵染性相关，与肿瘤易感性亦相关。 基因分子生物学功能
核内参PCNA抗体-用于细胞核内参的PCNA单抗 增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA）由Miyachi等于1978年在SLE（系统性红斑狼疮）患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为DNA聚合酶的辅助蛋白。由于其在细胞核内稳定表达，因此其抗体被广泛应用于细胞核蛋白的内参抗体。 如何选择合适的细胞核内参抗体？ 常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH和细胞骨架蛋白β-Actin或β-Tubulin等。对于一些植物的样本，则需要特别的植物Actin蛋白作为内参。当实验样品中只是核蛋白，而不是细胞总蛋白提取液时，可以用组蛋白H（Histone H），或者增殖细胞核抗原（PCNA）等为核内参抗体。除了这些，其它常见的核蛋白内参还有K70, K80, Lamin A和B，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein（TBP）以及c-Jun、c-Fos等都有使用。但是需要注意的问题是核蛋白内参的选择需要考虑实际的试验环境，比如在涉及细胞增殖相关试验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参；而在凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参。 另外，我们还需要根据目的蛋白的大小选择合适的核内参，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参。PCNA的检测分子量大约在28kD，而Histone H3的检测条带大约在18kD，因此PCNA比较适合用于检测目标蛋白在较大的WB实验，而Histone H3则不适合用于13kD-23kD大小的目的蛋白内参。另外，虽然PCNA是最合适的核内参抗体之一，但是在某些条件下，一些影响增殖的因素会导致样品间PCNA含量的变化，就不适合作为内参。
PH1498|Western Blot一抗二抗去除液（中性） Western Blot Stripping Buffer（Neutral） Catalog No：PH1498Size：?250mL Store at4℃ 去除液简介 Western Blot一抗二抗去除液（Stripping buffer）可以充分去除结合在印迹膜上的一抗和二抗，使同一张膜可进行多次抗体检测，无需反复电泳和转膜，节省样品和时间，适用于使用NC或PVDF膜进行Western Blot检测时条件的优化或同一样品不同蛋白的检测。 本品经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用3次，每次大约只需15-30min，并且在室温条件下就可以进行。 本类型Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。 试剂保存 4℃保存，一年有效，如长期不用请放置-20℃保存。 使用参考 1.在完成Western化学发光检测后，用蒸馏水或TBST缓冲液漂洗5-10min。 2.弃蒸馏水，加入适量的Western一抗二抗去除液（中性），至少需把膜完全覆盖。在摇床上室温缓慢漂洗25min左右（漂洗时间应根据不同的目的蛋白来调整：比如内参抗体等表达量较高的蛋白，可以延长漂洗时间至30min）。 3.弃Western一抗二抗去除液，用蒸馏水或TBST缓冲液洗膜3次，每次10min，室温振摇。 4.剥脱后的膜加入封闭液进行封闭，进行下一轮的WB实验。 注意事项 1、用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶，任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。 2、本Western一抗二抗去除液仅适用于PVDF膜。用于硝酸纤维素膜时会导致转移到膜上的蛋白有非常显著的损失。 3、使用ECL等类似的化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测，例如DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 孵育内参抗体GAPDH后用ECL发光液曝光20s。用本试剂剥脱25min后孵育内参抗体β-actin,ECL发光液曝光20s
Western blot内参 要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量Marker（用来确定蛋白条带对应的分子量大小）、空白载体对照（如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照）、已知量标准产物的正对照，另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因，国内的不少人做Western Blot 往往省略参照，导致结果出现问题时无法分析结果，即便有结果也可能影响结果的分析。内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要进行内参的检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。 实际上内参是最容易被忽略的一项。我们知道，要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础，特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析，所以需要内参。在国外发表的文章中，Western Blotting 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是，国内仍有不少科研人员在Western Blotting实验中忽略了内参的使用，将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法。 然而各种蛋白质浓度定量方法，都存在局限性，不能完全准确的确定各种样品的蛋白浓度。如UV法直接定量，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质，相对于比色法来说，操作简单，但是容易受到平行物质如DNA的干扰，且敏感度低，要求蛋白的浓度较高。比色法测定蛋白浓度一般有BCA、Bradford、Lowry 等几种方法。BCA法与Lowry法都容易受到蛋
https://www.doczj.com/doc/6e4458847.html, PCNA核内参抗体，抗PCNA单抗，PCNA小鼠源单克隆抗体 Anti-PCNA Mouse Monoclonal Antibody （ 1D7） 增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA）由Miyachi等于1978年在 SLE（系统性红斑狼疮）患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为DNA聚合酶的辅助蛋白。由于其在细胞核内稳定表达，因此其抗体被广泛应用于细胞核蛋白的内参抗体。 如何选择合适的细胞核内参抗体？ 常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH和细胞骨架蛋白β-Actin或β-Tubulin等。对于一些植物的样本，则需要特别的植物Actin蛋白作为内参。当实验样品中只是核蛋白，而不是细胞总蛋白提取液时，可以用组蛋白H（Histone H），或者增殖细胞核抗原（PCNA）等为核内参抗体。除了这些，其它常见的核蛋白内参还有K70, K80, Lamin A和B，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein（TBP）以及c-Jun、c-Fos等都有使用。但是需要注意的问题是核蛋白内参的选择需要考虑实际的试验环境，比如在涉及细胞增殖相关试验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参；而在凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参。 应用类型：WB（1:1000-1:5,000）、IHC（1:100-1:500）
Fig.1.Immunohistochemistry staining (1:100) of Human breast cancer tissue paraffin-embedded with Anti-PCNA mouse monoclonal antibody (1D7). Fig.2.Western blot analysis (1:2,000) of PCNA expression in Rat brain (lane A), A549 cell (lane B), NIH 3T3 cell (lane C) and 293T cell (lane D) with Anti-PCNA mouse monoclonal antibody (1D7). 免疫原：KLH偶联的PCNA部分多肽序列 来源宿主：小鼠 反应性：该PCNA核内参抗体可识别人、小鼠、大鼠等种属的PCNA蛋白。 保存建议：在发货后能在-20℃保存1年。为最大限度的避免损失，请在打开管盖之前融化抗体并离心。我们建议使用前分装以避免反复冻融，分装后可在4℃保存1个月。 背景资料：增殖细胞核抗原（ Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA）由Miyachi等于1978年在 SLE（系统性红斑狼疮）患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为DNA聚合酶的辅助蛋白。由于其在细胞核内稳定表达，因此其抗体被广泛应用于细胞核蛋白的内参抗体。 https://www.doczj.com/doc/6e4458847.html,
医学免疫学免疫球蛋白 大纲要求 一、基本概念 二、免疫球蛋白的结构 三、免疫球蛋白的类型 四、免疫球蛋白的功能 五、各类免疫球蛋白的特性和功能 六、抗体的制备 一、基本概念 （一）抗体（antibody, Ab） 是B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白，主要存在于血清等体液中，是介导体液免疫的重要效应分子。 （二）免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig） 指具有抗体活性的或化学结构与抗体相似的球蛋白。 二、免疫球蛋白（Ig）的结构 （一）Ig的基本结构 由两条相同的重链（H链）和两条相同的轻链（L链）借链间二硫键连接组成。 可变区（V区）和恒定区（C区） 可变区：H链近氨基端（N端）1/4或1/5区域内的氨基酸、L链近N端1/2区域内的氨基酸序列多变，称为V区。 超变区（HVR）：VH和VL各有3个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变，称为HVR，也称为互补决定区（CDR）。一般CDR3变化程度更高。 骨架区（FR） 恒定区：H链和L链靠近C端区域的氨基酸序列相对稳定，称为C区。
免疫球蛋白的类、亚类、型、亚型 根据CH不同分为五类： CH：γαμδε Ig： IgG IgA IgM IgD IgE 亚类：IgG1~IgG4; IgA1、IgA2。 根据CL不同分为两型：κ型、λ型 亚型：λ1~λ4 （二）Ig的功能区 L链：VL、CL。 H链： VH、CH1、CH2、CH3（IgA、IgG、IgD）VH、CH1、CH2、CH3、CH4（IgM、IgE）铰链区：位于CH1与CH2之间，易弯曲。各功能区主要功能： VH、VL：与抗原特异性结合部位 CH和CL：遗传标志所在处 IgG的CH2和IgM的CH3:激活补体 IgG的CH2/CH3和IgE的CH4:结合细胞
WB检测抗体如何选择 WB检测之二抗 二抗选择 二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。 二抗选择要考虑的问题有： ①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗 IgGF(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。 WB检测之内参抗体 Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。 WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。 内参使用方法 1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。 2.普通内参：当靶蛋白分子量与所选内参分子量相差不大时，可先对靶蛋白进行显色检测，然后用Strip缓冲液洗掉膜上抗体，重新对内参蛋白进行显色检测。当靶蛋白分子量与所选内参分子量相差较明显时，可对转膜预染，根据蛋白质分子量将膜剪为两部分并分开进行靶蛋白和内参蛋白的显色检测。 内参抗体选择 常用的蛋白内参有GAPDH和β-actin或β-tubulin，内参的选择原则是选择与靶蛋白分子量相差5KD以上的内参，对不同的样本则需要根据实际情况进行选择。 1.根据物种选择 哺乳动物来源的组织或细胞样本通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na+/K+-ATPase等。植物来源的样本常选择plant actin、Rubisco等。对于其他研究稀少的物种可参考报导的文献进行选择。以GAPDH为例，抗GAPDH单抗（ABGENT，clone 6C5）能够与非洲蟾蜍、猴、猪、羊、狗、猫、鱼、蛙、鸡、兔、小鼠、大鼠及人组织来源的GAPDH反应，但不能与酵母GAPDH反应。 2.根据组织类型选择
β-Actin抗体推荐—高效价的Beta-Actin内参抗体 Actin即肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin和γ-non-muscle actin。β-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织或细胞内，β-Actin的表达量就很少。β-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。 如何选择合适的β-Actin抗体？ 内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。首先，我们需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于β-Actin的检测分子量大约在42kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测38kD-48kD大小目标蛋白的WB实验中。另外，虽然β-Actin是最合适的内参抗体之一，但是在某些条件下，一些因素也会导致样品间β-Actin含量的变化。特别需要注意的是，在脂肪组织里，β-Actin的表达量非常低，不适合作为内参。 很耐用，质量也很稳定，购买后放了一年了，拿出来用效价还是很高，后来买了他们大包装的，直接定制的5ml，很推荐。——北京工业大学生命科学与生物工程学院一客户 另外，我们还需要考虑自己的需要，特别是实验应用上的需要。一般来说，应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大，而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl β-Actin抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:5000，最终使用液相当于500ml），要比效价低的1ml的β-Actin抗体（假如WB检测的稀释比率是1:200，最终使用液相当于2ml）性价比更高。因此在选择抗体的时候，不但需要考虑抗体的量，还需要考虑抗体的效价，即不同应用的建议稀释比率。