中国男科学杂志２００９年第２３卷第２期
男性非淋菌性尿道炎患者尿道黏膜细胞内广泛
存在衣原体始体与包涵体
刘鸿玲＋刘维洲卓国文王文兰
青岛民康皮肤病医院青岛民康皮肤病研究所（青岛２６６０７１）
摘要目的探索男性非淋菌性尿道炎患者尿道黏膜细胞内衣原体始体与包涵体检测的意义。方法取患者尿道粘膜柱状上皮细胞涂片姬姆萨染色镜检。结果男性非淋菌性尿道炎患者尿道黏膜细胞内广泛存在衣原体始体与包涵体，在衣原体敏感抗生素治疗前后衣原体感染细胞百分比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），尿道细胞标本经实时荧光定量聚合酶链反应检测含有衣原体ＤＮＡ，经免疫组化染色检测含有衣原体抗原抗体免疫复合物。结论提示衣原体是男性非淋菌性尿道炎患者的主要致病菌，尿道黏膜细胞内存在衣原体包涵体与数个始体是衣原体感染的确凿证据。
关键词衣原体属：尿道炎；免疫组织化学一
中图分类号Ｒ６９５．２
ＡｂｒｏａｄｅｘｉｓｔｅｎｃｅｏｆＣｈｌａｍｙｄｉａｌｉｎｉｔｉａｌａｎｄｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｉｅｓｉｎ
ｕｒｅｔｈｒａｍｕｃｏｕｓｍｅｍｂｒａｎｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｃｅｌｌｓｏｆｍａｌｅＮＧＵｐａｔｉｅｎｔｓ
ＬｉｕＨｏｎｇｌｉｎｇ，ＬｉｕＷｅｉｚｈｏｕ，ＺｈｕｏＧｕｏｗｅｎ，ＷａｎｇＷｅｎｌａｎ
ＱｉｎｇｄａｏＭｉｎｋａｎｇＤｅｒｍａｔｏｓｉｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６０７１，Ｃｈｉｎａ
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ｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｕｒｅｔｈｒａｎｌｕｃ叩ｓｍｅｍｂｒａｎｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｃｅｌｌｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｅｘｉｓｔｅｄｃｈｌａｍｙｄｉａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎＮＧＵｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄＣｈｌａｍｙｄｉａｌｗａｓｔｈｅｍａｉｎｐａｔｈｏｇｅｎｏｆＮＧＵｐａｔｉｅｎｔｓ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＣｈｌａｍｙｄｉａ；ｕｒｅｔｈｒｉｔｉｓ；ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ
在随机检测工作中，我们发现男性非淋菌性尿道炎（ＮＧＵ）患者的尿道黏膜柱状上皮细胞内广泛存在衣原体始体与包涵体，经实时荧光定量聚合酶链反应检测证实含有衣原体ＤＮＡ，经免疫组化染色检测证实含有衣原体抗原抗体免疫复合物，而且衣原体感染细胞的百分比，在衣原体敏感的抗生素治疗前后差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。尿道粘膜细胞内存在衣原体包涵体与数个始体是衣原体感染的确凿证据。报道如下。
。通讯作者．Ｅ?ｍａｉｌ：ｈｏｎｇｌｉｎｇｌｉｕ＠ｑｉｎｇｄａｏｎｅｗｓ．ｃｏｎｌ
材料与方法
一、临床资料
（一）ＮＧＵ患者
随机选择２００６年７月至２００７年７月因尿道不适、尿道口红有粘液性分泌物就诊的、经临床诊断与实验室检测排除淋球菌感染的尿道炎患者３１９例，取尿道黏膜柱状上皮细胞涂片姬姆萨染色镜检衣原体。
万方数据
３２ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｄｒｏｌｏｇｙＶ０１．２３Ｎｏ．２２００９
（二）正常对照组
无尿邀炎症状与体镪的尿道采样经实验诊断排除游耩董、支骤俸、衣瓣舔感染懿德壤舅燃３０搦，取尿道黏膜柱状上皮细胞涂片姬姆萨染色镜检农原体。
二、敷样与制抟
受奏黝羹猜匀夔，采榉者左手枣指与荛篱黻患者阴鉴，食指和拇指张开历｝道口，霸手持直径约１．５ｒａｉｎ无菌拭子轻轻进入渌道内３—ｃｍ，轻转ｌ周，停留ｔ。２ｍｉｎ，取朦遒黏膜挺状￡皮缨脆与分泌物，联窭立器ｇ廉选轻轻涂片，涂片与采样拭子送实验窜待检。为减轻个别患者采样肘的痛感，采样前可予聚道口滴入少许麻醉剂。
三、试粼与方法
（一）姬姆萨染包镜检尿道黏膜细胞涂片农原体
临用前用ｐＨ６．８的缓冲液或注射用水５份，加燕姆萨絷魏储鍪渡ｌ份熬裁成染色度耀滚。取藤遵黏膜绷胞涂片，加一小滴甲醇恰好覆盖标本，固定ｌ一２ｍｉｎ待干，加新配制染色液覆盖标本，置湿盒惠，染色３０ｍｉｎ，淀瓣簇隶冲洗，９５％ｚＩ醇快速冲洗除掉染料沉渣，注射用水冲洗，待干镜梭。
（二）免疫组化染色镜检尿道黏膜细胞涂片衣原体
试荆：簸藐表燎钵ＬＰＳ攀壳隧撬体ＩｇＧ，美溪Ｃｈｅｍｉｃｏｎ公闭生产；生物素标记羊抗鼠ＩｇＧ抗体，美嗣ＫＰＬ公闭生产；辣根过氧化物酶标记链霉亲和紊，美圈ＳＢＡ公司生产；酶爱瘫簌兹３。３够．二氯基联苯胺网盐酸盐（ＤＡＢ）。免疫组化染色：每份标本两张涂片，分测定片与空白片，经丙蒯迅速固定，３％硬氧承，０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ溶液（ｐＨ７。２坼。６）灭添内源性酶，ＰＢＳ冲洗，小牛血清封闭后依次与鼠摅衣原体ＬＰＳ单克隆抗体ＩｇＧ（Ｉ抗）、生物索标记羊挽鼠ｌｇＧ抗体（１｛撬）、辣根避氧位耪酶标记链霉亲和素孵育，经ＤＡＢ箍色镜检。空自片中不加｛抗，健康男性标本做阴性对照。
≤三）襄时荧竞定量聚合酶链茨应《羚畏＞检测尿道采样拭予衣原体
ＤＮＡ试剂是广州中山医科大学达安基因诊断中心产品。仪器：ＰＥ５７００鑫动荧光ＰＣＲ仪。方法：将采样拭予洗涤液ｌ２０００ｒｔｍｉｎ离心５ｍｉｎ，去上清液，采用常规碱裂解法提取衣原体ＤＮＡ，各反应管教入ＰＥ５７００爨动荧毙捡灏获，按篾定条襻扩遴，爱应结束螽豳电麟自动分析计算定璧结果。
结果
一、尿道黏膜细胞涂片姬姆萨染色镜检细胞内衣爨体始体号龟涵傣
３１９例ＮＧＵ患者尿道黏膜细胞内均发现广泛存在农骧体始体与包涵体，其形态和染色与文献掇道“ｄ１一致。衣绦体戆体呈数鼙不等、太小不一、鼷澎或撩鼷澎外嘣有包膜嗣绕的偏蓝色颗粒（圈１），农原体包涵体呈臣大的填塞型充满胞浆将细胞核揆到一边，里垂寄满中心是经惫点获溺豳誊浅色晕露鐾鱼黢状瓣、红色成熟的衣原体原体颗粒（图２，３），有时成熟包涵体中也有来成熟的偏蓝谯始体（圈４），也商来残熬戆镪涵诲照蘸悫满巍鼹状的誊色颡粒、浚色鬏粒或网状结构（豳５，６）。
图ｌ男性ＮＧＵ患者尿道黏膜细胞
圈巾上方两个缨胞内的熬畿水等，大书誉…，竣形或椭瓣形辨霹誊识膜瓣绕翦镰壤琵鬏鞋霆魏稳内势襞蘩簸凝杰魏友藤舔戆搭
图２圈３
豳２，３男性ＮＧｔＵ患者尿道黏膜细胞辑阍审麦铡缁簸瞧蠢巨大黝填寒攀丧簸豁包瀵体，毯酒俸将细耱按挤剿一边，鬻谢布满孛一§整数色煮狄掰闹蠢浅色辇阐黧惫眼状的、红色成熟的柯传染性的衣原体原体颗粮
图４男性ＮＧＵ患者尿道黏麟细胞
辫枣庄穗缍腿斑成熟毽涵俸中锫蹿蠢求袋熬的偏蠛愚静农琢律始体
万方数据
中国男科学杂志２００９年第２３卷第２期３３
图Ｓ蚕６
图Ｓ，６男性ＮＧＵ患者艨遭粘膜细胞图中细胞内有未成熟农原体包涵体，取面充满鱼眼状的青色藏浅色颗誊电农时｛跬网状结｛奄（Ｘ１０００姬姆萨染色）
治疗前，感染细胞百分比可高达９０％以上（油镜观察１００个细胞，记录衣原体感染细胞数），感染细胞内始体数量２个以上可达ｌＯ数个（缀庭内始体呈二分裂增殖状态）。经衣掀体敏感药物治疗（大环内酯类或喹诺削类抗生絮），按医嘱用药，７娃一个疗程，一般２个疗程，随枧对３１９例ＮＧＵ患者中的１００例进行疗效跟踪观察，经治疗患者症状与体征减轻至消失，尿道衣原体感染细胞百分比逐渐降低可降至１０％以下，纲胞内衣凝体始体数最减少至ｌ一２个，不觅包涵体。治疗前磊，衣原体感染细胞百分比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。正常对照组尿遴黏膜细胞涂片染色镜稔未发现缎胞走衣原体。
二、尿道黏膜细稔涂片免疫缓化染色镜检衣原体
随机对３１９例ＮＧＵ患者中的６２例ＮＧＵ患者作兔疫组化染色镜检农原体，均发现细胞内有棕褐色的衣原体抗原抗体免疫复合物颗粒（盈７，８）。正常对照组米发现。
图７，８男性ＮＧＵ患者尿道黏膜细胞
篼疫维纯染色绷腿内橡蝎色农簸体援骧攘侮免疫复仑物蹶较（ｘ１０００）
翌、尿道采样拭子实时荧光定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测衣漂体ＤＮＡ
随机对３１９例ＮＧＵ患者中的３０例作实时荧光定量聚合酶链反应检测尿道采样拭予衣原体ＤＮＡ：２７例阳性（≥ｌ×１０４拷贝／ｍ１），阳性率９０％。
潮、其它椽测结果
３１９例ＮＧＵ患者中，尿道采样解脲支原体培养阳性８２例，尿道标本涂片纂兰氏染色镜捡发现慕兰氏阳性杆菌６ｌ铡，阳性球菌５３例，阴性杆菌５６例。
讨论
男性ＮＧＵ患者尿道黏膜柱状上皮细胞内广泛存在衣原体始体与包涵体，经衣原体敏感药物治疗后，细胞内衣原体数量减痧，感染细胞百分院减低与治疗前有显著性差异，患者症状与体征消失，提示衣原体是ＮＧＵ的主要致病菌。
稼道黏膜细胞内存在衣源体包涵体与数个始俸，提示农原体正处在细胞内分裂繁殖发育成成熟包涵体释放患有感染性的予代原体辫感染新的细胞的感染状态。纲胞内存在寝原体包涵体与数个始体是衣原体感染的确凿证据。
观察用药前聪尿道黏膜细胞衣原体感染的百分比与细胞痰衣原体始体数量豹变纯及有焉包涵体，可用来分析病情与疗效。
跟前普遍采用“立明”板检测衣原体ＬＰＳ抗原，该法敏感性较低，需采妥足够多酶标本来避免鬣鬻性以保证结果准确，不能用来分析病情和观察疗效。
（荧于衣原体的检测与鉴定工作得到上海复旦大学公共羹垒学院李予华教授，青岛大学菰学茂鄂济钧教授，强新教授的指导与帮助，在此谨致衷心的感谢）
参考文藏
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羽锈竞。现代诊蕻徽生物学．≤艺素：天瑟至生窭敝桂，２００２：９４７．９５０
（２００８－０８－１２收稿）万方数据