第二章（2）抗原抗体反应
Chapter 13 Antigen and Antibody Reaction
第一部分教学内容和要求
一、目的要求
·掌握：抗原抗体反应的原理和特点，抗原抗体反应的带现象、前带、后带，亲和力、亲和性的概念；熟悉：抗原抗体反应的影响因素；了解：抗原抗体反应的基本类型。
二、教学内容
1。抗原抗体反应的原理：抗原抗体的结合力，抗原抗体的亲和性，亲水胶体转化为疏水胶体。
2。抗原抗体反应的特点：特异性，比例性，可逆性。
3。影响抗原抗体反应的因素：反应物自身因素，环境条件，对照设置。
第二部分测试题
一、选择题
（一）单项选择题（A型题）
1.抗原抗体结合力中作用最大的是
A.静电引力
B.范登华引力
C.氢键结合力
D.疏水作用力
E.分子间结合力
2.抗原抗体结合力中作用最小的是
A.静电引力
B.范登华引力
C.氢键结合力
D.疏水作用力
E. 分子间结合力
3.抗原自凝现象出现在下列哪种情况
A.反应pH达到或接近颗粒抗原的等电点
B.反应pH达到或接近抗原的等电点
C.反应pH高于颗粒抗原的等电点
D.反应pH低于颗粒抗原的等电点
E.反应pH高于抗原的等电点
4.用已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原，是由于抗原抗体反应具有
A.特异性
B.比例性
C.可逆性
D.亲和性
E.带现象
5.外-斐试验是利用了
A.过量抗原
B.共同抗原
C.过量抗体
D.亲和性
E.可逆反应
6.免疫血清制备时，下列说法正确的是
A.早期获得的抗血清亲和力低，特异性好。
B.早期获得的抗血清亲和力高，特异性好。
C.早期获得的抗血清亲和力低，特异性低。
D.后期获得的抗血清亲和力低，特异性好。
E.后期获得的抗血清亲和力高，特异性低。
7.抗原抗体反应的特异性是指抗原决定簇和抗体分子什么区结合的特异性
A.可变区
B.恒定区
C.高变区
D.超变区
E.低变区
8.下列哪种免疫血清与相应抗原结合可形成可见免疫复合物
A.人
B.马
C.家兔
D.猴
E.牛
9.抗原抗体反应中，抗体的合适浓度是
A.固定的
B.规定的
C.与抗原相对而言
D.随便设定的
E.人为规定的
10.有补体参与的反应最适宜的pH
A.6.0～9.0
B.7.0～9.0
C.7.2～7.4
D.6.0～8.0
E.7.0～7.5
11.在抗原抗体反应中，通常使用什么溶液作抗原抗体稀释液
A.0.70%NaCl溶液
B.0.60% NaCl溶液
C.0.75% NaCl溶液
D.0.85% NaCl溶液
E.0.95% NaCl溶液
12.静电引力大小
A.和两个电荷的距离成正比
B.和两个电荷的距离的平方成正比
C.和两个电荷的距离成反比
D.和两个电荷的距离的平方成反比
E.和两个电荷的距离平方不成比例关系
13.抗原抗体反应比例不合适出现的沉淀物减少的现象称为
A.前带
B.后带
C.带现象
D.等价带
E.等电点
14.由于抗原过量导致抗原抗体结合物减少的现象为：
A.前带
B.后带
C.带现象
D.等价带
E.等电点
15. 由于抗体过量导致抗原抗体结合物减少的现象为
A.前带
B.后带
C.带现象
D.等价带
E.等电点
16.有关交叉反应的描述，正确的是
A.为非特异性抗原抗体反应
B.由于不同抗原分子上存在共同抗原表位所致
C.对免疫学诊断结果判断没影响
D.利用交叉反应进行诊断典型例子是肥达试验
E.利用交叉反应进行诊断典型例子是库姆试验
17.抗原抗体结合反应最终出现肉眼可见沉淀现象，其原因是
A.从亲水胶体变为疏水胶体
B.从疏水胶体变为亲水胶体
C.抗原抗体结合反应导致蛋白变性所致
D.抗原抗体结合作用和盐析作用共同作用所致
E.蛋白质盐析所致
18.一般抗原抗体反应的最适温度为
A.37℃
B.25℃
C.4℃
D.56℃
E.45℃
19.平衡常熟K是表示抗原抗体反应的
A.特异性
B.亲合性
C.比例性
D.可逆性
E.非特异性
20.抗原抗体反应的最适pH值是
A.3～4
B.5～10
C.6～9
D.9～10
E.10～12
21.下列关于抗原抗体反应的特点表述，正确的是
A.抗原抗体反应有交叉反应，故抗原抗体反应特异性不强
B.抗原抗体反应必须在抗体量略大于抗原量时，形成的复合物最大
C.抗原抗体反应形成的复合物又可解离为游离的抗原与抗体
D.抗体与抗原结合牢固，不易被解离
E.抗原抗体反应分为两个阶段，两个阶段之间有明显的界限
22.下列哪类抗体与相应抗原表位的亲和力最强
A.IgG类
B.IgM类
C.IgA类
D.IgE
E.IgD
23.利用抗原抗体反应的可逆性原理设计的免疫学技术是
A.酶免疫技术
B.放射免疫技术
C.金免疫技术
D.荧光免疫技术
E.亲合层析技术
24.影响抗原抗体反应速度的因素是
A.电解质
B.pH值
C.温度
D.抗体特异性
E.抗原表位的数量
25.下列哪种不属于抗原抗体反应的影响因素中反应物自身的因素
A.抗原的性质
B.抗体的亲和力
C.电解质
D.抗体的浓度
E.抗体的特异性
（二）多项选择题（X型题）
1.下列哪些因素能引起抗原抗体复合物解离
A.提高pH值
B.增加离子强度
C.降低pH值
D.减少离子强度
E.抗体亲和力低
2.抗原抗体结合出现可见复合物要有电解质存在，关于电解质的作用，下列说法正确的是
A.进一步使抗原抗体复合物表面失去电荷
B.破坏水化层
C.使复合物相互靠拢、聚集
D.便于形成大块凝集、沉淀
E.使抗原抗体复合物表面电荷增多
3.关于公式K=K1/K2，下列说法正确的是
A.K2固定，K1越大，亲和性越高
B.K1固定，K2越大，亲和性越低
C.K1越大，与抗原结合越牢固
D.K2固定，K1越大，亲和性越低
E.K越大，亲和性越高
4.在通常的血清学试验中，溶液pH偏高时，下列说法正确的是
A.蛋白质分子带负电荷
B.蛋白质分子带正电荷
C.蛋白质分子周围出现极化的小分子
D.蛋白质分子间不易靠拢
E.蛋白质分子间不能形成沉淀
5.下列说法正确的是
A.颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集现象
B.可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀现象
C.粗糙型细菌在生理盐水中易出现自凝现象
D.血细胞同IgG类抗体反应可出现凝集与现象
E.单价抗原与相应抗体结合后不出现沉淀现象
6.关于温度的说法，下列哪些正确
A.温度越高，抗原抗体分子运动越快
B.温度越高，抗原抗体反应速度越快
C.温度越高，抗原抗体反应速度越慢
D.温度越高，抗原抗体结合越牢固
E.温度高于56℃时，可导致复合物解离
7.下列哪些属于抗原抗体反应
A.沉淀反应
B.凝集反应
C.中和反应
D.补体结合试验
E.蛋白质变性
8.下列哪些属于抗原抗体反应的影响因素
A.抗原的性质
B.抗体的亲和力
C.电解质
D.抗体的浓度
E.抗原抗体的比例
9.提高免疫学试验的可靠性措施，包括那些
A.选择高特异性抗体
B.选择高亲和力抗体
C.合适的电解质浓度
D.最佳的pH值
E.采用非纯化抗原，保证其免疫原性
10.有关抗原抗体的亲合性和亲和力的描述，正确的是哪些
A.亲合性是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相互适应而存在的引力
B.抗体的
亲和力是指抗体的抗原结合部位与抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价有关 C.亲合性K值越大，其亲和力也越大
D.抗原抗体反应的灵敏度与亲和性及亲和力无关
E.抗体的亲和力越高，与抗原结合越牢固，抗原抗体复合物越不易解离
11。临床做抗原抗体反应的实验中常设的对照有
A。阳性对照 B。阴性对照 C。空白对照 D。标准品对照 E。时间对照
二、填空题
1.抗原抗体反应的特点有_________ 、_________ 和___________。
2.抗原抗体反应的温度一般以_________为宜，最适温度为________。
3.影响抗原抗体反应的环境因素主要有、___ _____ 与_____ ___。
4.某些特殊的抗原抗体反应对温度有一些特殊的要求，如冷凝集素在______左右与红细胞结合最好，
_________以上反而解离。
5。抗原抗体的结合分子间的引力包括_________ 、_________ 、___ _____和___________。
三、名词解释题
1.抗原抗体反应（antigen and antibody reaction）
2.静电引力(electrostatic force)
3.范德华引力（Van der Waals force）
4．氢键结合力（hydrogen bonding force）
5．疏水作用力(hydrophobic force )
6.等价带(zone of equivalence)
7.带现象(zone phenomenon)
8.前带现象(prozone phenomenon)
9.后带现象(postzone phenomenon)
10.抗体亲和力(avidity of antibody)
四、问答题
1.简述抗原抗体反应的原理。
2.简述抗原抗体反应的类型。
3.什么是带现象？
4．影响抗原抗体反应的环境条件有哪些？在实验中如何控制这些条件因素？
第三部分参考答案与题解
一、选择题
（一）单项选择题（ A型题）：
1.D
2.B
3.A
4.A
5.B
6.A
7.D
8.C
9.C 10.C 11.D
12.D 13.C 14.B 15.A 16.B 17.A 18.A 19.D 20.C 21.C
22.B 23.E 24.C 25.C
（二）多项选择题（X型题）
1.ABCE
2.ABCD
3.ABE
4.ACDE
5.ABCE
6.ABDE
7.ABCD
8.ABCD
9.ABCD 10.ABCE 11。ABCD
二、填空题
1．特异性、比例性、可逆性 2．15～40℃、 37℃ 3．电解质、 pH、温度
4．4℃、 20℃ 5．静电引力、范德华引力、氢键引力、疏水作用力
三、名词解释
1．抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。它既可以发生在体内，也可以发生在体外。
2.静电引力：是指抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。又称为库伦引力。
3. 范德华引力：原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原抗体两个大分子外层轨道上电子之间相互作用时，因两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。又称分子间引力。
4．氢键结合力：是供氢体上的氢原子与氢受体原子间的引力。如分子中的氢原子和电负性大的氮、氧等原子相互吸引的力。当具有亲水基团（如-OH，-NH2及-COOH）的抗体与相对应的抗原彼此接近时，相互间即可形成氢键，使抗原与抗体相互结合。氢键结合力较范登华引力强。
5．疏水作用力：在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子排斥而趋向聚集而产生的力称为疏水作用力。当抗原表位与抗体超变区靠近时，相互间正、负极性消失，亲水层也立即失去，排斥了两者之间的水分子，使抗原抗体进一步相互吸引，从而促进其相互结合。疏水作用力是这些力中最强的，对维系抗原抗体结合作用最大。
6．等价带：抗原抗体反应曲线的高峰部分是抗原抗体分子比例合适的范围，称为抗原抗体反应的等价带。在此范围内，抗原抗体充分结合，沉淀物形成快而多。
7．带现象：在抗原抗体反应等价带前后，由于抗体或抗原过量，上清液中可测出游离的抗体或抗原，形成的沉淀物少，不出现可见反应，这种现象称为带现象。
8．前带现象：抗原抗体反应当抗体量过时、不出现可见反应，称为前带现象。
9．后带现象：抗原抗体反应当抗原量过剩时、不出现可见反应，称为后带现象。
10．抗体亲和力：是指抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接相关。
四、问答题
1．抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合。
2．抗原抗体反应分为五种类型：①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标记的抗原抗体反应等。
3．在抗原抗体反应等价带前后，由于抗体或抗原过量（形成前带或后带），上清液中可测出游离的抗体或抗原，形成的沉淀物少，不出现可见反应，这种现象在做血清学试验时称为带现象。
4．环境条件包括：电解质.酸碱度和温度。稳定条件：①电解质：常用0.85%氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液；酸碱度：pH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质。抗原抗体反应一般在pH为6～8进行。温度：一般以15～40℃为宜，最佳反应温度为37℃。
（秦东春）
免疫学检验试题（一） 1. 免疫监视功能低下时易发生（）。 A．自身免疫病 B．超敏反应 C．肿瘤 D．免疫缺陷病 E．移植排斥反应 答案C 解析免疫系统的功能之一是对自身偶尔产生的有癌变倾向的细胞进行清除，此即免疫监视功能，免疫监视功能低下时易发生肿瘤。 2. 免疫自稳功能异常可发生（）。 A．病毒持续感染 B．肿瘤 C．超敏反应 D．自身免疫病 E．免疫缺陷病 答案D 解析免疫系统的功能之一是对自身衰老的组织细胞进行清除，此即免疫自稳功能，免疫自稳功能异常可发生自身免疫病。
3. 既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞是（）。A．树突状细胞 B．巨噬细胞 C．中性粒细胞 D． B细胞 E． T细胞 答案B 解析树突状细胞、巨噬细胞和B细胞都有抗原加工提呈作用，但只有巨噬细胞兼有吞噬杀菌作用。 4. 免疫应答过程不包括（）。 A． T细胞在胸腺内分化成熟 B． B细胞对抗原的特异性识别 C．巨噬细胞对抗原的处理和提呈 D． T细胞和B细胞的活化、增殖和分化 E．效应细胞和效应分子的产生和作用 答案A 解析免疫应答过程指免疫系统针对抗原的反应过程，不包括免疫细胞的发育过程。 5. 关于外周免疫器官的叙述，不正确的是（）。 A．包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织
B．发生发育的时间晚于中枢免疫器官 C．是免疫应答发生的场所 D．是免疫细胞发生和成熟的场所 E．是所有淋巴细胞定居的场所 答案D 解析免疫细胞发生和成熟的场所在中枢免疫器官，故D项不正确。 5. 在正常血清中，含量最高的补体成分是（）。 A． C1 B． C3 C． C4 D． C5 E． C4Bp 答案B 解析在正常血清中含量最高的补体成分是C3。 7. 细胞因子不包括（）。 A．单核因子 B．淋巴因子 C．生长因子 D．抗体
第二章抗原抗体反应 一、以下每一道考题下面有A、B、C、D、E5个备选答案。请从中选择1个最佳答案。并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。 1.抗原抗体复合物吸引在一起依靠 A.静电引力 B.共价键 C.分子间吸引力 D.疏水结合力 E.范德华引力 参考答案：C 2.抗原抗体反应的特点不包括 A.特异性 B.比例性 C.多价性 D.可逆性 E.电离性 参考答案：E 3.抗原抗体反应的特异性指的是 A.两者分子功能的相近性 B.两者分子的电子云吸引力 C.两者之间空间结构的相似性 D.两者分子大小的相近性 E.两者之间相互吻合的互补性 参考答案：E 4.完全抗原的特征是 A.有免疫原性，无反应原性 B.有反应原性，无免疫原性 C.无免疫原性和反应原性 D.有免疫原性和反应原性 E.必须与载体结合才具有免疫原性 参考答案：D 5.影响抗原抗体反应的因素不包括 A.电解质 B.温度 C.PH D.适当振摇 E.溶液量 参考答案：E 6.A、B两种抗原都能与某一抗体发生特异性结合反应，这两种抗原相互称为 A.TD-Ag B.TI-Ag C.半抗原 D.完全抗原
E.共同抗原 参考答案：E 7.抗原抗体结合形成复合物的主要原理是 A.氨基酸结构发生改变 B.氨基酸数量发生改变 C.氨基酸种类发生改变 D.由亲水胶体转变为疏水胶体 E.由疏水胶体转变为亲水胶体 参考答案：D 8.抗体在抗原抗体反应中的合适浓度是 A.固定的 B.规定的 C.随便设定的 D.与抗原相对而言 E.人为规定的 参考答案：A 9.下列关于抗原与抗体特异性结合的结合力，不正确的是 A.非共价键 B.氢键 C.范德华力 D.疏水键 E.需8种分子间引力参与 参考答案：E 10.一般抗原抗体反应的pH值为 A.6.0~9.0 B.6.0~8.0 C.6.0-7.0 D.5.0~7.0 E.5.0~6.0 参考答案：B 11.免疫学技术中的亲和层析法，纯化抗原或抗体是利用抗原抗体反应的 A.特异性 B.比例性 C.可逆性 D.亲和力 E.疏水作用力 参考答案：C 12.抗原抗体特异性反应时，若抗原或抗体极度过剩则无沉淀形成，叫做 A.前带 B.后带 C.带现象 D.等价带 E.拖尾 参考答案：C
第一节抗原抗体反应的原理 抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）与抗体超变区的沟槽分子表面的结构互性与亲合性而结合的。 一、抗原抗体的结合力 抗原抗体间结合为非共价键结合，有四种分子间引力参与。 （1）静电引力：是抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。又称为库伦引力。这种引力的大小与两电荷间的距离的平方成反比。两个电荷距离越近，静电引力越强。 （2）范德华引力：是抗原与抗体两个大分子外层轨道上电子之间相互作用时，因两者电子云中的偶极摆动而产生吸引力。能促使抗原抗体相互结合，这种引力的能量小于静电引力。 （3）氢键结合力：是抗体上亲水基团与相应抗原彼此接近时，相互间可形成氢键，使抗原抗体相互结合。氢键结合力较范德华引力强。 （4）疏水作用力：是抗原表位与抗体超变区靠近时，相互间正、负极性消失，亲水层也立即失去，排斥了两者之间的水分子，使抗原抗体进一步相互吸引，促进其结合。疏水作用力是这些力中最强的，对维系抗原抗体结合作用最大。 二、抗原抗体的亲合性和亲合力 亲合性是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相互适应而存在的引力，它是抗原抗体之间固有的结合力，可用平衡常数K来表示：K=K1/K2，K值越大，亲合性越高；亲合性越高，与抗原结合越牢。 抗体的亲合力是指抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接相关，即所谓多价优势，如IgG为两价，亲合力为单价的103倍，IgM为5～10价，亲合力为单价的107倍。由于抗原抗体的结合反应是可逆的，若抗体的亲合力高，与抗原分子结合牢固，不易解离；反之即容易解离。 二、亲水胶体转化为疏水胶体 大多数抗原为蛋白质，抗体是球蛋白，它们溶解在水中皆为胶体溶液，不会发生自然沉淀。这种亲水胶体的形成机制是因蛋白质含有大量的氨基和羧基残基，在溶液中这些残基带有电荷，由于静电作用，在蛋白质分子周围出现了带相反电荷的电子云并形成了水化层，由于电荷的相斥，就避免了蛋白质分子间靠拢、凝集和沉淀。当抗原抗体结合后，使水化层表面电荷减少或消失，水化层变薄，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。再加入电解质，如NaCl，则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。
第二章抗原抗体反应 一、A1 1、抗原的特异性取决于 A、抗原的化学组成 B、抗原结构的复杂性 C、抗原表位的数量 D、抗原决定簇的性质及空间构型 E、抗原分子量的大小 2、抗原抗体结合过程中，下面哪种力所起作用最小 A、静电引力 B、范德华引力 C、氢键结合力 D、疏水作用力 E、共价键 3、必须与蛋白质载体结合才具有免疫原性的是 A、超抗原 B、变应原 C、半抗原 D、完全抗原 E、耐受原 4、根据抗原抗体反应的特点，以下提法哪一点是错误的 A、特异性 B、最适比例 C、反应分阶段 D、反应都不可逆 E、最适反应温度为37℃ 5、完全抗原的特钲是 A、有反应原性，无免疫原性 B、有免疫原性，无反应原性 C、无免疫原性和反应原性 D、有免疫原性和反应原性 E、必须与载体结合才具有免疫原性 6、沉淀反应中抗体过量的现象称为 A、后带 B、前带 C、带现象 D、等价带 E、拖尾 7、人体血清中的抗原、抗体等分子不会发生自然沉淀，主要原因是 A、带有大量的氨基和羧基残基形成水化层 B、周围电荷的相吸作用 C、亲水肢体转化为疏水胶体
D、抗原抗体比例合适 E、静电引力 8、下列哪种不属于抗原抗体反应的特点 A、特异性 B、敏感性 C、比例性 D、可逆性 E、存在交叉反应 9、抗原抗体反应最适宜的温度（℃）是 A、25℃ B、30℃ C、33℃ D、37℃ E、40℃ 10、影响抗原抗体反应的因素下列说法不正确的是 A、抗原的理化性质和分子量 B、抗体的浓度、特异性和亲和力 C、抗原决定簇的种类和数目 D、电解质和酸碱度 E、湿度 11、可以用已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原，是由于抗原抗体反应的 A、特异性 B、比例性 C、可逆性 D、亲和性 E、带现象 12、在抗原抗体反应中，通常被用作抗原抗体稀释液的溶液是 A、0.70% NaCl溶液 B、0.60% NaCl溶液 C、0.75% NaCl溶液 D、0.85% NaCl溶液 E、0.95% NaCl溶液 13、供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力是 A、静电引力 B、范德华引力 C、氢键结合力 D、疏水作用力 E、分子间结合力 14、有关交叉反应的描述，正确的是 A、为非特异性抗原抗体反命 B、由于不同抗原分子上存在公共抗原表位所致 C、对免疫学诊断结果判断无影响 D、利用交叉反应进行诊断典型例子是肥大试验
免疫学检测 抗原抗体反应(antigen-antibody reaction)是指抗原与相应抗体所发生的特异性结合反应。 抗原抗体反应的特点 （一）特异性抗原抗体的结合本质是抗原决定簇与抗体超变区的结合。抗原决定簇与抗体超变区在一级结构和空间构型上呈互补关系，所以它们的结合具有高度特异性。抗原抗体结合力的大小，常用亲和力（affinity）或亲合力（avidity）来表示，前者指抗体分子上一个抗原结合部位与相应的抗原决定基之间的结合强度，后者指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度。抗原与抗体的结合为非共价的可逆结合，它们空间构象的互补程度不同，结合力强弱也不同，互补程度越高，亲和力越高。 （二）可逆性抗原抗体结合反应不是化学反应，而是非共价键的结合。4种分子间引力参与了抗原抗体间的结合，分别是静电引力、范德华力、氢键结合力和疏水作用。抗体和抗原之间的亲和力源自抗体超变区和抗原决定簇在空间构型上的互补性。抗原和抗体分子均是极性分子，反应温度、酸碱度和离子浓度对它们的极性有重要影响，从而影响着两者的空间构型和亲和力。抗原抗体结合反应是可逆反应。正向反应产物是抗原抗体复合物，复合物解离则是逆向反应。（三）抗原和抗体的浓度及合适比例 抗原和抗体的浓度及合适比例是可见现象能否出现的关键。当比例不合适时，少量的小分子抗原抗体复合物停留在反应的第一阶段，不能进一步交联和聚集，故不出现肉眼可见的现象。一般用电解质溶液来调整抗原和抗体的浓度，使两者的比例合适。 （四）抗原抗体反应的阶段性 抗原抗体反应的过程可分为两个阶段。第一阶段是抗原抗体发生特异性结合，此阶段的抗原抗体复合物量很少，分子小，肉眼看不见。当抗原抗体比例合适并且具备一定的环境因素(如电解质、pH、温度、补体)时，抗原抗体复合物进一步交联和聚集，反应也进入第二阶段，即可见反应阶段。第二阶段的抗原抗体
全国体检预约平台 全国体检预约平台 影响抗原抗体反应的原因? 抗原与抗体发生特异性结合后，虽由亲水胶体变为疏水胶体，若溶液中无电解质参加，仍不出现可见反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85%氯化钠或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。影响抗原抗体反应的因素很多，主要有两个方面：一是抗原抗体本身 的因素;另一方面是反应环境因素。 一、反应物自身因素 不同来源的抗体，反应性各有差异，抗体的浓度、特异性和亲和力都影响抗原抗体反应，为提高试验的可靠性，应选择高特异性、高亲和力的抗体作为诊断试剂。等价带的宽窄也影响抗原抗体复合物的形成，单克隆抗体不适用于沉淀反应。 抗原的理化性状、分子量、抗原决定簇的种类及数目均可影响反应结果。颗粒性抗原出现凝集反应，可溶性抗原出现沉淀反应，单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。 二、环境条件 (一)电解质 抗原与抗体发生结合后，由亲水胶体变为疏水胶体的过程中须有电解 质参与才能进一步使抗原抗体复合物表面失去电荷，水化层破坏，复合物 相互靠拢聚集形成大块的凝集或沉淀。若无电解质参加，则不出现可见 反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成，常用 O.85%氯化钠或各种缓冲液 作抗原及抗体的稀释液及反应液。但电解质的浓度不宜过高，否则会出现 盐析现象。 (二)酸碱度 蛋白质具有两性电离性质，因此每种蛋白质都有固定的等电点。抗原抗体 反应必须在合适的 pH 环境中进行，pH 过高或过低都将影响抗原与抗体的理 化性质抗原抗体反应一般在 pH 为 6～9 进行。 (三)温度 抗原抗体反应必须在合适的温度中进行，一般以 15～40℃为宜，最适 反应温度为 37℃。某些特殊的抗原抗体反应，对温度有 一些特殊的要求，例如冷凝集素在 4℃左右与红细胞结合最好，20℃以上反 而解离。 此外，适当振荡和搅拌也能促进抗原抗体分子的接触，加速反应，其作用与反应物粒子大小成正比。 本文来源：杭州入职体检https://www.doczj.com/doc/6a4068949.html,/0571/cl/t40
转载某理工大学讲义，如果有更新的研究文章更好，呵呵 第一节抗原抗体反应的原理 抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇(表位)与抗体超变区的 沟槽分子表面的结构互性与亲合性而结合的。 一、抗原抗体的结合力 抗原抗体间结合为非共价键结合，有四种分子间引力参与。 (1)静电引力：是抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相 互吸引的力。又称为库伦引力。这种引力的大小与两电荷间的距离的平方 成反比。两个电荷距离越近，静电引力越强。 (2)范登华引力：是抗原与抗体两个大分子外层轨道上电子之间相互作 用时，因两者电子云中的偶极摆动而产生吸引力。能促使抗原抗体相互结合，这种引力的能量小于静电引力。 (3)氢键结合力：是抗体上亲水基团与相应抗原彼此接近时，相互间可 形成氢键，使抗原抗体相互结合。氢键结合力较范登华引力强。 (4)疏水作用力：是抗原表位与抗体超变区靠近时，相互间正、负极性 消失，亲水层也立即失去，排斥了两者之间的水分子，使抗原抗体进一步 相互吸引，促进其结合。疏水作用力是这些力中最强的，对维系抗原抗体 结合作用最大。 二、抗原抗体的亲合性和亲合力 亲合性是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相互适 应而存在的引力，它是抗原抗体之间固有的结合力，可用平衡常数K 来表示：K=K1/K2，K 值越大，亲合性越高；亲合性越高，与抗原结合越牢。 抗体的亲合力是指抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度， 与抗体结合价直接相关，即所谓多价优势，如IgG 为两价，亲合力为单价 的103倍，IgM 为5～10 价，亲合力为单价的107倍。由于抗原抗体的结合反应是可逆的，若抗体的亲合力高，与抗原分子结合牢固，不易解离；反 之即容易解离。 三、亲水胶体转化为疏水胶体 大多数抗原为蛋白质，抗体是球蛋白，它们溶解在水中皆为胶 体溶液，不会发生自然沉淀。这种亲水胶体的形成机制是因蛋白质含有大 量的氨基和羧基残基，在溶液中这些残基带有电荷，由于静电作用，在蛋 白质分子周围出现了带相反电荷的电子云并形成了水化层，由于电荷的相斥，就避免了蛋白质分子间靠拢、凝集和沉淀。当抗原抗体结合后，使水 化层表面电荷减少或消失，水化层变薄，电子云也消失，蛋白质由亲水胶 体转化为疏水胶体。再加入电解质，如NaCl，则进一步使疏水胶体物相互 靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。 第二节抗原抗体反应的特点 一、特异性 抗原抗体的特异性是指抗原分子上的抗原决定簇和抗体分子超变区结 合的特异性，由两者之间查问结构互补决定的。抗体分子VH 区和VL 区上各自具有的三个高变区共同组成抗原结合部位，该部位形成一个与抗原决 定簇互补的槽沟，决定了抗体的特异性。因此，在抗原抗体反应的免疫学 实验中，可以用已知的抗原或抗体来检测相应的抗体或抗原。但较大分子
抗原抗体反应教案 行业文档 (word可编辑版) 大连医科大学检验医学院 临床微生物与免疫 教研室: 学科: 免疫检验 抗原抗体反应授课题目: 授课对象: 医学检验 年月日时至授课时间: 年月日时止 授课教师: 大连医科大学检验学院制 教学目标及基本要求 了解抗原抗体反应的化学本质(原理)、特点; 掌握影响抗原抗体反应的因素及常用血清学反应的种类。教学内容提要及时间分配 1. 抗原抗体反应的原理 20min 2. 抗原抗体反应的特点 30min 3. 影响抗原抗体反应的因素及常用血清学反应 1学时 教学重点及难点 重点:抗原抗体反应的特点、影响因素及常用血清学反应。 难点:抗原抗体反应的化学本质。 教学内容 抗原抗体反应 (Antigen-antibody Reaction) 抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。它既可发生于体内，也可发生于体外。 在体内，抗原抗体反应是体液免疫(System immune)的基础。——Ag与Ab 在体内结合可发生吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用，这些都是机体的体液免疫效应的表现方式;
在体外,抗原抗体反应是血清学反应(Serologic reaction)的基础——Ag与Ab在体外(如试管)结合，可出现凝集、沉淀、补体参与的溶血等反应。因抗体主要存在于血清中，临床上一般多采用血清作试验。所以体外的抗原抗体反应又称为血清学反应。 一、抗原抗体反应的化学本质 (原理) 1. 结构基础:Ag决定簇与Ab Fab段超变区之间的互补性。 Ab N端可变区形成一个平穴槽，大小约150×6×nm。 Ag如楔状嵌入，其中超变区氨基酸残基的变异性使槽沟形状千变万化。只有与其空间结构互补的Ag决家簇才能嵌入，其关系如钥匙和锁。 2. 化学变化: ? 四种分子间作用力参与并促进Ag-Ab的反应 3+-a. Ag与Ab分子上带相反电荷基团 (-NH-CO )之间的引力 b. Vander waal’s forces (范德华力) c. 氢键 d. 疏水作用(Ag、Ab分子侧链上的非极性氨基酸之间) (极化的原子或分子间的作用力) ? 理化性质改变:亲水胶体转化为疏水胶体 抗原抗体反应之所以所能出现可见的反应现象，例如沉淀、凝集，是因为抗原抗体反应不仅包括特异性结合阶段，还涉及到非特异性的促凝聚过程。换言之，抗原抗体反应也是由亲水胶体向疏水胶体转变，进而凝聚成大复合物的过程。 抗体是球蛋白，大多数抗原亦属蛋白质。它们在通常血清学反应条件下，均带有负电荷使极化的水分子在其周围形成水化层，成为亲水胶体，因此不会自行聚合发生沉淀。当抗原与抗体特异性结合后，电荷因结合而减少或消失，水化层被破坏，并由于形成复合物，与水接触的表面积减少，由亲水胶体转化为疏水胶体。此时在电解质(例如NaCl)的作用下，使各疏水胶体之间更易靠扰聚集，形成可见的抗原抗体复合物。 抗原抗体反应的胶体状态的变化过程总结如下。 Ag+Ab 特异性结合 AgAb 电解质 (AgAb) n 亲水胶体带电荷的疏水胶体疏水胶体凝集 3. 反应过程:
第二章（2）抗原抗体反应 Chapter 13 Antigen and Antibody Reaction 第一部分教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：抗原抗体反应的原理和特点，抗原抗体反应的带现象、前带、后带，亲和力、亲和性的概念；熟悉：抗原抗体反应的影响因素；了解：抗原抗体反应的基本类型。 二、教学内容 1。抗原抗体反应的原理：抗原抗体的结合力，抗原抗体的亲和性，亲水胶体转化为疏水胶体。 2。抗原抗体反应的特点：特异性，比例性，可逆性。 3。影响抗原抗体反应的因素：反应物自身因素，环境条件，对照设置。 第二部分测试题 一、选择题 （一）单项选择题（A型题） 1.抗原抗体结合力中作用最大的是 A.静电引力 B.范登华引力 C.氢键结合力 D.疏水作用力 E.分子间结合力 2.抗原抗体结合力中作用最小的是 A.静电引力 B.范登华引力 C.氢键结合力 D.疏水作用力 E. 分子间结合力 3.抗原自凝现象出现在下列哪种情况 A.反应pH达到或接近颗粒抗原的等电点 B.反应pH达到或接近抗原的等电点 C.反应pH高于颗粒抗原的等电点 D.反应pH低于颗粒抗原的等电点 E.反应pH高于抗原的等电点 4.用已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原，是由于抗原抗体反应具有 A.特异性 B.比例性 C.可逆性 D.亲和性 E.带现象 5.外-斐试验是利用了 A.过量抗原 B.共同抗原 C.过量抗体 D.亲和性 E.可逆反应 6.免疫血清制备时，下列说法正确的是 A.早期获得的抗血清亲和力低，特异性好。 B.早期获得的抗血清亲和力高，特异性好。 C.早期获得的抗血清亲和力低，特异性低。 D.后期获得的抗血清亲和力低，特异性好。 E.后期获得的抗血清亲和力高，特异性低。 7.抗原抗体反应的特异性是指抗原决定簇和抗体分子什么区结合的特异性 A.可变区 B.恒定区 C.高变区 D.超变区 E.低变区 8.下列哪种免疫血清与相应抗原结合可形成可见免疫复合物 A.人 B.马 C.家兔 D.猴 E.牛 9.抗原抗体反应中，抗体的合适浓度是 A.固定的 B.规定的 C.与抗原相对而言 D.随便设定的 E.人为规定的 10.有补体参与的反应最适宜的pH A.6.0～9.0 B.7.0～9.0 C.7.2～7.4 D.6.0～8.0 E.7.0～7.5 11.在抗原抗体反应中，通常使用什么溶液作抗原抗体稀释液 A.0.70%NaCl溶液 B.0.60% NaCl溶液 C.0.75% NaCl溶液 D.0.85% NaCl溶液 E.0.95% NaCl溶液 12.静电引力大小 A.和两个电荷的距离成正比 B.和两个电荷的距离的平方成正比 C.和两个电荷的距离成反比 D.和两个电荷的距离的平方成反比 E.和两个电荷的距离平方不成比例关系 13.抗原抗体反应比例不合适出现的沉淀物减少的现象称为 A.前带 B.后带 C.带现象 D.等价带 E.等电点 14.由于抗原过量导致抗原抗体结合物减少的现象为：
第二章抗原抗体反应 第一节抗原抗体反应的原理 抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。 除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。 一、抗原抗体结合力 抗原抗体是一种非共价结合，不形成共价键。 1.静电引力（库伦引力）：是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力，这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。两个电荷距离越近，静电引力越大。 2.范德华力：这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时，两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。这种引力的能量小于静电引力。 3.氢键结合力：是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。其结合力较强于范德华引力。 4.疏水作用：最强。水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。 二、抗原抗体的亲和性和亲合力 亲和性指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相适应而存在的引力，它是抗原抗体间固有的结合力。亲和性用平衡常数K来表示，K值越大，亲和性越强，与抗原结合也越牢固。 抗体的亲合力指抗体结合部位与抗原表位间结合的强度，与抗体结合价、抗体的亲和性、抗原有效表位数目等相关。 三、亲水胶体转化为疏水胶体 抗体和大多数的抗原同属蛋白质，在通常的血清学反应条件下带有负电荷，形成水化层，成为新水胶体，因此，蛋白质分子不会相互凝集或沉淀。 当抗原与抗体结合，使其表面电荷减少，水化层变薄，失去亲水性能，抗原抗体复合物成为疏水胶体。在电解质作用下，胶体粒子表面的电荷被中和，使疏水胶体进一步靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。 第二节抗原抗体反应的特点 一、特异性 抗原表位与抗体超变区结合的特异性，是两者在化学结构和空间构型上呈互补关系所决定的。这一特性，是应用于临床诊断的基础。 但某些天然抗原具有多种抗原表位，与另一物质可能有共同抗原表位，对检验结果产生交叉反应。 二、可逆性 抗原抗体是非共价结合，故不牢固，是一种动态平衡过程。抗原抗体的亲合力及反应条件（如离子强度、pH等）可影响解离。 亲和层析法就是利用这个原理来纯化抗原或抗体。 三、比例性 抗原抗体比例合适时，沉淀物形成快而多，称为抗原抗体反应的等价带；若抗原或抗体极度过剩则无沉淀形成，称为带现象，抗体过量时，称为前带，抗原过量时，称为后带。
第二章抗原 一. 名词解释 1.抗原（antigen） 2.半抗原(hapten) 3.抗原决定基（antigenic determinant） 4.胸腺依赖性抗原 (TD-Ag) 5.交叉反应(cross reaction) 二.单项选择题：（从5个备选答案中选择一个正确或最为接近的） 1.免疫原性是指（） A.抗原分子能与应答产物发生特异性反应的特性 B.抗原分子不能与应答产物发生特异性反应的特性 C.抗原分子能诱导免疫应答的特性 D.抗原分子不能诱导免疫应答的特性 E.抗原与载体结合后诱导免疫应答的特性 2.异物是指（） A.异种物质 B.同种异体物质 C.结构发生改变的自身物质 D.胚胎期未曾与机体免疫细胞接触过的物质 E.以上均是 4.决定抗原与抗体反应特异性的物质基础是（） A.载体 B.佐剂 C.抗原决定基 D.TI-Ag E.TD-Ag 5.对人体具有抗原和抗体二重性的物质是（） A.人抗白喉外毒素血清 B.干扰素 C.具有免疫活性的淋巴细胞 D.细菌外毒素 E.马抗破伤风血清 6.兄弟姐妹间进行器官移植引起排斥反应的物质是（） A.异种抗原 B.自身抗原 C.同种异体抗原 D.异嗜性抗原 E.超抗原 7.有的抗原称为胸腺依赖性抗原(TD-Ag)是因为（） A.B细胞需要胸腺的辅助才能产生抗体 B.TD-Ag刺激机体在胸腺内产生抗体 C.TD-Ag在胸腺中被加工、处理后刺激机体产生抗体； D.TD-Ag需要巨噬细胞、T和B细胞相互协作，才能刺激机体产生抗体 E.TD-Ag只能引起细胞免疫应答，不能刺激机体产生抗体 8.用间位氨基苯甲酸与载体结合免疫实验动物，制备的抗血清能与哪种物质进行特异性结合反应（） A.苯胺； B.对氨基苯砷酸； C.间位对氨基苯磺酸； D.邻位对氨基苯甲酸； E.间位氨基苯甲酸 10.正常情况下，自身组织成分无免疫原性是由于（） A ：体内有针对自身组织成分的抑制性T淋巴细胞 B ：自身组织成分分子量小 C ：自身组织成分无抗原决定簇 D ：胚胎期机体形成对自身组织成分的免疫耐受 E ：自身组织成分分子结构简单 11.下列哪组现象均属交叉反应（） A.DNP—BSA免疫动物后，产生抗BSA抗体；链球菌感染后引起风湿性心内膜炎。
抗原抗体反应的临床特点 抗原抗体反应的临床特点 (一)特异性抗原抗体的结合实质上是抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原与抗体的结合具有高度的特异性。这种特异性如同钥匙和锁的关系。例如白喉抗毒素只能与相应的外毒素结合，而不能与破伤风外毒素结合。但较大分子的蛋白质常含有多种抗原表位。如果两种不同的抗原分子上有相同的抗原表位，或抗原、抗体间构型部分相同，皆可出现交叉反应医`学教育网搜集整理。 (二)按比例。 在抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关。无论在一定量的抗体中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗体，均可发现只有在两者分子比例合适时才出生现最强的反应。以沉淀反应为例，若向一排试管中中入一定量的抗体，然后依次向各管中加入递增量的相应可溶性抗原，根据所形成的沉淀物及抗原抗体的比例关系可绘制出反应曲线(图9-1)。从图中可见，曲线的高峰部分是抗原抗体分子比例合适的范围，称为抗原抗体反应的等价带(zoneofequivalence)。在此范围内，抗原抗体充分结合，沉淀物形成快而多。其中有一管反应最快，沉淀物形成最多，上清液中几乎无游离抗原或抗体存在，表明抗原与抗体浓度的比例最为合适，称为最适比(optimalratio)。在等价带前后分别为抗体过剩则无沉淀物形成，这种现象称为带现象(zonephenomenon)。出现在抗体过量时，称为前带(prezone)，出现在抗原过剩时，称为后带(postzone)。 关于抗原抗体结合后如何形成聚合物，曾经有过不少解释。结合现代免疫学的成就呼电镜观察所见，仍可用Marrack(1934)提出的网格学说(latticetheory)加以说明。因为大多数抗体的巨大网格状聚集体，形成肉眼可见的沉淀物。但当抗原或抗体过量时，由于其结合价不能相互饱和，就只能形成较小的沉淀物或可溶性抗原抗体复合物。 在用沉淀反应对不同来源的抗血清进行比较后，发现抗体可按等价带范围大小分为两种类型，即R型抗体和H型抗体。R型抗体以家兔免疫血清为代表，具有较宽的抗原抗体合适比例范围，只在抗原过量时，才易出现溶性免疫复合物，大多数动物的免疫血均属此型。H型抗体以马免疫血清为代表，其抗原与抗体的合适比例范围较窄，抗原或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合物。人和许多大动物的抗血清皆属H型。
抗原抗体反应及其应用 摘要抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。免疫印迹，又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。双转印法、天然电泳及western blot 分析等是最近几年出现的新型蛋白印迹技术。单克隆抗体技术是20世纪后20年内最为重要的生物高技术之一。单克隆抗体药物在肿瘤治疗、抗感染等方面具有重要的作用。关键词抗原抗体反应、Western blotting、单克隆抗体技术 一、抗原抗体反应 抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。这种反应既可在机体内进行，也可以在机体外进行。抗原抗体反应的过程是经过一系列的化学和物理变化，包括抗原抗体特异性结合和非特异性促凝聚两个阶段，以及由亲水胶体转为疏水胶体的变化[1]。抗原是能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。抗原表位是抗原上与抗体结合的区域。蛋白质抗原的表位是由相邻的连续的或非连续的氨基酸序列形成的局部表面结构[2]，如图1所示。抗体是指宿主对体内存在的外来分子、微生物或其他因子的应答而产生的蛋白质。抗体主要由B淋巴细胞系的终末分化细胞-浆细胞产生，并且循环在血液和淋巴液中，在那里与抗原结合。抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。抗体上与抗原表位结合的位点由重链和轻链的可变区构成[3]，如图2所示。抗原抗体复合物通过大量非共价键连接。某些免疫复合物中抗体或抗原的结构未发生改变，而另一些则出现巨大的构像改变。研究抗原抗体复合物最有说服力的的方法是抗体-抗原共结晶的X射线衍射技术。
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 抗原抗体反应及应用 不论天然的还是人工合成的分子，只要能被机体的免疫系统识别的都可以诱导机体的免疫应答，产生相应的抗体。 大多数抗体和抗原本身是既有免疫原性(诱发产生特异抗体) ，又有反应原性(与特异的抗体相结合) 。 抗原与抗体的特异性反应不仅可以在体内进行，而且可以在体外进行。 一切利用血清学技术方法所进行的各种测试都是基于这一根本的特性。 抗体反应技术的应用之广泛已经远远超出了免疫学、医学、甚至生命科学的范围，成为类微量，灵敏，快速的检测分析方法。 本章着重介绍抗体制备，抗体抗原反应原理及技术方法的应用。 第一节抗体的制备环境中的大部分生物(包括病原生物) 及其产物分子和一些化合物对哺乳动物的免疫系统而言是外源抗原，这些抗原能通过侵染或其他的途径刺激免疫系统，产生以抗体为主的体液免疫应答。 同样用抗原人工免疫实验动物，可以获得含有特异性抗体的血清，称为抗血清(antiserum) ，因血清中抗体是多个抗原决定簇刺激不同 B 细胞克隆而产生的抗体，所以称多克隆抗体(polyclonal antibody) 。 一个 B 细胞克隆所分泌的抗体即为单克隆抗体。 1 / 3
用免疫动物的 B 细胞与骨髓瘤细胞融合，在体外可以分离出许多单个 B 细胞克隆，以此方法可制备单克隆抗体(monoclonal antibody) 。 随着分子生物学技术的发展，已经可以用抗体基因文库(antibody combinatorial library) 筛选制备单克隆抗体。 应用基因工程技术，根据需要对抗体进行改造，获得基因工程抗体(engineering antibody) ，以及催化性抗体(catalytic antibody 或 abozyme) 等的全新的抗体。 一、抗血清的制备 1．免疫动物 (1) 抗原： 免疫动物是制备抗血清的第步。 免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他蛋白质抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必须与大分子载体连接，连接剂见表71。 抗原的用量视抗原种类及动物而异，次注射小鼠可以少至几个微克，免、羊甚至更大的动物每次注射的量就相应增加，从几百 g ／次至几 mg／次。 〔2) 佐剂及乳化： 佐剂可以帮助抗原在注射部位缓慢释放，以增加免疫刺激的效果。 佐剂有完全和不完全佐剂之分。 完全佐剂加有灭活的分枝杆菌(如卡介苗) 或棒状杆菌。 福氏佐剂可从试剂公司购买，也可用羊毛脂和石蜡油按 1：
抗原或抗体的检测方法概述 一、检测的原理 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。 1．抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。 2．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。 对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。https://www.doczj.com/doc/6a4068949.html, （1）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体（或抗原）的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原（或抗体）量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原（或抗体）的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。 （2）抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工作中，把浓度低的反应成分（抗原或抗体）的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比较3只家兔产生抗体的多少，即滴定3只兔血清抗体效价，可用双向琼脂扩散法来滴定，例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度（如甲兔的抗体效价为1/2000，而丙免的是1/8000则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高）。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。因人血清（抗原）和抗体（免疫兔血清）相比，浓度高，故应稀释抗原。 二、抗原或抗体检测的实用意义 1．抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLA抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体，对有关疾病的诊断有重要意义。
几种常用的抗体检测方法 (1)免疫酶技术 免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。 A、器材和试剂 a. 包被缓冲液： 碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。 Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml 混合，加蒸馏水至1000ml。 b. 洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4&S226;12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。 c. 稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。 d. 酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。 e. 底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L 柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。 f. 底物使用液： OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O2 0.15ml。TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml）1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。 ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。 g. 抗体对照：以骨髓瘤细胞培养上清作为阴性对照，以免疫鼠血清作为阳性血清。 h. 抗原：可溶性抗原：尽量纯化，以获得高特异性。 病毒感染的传代细胞或全菌抗原。 淋巴细胞等悬液。 i. 酶标抗鼠抗体或酶标SPA或其他类似试剂。
第二章抗原抗体反应 A1/A2型题 1．不能成为免疫原的是（）。 A．与红细胞结合的青霉素代谢产物 B．与蛋白质结合的DNP C．细菌蛋白 D．类毒素 E．氧化铝 【答案】E 2．关于表位的说法，正确的是（）。 A．半抗原 B．抗原决定簇 C．超抗原 D．抗原与MHC结合分子的部位 E．新抗原 【答案】B 3．不属于抗原抗体反应特点的是（）。 A．特异性 B．比例性 C．多价性
D．可逆性 E．电离性 【答案】E 4．有反应原性而无免疫原性的物质称为（）。 A．超抗原 B．变应原 C．半抗原 D．耐受原 E．完全抗原 【答案】C 5．供氢体上的氢原子与受氢体上的氢原子相互作用的引力属于（）。 A．静电引力 B．范德华引力 C．氢键结合力 D．分子间结合力 E．疏水作用力 【答案】C 6．下列不是影响抗原抗体反应的因素为（）。 A．温度 B．适当振摇 C．pH D．电解质
E．溶液量 【答案】E 7．抗原抗体之间的反应速度会随温度的升高而（）。 A．降低 B．增加 C．不变 D．温度过高，反应速度会降低 E．以上都不对 【答案】D 8．用已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原是基于抗原抗体反应的（）。 A．特异性 B．可逆性 C．比例性 D．亲和性 E．带现象 【答案】A 9．起主要作用的抗原抗体结合力是（）。 A．静电引力 B．氢键结合力 C．范德华引力 D．疏水作用力 E．分子间结合力
【答案】D 10．常用的亲和层析技术是利用抗原抗体反应的（）。 A．特异性 B．可逆性 C．结合性 D．比例性 E．不可逆性 【答案】B 11．最适宜的抗原抗体反应温度为（）。 A．40℃ B．37℃ C．33℃ D．30℃ E．25℃ 【答案】B 12．一般抗原抗体反应的温度区间为（）。 A．15～25℃ B．15～35℃ C．15～37℃ D．15～40℃ E．18～42℃ 【答案】D
一、抗原抗体反应的基本原理：Ag与Ab的特异性结合是基于Ag决定簇与超变区分子 间的结构互补性和亲和性。 二、Ag与Ab结合力有四种：静电引力，范德华力，氢键结合力，疏水作用力四种结 合力的强弱。疏水>氢键>静电>范德华力 三、Ag与Ab反应特点：特异性，比例性，可逆性。 沉淀反应曲线的意义：曲线的高峰部分是AgAb分子比例合适的范围，称为AgAb的等价带。在此范围内结合充分，沉淀物形成快而多。当ab过量时称为前带，反之后带。 四、影响AgAb反应因素，主要有两方面，一、反应物自身因素。环境因素，电解质， ph，温度。 五、佐剂：与Ag一起或预先注入机体内，可增强机体对该Ag免疫应答能力或改变应 答类型的物质。 六、单克隆抗体：由一个B细胞克隆产生的，只能识别某一个抗原表位的高度特异性 Ab称为单克隆抗体 七、Ch50试验：即补体50%溶血试验，是根据补体能使致敏的SRBC发生溶血的原理 而建立起测定补体活性的试验，该试验以50%溶血作为终点指标，因此称为ch50试验。 八、超敏反应：是指机体对某些抗原初次应答致敏后，再次接触相同抗原刺激时，所出 现的一种以生理功能紊乱和组织细胞损伤为主的异常免疫应答。 九、M蛋白：单克隆免疫球蛋白，是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一 种在氨基酸组成及顺序十分均一的异常单克隆免疫球蛋白；多见于多发性骨髓瘤、巨秋蛋白血症和恶性淋巴瘤，故命名为M蛋白。 十、AID：自身免疫性疾病：当机体免疫系统受某些内因、外因或遗传等因素作用产生 针对自身正常或变性的自身抗原发生免疫应答，导致自身组织器官损伤或功能障碍所致的疾病称自身免疫性疾病。 十一、TAA:肿瘤相关抗原，非肿瘤细胞所特有的抗原成分，也少量存在于正常细胞，但是在肿瘤发生的机体可异常表达。 十二、GVHR：移植物抗宿主反应，由于移植物中的大量免疫活性细胞，受体免疫功能低下，供受体之间MHC抗原不符等引起杀伤宿主靶细胞的现象。 十三、包被：特异性抗原或抗体充分反应，形成固相抗体/载体复合物的过程。 十四、沉淀反应：可溶慈宁宫抗原和抗体在适当条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象。
第二章抗原抗体反应 本章考点 1.概述 2.抗原抗体反应原理 3.抗原抗体反应的特点 4.抗原抗体反应的影响因素 5.抗原抗体反应的类型 第一节抗原抗体反应原理 抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。 抗原抗体反应可分为两个阶段：第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应；第二阶段为可见反应阶段，这一阶段抗原抗体复合物在适当温度、pH、电解质和补体影响下，出现沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合介导的肉眼可见的反应，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。在血清学反应中，以上两阶段往往不能严格分开，往往受反应条件（如温度、pH、电解质、抗原抗体比例等）的影响。 （一）抗原抗体结合力 抗原抗体是一种非共价的结合，不形成共价键，需要四种分子间引力参与。 1.静电引力：又称库伦引力。是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力，这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。两个电荷距离越近，静电引力越大； 2.范德华引力：这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时，两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。这种引力的能量小于静电引力； 3.氢键结合力：是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。其结合力较强于范德华引力； 4.疏水作用力：水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。当抗原表位和抗体超变区靠近时，相互间正负极性消失，周围亲水层也立即失去，从而排斥两者间的水分子，使抗原抗体进一步吸引和结合。疏水作用力是这些结合力中最强的，因而对维系抗原抗体结合作用最大。 图10 抗原与抗体的结合力 （二）抗原抗体的亲和性和亲和力