18种天然氨基酸分析(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)
——序列号: D024 1 适用范围
该方法适用于氨基酸注射液、动植物性食品和饲料中Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)等18种天然氨基酸的检测
2 溶液配制
氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准品，用0.1 mol/L HCl水溶液溶解，
胱氨酸为0.01 mol/L，酪氨酸为0.02 mol/L，其他氨基酸
为0.05 mol/L
氨基酸使用液：将储备液用0.1 mol/L HCl水溶液稀释，得到浓度为0.002
mol/L的氨基酸单标和混标
内标液：以正亮氨酸作为内标物。称取一定量正亮氨酸，溶于0.1
mol/L HCl水溶液，得到0.02 mol/L的正亮氨酸内标液异硫氰酸苯酯溶液：将250 μl异硫氰酸苯酯用乙腈乙腈定容至10 ml，得到
0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液
三乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml，得到1.0 mol/L三
乙胺溶液
3 衍生化
3.1 样品溶液衍生化
量取200 μl样品溶液(蛋白质水解液或游离氨基酸溶液)[1]，置于1.5 ml塑料离心管中，加入20 μl正亮氨酸内标溶液[2]，混匀，再加入100 μl 1 mol/L三乙胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，室温反应1小时，然
后加入400μl正己烷，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μl下层溶液与800 μl水混合[3]，0.22 μm针式过滤器过滤，待分析。
3.2 标准溶液衍生化
量取200 μl氨基酸混合标准溶液(每种组分浓度均为0.002 mol/L)，置于1.5 ml 塑料离心管中，准确加入20 μl正亮氨酸内标溶液[2]、100 μl 1 mol/L三乙胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，室温反应1小时，然后加入正己烷400 μl，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μl下层溶液与800 μl水混合[3]，0.22 μm针式过滤器过滤，待分析。
注：
[1] 通过控制原始样品质量或稀释等方法，使样品溶液中的氨基酸总量不超过0.04 mol/L或3.0 g/L(两者中取最小值)
[2] 只有采用内标法分析时，才需要加入正亮氨酸作为内标物
[3] 衍生得到的样品溶液中含有50%的乙腈，这与流动相溶剂体系存在较大差距，因而需要加水稀释，否则会引起峰前沿或分叉
4 分析条件
色谱柱: Diamonsil AAA氨基酸分析柱，250×4.6 mm，5 μm
流动相A: 0.05 mol/L乙酸钠水溶液(冰乙酸调节pH值为6.50 ± 0.05)
流动相B: 甲醇: 乙腈: 水=20 : 60 : 20(V : V : V)
流速: 1.0 ml/min
柱温: 35 ℃
进样体积: 10 μl
梯度程序
二元高压HPLC系统
比如Shimadzu 10A、20 A、Agilent 1200，双泵后配备1.7～2.6 ml涡流混合器
10
20
3040
Time (min)
12
3
4567
8
910
11
1213
14
1516
171819
20
18种天然氨基酸、正亮氨酸以及NH 3(氨)-异硫氰酸苯酯衍生物的液相色谱图
3的20种化合物完全得到分离，相邻色谱峰的分离度大于2.0。
氨基酸对农作物的作用 随科学技术的创新，化学家们让氨基酸登上农业的历史舞台，使它在无污染方面大显身手。氨基酸是蛋白质的基石，它们都含有一定量的氮素，正是农作物生长所必需的。把氨基酸制成的肥料，喷洒在农作物上，农作物像人吃了“补药”一样，茁壮成长，结出丰硕的果实；在蔬菜和瓜果上施用，也会使人得到满意的效果。日本科学家用脯氨酸万分之四的溶液喷洒到玉米上，玉米产量提高20％，只要它喷洒到水稻、黄瓜上，产量均提高15％。日本农业科技人员还将甘氨酸拌人无污染的磷、钾肥中，可增加农作物对磷、钾元素的吸收。甘氨酸本身也起到氮肥的作用美国科学家证明，甘氨酸对甘蔗的生长起特殊作用，如1亩地用85％的甘氨酸溶液0．2公斤洒喷，成熟时甘蔗的糖份可增加13％；此外，还可用谷氨酸钠溶液浸泡大豆种子，大豆生长旺盛，产量大增。氨基酸配成的农药功能十分良好。能起到植物“抗菌素”的作用。实践证明，直接使用各种氨基酸能有效地防、治农作物的各种疾病。如印度科学家辛格用低浓度的蛋氨酸喷在水稻上，防止了水稻腐根菌的侵害。同时蛋氨酸能杀灭黄瓜茎上的许多寄生病菌。日本科学家用万分之五浓度的DI一苏氨酸3O毫升喷于柠檬树上，有效地抵抗黑斑病。近年来许多国家的科学家研究发现把色氨酸、半胱氨酸、丙氨酸等喷洒于农作物上，都有抵抗和消灭农作物病菌的效果。氨基酸农药还有除草作用。根据近年统计，用氨基酸衍生物研究成功的除草剂，形成的专利已有100多个已形成一大类无污染的除草剂。七十年代初德国化学家合成了N—磷酸甲酯甘氨酸，在玉米和大豆田里试用表明，每亩只用1．5公斤就可消灭一切杂草。相继日本化学家合成一种广谱除草剂——硫代氨基酸，它可消灭一切杂草，而且对人畜无害。氨基酸农药可以灭虫或驱虫，例如南瓜子和使君子等药物作驱虫剂，现代化学家研究，其中有效成分就是氨基酸。80年代初美国科学家傲了一个试验，他用10％浓度的半胱氨酸和饱和蔗糖溶液拌合杀黄瓜蝇，20天后黄瓜蝇全部死亡。更有研究人员用4％的月桂酰肌氨酸杀灭体虱，两分钟后体虱全部死亡。氨基酸做成农药和化肥，从理论和实践上已知绝不会蛤环境、空气、水源、土壤造成污染，更不会使农产品(粮食、蔬菜、水果等)带有潜伏性的危害。在这知识创新、科技创新的时代里，农业生产无污染化已提到科技人员的面前，只有更新当前使用的化肥和农药。氨基酸的生理功能氨基酸通过肽键连接起来成为肽与蛋白质。氨基酸、肽与蛋白质均是有机生命体组织细胞的基本组成成分，对生命活动发挥着举足轻重的作用。某些氨基酸除可形成蛋白质外，还参与一些特殊的代谢反应，表现出某些重要特性。（1）赖氨酸赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸。赖氨酸可以调节人体代谢平衡。赖文档冲亿季，好礼乐相随mini ipad移动硬盘拍立得百度书包氨酸为合成肉碱提供结构组分，而肉碱会促使细胞中脂肪酸的合成。往食物中添加少量的赖氨酸，可以刺激胃蛋白酶与胃酸的分泌，提高胃液分泌功效，起到增进食欲、促进幼儿生长与发育的作用。赖氨酸还能提高钙的吸收及其在体内的积累，加速骨骼生长。如缺乏赖氨酸，会造成胃液分沁不足而出现厌食、营养性贫血，致使中枢神经受阻、发育不良。赖氨酸在医药上还可作为利尿剂的辅助药物，治疗因血中氯化物减少而引起的铅中毒现象，还可与酸性药物（如水杨酸等）生成盐来减轻不良反应，与蛋氨酸合用则可抑制重症高血压病。单纯性疱疹病毒是引起唇疱疹、热病性疱疹与生殖器疱疹的原因，而其近属带状疱疹病毒是水痘、带状疱疹和传染性单核细胞增生症的致病者。印第安波波利斯Lilly研究室在1979年发表的研究表明，补充赖氨酸能加速疱疹感染的康复并抑制其复发。长期服用赖氨酸可拮抗另一个氨基酸――精氨酸，而精氨酸能促进疱疹病毒的生长。（2）蛋氨酸蛋氨酸是含硫必需氨基酸，与生物体内各种含硫化合物的代谢密切相关。当缺乏蛋氨酸时，会引起食欲减退、生长减缓或不增加体重、肾脏肿大和肝脏铁堆积等现象，最后导致肝坏死或纤维化。蛋氨酸还可利用其所带的甲基，对有毒物或药物进行甲基化而起到解毒
1) 天平一台（精度0.1mg）2) 恒温水浴锅一台3) 容量瓶 4) 试管（1.5×15cm或1.5×10cm）5) 微量进样器（5μL或10μL）一支 6) 微量可调移液枪（1000μL，200μL）一支、吸头多个。7) 旋涡混匀器一台 8) HPLC系统及氨基酸分析专用柱（4.6×250mm 5μm） 一. 仪器及试剂 二. 流动相的配制 三. 衍生化反应 1. 对照品溶液浓度值 18种氨基酸分析方法 仪 器： 流动相 A：0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.5）：乙睛＝93.0：7.0 流动相 B：水：乙腈＝20.0：80.0 配制方法：准确量取水200mL和乙腈800mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜1) 超纯水（≥18MΩ·cm）2) 乙腈（HPLC级）3) 三水合醋酸钠（分析纯）4) 冰醋酸（分析纯） 5) 衍生试剂A和衍生试剂B溶液，至于冰箱保存（衍生试剂包对身体有害，用时请做好防护措施）6) 正己烷（HPLC级） 7) 0.1mol/L盐酸溶液：量取9.0mL浓盐酸，加去离子水稀释至1000mL。 8) 正亮氨酸内标溶液：称取正亮氨酸约10mg，加0.1mol/L 盐酸溶液 10mL溶解，混匀。 试 剂： 配制方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000mL水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50；准确量取配制好的三 水合醋酸钠溶液930mL和乙腈70mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜。。
月旭科技（上海）股份有限公司 公司官网：https://www.doczj.com/doc/689357064.html, 服务热线：400-808-6760 2. 注意事项： 1）进样分析：先进对照品溶液，后进供试品溶液；2）缓冲溶液，隔天需重新配制；3）防止缓冲盐析出。 5）运行一次空白梯度； 6）进样分析；7) 分析完成后： I）用乙腈：水＝20：80代替流动相A ，进水样（清洗自动进样器）， 进行梯度洗脱； II）换90％乙腈冲洗色谱柱40min以上。 波 长：254nm 进样量：10μL ｍｉｎ ５1015202530100 80 60 40 20 12 3 45 6 78 9 10 11 12 14 13 1516 17 18 19 色谱图：
一．甘氨酸（GLY） 1、降低血液中的胆固醇浓度，防治高血压 2、降低血液中的血糖值，防治糖尿病 3、能防治血凝、血栓 4、提高肌肉活力，防止胃酸过多 5、甜味为砂糖的0.8倍，对人体有补益等营养作用 二.亮氨酸（LEU） 1、降低血液中的血糖值，对治疗头晕有作用 2、促进皮肤、伤口及骨头有愈合作用 3、如果缺乏时，会停止生长，体重减轻 三.蛋氨酸（MET） 1、参与胆碱的合成，具有去脂的功能，防治动脉硬化高血脂症 2、有提高肌肉活力的功能 3、促进皮肤蛋白质和胰岛素的合成 四.酪氨酸（TYR） 1、造肾上腺激素、甲状腺激素和黑色素的必需氨基酸 2、可防治老年痴呆症 3、促进新陈代谢，增进食欲 4、对治疗胃溃疡等慢性疾病、神经性炎症及发育不良等效果 5、与色素形成有关系，缺乏时会利白化症 五.组氨酸（HIS） 1、参与血球蛋白合成，促进血液生成 2、产生组氨、促进血管扩张，增加血管壁的渗透性 3、医治胃病、十二指肠等有特效 4、促进腺体分泌，对过敏性疫病有效果 5、可治疗消化性溃疡、发育不良等症状 6、对治疗心功能不全、心绞痛、降低血压、哮喘及类风湿关节炎有效果 六.苏氨酸（THR） 人体必需，缺乏时会使人消瘦，甚至死亡
七.丙氨酸（ALA） 1、能促进血液中酒精的代谢（分解）作用增强肝功能，有保肝护肝作用 2、甜味为砂糖的1.2倍 八.异亮氨酸（ILE） 1、能维持机体平衡，治疗精神障碍 2、有促进食欲的增加和抗贫血的作用 3、如果缺乏时，会出现体力衰竭，昏迷等症状 九.色氨酸（TRY） 1、促进血红蛋白的合成 2、防治癞皮病 3、促进生长，增加食欲 4、甜味为砂糖的35倍，配制生产的低塘食物等对糖尿病、肥胖病人食用较好 十.胱氨酸（CYS） 1、有治疗脂肪肝和解毒效果 2、治疗皮肤的损伤，对病后、产后脱发有疗效 十一.赖氨酸（LYB） 1、参与结缔组织、微血管上皮细胞间质的形成，并保持正常的渗透性 2、可增加食欲，促进胃蛋白酶的分泌，增强免疫能力，改善发育迟缓，防止蛀牙，促进儿童生长 3、提高钙的吸收，促进骨骼生长 4、如果缺乏，会降低人的敏感性，妇女会停经，出现贫血、头晕、头昏和恶心等病状 十二.天门冬氨酸（ASP） 1、降代血氨，对肝有保护作用 2、对肌肉有保护作用，可治疗心绞痛，对心肌梗塞等有防治效果 3、增加鲜味，促进食欲 十三.缬氨酸（VAL） 1、促使神经系统功能正常
一、蛋白质与氨基酸的关系 一般认为，动物蛋白质的营养实质上是氨基酸的营养。只有当组成蛋白质的各种氨基酸同时存在且按需求比例供给时，动物才能有效地合成蛋白质。饲粮中缺乏任何一种氨基酸，即使其他必需氨基酸含量充足, 体蛋白质合成也不能正常进行。同样，体蛋白合成潜力越大的动物（如高瘦肉型猪），对氨基酸的需求量就越高。 畜禽饲粮中必需氨基酸的需要量取决于饲粮中的粗蛋白水平。例如, 仔猪饲粮中蛋白质含量由10%增至22%时, 饲粮赖氨酸的需要量则从0.6 % 增至1.2 % 。另一方面，饲粮粗蛋白质需要量取决于氨基酸的平衡状况。一般而言，依次平衡第一至第四限制性氨基酸后，饲粮的粗蛋白质需要量可降低2-4个百分点。 二、氨基酸间的相互关系 组成蛋白质的各种氨基酸在机体代谢过程中, 亦存在协同、转化、替代和拮抗等关系。 蛋氨酸可转化为胱氨酸,也可能转化为半胱氨酸, 但其逆反应均不能进行。因此, 蛋氨酸能满足总含硫氨基酸的需要, 但是蛋氨酸本身的需要量只能由蛋氨酸满足。半胱氨酸和胱氨酸间则可以互变。苯丙氨酸能满足酪氨酸的需要, 因为它能转化为酪氨酸, 但酪氨酸不能转化为苯丙氨酸。由于上述关系,在考虑必需氨基酸的需要时, 可将蛋氨酸与胱氨酸、苯丙氨酸与酪氨酸合并计算。 氨基酸间的拮抗作用发生在结构相似的氨基酸间, 因为它们在吸收过程中共用同一转移系统, 存在相互竞争。最典型的具有拮抗作用的氨基酸是赖氨酸和精氨酸。饲粮中赖氨酸过量会增加精氨酸的需要量。当雏鸡饲粮中赖氨酸过量时, 添加精氨酸可缓解由于赖氨酸过量所引起的失衡现象。亮氨酸与异亮氨酸因化学结构相似, 也有拮抗作用。亮氨酸过多可降低异亮氨酸的吸收率, 使尿中异亮氨酸排出量增加。此外, 精氨酸和甘氨酸可消除由于其他氨基酸过量所造成的有害作用, 这种作用可能与它们参加尿酸的形成有关。 一、蛋白质与氨基酸的关系 一般认为，动物蛋白质的营养实质上是氨基酸的营养。只有当组成蛋白质的各种氨基酸同时存在且按需求比例供给时，动物才能有效地合成蛋白质。饲粮中缺乏任何一种氨基酸，即使其他必需氨基酸含量充足, 体蛋白质合成也不能正常进行。同样，体蛋白合成潜力越大的动物（如高瘦肉型猪），对氨基酸的需求量就越高。 畜禽饲粮中必需氨基酸的需要量取决于饲粮中的粗蛋白水平。例如, 仔猪饲粮中蛋白质含量由10%增至22%时, 饲粮赖氨酸的需要量则从0.6 % 增至1.2 % 。另一方面，饲粮粗蛋白质需要量取决于氨基酸的平衡状况。一般而言，依次平衡第一至第四限制性氨基酸后，饲粮的粗蛋白质需要量可降低2-4个百分点。 二、氨基酸间的相互关系 组成蛋白质的各种氨基酸在机体代谢过程中, 亦存在协同、转化、替代和拮抗等关系。 蛋氨酸可转化为胱氨酸,也可能转化为半胱氨酸, 但其逆反应均不能进行。因此, 蛋氨酸能满足总含硫氨基酸的需要, 但是蛋氨酸本身的需要量只能由蛋氨酸满足。半胱氨酸和胱氨酸间则可以互变。苯丙氨酸能满足酪氨酸的需要, 因为它能转化为酪氨酸, 但酪氨酸不能转化为苯丙氨酸。由于上述关系,在考虑必需氨基酸的需要时, 可将蛋氨酸与胱氨酸、苯丙氨酸与酪氨酸合并计算。 氨基酸间的拮抗作用发生在结构相似的氨基酸间, 因为它们在吸收过程中共用同一转移系统, 存在相互竞争。最典型的具有拮抗作用的氨基酸是赖氨酸和精氨酸。饲粮中赖氨酸过量会增加精氨酸的需要量。当雏鸡饲粮中赖氨酸过量时, 添加精氨酸可缓解由于赖氨酸过量所引起的失衡现象。亮氨酸与异亮氨酸因化学结构相似, 也有拮抗作用。亮氨酸过多可降
BLAST 核酸/氨基酸序列相似性比较 Blast (Basic Local Alignment Search Tool)是一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似性比较的分析工具。BLAST程序能迅速与公开数据库进行相似性序列比较。BLA ST结果中的得分是对一种对相似性的统计说明。 BLAST 采用一种局部的算法获得两个序列中具有相似性的序列。如果您想进一步了解BLAST算法，您可以参考NCBI的BLAST Course ，该页有BLAST算法的介绍。 BLAST的功能 BLAST对一条或多条序列(可以是任何形式的序列)在一个或多个核酸或蛋白序列库中进行比对。BLAST还能发现具有缺口的能比对上的序列。 BLAST是基于Altschul等人在J.Mol.Biol上发表的方法(J.Mol.Biol.215:403-410(19 90)),在序列数据库中对查询序列进行同源性比对工作。从最初的BLAST发展到现在NC BI提供的BLAST2.0,已将有缺口的比对序列也考虑在内了。BLAST可处理任何数量的序列,包括蛋白序列和核算序列;也可选择多个数据库但数据库必须是同一类型的,即要 么都是蛋白数据库要么都是核酸数据库。 所查询的序列和调用的数据库则可以是任何形式的组合,既可以是核酸序列到蛋白库中作查询,也可以是蛋白序列到蛋白库中作查询,反之亦然。 通常根据查询序列的类型（蛋白或核酸）来决定选用何种BLAST。假如是作核酸－核酸查询，有两种BLAST供选择，通常默认为BLASTN。如要用TBLASTX也可，但记住此时不考虑缺口。 BLAST适用于本地查询。可以下载公共数据库，对于该数据库的更新和维护是必不可少的。如果要直接到网上查询也可以（即ＮetＢlast），但记住如果你认为自己的序列很有价值的话，还是谨慎为宜。 如何访问在线的BLAST功能服务? 您只要通过浏览器访问Blast主页(https://www.doczj.com/doc/689357064.html,/) 。所有的查询和分析都通过浏览器来完成，就象您在您的本地机上一样方便和快捷。 BLAST 采用一种局部的算法获得两个序列中具有相似性的序列。 Blast中常用的程序介绍： 1、BLASTP是蛋白序列到蛋白库中的一种查询。库中存在的每条已知序列将逐一地同每条所查序列作一对一的序列比对。 2、BLASTX是核酸序列到蛋白库中的一种查询。先将核酸序列翻译成蛋白序列（一条核酸序列会被翻译成可能的六条蛋白），再对每一条作一对一的蛋白序列比对。 3、BLASTN是核酸序列到核酸库中的一种查询。库中存在的每条已知序列都将同所查序列作一对一地核酸序列比对。
甘氨酸 产品描述： 分子式C2H5NO2 性状白色斜晶系或六方晶系晶体，或结晶性粉末。无臭，有特殊甜味，味觉阈值0.13%。熔点232-236度。（产生气体并分解）。水溶液呈微酸性（PH值5.5-7.0）.易溶于水(25g/100ml,25度).极难溶于乙醇(0.06g/100g无水乙醇).不溶于丙酮、乙醚等有机溶剂。 用途1 调味与丙氨酸合用于含醇饮料，添加量：葡萄酒0.4%，威士忌酒0.2%，香槟酒1.0%。其他如粉末汤料约添加2%；酒糟腌的食品1%。由于其能一定程度呈虾、墨鱼味，可用于调味酱。 2 对枯草杆菌及大肠杆菌的繁殖有一定抑制作用。故可用于鱼糜制品、花生酱等的防腐剂。添加量1%-2%。 3 缓冲作用因甘氨酸为具有氨基和羧基的两性离子，故有很强的缓冲性。对食盐和醋等的味感能起缓冲作用。添加量为盐腌品的0.3%-0.7%，酸渍品0.05%-0.5%。 4 抗氧化作用（利用其金属螯合作用）添加于奶油、干酪、人造奶油、牛乳制品等可延长保存期3-4倍。为使焙烤食品中的猪油稳定，可添加葡萄糖2.5%和甘氨酸0.5%。速煮面用的小麦粉中添加0.1%-0.5%，同时可起调味作用。 医药上用作制酸剂（胃酸过多症）、肌肉营养失调治疗剂、解毒剂等。亦为苏氨酸等氨基酸的合成原料。 5 按我国GB2760-96规定可用作香料。 DL-丙氨酸 产品描述： 分子式C3H7NO2 性状无色至白色无臭针状结晶或结晶性粉末。有甜味。味觉阈值在0.06%.由水-乙醇液重结晶者为斜方晶系,由水重结晶者为针状结晶或结晶性粉末.5%水溶液的PH值5.5-7.0.约为295-300度熔化并分解.化学性质稳定.遇亚硝酸可转化为L-乳酸.易溶于水(16.72g/100ml,25度).微溶于乙醇.无旋光性. 用途营养增补剂。调味料，包括下述若干方面。 1．增强化学调味料的调味效果2.改善人工甜味剂的味感3.改善有机酸的酸味4.提高腌制效果5.提高含醇饮料的质量6.防止油类氧化7.改善浸渍品的风味8.合成清酒的调味料 L-丙氨酸 产品描述： 分子式C3H7NO2 性状白色无臭结晶性粉末。有特殊甜味，甜度约为蔗糖的70%。200度以上开始升华，
18种天然氨基酸分析 迪马科技摘要 氨基酸组成测定是蛋白质组学、食品质量检测以及药品质量检测中的重要分析项目。本文分别以异硫氰酸苯酯、2,4-二硝基氟苯作为衍生剂对蛋白质水解液和游离氨基酸注射液进行衍生，使用Diamonsil AAA柱250×4.6 mm，5 μm，梯度洗脱进行分离，能够满足19种天然氨基酸的分析，各组分分离度较高、定量结果准确而稳定。 Abstract The amino acid determination is an important analysis project in proteomics, food and drug quality testing.The method determination of 19 nature amino acid in protein hydrolyzed solution and free amino acid injection, the derived reagent is phenyl isothiocyanate (PITC) and 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene. The column is Diamonsil AAA (250 × 4.6 mm, 5 μm), gradient elution, the results are accurate and stable. 引言 从化学角度讲，同时含有一个或多个氨基和羧基的脂肪酸均可称为氨基酸。自然界存在300多种氨基酸，但构成天然蛋白质的氨基酸只有20种，这20种氨基酸又称为天然氨基酸。天然氨基酸分析是食品、饲料和药品分析的重要项目。目前氨基酸分析常常采用这样两种方式：离子交换色谱分离-柱后衍生和柱前衍生-反相色谱法分离。后者以操作灵活、费用低廉而被广泛应用。在柱前衍生-反相色谱法分离中，异硫氰酸苯酯(PITC)和2,4-二硝基氟苯(DNFB)均可与一级胺、二级胺反应，是理想的柱前衍生剂。尽管天然氨基酸多达20种，但由于蛋白质水解过程中天冬酰胺和谷氨酰胺分别转化为天冬氨酸和谷氨酸，半胱氨酸则以胱氨酸形式存在，因而对于含蛋白食品、饲料等样品的氨基酸分析时，只需分析Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(甲硫氨酸)、Cys-Cys(胱氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)等18种氨基酸，PITC和DNFB均能与这些氨基酸生成稳定的衍生物。此外，DNFB还能对半胱氨酸进行衍生，对PITC衍生法是一个重要的补充，能够满足氨基酸注射液中涉及的19种氨基酸分析。 1 分析原理 对于含蛋白样品(饲料、动物组织等)，先对样品进行酸水解或碱水解处理，得到游离氨基酸
饲料中的氨基酸分析 一. 仪器及试剂 仪器： 1). 天平一台（精度0.1mg）； 2). 恒温水浴锅一台； 3). 容量瓶； 4). 试管（1.5×15cm或1.5×10cm）； 5). 微量进样器（5μL或10μL）一支； 6). 微量可调移液枪（1000uμL，200μL）一支、吸头多个； 7). 旋涡混匀器一台； 8). HPLC系统及氨基酸分析专用柱（4.6×250mm 5μm）； 试剂： 1). 超纯水（≥18MΩ?cm）； 2). 乙腈（HPLC级）； 3). 三水合醋酸钠（分析纯）； 4). 冰醋酸（分析纯）； 5). 衍生试剂A和衍生试剂B溶液，至于冰箱保存（衍生试剂包对身体有害，用 时请做好防护措施）； 6). 正己烷（HPLC级）。 7). 0.1mol/L盐酸溶液：精密量取9.0mL浓盐酸，加去离子水稀释至1000mL。 8）6mol/L盐酸溶液:精密量取浓盐酸溶液，加到去离子纯化水以等比例混合，（再加入0.1%的苯酚试剂作为保护剂）。 二. 流动相的配制 流动相A：0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.5）：乙睛＝93.0：7.0 配制方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000mL水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50；准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液 930mL和乙腈70mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜；
流动相B：水：乙腈＝20.0：80.0 配制方法：准确量取水200mL和乙腈800mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜； 三. 衍生化反应 1. 2. 供试品溶液制备 精密称取饲料粉末样品100mg，置于50ml的圆底烧瓶中，加入10ml的6mol/L盐酸溶液，溶解，并在110度条件下加热回流反应24小时，反应完成后，放置冷却；冷却完后转移至100ml的量瓶中，加水分别3次润洗反应瓶，收集到量瓶中定容至100ml；充分混匀，再量取50ml的溶液蒸干，并用2ml水润洗定容，待衍生用。 3. 衍生步骤 1）分别将A、B两种衍生试剂用稀释剂稀释至原来浓度的1/5倍； 2）精密量取上述对照品溶液200μL，置于试管中，加入稀释后的A溶液100μL和稀释后的B 溶液100μL，摇匀，室温反应60min；然后加入正己烷溶液400μL旋紧盖子后振摇5~10s，室温静置分层，取下层200μL溶液，加入800μL水混合均匀，再取200μL加入800μL 水混合均匀，用孔径为0.22μm有机膜过滤，待分析； 3）供试品的衍生：供试品溶液200μL，置于试管中，加入稀释后的A溶液100μL和稀释后的B溶液100μL，摇匀，室温反应60min；然后加入正己烷溶液400μL旋紧盖子后振摇5~10s，室温静置分层，取下层200μL溶液，加入800μL水混合均匀，再取200μL加入800μL水混合均匀，用孔径为0.22μm有机膜过滤，待分析；
氨基酸对人体的作用 一.甘氨酸（GLY） 1、降低血液中的胆固醇浓度，防治高血压 2、降低血液中的血糖值，防治糖尿病 3、能防治血凝、血栓 4、提高肌肉活力，防止胃酸过多 5、甜味为砂糖的0.8倍，对人体有补益等营养作用 二.亮氨酸（LEU） 1、降低血液中的血糖值，对治疗头晕有作用 2、促进皮肤、伤口及骨头有愈合作用 3、如果缺乏时，会停止生长，体重减轻 4.促进睡眠，减低对疼痛的敏感，缓解偏头痛·缓和焦躁及紧张情绪 5.减轻因酒精而引起人体中化学反应失调的症状，并有助于控制酒精中毒 参考食物：牛奶、鱼类、香蕉、花生及所有含丰富蛋白质的食物 三.甲硫氨酸（蛋氨酸）（MET） 1、参与胆碱的合成，具有去脂的功能，防治动脉硬化高血脂症 2、有提高肌肉活力的功能，防止肌肉软弱无力 3、促进皮肤蛋白质和胰岛素的合成 4.参与组成血红蛋白、组织与血清，有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能 5.帮助分解脂肪，能预防脂肪肝、心血管疾病和肾脏疾病的发生 6.将有害物质如铅等重金属除去 7. 治疗风湿热和怀孕时的毒血症 8.一种有利的抗氧化剂 参考食物：大豆、其它豆类、鱼类、大蒜、肉类、洋葱和酸奶 四.酪氨酸（TYR） 1、造肾上腺激素、甲状腺激素和黑色素的必需氨基酸 2、可防治老年痴呆症 3、促进新陈代谢，增进食欲 .医药用作甲状腺功能亢进；食品添加剂。 4、对治疗胃溃疡等慢性疾病、神经性炎症及发育不良等效果 5、与色素形成有关系，缺乏时会利白化症 6.是一种重要的生化试剂，是合成多肽类激素、抗生素、L-多巴等药物的主要原料。 7.广泛用于农业科学研究，也作饮料添加剂和配制人工昆虫饲料。 五.组氨酸（HIS） 1、参与血球蛋白合成，促进血液生成 2、产生组氨、促进血管扩张，增加血管壁的渗透性 3、医治胃病、十二指肠等有特效 4、促进腺体分泌，对过敏性疫病有效果 5、可治疗消化性溃疡、发育不良等症状 6、对治疗心功能不全、心绞痛、降低血压、哮喘及类风湿关节炎有效果 六.苏氨酸（THR） 1.人体必需，缺乏时会使人消瘦，甚至死亡 2.有转变某些氨基酸达到平衡的功能 3.是协助蛋白质被人体吸收、利用所不可缺少的氨基酸
中国饲料成分及营养价值表（第24版） TABLES OF FEED COMPOSITION AND NUTRITIVE VALUES IN CHINA 表3. 饲料中氨基酸含量 Amino Acids 序号 中国饲料号CFN 饲料名称 Feed Name 干物质DM% 粗蛋白质 CP% 精氨酸Arg% 组氨酸His% 异亮氨酸Ile% 亮氨酸 Leu% 赖氨酸Lys% 蛋氨酸Met% 胱氨酸Cys% 苯丙氨酸Phe% 酪氨酸Tyr% 苏氨酸Thr% 色氨酸 Trp% 缬氨酸 Val% 1 4-07-0278 玉米corn grain 86.09.40.380.230.26 1.03 0.260.190.220.430.340.310.08 0.40 2 4-07-0288 玉米corn grain 86.08.50.500.290.270.74 0.360.150.180.370.280.300.08 0.46 3 4-07-0279 玉米corn grain 86.08.70.390.210.250.93 0.240.180.200.410.330.300.07 0.38 4 4-07-0280 玉米corn grain 86.0 7.8 0.370.20 0.24 0.93 0.230.150.150.380.310.290.06 0.35 5 4-07-0272 高粱sorghum grain 86.0 9.0 0.33 0.18 0.35 1.08 0.180.170.120.450.320.260.08 0.44 6 4-07-0270 小麦wheat grain 88.0 13.4 0.62 0.300.46 0.89 0.35 0.21 0.30 0.61 0.370.38 0.15 0.56 7 4-07-0274 大麦（裸）naked barley grain 87.0 13.0 0.64 0.16 0.43 0.87 0.440.14 0.25 0.68 0.40 0.43 0.16 0.63 8 4-07-0277 大麦（皮）barley grain 87.0 11.0 0.65 0.24 0.52 0.91 0.42 0.18 0.18 0.59 0.350.41 0.12 0.64 9 4-07-0281 黑麦rye 88.0 9.500.48 0.22 0.30 0.58 0.350.150.21 0.42 0.26 0.31 0.10 0.43 10 4-07-0273 稻谷paddy 86.07.8 0.57 0.15 0.32 0.58 0.290.190.160.40 0.37 0.25 0.10 0.47 11 4-07-0276 糙米rough rice 87.0 8.8 0.65 0.170.30 0.61 0.320.20 0.14 0.35 0.31 0.28 0.12 0.49 12 4-07-0275 碎米broken rice 88.010.4 0.78 0.27 0.39 0.74 0.42 0.22 0.17 0.49 0.390.38 0.12 0.57 13 4-07-0479 粟（谷子）millet grain 86.5 9.7 0.30 0.20 0.36 1.15 0.15 0.25 0.20 0.49 0.26 0.35 0.17 0.42 14 4-04-0067 木薯干cassava tuber flake 87.0 2.5 0.40 0.05 0.11 0.15 0.13 0.05 0.04 0.10 0.04 0.10 0.03 0.13 15 4-04-0068 甘薯干sweet potato tuber flake 87.0 4.0 0.16 0.08 0.17 0.26 0.160.06 0.08 0.19 0.130.180.05 0.27 16 4-08-0104 次粉wheat middling and reddog 88.0 15.4 0.86 0.41 0.55 1.06 0.59 0.23 0.37 0.66 0.46 0.50 0.21 0.72 17 4-08-0105 次粉wheat middling and reddog 87.013.60.850.330.480.98 0.520.160.330.630.450.500.18 0.68 18 4-08-0069 小麦麸wheat bran 87.015.7 1.000.410.510.96 0.630.230.320.620.430.500.25 0.71 19 4-08-0070 小麦麸wheat bran 87.014.30.880.370.460.88 0.560.220.310.570.340.450.18 0.65 20 4-08-0041 米糠rice bran 87.012.8 1.060.390.63 1.00 0.740.250.190.630.500.480.14 0.81 21 4-10-0025 米糠饼rice bran meal(exp.) 88.014.7 1.190.430.72 1.06 0.660.260.300.760.510.530.15 0.99 22 4-10-0018 米糠粕rice bran meal(sol.) 87.015.1 1.280.460.78 1.30 0.720.280.320.820.550.570.17 1.07 23 5-09-0127 大豆soybeans 87.0 35.5 2.57 0.59 1.28 2.72 2.20 0.56 0.70 1.42 0.64 1.41 0.45 1.50 CFIC 2013 24 动物科学数据分中心 CFIC 2013 24 动物科学数据分中心
各种微量元素与氨基酸的作用 各种微量元素与氨基酸的作用 钙——骨骼生长的基本元素 钙的作用：有助于提高各种身体机能。如：对心脏的保护、帮助血凝块的形成、预防骨质损失、使骨头更结实，药物的新代谢（红细胞病、血小板病、心脏病、高血压病和气喘病，所有这些疾病都和钙这一重要因素有关。许多药物、一些草药和少数维生素矿物质都会消耗血液中的钙含量。这就可能导致上述疾病的产生。因此为了预防这类重病，就需要补钙）、肌肉收缩和放松。 在市场上可供挑选的各种补钙品多得令人目眩，如碳酸钙、柠檬酸钙、磷酸钙、乳酸钙、葡萄糖酸钙等,都可以给鸽子使用.下面主要介绍以下几种： 碳酸钙：是市场上最为普遍的钙，主要是钙片。原料为牡蛎壳，用来治疗背痛、关节炎、骨折（疗效较慢）、幼儿牙痛。但对鸽子而言，碳酸钙在肠被充分地分解和吸收是有困难的。建议用碳酸钙氢氧化物或柠檬酸钙代替。 富含钙又适合鸽子使用的食物有：各种豆类、大白菜、面包、鸡蛋、全脂奶粉、燕麦、牡蛎粉、糙米、芝麻、菠菜、
桃、等。 含有丰富钙的草药、调味品和海草有：金合欢、芦巴、灵芝、大麦草、人参、墨角藻、山楂浆果、香菜、蒲公英香薄荷和海飘蛸等。 铁——血液中不可缺少的基本元素 铁最主要的功能是在血液中担任输送氧气的作用。它作为血红蛋白的一个组成部分，可以帮助分子携带氧气进入肺部，并且在全身游移和释放氧气。鸽子体中的铁大约有73%在血红蛋白中不断循环并促进更多红血球的形成。 最近几年的医学研究还发现。体铁含量过低会给大脑功能造成严重的不利影响。此外，鸽子体铁含量下降会影响其训练成效，而且还会使其免疫能力受到损伤，从而增加感染疾病和死亡的危险. 铁对视力也有帮助。好视力的部分也是由于眼里被输送了充足的氧，当输送到眼里的氧在突然减少时，视力的清晰度就会降低。铁还可以纠正体温过低。 镁——骨骼形成的必须元素 镁的最大作用是对细胞流通的钙进行调节。 由于镁缺乏而引起的多种疾病有以下几种，这些病症都可以通过补镁而得到缓解：化学过敏、兴奋、突发心脏病
1.正常添加标准 缬氨酸能够促进泌乳期母猪泌乳，通过提高泌乳量间接地提高仔猪增重，同时改善母猪体质，增强其免疫力。[1~3]适量的异亮氨酸也能够在禽畜的增重和饲料转化率上起到明显的作用，[4]并弥补饲料中异亮氨酸的缺乏。 目前在试验阶段的产品，只把现有生产的样品在计算后以一定量添加到饲粮中进行饲喂，但我们可以根据实验对象（猪和鸡）理想氨基酸模式来了解具体氨基酸的添加量，从而有利的指导实验的顺利展开，为取得较好的实验结果提供科学依据。 以下是猪和鸡的理想氨基酸添加模式（来自行业标准）。 猪各生长阶段理想氨基酸模式（每日）： 体重/kg 赖氨酸色氨酸异亮氨酸亮氨酸缬氨酸苏氨酸赖氨酸需 求量3-5 100 18 55 100 69 65 1.50% （日粮）5-10 100 18 54 98 68 64 1.50% （日粮）10-20 100 18 55 97 69 64 1.50% （日粮）20-50 100 18 54 95 67 64 1.50% （日粮）50-80 100 18 56 95 69 68 1.50% （日粮）80-120 100 18 55 90 67 68 1.50% （日粮）上表以赖氨酸为基准，其它氨基酸添加量为与赖氨酸相比所占的份额 产蛋鸡氨基酸需要量(mg/d)： 氨基酸0-6周6-12周12-18周18周-开产异亮氨酸291 286 257 321 亮氨酸534 486 450 571 苏氨酸330 326 238 336 色氨酸83 80 71 86 缬氨酸301 297 264 329 产蛋鸡对于特定数量单体氨基酸的生理需求，主要是用于生产鸡蛋蛋白和体组织蛋白，氨基酸需要量的最好表达方式是以每天氨基酸的摄入量（mg/d)直接表示。 氨基酸的添加量标准并不固定，仅作参考，具体数值要视饲粮种类与禽畜品种而定。以
复方氨基酸注射液市场分析 复方氨基酸是由氨基酸、糖、电解质、微量元素、维生素及pH 值调整剂等配制而成。 一．氨基酸的分类： 1. 氨基酸根据在体内是否能合成分为两类：必需氨基酸和非必需氨基酸。 必需氨基酸对成人来说，有8种，包括赖氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。对婴儿来说，组氨酸也是必需氨基酸。 非必需氨基酸（nonessential amino acid, NEAA）可在动物体内合成，作为营养源不需要从外部补充的氨基酸。一般在植物、微生物必需的氨基酸均由自身合成，这些都不称为非必需氨基酸。对人来说非必需氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸（及其胺）、脯氨酸、精氨酸、组氨酸、酪氨酸、胱氨酸。这些氨基酸由碳水化合物的代谢物或由必需氨基酸合成碳链，进一步由氨基转移反应引入氨基生成氨基酸。有些非必需氨基酸如胱氨酸和酪氨酸如果供给充裕还可以节省必需氨基酸中蛋氨酸和苯丙氨酸的需要量。 2. 氨基酸根据其结构又分为：芳香族氨基酸、杂环氨基酸和脂肪族氨基酸。其中支链氨基酸包括L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸。芳香族氨基酸:苯丙氨酸,色氨酸,酪氨酸。 二．氨基酸的去路氨基酸的去路都包括以下三个方面：一是：合成各种组织蛋白及酶和激素等；二是：脱氨基作用的转换形成含氮
部分和不含氮部分，含氮部分最终在肝脏部位形成尿素，不含氮部分一部分氧化分解形成最终代谢产物二氧化碳和水并释放能量，另一部分合成糖类和脂肪；三是：都可进行转氨基作用形成新的氨基酸。 三．复方氨基酸的分类及复方氨基酸注射液（18AA）的区别 不同疾病对氨基酸的需求是不同的，如创伤状态下谷氨酰胺的需要量明显增加，肝病则应增加支链氨基酸，肾功能不良则以提供必需氨基酸为主。复方氨基酸注射液根据其作用及用途分为营养型与治疗型，治疗型复方氨基酸根据其特殊纽方及临床用途又分为肝病用氨基酸、肾病用氨基酸、创伤用氨基酸制剂。 复方氨基酸的区别分为：1.浓度；2.含氮量；3.氨基酸种类；4.必需氨基酸与非必需氨基酸的比值（EAA/NEAA），支链氨基酸（BCAA 含量）；5.是否含有葡萄糖和木糖醇；6.无机盐种类含量复方氨基酸注射液（18AA）是指含有合成人体蛋白质所需的18种必需和非必需氨基酸，能维持营养不良患者的正氮平衡。它分为18AA, 18AA-I, 18AA-II, 18AA-III, 18AA-IV, 18AA-V，18AA-N。其中用于补充营养的平衡型氨基酸制剂为18AA, 18AA-I, 18AA-II, 18AA-III, 18AA-IV, 18AA-V；用于肾病氨基酸制剂为18AA-N；用于创伤的氨基酸制剂为18-B；小儿氨基酸注射液为小儿复方氨基酸注射液18AA-I, 18AA-II。 （一）补充营养的平衡型氨基酸制剂 1. 复方氨基酸注射液(18AA) 有5%和12%两种浓度，其抗氧化剂为亚硫酸氢钠。 5%浓度 200ml:10g(总氨基酸)； 12%浓度 200ml:7.5g(总氨基酸) 5%浓度250ml:12.5g(总氨基酸)；12%浓度250ml:30g(总氨基酸) 5%
天然的氨基酸现已经发现的有300多种，其中人体所需的氨基酸约有22种，分非必需氨基酸和必需氨基酸（人体无法自身合成）。另有酸性、碱性、中性、杂环分类，是根据其化学性质分类的。1、必需氨基酸（essential amino acid）：指人体（或其它脊椎动物）不能合成或合成速度远不适应机体的需要，必需由食物蛋白供给，这些氨基酸称为必需氨基酸。共有8种其作用分别是：①赖氨酸（Lysine ）：促进大脑发育，是肝及胆的组成成分，能促进脂肪代谢，调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢，防止细胞退化；②色氨酸（Tryptophan）：促进胃液及胰液的产生；③苯丙氨酸（Phenylalanine）：参与消除肾及膀胱功能的损耗； ④蛋氨酸（又叫甲硫氨酸）（Methionine）；参与组成血红蛋白、组织与血清，有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能；⑤苏氨酸（Threonine）：有转变某些氨基酸达到平衡的功能；⑥异亮氨酸（Isoleucine ）：参与胸腺、脾脏及脑下腺的调节以及代谢；脑下腺属总司令部作用于甲状腺、性腺；⑦亮氨酸（Leucine ）：作用平衡异亮氨酸；⑧缬氨酸（Valine）：作用于黄体、乳腺及卵巢。8种人体必需氨基酸的记忆口诀①"借一两本蛋色书来" 谐音: 借(缬氨酸), 一(异亮氨酸),两(亮氨酸),本(苯丙氨酸),蛋(蛋氨酸),色(色氨酸),书(苏氨酸),来(赖氨酸). ②"笨蛋来宿舍，晾一晾鞋" 笨（苯丙氨酸）蛋（蛋氨酸）来（赖氨酸）宿（苏氨酸）舍（色氨酸），晾（亮氨酸）一晾（异亮氨酸）鞋（缬氨酸）③”携带一两本甲硫色书来”携（缬氨酸）带一（异亮氨酸）两（亮氨酸）本（苯丙氨酸）甲硫（甲硫氨酸）色（色氨酸）书(苏氨酸)来(赖氨酸) 其理化特性大致有：1）都是无色结晶。熔点约在230°C 以上，大多没有确切的熔点，熔融时分解并放出CO2；都能溶于强酸和强碱溶液中，除胱氨酸、酪氨酸、二碘甲状腺素外，均溶于水；除脯氨酸和羟脯氨酸外，均难溶于乙醇和乙醚。2）有碱性[二元氨基一元羧酸，例如赖氨酸（lysine）]；酸性[一元氨基二元羧酸，例如谷氨酸（Glutamic acid）]；中性[一元氨基一元羧酸，例如丙氨酸（Alanine）]三种类型。大多数氨基酸都呈显不同程度的酸性或碱性，呈显中性的较少。所以既能与酸结合成盐，也能与碱结合成盐。3)由于有不对称的碳原子，呈旋光性。同时由于空间的排列位置不同，又有两种构型：D型和L型，组成蛋白质的氨基酸，都属L型。由于以前氨基酸来源于蛋白质水解（现在大多为人工合成），而蛋白质水解所得的氨基酸均为α-氨基酸，所以在生化研究方面氨基酸通常指α-氨基酸。至于β、γ、δ……ω等的氨基酸在生化研究中用途较小，大都用于有机合成、石油化工、医疗等方面。氨基酸及其衍生物品种很多，大多性质稳定，要避光、干燥贮存。2、非必需氨基酸（nonessential amino acid）：指人（或其它脊椎动物）自己能由简单的前体合成，不需要从食物中获得的氨基酸。例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。1，2萘醌、4磺酸钠在碱性溶液深红色（检验α－氨基酸）肽键（peptide bond）:一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基缩合，除去一分子水形成的酰胺键。肽（peptide）:两个或两个以上氨基通过肽键共价连接形成的聚合物。是氨基酸通过肽键相连的化合物，蛋白质不完全水解的产物也是肽。肽按其组成的氨基酸数目为2个、3个和4个等不同而分别称为二肽、三肽和四肽等，一般含10个以下氨基酸组成的称寡肽（oligopeptide），由10个以上氨基酸组成的称多肽（polypeptide），它们都简称为肽。肽链中的氨基酸已不是游离的氨基酸分子，因为其氨基和羧基在生成肽键中都被结合掉了，因此多肽和蛋白质分子中的氨基酸均称为氨基酸残基（amino acid residue）。多肽有开链肽和环状肽。在人体内主要是开链肽。开链肽具有一个游离的氨基末端和一个游离的羧基末端，分别保留有游离的α－氨基和α－羧基，故又称为多肽链的N端（氨基端）和C端（羧基端），书写时一般将N端写在分子的左边，并用（H）表示，并以此开始对多肽分子中的氨基酸残基依次编号，而将肽链的C端写在分子的右边，并用（OH）来表示。目前已有约20万种多肽和蛋白质分子中的肽段的氨基酸组成和排列顺序被测定了出来，其中不少是与医学关系密切的多肽，分别具有重要的生理功能或药理作用。多肽在体内具有广泛的分布与重要的生理功能。其中谷胱甘肽在红细胞中含量丰富，具有保护细胞膜结构及使细胞内酶蛋白处于还原、活性状态的功
18种天然氨基酸分析(异硫氰酸苯酯柱前衍生法) ——序列号: D024 1 适用范围 该方法适用于氨基酸注射液、动植物性食品和饲料中Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)等18种天然氨基酸的检测 2 溶液配制 氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准品，用0.1 mol/L HCl水溶液溶解， 胱氨酸为0.01 mol/L，酪氨酸为0.02 mol/L，其他氨基酸 为0.05 mol/L 氨基酸使用液：将储备液用0.1 mol/L HCl水溶液稀释，得到浓度为0.002 mol/L的氨基酸单标和混标 内标液：以正亮氨酸作为内标物。称取一定量正亮氨酸，溶于0.1 mol/L HCl水溶液，得到0.02 mol/L的正亮氨酸内标液异硫氰酸苯酯溶液：将250 μl异硫氰酸苯酯用乙腈乙腈定容至10 ml，得到 0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液 三乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml，得到1.0 mol/L三 乙胺溶液 3 衍生化 3.1 样品溶液衍生化 量取200 μl样品溶液(蛋白质水解液或游离氨基酸溶液)[1]，置于1.5 ml塑料离心管中，加入20 μl正亮氨酸内标溶液[2]，混匀，再加入100 μl 1 mol/L三乙胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，室温反应1小时，然