第1讲微生物的培养与利用
[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择作用。4.利用微生物进行发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用。5.运用发酵加工食品的基本方法。6.测定食品加工中可能产生的有害物质。
1．培养基营养成分的分析方法
(1)虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。
(2)在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源，新陈代谢同化作用类型的划分也是以是否能合成含碳有机物为依据，能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。
(3)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源又是氮源。
2．微生物的培养和纯化
(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培养基在适宜条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成。
(2)观察菌落需用固体培养基，因此培养基要添加琼脂。
(3)倒平板的温度一般在50℃左右较为适宜，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(4)平板需倒置，这样既可减少培养基表面的水分挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，
造成培养基污染。
(5)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适合进行计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。
(6)利用稀释涂布平板法的计算公式估算水样中的活菌数：(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
(7)菌种可采用甘油管藏法长期保存。
3．利用微生物加工食品的误区
(1)误认为泡菜制作过程中乳酸和亚硝酸盐的含量都是先增加后减少。实际上，泡菜制作过程中乳酸的含量是先增加后保持稳定。
(2)误认为果酒、果醋制作过程中都需要无氧条件。果醋制作过程中，利用醋酸菌的有氧呼吸，因此需要有氧条件。
1．可以用血细胞计数板直接统计自来水中的大肠杆菌数( )
2．高压蒸汽灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，再开启锅盖( ) 3．腐乳制作中，控制发酵温度的主要目的是调味( )
4．腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用( )
5．果酒发酵中期通入氮气，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸( )
6．果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关( )
7．通常使用液体培养基分离获得细菌单菌落( )
8．在制作果酒的实验中，将葡萄汁装满整个发酵装置( )
9．泡菜制作的过程中，乳酸菌能在缺氧条件下产生乳酸( )
答案 1.× 2.× 3.× 4.√ 5.√ 6.√7.×8.×9.√
1．吃腐乳时，你会发现腐乳外部有一层致密的“皮”。这层“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝(匍匐菌丝)，它能形成腐乳的“体”，使腐乳成形。
2．无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。
3．在平板划线操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环的目的：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。
考点一微生物的培养、分离与计数
1．无菌操作技术
(1)常用的3种消毒方法——煮沸消毒法、巴氏消毒法及化学药剂消毒法。
(2)常用的3种灭菌方法
①灼烧灭菌——接种环、接种针等金属器具；
②干热灭菌——主要针对玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等；
③高压蒸汽灭菌——主要针对培养基等。
2．平板划线法、稀释涂布平板法及显微镜直接计数法的区别
(1)平板划线法适用于微生物的纯化，但不能用于微生物的计数。
(2)稀释涂布平板法常用于活菌计数，而显微镜直接计数法不能区分菌体的死活。
(3)用稀释涂布平板法进行计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300间的平板进行计数。
3．选择培养基及鉴别培养基的使用方法
(1)分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。选择培养基中无凝固剂，为液体培养基，以纤维素作为碳源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长；利用液体培养基能使营养成分充分利用，以增加纤维素分解菌的浓度。
(2)鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，可在培养基上形成肉眼可见的菌落。刚果红染色法就是应用的此类培养基。
4．微生物计数的“两”种方法
(1)直接计数法：显微镜直接计数法。
(2)间接计数法：稀释涂布平板法(活菌计数法)，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
考向一微生物的分离和培养技术
1．(2019·全国Ⅲ，37)回答下列与细菌培养相关的问题。
(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是_________________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上________(填“能够”或“不能”)生长，原因是__________________________________________________________ _______________________________________________________________________________。
(2)用平板培养细菌时一般需要将平板________(填“倒置”或“正置”)。
(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是_____________________________________________________ _______________________________________________________________________________。
(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
答案(1)蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源(2)倒置(3)在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征(4)灭菌
解析(1)细菌培养时常用牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏能提供碳源、氮源、磷酸盐、维生素，蛋白胨能提供碳源、氮源、维生素，而葡萄糖不能提供氮源，NaNO3不能为微生物提供碳源。不同细菌生长繁殖所需要的最适pH是不同的，应该根据培养细菌的不同来调节培养基的pH。硝化细菌是化能自养型细菌，可以空气中的CO2为碳源，因此在没有碳源的培养基上能够生长。(2)在平板培养基上培养细菌时，一般需将平板倒置，这样可以防止皿盖上的水珠落入培养基。(3)不同种类的细菌所形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征，不同种细菌在一定培养条件下表现出各自稳定的菌落特征，可以作为菌种鉴定的重要依据。(4)使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，以免污染环境。2．(2019·泉州市3月质检)研究人员从大熊猫粪便中分离纤维素分解菌的实验流程如下图。请据图回答下列问题：
(1)进行步骤①的目的是__________________________________________________________；液体培养基A应含有纤维素粉，其作用是_____________________________________________
_____________________________________________________________________(答出两点)。
(2)步骤②的操作是______________________________________________________________，以让纤维素分解菌被_____________________________________________________________。
(3)鉴定纤维素分解菌时，培养基用______________染色。根据__________________________，评定菌株的产酶能力。
答案(1)增加纤维素分解菌的浓度提供碳源、对纤维素分解菌有筛选作用(2)梯度稀释(或“系列倍数稀释”)分散成单个细胞(3)刚果红菌落产生的透明圈直径大小
解析(1)题图中步骤①是将大熊猫粪便接种到液体培养基中进行培养，是为了增加纤维素分解菌的浓度；纤维素分解菌需要碳源，故要加入纤维素，另外只以纤维素为碳源可以作为筛选纤维素分解菌的指标。
(2)题图中步骤②是对纤维素分解菌进行梯度稀释处理，是为了让纤维素分解菌分散成单个细胞。
(3)可以采用刚果红染色法来鉴定纤维素分解菌，培养基需要用刚果红染色。刚果红会与纤维素形成红色复合物，若纤维素被分解，则在菌落周围会形成透明圈，故可以根据菌落产生的透明圈直径大小，评定菌株的产酶能力。
考向二运用培养基进行微生物的筛选和纯化
3．(2019·全国Ⅰ，37)已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5g/L)。
Ⅱ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(15g/L)。
Ⅲ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(45g/L)。
回答下列问题：
(1)在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是__________________。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是________。
(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会__________________，其原因是_____________________________________________________ _______________________________________________________________________________。
(3)Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是__________________。
(4)假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供________和__________________。
答案(1)牛肉膏、蛋白胨X (2)下降不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖(3)稀释涂布平板法(4)能量合成其他物质的原料
解析(1)牛肉膏蛋白胨培养基中，牛肉膏、蛋白胨为微生物生长提供了氮源，而Ⅱ号、Ⅲ号培养基中除X外的其他物质均不含碳，所以能为微生物提供碳源的有机物是X。(2)因为Ⅱ号
培养基中碳源只有X，属于选择培养基，只有能降解X的细菌才能增殖，而不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖。(3)要对菌落进行计数，应采用稀释涂布平板法进行接种。(4)在有氧条件下，丙酮酸参与细菌的有氧呼吸，可以为该菌的生长提供能量和合成其他物质的原料。4．(2019·福州质检)研究表明，香菇含有多种有效药用成分，其提取物有抗菌、抗肿瘤等多种功能。为研究香菇中的酚类物质对不同菌种的抑菌活性，科研人员进行了如下实验：
(1)根据香菇中酚类物质具有____________的特点，可采用萃取法提取。
(2)制备大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌的菌液。
(3)用____________法将3种菌液分别接种在固体培养基上，使其均匀生长。
(4)将浸透____________的无菌圆纸片分别贴在各个平板上。
(5)将完成步骤(4)的平板置于恒温培养箱中进行培养，不同平板的培养温度不一定相同，原因是______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________。
(6)测量抑菌圈直径，结果如下：
实验结果说明香菇酚类物质对______________没有明显的抑制作用，通过抑菌圈直径可以判断香菇酚类物质的抑菌活性高低的原理是____________________________________________ _______________________________________________________________________________。为使实验更具说服力，应如何设计对照组？___________________________________________ _______________________________________________________________________________。答案(1)易溶于有机溶剂(3)稀释涂布平板(4)香菇酚类物质(5)不同微生物的最适生长温度可能不同(6)黑曲霉菌香菇酚类物质在平板上扩散使周围的微生物生长受到抑制，抑菌能力越强，抑菌圈直径越大同时将用无菌水浸泡的相同大小的无菌圆纸片分别贴于接种了3种菌液的培养基上
解析(1)根据香菇酚类物质易溶于有机溶剂的特点，可采用萃取法提取。
(3)微生物常见的接种方法包括平板划线法和稀释涂布平板法。用稀释涂布平板法将3种菌液分别接种在固体培养基上，使其均匀生长。
(4)将浸透香菇酚类物质的无菌圆纸片分别贴在各个平板上。
(5)将贴有浸透香菇酚类物质的无菌圆纸片的各个平板置于恒温培养箱中进行培养，由于不同微生物的最适生长温度可能不同，因此不同平板的培养温度不一定相同。
(6)从实验数据看出，黑曲霉菌的抑菌圈直径为0，说明香菇酚类物质对黑曲霉菌没有明显的
抑制作用。通过抑菌圈直径可以判断香菇酚类物质抑菌活性高低的原理是香菇酚类物质在平板上扩散使周围的微生物生长受到抑制，抑菌能力越强，抑菌圈直径越大。为使实验更具说服力，应设计对照组，即同时将用无菌水浸泡的相同大小的无菌圆纸片分别贴于接种了3种菌液的培养基上。
考向三微生物的计数
5．(2019·广东汕头质检)某生物兴趣小组的同学计划调查某快餐店的冰块中大肠杆菌的含量。具体实验步骤如下：
第一步：配制培养基(成分：蛋白胨、氯化钠、乳糖、水、X和Y)。
第二步：制作无菌平板。
第三步：设置空白对照组和实验组，对照组接种①，实验组接种②。
第四步：将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题：
(1)培养基中的乳糖可以为大肠杆菌提供____________________________________________。为了方便大肠杆菌的鉴定，需要在培养基中添加成分X________________，在该培养基表面，大肠杆菌的菌落呈现________________(填颜色)。为了完成步骤二，该培养基中的成分Y通常是________________。
(2)完善步骤三
①是___________________________________________________________________________；
②是___________________________________________________________________________。
(3)在纯化大肠杆菌前，将灭菌后的空平板先培养一段时间，目的是________________。划线的某个平板培养后，第—划线区域的划线长满了菌落，第二划线区域却无菌落产生，可能的原因是__________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是振荡培养能提高培养液中________________的含量和________________的利用率。
答案(1)碳源伊红美蓝黑色琼脂(2)适量无菌水取自该快餐店的等量冰块水(3)检测培养基平板灭菌是否合格接种环灼烧后未冷却便进行划线(或划线未从第一区域末端开始) (4)氧气营养物质
解析(1)乳糖是糖类物质，不含氮元素，所以培养基中的乳糖可为大肠杆菌提供碳源。鉴定大肠杆菌时，在培养基中添加的成分X是伊红美蓝，大肠杆菌的菌落呈现黑色。制作无菌平板是制作固体培养基，所以该培养基中还应加入琼脂，即成分Y是琼脂。
(2)本实验的目的是调查某快餐店的冰块中大肠杆菌的含量，故实验中对照组应接种适量无菌水，实验组应接种取自该快餐店的等量冰块水。
(3)为了检测培养基平板灭菌是否合格，常在纯化大肠杆菌前，将灭菌后的空平板先培养一段时间，若平板上有菌落生长，说明灭菌不合格。接种环在平板内的每一次划线前，都要先灼烧灭菌，待冷却后划线，而且要从上一次划线末端而非空白处划线，若不冷却会烫死上次划线末端的菌株，使以后的划线处没有菌落生长，若从空白处划线也是不会有菌落生长。所以划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线长满了菌落，第二划线区域却无菌落产生，可能的原因是接种环灼烧后未冷却便进行划线(或划线未从第一区域末端开始)。
(4)振荡培养可增加溶液中氧气的含量以及增强菌体与营养物质的接触，提高营养物质的利用率，从而使振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。
6．手机上的细菌真的比马桶还多吗？就此问题，甲、乙两位同学进行了下列实验(如图)。请回答下列相关问题：
(1)该实验需制备培养基，培养基中一般都含有水、碳源、______________________。
(2)据图，两位同学均采用______________法接种，该方法需要__________(多选)。
A．接种环B．酒精灯C．移液管D．涂布器
E．无菌水
(3)通过观察菌落的__________，可知手机屏幕和马桶按钮上都存在多种微生物。两位同学的实验操作均正确且完全一致，但实验结果却截然不同，你认为原因是______________________ _______________________________________________________________________________。
(4)按图操作取样面积，实验员测定某手机屏幕的细菌数量，将10mL菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1mL稀释倍数为102的样品液接种到三个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为48、50、52，则该手机屏幕的细菌数为______个/cm2。该实验对照组该如何设置？________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________。答案(1)氮源和无机盐(2)稀释涂布平板BCDE (3)形态、大小手机的取样和马桶的取样都不相同(4)2×104取培养基涂布0.1mL无菌水进行培养
解析(1)微生物培养基的成分一般包括水、碳源、氮源和无机盐。(2)根据题图分析，该实验的接种方法为稀释涂布平板法，选项中该方法用到的工具有酒精灯、移液管、涂布器、无菌水。(3)不同的菌落形态、大小不同，图示两位同学调查的手机屏幕和马桶按钮上都有多种形态的菌落，即存在多种微生物。两位同学实验操作均正确且完全一致，但实验结果截然不
同，可能是因为手机的取样和马桶的取样都不相同。(4)根据提供的数据进行计算，某手机屏幕的细菌数＝(48＋50＋52)÷3×102÷0.1×10÷(5×5)＝2×104(个/cm2)。
考点二微生物的利用
1．理清“4”种传统发酵食品的技术
2.控制杂菌的“四大措施”
(1)通过发酵条件控制杂菌
①无氧发酵时的无氧环境可以抑制好氧菌。
②乳酸菌发酵、酒精发酵形成的酸性环境抑制杂菌繁殖。
(2)利用盐控制杂菌：如腐乳的制作。
(3)利用酒精控制杂菌：如果酒、腐乳的制作。
(4)利用香辛料控制杂菌：如腐乳、泡菜的制作。
3．乳酸菌数量、乳酸含量、亚硝酸盐含量随发酵时间变化的曲线
考向利用微生物进行发酵生产食品
7．(2017·全国Ⅱ，37)豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并在32h内定期取样观测发酵效果。回答下列问题：
(1)该实验的自变量是____________、____________。
(2)如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是_______________。
(3)如果在实验后，发现32h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情是________________________ _______________________________________________________________________________。
(4)从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为_________________，脂肪转变为______________________。
答案(1)菌种发酵时间(2)好氧菌(3)延长发酵时间，观测发酵效果，最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间(4)氨基酸和肽脂肪酸和甘油
解析(1)由题意可知该实验的自变量是菌种和发酵时间。(2)如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是好氧菌。(3)如果在实验后，发现32h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情是延长发酵时间，观测发酵效果，最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间。(4)从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为氨基酸和肽，脂肪转变为脂肪酸和甘油。
8．请回答与酿酒和制醋有关的问题：
(1)红曲主要含有红曲霉菌和酵母菌等微生物，具有糖化和发酵的双重作用，为了获得优良的酿酒红曲，将红曲制成较稀浓度的悬液后，可通过______________或______________法分离出单菌落。
(2)大米经蒸煮、红曲霉菌糖化后，用食用酵母进行发酵，发酵完毕后得到新鲜红曲酒，酒中乙醇浓度不超过15%。其主要原因是当发酵液中的乙醇浓度超过16%时，__________________ _______________________________________________________________________________。
(3)影响红曲酒风味的主要因素有__________________等环境因素。
(4)在红曲醋生产工艺中，将适量的红曲酒、水、醋酸菌等混合，醋酸生产过程的反应式是________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。醋酸发酵时要始终保持有氧状态，原因是__________________。
答案(1)稀释涂布平板法平板划线(2)会对酵母菌产生毒害作用(3)温度、pH、氧气含量
(4)C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O 醋酸菌是好氧菌
解析(1)据试题分析可知，为了获得优良的酿酒红曲，将红曲制成较稀浓度的悬液后，可通过稀释涂布平板法或平板划线法分离出单菌落。(2)酵母菌发酵的产物是乙醇和二氧化碳，其中较高浓度的乙醇(乙醇浓度超过16%)对酵母菌有毒害作用，因此用食用酵母进行发酵，发酵完毕后得到新鲜红曲酒，酒中乙醇浓度不超过15%。(3)红曲霉菌属于真菌，用红曲霉菌发酵可得到红曲酒，影响红曲霉菌生长繁殖的环境因素都会影响红曲酒的风味，其发酵需要适宜的温度、pH、氧气含量等环境因素。(4)在红曲醋生产工艺中，将适量的红曲酒、水、醋酸
菌等混合，醋酸生产过程的反应式是C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O。因为醋酸菌是好氧菌，因此醋酸发酵时要始终保持有氧状态。
9．请回答下列有关发酵食品制作的问题：
(1)在泡菜腌制的过程中，要注意控制腌制的时间、__________和食盐的用量；最后要向坛盖边沿的水槽中注满水，这一操作的目的是_____________________________________________ _______________________________________________________________________________。
(2)在传统腐乳制作过程中，所需的微生物来源于______________________________________ ____________________；而现代的腐乳生产是在严格____________________的条件下，将优良的毛霉菌种直接接种在豆腐上，这样可以避免其他菌种的污染。
(3)某同学制作蓝莓果醋时，定时通过充气口充气，原因是_______________________________ _______________________________________________________________________________。另一位同学在蓝莓果汁中直接加入某品牌活性酵母，之后先向发酵罐中通入一段时间的无菌空气，这一做法的目的是___________________________________________________________ _______________________________________________________________________________。
(4)若制作失败，则在变酸的酒的表面观察到的菌膜是由______________大量繁殖而形成的，其可在缺少糖源时将乙醇变为____________，然后变为醋酸。
答案(1)温度保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境(2)空气中的毛霉孢子无菌(3)醋酸菌是好氧菌，生产醋酸时需要氧气参与在有氧条件下，使酵母菌迅速繁殖，数量增加(4)醋酸菌乙醛
解析(1)在泡菜腌制的过程中，要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量；最后要向坛盖边沿的水槽中注满水，其目的是保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境。(2)在传统腐乳制作过程中，所需的微生物来源于空气中的毛霉孢子；现代的腐乳生产是在严格无菌的条件下接种优良的毛霉菌种。(3)制作蓝莓果醋时，定时通过充气口充气的原因是醋酸菌是好氧菌，生产醋酸时需要氧气参与。在蓝莓果汁中直接加入某品牌活性酵母后，先向发酵罐中通入一段时间的无菌空气，其目的是在有氧条件下，使酵母菌迅速繁殖，数量增加。(4)若制作失败，在变酸的酒的表面观察到的菌膜是由醋酸菌大量繁殖而形成的，其可在缺少糖源时将乙醇变为乙醛，然后变为醋酸。
10．太源井晒醋是自贡市的名优土特产品，该产品面市已有150多年的历史。中草药制曲和天然发酵是太源井晒醋与其他食醋的区别。下表表示太源井晒醋不同陈酿方法下的一些理化指标。据表回答下列问题：
(1)醋的制作需要以__________作为菌种，请写出一个表示制醋原理的反应式______________ _______________________________________________________________________________。从生态系统的成分看，该微生物属于生态系统中的______________。
(2)传统酿醋工艺中，主要是依靠自然界中的菌种，其生产性能不稳定且出醋率低，因而要对菌种进行纯化培养。纯化菌种可用__________法或稀释涂布平板法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。接种前需随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，其目的是______________________________________________________________。
(3)恒温陈酿时，需将温度控制在_____________范围内；由表中数据可知__________________法可提高晒醋质量。
(4)用一定的方法进行脱色处理后，食醋中的还原糖可用______________试剂检测，在水浴加热的条件下，该试剂与还原糖发生反应产生的现象是__________________________________。答案(1)醋酸菌C2H5OH＋O2―→CH3COOH＋H2O或(CH2O)＋O2―→CH3COOH 分解者
(2)平板划线检测培养基平板是否已彻底灭菌(3)30～35℃自然陈酿(4)斐林出现砖红色沉淀
解析(1)醋的制作使用的微生物是醋酸菌。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将糖分解成醋酸，其反应式为(CH2O)＋O2→CH3COOH；当氧气充足、缺少糖源时，醋酸菌可以先将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，其反应式为C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O。醋酸菌属于生态系统中的分解者。
(2)分离纯化菌种，常用固体培养基进行培养，采用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种。为检测培养基平板是否已彻底灭菌，接种前需随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间。(3)醋酸菌的最适生长温度为30～35℃，因此在恒温陈酿时，需将温度控制在30～35℃范围内。表中信息显示：自然陈酿的相应数值均高于恒温陈酿，说明自然陈酿法可提高晒醋质量。(4)还原糖与斐林试剂发生作用，在水浴加热的条件下会生成砖红色沉淀，据此可用斐林试剂检测食醋中的还原糖。
1．(2019·全国Ⅱ，37)物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题：
(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是________。
(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如
图所示)。如果要得到目标菌，应该选择____________________菌落进一步纯化，选择的依据是
_______________________________________________________________________________。
(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_______________ _______________________________________________________________________________。
(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加__________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明____________________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明_________________________________________。答案(1)W (2)乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W (3)将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源(4)①缓冲液②缓冲液不能降解W 酶E与天然酶降解W的能力相近
解析(1)要从土壤中分离出能降解含氮有机物W的目标菌，所用选择培养基应以该特定物质W为氮源。(2)题图信息显示，在乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W，若要得到目标菌，应该选择乙菌落进一步纯化。(3)若要通过设计实验确定甲、乙两种细菌能否利用空气中的氮气作为氮源，需将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若某细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源。(4)①实验应遵循单一变量原则，故C处应滴加缓冲液。②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明缓冲液不能降解W；若A、B 处形成的透明圈大小相近，说明酶E与天然酶降解W的能力相近。
2．(2019·辽宁葫芦岛一模)在冬季部分城市出现严重雾霾，这与野外焚烧秸秆有一定关系。微生物学家试图通过微生物降解技术使秸秆尽快腐烂，以增加土壤肥力并缓解环境污染。请回答下列有关问题：
(1)专家研制的降解秸秆的“催腐剂”是十余种能分解纤维素的霉菌、细菌和酵母菌的组合。其中____________在细胞结构上与其他两者不同。
(2)纤维素酶是一种复合酶，其中______________可以将纤维素分解为二糖，______________可以将二糖分解为葡萄糖。
(3)微生物学家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株而制备了选择培养基，将菌液进行一系列____________，并涂布到选择培养基上，从而得到单个菌落，再采用
__________法进行鉴定，得到下图所示菌落。那么，图中降解纤维素能力最强的菌株是______________(填图中序号)。
(4)为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，其发酵方法有______________和______________两种。
答案(1)细菌(2)C1酶、C X酶葡萄糖苷酶(3)梯度稀释刚果红染色①(4)液体发酵固体发酵
解析(1)霉菌和酵母菌是真菌，属于真核生物，而细菌属于原核生物。细菌在细胞结构上与霉菌和酵母菌不同，细菌无以核膜为界限的细胞核。
(2)纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、C X酶、葡萄糖苷酶等。其中C1酶、C X酶可以将纤维素分解为二糖，葡萄糖苷酶可以将二糖分解为葡萄糖。
(3)微生物学家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株而制备了选择培养基，将菌液进行一系列梯度稀释，并涂布到选择培养基上从而得到单个菌落，再采用刚果红染色法进行鉴定。当纤维素被纤维素酶分解后，无法与刚果红染色剂形成红色复合物，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。菌落周围的透明圈越大，透明圈直径与菌落直径的比值越大，即被分解的纤维素越多，说明菌株降解纤维素的能力越强。因此，降解纤维素能力最强的是菌株①。
(4)为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，其发酵方法有液体发酵和固体发酵。
3．(2019·甘肃张掖质检)酸奶和泡菜的制作都离不开乳酸菌，请回答下列有关问题：
(1)分离纯化乳酸菌的培养基中含蛋白胨，蛋白胨提供的主要营养有_____________________；培养基灭菌常采用____________法；灭菌的标准是_____________________________________ _______________________________________________________________________________。
(2)培养乳酸菌一段时间后，培养基中的pH会下降，原因是______________________________ _______________________________________________________________________________。
(3)家庭制作泡菜时，一般需要配制泡菜盐水，但会因其含盐量过高而影响口感。直接接种乳酸菌制作泡菜时，产生的大量乳酸能够____________，因此可以采用低盐工艺制作泡菜，从而大幅降低泡菜的含盐量。下图中能正确表示泡菜中亚硝酸盐含量随发酵时间变化的曲线是__________。
(4)乳酸菌活菌数是衡量酸奶营养价值的一个重要指标，为检测某酸奶中乳酸菌的含量，取不同稀释度的样品各1mL涂布到固体培养基上，在适宜条件下培养一段时间，统计得到106、107、108三个稀释度的培养基上的平均菌落数依次为433个、76个、8个，据此估算，每毫升样品中的乳酸菌数约为____________个，接种乳酸菌所用的工具是____________。
答案(1)碳源、氮源和维生素高压蒸汽灭菌杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子(2)乳酸菌通过无氧呼吸产生的乳酸进入了培养基(3)抑制杂菌生长 B (4)7.6×108涂布器
解析(1)蛋白胨可以为微生物的生长提供碳源、氮源和维生素；培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；灭菌的标准是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
(2)乳酸菌无氧呼吸产生的乳酸进入培养基，会导致培养基的pH下降。
(3)在泡菜制作的过程中，加入一定的食盐可以抑制杂菌的生长，而乳酸菌无氧呼吸产生的大量乳酸进入培养基，也能抑制其他杂菌的生长，因此可以采用低盐工艺制作泡菜，从而大幅降低泡菜的含盐量。
(4)微生物计数时，应该采用30～300菌落数的平板，因此符合要求的菌落数为76个，则其稀释的倍数为107，因此每毫升样品中的乳酸菌数约为7.6×108个；在稀释涂布平板法中，接种乳酸菌的工具是涂布器。
临床微生物学检验技术复习练习试题 厌氧性细菌及检验 选择题 A 型题 1．下列产生外毒素的细菌中哪种细菌产生的毒素引起食物中毒 A 霍乱弧菌 B 肉毒杆菌 C 白喉杆菌 D 链球菌 E 破伤风杆菌 2．预防和治疗破伤风的方法是: A 清创处理 B 有效抗生素治疗 C 注射破伤风抗毒素血清 D A+B E A+B+C 3．当一民工因铁钉深刺足底造成外伤送医院急诊时，医生应首先考虑给予注射 A．破伤风类毒素 B．破伤风抗毒素 C．白百破三联疫苗 D．丙种球蛋白 E．破伤风菌苗 4.王某，48岁，建筑工人；因牙关紧闭、四肢痉孪而入院。8天前，右脚被铁钉扎伤，伤口深，但几日后自愈。5日后右腿有些麻木和疼痛，且咀嚼不便，吞咽困难，最后全身抽搐，四肢痉挛。入院诊断为破伤风，请问下述哪项是最佳治疗原则 A 注射青霉素 B 注射破伤风抗毒素和白百破疫苗 C 注射破伤风抗毒素和青霉素 D 注射破伤风抗毒素 E 注射青霉素和白百破疫苗 5．鉴定破伤风杆菌有无致病性的最重要的根据是 A G+细长杆菌 B 顶端圆形芽孢 C 有周身鞭毛 D 专性厌氧生长 E 产生特异性外毒素 6．破伤风梭菌除致破伤风病外，还能引起何种疾病E A．菌血症 B．食物中毒
C．组织坏死 D．坏死性肠炎 E．以上均不是 7．下列搭配哪项不恰当： A 大肠杆菌EHEC组——出血性肠炎 B 炭疽杆菌——气性坏疽 C 破伤风杆菌——脐带风 D 淋球菌——尿道炎 E 脑膜炎球菌——流行性脑脊髓膜炎 8．不是肉毒梭菌特点的是 A 芽胞位于菌体次极端，菌体呈网球拍状 B 严格厌氧 C 致病物质主要是肉毒毒素 D 引起疾病主要是细菌性食物中毒 E 肉毒毒素作用机制是阻止神经组织释放乙酰胆碱 B型题 A 常因滥用抗生素所致的疾病 B 常经呼吸道所致的疾病 C 常经消化道所致的疾病 D 常经产道所致的疾病 E 常因战伤所致的疾病 1．假膜性肠炎 2．气性坏疽 3．肉毒中毒 X型题 1．可能引起食物中毒较常见的细菌有 A 金葡菌 B 伤寒杆菌 C 产气荚膜杆菌 D 破伤风杆菌 E 副溶血性弧菌 2．产气荚膜芽孢梭菌引起的疾病有 A 气性坏疽 B 坏死性肠炎 C 产褥热 D 食物中毒 E 伪膜性肠炎 3．有迁徙性生长现象的是 A 链球菌 B 变形杆菌
高三生物二轮复习计划及方法 时间:2009-11-02 11:24 来源:互联网作者:转载点击: 2002次 （一）二轮复习的时间 二月底四月底 （二）二轮复习应达到的目标 1.进一步夯实基础，打牢双基。 2.综合、归纳、整理和提高，形成知识网络。 3.注重能力培养，提高分析问题和解决实际问题的能力。 4.加强应试训练，提高应试技巧和心理素质。 （三）二轮复习的形式和内容 根据二轮复习的总时间，建议分8个大专题，每个大专题下再分成若干个小专题进行复习，小专题的目的是对重要知识进行深化、对相似或相近的知识进行归类、整理和比较。每个大专题约一周时间，每个小专题1节课。 专题一生命的物质基础和结构基础 包括：绪论、组成生物体的化学元素、组成生物体的化合物、细胞膜有结构和功能（含生物膜系统）、细胞质的结构和功能、细胞核的结构和功能、有丝分裂、减数分裂、无丝分裂、细胞分化癌变和衰老、植物细胞工程、动物细胞工程。 本专题知识是其它生物学知识的基础，应细一点、慢一点，可分出以下小专题进行复习：化学元素专题、水专题、无机物专题、糖类专题、蛋白质专题、核酸专题、原核细胞结构和
功能专题、真核细胞结构和功能专题、细胞分裂专题、细胞工程专题、细胞的全能性专题。如水专题为例可包括水的存在、水的来源、水的排出、水的调节、水的标记、水的生态、水的污染。 专题二生物的新陈代谢与固氮 包括：光合作用、C3、C4植物、提高光能利用率、生物固氮、植物对水分的吸收和利用、植物的矿质营养、人和动物的三大营养物质代谢、细胞呼吸、代谢的基本类型。 本专题知识是高考的重点之一，主要是强化知识的整体性，如选修教材与必修教材的融合、植物的整体性、动物的整体性。可以分出酶和ATP专题、植物代谢专题、动物代谢专 题、生物的代谢类型专题。在植物代谢专题复习时应补充初中课本中有关植物根、茎、叶的结构与功能，光合作用、呼吸作用的经典实验。光合作用、呼吸作用有关的综合题、实验设计题要引起足够重视。在动物物代谢专题复习时应补充初中生理卫生课本中消化系统、呼吸系统、循环系统、泌尿系统的知识。生物的代谢类型专题应给学生归纳整理出高中生物中所涉及到的各种生物，特别是课本上提到的一些常见生物、微生物的代谢特点。如酵母菌、硝化细菌、根瘤菌、圆褐固氮菌、谷氨酸棒状杆菌、黄色短杆菌、反硝化细菌、产甲烷杆菌、 放线菌、乳酸菌、大肠杆菌、红螺菌。05年高考生物试题中出现用小麦、洋葱作为背景材 料，要求考生回答一系列有关的生物学知识、实验知识，题目很好。要加强这类题的训练，如水稻、玉米、蘑菇等。 专题三生命活动的调节与免疫 包括：植物生命活动的调节、人和动物的体液调节、人和动物的神经调节、动物行为产生的生理基础、内环境与稳态、水盐平衡及调节、血糖平衡及调节、人的体温调节、免疫。 本专题中植物生命活动的调节可以给学生补充教参中的部分内容（如植物的向性运动实验设计等）、植物生长素的极性运输、转台、宇宙飞船上植物的向光性、向地性问题。体液调节中补充内分泌系统的基础知识、整理高中课本上提到的各种激素的分泌器官、化学本质、生理作用、病症，如促激素释放激素、促激素、甲状腺激素、生长激素、胰岛素、胰高血糖素、性激素、孕激素、抗利尿激素、醛固酮、肾上腺素。 在复习免疫时要归纳总结淋巴细胞、造血干细胞、吞噬细胞、T细胞、B细胞、效应T 细胞、效应B细胞、记忆细胞的形成、特点和功能。 专题四生物的生殖和发育 包括：植物的个体发育、动物的个体发育。
微生物的培养方法 实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方法；学习常用的分离、纯化菌种的方法。 一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 １、接种工具和方法 在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图1） 图1 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种： １）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 ２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 ３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。
４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 ５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。 ６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。 ７）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。 ８）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。 ２、无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。 空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。（图2）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。
高三生物二轮复习的八个大专题 根据二轮复习的总时间，建议分8个大专题，每个大专题下再分成若干个小专题进行复习，小专题的目的是对重要知识进行深化、对相似或相近的知识进行归类、整理和比较。每个大专题约一周时间，每个小专题1节课。 专题一生命的物质基础和结构基础 包括：绪论、组成生物体的化学元素、组成生物体的化合物、细胞膜有结构和功能（含生物膜系统）、细胞质的结构和功能、细胞核的结构和功能、有丝分裂、减数分裂、无丝分裂、细胞分化癌变和衰老、植物细胞工程、动物细胞工程。 本专题知识是其它生物学知识的基础，应细一点、慢一点，可分出以下小专题进行复习：化学元素专题、水专题、无机物专题、糖类专题、蛋白质专题、核酸专题、原核细胞结构和功能专题、真核细胞结构和功能专题、细胞分裂专题、细胞工程专题、细胞的全能性专题。如水专题为例可包括水的存在、水的来源、水的排出、水的调节、水的标记、水的生态、水的污染。 专题二生物的新陈代谢与固氮 包括：光合作用、C3、C4植物、提高光能利用率、生物固氮、植物对水分的吸收和利用、植物的矿质营养、人和动物的三大营养物质代谢、细胞呼吸、代谢的基本类型。 本专题知识是高考的重点之一，主要是强化知识的整体性，如选修教材与必修教材的融合、植物的整体性、动物的整体性。可以分出酶和ATP专题、植物代谢专题、动物代谢专题、生物的代谢类型专题。在植物代谢专题复习时应补充初中课本中有关植物根、茎、叶的结构与功能，光合作用、呼吸作用的经典实验。光合作用、呼吸作用有关的综合题、实验设计题要引起足够重视。在动物物代谢专题复习时应补充初中生理卫生课本中消化系统、呼吸系统、循环系统、泌尿系统的知识。生物的代谢类型专题应给学生归纳整理出高中生物中所涉及到的各种生物，特别是课本上提到的一些常见生物、微生物的代谢特点。如酵母菌、硝化细菌、根瘤菌、圆褐固氮菌、谷氨酸棒状杆菌、黄色短杆菌、反硝化细菌、产甲烷杆菌、放线菌、乳酸菌、大肠杆菌、红螺菌。05年高考生物试题中出现用小麦、洋葱作为背景材料，要求考生回答一系列有关的生物学知识、实验知识，题目很好。要加强这类题的训练，如水稻、玉米、蘑菇等。 专题三生命活动的调节与免疫
食品微生物学检验技术（专科）作业题 一、简答题（每题15分，共4题，共60分） 1. 请简述革兰氏染色的原理及操作中应注意的问题。 G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。 应注意的问题。 2.请简述细菌培养中所用的培养基的种类及各自的用途。 常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基。 营养肉汤用于一般细菌培养、复壮、增菌等，也可用于消毒剂定性消毒效果测定营养琼脂培养基是一种无选择性的较低营养成分的固体培养基,主要用于细菌菌落计数,也可以用于细菌的传代和增菌,但一般不用于细菌的鉴定（除非该细菌菌落有比较特殊的形态特征）.只适合营养要求不高的细菌生长. 3.平板菌落计数原理。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，
根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量 4.食品中大肠菌群检测的意义。 食品的微生物学指标主要包括菌落总数、大肠菌群和致病菌等三个项目。其中菌落总数和大肠菌群是最重要、最常检的检验项目。 检测食品中的菌落总数，可以了解食品在生产中，从原料加工到成品包装受外界污染的情况．从而反映食品的卫生质量。一般来说、菌落总数越多，说明食品的卫生质量越差，遭受病原菌污染的可能性越大。而菌落总数仅少量存在时，病原菌污染的可能性就会降低或者几乎不存在。但上述规则也有例外，有些食品成品的菌落总数并不高，但由于已有细菌繁殖并已产生了毒素，且毒素性状稳定，仍存留于食品中；再有一些食品如酸泡菜和酸乳等，本身就是通过微生物的作用而制成的，且是活菌制品。因此，菌落总数的测定对评价食品的新鲜度和卫生质量有着一定的卫生指标的作用，但本能单凭此一项指标来判定食品的卫生质量，还必须配合大肠菌群和致病菌等检验，才能作出比较全面、准确的评价。大肠菌群是水源污染的指示菌，当饮用水中检查出大肠菌群时，即证实水已被粪便污染，对人是有害的，是不卫生的。同样，食品中若有大肠菌群存在，也会影响人的健康 二、论述题（每题20分，共2题，共40分） 1. 纯净水样品中的菌落总数的检测方法。 国家饮用水标准GB 5749-85规定，菌落总数不得超过100 cfu/g(ml)，所用 的方法是稀释平板计数法。平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌
【2019最新】高三生物二轮复习专题综合训练（二） (建议用时：45分钟) 1．(2015·吉林长春质检)下列关于酶的叙述，错误的是( ) A．溶酶体本身不能合成和分泌多种酸性水解酶 B．激素都是通过影响细胞内酶的活性来调节细胞代谢的 C．同一个体内的各类活细胞所含酶的种类有差异，数量也不同 D．酶既可以作为催化剂，也可以作为另一个化学反应的底物 解析：选B。溶酶体内含多种酸性水解酶，这些酶是在核糖体上合成的，A正确；激素调节细胞代谢是通过影响酶的合成来实现的，B错误；由于基因的选择性表达，故同一个体内的不同种类的细胞中酶的种类和数量会有差异，C正确；酶具有催化作用，但一部分酶本身也是蛋白质，又可作为反应底物参与反应，D正确。 2．下列关于ATP、ADP的说法中，错误的是( ) A．ATP是生物体生命活动的直接能源物质 B．ATP中的A代表腺嘌呤，T代表三个，P代表磷酸基团 C．叶绿体中ADP由叶绿体基质向类囊体薄膜运动 D．有氧呼吸过程中的第三阶段[H]与氧气结合产生水，同时产生大量ATP 解析：选B。ATP是生物体生命活动的直接能源物质。ATP中的A代表腺苷，腺苷包括腺嘌呤和核糖两部分。在叶绿体基质中ATP分解产生ADP，ADP由叶绿体基质向类囊体薄膜运动参与光反应中ATP的合成。有氧呼吸的第三阶段[H]与氧气结合产生水，同时产生大量ATP。 3．(2015·甘肃兰州调研)如图曲线b表示在最适温度、最适pH条件下，反应物浓度与酶促反应速率的关系。据图分析，下列叙述正确的是( ) A．增大pH，重复该实验，A、B点位置都不变 B．B点后，适当升高温度，曲线将出现c所示变化 C．酶量增加一倍，酶促反应速率可用曲线a表示 D．反应物浓度是限制曲线AB段酶促反应速率的主要因素 解析：选D。曲线b表示在最适温度、最适pH条件下测定的酶促反应速率与反应物浓度的关系，若温度、pH发生变化，酶促反应速率会降低。酶量增加一倍，酶促反应速率会变大。 4．研究人员从木耳菜中提取过氧化物酶(POD)，分别与四种不同酚类物质及H2O2进行催化反应，结果如下图所示。相关说法正确的是( ) A．图1所示的实验目的是探究不同酚类物质的浓度对POD活性的影响 B．当底物浓度为0.08 mmol·L－1时，POD催化酚类2的反应速率一定大于催化酚类3的反应速率 C．由图2可知，H2O2浓度过高会抑制POD的活性，降低浓度后POD活性就会恢复 D．H2O2对POD活性的影响与温度和pH对POD活性的影响相同 解析：选A。由图1可知，横坐标代表不同酚类物质的浓度，纵坐标代表POD的活性，
高三生物第二轮复习计划 生物学科的学习特点 生物作为高考理科综合中的一门学科，记忆性的东西比较多，用生物学知识来说，学习就是建立条件反射，而条件反射是需要强化的，因为总有些不可避免会遗忘，所以在考前的突击，是有很好效果的。 生物学科的内容要求记忆的比较多，遗忘性也比较大。在复习时可以查找知识上的盲点，有针对性的复习，并编织好完整的知识体系，有利于对知识全面的理解和掌握。生物知识点特别多又特别杂，主干的知识又非常重要，所以考生在复习时既要全面又要抓住重点，重点知识重点读。结合近几年的高考题，近几年来生物的重点内容主要集中在新陈代谢、生命活动的调节、遗传与变异、生态等主干知识章节中，这些知识点需要重点掌握。 生物学科知识在高考中的要求 高考考试说明中对生物学科要求：“能把握所学知识的要点和知识之间的内在联系。”高考题目年年有变化，但考查考生“运用学过的知识灵活地分析问题和解决问题”的思想一直没有变化。从试题来看，高考有些试题直接来源于教材。复习要回归教材，对教材基础知识掌握一定要扎实、准确、熟练，准确掌握知识的内涵和外延。基础知识学好了，复习时既节省时间，又提高效率。 生物高考考试说明中要求“能用文字、图表、图解等形式阐述生物事实、概念、原理和规律等”，所以考生在读书时应特别注意教材中对生物事实、概念、原理和规律等的描述。在考试时用准确的生物
学术语回答描述,最好能够做到用教材的描述答题——“知识回归考纲、描述回归教材”。 生物高考考试说明中对实验与探究能力有明确、具体的要求，实验与探究能力包括能独立完成生物课本上的实验、实习和研究性课题，如理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合的运用。具备验证简单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理。具有对一些生物学问题进行初步探究的能力。包括确认变量、作出假设和预期、设计可行的研究方案、处理和解释数据、根据数据作出合理的判断等。能对一些简单的实验方案作出恰当的评价和修改。 现在的高考,与以前的高考不同，以前的高考记忆的内容多，而现在的高考题却是以知识的运用为主，因此，要在高考中获得高分，死记硬背是肯定行不通的，要进行适度训练。通过训练，可以检查知识的漏洞，检查知识的熟练程度，并且能学会一些解题技巧。通过训练，会鉴别、选择试题给出的相关生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题，能用文字、图表等多种表达形式准确地描述生物学方面的内容，同样，通过训练，能提高理论联系实际，综合运用所学知识解决自然界和社会生活中的有关生物学问题的能力。因此进行适度训练有必要，但一定要记住：训练要适度，题海战术有害无益。在平时应适度进行一些这方面的训练,只有通过训练，才能获得相应的能力。生物实验题在高考中几乎年年出现，分值也越来越大。生物考试成绩差距较大,主要是因为实验得分率相差较
填空题 1.动植物的研究能以体为单位进行，而对微生物的研究一般用体 2.在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物、其中只有培养物能较好地被研究、利用和重复结果。 3.一般情况下，培养微生物的器具，在使用前必须先行，使容器中不含。 4.用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括、和。 5、微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行、的重要依据。 6、微生物保藏的目标就是要使所保藏菌株在一段时间不、不和不 7、一般说来，采用冷冻法时，保藏温度越，保藏效果越。 8、、和是影响显微镜观察效果的3个重要因索。 9.光学显微镜能达到的最大有效放大倍数是，这时一般使用 x的目镜，和 x的物镜，并应在物镜镜头和玻片之间加。 10、采用明视野显微镜观察未经染色的标本(如活的细胞)时，光的和都没 有明显的变化，因此，其形态和内部结构往往难以分辨。 11.在的照射下，发荧光的物体会在黑暗的背景下表现为光亮的有色物体，这就是荧光显微技术的原理。 12.透射电子显微镜用电子作为，因此其分辨率较光学显微镜有很大提高，但镜筒必须是环境，形成的影像也只能通过或进行观察、记录。 13.在显微镜下不同细菌的形态可以说是千差万别，丰富多彩，但就单个有机体而言，其基本形态可分为、与 3种。 14.霉菌菌体均由分支或不分支的菌丝构成。许多菌丝交织在一起，称为。在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基内吸收养料，称为；另一部分则向空中生长，称为。有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成。 15. 是一类缺少真正细胞壁，细胞通常无色，具有运动能力，并进行吞噬营养的单细胞真核生物。它们个体微小，大多数都需要显微镜才能看见。 选择题（4个答案选1) 1.培养微生物的常用器具中，（）是专为培养微生物设计的。 (1)平皿(2)试管(3)烧瓶(4)烧杯 2.( )可用来分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。 (1)选择平板(2)富集培养(3)稀释涂布(4)单细胞显微分离 3.下面哪一项不属于稀释倒平板法的缺点?( ) (1)菌落有时分布不够均匀 (2)热敏感菌易被烫死 (3)严格好氧菌因被固定在培养基中生长受到影响 (4)环境温度低时不易操作 4.下面哪一种方法一般不被用作传代保藏?( ） (1)琼脂斜面(2)半固体琼脂柱(3)培养平板(4)摇瓶发酵 5.冷冻真空干燥法可以长期保藏微生物的原因是微生物处于( )的环境，代谢水平大大降低。 (1)干燥、缺氧、寡营养(2)低温、干燥、缺氧 (3)低温、缺氧、寡营养(4)低温、干燥、寡营养 6.对光学显微镜观察效果影响最大的是( )。
《微生物学与检验》题库及答案 一.名词解释 1.医院感染 2.肥达反应 3.内基小体 4. 噬菌体： 5.血浆凝固酶 6.败血症 7.灭菌 8.药物敏感试验 9.外 - 斐氏试验 10.L 型细菌 11.菌群失调：12.微生物 13.细菌 14.最小抑菌浓度 15.菌落 16.汹涌发酵 17.无菌操作18.流感杆菌“卫星现象” 19.培养基 20.包涵体 21.正常菌群 22. 内毒素 23. 干扰现象： 24.菌血症 25菌丝： 二.填空题 1 L 型细菌是指（）。 2 杀灭物体上所有微生物的方法称为（）。 3 细菌 H-O 变异是指（）。 4 药敏试验所用标准培养基是，所用菌液相当于（）个细菌／ ml ，细菌接种采用（）划线接种法。 5 细菌致病因素包括（）、（）和（）。 6 细菌引起的全身感染包括（）、（）、（）和（）四种类型。 7 不染色标本检查主要用于观察细菌的（）。 8 影响革兰染色结果的关键步骤是（）。 9 有动力细菌在半固体培养基中的生长现象是穿刺接种线（），无动力细菌穿刺接种线（）。 10 糖发酵试验用于观察细菌分解糖是否产（）和（）。 11 靛基质试验的原理为，细菌产生的色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸而生成（），此代谢产物与加入的试剂反应，生成（）。 12 链球菌根据溶血现象分为（）、（）和（）三种类型。 13 葡萄球菌触酶试验结果为（）性，链球菌触酶试验结果为（）性。 14 呈现脐窝状菌落的球菌是（）。 15 抗 O 试验是测定病人血清中（）抗体效价的试验，用于风湿热等疾病的辅助诊断。 16 血平板上呈现草绿色溶血环的病原性球菌是（）和（）。 17 IMViC 试验包括（）、（）、（）和（）四项试验。 18 分解乳糖的细菌在肠道选择平板上呈现（）菌落，不分解乳糖则为（）菌落。 19 KIA 斜面红色表明，底层黄色、有气泡表明（）、（），有黑色沉淀表明（）试验阳性 20 霍乱弧菌生物型包括（）和（）。 21 AIDS 的传染源是（）和（），传播途径主要有（），（）和（）。 22 真菌菌落有（）、（）和（）三种。 23 病毒培养方法有（）、（）和（）。 24 病毒的基本结构由（）和（）组成，有些病毒还具有（）。 25 流感病毒根据抗原结构不同分（）、（）、（）三型，其中容易引起流感大流行的是其中的（）型。 26 防止微生物进入机体和物品的操作方法称为（）。 27 含菌量较多的标本（如粪便）的接种通常采用（）接种法。
微生物的分离和纯培养技术 一、培养基 1、培养基的概念：人们按照______________对营养物质不同的_______，配制出供其生长繁殖的________________叫培养基。根据其物理状态，一般分为_______________________和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂_____________后，就能制成__________________ 2、培养基的营养成分：各种培养基的配方不同，但一般都含有__ 、、、和______等最基本的生命物质。在此基础上还要满足微生物生长对_________、特殊营养物质以及_________的要求。 二、无菌技术 1、消毒方法：___________________、__________________、化学药剂消毒法 2、灭菌方法：___________灭菌、_______________灭菌、___________________灭菌 【思考】无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 【思考】请选用合适的方法为下列材料或用具进行消毒或灭菌 （1）培养细菌用的培养基与培养皿。___________（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管。__________ （3）实验操作者的双手。___________ 三、分离和纯培养大肠杆菌的实验操作 1、制备培养大肠杆菌的培养基：即牛肉膏蛋白胨固体培养基，一般步聚：计算、_______、_______、_______、倒平板。 2、接种和纯化大肠杆菌 ①平板划线法：是通过______________在琼脂固体培养基表面划线的操作，将聚集的菌种___________________到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由_____个大肠杆菌繁殖而来的肉眼可见的菌落 ②稀释涂布平板法：是将菌液进行_______________________稀释，再将不同稀释度的菌液_____________涂布到琼脂________培养基的表面进行培养。在涂布稀释度_____________的培养基表面上可获得单个菌落。 课题延伸：对于频繁使用的菌种我们可以采用_______________的方法，但这种方法保存的时间不长，菌种易被污染或产生变异，需长期保存的菌种可采用___________________的方法放在___________℃的冷冻箱中保存。 【讨论】1、平板划线时，为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物； 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的未端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环
高三生物二轮复习--实验专题 围绕一中心：以学生为中心，少讲精练 坚持二原则：充分利用教材与学生已有的资料； 充分研究海南生物高考考纲与高考真题 明确三（考试）方向：实验设计（整体）； 实验分析（现象结果）； 实验评价（方法过程） 第1讲必修教材实验概述 显微镜的结构与使用 1．高倍镜的使用步骤： （1）在低倍镜下找到物像，将物像移至视野正中央， （2）转动［7］转换器，换上高倍镜。 （3）调节［11］光圈和［13］反光镜，使视野亮度适宜。 （4）调节［2］细准焦螺旋，使物象清晰。 2．在显微镜操作过程中的有关问题 ①放大倍数：目镜的放大倍数与镜头长度成反比（正比或反比），物镜 的放大倍数与镜头长度成正比；放大倍数的计算方法：目镜的放大倍数 ×物镜放大倍数；如果某显微图标明“放大倍数：640”，这里的“640”是 指长度（长度或面积）放大了640倍。 ②物像移动与装片移动的关系：若希望把视野左上方的细胞移至视野中 央，应将玻片移向左上方。 ③异物位置的判断：异物存在的位置可能在玻片标本、目镜、物镜等；转动目镜，异物不动，转动转换器，异物仍在，则异物可能在玻片标本。
实验一：用显微镜观察多种多样的细胞 1.目的要求：①使用高倍显微镜观察几种细胞（如酵母菌、水绵、叶的保卫细胞、蛙的皮肤上皮细胞等），比较几种细胞的异同点。②运用制作临时装片的方法。 2.实验原理：利用高倍镜可以看到某些在低倍镜下无法看到的细胞结构，例如：可以看到叶绿体、液泡等细胞器，从而能够区别不同的细胞。 临时装片的制作（以洋葱表皮细胞临时装片制作为例） 擦：擦拭载玻片和盖玻片—→ 滴：在载玻片中央滴一滴清水—→ 撕：用镊子从洋葱鳞片叶内侧撕取一小块透明薄膜（内表皮）—→ 展：把撕下的内表皮浸入载玻片上的水滴中，用镊子把它展平—→ 盖：用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地放下，盖在要观察的材料上，这样才能避免盖玻片下面出现气泡而影响观察 实验二：观察植物细胞质壁分离 目的要求：①初步学会观察植物细胞质壁分离与复原的方法。 ②理解植物细胞发生渗透作用的原理。 1.实验原理 原生质层包括细胞膜、液泡膜和这两膜之间的细胞质，它相当于一层半透膜。当外界溶液浓度大于细胞液浓度时，细胞失水，使细胞壁和原生质层都会出现一定程度的收缩。由于原生质层比细胞壁的伸缩性大，二者就会逐渐分离开来。 2.选材 选择紫色洋葱鳞片外（内或外）表皮作实验材料，理由是有紫色的大液泡，便于观察。注意所选细胞必须为有大液泡的活的植物细胞，否则不会发生质壁分离。 3．方法步骤 制作临时装片→观察（用低倍镜观察细胞中紫色的液泡的大小及原生质层的位置）→滴加蔗糖溶液（注意从盖玻片一侧滴入，另一侧用吸水纸吸引）→观察质壁分离现象（液泡变小，细胞液颜色深，原生质层与细胞壁分离，细胞大小基本不变）→观察质壁分离复原（用清水做复原试剂） （1）发生质壁分离现象的外因是细胞内外溶液浓度差，内因是原生质层与细胞壁的伸缩性不同。 （2）相对细胞膜，细胞壁具有什么特性？全透性。 （3）实验常用0.3g/mL的蔗糖溶液。若浓度过高，细胞质壁分离速度很快，但会导致细胞失水过多而死亡，细胞不能发生质壁分离复原现象；若浓度过低，则不能引起细胞质壁分离或速度太慢。 （4）一定浓度的硝酸钾溶液、尿素等也能导致植物细胞质壁分离，但随后植物细胞可自动质壁分离复原。 实验三观察DNA和RNA在细胞中的分布 目的要求：初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法。 1.实验原理： 甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA 呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。 盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染液进入细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。 2.实验材料： 可用人的口腔上皮细胞或洋葱鳞片叶内表皮细胞 3.实验步骤： 取材制片→水解（用8%的盐酸溶液）→冲冼涂片→染色→观察（选择染色均匀、色泽浅的区域观察）（1）取口腔上皮细胞制片： ①载玻片要洁净，先在载玻片中央滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液→②用消毒牙签在自己漱净的口
临床微生物学检验技术试题及答案A1题型 1、人类ABO血型抗原包括 A、A抗原 B、B抗原 C、O抗原 D、AB抗原 E、A抗原和B抗原 答案：E 2、ABO血型物质在人体中可引起哪几种Ab产生 A、抗B抗体 B、抗AB抗体 C、抗A抗体 D、抗O抗体 E、抗A和抗B抗体 答案：E 3、免疫耐受就是 A、非特异性无反应性 B、特异性无反应性 C、机体无反应性 D、免疫抑制性 E、对任何抗原都不反应 答案：B 4、迟发型皮肤过敏反应与下列哪种物质有关 A、IgE B、IgA C、活化B细胞 D、活化T细胞 E、活化NK细胞
答案：D 5、佐剂作用是 A、将Ag送入机体各部位 B、将Ag固定在局部 C、增强Ag免疫原性 D、赋予Ag免疫原性 E、增强机体对Ag的免疫应答 答案：E 6、下列哪种物质既有非特异性免疫也参与特异性免疫反应 A、IgG B、干扰素 C、IgA D、前列腺素 E、补体 答案：E 7、TDH 细胞是 A、产生Ab细胞 B、天然杀伤细胞 C、细胞毒细胞 D、迟发变态反应T细胞 E、依Ab杀伤T细胞 答案：D 8、关于霍乱弧菌是否侵入上皮细胞，下列说法正确的是 A、不侵入 B、侵入 C、在特定条件下侵入 D、具有侵袭基因的霍乱弧菌侵入 E、侵入后局限于上皮细胞内 答案：A 9、葡萄球菌能产生多种溶血素，其中最主要的是
A、α、β溶血素 B、α、γ溶血素 C、β、γ溶血素 D、δ、ε溶血素 E、α、γ溶血素 答案：A 10、与其他肺部感染病原菌相比较，铜绿假单胞菌的毒力特点是 A、产生外毒素 B、具有内毒素 C、产生溶血素 D、产生绿脓素 E、具有菌毛 答案：D 11、有荚膜的流感嗜血杆菌含有荚膜多糖抗原称作： A、V抗原 B、M抗原 C、A抗原 D、X抗原 E、S抗原 答案：B 12、下列关于铜绿假单胞菌叙述中，正确的是 A、革兰氏阳性球菌 B、革兰氏阳性杆菌 C、无芽孢 D、具有荚膜 E、无鞭毛 答案：C 13、下列何种微生物具有荚膜结构 A、军团菌 B、支原体
2014级高三生物二轮复习学法指导 高三生物组 同学们，紧张而漫长的一轮复习已经结束。一轮复习时间跨度长，重在生物学基本知识的巩固和提高，在一轮复习中我们把目标定位在梳理课本知识，加强和巩固对教材知识的理解，并及时解决有疑问的知识点上，但在第一轮复习中我们一般不跨章节复习，前后知识也没有进行联系，再加上复习时间又长，所以导致不少同学复习着后面的知识同时又忘着前面的。下面从四个方面来谈一下二轮生物复习： 一、第二轮复习的方法和策略 针对同学们一轮复习中出现的问题和对近几年高考试题的分析，特制订了第二轮复习的方法和策略 1、进一步夯实基础 高考命题的突出特点是“注重基础，重视能力”，常常是“题在书外，理在书中”，因此，在高考中很难遇到做过的原题。高考题虽然都是思路新颖、考查逻辑推理能力的试题，但对能力的考查也离不开教材，而且在考试命题要求中也指出：考查学生对基础知识、基本技能的掌握程度，能否灵活运用生物学知识解决实际问题和社会热点问题。所以注重教材、抓好基础是复习的根本；灵活运用，提高技能是学习的目的；应对高考，提高分数是圆梦的前提。 因此同学们要回归教材：阅读前言和小结，减少知识漏洞；阅读正文，画出关键，减少易错易混点，减少错别字；浏览辅助资料，关注了生物热点前沿。总之再次回扣教材，可以熟练掌握生物学主干知识、生物学术语、名词概念、结论性语句、经典实验原理、研究方法等，减少会而用词不当造成的失分。 2、构建知识网络，提升能力 知识网络是人们在学习和实践中所获得的知识在头脑中通过多维度的联系所构成的开放性知识系统。一般认为，知识网络有三个重要特点： 一是系统的整体性。在网络中的知识不是一盘散沙，而是一个相互间具有清晰逻辑关系的整体，其中的每个知识点都有特定的位置，从而使大脑对知识的提取、应用变得较为容易。 二是联系的多维性。即每个知识点都可以通过不同的联线与其他多个知识点相联系（如由叶绿体可联想到色素的种类、植物细胞特有的细胞器、ATP、NADPH、酶、细胞膜、光合作用的过程、细胞质遗传、DNA复制、转录、mRNA、生产者等），同时两个知识点之间也可以有多种联结方式（如叶绿体和线粒体，既可以通过"都含DNA和RNA"联结，也可以通过"都能产生ATP"联结，或通过"具双层膜的结构"、"有机物的合成和分解"等联结）。 三是网络的开放性。随着学习的不断深入，新的知识源源不断地补充到原来的网络中，使网络中的知识点不断增加，知识点间的联系更广泛、更优化。 因此同学们应该完成对每个模块概念图的构建，然后再通过列表法、辐射法、分支法、注释法等对概念图进行拓展延伸，使孤立的知识点串联到一块，形成知识网络。在应用的时候做到呼之即出，用之即来，为进一步提高解决问题的能力创造条件。 3、研究易错题，突破得分瓶颈 做错的题中错点必然是自己知识、思维、技巧等的盲点，研究错题能更快地查漏补缺、更深刻地理清思路、更直接地提高技巧和克服过失。所以纠错是提升解题能力的捷径。其实，纠正错题并不难，关键是要做好以下几点： 首先要认真收集错题，建立错题集。方法有错题本法——用专用笔记本摘抄自己的错题；试卷标记法——在试卷上用红色标记自己的错题，写好反思及解答此题的要点，并编号整理好试卷；裁剪法——将试卷的错题剪下来，贴在错题本上。
目录 实验二土壤中微生物分离纯化培养 实验三菌种保藏 实验四细菌形态观察及单染色 实验五放线菌及霉菌形态观察 实验六革兰氏染色及芽孢染色 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 实验八微生物直接计数法及测微技术 实验九大肠杆菌生长曲线的测定 实验十水中细菌总数的测定 实验十一细菌细胞的生化反应实验 实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 生长繁殖之用。
三、试剂与器材 微孔滤膜过滤器、镊子等。 四、实验内容 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。 3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。 实验二土壤中微生物分离纯化培养 一、实验目的 掌握微生物培养方法。 二、实验原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。 释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。 三、试剂与器材
微生物学检验技术（副高、高级）病例分析题 一个23岁男子因尿痛、尿频，尿道有黄绿色脓性排出物或分泌物而入院。脓性分泌物涂片镜检显示有大量多形核白细胞，其内有革兰染色阴性双球菌。 1.病人最可能感染的病原体是： A.脑膜炎球菌 B.杜克嗜血杆菌 C.溶脲脲原体 D.淋病奈瑟菌 E.性病淋巴肉芽肿衣原体 2.治疗首选药物是： A.青霉素 B.头孢曲松与强力霉素联用 C.强力霉素 D.磺胺增效剂-磺胺甲基异噁唑 E.万古霉素 3.该病原体在缺乏特异性抗体的情况下具有抗吞噬作用，这主要是由哪种抗原所致： A.荚膜 B.菌毛 C.外膜蛋白 D.IgA蛋白酶 E.脂多糖 4.如果在患者脓性分泌物中查不到病原菌，你人认为尿道炎最常是由哪种病原体引起的： A.溶脲脲原体 B.梅毒螺旋体 C.单纯疱疹病毒 D.沙眼衣原体血清型D～K E.沙眼衣原体血清型L1、L2或L3
一个1岁女孩因阵发性严重咳嗽而入院。发作时，连续咳嗽5～20次，呼吸困难，口鼻流出大量粘液性带泡分泌物。患者咳嗽终止前，随着空气最后涌入肺部，发出喘鸣音。其它临床症状有：鼻和眼结膜出血，眶膜水肿，淋巴细胞性白细胞增多。病人无发热，咽喉部无假膜。该女孩尚未接受常规计划免疫。 5.引起患者疾病的最可能的病原体是： A.百日咳杆菌 B.流感嗜血杆菌 C.呼吸道合胞病毒 D.流感病毒 E.白喉杆菌 6.已与病孩密切接触的未受免疫儿童和成人，应采取哪种药物进行预防性治疗： A.白喉抗毒素 B.氨苄青霉素＋克拉维酸 C.红霉素 D.头孢曲松 D.金刚烷胺 7.病人发病过程中所见的过度分泌是由于： A.灭活延长因子2的毒素 B.激活膜结合Gi蛋白而提高胞内cAMP水平的毒素 C.降解SIgA抗体的IgA蛋白酶 D.切断上皮细胞表面糖蛋白末端神经氨酸与相邻糖基的联结链的一种表面酶 E.病理免疫损伤 8.分离培养该病原体应采用： A.鲍-金培养基 B.巧克力培养基 C.鸡胚接种 D.吕氏血清培养基
普通高中课程标准实验教科书——生物选修1[ 人教版] 课题 1 微生物的实验室培养 ★课题目标 （一）知识与技能了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象 （三）情感、态度与价值观 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神 ★ 课题重点无菌技术的操作 ★ 课题难点无菌技术的操作 ★ 教学方法启发式教学 ★ 教学工具多媒体课件 ★教学过程 （一）引入新课在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。 （二）进行新课 1．基础知识 1．1 培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。 〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。【补充】培养基的类型及其应用： 1．2 培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。 〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C、H、O、N、P、S 是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。 【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。
氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 1．3 培养基除满足微生物生长的pH 、特殊营养物质和氧气等要求。【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。 〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。 〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH 调节为酸性，培养细菌时需要将pH 调节为中性或微碱性。 活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： 1．4 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。 1．5 无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 1．6 比较消毒和灭菌（填表） 思考5〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是防止感染实验操作者 1．7 消毒方法： 1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法； （3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行 物理消毒。 （4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒； （5）饮水水源用氯气进行消毒。 1．8 灭菌方法： （1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法； （2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱； （3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。 （4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。