瓜叶菊Mlo基因片段的克隆
摘要
瓜叶菊（Pericallis hybrida B. Nord.）是菊科（Compositea）多年生草本植物，是元旦、春节重要的观赏盆栽早春花卉，具有广阔的开发前景和现实意义。近年来，白粉病（Powdery Mildew）逐渐成为制约瓜叶菊商品化产业发展的重要病害之一。瓜叶菊白粉病的传统生物防治方法不仅使病原产生抗药性，还会造成成本增加和环境污染等问题。因此，利用基因工程手段培育具有广谱抗白粉病的瓜叶菊种质资源具有非常重要的意义。
Mlo基因是一种新型的抗病基因，可能参与瓜叶菊白粉病的调控过程。它与显性R基因控制的抗病基因不同，它是由单基因控制的隐性抗病基因，具有非小种专化的持久抗性，其功能类似于G蛋白偶联受体。Mlo基因可能对细胞坏死具有负调控作用，即抑制细胞坏死，类似于其它突变体基因以寄主死亡来抵抗病原菌的入侵，Mlo基因突变为mlo基因后，对细胞死亡的负调控作用被解除，被侵染细胞可能更易死亡，由此引发广谱的抗病性。任何感病的野生型都可以通过对Mlo基因进行诱变而获得抗性。这种抗性，即便是在粗放的栽培管理条件下，也可以在田间得到持久保存，即便没有病原菌的侵染，突变的mlo植物也表现出自身细胞壁加固（cell wall appositions，CW As）和叶细胞的自发死亡现象。因此，对该基因的克隆以及结构和功能的研究，为瓜叶菊的抗病育种奠定了基础并提供了新思路。
本研究以瓜叶菊（Pericallis hybrida B. Nord.）为试材，通过PCR方法克隆了Mlo基因片段的cDNA序列，并采用生物信息学方法对其进行预测和分析，为进一步研究瓜叶菊Mlo 基因的功能和表达情况提供了理论依据。
关键词: 瓜叶菊；Mlo基因片段；PCR扩增；
1.研究的目的及意义
在温室生产的条件下，白粉病（Powdery Mildew）逐渐成为瓜叶菊（Pericallis hybrida B. Nord.）栽培的主要病害，发病后严重影响瓜叶菊的生长发育和观赏性能，随着元旦、春节人们对于盆栽早春瓜叶菊需求的逐年增加，目前瓜叶菊白粉病已成为制约瓜叶菊商品化产业发展的重要病害之一。迄今为止, 化学杀菌剂的喷施是目前防控瓜叶菊白粉病的主要手段，但又往往损伤叶片和花朵，影响了观赏价值和带来环境污染[1]。在生产上，主要通过常规杂交选育的方法培育抗白粉病的瓜叶菊品种，可是由于白粉病原菌优势小种的更替及突变速度快，导致抗病选育往往落后于小种更替[2]。近年来，人们采用RNA干扰MLO(Mycoplasma-like Organism)基因技术进行白粉病的防治取得一定进展[3,4]，如果该技术应用于瓜叶菊白粉病的防治上，那么有望从根本上解决防控白粉病的问题。
瓜叶菊白粉病的Mlo基因防治机理认识还不是十分清楚，但是在大麦、番茄等作物上有研究表明，作为一种新型抗病基因，Mlo基因会使植物产生叶细胞的自发死亡现象，且在抗性调控的过程中起负调控因子的作用[5,6]。即使没有病原菌存在时，携带mlo突变基因的大麦也易引发植物本身自发性的细胞坏死，说明在细胞坏死过程中，野生Mlo基因可能起负调控作用，即抑制细胞坏死[7,8]。通过缺失或移码的方式，Mlo基因突变成为mlo后，正常功能的MLO蛋白不能被合成，因此解除了这种负调控作用，而植物的叶表皮细胞会积累具有抗真菌活性功能的酚类物质以及H2O2和O2-，其中H2O2能够直接杀死感病细胞和侵染的病原菌，从而阻碍了白粉病的入侵，并加固细胞壁，产生广谱抗病性[9,10]。
本实验以瓜叶菊（Pericallis hybrida B. Nord.）为试材，采用RT-PCR 和RACE方法克隆了Mlo基因cDNA全长序列，并采用生物信息学方法对其进行预测和分析，为进一步研究瓜叶菊Mlo基因的功能和获得具有广谱和持久的白粉菌抗性的瓜叶菊种质资源奠定基础。
2材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
瓜叶菊（Pericallis hybrida B. Nord.）由东北农业大学园艺实验站提供，取样液氮速冻保存于-80℃冰箱中备用。
2.1.2 实验试剂
TRIZOL购自Invitrogene公司；总RNA抽提试剂盒购自北京天根；第一链cDNA合成试剂盒，PCR扩增试剂盒，DNA凝胶回收试剂盒均购于北京全式金公司，其它生化试剂均为进口或国产分析纯产品。
2.1.3 菌株及载体
大肠杆菌（E. coli）菌株Trans5α、TransT1购置于北京全式金，克隆载体pMD18 T-Vector 购置于TaKaRa公司。
2.2 实验方法
2.2.1 瓜叶菊Mlo基因片段的克隆及序列预测分析
2.2.1.1 瓜叶菊RNA的提取
方法一：TRIZOL法提取RNA
（1）剪取100~200mg新鲜的瓜叶菊叶片，液氮研磨后，置入1.5ml离心管中，加入lm1预冷的TRNzol Reagent试剂，振荡lmin，室温放置5~10min；
（2）4℃，12000r/min，离心10min，去除沉淀；
（3）取上清，并将其液移入一新的离心管，加入等体积的氯仿（1:1），剧烈振荡30sec，室温静置2~3min；
（4）4℃，12000r/min，离心10min；样品分成三层：黄色有机相，中间层和上层无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新的离心管中；
（5）加入等体积的异丙醇，室温沉淀10~30min；
（6）4℃，12000r/min，离心10min，沉淀RNA；
（7）去上清，加入lm175%的乙醇（DEPC处理过的水配制）清洗，4℃，7500r/min，离心5min；重复一次；室温晾干10min左右；
（9）加入50μl无RNase的灭菌双蒸水（ddH2O），溶解RNA；
（10）260mn下测OD值定量RNA浓度；
方法二：参照北京天根总RNA抽提试剂盒说明书
2.2.1.2 设计简并引物
将GeneBank上登录的外源植物Mlo基因的核苷酸及氨基酸序列进行下载，通过DNAMAN软件进行序列比对，根据比对结果为上下游引物确定两个合适的保守区域，使用primer5.0设计简并引物。
2.2.1.3 RT-PCR扩增目的片段
参照北京全式金EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix,反转录试剂盒说明书。（1）瓜叶菊cDNA第一链的获得
反转录反应体系如下：
瓜叶菊RNA 3 ul
Anchored Oligo(dT)18(0.5 μg/μl) 1 ul
2×TS Reaction Mix 10 ul
TransScript RT/RI Enzyme Mix 1 ul
RNase- Free Water to 20 ul
反转录反应条件如下：
42℃30min，85℃5min。
（2）Mlo基因的PCR扩增
PCR反应体系如下：
TemplateDNA 2 ul
Forward Primer(10 μM) 1 ul
Reverse Primer(10 μM) 1 ul
10×TransTap HiFiBuffer 5 ul
2.5mM dNTPs 4 ul
TransTap TM HiFi DNA Polymerase 0.5 ul
ddH2O to final volum 50 ul
PCR反应条件如下：
94℃pause
94℃ 3 min
94℃30 s
51℃ 1 min 35 Cycles
72℃ 1 min
72℃10 min
4℃pause
反应结束后，进行琼脂糖凝胶电泳，利用紫外凝胶成像系统进行拍照及分析，观察是否扩增出目的片段大小的条带。
2.2.1.4 凝胶回收目的片段
按照TIANgel Midi Purification Kit（离心柱型）胶回收试剂盒说明书进行。
（1）柱平衡步骤：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液BL，12000 rpm离心1min，弃收集管中的废液，然后把吸附柱放回收集管中。
（2）DNA样品经1%琼脂糖凝胶电泳后，EB染色，紫外灯下从凝胶上将目的条带DNA切出放入干净的1.5ml Eppendorf管中称取重量。
（3）向胶块中加入3倍体积PN溶胶液（如凝胶重0.1g，其体积可视为100μl，依此类推），50℃水浴放置10min，期间不断上下翻转离心管，确保胶块的完全溶解。如果胶块没有完全溶解，可再加入些溶胶液或继续放置几分钟，直至胶块彻底融化。
（4）将融化的胶溶液转移到一个吸附柱CA2中，室温放置2min，12000 rpm离心30~60s，弃收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
（5）向吸附柱CA2中加入600μl漂洗液PW。12000 rpm，离心30~60s后，倒掉收集管中的废液。
（6）将吸附柱CA2放回收集管中，12000 rpm，离心2min，尽量去净漂洗液，将吸附柱CA2 置于室温放置数分钟，彻底晾干，防止残留的漂洗液影响下一步的实验。
（7）将吸附柱CA2放入干净的离心管中，向吸附膜中央位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB （65~70℃预热后效果更好），室温放置2min。12000 rpm，离心2min收集DNA溶液（洗脱液体积应不少于30μl）。回收DNA可立即使用或保存于-20℃备用。
（8）1％琼脂糖凝胶电泳检测回收结果。
2.2.1.5 PCR产物与T载体连接
pMD18-T Vector，在10μl连接体系中加入以下成分：
表2-1 连接反应体系
Tab.2-1 The reaction system of connect
成分10 μl/管
PCR回收产物 4 ul
pMD18-T Vector 1 ul
Solution I 5 ul
置于冰上操作，之后放于16℃反应过夜。
2.2.1.6 连接产物转化大肠杆菌
感受态细胞（Trans5αChemically Competent Cell）购于TRANS。操作说明如下：
（1）取感受态细胞100μl，置于冰上融化，加入10μl pMD18-T Vector连接产物，轻轻混匀，冰浴30min。
（2）于42℃水浴中热激90s，之后迅速将管移到冰浴中2min，该过程不要剧烈摇动。（3）向每个离心管中加入500μl无菌的LB液体培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃，200 r/min培养1h，使细菌复苏。
（4）8000rpm离心5min，留50-100μl菌液，将感受态均匀涂开，将平板倒置于37℃培养箱中过夜。
2.2.1.7 重组质粒的PCR鉴定
在25μl的PCR反应体系中，取模板为0.2μl的质粒cDNA 或1μl的菌液，进行正常程序的PCR反应，同时设负对照，电泳检测是否扩增出特异条带。
2.2.1.8 重组质粒的酶切鉴定
本实验中用Hind III单酶切、EcoR I单酶切和Hind III/EcoR I双酶切来对重组质粒进行酶切鉴定。观察电泳中DNA条带位置，来确定是否有外源片段的插入以及插入片段的大小是否正确，从而初步判断是否为重组克隆。然后将其送到华大基因进行测序。
2.2.1.9 序列分析
将测序所得的序列利用生物学软件进行分析，并通过NCBI网站(https://www.doczj.com/doc/6612061359.html,)对Mlo基因的序列信息进行解析。
3 结果与分析
3.1 瓜叶菊总RNA的提取及质量分析
采用TRIZOL法和试剂盒提取瓜叶菊叶片总RNA，1.0%琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。从图3-1可以清晰地看到28S和18S两条主带，5s条带亮度也较弱，说明提取的总RNA纯度较高，无明显降解，其完整性符合试验要求，可用于进行下一步反应。
图3-1 瓜叶菊叶片总RNA
3.2 Mlo基因保守序列的克隆
3.2.1 简并引物的设计
在GenBank上搜索外源Mlo基因的氨基酸序列，以番茄、辣椒、芜菁、拟南芥等植物
为参考，使用DNAMAN软件对其氨基酸序列进行比对，结果发现该基因保守性较高，根据比对结果为上下游引物确定两个合适的保守区域，使用primer5.0设计简并引物。克隆瓜叶菊Mlo基因保守序列，简并引物序列为：
F: 5’-CAYCARCTGCAY ATHTTCA T-3’
R: 5’-GGV AGAGTCACA TAGCTGCA-3’
3. 2.2 RT-PCR扩增Mlo基因目的片段
以瓜叶菊总RNA反转录所得到的第一链cDNA为模板，PCR扩增目的片段，扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，发现约在812bp处有一条亮带，与目的片断的大小一致（图3-2），初步推测该扩增产物为Mlo基因目的片断，并有待进一步鉴定。
图3-2 Mlo基因的RT-PCR扩增电泳图
M：DL2000；1：Mlo基因片段
3. 2.3 阳性克隆的筛选与鉴定
将经回收、纯化后的PCR产物与pMD18-T Vector载体连接，连接产物转化大肠杆菌Trans5α感受态细胞后，在含有100 mg/L Amp的固体LB培养基上进行筛选。为确保证实验的准确性，设立了两种对照，即为：阴性对照和阳性对照，以大肠杆菌感受态细胞涂抹不加任何抗生素的LB培养基上作为阳性对照，结果长满菌落，说明感受态细胞有效，可用于转化；以感受态细胞涂抹于100mg/L Amp的固体LB培养基上作为阴性对照，结果没有菌落长出，说明抗生素有效。挑取阳性克隆进行pCR扩增，得到的扩增片段大小约为812bp（图3-3），与RT-PCR结果一致，表明这些克隆为阳性克隆。
图3-3重组质粒的PCR鉴定电泳图
M：DL2000；1：阴性对照；2-5：4个阳性克隆的PCR鉴定
3. 2.4阳性克隆的酶切鉴定
挑取白色菌落进行酶切鉴定。利用pMD18-T Vector载体上位于插入位点两端的Hind III 和EcoR I酶切位点，用Hind III单酶切、EcoR I单酶切和Hind III/EcoR I双酶切对其进行酶切鉴定，结果见图3-4。
图3-4酶切鉴定
M：DL2000；1：阴性对照；2：Hind III单酶切；3：EcoR I 单酶切；4：Hind III/EcoR I双酶切4.2.5 瓜叶菊Mlo基因片段的序列分析
将重组pMD18- T质粒经过PCR鉴定后，将确定的阳性克隆进行测序，得到一段长度为812 bp的序列，编码267个氨基酸（图3-5，3-6）。Blast比较结果显示：该序列与其他植物的Mlo基因核苷酸序列的同源性均在72%以上，氨基酸序列的同源性达82%以上。表明所克隆到的片段为Mlo基因片断。
图3-5瓜叶菊Mlo 基因片段的核苷酸序列及推测的氨基酸序列
图3-6 Mlo基因氨基酸序列比对结果
参考文献
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第一章知识点 1.说明分布式系统相对于集中式系统的优点和缺点。从长远的角度看，推动分布式系统发展的主要动力是什么？ 2.多处理机系统和多计算机系统有什么不同？ 3.真正的分布式操作系统的主要特点是什么？ 4.分布式系统的透明性包括哪几个方面，并解释透明性问题对系统和用户的重要性。 5.在分布式操作系统中，为什么采用微内核技术，通常微内核提供哪些服务？ 第二章知识点 6.客户-服务器模式的主要思想及优点。 7.客户为了发送消息给服务器，它必须知道服务器的地址。试给出服务器进程编址的几种方法，并说明如何定位进程。 8.对于接收消息Receive原语，为什么需要缓存, 缓存的作用是什么? 9.说明在C/S模式下解决消息可靠传输的三种方法? 10.说明RPC的主要思想及RPC调用的主要步骤。（远程过程调用函数sum(4,7)为例说明） 11.在RPC调用时，如果服务器或客户机崩溃了，各有哪些解决方法。 12.RPC信包发送可采用爆发协议，但是会产生超限错误(overrun error)，给出解决办法。 13.一个影响RPC执行时间的问题是消息的拷贝问题，试说明在那些环节需要拷贝，并说明减少拷贝次数的方法。 14.在组通信中，给出组编址的的三种方式。 15.用组通信方式时，举例说明消息顺序的重要性，并说明解决方法说明。 第三章知识点 16.实现分布式系统同步的复杂性表现在哪几个方面？说明先发生关系，并说明在LAMPORT算法中怎样给事件分配时间。 17.有三个进程分别运行在不同的机器上，每个机器都有自己的时钟并以不同且不变的速率工作（进程1的时钟嘀嗒了6下时，进程2的时钟嘀嗒了8下，而进程3的时钟嘀嗒了10下）。举例说明进程之间消息传递中违反先发生关系的情况，并说明如何用Lamport方法解决。 18.说明RICART和AGRAW ALE分布式互斥算法；假定A和B是相互独立的两个临界区，进程0要进入A，进程1要进入B，R-A分布式互斥算法会导致死锁吗？说明理由。 19.许多分布式算法需要一个协调者，叙述欺负选举算法。 20.举例说明用私有工作空间实现事务处理时的基本思想。 21.说明在分布式系统中实现原子性提交的两阶段提交协议的基本思想及其优点。 22.举例说明为什么使用集中式的死锁检测算法会产生假死锁，并给出一种解决办法。 23.举例说明分布式死锁检测方法Chandy-Misra-Has算法的思想以及如何解除死锁。 24.说明wait-die和wound-wait分布式死锁预防方法。事务时间戳为50的进程申请事务时间戳为100的进程占用的资源。按以上两种策略，结果会如何? 第四章. 知识点 25、叙述实现线程包的方法及其优缺点。 26、说明发送者发起的分布式启发算法和接收者发起的分布式启发算法及各自的主要缺点。 27、说明主机后备容错方法的主要思想，在主机崩溃后存在的问题及解决方法。 28、多处理机系统中，fail-silent类型和Byzantine类型处理机错误各需要至少多少个处理机才能满足要求？说明理由。 29、举例说明Lamport等人提出的算法是如何解决Byzantine将军问题的。
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植物基因工程实验技术
编者: 赵 燕
主审: 张学文
湖南农业大学植物科学实验教学中心
2007 年 4 月
前
言
基因工程是现代生物技术的核心, 也是现代分子生物学研究的重 要手段. 掌握基因工程技术对于生物技术专业及其它生物学相关专业 学生都很重要. 基因工程本身是由一系列分子生物学操作技术组成的系统性技 术体系,本实验指导侧重于 DNA 重组操作,将基因工程操作的常用 和核心技术组织起来, 以为我校生物技术本科生及有关专业研究生基 因工程实验提供简单而明确的指导. 为适应基因工程的飞速发展,一些生物技术公司匠心独运,开发 出专门的试剂盒,使一些复杂的实验操作简单化了.这对于实验者来 说自然是好事,但也使实验者动手胜于用脑.对于实验人员来说,一 定应知其然并知其所以然, 才会在实验中运用自己的知识予以创新性 的发展.期望本实验指导不成为实验中的教条.
编
者
2007 年 4 月
1
目
实验一 实验二 实验三 实验四 实验五 实验六 实验七 实验八 实验九 实验十 附录:
录
大肠杆菌的对照培养,单菌落的分离及菌种保存 ...............3 强碱法小量制备质粒 DNA.....................................................5 琼脂糖凝胶电泳......................................................................7 植物总 DNA 的提取,纯化和检测 ........................................9 DNA 的 PCR 扩增................................................................. 11 植物总 RNA 的分离 .............................................................15 RT-PCR..................................................................................17 体外重组分子的构建,筛选及检测.....................................21 植物表达载体的构建,筛选及检测.....................................22 植物遗传转化技术 ................................................................23 实验中常用的仪器与器皿 .....................................................24
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数据挖掘课程论文 ——————数据挖掘技术及其应用的实现 数据挖掘技术及其应用的实现 摘要：随着网络、数据库技术的迅速发展以及数据库管理系统的广泛应用，人们积累的数据越来越多。数据挖掘(Data Mining)就是从大量的实际应用数据中提取隐含信息和知识，它利用了数据库、人工智能和数理统计等多方面的技术，是一类深层次的数据分析方法。本文介绍了数据库技术的现状、效据挖掘的方法以及它在Bayesian网建网技术中的应用：通过散据挖掘解决Bayesian网络建模过程中所遇到的具体问题，即如何从太规模效据库中寻找各变量之间的关系以及如何确定条件概率问题。 关键字：数据挖掘、知识获取、数据库、函数依赖、条件概率 一、引言： 数据是知识的源泉。但是,拥有大量的数据与拥有许多有用的知识完全是两回事。过去几年中,从数据库中发现知识这一领域发展的很快。广阔的市场和研究利益促使这一领域的飞速发展。计算机技术和数据收集技术的进步使人们可以从更加广泛的范围和几年前不可想象的速度收集和存储信息。收集数据是为了得到信息,然而大量的数据本身并不意味信息。尽管现代的数据库技术使我们很容易存储大量的数据流,但现在还没有一种成熟的技术帮助我们分析、理解并使数据以可理解的信息表示出来。在过去,我们常用的知识获取方法是由知识工程师把专家经验知识经过分析、筛选、比较、综合、再提取出知识和规则。然而,由于知识工程师所拥有知识的有局限性,所以对于获得知识的可信度就应该打个 折扣。目前,传统的知识获取技术面对巨型数据仓库无能为力,数据挖掘技术就应运而生。 数据的迅速增加与数据分析方法的滞后之间的矛盾越来越突出,人们希望在对已有的大量数据分析的基础上进行科学研究、商业决策或者企业管理,但是目前所拥有的数据分析工具很难对数据进行深层次的处理,使得人们只能望“数”兴叹。数据挖掘正是为了解决传统分析方法的不足,并针对大规模数据的分析处理而出现的。数据挖掘通过在大量数据的基础上对各种学习算法的训练,得到数据对象间的关系模式,这些模式反映了数据的内在特性,是对数据包含信息的更高层次的抽象[1]。目前,在需要处理大数据量的科研领域中,数据挖掘受到越来越多的关注,同时,在实际问题中,大量成功运用数据挖掘的实例说明了数据挖掘对科学研究具有很大的促进作用。数据挖掘可以帮助人们对大规模数据进行高效的分
多处理机操作系统 【摘要】本文通过对操作系统的发展对引入多操作系统的原因和采用多处理机操作系统的优点进行了阐述。分别对多处理机操作系统的三种模式类型分别就其工作原理和特点进行了详细说明。随后对多处理机操作系统的共享公用存储器的实现方法进行了阐述，即处理机和存储器的几种连接方式的优缺点和实现原理进行了说明。 【summary】In this paper, the development of the operating system into multiple operating systems on the causes and the use of the advantages of multiprocessor operating system has been described. Multiprocessor operating systems, respectively, for the three model types in respect of its working principle and characteristics are described in detail. Then the multi-processor operating system share a common memory implementation are described,The processor and memory advantages and disadvantages of several connections and implementation principles described 【关键词】多处理机操作系统、主从式(master-slave)、 独立监督式(separate supervisor) 浮动监督式(floating superviso)、公用存储器、 操作系统经过上个世纪60、70年代的发展，到了本世纪80年代已趋于成熟，随着VLSI和计算机体系结构的发展，操作系统随之发展，形成了多处理机操作系统、微机操作系统、网络操作系统、分布式操作系统和嵌入式操作系统等。 从广义上说，多处理机操作系统，就是由多台计算机协同工作来完成所要求的任务的计算机系统操作系统。而传统的侠义上，多处理机系统的作用是利用系统内的多个CPU来并行执行用户的多个指令。这样做的优点有三。 第一、利用多个处理机提供在发生故障的情况下的冗余性，建立高度可靠的系统。 第二、将程序可以分成几个能作为进程独立执行的部分，减少程序执行的时间。 第三、通过并行执行多个用户程序，增加系统的吞吐量。 多个CPU在物理位置上处于同一机壳中，有一个单一的系统物理地址空间和每一个CPU均可访问系统内的所有存储器是其显著的特点。 引入多处理机系统的原因有以下三点： 1、增加系统的吞吐量 2、节省投资 3、提高系统的可靠性 多处理机操作系统的模式类型可分为三种： 1、主从式(master-slave)主从式操作系统即由一台主处理机记录、控制 其它从处理机的状态，并分配任务给从处理机。操作系统在主处理机 上运行，从处理机的请求通过陷入传送给主处理机，然后主处理机回 答并执行相应的服务操作。主从式操作系统的特点有如下几个特点： 1）：由于只有一个处理机访问执行表，所以不存在管理表格存取冲突 和访问阻塞问题。 2）：操作系统程序只在一台处理机上运行。
农杆菌介导的植物转基因技术 一、实验目的 1 了解低温离心机、恒温振荡培养箱、超净工作台等仪器的使用。 2 学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理；掌握农杆菌介导转化植物的实验方法，了解转基因技术的操作流程。 二、实验原理 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤。农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将 T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。 实验一培养基配制 一、仪器和试剂 1、仪器：高压灭菌锅，超净工作台 2、药品：Beef extract （牛肉浸膏） 5g/L ，Yeast extract （酵母提取物） 1g/L ，Peptone （蛋白胨） 5g/L ，Sucrose （蔗糖） 5g/L ，MgSO4.7H2O 0.4g/100ml ，Agar （琼脂）1.5g/100ml，MS粉，有机溶液，肌醇，Fe盐，NAA（萘乙酸），6-BA （6-苄氨基腺嘌呤），卡那霉素（kan），利福平（rif ），链霉素（str ）。 二、实验方法 第一组配制YEB固体培养基 1、配制250mlYEB固体培养基：先称取1.25g Beef extract （牛肉浸膏）； 1.25g Peptone （蛋白胨）；0.25g Yeast extract （酵母提取物）；1.25g Sucrose
（蔗糖）;1g MgS04.7H2O琼脂粉3.75g ;将上述药品置于250ml三角瓶中，用量筒称取 200ml蒸馏水将其溶解混匀，然后再定容至250ml,用NaOH调pH=7.4。 2、灭菌：将盛有250ml 培养基的三角瓶封口，在三角瓶表面写清培养基名称，用高压灭菌锅进行灭菌。 3、抗生素的加入：高压灭菌后，待培养基温度降到50-60 C时（手可触摸）加入已经过滤好的抗生素（100用/ml kan+50⑷/ml Str+ 50旧/ml rif ）,以免温度过高导致抗生素失效。 4 、倒板：将抗生素与培养基混匀，每个平皿倒15ml 培养基，可以倒16个平皿，倒完后打开平皿盖，在紫外灯下照10min,等待培养基凝固，盖上平皿盖，封口备用。 第二组配制YEB液体培养基 1、配制500mlYEB液体培养基：先称取2.5g Beef extract （牛肉浸膏）;2.5g Peptone （蛋白胨）; 0.5g Yeast extract （酵母提取物）; 2.5g Sucrose （蔗糖）; 2g MgSO4.7H2O将上述药品置于500ml三角瓶中，用量筒称取450ml蒸馏水将其溶解混匀，然后再定容至500ml，用NaOH调pH=7.4。 2、灭菌：将盛有500ml 培养基的三角瓶封口，在三角瓶表面写清培养基名称，用高压灭菌锅进行灭菌。 3、抗生素的加入：高压灭菌后，待培养基温度降到50-60 C时（手可触摸）加入已经过滤好的抗生素（100用/ml kan+50⑷/ml Str+ 50旧/ml rif ），以免温度过高导致抗生素失效。 4 、分装：将培养基分别分装到试管和三角瓶中，每个试管中分装5ml，分 装12个试管。每个三角瓶中倒入35ml，共12个三角瓶。 5、分装好后，封口备用。 第三组配制MS液体培养基 1、配制500mlMS液体培养基：先在500ml三角瓶中加入400ml蒸馏水，称取2.15gMS 粉置于蒸馏水中，搅拌均匀；再向其中加入5ml 100倍Fe盐浓缩液；5ml100倍肌醇浓缩液；5ml有机溶液的混合液，然后混匀定容至500ml,用NaOH 调pH=5.8。
第七章分式操作系统 一、填空题 １网络拓扑结构主要有三种，它们是（），（），（）· 2．将IP地址和城名对应的协议是（）· 3．OSI参考模型由（）层组成，TCP／IP参考模型由（）组成． 4．在TCP／IP模型的传输层共有两个协议，它们是（），（）· 5．将物理地址和IP转化的协议是（）· 6．使用TCP提供基于Web浏览器的Internet访问服务的是（）服务，它通常使用（）端口． 7．Java中与远程过程调用具有相似特性的方法是（）· 8．Java中将远程对象注册到RMl名称注册表，以便客户端就能够找到这些服务器对象的语句是（）· 9．在分布式系统不能采用诸如信号量，管程等方法来解决进程的互斥和死锁问题，因为这些 10，假设在一个分布式系统中有n个进程，采用分布式算法解决互斥问题时，使用一次所需发送的消息数为（）· 11．在选举的环算法中，当一个进程发现管理员不能工作时，它把包含（）的选举(ELECTION)消息发给它的后继进程． 12．分布式文件系统的设计基于（）模式． 13．命名的透明性分两种：（）和（）· 14．若某分布式系统某一个文件共有6个复制，假设采用的是Gifford方案，那么需满足（），文件才可以读取或者修改． 15．对读取文件有效，但是丝毫不影响写文件的解决缓存一致性问题的算法是（）· 16. Sun公司的NFS实现包括（）层，顶层是（）· 17．分布式系统通信基于（）协议． 18．一个分布式系统是一组通过网络相连的各自独立的计算机的（）。 19．分布式系统提供一种高效而且简便的环境来（）资源． 20．使用分布式系统主要基于以下四点：资源共享，（），可靠性，通信． 21．要使得系统中的计算机联合起来工作，系统中的计算机必须通过（）(比如电缆)的方法连接起来． 22、（）结构是将所有网络上的计算机设备全都连接在一条电缆上． 23．星形网路上各个节点之间的通信都统一由（）控制。 24．环形网络有以下优点（）。 25．网络有两种基本类型：（）· 26．共享式局域网可能有不同的拓扑结构：（） 27．局城网最基本的物理形式是采用某种类型的导线或电缆，把两台或多台计算机连接起来， 以形成这些计算机之间的（）· 28．在大多数广城网中，通信子网一般都包括两部分：（）
《数据分析与数据挖掘实训》课程论文模板 班级：学号：姓名：开课学院：理学院考试形式：开卷任课教师：
小论文题目黑体小二居中 张三信计091 摘要 “摘要”用黑体小三号,居中。"摘要"设置段前为8行,段后为1行。摘要的字数要求150字，用宋体五号。"关键词"用黑体(Times New Roman粗体)小五号,内容用宋体五号或小四号(Times New Roman体),包含3至5个字或词组,中间用逗号分隔,结束时不用标点符号。关键词与摘要相距1行。 关键词计算机，信计，经信 1一级标题,用黑体小二号 正文中所有非汉字均用Times New Roman体。1、字间距 设置为"标准",段落设置为"单倍行距"。2、段落采用三级标题, 用阿拉伯数字连续编号,例如1,1.1,1.1.1。每一段落的标题为一
级标题,用黑体小二号。段前距为0行,与紧接其后的文字或二 级标题间距为1行。 2 第二个一级标题,用黑体小二号 2.1二级标题用宋体四号 二级标题用宋体四号,左对齐,段前距1行,段后距0行。 2.1.1三级标题用黑体小四号 三级标题用黑体小四号,左对齐,段前距1行,段后距0行。正文用宋体五号或小4号。 4、表名位于表的正上方,用宋体小五号粗体;图名位于图的正下方,用宋体小五号粗体;图表按图1或表1编号。 表1-1 学生成绩 学号姓名年龄成绩图名位于图的正下方,用宋体小五号粗体;图表按图1或表1编号。 图1-1 瑞星卡卡 5、数学公式用斜体,注明编号。
sina+sinb=sinc (1-1) csina+csinb=sinc (1-2) 6、页眉从正文开始。页眉左端顶格为该篇文章的标题,右端右对齐为页码,用阿拉伯数字。参考文献用黑体小二号，左缩进为0，段前设置为0行,段后设置为1行,著录的内容应符合国家标准。 主要格式如下: 期刊:[序号]作者(用逗号分隔).题名.刊名,出版年,卷号:(期号),起始页码～终止页码 书籍:[序号]作者(用逗号分隔).书名.版本号(初版不写).出版地:出版者,出版年 论文集:[序号]作者(用逗号分隔).题名.见(英文用In):主编.论文集名. 出版地:出版者,出版年,起始页码－终止页码 学位论文:[序号]作者.题名[博士(硕士/学士)学位论文].保存地:保存单位,授予年 参考文献 [1] 张三,李四.计算机在初级会计电算化中的应用, 计算机研究进 展,2009,34(3):12-20 [2] 王珊,萨世轩.数据库原理及应用.第四版.北京.高等教育出版 社.2004 [3] 万明,李恪.数据挖掘在上海世博会中的应用.华东理工大学.高性 能计算国际会议.上海.高等教育出版社,2011,10-23
智能楼宇监控 内容提要： 近些年来，随着经济的发展，人们生活质量的提高，一般的楼宇已经不能满足人们对人身财产安全的要求。然而，智能楼宇监控系统的出现将从根本上改善这个问题。因此，楼宇采用现代化安防技术是目前发展的必然趋势。 指纹门禁系统是智能楼宇出入管理的一个重要措施，它可以通过所采集的住户指纹信息来对出入门禁的人进行核对，以确保住户的人身财产安全。视频监控系统现多采用数字信号处理技术，根据监控点的不同选择不同的监控设备，并通过数字硬盘录像机（DVR）对监控区域进行录制。可视对讲系统是对门禁系统的更进一步完善，住户可以通过该系统对探访者进行视频认证，从而为住户人身财产安全提供更好的保证。智能楼宇监控技术的推广，对于改善人居环境，促进可持续发展也具有重要意义。 关键词：智能监控安防
Abstract： In recent years, with the development of economy, the quality of people's life is improving, general building cannot have satisfied the requirement of personal property safety . However, intelligent building security monitoring system would radically improve the problem. Therefore, it is the inevitable trend of current development for building which adopts the modern security technology. Fingerprint entrance guard system is one of the important measures in the management for the intelligent building ,it can check out the people through the acquisition of the residents of fingerprint information to ensure personal property safety . Video monitoring systems are now mostly adopted digital signal processing technology, according to the different choices of decentralizing we chose the different monitoring equipment, and record the different monitor region through digital hard disk video recorder (DVR) .Visible interphone system is the further improvement of entrance guard system, residents can recognize the visitors by video through this system, so it can provide better guarantee for personal property safety . The promotion of intelligent building security monitoring technology has important meaning on improving the living environment and promoting sustainable. Key words：intelligent security monitoring
植物基因工程的重要意义 关键词：植物基因工程技术，转基因 正文： 作为21世纪科技的重要发展项目，基因工程技术在植物方面应用的意义主要体现在以下五个方面。 1．植物基因工程技术可以实现超远缘育种,克服不亲和障碍 我们知道，在作物育种中最早应用的是植物组织培养技术，这种技术已在花卉、药材、森林和农作物育苗得到广泛的应用，我国已在甘蔗、人参和马铃薯等方面收到显著经济效益。此外，还可从培养细胞或再生植株选择所需要的突变体。如Shepard(1983)从马铃薯培养物中选出一种能抗腹疫病(Phytophthorainfectans)的抗性植株以及利用培养细胞生产诸如喜树碱等化合物。但以上方法只是同类植株的基因改变。此外人们还对植物原生质体融合进行了研究。但是植物细胞融合后性状的表达，取决于它在以后有丝分裂时染色体是否发生交换或丢失情况。[1]但到目前为止，由融合的细胞而能培养成植株者容寥寥无几，这可以说是克服远缘杂交不亲和障碍的最早例子。如果说细胞融合可以克服种属之间不亲和性，而基因重组则可在更大范围内进行了。动物基因如萤火虫的发光蛋白基因,寒带鱼的抗冻蛋白基因,蛇、蝎的毒液基因等也已转移给作物,分别获得能发光的转基因烟草,抗寒的转基因甜菜、转基因番茄和抗虫的转基因棉花等。[2]由此可见，外源基因导入植物细胞后引发的改变是巨大的。 2．植物基因工程技术可以增强作物改良力度,促进品种更新换代 作物改良基本有两方面，其中提高作物品种的光合与养分效率、病害与虫害抗性正在成为植物基因工程的研究重点,促使作物品种适应低温、干旱、雨涝、土壤瘠薄和盐碱以及温室效应等新旧灾害从而提高作物产量，也已成为基因工程育种的主要内容。 农业生产中，增加粮食产量无非依靠两种途径:一是提高作物品种的生产能力;二是减轻环境因素对作物生长的不利影响。据报道，全世界每年因虫害、病害、草害以及寒冷、干旱、盐碱等灾害对粮食生产所造成的损失令人惊叹：全球每年因虫害与病害所造成的作物减产达30%以上，因杂草所损失的粮食至少在10%以上，再加上低温、干旱和盐碱等各种因素，全世界每年至少要损失粮食产量的一半以上。[3～5] 同时，为了防治病虫害及杂草等，还要施用大量的化学农药，这不仅消耗大量的能源，更严重的是对生态环境造成了极大的甚至是不可逆的破坏。为了摆脱上述困境，从20世纪80年代起，人们开始研究和利用转基因抗性植物来预防病虫害和杂草等，并收到了良好的效果。与传统作物育种技术相比，利用基因工程技术进行遗传育种有其自身的优势，一方面由于它可以将特定的抗性基因定向转移，因而成功率较高，可大大提高选择效率，在很大程度上避免了传统育种工作的盲目性；另一方面是其基因来源打破了种属的界限，除了植物基因以外，动物和微生物的抗性基因都可以作为外源基因转人植物基因组中，并获得表达。[6] 3．植物基因工程技术可以拓宽应用研究,扩大生产领域 随着转基因植物技术日益成熟,利用植物的生物反应器作用,进行贵重药品、人畜疫苗和精细化工等的生产,因具有成本低,竞争力强的吸引力,正在成为高技术及其产业化的新兴热门领域。现已成功地将干扰素、胰岛素、多肽抗体、人血清白蛋白等基因转给植物进行这些药物的生产。美国现已得到多肽抗体转基因烟草,美国还在通过转基因植物研制麻疹、乙肝、艾滋病等疫苗,甚至成功地获得了口服植物疫苗。现国际上正在出现研制营养药物的新思路。此外,现还大量进行用于塑料、染料、涂料、洗涤、香料、润滑剂等的转基因植物研究。据
海南大学 数据挖掘论文 题目：股票交易日线数据挖掘 学号：20100602310002 姓名： 专业：10信管 指导老师： 分数：
目录 目录 (2) 1. 数据挖掘目的 (3) 2.相关基础知识 (3) 2.1 股票基础知识 (3) 2.2 数据挖掘基础知识 (4) 2.2.2数据挖掘的任务 (5) 3.数据挖掘方案 (6) 3.1. 数据挖掘软件简介 (6) 3.2. 股票数据选择 (7) 3.3. 待验证的股票规律 (7) 4. 数据挖掘流 (8) 4.1数据挖掘流图 (8) 4.2规律验证 (9) 4.2.2规律2验证 (10) 4.2.3规律三验证 (12) 4.3主要节点说明 (14) 5.小结 (15)
1.数据挖掘目的 数据挖掘的目的就是得出隐藏在数据中的有价值的信息，发现数据之间的内在联系与规律。对于本次数据挖掘来说，其目的就是学会用clementine对股票的历史数据进行挖掘，通过数据的分析，找出存在股票历史数据中的规律，或者验证已存在的股票规律。同时也加深自己对股票知识的了解和对clementine软件的应用能力。为人们决策提供指导性信息，为公司找出其中的客户为公司带来利润的规律，如二八原则、啤酒与尿布的现象等。 2.相关基础知识 2.1 股票基础知识 2.1.1 股票 是一种有价证券，是股份公司在筹集资本时向出资人公开或私下发行的、用以证明出资人的股本身份和权利，并根据持有人所持有的股份数享有权益和承担义务的凭证。股票代表着其持有人（股东）对股份公司的所有权，每一股同类型股票所代表的公司所有权是相等的，即“同股同权”。股票可以公开上市，也可以不上市。在股票市场上，股票也是投资和投机的对象。对股票的某些投机炒作行为，例如无货沽空，可以造成金融市场的动荡。 2.1.2 开盘价 开盘价又称开市价，是指某种证券在证券交易所每个交易日开市后的第一笔买卖成交价格。世界上大多数证券交易所都采用成交额最大原则来确定开盘价。 2.1.3 收盘价 收盘价是指某种证券在证券交易所一天交易活动结束前最后一笔交易的成交价格。如当日没有成交，则采用最近一次的成交价格作为收盘价，因为收盘价是当日行情的标准，又是下一个交易日开盘价的依据，可据以预测未来证券市场行情；所以投资者对行情分析时，一般采用收盘价作为计算依据。
郑州轻工业学院 课程设计报告 题目简述分布式操作系统学生姓名杨元家张峰崎 专业班级计科11-01 学号0152 0153 院（系）计算机与通信工程指导教师张旭 完成时间2014 年6月18日
目录 摘要错误!未定义书签。 1 分布式操作系统的特点错误!未定义书签。 2 网络操作系统和分布式操作系统的区别错误!未定义书签。 网络操作系统错误!未定义书签。 网络操作系统错误!未定义书签。 网络操作系统对于计算机网络的作用错误!未定义书签。 分布式操作系统错误!未定义书签。 集群为了提高计算机的性能错误!未定义书签。 分布式操作系统错误!未定义书签。 网络操作系统和分布式操作系统的区别是：错误!未定义书签。 3 以大规模IPTV点播系统为例说明分布式系统分布方式错误!未定义书签。分布式点播系统分析错误!未定义书签。 分布式系统典型结构错误!未定义书签。 分布式系统工作原理错误!未定义书签。 分布式系统的典型应用错误!未定义书签。 分布式点播系统的局限性错误!未定义书签。 结论错误!未定义书签。 参考文献错误!未定义书签。 分布式操作系统的特点
摘要 本文介绍了分布式操作系统的特点以及与网络操作系统的区别，并且以大规模IPTV 点播系统为例说明分布式系统分布方式，分布式操作系统是在比单机复杂的多机环境下得到实现的，并且具备分布性、自治性、并行性、全局性这四个基本特征，能够实现资源共享，加快计算速度，并且可靠性得到了提高。在分布性与并行性上比网络操作系统有独到的优点，并且在透明性以及健壮性方面具有网络操作系统不可匹敌的优势，在大规模IPTV点播系统中，本文从分布式系统的结构、分布式系统的工作原理、分布式系统的典型作用以及分布式系统的局限性等方面详细阐述了分布式系统在服务器系统中是如何实现分布的。 关键字：分布式操作系统、网络操作系统、IPTV点播系统 1 分布式操作系统的特点 分布式操作系统是在比单机复杂的多机环境下得到实现的，操作系统在进行任何一项任务的始终都要依赖于通信软件模块，故而分布式操作系统具有区别于单机操作系统的下列显著特点： (1)具有干预互连的各处理机之间交互关系的责任。分布式操作系统必须保证在不同处理机上执行的进程彼此互不干扰，并严格同步，以及保证避免或妥善解决各处理机对某些资源的竞争和引起的死锁等问题。
吉JISHOU UNIVERSITY 课 程 论 文 课程名称 小二号楷GB2312不加粗 题 目 小二号楷GB2312不加粗 作 者 所属学院 专业年级 信息管理与信息系统2008级 写作时间 吉首大学教务处制
目 录 (1) Abstract (1) 引言 (2) 一、应收帐款具有“双刃性” (2) （一）有利方面 (2) （二）不利方面 (3) 二、我国应收帐款管理制度及缺陷 (3) （一）相关制度 (3) （二）制度缺陷 (3) 三、加强应收帐款管理的措施 (4) （一）制定适当的信用政策 (4) （二）提取坏帐准备金，减少坏帐损失 (4) （三）慎选结算方式，推行票据结算制度 (5) （四）对应收帐款设定担保，办理信用保险 (5) （五）制定合理的收款政策，催收帐款责任到位 (5) （六）根据帐龄情况采取必要措施 (5) 四、系统分析，为应收帐款科学管理提供思路 (5) 结语 (13) 参考文献 (13) （用3号黑体字，中间空2字符） （用小4号宋体字，1.5倍行距，下同）
学生姓名 （吉首大学 ***学院，湖南 张家界 摘要：（←用小4号黑体字）应收帐款的存在是买方市场下企业为占有市场而必然出现的结果。它既可扩大市场，提高市场占有率，又给企业带来潜在的坏帐风险，具有“双刃性”。企业应充分认识应收帐款的利弊，从应收帐款的周转情况、帐龄、规模及对收入和利润的弹性等方面系统分析，从信用政策、坏帐准备、及时催收、根据帐龄区别对待等方面加强管理，由此降低和控制应收帐款的风险。（←用5号宋体字，中文摘要应简洁明了，字数为300字左右，内容包括论文的写作目的、意义、研究方法、研究过程、主体内容及结论，突出创造性成果及新见解） 关键词：（←用小4号黑体字）应收帐款；管理；分析（←用5号宋体字，关键词为能反映论文最主要内容的名词性术语，数量3 The Management and the Analysis of the Account Receivable （↑用3号Times New Noman ，加粗，居中） （如果有副标题，用小3号Times New Noman ，居中） （作者姓名，用4号Times New Noman ，居中） (School of ****,Jishou University Zhangjiajie,Hunan 427000) （单位，用小4号 Abstract : （←用小4号Times New Noman ，加粗，首个字母大写）The existence of the account receivable is a result to occupy market in the buyer ’s market. The account receivable not only expands the occupation rate of market but also brings the potential bad account risk. It is “a pair of edge nature ”. Enterprises should study the pros and cons of the account receivable and analyze turnover situation and scale of the account receivable age of the debt and elasticity to the income and profit of the account receivable. And enterprises should strengthen management to lower and to control the （用4号宋体字）
浅谈计算机操作系统的论文 《浅谈计算机操作系统及其发展》 摘要：本文浅谈了有关计算机的操作系统及其发展。 关键字：计算机操作系统;功能 一、引言 随着我国经济社会的快速发展，计算机已经逐渐渗透到人们生活的各个领域，计算机操作系统也得到了长足的发展，操作系统是管 理计算机软硬件资源、控制程序运行、改善人机界面和为应用软件 提供支持的一种系统，操作系统功能强大，能够为用户带来良好的 界面体验，当然操作系统也在不断的完善和发展，操作系统从最简 单的批处理系统、分时操作系统，到今天的各种面向PC的操作系统 和面向大型机的多任务、多用户系统，它们在调度和控制计算活动，提供软件开发、运行和应用环境，挖掘计算机潜力，提高计算机的 性能方面发挥着越来越重要的作用。对计算机操作系统的研究，学 者一般集中在对计算机系统开发的研究上，而从计算机系统及其发 展的角度进行研究的文章较少，本文从计算机系统基本情况着手， 探讨了现代计算机操作系统的功能，并对计算机操作系统的发展情 况进行了简单的总结。希望能够对计算机操作系统理论研究有所启发。 二、计算机操作系统概述 (一)操作系统发展的目标 操作系统一方面直接管理和控制着所有的硬件和软件，使计算机系统的各部件相互协调一致的开展工作，另一方面它想用户提供正 确的利用软硬件资源的方法和环境，使用户能够通过操作系统充分 而有效的使用计算机。计算机操作系统有四个方面的目标： (1)方便。进行操作系统配置能够是用户计算机系统更容易运用，方便用户利用计算机处理任务。
(2)有效。操作系统要能够使计算机系统的CPU和I/O设备得到 更有效的利用。 (3)可扩展能力。计算机操作系统要适应计算机硬件和体系结构 的方面，要具有良好的扩展性，可扩展性是计算机系统性能是否优 越的重要指标。 (4)开放性。计算机操作系统要适应各种不同类型的计算机硬件 系统，实现应用程序的可移植和互操作性，互联网是一个开放性平台，这也决定了计算机操作系统必须是一个开放性平台。能够帮助 用户实现资源共享。 (二)用户角度下的操作系统层次结构 三、计算机操作系统功能 (一)处理器管理 计算机操作系统一个重要的功能就是实现对中央处理器的管理，总所周知，中央处理器是计算机的核心部件，它是决定计算机性能 的关键指标，计算机在执行单道作业或者单用户作业命令时，对处 理器的管理任务相对简单，但是在计算机执行多道程序或者命令时，如何将中央处理器的时间合理的分配给各个程序这一任务就相对复杂，计算机操作系统能够有效解决这一问题，计算机操作系统对处 理器的管理就是要解决CPU分配策略、实施方法等问题。 (二)存储管理 计算机操作系统存储管理主要工作任务是对存储器进行分配、保护、扩充和管理，主要围绕以下三个方面开展工作： (1)内存分配。在内存中有操作系统、其他系统软件及一个或多 个用户程序。如何分配内存、以保障系统及各用户程序存储区不冲突，是内存分配解决的主要问题。 (2)存储保护。系统中存在着多个任务程序运行，通过存储管理 可以保证程序在执行过程中不会相互占用，并且确保用户执行程序 无法破坏系统程序。