.
《中国医疗器械信息》
年第13卷第7期 Vol.13 No.7
文章编号：1006-6586(2007)07-0051-03 中图分类号：TH773 文献标识码：A
收稿日期：2007-03-27
作者简介：余虹，在读研究生
中药现代化离不开现代、高效的分离、分析技术。现代分析技术的发展，尤其是色谱联用技术的出现加快了中药成分分析研究的步伐。目前，高效液相色谱一质谱(high-performance liquid chromatography-mass spectrometry ， HPIC-MS)联用技术正处于快速发展
阶段。质谱检测器具有更高的灵敏度，样品用量少，分析速度快，应用范围广，在选择合适电离方法的前提下，一般化合物都能被电离得到检测，从而能获得更多的化合物结构信息。HPLC 可分离极性的、离子化的、不易挥发的相对分子质量大和对热不稳定的化合物。HPIC-MS 联用技术具有集液相色谱的高分离与质谱的高灵敏度，极强的定性专属性于一体的优势，为中药成分分析提供了一种更高效、更可靠的方法[1]。
1 HPLC–MS 联用接口技术
大气压电离接口是目前应用最广泛的接口技术，包括3种操作模式：大气压化学电离(atmospheric pressure
chemical inization ，APCI)。电喷雾(electrospray ，ESP)和离子喷雾(ionspray ，ISP)。质谱仪的类型通常根据质量分析器的不同进行分类，有扇形磁场质谱仪(magnetic sector-MS ，MS-MS)，四级杆质谱仪(quadrupole-MS ，Q-MS)，飞行时间质谱仪(time of flight-MS ，TOF-MS)，
傅立叶变换质谱仪(fourier transform-MS ，FT-MS)，离子阱质谱仪(ion trap-MS ，IT-MS)，串联质谱仪和多级质谱仪等。最常用的质量分析器为Q-MS ，其次为IT-MS ，MS-MS 和TOF-MS 等[2]。
2 在中药指纹图谱研究中的应用
色谱指纹谱技术是国际公认的有效控制天然产物内在质量的技术。中药指纹图谱的研究已成为中药现代化的关键技术之一。随着色谱联用技术的高速发展，特别是高效液相色谱质谱联用技术的发展，加快了中
药指纹图谱的研究。
张尊建[3]等采用 HPLC-UV-MS 法对密花石斛进行指纹图谱研究，标示了9个共有峰，对其部分色谱峰
.
《中国医疗器械信息》2007年第13卷第7期 Vol.13 No.7
技术报告
T echnology Report
芦荟大黄素等。此外，他们[4]还采用 HPLC-UV-MS 法对忍冬和山银花药材进行指纹图谱的研究，确认了忍
冬指纹图谱中的8个色谱峰(熊果酸、绿原酸、十三烷酸、香芥酚、corymbosin 、3-甲基-4-羟基肉桂酸、异绿原
酸、丁香酚等)和山银花图谱中的5个色谱峰(绿原酸、香芥酚、丁香酚、异绿原酸、咖啡酸等)，并比较了2种药材指纹图谱的差异。李松林[5]等应用 HPLC-DAD-MS 联用技术测定四川GAP 示范基地3个公司的9个川芍样品，结果有21个共有峰，通过参考文献资料鉴定l1个色谱峰对应之化合物：阿魏酸、川芎酽内酯Ⅰ和H 、Coniferylferulate 、藁本内酯等。所建立的液相色谱指纹谱特征性和专属性强，可作为川芎药材内在质量控制的有效方法 。余静[5]等采用 HPLC-UV-MS 法分别对刺五加药材水溶性和脂溶性成分进行指纹图谱研究，并分别对水溶性成分指纹谱中5个色谱峰和脂溶性成分指纹图谱中8个色谱峰进行了初步定性。根
据化合物的质荷比、提取离子色谱(EIC)以及相关文献，对图中主要色谱峰进行了初步归属，主要成分为丁香苷、绿原酸、异绿原酸、咖啡酸、刺五加苷Bl 、芥子醛等。两张指纹图谱相互补充，为剌五加药材的相关研究提供了较全面的参考。
由于中药复方制剂成分复杂，现行的各种单一测
定法提供的信息量少，无法建立较完善的指纹图谱，因此有人提出建立多维指纹谱尝试解决该问题。其建立既能较系统、完整地解决中药复方制剂质量控制难题，又可为中药研究中缺乏标准品的难题提供一种新的解决途径[6]。
马欣[7]等应用HPLC-DVD-MS2法建立了银杏叶提取物的多维指纹图谱，同时建立了质谱总离子流(TIC)指纹图谱，检测了银杏叶中四种有效成分(黄酮和内酯类化合物)。样品经前处理后，应用Agilent
HPLC 色谱条件和 API-ES-MS 条件分析了法国、香港、山东等10个厂家样品。结果提取物的HPLC 有33个峰，MS 总离子流有51个峰。并以芦丁为参照物，计算了
样品的相似度。戴德舜[8,9]等在研究桂枝汤指纹图谱时，采用HPLC-MS-MS 等法对其中具有双向调节作用的A 部分、5种单味药A 部分及各单味药按收率和组方用
量配比制得的A 部分进行指纹图谱测定，并将其阐述为多维全息化学特征谱，对桂枝汤A 部分产生双向调节作用的物质基础作了初步讨论，说明多维化学特征
谱提供的大量信息可较好地反映复方及单味药物信息，所显示的各项参数如能配合一定指标的成分信息，将
成为复方质量控制的有效指标，并可在一定程度上作为药效特征的有力佐证。
多维指纹图谱专属性强，因为对中药中某成分有保留时间、UV 图谱、相对分子量和特征碎片4种信息，为中药研究中缺乏对照品提高了可能性。
3 在中药结构鉴定中的应用
采用HPLC-MS 联用技术，在对未知成分的研究中，质谱检测器可以给出大量的结构信息，结合同类已知结构化合物的裂解规律，或结合其它检测方法，即可对未知成分结构进行直接分析。
卢定强等[10]用HPLC-ESI-MS 法分析银杏叶中银杏萜内酯的成分和含量，鉴别出白果内酯和银杏内酯A ，B ，C ，J 。孙秀燕等[11]采用 HPLC-MS 联用仪，ESP-IT-MS 对滨蒿中利胆保肝活性成分进行了分离和结构鉴定，鉴定出滨蒿中的利胆有效成分除含有绿原酸、对羟基苯乙酮、6，7-二甲氧基香豆素外，还首次分离鉴定出具有保肝活性的茵陈色原酮。Miketova 等
[12] 利用 HPLC-ESI-MS 技术对绿茶提取物直接进行分析，结合不同化合物的相对分子质量和保留时间信息，可对所含的儿茶酸类进行有效鉴定。He 等[13]同时利用 HPLC-MS 和 HPLC-DAD 成功地对姜的辛辣成分与含油树脂提取物进行了成分分析，根据紫外吸收光谱和质谱结果，成功地鉴定了其中7个化合物结构，并分析推测了其他2个未知成分的结构。Ndjoko 等[14]利用 HPLC-TSP-MS 并结合 HPLC-TSP-MS-MS 方法对大麻树脂提取物中的大麻酚类进行定性分析，在3
份不同的大麻树脂提取物样品中，共鉴定分析了Δ9 THC(m/z3l5)等l1个成分。Fuzzati 等[15]利用 HPLC-MS 直接分析了人参根提取物中含有的人参皂苷，共检
测到25种人参皂苷，获得人参皂苷所连的糖基和苷元结构。Wolfender 等[16]分别对热喷雾接口、恒流快原子轰击接口和ESI 接口技术，对提取物进行HPLC–MS
《中国医疗器械信息》年第13卷第7期 Vol.13 No.7
技术报告T echnology Report
分析的应用研究中，认为HPLC-TSP-MS适用于中等极性的化合物，如多酚类，萜类化合物；恒流快原子轰击接口及ESI接口更适合于分析相对分子质量和极性较大的化合物。由于粗提物中通常含有不同类型的化合物，应用不同类型的离子化方式对其进行分析，以取各组分完整的信息。
4 在中药定量分析中的应用
HPLC-MS与多级反应监测技术结合可进行天然药物提取物中成分的定量分析。其具有高灵敏度、高选择性，适用于对热不稳定化合物的分析等特点。
徐智秀[17]等采用惠普公司Hypersil ODS色谱柱，以乙腈一水梯度洗脱,分离出9种人参皂甙，用二极管阵列检测器检测并在202nm下提取色谱图。利用三极四极质谱研究了9种人参皂甙的一级质谱和二级质谱，采用内标、外标法对人参皂甙进行了定量分析。Chauvaux等[18]用HPLC-ESI-MS-MS 对植物组织中微量成分氨基环丙烷羧酸进行了定量分析，并对烟草的根、茎、叶提取物中的氨基环丙烷羧酸进行了定量分析。由于测定方法的高度特异性，测定内源性的氨基环丙烷羧酸不需提纯。尽管样品的成分非常复杂，色谱条件仍可优化至被分析成分与干扰成分很好地分离，并能l2min内完成分析测试。
5 小结
目前，HPIC-MS联用技术飞速发展，已成为一种常规的应用技术。HPLC-MS以其灵敏、快速的特点，在对含量低、不易分离得到或缺乏特征紫外吸收的物质的分析中显示了独特的优势，这决定了它在中药成分分析中具有广阔的应用前景。随着这一技术的进一步发展与普及，必将大大加快我国中药现代化的研究进程。
参考文献
[1] 张志斐.高效液相色谱-质谱联用技术在药学研究中的
应用.河北医科大学学报[J],2005,3 (26) :226-229
[2] 王绪明等.高效液相色谱及其联用技术在药物分
析中的应用新进展.解放军药学学报[J],2004,6
(20):457-459
[3] 张尊建等.密花石斛的HPLC/UV/MS指纹图谱研究[J].
中草药,2004,35(4):393-395
[4] 张尊建等.忍冬、山银花HPLC/UV/MS指纹图谱研究
[J].中成药,2003,25(11):863-865
[5] 余静等.刺五加HPLC/UV/MS指纹图谱研究[J].中国药
科大学学报,2003,34(2):148-150
[6] 杨秀岭等.色谱联用技术在中药研究领域的应用[J].中
国药房,2006,1(17):62-64
[7] 马欣等.银杏叶提取物的多维指纹图谱的研究[J].色
谱,2003,21(6):562
[8] 戴德舜等.桂枝汤A部分指纹图谱的确定及比较(一)[J].
中国实验方剂学杂志,2001,7(2):1
[9] 曹进等. 桂枝汤A部分指纹图谱的确定及比较(二)[J].
中国实验方剂学杂志,2001,7(3):1
[10] 卢定强等.银杏叶中银杏萜内酯的高效液相色谱-电喷
雾电离-质谱分析[J].药物分析杂志,2002,22(1):9-11 [11] 孙秀燕等.用液相色谱-质谱联用法测定滨蒿中的茵陈
色原酮[J].沈阳药科大学学报,2000,17(2):110-113 [12] M i k e t o b v a P, S c h r a m K H, W h i t n e y J L, e t a l.
Mass spectrometry of selected components of biologibal interest in green tea extracts[J].J Nat Prod,1998,64(4):461-467
[13] He XG, Bernart M,lian L, et al.High-performance liquid
chromatography-electrospray mass spectrometric analysis of pungent constituents of ginger[J].J Chromatogr A, 1998,796(2):327-334
[14] Ndjoko K, Wolfender JL, Hostettmann K.Analysis of
cannabionoids by liquid chromatography-thermospray mass spectrometry[J]. Chromatographia, 1998, 47(12) :72-76 [15] F u z z a t i N,G a b e t t a B,J a y a k a r K,e t a l.L i q u i d
chromatography-electrospray mass spectrometric identi fi cation of ginsenosides in Panax ginseng roots[J].J Chromatoger A. 1999,854(12):69-79
[16] Wolfender JL,Rodriguez S, Hostettmann K.Liquid
chromatrometry coupled to mass spectrometry for the screening of plant constituents[J].J Chromatogr A,1998,794(12):299-316
[17] 徐智秀等.高效液相色谱-质谱-质谱法分析人参皂
甙.色谱[J].2000,6(18):521-524
[18] Chauvaux N,Van DW, Esmans EL, et al.Quantitative
analysis of 1-aminocyclopropane-1-carboxyhc acid by liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry[J]. J Chromatogr A,1997,775(12):143-150 ■
.