第十四、二十一章基因工程、分子生物学常用技术段里原理及其应用
复习测试
（一)名词解释
１.DNA重组
2.基因工程
3.限制性核酸内切酶
４．基因组ＤＮA文库
5.ｃDＮA文库
6.聚合酶链反应（ＰCＲ）
７。载体
8。转化
9．感染
10。核酸分子杂交
1１。Ｓouthern印迹杂交
１2.Nｏrthern印迹杂交
13。斑点印迹
1４.原位杂交
15。DNA芯片
1６。基因诊断
１7.基因治疗
(二)选择题
A型题:
1．限制性核酸内切酶作用特点不包括：
Ａ。在对称序列处切开ＤNA
B.ＤＮＡ两链得切点常不在同一位点
Ｃ。酶切后产生得DNA片段多半具有粘性互补末端
D．DNA两链得切点常在同一位点
E。酶辨认得碱基一般为4~６个
2。限制性核酸内切酶：
A。可将单链ＤNA任意切断
B．可将双链ＤNA序列特异切开
Ｃ。可将两个DＮA分子连接起来
D．不受ＤNA甲基化影响
E．由噬菌体提取而得
３。ｃDＮA文库包括该种生物得:
Ａ．某些蛋白质得结构基因
Ｂ。所有基因组
C。结构基因与不表达得调控区
D．内含子与调节区
E。内含子与外显子
4。下列关于建立cDＮA文库得叙述哪项就是错误得:
Ａ。从特定组织或细胞中提取mＲNA
B。将特定细胞得DNＡ用限制性核酸内切酶切割后,克隆到噬菌体或质粒中
C.用逆转录酶合成mRNA得对应单股ＤＮA
D。用DＮA聚合酶,以单股DNA为模板合成双链DNA
Ｅ。加S－腺苷甲硫氨酸(SＡM),以使新生得DNA双链甲基化5。限制性核酸内切酶得通常识别序列就是：
A。粘性末端
B。ＲＮＡ聚合酶附着点
C.回文对称序列
Ｄ。聚腺苷酸
E。甲基化“帽＂结构
6。pUC系列就是指：
A。经人工改造得大肠杆菌质粒
B.天然得大肠杆菌质粒
Ｃ．天然得酵母质粒
D．经人工改造得大肠杆菌噬菌体
E．经人工改造得酵母质粒
7。用于转染哺乳类细胞得常用载体就是：
A.质粒
B。噬菌体
Ｃ。逆转录病毒ＲＮA
D。结构基因
Ｅ。乳糖操纵子
8.转化常指:
A.噬菌体感染
Ｂ。基因得转位
C.摄取外来DＮＡ,引起细胞生物学类型得改变
D。产生点突变
E．产生移码突变
９．基因工程得操作程序可简单地概括为:
Ａ。载体与目得基因得分离、提纯与鉴定
B。分、切、接、转、筛
C。将重组体导入宿主细胞,筛选出含目得基因得菌株
D．将载体与目得基因接合成重组体
E.限制性核酸内切酶得应用
10．用于基因治疗较为理想得载体就是：
A.质粒
B。噬菌体
Ｃ．经改造得逆转录病毒
Ｄ.人类DＮA
E。酵母质粒
11。常用质粒有以下特性:
A。就是线形双链ＤNA
Ｂ。插入片段得容量比λ噬菌体DNA大
Ｃ.含有抗生素抗性基因
Ｄ。含有同一限制性核酸内切酶得多个切口
Ｅ。不随细菌繁殖而进行自我复制
12.在重组体中切出插入片段最常用得方法就是：
Ａ。以重组时所用限制性核酸内切酶将其切出
B．用其它限制性酶将其切出
Ｃ．用Ｓ1核酸酶将其切出
D。用DNA酶将切出
E.用多种限制性内切酶将其切出
13。利用ＰCR扩增特异ＤNＡ序列主要原理之一就是:
A．反应体系内存在特异DNA片段
B．反应体系内存在特异RＮA片段
C。反应体系内存在特异ＤＮA引物
D.反应体系内存在特异RＮA引物
E.反应体系内存在得TaqDNA聚合酶具有识别特异DNA序列得作用
14。表达人类蛋白质得最理想得细胞体系就是:
A.大肠杆菌表达体系
B.原核表达体系
C．酵母表达体系
D。昆虫表达体系
E.哺乳类细胞表达体系
１5。限制性核酸内切酶切割ＤNA后产生:
Ａ。３′—磷酸基末端与5′—羟基末端
B。5′—磷酸基末端与3′-羟基末端
Ｃ．３′-磷酸基末端与5′-磷酸基末端
Ｄ。5′－羟基末端与3′—羟基末端
E.3′—羟基末端与5′-羟基末端及磷酸
16。下列描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性得就是：
A.小型环状双链DＮA分子
B。携带有某些抗生素抗性基因
C。在细胞分裂时恒定地传给子代细胞
D.具有自我复制功能
E.获得目得基因
17。在分子生物学领域分子克隆主要就是指:
A.DNA得大量复制
B.DNA得大量转录
C。DNＡ得大量剪切
D.RNＡ得大量剪切
E。RNA得大量反转录
18。在分子生物学领域重组DNA技术又称：
A.酶工程
B。蛋白质工程
Ｃ.细胞工程
D。发酵工程
E。分子克隆技术
１9.在重组DNA技术中不涉及得酶就是:
A。限制性核酸内切酶
B。DNA聚合酶
Ｃ．DNA连接酶
D.反转录酶
E。DＮA解链酶
20。多数限制性核酸内切酶切割后得DＮA末端为：
A.平端末端
Ｂ.3′突出末端
C.5′突出末端
D.粘性末端
Ｅ。缺口末端
21。可识别DＮA得特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DＮA得一类酶为: A。限制性核酸外切酶
B。限制性核酸内切酶
C。非限制性核酸外切酶
Ｄ．非限制性核酸内切酶
Ｅ。DＮA内切酶
2２。cDＮA就是指：
A。在体外经反转录合成得与RNA互补得DNA
B。在体外经反转录合成得与ＤNA互补得DＮＡ
Ｃ。在体外经转录合成得与DＮA互补得RNA
D.在体外经反转录合成得与RNA互补得RNA
E.在体外经反转录合成得与DNA互补得RNA
23.基因组代表一个细胞或生物体得:
A。部分遗传信息
B.整套遗传信息
C.可转录基因
Ｄ.非转录基因
E．可表达基因
2４。在基因工程中通常所用得质粒存在于：
A.细菌染色体
B．酵母染色体
C.细菌染色体外
D．酵母染色体外
E。病毒DNA外
25.就分子结构而论质粒就是：
Ａ.环状双链ＤNA分子
Ｂ。环状单链DＮA分子
C。环状双链ＲＮA分子
D.线状双链DＮA分子
Ｅ。线状单链DＮＡ分子
２６。聚合酶链式反应可表示为:
A。PEC
B。PＥR
C。PDＲ
D。BCR
Ｅ。PCR
２７。在已知序列信息得情况下,获取目得基因得最方便方法就是:
A。化学合成法
B。基因组文库法
Ｃ.ｃDＮA文库法
D。PCR
E．差异显示法
2８.重组DNＡ得基本构建过程就是将:
A.任意两段DＮA接在一起
B。外源ＤNA接入人体DNA
C。外源基因插入宿主基因
Ｄ。目得基因接入适当载体
Ｅ.目得基因接入哺乳类DNA
29．EcoＲⅠ切割DＮＡ双链产生:
A。平端
Ｂ。5′突出粘端
C.３′突出粘端
Ｄ。钝性末端
Ｅ。配伍末端
３0.催化PＣＲ得酶就是:
A.DNA连接酶
B．反转录酶
Ｃ.末端转移酶
D.碱性磷酸酶
Ｅ．ＴaqDNA聚合酶
31。将PsｔⅠ内切酶切割后得目得基因与用相同内切酶切割后得载体ＤＮA连接属: Ａ．同聚物加尾连接
Ｂ。人工接头连接
Ｃ.平端连接
Ｄ。粘性末端连接
E。非粘性末端连接
3２。重组ＤNA技术中实现目得基因与载体ＤＮA拼接得酶就是:
Ａ。DＮＡ聚合酶
B。ＲNＡ聚合酶
C.DNＡ连接酶
D.RＮA连接酶
E。限制性核酸内切酶
33.以质粒为载体，将外源基因导入受体菌得过程称：
Ａ.转化
B．转染
C.感染
D.转导
Ｅ.转位
3４。最常用得筛选转化细菌就是否含重组质粒得方法就是:
A。营养互补筛选
B.抗药性筛选
C.免疫化学筛选
D.PCR筛选
E。分子杂交筛选
３5.α互补筛选法属于:
A。抗药性标志筛选
B.酶联免疫筛选
Ｃ.标志补救筛选
Ｄ.原位杂交筛选
E．免疫化学筛选
36。下列常用于原核表达体系得就是：
A。酵母细胞
B.昆虫细胞
C.哺乳类细胞
D.真菌
E.大肠杆菌
37。在对目得基因与载体DNA进行同聚物加尾时，需采用:
A。反转录酶
Ｂ。多聚核苷酸激酶
C。引物酶
D.RNＡ聚合酶
E。末端转移酶
3８.在分子生物学领域分子克隆专指：
A。细胞克隆
B.RＮA克隆
Ｃ．DNA克隆
D.抗体克隆
E.ｍＲNA克隆
39.用于重组DNA 得限制性核酸内切酶，识别核苷酸序列得:
A。正超螺旋结构
Ｂ。负超螺旋结构
C．α螺旋结构
Ｄ。回文结构
E．锌指结构
40.在基因工程中通常所用得质粒就是:
A.细菌染色体ＤNA
Ｂ。细菌染色体以外得DNA
C。病毒染色体DＮA
D。病毒染色体以外ＤNＡ
E。噬菌体DNA
4１.构建基因组DNA文库时，首先需要分离细胞得：
A。染色体ＤNA
Ｂ.线粒体DNA
C。总mRNA
D.tＲNA
E。ｒＲNA
4２.DNA连接酶就是从T４噬菌体感染大肠杆菌中分离得，这种连接酶:
Ａ.只能催化平末端连接，而不能催化粘性末端连接
B．即能催化单链ＤＮＡ连接又能催化粘性末端双链DNA连接
C.双链DNA中不需一条完整得单链
D。单链中得切口位点可缺少几个核苷酸
Ｅ。切口存在相邻得５′—磷酸与3′-羟基末端，使其以磷酸二酯键连接43。末端转移酶就是合成酶类:
A。作用时不需模板
Ｂ。就是从小牛胸腺中分离
C．能催化单链核苷酸转移到5′-磷酸上
Ｄ．需要带有5′—端磷酸得末端得sｓDＮA
E.需要有延伸5′-端磷酸得末端dｓDNＡ
４4。在基因工程中可用碱性磷酸酶:
A。防止DNA得自身环化
B。同多核苷酸激酶一起进行ＤNA３′-羟基末端标记
C。制备突出得3′-末端
Ｄ.特异切除DNA或ＲＮA得3′—末端羟基
E。水解特异得核苷酸片段
45.以下哪种酶作用时需要引物:
A。限制性核酸内切酶
B.末端转移酶
C。反转录酶
D.DNA连接酶
E.碱性磷酸酶
46。Ｓ1核酸酶得功能就是:
A。切割双链得DNA
B。切割单链得ＲNA
C。切割发夹环
D。切割单链ＤNＡ
E.以上有两项就是正确得
47.在ｃDNA技术中所形成得发夹环可用：
A.限制性核酸内切酶切除
B.用3′外切酶切除
C.用S1核酸酶切除
D。用5′外切酶切除
E。碱性磷酸酶切除
48.下面有关限制性内切酶得叙述正确得就是：
Ａ.限制酶就是外切酶而不就是内切酶
B．限制酶在特异序列(识别位点）对DＮＡ进行切割
C.同一种限制酶切割DNA时留下得末端序列总就是相同得
D。一些限制酶在识别位点稍有不同得点切割双链DNＡ，产生粘性末端
Ｅ。一些限制酶在识别位点相同得位置切割双链ＤNＡ,产生平末端49．限制性核酸内切酶可以特异识别:
Ａ.双链DNA得特定碱基对
B.双链DNＡ得特定碱基序列
C.特定得三联码
D.双链RＮA得特定碱基序列
Ｅ.双链RNA得特定碱基对
50.DNA聚合酶得主要用途:
A．利用它得３′→5′聚合活性,合成ｄs—ＤNA第二条链Ｂ。对DNA得5′—端进行填补或末端标记
C．大肠杆菌ＤＮＡ聚合酶Ⅲ用于缺口平移,制作ＤNA标志探针
D.ＤNA聚合酶Ⅱ可用于ＤNA测序
E。TａqDNA聚合酶用于PCR
51.反转录酶:
A.就是依赖于DNA得RＮA聚合酶
Ｂ。用于真核DNA反转录生成mRNA
C。用于RNA探针得制备
Ｄ。用于RＮA序列测定
E．就是依赖于ＲNＡ得DＮA聚合酶
52。基因工程中作为载体应具备以下特点:
A．能在宿主细胞中复制繁殖
Ｂ。容易进入宿主细胞
C。具有多克隆位点
D。容易从宿主细胞中分离出来
E．以上均就是
５３。下列哪种克隆载体对外源DNA得容载量最大:
Ａ。质粒
B.粘粒
C.酵母人工染色体
Ｄ。λ噬菌体
E。ｃDNA表达载体
５4。ｐUC就是一种改造型质粒,含有:
Ａ。乳糖操纵子调节基因、启动子
B。多克隆位点
Ｃ。lａcZ′基因
D。氨苄青霉素抗性基因
Ｅ。以上均有
55.质粒具有以下特点:
A。就是位于细菌染色体外得RNA
B.不能自主复制
Ｃ。为单链环形DNA
D．大小在2～3０0ｋb之间
E。以上都不对
56。粘粒就是一种人工建造得载体不具有以下特点：
A。可借coｓ位点将多个粘粒串联成大环
B。本身约4～6kｂ之间
Ｃ.进入受体细胞后可进行复制
Ｄ。可克隆ＤNA大片段
E。以上都不就是
5７.下面关于多克隆位点得描述不正确得就是:
A。仅位于质粒载体中
Ｂ。具有多种限制性内切酶识别得位点
C。不同酶得识别序列可以重叠
D。一般就是人工合成后添加到载体中
E.可位于不同载体中
5８。下列筛选重组体得方法中不属于遗传学方法得就是:
A.限制性内切酶图谱法
Ｂ。PCＲ
C。Northerｎ印迹法
D.Sｏuｔheｒn印迹法
E。抗药性标记基因
5９.利用基因工程可以进行:
A。建立染色体基因文库
B。分析基因得结构与功能
C。疾病得发生、发展及治疗得分子机制
D．疾病得诊断与基因治疗
Ｅ.以上均可以
6０.Souｔherｎ印迹得ＤＮA探针杂交:
A.只与序列完全相同得RNA片段
Ｂ.可与任何含有相同序列得ＤNA片段
Ｃ.可与任何含有互补序列得DNA片段
D。可与用某些限制性核酸内切酶切成得DＮA片段
E。只与含有互补序列得RNA片段
61。下列哪个不就是Sｏuｔｈeｒn印迹法得步骤:
A。用限制性核酸内切酶消化DNA
Ｂ．ＤNA与载体连接
C。用凝胶电泳分离DNA片段
D.DNA片段转移至硝酸纤维素膜上
Ｅ.用一个标记得探针与膜杂交
6２。下列哪个不就是Nｏｒthｅrn印迹法得步骤：
A。从细胞与组织中提取RNA
Ｂ.用凝胶电泳分离ＲNA
Ｃ。将ＲNＡ转移到支持物上
D.与核酸探针进行杂交
E。将RNA反转录合成DNA
63。原位杂交具有以下特点：
A。不需从组织或细胞中提取核酸
B。对靶序列有很高得灵敏度
C。可完整保护组织与细胞得形态
D。准确反映出组织细胞得相互关系及功能状态
E。以上均就是
64。下列哪项不就是探针得特点:
A.要加以标记
B.应就是双链DNA
C.只与靶核酸序列杂交
D。探针长度可以就是十几个碱基到几千个碱基不等
E.高灵敏度
６5.探针得种类包括：
A。基因组DNＡ探针
B。cDNA探针
Ｃ.寡核苷酸探针
Ｄ．ＲNA探针
Ｅ。以上均就是
６６。下面哪一步不就是获得基因组DNA探针得步骤： A。从基因组文库筛选得到特定基因
B。克隆、扩增
C。纯化
Ｄ。连入表达载体
Ｅ．切取插入片段
67.ＲNA探针具有以下特点，但除外：
A．采用反转录方法可以得到
B.单链、杂交效率高
C。杂交体系稳定
D。不存在高度重复序列
Ｅ。特异性高
68。下面哪一步不就是cDNA探针得步骤:
A。从相应组织细胞直接中分离特异得cDNA
B．从相应组织细胞中分离特异得ｍRNA
C。反转录合成cDNA
D。与载体连接
E．切割cDNＡ，分离纯化
69。常用得标记物有,但除外：
A.放射性核素
B。生物素
C。荧光素
D。地高辛
E。NTP
70.用于标记核酸探针得放射性核素主要有,但除外:
A。32P
B。3５S
C。3H
Ｄ.125I
E.１4Ｃ
７1。放射性核素标记物具有,但除外:
Ａ．检测时间短
Ｂ.灵敏度与特异性高
C.可检出样品少于1００0个分子得核酸量
D。半衰期短,稳定性差
E。污染环境
72.非放射性核素标记物包括,但除外:
A.生物素
B。地高辛
C．荧光素
D．酶
E。核酸
73.非放射性核素标记物具有,但除外:
A.灵敏度高于放射性核素
B。稳定
C.经济
D。实验周期短
E.安全、无污染
７４。PCR反应体系包括，但除外:
A．基因组DNA（模板)
Ｂ。引物
C。dNＴＰ
D。TaqＤNA聚合酶
Ｅ．T4DNA连接酶
７５．PCR技术主要应用于：
A.目得基因得克隆
B。基因表达与调控
Ｃ。DＮＡ微量分析
D.遗传病与传染性疾病得诊断
E．以上均可以
7６.以DＮA为模板得ＰＣR反应,具备以下条件:
A。反应体系一般选用50-100μl
B。引物、TaｑDNＡ聚合酶
C.4种dＮTP、模板DNＡ
Ｄ。缓冲液
E.以上均就是
77。以ｍRNA为模板得PCＲ反应，具备以下条件：
A.需将mRNA反转录生成cDＮA
B。反应体系一般选用2０μl体积、4种dNTＰ、引物
C.需要RNA酶抑制剂、反转录酶
D。TaqＤＮA聚合酶
E．以上均就是
78。关于ＰCＲ停滞得原因,取决于很多因素,但除外：
Ａ.样品模板得拷贝数
B.ＰCＲ扩增效率
Ｃ.ＤNA酶种类及活性
D.dNTＰ得大量消耗
Ｅ．非特异性得竞争因素
79。用于核酸分子杂交得探针可以就是放射性核素标记得: A．核糖体
B.RNA
C。抗体
D.抗原
E。以上都不就是
8０。Ｓoｕｔｈern印迹就是用DNA探针检测ＤNA片段，而Nortｈeｒn印迹则就是: Ａ。用ＲNA探针检测DNＡ片段
Ｂ。用RNＡ探针检测RNA片段
C.用ＤNA探针检测RＮA片段
D.用RＮA探针检测蛋白片段
E．用DNA探针检测蛋白片段
81.用免疫化学筛选重组体得原理就是:
A。根据外源基因得表达
Ｂ．根据载体基因得表达
Ｃ。根据mRNA与ＤNA得杂交
D。根据DNA与ＤNA得杂交
Ｅ。根据ＲNA与RＮA得杂交
８2。原位杂交包括:
A．转膜杂交
Ｂ。斑点杂交
C。菌落杂交或噬菌斑杂交
Ｄ。直接对染色体或组织得杂交
E。以上均有
８3。外源性DNA进入菌体得方式就是:
Ａ．转化
B。转录
C.翻译
D.半保留复制
E.以上都不就是
84。要将无粘性末端得两种平端DNA片段结合在一起,可在：
Ａ.两种片段上都接上聚（dT)尾部
Ｂ．一种片段接聚（ｄＴ）尾部,另一种接聚(dA)尾部
C.两种片段都接上聚（ｄA)尾部
D.反应液中加以T4DNA连接酶
E.有两项就是对得
85。用原核生物表达真核生物得基因存在得问题就是:
A.大肠细菌只能表达克隆得cDＮA
Ｂ.细菌不能切除原始转录物中相当于内含子得核苷酸序列
C。缺乏翻译后加工机制
D．表达得蛋白质常形成不溶性包涵体
Ｅ.以上都正确
8６。常用载体有：
A．质粒
B．噬菌体
C.病毒DNA
Ｄ。大肠杆菌基因组DＮA
E.有3项就是正确得
87.构建cDNA文库时，首先需分离细胞得:
Ａ。染色体DNＡ
B.线粒体DNＡ
C.总mRNA
Ｄ。tRNA
E．rＲNA
88．构建DNA文库时，首先需分离细胞得:
Ａ。染色体DＮＡ
B.线粒体DNＡ
Ｃ。总mRNA
D。tRNA
E。rＲNA
89.设计PＣＲ得引物时,应考虑引物与模板得:
Ａ。5ˊ端特定序列互补
B.5ˊ端任意序列互补
C.３ˊ端特定序列互补
D.3ˊ端任意序列互补
E。中间序列互补
90.用于鉴定转化子细胞就是否含重组DＮA得最常用方法就是：
A。抗药性选择
B．分子杂交选择
C.RNA反转录
Ｄ.免疫学方法
E.体外翻译
9１。下列哪一步就是DNA芯片技术得最关键得环节: Ａ。样品得准备与标记
B。芯片得制备
C。信号得检测
D．数据分析处理
E。杂交
92。基因诊断常用得技术方法有:
A.核酸分子杂交
B。单链构象多态性分析
C。DNＡ序列测定
Ｄ．ＤNA芯片技术
E。以上均就是
B型题：
Ａ.基因从原来位置转到基因组得另一位置
B。噬菌体或病毒DNＡ进入细胞中繁殖
C。外来DNＡ引起细胞生物学特性得改变
D.移码突变
E。非移码突变
１。感染就是指:
２。转化就是指:
3。转位就是指:
4.结构基因中3个核苷酸得插入或丢失就是指：
５。结构基因中1个核苷酸得插入或丢失就是指:
A。抗药性选择
B.分子杂交选择
C。RNA转录
Ｄ。免疫学方法
E。体外翻译
6.用于鉴定就是否有质粒转入受体菌得一般方法就是：
7。用于鉴定转化子细胞就是否含目得基因得常用方法:
8。利用目得基因表达产物得特异抗体来筛选含目得基因得转化子细胞得方法就是: A。限制性核酸内切酶
Ｂ。DNＡ连接酶
C。反转录酶
Ｄ．ＴaqDNA聚合酶
E．碱性磷酸酶
9。识别DNA回文结构并对其双链进行切割得就是:
10.用于聚合酶链式反应得就是:
11.将目得基因与载体DＮA进行连接得酶就是:
１2.特异切除DＮA或RＮA5ˊ端磷酸得酶就是：
13。mRNA转录合成cDＮA得酶就是：
Ａ.支原体
B.衣原体
C．噬菌体
D.细菌
E．酵母
14.常用作原核表达体系得就是：
1５。常用作真核表达体系得就是：
A。基因组文库
Ｂ。cDＮＡ文库
Ｃ．ｍRNＡ文库
D.tＲNA文库
Ｅ.rRNA文库
1６。分离细胞染色体可制备：
１7。分离细胞总mRNA可制备：
A．抗药性选择
B.RNA反转录
C.免疫化学方法
D．体外翻译
Ｅ。PCR
１８。对重组体内基因进行直接选择得方法就是:
19。通过鉴定基因表达产物筛选重组体得方法就是:
A．RＮA聚合酶
B.末端转移酶
C.碱性磷酸酶
Ｄ。反转录酶
E。核苷酸酶
20。切除DNA末端磷酸基需要用:
2１.在ＤNＡ3′羟基末端进行同聚物加尾需要用：
22.合成cDＮA需要用：
Ａ。同聚物加尾连接
B。人工接头
C。粘性末端连接
Ｄ。缺口末端连接
E。平端连接
２３．外源基因与载体DNA经限制性酶切后得连接属于：
24。在外源基因与载体DNA末端添加同聚物序列后再进行连接属于:
２5．在外源基因与载体DＮＡ末端添加短核苷酸序列,人为制造粘性末端再进行连接属于：
26。需用适当得酶将DNＡ突出末端削平或补齐得连接属于:
A.将单链ＤＮA任意切断
B。将双链DＮＡ序列特异切开
Ｃ。将两个DＮA分子连接起来
D。将缺口末端连接
E。切除DＮＡ末端磷酸基团
27.限制性内切酶得作用就是:
2８．ＤNA连接酶作用就是:
29.碱性磷酸酶作用就是：
A。某些蛋白质得结构基因
B.所有基因结构
C。不表达得调控区
D.内含子与调节区
E。外显子与调节区
30。cDNA文库包括:
31。DＮA文库包括:
32。真核mRNＡ包括:
A．DNＡ聚合酶
B．RNA聚合酶
C。DＮA连接酶
Ｄ。RNA连接酶
E。限制性核酸内切酶
33．切除特异DNA片段：
34.连接两个DNA片段：
35。大量扩增DNA片段:
A。反转录酶
B.多聚核苷酸激酶
Ｃ。引物酶
D。RＮA聚合酶
Ｅ。末端转移酶
３６。催化AＴＰ得磷酸转移到DＮA或ＲNA得5ˊ端羟基上:
37.催化单核苷酸转移到DNA得3ˊ端羟基上:
38。合成cＤNA：
(三)问答题
1．简述基因工程得主要过程。
2．什么就是载体？可分为几类？它们各有什么特点？
3．ｐUC质粒有何特点?
4．采用哪些方法可获取目得基因?
5．目得基因与载体得连接有哪几种方法?简述其各特点?
6．重组体主要有哪些筛选与鉴定方法?
7．分子杂交得基本原理就是什么?有哪些基本得方法？
8．简述标记核酸得核素与非核素有哪几种？各自有何特点？
9．何为PCR?简述其基本原理。
10。ＤNA芯片技术得基本原理及其应用.
参考答案
(一)名词解释
1.不同来源得ＤNA分子可以通过末端共价连接(磷酸二酯键)而形成重新组合得ＤNＡ分子，这一过程称为DNA重组。
2.利用重组DＮＡ技术将目得DNＡ片段与载体DNA连接并导人宿主细胞，在受体细胞中复制、扩增、以获得单一DNA分子得大量拷贝。这种含有单一DNA重组体得无性系称为克隆.其中,将基因进行克隆，并利用克隆得基因表达、制备特定得蛋白或多肽产物,或定向改造细胞乃至生物个体得特性所用得方法及相关得工作统称为基因工程。
３。能够切割DＮA多聚核苷酸链中磷酸二酯键得酶称为核酸酶,其中有选择地切割DNA 分子特异序列得核酸酶，称为限制性核酸内切酶，简称限制性酶。
4。采用限制性酶将基因组DＮA切成片段,每一DＮA片段都与一个载体分子拼接成重组DNA.将所有得重组ＤNA分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到分子克隆得混合体,这样一个混合体称为基因文库.
5。ｍRNＡ为模板,经反转录酶催化合成cＤNA ，将cＤＮA得混合体与载体进行连接,使每一个cDＮＡ分子都与一个载体分子拼接成重组ＤＮA。将所有得重组DＮA分子都引入宿主细胞并进行扩增,得到分子克隆得混合体,这样一个混合体就称为cＤNＡ文库.
6.PCR又称基因体外扩增特定序列方法。就是在反应体系中加入模板DNA、ｄNTP、特定设计得引物及耐热得DNA聚合酶，经多次变性、退火、延伸循环反应,使目得DNA呈指数形式合成得过程。
7.就是携带外源基因,实现外源基因得扩增或表达所采用得DNA分子。常用克隆载体有质粒DNＡ、噬菌体DNA、粘粒DNA、病毒DNA等。
８。指将质粒或其它外源DNA导入处于感受态得宿主细胞,并使其获得新得表型得过程。转化常用得宿主细胞就是大肠杆菌。
９。以噬菌体进入宿主菌、病毒进入宿主细胞中繁殖称为感染。用人工改造得噬菌体或病毒作为载体以其ＤNA与目得序列重组后,在体外用噬菌体或病毒得外壳,将重组DNＡ包装成有活力得噬菌体或病毒，就能以感染得方式进入宿主细菌或细胞。
10。核酸分子杂交就是依据两条核酸单链之间碱基互补、变性与复性得原理,用已知碱基序列得单链核苷酸片段作为探针,检测待测样品中就是否存在与其互补得同源核苷酸序列得方法。
１1.指DNA与DNA得杂交,将经限制性内切酶消化与变性后电泳分离得待测DNA片段转印并结合到一定得固相支持物上,然后与标记得DNA探针杂交。
１2。指将待测ＲNＡ样品经电泳分离后转移到固相支持物上,然后与标记得核酸探针进行杂交,检测RＮＡ(主要就是mRNA）得方法.其基本原理与基本过程与Southern印迹杂交基本相同。
１3.将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上,再与探针杂交,称为斑点
印迹杂交。
１4.核酸保持在细胞或组织切片中，经适当方法处理细胞或组织后，将标记得核酸探针
与细胞或组织中得核酸进行杂交,称为原位杂交.原位杂交不需要从组织或细胞中提取核酸,对
组织中含量极低得靶序列有很高得灵敏度,并可完整地保持组织与细胞得形态，更能准确地反
映出组织细胞得相互关系及功能状态。
１5．DNＡ芯片技术就是指将大量已知寡核苷酸或DＮA探针按特定得排列方式固化在固
相支持物表面，按碱基互补配对得原则,与标记得特异得单链ＤNＡ或RNＡ分子杂交形成双链,
通过对杂交信号得检测分析，即可得出样品分子得数量与序列信息。
16。就是以ＤNA与ＲNA为诊断材料,DNA反映基因得存在状态，RNA反映基因得表达状态,
通过检查基因得存在、缺陷或表达异常，对人体状态与疾病作出诊断得方法与过程。
17。基因治疗就是指以正常基因矫正、替代缺陷基因,或从基因水平调控细胞中缺陷基因
得表达得一种治疗疾病得方法。
狭义得基因治疗就是指目得基因导入靶细胞后与宿主细胞内得基因发生整合，成为
宿主基因组得一部分,目得基因得表达产物起治疗疾病得目得。而广义得基因治疗则包
括通过基因转移技术或反义核酸技术、核酶技术等，使目得基因得到表达、或封闭、剪
切致病基因得ｍRNＡ,而达到治疗疾病得目得．
(二)选择题
A型题：
1、 D ２、 B ３、 A 4、 B ５、
C
6、 A ７、 C ８、 C 9、Ｂ
10、Ｃ
11、Ｃ１２、 A 1３、 C 14、 E １
5、Ｂ
1６、Ｄ 17、 A 1８、Ｅ 19、 E
2０、Ｄ
2１、 B 2２、 A 23、 B 24、Ｃ 2５、 A
26、 E 27、 D 28、 D 29、 B 30、 E
３１、 D 32、 C 33、 A 3４、 B 35、
C
36、Ｅ37、 B 38、 C ３9、 D 40、
B
4１、 A 42、 E 4３、 B 44、 A 4５、
Ｃ
4６、Ｅ47、 C 48、 B４９、 B
50、 E
51、 E 52、E53、 C 5４、Ｅ
55、 D
56、 E 57、 A ５8、 E 59、Ｅ６0、
C
６１、Ｂ 62、 E 63、 E 64、 B
65、 E
66、 D ６７、 A ６8、 A 69、Ｅ7
０、 E
7１、Ａ7２、 E 73、Ａ７４、 E 75、 E
７6、 E ７7、 E 78、Ｄ 79、 B ８0、 B
8１、 A 82、Ｅ83、 A 8４、 E
85、 E
86、 E 87、 E 88、 C 89、 A ９0、Ｃ
91、 A 92、 E
B型题:
１、Ｂ２、 C ３、 A 4、 E
5、 D
6、 A
7、 B
8、 D
9、 A １0、Ｄ
１1、 B 12、Ｅ１3、 C １4、Ｄ１５、 E
16、 A １7、 B 18、 A 19、 C ２0、Ｃ
２1、Ｂ 22、 D 23、 C 24、 A ２5、 B
２6、Ｅ 27、 B 2８、 C 29、 E 30、
A
31、Ｂ 32、 A 33、Ｅ 34、 C 35、Ａ
３6、Ｂ３７、 E 38、 A
(三)问答题
1。(1）目得基因得获取:通过化学合成或ＰCＲ得方法获取，也可从基因组DNA文库
或ｃDNＡ文库筛选。
（2)克隆载体得选择与构建:常用载体有质粒、噬菌体、病毒DNＡ。
（3)目得基因与载体得连接：利用DNA连接酶将目得基因与载体DＮA进行共价连接形
成重组ＤＮA分子。
(4)重组DNA分子导入受体细胞：目得基因与载体连接成重组DNA分子后,需将其导入
受体菌，随受体菌生长、繁殖,重组ＤNA分子也复制、扩增.导入得方法有转化与感染等．(5）重组体得筛选:筛选出含重组DNＡ得受体菌,常用筛选方法有遗传学方法如抗药
性标志选择、分子杂交与免疫化学方法。
(6）克隆基因得表达：包括原核表达与真核表达两种体系。可以生成有药用价值得
蛋白质或多肽.
2．载体就是为携带外源基因,实现外源基因得扩增或表达所采用得DＮＡ分子。常用克隆
载体有质粒DNA、噬菌体DNA、粘粒DNＡ、病毒DNA等。
（1)质粒质粒就是细菌中存在得独立于染色质以外得、能自主复制得、并与细菌或细
胞共存得遗传成分.多为双链共价闭合环形DNA,可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2～
3０0kb之间，＜1５ｋb得大小质粒比较容易分离纯化,＞15 kb得大质粒则不易提取。
(2)噬菌体噬菌体就是感染细菌得一类病毒。因为它寄生在细菌中并能溶解细菌细胞,
所以称为噬菌体。有得噬菌体基因组较大，如λ噬菌体与Ｔ噬菌体,有得则较小,如M13、ｆ
１、fd噬菌体等。λ噬菌体由头与尾构成,其基因组就是一条长约５0kb得线性双链DNＡ分子,组装在头部蛋白质外壳内部。λ噬菌体感染时,通过尾管将基因组ＤNA注入大肠杆菌，而将其蛋白质外壳留在菌外。λDNA进入大肠杆菌后以其两端各有12个碱基互补得单链末端(cos末端）环化成环状双链，可以两种不同得方式繁殖:①溶菌性方式：溶菌性噬菌体感染细菌后，连续增殖，直到细菌裂解,释放出得噬菌体又可感染其它细菌;②溶原性方式：溶原性噬菌体感染细菌后,可将自身得ＤNA整合到细菌得染色体中去，与细菌得染色体一起复制。
(3)粘粒粘粒(coｓｍid）就是将λ噬菌体得coｓ区与质粒组合得装配型载体．质粒提供了复制得起始点、酶切位点、抗生素抗性基因，而cｏs区提供了粘粒重组外源DNA大片段后得包装基础.粘粒本身约4~６kb，但可借cos区位点将多个粘粒串联成为一个长链或大环,真核基因29~4５kb得大片段插入两个相邻粘粒得限制酶切位点,借λ噬菌体得包装系统对两个ｃoｓ位点之间得ＤNA片段进行体外包装。体外包装好得颗粒感染宿主菌后,能像λ噬菌体一样环化、复制．由于粘粒可克隆DNA大片段,可用作建立真核基因组文库得载体。
(4）病毒质粒与噬菌体载体只能在细菌中繁殖，不能满足真核DNA重组得需要.感染人或哺乳动物得病毒,可改造用作动物细胞得载体.所以病毒载体更多地用于真核表达系统，如腺病毒、痘病毒、反转录病毒与猴空泡病毒。
３．(１）pＢR32２得氨苄青霉素抗性基因与复制起始位点(ori）。
（2)大肠杆菌乳糖操纵子得调节基因（lａcｉ）、启动子(Pｌａc)、操纵基因（O)及lacZ′基因片段，在laｃZ′基因中加入了多克隆位点。
lacZ′基因编码β—半乳糖苷酶N端得α—肽,宿主细胞编码β—半乳糖苷酶C端得肽段,两者可形成互补,而各自都没有酶得活性,只有两者融为一体才具有酶得活性,故称为α互补。
4。(１）基因组DＮA文库采用限制性酶将基因组DNA切成片段,每一ＤNＡ片段都与一个载体分子拼接成重组DNA。将所有得重组ＤNＡ分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到分子克隆得混合体，这样一个混合体称为基因文库。完成DNA重组后可通过杂交筛选获得特定得基因片段．
(2)制备cDNA文库以mRNA为模板，经逆转录酶催化合成cDNA ,将cDNA得混合体与载体进行连接,使每一个ｃDＮＡ分子都与一个载体分子拼接成重组ＤNA。将所有得重组DＮＡ分子都引入宿主细胞并进行扩增,得到分子克隆得混合体，这样一个混合体就称为cDNＡ文库。完成DＮA重组后可通过杂交筛选获得特定得cＤNA克隆。
(3)聚合酶链式反应（PCR) 如果已经知道目得基因得序列,可以用PCR从基因组DNA中获得目得基因,也可以采用逆转录ＰCＲ(ＲT-PCＲ）方法直接从mＲNA获得特定基因得ｃDＮA。
(４)化学合成如果知道肽链得氨基酸顺序,则可按照对应得密码子推导出ＤNA得碱基序列，然后用化学方法将这段序列合成出来。目前使用DNA合成仪合成得片段长度有限,较长得链则须分段合成，然后用连接酶进行连接．
5。主要有以下四种。
(1)粘性末端连接用同一种限制性内切酶切开载体与目得ＤＮＡ分子,或者载体DNA与目得ＤＮA虽然用不同得酶处理，但能产生相同得粘性末端,那么DNA片段之间很容易按照碱基配对关系退火,互补得碱基以氢键相结合。在T４DNＡ连接酶得作用下,其末端以磷酸二酯键相连接,成为环状DNA重组体.
(2）同聚物加尾连接如果要连接得两个DNＡ片段没有互补粘性末端,可用末端核苷酸转移酶催化脱氧单核苷酸添加于DＮA得3′粘性末端，例如一股DＮA3′端加上polｙA,另一股DNＡ上加上polyT,这样人工在DNA两端合成能互补得同核苷酸多聚物粘性末端，退火后能结合而连接。
(3）平末端连接不同方式产生得平端DNA片段可以在T4DNＡ连接酶得作用下,与某些限制性内切酶产生得平端载体相连接。如果目得序列与载体上没有相同得限制性内切酶位点
可供利用,用不同得限制性内切酶切割后得粘性末端不能互补结合，则可用适当得酶将DNＡ突出得末端削平或补齐成平末端,用T4DNA连接酶连接,但平末端连接要比粘性末端连接得效率低得多。
(4)人工接头连接对于平末端得DＮA,也可先连上人工设计合成得含有某些限制性内切酶切点脱氧寡核苷酸双链接头,在T4DNA连接酶得作用下使DNA末端产生新得限制性内切酶位点,再用相应得限制性内切酶切割，这样外源DNA片段得两端具有了粘性末端,可以连接到用同一限制性内切酶线性化了得载体上去.
6．（1)遗传学方法：针对载体携带有某种或某些标志基因与目得基因而设计得筛选方法.如果克隆载体携带有抗药性标志基因,如aｍp r、tｅt r、kan r,转化后只有含这种抗药基因得转化子菌落才能在含该抗生素得培养基中生存并形成菌落。这样就可以区分重组体与非重组体。
(2）分子杂交方法：利用32P标记得探针与转移至膜上得重组ＤNA或克隆得DNA片段进行分子杂交,直接筛选并鉴定目得基因。
(3)免疫学方法:利用特异性抗体与目得基因表达产物特异结合得方法筛选。免疫学方法特异性强、灵敏度高。
7.(１)分子杂交得基本原理:核酸分子杂交技术就是基于具有互补序列得两条单链核酸分子在一定条件下碱基互补配对结合，形成双链得原理。在这一过程中,核酸分子经历了变性与复性得变化，杂交得双方分别称为探针与待测核酸，杂交后形成得异源双链分子称为杂交分子。
(2)基本得方法
Ｓoutheｒn印迹杂交 Sｏutｈern印迹杂交就是指DNA与ＤNA得杂交，将经限制性内切酶消化与变性后电泳分离得待测DNＡ片段转印并结合到一定得固相支持物上,然后与标记得ＤNA探针杂交。
Ｎoｒthｅrn印迹杂交 Nｏrthern印迹杂交就是指将待测ＲNA样品经电泳分离后转移到固相支持物上,然后与标记得核酸探针进行杂交，检测RＮA(主要就是mRNＡ）得方法。其基本原理与基本过程与Ｓouthern印迹杂交基本相同.
斑点及狭缝印迹杂交将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上,再与探针杂交,称为斑点印迹。若采用狭缝点样器加样后杂交，其印迹为线状，称为狭缝印迹杂交.与Southern与Northern印迹法相比,其优点就是简单、快速,可在同一张膜上进行多个样品得检测。主要用于基因组中特定基因及其表达得定性及定量研究,
原位杂交核酸保持在细胞或组织切片中,经适当方法处理细胞或组织后，将标记得核酸探针与细胞或组织中得核酸进行杂交,称为原位杂交。原位杂交不需要从组织或细胞中提取核酸，对组织中含量极低得靶序列有很高得灵敏度，并可完整地保持组织与细胞得形态,更能准确地反映出组织细胞得相互关系及功能状态。
8。探针得标记就是将用作探针得DNA或RNA，或DNA得片段,以此为模板在适当得酶作用下,使被标记得单核苷酸掺入(整合）到模板得过程。常用得标记物有放射性核素与地高辛、生物素与荧光素等非放射性核素。
(1)放射性核素标记物:放射性核素就是目前应用最多得一类探针标记物,其灵敏度与特异性很高,可检出样品中少于１０00个分子得核酸量；其缺点就是半衰期短，稳定性差、污染环境、检测需时长。用于标记核酸探针得放射性核素主要有32Ｐ、３５S、3H、125I、１31Ｉ等.
(2)非放射性核素标记物:非放射性核素标记得探针得灵敏度都低于放射性核素标记得探针，但稳定、安全、经济及实验周期短等特点。非放射性核素标记物主要有:生物素、地高辛、荧光素、酶等.
9。PCＲ又称基因体外扩增特定序列方法。就是在反应体系中加入模板DNA、dＮＴP、特定设计得引物及耐热得DNＡ聚合酶，经多次变性、退火、延伸循环反应,使目得DNA呈指数
基因工程的应用练习题7-14 点滴积累汇江海厚积薄发 1、下列各项中，说明目的基因完成了表达的是 A、棉珠中含有杀虫蛋白基因 B、大肠杆菌中具有胰岛素基因 C、酵母菌中产生了干扰素 D、抗病毒基因导入土豆细胞中 2、转基因动物是指 A、提供基因的动物 B、基因组中增加外源基因的动物 C、能产生白蛋白的动物 D、能表达基因信息的动物 3、抗病毒转基因植物成功表达后，以下说法正确的是 A．抗病毒转基因植物，可以抵抗所有病毒 B．抗病毒转基因植物，对病毒的抗性具有局限性或特异性 C．抗病毒转基因植物可以抗害虫D．抗病毒转基因植物可以稳定遗传，不会变异4．如果通过转基因技术，成功改造了某血友病女性的造血干细胞，使其凝血功能全部恢复正常。当她与正常男性结婚，婚后所生子女的表现型为 A．儿子、女儿全部正常B．儿子、女儿中各一半正常 C．儿子全部有病，女儿全部正常D．儿子全部正常，女儿全部有病 5．若利用基因工程技术培育能固氮的水稻新品种，其在环保上的重要意义是 A．减少氮肥的使用量，降低生产成本B．减少氮肥的使用量，节约能源 C．避免氮肥过多引起环境污染D．改良土壤结构 6．疗白化病、苯丙酮尿症等人类遗传病的根本途径是 A．口服化学药物B．注射化学药物 C．采用基因治疗D．利用辐射或药物诱发致病基因突变 7．在基因诊断技术中，所用的探针DNA分子中必须存在一定量的放射性同位素，后者的作用是A．为形成杂交的DNA分子提供能量B．引起探针DNA产生不定向的基因突变 C. 作为探针DNA的示踪元素D．增加探针DNA的分子量 8．下列关于基因工程应用的叙述，正确的是 A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因B．一种基因探针能检测水体中的各种病毒C．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交D．原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良9．采用基因工程的方法培育抗棉虫，下列导入目的基因的作法正确的是 ①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 ③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 ④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵 A．①②B．②③C．③④D．④① 10．科学家能利用基因工程技术培育出特殊的西红柿、香蕉，食用后人体内可产生特定的抗体，这说明这些西红柿、香蕉中的某些物质至少应 A．含有丰富的免疫球蛋白B．含有某种抗原特异性物质 C．含有一些生活的病菌D．能刺激人体内的效应T细胞分泌抗体 11、切取某动物合成生长激素的基因，用某种方法将此基因转移到鲇鱼的受精卵中，从而鲇鱼比同类个体大3～4倍，此项研究遵循的原理是 A．基因突变，DNA→RNA→蛋白质B．基因工程，DNA→tRNA→蛋白质 C．细胞工程，DNA→RNA→蛋白质D．基因重组，DNA→RNA→蛋白质 12．下列各项不属于基因工程在实际中的应用的是 A．转基因抗虫棉的培育成功B．利用DNA探针检测饮用水中有无病毒 C．培育工程菌使之能产生胰岛素D．将C4植物细胞内的叶绿体移入C3植物细胞内 13．有关基因工程的成果及应用的说法正确的是 A．用基因工程方法培育的抗虫植物也能抗病毒 B．基因工程在畜牧业上应用的主要目的是培养体型巨大、品质优良的动物 C．基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物 D．目前，在发达国家，基因治疗已用于临床实践 14、运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种，这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白，对菜青虫有显着抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，保护农业生态环境。根据以上信息，下列叙述正确的是 A、Bt基因的化学成分是蛋白质 B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质 C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因 D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物 15．基因工程培育的“工程菌”通过发酵工程生产的产品，不包括 A．白细胞介素一2 B．干扰素C．聚乙二醇D．重组乙肝疫苗 16、利用基因工程技术将生长激素基因导入绵羊体内，转基因绵羊生长速率比一般的绵羊提高30％，体型大50％，在基因操作过程中生长激素基因的受体细胞最好采用 A．乳腺细胞B．体细胞C．受精卵D．精巢 17、下列不属于利用基因工程技术制取的药物是 A、从大肠杆菌体内制取白细胞介素 B、在酵母菌体内获得的干扰素 C、在青霉菌体内提取青霉素 D、在肠杆菌体内获得胰岛素 18、基因治疗是人类疾病治疗的一种崭新手段，下列有关叙述中不正确的是 A、基因治疗可使人类遗传病得到根治 B、基因治疗是一种利用基因工程产品治疗人类疾病的方法 C、基因治疗是指将健康基因导入有基因缺陷的细胞中 D、基因治疗的靶细胞可以是体细胞和生殖细胞 19．下列有关基因工程技术的应用中，对人类不利的是 A．制造“工程菌”用于药品生产B．创造“超级菌”分解石油、DDT C．重组DNA诱发受体细胞基因突变D．导人外源基因替换缺陷基因 20．“工程菌”是指 A．用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效表达的菌类细胞株系 B．用遗传工程的方法把相同种类不同株系的菌类通过杂交得到新细胞株系 C．用基因工程的方法使外源基因得到高效表达的菌类的细胞株系 D．从自然界中选取的能迅速增殖的菌类 21．生产上培育无子番茄、青霉素高产菌株、杂交培育矮秆抗锈病小麦、抗虫棉的培育原理依次是 ①生长素促进果实发育②染色体变异③基因重组④基因突变⑤基因工程 A．①②③④B．①④③②C．①④②⑤D．①④③③ 22、下列属于利用基因工程技术培育的新品种的是 Ａ、耐寒的小黑麦Ｂ、抗棉铃虫的转基因抗虫棉Ｃ、太空椒Ｄ、试管牛 23、下列有关基因工程的叙述中，不正确的是 A.DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B.基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子 C.基因治疗主要是对有基因缺陷的细胞进行替换 D.蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料
第2节基因工程及其应用 孝义三中高一生物组张文 一、教材内容分析 基因工程是现代四大生物工程之一。《基因工程及其应用》是人教版高中生物必修2第6章第2节内容。本节内容主要包括三个方面，分两课时讲授。第1课时简要介绍“基因工程的原理”，第2课时介绍“基因工程的应用”及“转基因生物和转基因食品安全性”。本节内容是对前面所学育种内容的补充，是即贴近生活又远离生活的微观内容。由于在选修3中还有基因工程的介绍，因此本节的要求相对简单一些。 二、学情分析 对于基因操作的工具和基本步骤，内容抽象和复杂，学生接触少，会出现掌握不好，甚至理解错误的情况。虽然经过必修1的学习，学生的生物基础知识较扎实，思维的目的性、连续性和逻辑性已初步建立。但基因工程一节对学生来说难点较多，如果处理不好，会变成简单的死记硬背。因此在教学过程中，尽量通过生活化打比喻的方式和模型建构活动及采用多媒体动画形象化教学，并在教师引导下适时加强学生解决问题和运用图解等生物学语言归纳结论等方面的能力。切记不可讲的太多。 三、教学目标 1、简述基因工程的基本概念； 2、简述基因工程的基本工具； 3、简述基因工程的基本操作步骤； 4、通过基因工程的简介，鼓励学生积极探索新知和科学创新，树立一分为二的辩证唯物主义思想； 四、教学重点、难点分析 教学重点：基因工程的基本原理（概念、工具、操作步骤） 教学难点：基因工程的基本原理 五、教学思路 本节课主要解决如下几个问题：1）什么是基因工程？2）基因工程的主要原理是什么？3）基因工程的操作过程如何？4）基因工程有哪些方面的应用？如何看待转基因食品？由于本节内容和前面的育种内容联系比较紧密，因此可以让学生回顾前面几种育种方法的成果，再通过情景展现传统育种方法所不能达到的地方，进而引出基因工程，通过列举生活中的转基因成果让学生知道基因工程就在我们身边。而后通过与学生们所熟知的器官移植做对比，让学生理解基因工程的本质和操作过程。通过对转基因食品的讨论让学生树立辩证唯物主义观念。 六．教学策略及教学媒体 根据激趣原则，通过展示色彩绚丽的转基因生物图片入手，引出基因工程的概念，采取“引导—互动—探究”模式，即采用师生互动探究式教学，借助老师生活化打比喻和多媒体动画并安排学生制作模型活动从而使抽象的课程内容具体化，直观化和形象化。 七、教学设计流程图第1课时“基因工程的原理”
第6章从杂交育种到基因工程 第2节基因工程及其应用 学习目标 1．简述基因工程的基本工具 2．简述基因工程的基本操作步骤 3．说出基因突变和基因重组的意义 基础知识 一、基因工程的原理 1. 基因工程的概念： 基因工程又叫技术或技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的提取出来，加以，然后放到另一种生物的细胞里，地改造生物的。 基因工程是在上进行的水平的设计施工，需要有专门的工具。 2.基因工程的工具 （1）基因的“剪刀”：__________（简称__________），作用： （2）基因的“针线”：__________，作用： （3）基因的：作用：，目前常用的运载体有________、________和______________等。 3. 基因工程操作的一般步骤为：__________________目的基因与___________结合将目的基因导入________________目的基因的________和________。 二、基因工程的应用 1、基因工程在作物育种方面的事例有：、、超级绵羊等； 抗虫基因作物的优点，不仅减少了__________，大大降低了生产成本，而且还减少了__________。 2、基因工程生产药品有__________、__________、__________等。 3、目前关于转基因生物和转基因产品的安全性，有两种观点，一种观点是转因生物和转基因食品不安全，____________________；另一种观点，应该大范围推广。
1.看课本P103图6-6，由图中过程怎么操作？用到什么工具？ ①从人的细胞中分离出DNA ； ②用限制酶切取胰岛素基因片断 ③分离大肠杆菌中的质粒并用同种限制酶切断 ④用DNA 连接酶将胰岛素基因与质粒DNA 重组 ⑤将重组质粒导入大肠杆菌进行转化 ⑥培养大肠杆菌，复制大量胰岛素基因并表达分泌出胰岛素； 过程属于基因工程的第一步：； 过程属于基因工程的第二步：； 过程属于基因工程的第三步：； 过程属于基因工程的第四步：； 2.此过程的目的基因是_____________，供体是，受体是_________； 3.细菌和人是差异非常大的两种生物，为什么通过基因重组后，细菌能够合成人的胰岛素呢？ 二、请模仿转基因大肠杆菌生产人胰岛素的过程，写出培育转基因抗虫棉的过程。 4.请写出过程 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥
基因工程测试题 姓名____________ 一、选择题 1．已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现在多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后， 这些线性DNA分子最多能 产生长度不同的DNA片段 种类数是( c ) A．3 B．4 C．9 D．12 2．下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是( c ) A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法钙离子处理法B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌普通质粒A和重组质粒都含有抗氨苄青霉素基因。都能生长因为目的基因在四环素 C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A 的细菌导入重组质粒的细菌不能生长，因为目的基因插在抗四环素基因中，抗四环素基因的结构被破坏。 D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长受体细胞通过转录、翻译合成相应的蛋白质，即人的生长激素。 3．下列关于基因工程的叙述，错误的是（D ） A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达基因工程中目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶；人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性,只有经过一定的物质激活以后,才有生物活性.载体上的抗性基因主要是有利于筛选含重组DNA的细胞,不能促进目的基因的表达.所以D错误. 4.将ada（腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是（C ） A、每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B、每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C、每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada不同的限制性核酸内切酶识别位点不同，不是每个限制性核酸内切酶的识别位点都能插入ada。 D、每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 5.北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（B ）农杆菌转化法 A、过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序图中①是获取目的基因的过程，获取的目的基因，可用于基因工程，但不能用于比目鱼基因组测序，故A错误； B、多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白将多个抗冻基因编码区相连形成的能表达的新基因可能不再是抗冻基因，所以可能得不到抗冻性增强的抗冻蛋白，故B 正确；， C、过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选②是基因表达载体的构建过程，基因表达载体通常由启动子、目的基因、终止子和标记基因构成，其中标记基因的作用是筛选重组质粒，利用农杆菌转化法只能将质粒导入受体细胞，不能对重组质粒进行筛选，故C错误； D、应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达利用DNA探针技术检测目的基因是否导入到受体细胞，利用抗原-抗体杂交技术检测目的基因是否表达出来，故D错误．6.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（A ） A 用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸限制性核酸内切 酶只能识别DNA的核苷酸序列,并在特定的位点切割,而烟草花叶病毒的核酸是RNA,限制性核酸内切酶对其不能发挥作用. B 用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C 将重组DNA分子导入原生质体 D 用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞目的基因为抗除草剂 基因，所以成功导入目的基因的细胞具有抗除草剂的能力，筛选时应该用还有除草剂的培养基筛选转基因细胞 7.下列关于基因工程的叙述，正确的是: ( D ) A.基因工程往往以细菌抗药性基因为目的基因基因工程经常以抗菌素抗性基因为标记基因，便于重组质粒的筛选，A错误； B.重组DNA的形成和扩增是在细胞内完成的比如PCR技术在体外 C.基因工程育种能够定向地改造生物性状，快速形成新物种定向地改造生物的遗传性状，培育新的农作物优良品种的生物技术 D.限制性内切酶和DNA连接酶是构建重组DNA必需的工具酶8．下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是( B ) A．基因工程需对基因进行分子水平操作，蛋白质工程不对基因进行操作基因工程和蛋白质工程都是分子水平操作，且直接操作对象都是基因。 B．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质基因工程合成的是天然存在的蛋白质，而蛋白质工程合成的可以是自然界不存在的蛋白质，但不是只能合成天然不存在的蛋白质。 C．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作基因工程和蛋白质工程都是分子水平操作 D．基因工程完全不同于蛋白质工程蛋白质工程是以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。所以蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。 9．PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，下列有关PCR过程的叙述，不正确的是( C ) A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键跟解旋酶的作用相同 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配 对原则完成 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸四种脱氧核糖核苷酸热稳定DNA聚合酶 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高 10.“工程菌”是指（C） A．用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效表达的菌类细胞株系用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系一般称为“工程菌” B．用遗传工程的方法，使同种不同株系的菌类杂交，得到的新细胞株系 C．用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系 D．从自然界中选取能迅速增殖的菌类 二、非选择题 11.为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 植 线性DNA分子的酶切示 意图
6-2 基因工程及其应用 【学习目标】 1、简述基因工程的基本原理。 2、举例说出基因工程在农业、医药等领域的应用。 3、关注转基因生物和转基因食品的安全性。 【新知预习】 一基因工程的原理 基因工程又叫技术或技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的提取出来，加以，然后放到另一种里，地改造生物的。 基因工程是在上进行的水平的设计施工，需要有专门的工具。基因工程最基本的工具有：“”、“”、“”。 二基因工程的工具 1、基因的“剪刀” (1)它指的是限制性内切酶，简称为，正是伴随它的发现，以人类定向改造生物遗传性状为目的的才应运而生。 (2) 限制性内切酶主要存在于中，限制性内切酶是不是就是一种？ (3) 限制性内切酶的特点是a: ；b： (4)不同的限制性内切酶切割DNA的切点相同吗？ 2、基因的“针线” 把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，然后让两者的黏性末端黏合起来，问： (1)两者的黏性末端能黏合起来遵循的原则是。 (2)DNA连接酶的作用是。 3、基因的运载体 (1)要将一个外源基因，送入受体细胞内，还需要有运输工具，这就是 (2)通常使用的运载体有、和等。 (3)质粒它存在于及等生物中，是细胞染色体(有的细胞中没有染色体)外能的很小的环状分子。 三基因工程的操作步骤
1、提取 2、与结合 将与结合的过程，实际上就是不同来源的DNA 的过程。如果以质粒作为运载体，首先要用一定的切割质粒，使质粒出现一个切口，露出黏性末端。然后用限制酶切断，使其产生相同的。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，质粒的黏性末端与目的基因的黏性末端就会因碱基互补配对而结合，再加入适量的，这样就形成了一个重组DNA分子。 3、将导入 4、目的基因的表达和检测 基因的表达是指通过和合成的过程。 四基因工程的应用（见书） 1.获得高产、稳产和具有优良品质的农作物和具有抗逆性的作物新品种。 2.高效率的生产出高质量、低成本的药品，如胰岛素、干扰素和乙肝疫苗等 3.利用转基因细菌降解有毒有害的化合物，保护环境。 五转基因生物和转基因食品的安全性 【知识细目表】 1.概念 2.原理基因重组 3.基因工程的基本工具 （1）基因的“剪刀”（限制性内切酶） 限制性内切酶能够对DNA分子进行切割，它具有专一性和特异性。即一种内切酶只对DNA 分子内特定的碱基序列中的特定位点发生作用，把它切开。 （2）基因的“针线”（DNA连接酶） 能够将限制酶切开的黏性末端连接起来，从而使两个DNA片段连接起来。 注：限制酶与连接酶作用的位点都是磷酸二酯键 （3）.基因的运载体作用：将外源基因送入受体细胞 种类：质粒、噬菌体和动物病毒。其中质粒是基因工程中最常用的运载体，最常用的质粒是大肠杆菌的质粒。 特点：是细胞染色体外能自主复制的很小的环状DNA 分子，存在于许多细菌及酵母菌等生物中。
《基因工程及其应用》习题 一、选择题 1、不属于基因工程方法生产的药物是（） A、干扰素 B、白细胞介素 C、青霉素 D、乙肝疫苗 2、质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点是（） ①能自主复制②不能自主复制③结构很小④是蛋白质⑤环状RNA分子 ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A、①③⑤⑦ B、②④⑥ C、①③⑥⑦ D、②③⑥⑦ 3、1993年，我国科学工作者培育成的抗棉铃虫的转基因抗虫棉，其抗虫基因来源（） A、普通棉花的基因突变 B、棉铃虫变异形成的致死基因 C、寄生在棉铃虫体内的线虫 D、苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因 4、下图表示限制酶切割某DNA的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列及切点是（） A、CTTAAG，切点在C和T之间 B、CTTAAG，切点在G和A之间 C、GAATTC，切点在G和A之间 D、GAATTC，切点在C和T之间 5、切取牛的生长激素和人的生长激素基因，用显微注射技术将它们分别注入小鼠的受精卵中，从而获得了“超级鼠”，此项技术遵循的原理是（） A、基因突变：DNA→RNA→蛋白质 B、基因工程：RNA→RNA→蛋白质 C、细胞工程：DNA→RNA→蛋白质 D、基因重组：DNA→RNA→蛋白质 6、控制细菌的抗药性、固氮、抗生素基因存在于（） A、核区 B、线粒体 C、质粒 D、核糖体 7、科学家将含人的α-抗胰蛋白酶基因的DNA片段，注射到羊的受精卵中，该受精卵发育的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的奶。这一过程没有涉及（） A、DNA按照碱基互补配对原则自我复制 B、DNA以其一条链为模板合成RNA
C、RNA以自身为模板自我复制 D、按照RNA密码子的排列顺序合成蛋白质 8、下列高科技成果中，根据基因重组原理进行的是（） ①我国科学家袁隆平利用杂交技术培育出超级水稻 ②我国科学家将苏云金杆菌的某些基因移植到棉花体内，培育出抗虫棉 ③我国科学家通过返回式卫星搭载种子培育出太空椒 ④我国科学家通过体细胞克隆技术培养出克隆牛 A、① B、①② C、①②③ D、②③④ 9、下列关于基因工程应用的叙述，正确的是（） A、基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因 B、基因诊断的基本原理是DNA分子杂交 C、一种基因探针能检测水体中的各种病毒 D、原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良 10、上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带白蛋白的转基因牛，他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍。转基因动物是指（） A、提供基因的动物 B、基因组中增加了外源基因的动物 C、能产生白蛋白的动物 D、能表达基因信息的动物 二、非选择题 11、据调查，随着化学农药的产量和品种逐年增加，害虫的抗药性也不断增强，危害很严重，如近年来，棉铃虫在我国大面积爆发成灾，造成经济损失每年达100亿元以上。针对这种情况，我国科学工作者经研究发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌能分泌一种毒蛋白使棉铃虫致死，而此毒蛋白对人畜无害。通过科技攻关，我国科技工作者已成功地将该毒蛋白基因导入到棉花植株内并成功实现表达。由于棉铃虫吃了新品种“转基因抗虫棉”植株后会死亡，所以该棉花新品种在1998年推广后，取得了很好的经济效益。 请据上述材料回答下列问题： （1）“转基因”抗虫棉新品种的培育应用了新技术，毒蛋白对人畜无害，但能使棉铃虫致死，从蛋白质的特性看，蛋白质具有性。 （2）在培养转基因抗虫棉新品种过程中，所用的基因的“剪刀”是，基因的针线是，基因的运载工具是。
基因工程及其应用文件管理序列号：[K8UY-K9IO69-O6M243-OL889-F88688]
第2节基因工程及其应用（第1课时）知识链接及考试地位 本知识与“DNA分子的结构与复制”、“基因突变和基因重组”、“DNA 重组技术的基本工具”、“基因工程的基本操作程序”等内容相联系，考试过程中常设计基因工程的原理、基本工具等基础知识，多以个别填空或选择题的形式呈现。 知识回顾 1、DNA分子的结构特点是什么？ 2、什么是基因重组？ 学习目标 1、简述基因工程的诞生。 2、简述基因工程的原理及技术。要明确基因工程操作的基本步骤和最基本的工具。 重难点 1．教学重点 基因工程的基本原理。 2．教学难点 基因工程的基本原理 新知探究
传统育种的方法一般只能在生物中进行，很难将一种生物的优良性状移植到生物身上。基因工程的出现使人类有可能按照自己的意愿地改变生物，培育出。 一、基因工程的原理 基因工程又叫做或。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以，然后放到另一种生物细胞里，地改造生物的遗传性状。基因工程是在DNA上进行的 水平的设计施工，基因的剪刀是指，简称限制酶。其作用特点是一种限制酶只能识别一种序列。基因的针线是 指。目前常用的运载体有、和等。质粒存在于许多以及等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的小型分子。 基因工程的操作步骤是：、目的基因与运载体结合，目的基因导入受体细胞、目的基因的和。 二、基因工程的原理、操作对象各是什么？ 三、限制性内切酶的分布、特点、作用部位和作用结果如何？ 四、作为基因的运载体，需具备哪些条件？ 五、DNA连接酶的作用对象、位置和结果如何？ 六、基因工程的优点是什么？ 七、基因重组与基因工程比较
课型：新授主备：同备审批: 7/13/2013 第6章从杂交育种到基因工程 第2节基因工程 【学习目标】1.简述基因工程的基本原理 2.举例说出基因工程在农业、医药等领域的应用 3.关注转基因生物和转基因食品的安全性 【学习重点】1. 基因工程的基本原理 【学习难点】基因工程的基本原理 【学习过程】 一、基因工程的基本原理 （一）、基因工程的概念 基因工程又叫做或。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的。 【思考】 为什么不同生物的基因可以相互转移？转基因生物是否产生了新基因和新型蛋白质？ （二）、基因工程的工具 基因的“剪刀”—— 一种限制酶只能识别特定的核苷酸序列，并在的切点上切割DNA分子。【思考】 要获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 【练一练】试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端 基因的“针线”—— “缝合”__________和_________交替连接而构成的DNA骨架上的缺口。 【思考】DNA连接酶连接的是两个脱氧核苷酸分子的什么部位？
基因的运载体目前常用的运载体有________、________和______________等。 质粒存在于中,是拟核或细胞核外能够________的______________分子。 （三）、基因工程的操作步骤 目的基因、目的基因与结合、将目的基因、目的基因的和 【思考】 目的基因和质粒为什么要用同一种限制酶切割？限制酶和DNA连接酶作用的位点相同吗？用DNA连接酶讲目的基因与运载体结合时，有其他不同的结合情况吗（两两结合时）？ 二、基因工程的应用 1、基因工程与作物育种 人们培育出的转基因作物和转基因动物主要有 ___________________________ ___ _____ ____ ____________________________________ __ 2、基因工程与药物研制 转基因药物有：________、________、________、________、________、________、________、________、________。 三、转基因生物和转基因食品的安全性 两种观点：__________________________________和_______________________________ ［课堂小结］ 【自我检测】 1．不属于基因工程方法生产的药物是（） A.干扰素 B.白细胞介素 C.青霉素 D.乙肝疫苗 2．质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点是（） ①能自主复制②不能自主复制③结构很小④蛋白质⑤环状RNA分子 ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居”
基因工程测试题 一、选择题： 1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A.大肠杆菌 B.酵母菌 C.肺炎双球菌 D.乳酸菌 2.下列有关基因工程的叙述，正确的是( ) A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来 B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变 C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大 D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 3.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是( ) A.抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体 B.重组DNA分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染 D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的 4.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kan r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养
基上生长。下列叙述正确的是( ) A.构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株 C.卡那霉素抗性基因(kan r)中有该过程所利用的限制性核酸内切酶 的识别位点 D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传 5.上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，以下与此有关的叙述中正确的是( ) A.“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物 B.“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 C.只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有 D.转基因牛的肌肉细胞中也有人白蛋白基因，但不发生转录、翻译，不能合成人白蛋白 6.下列关于蛋白质工程和基因工程的比较，不合理的是( )
基因工程及其应用集团标准化办公室：[VV986T-J682P28-JP266L8-68PNN]
第2节基因工程及其应用（第1课时） 知识链接及考试地位 本知识与“DNA分子的结构与复制”、“基因突变和基因重组”、“DNA重组技术的基本工具”、“基因工程的基本操作程序”等内容相联系，考试过程中常设计基因工程的原理、基本工具等基础知识，多以个别填空或选择题的形式呈现。 知识回顾 1、DNA分子的结构特点是什么？ 2、什么是基因重组？ 学习目标 1、简述基因工程的诞生。 2、简述基因工程的原理及技术。要明确基因工程操作的基本步骤和最基本的工具。 重难点 1．教学重点 基因工程的基本原理。 2．教学难点 基因工程的基本原理 新知探究 传统育种的方法一般只能在生物中进行，很难将一种生物的优良性状移植到生物身上。基因工程的出现使人类有可能按照自己的意愿地改变生物，培育出。 一、基因工程的原理 基因工程又叫做或。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以，然后放到另一种生物细胞里，地改造生物的遗传性状。基因工程是在DNA上进行的水平的设计施工，基因的剪刀是指，简称限制酶。其作用特点是一种限制酶只能识别一种序列。基因的针线是指。目前常用的运载体有、和等。质粒存在于许多以及等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的小型分子。 基因工程的操作步骤是：、目的基因与运载体结合，目的基因导入受体细胞、目的基因的和。 二、基因工程的原理、操作对象各是什么？ 三、限制性内切酶的分布、特点、作用部位和作用结果如何？ 四、作为基因的运载体，需具备哪些条件？ 五、DNA连接酶的作用对象、位置和结果如何？ 六、基因工程的优点是什么？
人教版高中生物《基因工程及其应用》教学设计 一、总体设计指导思想 本节课突出对学生技能和科学素质的培养，通过精心设计课堂教学环节，来培养学生的信息提取能力、识图能力、语言表达能力、实际操作能力及培养学生的科学精神和科学素养。 二、教材分析 基因工程是现代生物科技中的热点，逐渐对人类的生产和生活产生了巨大的影响，学习这一内容既有利于学生对这一前沿科技的了解，也能让学生对科学技术社会三者的关系有更深入的理解，还能为学生的人生规划提供一种新的视角。而对这一专题的教学，首先要考虑基础性，高中阶段的教学不是培养专家，而是要全面提高学生的科学素养，因此着力点应瞄准对学生的发展起根本作用的知识能力思想情感上，针对本节内容即简述基因工程的基本原理，举例说出基因工程在农业、医药等领域的应用，关注转基因生物和转基因食品的安全性；关注基因工程的发展，认同基因工程的应用促进生产力的提高；运用所学DNA重组技术的知识，模拟制作重组DNA模型，而本课知识、能力上主要解决基因工程操作的原理及基本步骤以及模型构建。 三、教学目标 （一）知识目标 简述基因工程的基本原理 举例说出基因工程在农业、医药等领域的应用 关注转基因生物和转基因食品的安全性； （二）情感态度价值观目标 关注基因工程的发展，认同基因工程的应用促进生产力的提高 （三）能力目标 运用所学DNA重组技术的知识，模拟制作重组DNA模型。 四、教学重难点 重点：①基因工程的主要步骤 ②基因工程的应用 ③转基因生物和食品的安全性 难点：①基因工程的基本原理。 ②转基因生物与转基因食品的安全性。 五、教学过程：
六、学案设计： 6.2基因工程---课堂探究案 一．学习目标 1.简述基因工程的基本原理 2.通过模型制作理解基因工程的关键步骤 二．合作探究 1.核心概念：基因工程 又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。别名_________________ 原理____________________________ 结果__________________________________________________________________ 2.信息提取：阅读以下资料，找出能代表培育转基因大肠杆菌关键步骤的三个动词。 美国人在1978年用大肠杆菌生产出了胰岛素，大肠杆菌产生胰岛素并进行批量生产的原理是运用到了现代生物技术的转基因技术，它是先将人胰岛素基因从人的染色体DNA上剪切出来，插入从细菌细胞中提取出来的质粒（作为载体）中，再将这个合并起来的、带有胰岛素基因的质粒，转移入大肠杆菌的细胞中，随后该胰岛素基因会指导大肠杆菌细胞产生胰岛素，人类即可将这些胰岛素提取并收集出来，用于治疗糖尿病病人，给糖尿病患者带来了福音. 能代表培育转基因大肠杆菌关键步骤的三个动词分别是________、_________、__________。 3.合作探究：阅读课本102页最后一段至103页第二段，探讨以下问题 （1）限制酶的分布、作用及特性 思考一：限制性核酸内切酶切割的是DNA分子的哪个部位_______________ （2）DNA连接酶的作用、作用对象和作用部位 思考二：DNA连接酶与DNA聚合酶有何区别？___________________________________ （3）运载体的常见种类、作用 4.读图说话：读下图，用自己的话描述基因工程操作的一般步骤。
基因工程的应用练习题 一、选择题 1、下列各项中，说明目的基因完成了表达的是 A、棉珠中含有杀虫蛋白基因 B、大肠杆菌中具有胰岛素基因 C、酵母菌中产生了干扰素 D、抗病毒基因导入土豆细胞中 2、转基因动物是指 A、提供基因的动物 B、基因组中增加外源基因的动物 C、能产生白蛋白的动物 D、能表达基因信息的动物 3、抗病毒转基因植物成功表达后，以下说法正确的是 A．抗病毒转基因植物，可以抵抗所有病毒 B．抗病毒转基因植物，对病毒的抗性具有局限性或特异性 C．抗病毒转基因植物可以抗害虫 D．抗病毒转基因植物可以稳定遗传，不会变异 4．如果通过转基因技术，成功改造了某血友病女性的造血干细胞，使其凝血功能全部恢复正常。当她与正常男性结婚，婚后所生子女的表现型为 A．儿子、女儿全部正常 B．儿子、女儿中各一半正常 C．儿子全部有病，女儿全部正常 D．儿子全部正常，女儿全部有病5．若利用基因工程技术培育能固氮的水稻新品种，其在环保上的重要意义是A．减少氮肥的使用量，降低生产成本 B．减少氮肥的使用量，节约能源C．避免氮肥过多引起环境污染 D．改良土壤结构 6．疗白化病、苯丙酮尿症等人类遗传病的根本途径是 A．口服化学药物 B．注射化学药物 C．采用基因治疗 D．利用辐射或药物诱发致病基因突变7．在基因诊断技术中，所用的探针DNA分子中必须存在一定量的放射性同位素，后者的作用是 A．为形成杂交的DNA分子提供能量 B．引起探针DNA产生不定向的基因突变 C. 作为探针DNA的示踪元素D．增加探针DNA的分子量 8．下列关于基因工程应用的叙述，正确的是 A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因 B．一种基因探针能检测水体中的各种病毒 C．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交D．原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良 9．采用基因工程的方法培育抗棉虫，下列导入目的基因的作法正确的是 ①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 ③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 ④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵 A．①② B．②③C．③④ D．④① 10．科学家能利用基因工程技术培育出特殊的西红柿、香蕉，食用后人体内可产生特
2019湖南高考生物知识点：基因工程及其应用 1.概念 按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 2.原理 基因重组 3.工具 A.基因的”剪刀”：限制性内切酶 ①分布：主要在微生物中。 ②作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。 ③结果：产生黏性未端(碱基互补配对)。 B.基因的”针线”：DNA连接酶 ①连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。 ②结果：两个相同的黏性未端的连接。 C.基因的”运载工具”：运载体 ①作用：将外源基因送入受体细胞。 ②具备的条件：a、能在宿主细胞内复制并稳定地保存。b、具有多个限制酶切点。 c、有某些标记基因。 ③种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。 ④质粒的特点：质粒是基因工程中最常用的运载体。
4.基因操作的基本步骤 ①提取目的基因：人们所需要的特定基因，如人的胰岛素基因、抗虫基因、抗病基因、干扰素基因等 ②目的基因与运载体结合(以质粒为运载体)：用同一种限制酶分别切割目的基因和质粒DNA(运载体)，使其产生相同的黏性末端，将切割下的目的基因与切割后的质粒混合，并加入适量的DNA连接酶，使之形成重组DNA分子(重组质粒) ③将目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌、动植物细胞 ④目的基因检测与表达 检测方法如：质粒中有抗菌素抗性基因的大肠杆菌细胞放入到相应的抗菌素中，如果正常生长，说明细胞中含有重组质粒。 表达：受体细胞表现出特定性状，说明目的基因完成了表达过程。如：抗虫棉基因导入棉细胞后，棉铃虫食用棉的叶片时被杀死;胰岛素基因导入大肠杆菌后能合成出胰岛素等。
6.2基因工程及其应用教学设计案例 基因工程及其应用 --案例 一、教学目标的确定 课程标准中与本节内容相对应的具体内容标准是："关注转基因生物和转基因食品的安全性"，这也是本节要达成的主要教学目标。课程标准并未明确指出本章要讲述基因工程的内容，考虑到本章教材知识体系的完整性，以及学生达成上述目标所需要的知识基础，本节还将"简述基因工程的基本原理"，"举例说出基因工程在农业、医药等领域的应用"作为教学目标。 二、--思路 第一课时--流程图如下。 第二课时--流程图 如下。 三、教学实施的程序 教师组织引导 学生活动 教学意图 教师通过图 片和音像资料展示基因工程产品，如种子、水果、疫苗或药物等，
引入课题。教师利用"问题探讨"，提出问题，组织学生讨论、交流看法。 ·为什么能把一种生物的基因"嫁接"到另一种生物上？ ·推测这种"嫁接"怎样才能实现？ ·这种"嫁接"对品种的改良有什么意义？ 教师小结：从杂交育种的局限性切入，人类可以利用基因工程技术按照自己的意愿直接定向改变生物。说明本节教学目标。 教师肯定学生合理的想法，引发思考。 "你的想法很好，可是用什么样的方法才能实现你的设想呢？" 教师用类比的方法引导学生思考基因工程的大致步骤和所需要的工具：剪刀、针线、运载体等。并用问题启发学生："你能想像这种‘剪刀加浆糊’式的‘嫁接’工作在分子水平的操作，其难度会有多大吗？" 以ecor i为例，构建重组dna分子模型，体会基因的剪切、拼接、缝合的道理。教师交代清楚ecor i是已发现的500多种限制性内切酶中的一种，它是一种从细菌中发现的能在特定位置上切割dna分子的酶。它的特殊性在于，它在dna 分子内部"下剪刀"，专门识别dna分子中含有的"gaattc"这样的
高一（生物）基因工程及其应用(第1课时)学案 编制人初审人审核人编制时间 5月20日 班级姓名第小组 【学习目标】: 1.简述基因工程的基本原理； 2.说出基因工程的基本工具 3 简述基因工程的基本操作步骤 【问题导学】: 学点1.基因工程的概念：阅读课本P102第2段回答下面的问题: 1. 基因工程又叫技术或技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的提取出来，加以，然后放到另一种生物的细胞里，地改造生物的。 2.精读概念，想一想基因工程为什么又叫基因拼接技术”？ 学点2. 基因工程的工具: : ﹙1﹚基因的“剪刀”：学习课本P102第3段回答下面的问题 ①基因的“剪刀”是指：（简称__________） 一种限制酶只能识别特定的核苷酸序列，并在的切点上切割DNA分子。 ②EcoRⅠ限制酶识别的特定序列是什么?在哪个部位将序列切开? ③什么是黏性末端？不同的酶切出的黏性末端是否相同?这体现了酶的哪种特性? 【试一试：】试写出下列序列受EcoRⅠ限制酶作用后的粘性末端 CTTCAT GAATTC CCTAA GAAGTA CTTAAG GGATT （2）、基因的“针线”：阅读课本P103第1段回答下面的问题 ①基因的“针线”是指_______ 它可以“缝合”和交替 连接而构成的DNA骨架上的缺口。 ②DNA连接酶作用的部位是氢键吗？ 【试一试：】请在右图中标出DNA连接酶连接的部位。 （3）、基因的“运载体”：阅读课本P103第2段回答下面的问题 ①基因工程中，目前常用的运载体有________、________和______________等。 质粒存在于中，是拟核或细胞核外能够的分子。 ②运载体的作用是什么？质粒的本质是什么？ 学点3. 基因工程的操作步骤：阅读课本P103第3段思考下面的问题 ①什么是目的基因? ②提取目的基因时需要对目标DNA切割几次才能获得目的基因？ ③目的基因与运载体结合时需要对质粒切割几次？ ④切取目的基因和运载体时是否需要使用相同的限制酶？为什么？ ⑤基因工程操作的一般步骤为：__________________、目的基因与___________结合、将目的基因导入_________________、目的基因的________和________。 【小试牛刀】：重组DNA分子的模拟操作(以小组为单位,合作完成)