ABI公司测序仪的应用
, Ph.D. Technical Product Specialist chenyd@https://www.doczj.com/doc/6e4788923.html,
提
I II III IV V VI
要
DNA测序仪应用概况 基因突变快速扫描：SSCP 植物AFLP分析 细菌真菌鉴定：MicroSeq ID 甲基化研究 BigDye XTerminator
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DNA测序仪应用概况
ABI遗传分析仪家族
使用同样的试剂和软件
310
3130 3130xl
3730 3730xl
1
4
4
16
48
96
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测序仪三大功能
DNA测序— 测定DNA片段的碱基序列 片段分析— 测定DNA片段的长度和颜色 SNP分型— 测定多态或点突变
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测序仪可以用来做什么？
DNA测序
医学测序 细菌、真菌鉴定 杂合子、突变检测
SNP研究
SNaPshot Multiplex SNPlex 定量PCR TaqMan探针杂交
片段分析
基于STR的法医鉴定：HID 基于STR的基因连锁定位：LMS 突变筛查 ：SSCP 农牧业育种：AFLP
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未知序列测序
100多种基因组已经 完成测序，许多新基 因组计划正在进行中 许多基因有待发现 理解生物学功能 解码人类疾病的路径 和机制
Diagram from Celera Genomics 7
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线粒体DNA测序
Deleterious mutations in genecoding regions Genetic variation in populations Human evolution Disease association studies 500-1000 copies of mtDNA per cell allows easier extraction
MITOMAP: A Human Mitochondrial Genome Database. https://www.doczj.com/doc/6e4788923.html, , 2004 Image provided by Molecular Probes photo gallery. https://www.doczj.com/doc/6e4788923.html,/servlets/gallery/, 2004
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比较基因组学
Genetic conservation and variation Finding answers to disease mechanisms How closely related are mice and humans? How many genes are the same?
https://www.doczj.com/doc/6e4788923.html, – Mouse Karyotype ZooWeb - Karyotypes home page – Human Karyotype
人类
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医学测序
VariantSEQr? Resequencing System
A complete application solution for detecting variants in thousands of disease-related human genes.
SeqScape? Software v2.5
Allows automatic detection of heterozygotes
Mutation Profiling Insertions & Deletions Development of diagnostic / prognostic assays for disease
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杂合子检测：发现新突变
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细菌和真菌鉴定
MicroSeq? ID Analysis Software
MicroSeq? 500 16S Bacterial Identification Kit MicroSeq? D2 LSU Fungal Identification Kit
DNA Sequencing of the 16S ribosomal RNA gene Classification of Eubacteria, Yeasts,and Filamentous Fungi Sequence polymorphisms Bacterial category A biothreat agents Food pathogens Same day results
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SAGE? Analysis
基因组范围的基因表达图式分析 鉴定转录子(mRNA)
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基于测序的HLA配型
Donor / Recipient compatibility prior to tissue transplantation HLA typing products - distributed directly by Celera Diagnostics for research purposes only.
1-866-235-3723
https://www.doczj.com/doc/6e4788923.html,/cdx/HLA_Typing
Referenced to GENBANK: HLA–C 6p21.3 major histocompatibility complex, class I, C. https://www.doczj.com/doc/6e4788923.html,
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功能强大的片段分析
? 片段长度多态性
? AFLP和T-RFLP
? BAC指纹图谱 ? 相对荧光定量
? LOH和QMPSF
? 构象分析扫描突变
? SSCP和CSCE
? InVivoScribe B细胞和T细胞clonality ? TILLING
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相对荧光定量
细胞淋巴瘤(cell lymphomas) 及其他肿瘤中的等位基因丢失 染色体不平衡 部分和全部染色体丢失
LOH (Loss of Heterozygosity) P53 17p13.1
非遗传的in-vivo LOH
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寻找新的SNP位点
Mutation Profiling - SNP Discovery and Analysis
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SNP扫描
SNPlex? Genotyping System
SNaPShot? Multiplex System SNP Validation Linkage Mapping and Association Studies Pharmacogenomic Research
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SSCP突变快速扫描
SSCP
Amplify region of interest Heat denature in HiDi formamide and NaOH
A T A T A T
G C G C
Rapidly chill and electrophoresis under non denaturing conditions
G
C
WT Wild Type
20
rfu
MUT
mobility
Mutant
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第十八章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序 仪 首页习题习题参考答案 名词解释选择题简答题 、名词解释 1. 荧光标记引物法 2 ?荧光标记终止底物法 3. 多色荧光标记引物法 4. 多色荧光标记终止底物法 5. Edman降解法 6. San ger双脱氧链末端终止法 7. 平板电泳型DNA测序仪 &毛细管电泳型DNA测序仪 9.缩微生物处理器 二、选择题 【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案） 1. DNA的一级结构是指（）； A. DNA空间构象 B. 核苷酸序列 C. 碱基序列 D. 氨基酸序列 E. DNA双螺旋结构 2. 下列有关测序反应体系反应原理的叙述中，错误的是（） A. 加入的核苷酸单体为2 '-脱氧核苷三磷酸 B. 低温退火时，引物与模板形成双链区
C. 沿着3 - 5的方向形成新链 D. DNA聚合酶结合到DNA双链区上启动DNA的合成 E. 形成的新生链与模板完全互补配对 3. 双脱氧链末端终止法测序反应与普通体外合成DNA反应的主要区别是（） A. DNA聚合酶不同 B. dNTP的种类不同 C. dNTP的浓度不同 D. 引物不同 E. 双脱氧链末端终止法测序反应体系中还需加入d dNTP 4. 下列荧光标记方法中，可以将A、C G T四个测序反应在同一管中完成而不影响测序结果的是（） A. 单色荧光标记引物法 B. 单色荧光标记终止底物法 C. 多色荧光标记引物法 D. 多色荧光标记终止底物法 E. 多色荧光标记法 5?下列哪一荧光标记法，必需将A、T、C G四个测序反应分管进行，但可以合并在一个泳道内电泳（） A. 单色荧光标记引物法 B. 单色荧光标记终止底物法 C. 多色荧光标记引物法 D. 多色荧光标记终止底物法 E. 多色荧光标记法 6. 毛细管电泳型测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的原因是由于（） A. 电极弯曲 B. 电泳缓冲液蒸发使液面降低 C. 毛细管未浸入缓冲液中 D. 毛细管内有气泡 E. 测序样本未注入毛细管中 7. 毛细管电泳型测序仪电泳时产生电弧，主要原因是（） A. 电泳缓冲液漏出
3500基因测序仪操作流程 一、启动仪器 1．按下仪器的电源键，当仪器指示灯为绿色时表明仪器正常开启。 2．打开与仪器连接的计算机，点击Ctrl+Alt+Delete界面，点击Administrator，输入密码：Administrator。等待Daemon（隐藏图标），Server Monitor程序完全启动，Server Monitor图标上出现绿色对号时表示连接成功。 3．打开3500 Data Collection 软件，出现3500 Log In 登录界面，输入用户名和密码，本机用户名为：Administrator，密码为：Administrator1，点击“OK”，打开软件。检查所有耗材的剩余用量、仪器的信息、耗材的使用信息以及仪器维护提示灯信息。 4. 确认检测阴性、阳极缓冲液在刻度线以上，以及确认所有耗材已恢复至室温。 注：3500测序所用到的阳极缓冲液、阴极缓冲液在仪器上可存放一周，POP 胶在仪器上存放一周后需置于2-8℃保存，洗液为一次性消耗品，不可重复使用。 5. 将阴性缓冲液、阳极缓冲液、洗液等耗材安装至仪器上后，点击refresh，确认所有耗材均为有效状态。 二、仪器维护 1. 于软件主界面点击Dashbord，于菜单栏中选择Maintenance Wizards选项。 2. 将装有阳极缓冲液的耗材从仪器中取下，安装没有阳极缓冲液的容器，选择WASH pumper chamber and chanels选项，按照仪器指示，开始清洗管路并重新给毛细管灌胶直至完成全部操作。 3. 从Maintenance进入Spatial界面，按图示指示进行空间定位。结果应满足如
第十三章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪 一、名词解释 1.荧光标记引物法：将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5′端，称为荧光 标记引物法。 2.荧光标记终止底物法：将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上， 称为荧光标记终止底物法。 3.多色荧光标记引物法：是DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。将荧光染料 预先标记在测序反应所用引物的5′端，当相同碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分 别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4 种）标记引物。特定颜色荧光标记的 引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。 4.多色荧光标记终止底物法：是D NA 测序反应常用的一种荧光标记方法。将荧光染 料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。反应中将4种d dNTP 分别用4种不同 的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP 在掺入DNA 片段导致链延伸终止的同时，也使该片段3′端标上了一种特定的荧光染料。根据荧光颜色的不同来判断所代表 的不同碱基信息。 5.Edman降解法：是检测蛋白质一级结构的方法。在弱碱条件下，多肽链N末端N H2 与P ITC 反应，生成PTC－多肽。在无水强酸如三氟醋酸的作用下，可使PTC－多 肽形成ATZ 衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽。剩余多肽链可以进行下 一次以及后续的降解循环。如此不断循环，可依次使多肽链的氨基酸逐一降解， 形成A TZ 衍生物。ATZ 衍生物经水溶酸处理转化为稳定的P TH 氨基酸。 6.Sanger 双脱氧链末端终止法：是检测D NA 序列的一种方法。其原理是利用P CR，但反应体系中除了dNTP 外，还有ddNTP。ddNTP 可掺入到正在延伸的DNA 链中， 但不能同后续的dNTP 形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA 链在此终止。由于 存在ddNTP 与dNTP 的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。 7.平板电泳型DNA测序仪：为D NA 测序仪的一种类型。平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间，聚合后厚度一般小于 0.4mm 或更少，因此又称为超薄片层凝胶电泳。它具有样品判读序列长（600bp～900bp）、一块凝胶板上可同时进行多个样品测序的优点。 8.毛细管电泳型DNA测序仪：为D NA 测序仪的一种类型。将凝胶高分子聚合物灌 制于毛细管中（内径50m～100m），在高压及较低浓度胶的条件下实现D NA 片 段的快速分离。 9.缩微生物处理器：是一种新型D NA 自动测序装置。其基本结构为3层玻璃薄片和 一层聚二甲基硅氧烷薄片，各层间紧密粘合形成圆盘状，直径仅 10 厘米。在 这些薄片之间有各种反应小室、毛细管电泳通道和微瓣膜，可完成纳升级标本 的S anger DNA 测序。 二、选择题 【A型题】 1.DNA的一级结构是指（B） A.DNA空间构象
二代测序技术比较Illumina_、454_、ABI_测序仪比较.docIllumina 、454 、ABI 测序仪比较 Illumina 测序仪 Illumina公司的新一代测序仪Genome Analyzer最早由Solexa公司研发，利用其专利核心技术“DNA簇”和“可逆性末端终结（reversible terminator）”，实现自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。Illumina公司于2007年花费6亿美金的巨资收购了Solexa，就是为了促成Genome Analyzer的商品化。Genome Analyzer作为新一代测序技术平台，具有高准确性，高通量，高灵敏度，和低运行成本等突出优势，可以同时完成传统基因组学研究（测序和注释）以及功能基因组学（基因表达及调控，基因功能，蛋白/核酸相互作用）研究。 Genome Analyzer自上市以来，已经为千人基因组计划立下了赫赫战功。今年早期，荷兰科学家利用它首次绘出女性的基因组图谱。而就在前两周，《Nature》杂志上一连出现三个人类基因组图谱：炎黄一号-第一个亚洲人图谱；第一个癌症病人图谱；第一个非洲人图谱。它们全是依赖Genome Analyzer完成的。哗，一下就来仨！这和第一个人类基因组图谱的13年形成了多么鲜明的对照。 根据去年底的数据，Genome Analyzer已售出约200台，估计是市场占有率最广的。前不久，华大基因再添置了12台，准备放在香港和深圳的实验室，至此华大基因已经有29台Genome Analyzer。而著名的麻省理工学院和哈佛大学Broad研究院拥有47台Illumina测序仪。众多实验室之所以选择Illumina，看中的无疑是Genome Analyzer的高性价比。 上个月，Illumina将Genome Analyzer II升级到Genome Analyzer IIx，距年底实现单次运行获得95 GB数据的宏伟目标又近了一步。Genome Analyzer IIx有两个核心特征：其一是更大的试剂冷却器，支持超过100个测序循环，进一步提升了系统的易用性和自动化；其二是全新的流动池支架，让每轮运行所得的高质量数据增加20%。依靠系统软件和试剂的改进，Genome Analyzer IIx现在能够支持100 bp以上的配对末端读长，并在每次运行中产生超过20 GB的高质量数据。 Genome Analyzer技术的基本原理： 1. 文库制备 将基因组DNA打成几百个碱基（或更短）的小片段，在片段的两个末端加上接头(adapter)。 2. 产生DNA簇 利用专利的芯片，其表面连接有一层单链引物，DNA片段变成单链后通过与芯片表面的引物碱基互补被一端“固定”在芯片上。另外一端（5’或3’）随机和附近的另外一个引物互补，也被“固定”住，形成“桥(bridge) “。反复30轮扩增，每个单分子得到了1000倍扩增，成为单克隆DNA簇。DNA簇产生之后，扩增子被线性化，测序引物随后杂交在目标区域一侧的通用序列上。
大规模测序 1.RNA测序（RNA Sequencing）—高速序列比对 2.转录组测序（Transcriptome sequencing） 3.宏基因组测序 1.转录组是指某个物种的特定组织或细胞在某一生理功能状态下所有转录的mRNA产物的集合，是基因组遗传信息传递和表达的重要步骤和过程。 高通量转录组测序可以获得大量转录本序列信息，定量基因转录表达水平，获得基因组转录区域及其位点信息等，在基因组序列拼接注释、样品间基因转录差异表达（差异表达分析为考点）及其功能研究等方面有重要作用。 1. 有参考基因组的转录组分析技术路线
推荐平台：Illumina HiSeq 2000、Illumina MiSeq 2. 无参考基因组的转录组分析 推荐平台： Roche 454 FLX+ 二、生物信息学分析 1) 有参考基因组的转录组 1. 原始数据整理、过滤及质量评估 2. 转录组测序分析 与参考基因组比对 蛋白编码基因的表达量分析 蛋白编码基因的表达量差异分析 差异表达的蛋白编码基因的聚类分析（热图） 差异表达基因富集分析（GO、KEGG）
SNPs的分析（SNPs鉴定、同义/非同义突变、与已有SNPs数据库比对） 可变剪切分析 UTR区域鉴定 新基因/新转录本分析 3. 根据客户需求进行个性化分析 2) 无参考基因组的转录组 1. 原始数据整理、过滤及质量评估 2. 转录组测序分析： 序列拼装及拼装统计 Unigene功能注释 Unigene的功能聚类分析（KOG、GO） Unigene的代谢途径分析（KEGG pathway） Unigene的表达量分析 Unigene的表达量差异分析 差异表达的Unigene的聚类分析（热图） 差异表达的Unigene的富集分析（KOG、GO、KEGG） SNPs的鉴定 3. 根据客户需求进行个性化分析 四、经典案例 案例1：人前列腺癌融合基因鉴定 背景：人前列腺癌发病率位于男性恶性肿瘤的首位，并且发病率近年
Illumina 、454 、ABI 测序仪比较 Illumina 测序仪 Illumina公司的新一代测序仪Genome Analyzer最早由Solexa公司研发，利用其专利核心技术“DNA簇”和“可逆性末端终结（reversible terminator）”，实现自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。Illumina公司于2007年花费6亿美金的巨资收购了Solexa，就是为了促成Genome Analyzer的商品化。Genome Analyzer作为新一代测序技术平台，具有高准确性，高通量，高灵敏度，和低运行成本等突出优势，可以同时完成传统基因组学研究（测序和注释）以及功能基因组学（基因表达及调控，基因功能，蛋白/核酸相互作用）研究。 Genome Analyzer自上市以来，已经为千人基因组计划立下了赫赫战功。今年早期，荷兰科学家利用它首次绘出女性的基因组图谱。而就在前两周，《Nature》杂志上一连出现三个人类基因组图谱：炎黄一号-第一个亚洲人图谱；第一个癌症病人图谱；第一个非洲人图谱。它们全是依赖Genome Analyzer完成的。哗，一下就来仨！这和第一个人类基因组图谱的13年形成了多么鲜明的对照。 根据去年底的数据，Genome Analyzer已售出约200台，估计是市场占有率最广的。前不久，华大基因再添置了12台，准备放在香港和深圳的实验室，至此华大基因已经有29台Genome Analyzer。而著名的麻省理工学院和哈佛大学Broad研究院拥有47台Illumina测序仪。众多实验室之所以选择Illumina，看中的无疑是Genome Analyzer的高性价比。 上个月，Illumina将Genome Analyzer II升级到Genome Analyzer IIx，距年底实现单次运行获得95 GB数据的宏伟目标又近了一步。Genome Analyzer IIx有两个核心特征：其一是更大的试剂冷却器，支持超过100个测序循环，进一步提升了系统的易用性和自动化；其二是全新的流动池支架，让每轮运行所得的高质量数据增加20%。依靠系统软件和试剂的改进，Genome Analyzer IIx现在能够支持100 bp以上的配对末端读长，并在每次运行中产生超过20 GB的高质量数据。 Genome Analyzer技术的基本原理： 1. 文库制备 将基因组DNA打成几百个碱基（或更短）的小片段，在片段的两个末端加上接头(adapter)。 2. 产生DNA簇 利用专利的芯片，其表面连接有一层单链引物，DNA片段变成单链后通过与芯片表面的引物碱基互补被一端“固定”在芯片上。另外一端（5’或3’）随机和附近的另外一个引物互补，也被“固定”住，形成“桥(bridge) “。反复30轮扩增，每个单分子得到了1000倍扩增，成为单克隆DNA簇。DNA簇产生之后，扩增子被线性化，测序引物随后杂交在目标区域一侧的通用序列上。
十八章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序首页习题习题参考答案 习题名词解释选择题简答题 一、名词解释 1．荧光标记引物法 2．荧光标记终止底物法 3．多色荧光标记引物法 4．多色荧光标记终止底物法 5．Edman降解法 6．Sanger双脱氧链末端终止法 7．平板电泳型DNA测序仪 8．毛细管电泳型DNA测序仪 9．缩微生物处理器 二、选择题 【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。 1. DNA的一级结构是指（）； A．DNA空间构象 B．核苷酸序列 C．碱基序列 D．氨基酸序列 E．DNA双螺旋结构 2. 下列有关测序反应体系反应原理的叙述中，错误的是（） A．加入的核苷酸单体为2 -脱氧核苷三磷酸 B．低温退火时，引物与模板形成双链区
C．沿着3'-5'的方向形成新链 D．DNA聚合酶结合到DNA双链区上启动DNA的合成 E．形成的新生链与模板完全互补配对 3. 双脱氧链末端终止法测序反应与普通体外合成DNA反应的主要区别是（） A．DNA聚合酶不同 B．dNTP的种类不同 C．dNTP的浓度不同 D．引物不同 E．双脱氧链末端终止法测序反应体系中还需加入ddNTP 4. 下列荧光标记方法中，可以将A、C、G、T四个测序反应在同一管中完成而不影响测序结果的是（） A．单色荧光标记引物法 B．单色荧光标记终止底物法 C．多色荧光标记引物法 D．多色荧光标记终止底物法 E．多色荧光标记法 5. 下列哪一荧光标记法，必需将A、T、C、G四个测序反应分管进行，但可以合并在一个泳道内电泳（） A．单色荧光标记引物法 B．单色荧光标记终止底物法 C．多色荧光标记引物法 D．多色荧光标记终止底物法 E．多色荧光标记法 6. 毛细管电泳型测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的原因是由于（） A．电极弯曲 B．电泳缓冲液蒸发使液面降低 C．毛细管未浸入缓冲液中 D．毛细管内有气泡 E．测序样本未注入毛细管中 7. 毛细管电泳型测序仪电泳时产生电弧，主要原因是（） A．电泳缓冲液漏出
ABI与Illumina、454测序仪比较Illumina 测序仪 Illumina公司的新一代测序仪Genome Analyzer最早由Solexa公司研发，利用其专利核心技术“DNA簇”和“可逆性末端终结（reversible terminator）”，实现自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。Illumina公司于2007年花费6亿美金的巨资收购了Solexa，就是为了促成Genome Analyzer的商品化。Genome Analyzer作为新一代测序技术平台，具有高准确性，高通量，高灵敏度，和低运行成本等突出优势，可以同时完成传统基因组学研究（测序和注释）以及功能基因组学（基因表达及调控，基因功能，蛋白/核酸相互作用）研究。 Genome Analyzer自上市以来，已经为千人基因组计划立下了赫赫战功。今年早期，荷兰科学家利用它首次绘出女性的基因组图谱。而就在前两周，《Nature》杂志上一连出现三个人类基因组图谱：炎黄一号-第一个亚洲人图谱；第一个癌症病人图谱；第一个非洲人图谱。它们全是依赖Genome Analyzer完成的。哗，一下就来仨！这和第一个人类基因组图谱的13年形成了多么鲜明的对照。
根据去年底的数据，Genome Analyzer已售出约200台，估计是市场占有率最广的。前不久，华大基因再添置了12台，准备放在香港和深圳的实验室，至此华大基因已经有29台Genome Analyzer。而著名的麻省理工学院和哈佛大学Broad研究院拥有47台Illumina测序仪。众多实验室之所以选择Illumina，看中的无疑是Genome Analyzer的高性价比。 上个月，Illumina将Genome Analyzer II升级到Genome Analyzer IIx，距年底实现单次运行获得95 GB数据的宏伟目标又近了一步。Genome Analyzer IIx有两个核心特征：其一是更大的试剂冷却器，支持超过100个测序循环，进一步提升了系统的易用性和自动化；其二是全新的流动池支架，让每轮运行所得的高质量数据增加20%。依靠系统软件和试剂的改进，Genome Analyzer IIx现在能够支持100 bp以上的配对末端读长，并在每次运行中产生超过20 GB的高质量数据。 Genome Analyzer技术的基本原理： 1. 文库制备 将基因组DNA打成几百个碱基（或更短）的小片段，在片段的两个末端加上接头(adapter)。
一、技术要求 1.要求产品通过CFDA注册，具有医疗器械产品注册证； 2.可以实现在同一系统中任意切换两种不同快速测序模式： 2.1 高通量测序模式：30小时内可生成不少于120G碱基数据； 2.2 中通量测序模式：27小时内可生成不少于38G碱基数据； 3.仪器每次运行： 3.1 高通量测序模式可生成可读不少于7.8亿个片段标签序列； 3.2 中通量测序模式可生成可读不少于2.5亿个片段标签序列； 4.仪器运行成本：从样品制备到数据读取，每测量10亿个碱基对所需成本不高于50美元； 5.数据读长：单端读取序列，两种测序模式读长都可达150个碱基； 6.双端读取序列：两种测序模式读长都可达2x150个碱基； 7.样品用量：DNA样本需要0.1-1μg； 8.样品制备：扩增及测序过程为自动化操作，均在测序仪内部自动完成，无需其他辅助仪器，实验中人工干预时间少于10分钟； 9.测序结果以碱基形式显示，方便数据的比对和分析。 二、仪器性能 1.高速测序系统平台在高通量、高精度、大规模平行测序的基础上，可以完成各种测序水平应用如：1.1 DNA水平 1.1.1 新物种的基因组测序及注释； 1.1.2 已知物种深度测序； 1.1.3 定向基因区域重复测序-判定和发现新的基因多态性（如SNP）； 1.1.4 大规模筛查基因突变如插入缺失、转位等和基因多态性； 1.1.5 基因组甲基化分析； 1.2 RNA水平 1.2.1 全基因组广谱基因表达研究； 1.2.2 小RNA扫描、定量和鉴定； 1.2.3 转录组研究（RNA-Seq）；
1.3 蛋白水平 1.3.1 核酸和蛋白相互作用及定位研究（如ChIp-Seq研究）； 三、配套试剂 1.可提供完善的全套NIPT试剂及软件，包括文库构建、测序等试剂盒 2.相关NIPT试剂均已获得CFDA注册证 四、硬件系统 1.光源 1.1 波长包括但不限于520 nm、650 nm 的双LED光源系统，以及780nm的激光二极管； 1.2 仪器控制计算机； 1.3 开展实时的分析处理，直接在计算机上自动产生图像强度和有质量打分的碱基检出； 1.4 序列输出包含了准确的碱基检出和质量，这些直接来源于强度数据，而不是基于参考序列的多 色编码图； 五、配置要求： 1.1 二代高通量测序系统1套； 1.2 控制工作站不低于以下配置：Dual Intel Xeon ES-2448L 1.8 GHz CPU；96 GB RAM；硬盘750G；Microsoft Windows 7 操作系统； 1.3 仪器调试试剂1套； 1.4 配套测序试剂10盒，要求：每个测序试剂盒可检测不少于120Gb数据量，单端读长不低于 250cycles； 1.5 仪器配套软件； 六、售后服务 1.本项目供应商有能力协助用户完成货物的安装与调试，售前售后培训，24小时内响应，72小时 内到实验室； 2.保修期3年，包括仪器维修及更换零配件。 备 注： 1.所有技术要求中，其中5条（含5条）条款不满足将导致废标。 三、售后服务要求: 1．投标人应对所提供的货物提供3年的免费维修服务。 2. 开机率≥95%，仪器故障要求12小时内到达现场，48小时内解决。 3. 投标人（制造商或销售商）需在中国大陆地区设有售后服务机构和设施，并配备受过专业培训的售后服务人员。
测序技术及测序仪简介 一．第一代测序技术 1.1第一代测序技术原理 第一代DNA测序技术用的是1975年由桑格（Sanger）和考尔森（Coulson）开创的链终止法或者是1976-1977年由马克西姆（Maxam）和吉尔伯特（Gilbert）发明的化学法（链降解）. 研究人员在Sanger 法的多年实践之中不断对其进行改进，在2001年，完成的首个人类基因组图谱就是以改进了的Sanger法为其测序基础。 Sanger法原理：在模板中首先分别加入A、T、G、C和四种ddNTP 双脱氧核苷酸（加入ddNTP序列合成会终止），如下图第一个加入ddATP，这样每一个位置上的A位置会大量的被ddATP替代，然后终止，然后再分别加入其他的ddNTP，让他随机终止。这样对得到的这些序列进行跑胶。就得到了如下的胶图。根据ACGT的加入顺序和位置，获取信息。这个方法准确率高，费用高，是先合成，再测序的。
1.2第一代测序仪 第一代测序仪基于Sanger原理，用荧光标记代替同位素标记，并用成像系统自动检测，从而大大提高了DNA测序的速度和准确性。 应用最广泛的是applied biosystems（ABI）3730系列自动DNA 测序仪。例如ABI3730XL测序仪拥有96道毛细管，四种ddNTP分别用不同的荧光标记，被CCD系统识别后，直接翻译成DNA序列。
图一：ABI3730XL 二．第二代测序技术（高通量测序） 2.1 常见二代测序技术平台： 第二代测序技术一般采用边合成边测序的方法。二代测序仪市场初期，有三家公司推出了各自的测序平台，分别是： ABI公司：Solid平台 罗氏454公司：GS FLX平台 Illumina公司:Solexa Genome Analyzer 三种二代测序技术对比如表一。
第十四章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序 仪 首页基本要求重点难点讲授学时内容提要 1．基本要求 1.1了解 (1)全自动DNA测序仪的仪器结构 (2)全自动DNA测序仪各组成部分的功能 (3)全自动DNA测序仪的进展 (4)蛋白质测序仪的结构及其各部件的功能 (5)蛋白质测序仪的主要应用 1.2 熟悉 (1)荧光标记DNA的检测原理 (2)全自动DNA测序仪的常见故障及维护 (3)全自动DNA测序仪的主要应用 1.3 掌握 (1)双脱氧链末端终止法测序原理 (2)荧光标记引物法定义及特点 (3)荧光标记终止底物法定义及特点 (4)荧光标记引物法和荧光标记终止底物法的异同点 (5)蛋白质测序仪的工作原理 2．重点难点 2.1重点 (1)双脱氧链末端终止法测序原理 (2)荧光标记引物法和荧光标记终止底物法的定义及两者的异同点 (3)蛋白质测序仪的工作原理 2.2 难点
(1)荧光标记DNA的检测原理 (2)全自动DNA测序仪的结构及仪器各组成部分的功能 (3)全自动DNA测序仪的常见故障及维护 3．讲授学时 建议2学时~4学时 4．内容提要 4.1全自动DNA测序仪 4.1.1 全自动DNA测序仪的工作原理 DNA测序是指检测其一级结构--核苷酸的线性排列顺序。目前DNA测序仪的工作原理主要是利用Sanger双脱氧链末端终止法或Maxam-Gilbert化学降解法。 双脱氧链末端终止法测序原理： 是利用DNA的体外合成过程－聚合酶链反应（PCR）。反应体系中除加入4种dNTP外，还加入一种2'，3'-双脱氧核苷三磷酸（2',3'-ddNTP，N代表A、C、G、T任一碱基）。与dNTP相比，ddNTP在脱氧核糖的3'位置上缺少一个羟基，反应过程中虽然可以与正在延伸的DNA链的末端脱氧核糖3'-OH发生反应，形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中，但它们本身没有3'-OH，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止。据此原理分别设计四个反应体系，每一反应体系中存在相同的DNA 模板、引物、四种dNTP和一种ddNTP(如ddATP)，则新合成的DNA链在可能掺入正常dNTP的位置都有可能掺入ddNTP而导致新合成链在不同的位置终止。由于存在ddNTP与dNTP的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对长度不等的新生链进行分离后，就可根据片段大小直接读出新生DNA链的序列。 新生链的荧光标记： (1)多色荧光标记法多色荧光标记法的荧光染料掺入方式有两种。第一种方式是将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5'端，称为荧光标记引物法。第二种掺入方式是将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上，称为荧光标记终止底物法。
DNA测序仪的测序原理和操作规程 DNA测序仪 DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括sanger双脱氧链终止法和maxam-gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国pe abi 公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是abi prism 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程。 原理 abi prism 310型基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddntp(标记终止物法)，因此通过单引物pcr测序反应，生成的pcr产物则是相差1个碱基的3''''末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序pcr产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的ccd(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在ccd摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。 它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。pe公司还提供凝胶高分子聚合物，包括DNA 测序胶(pop 6)和genescan胶(pop 4)。这些凝胶颗粒孔径均一，避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。它主要由毛细管电泳装置、macintosh电脑、彩色打印机和电泳等附件组成。电脑中则包括资料收集，分析和仪器运行等软件。它使用最新的ccd摄影机检测器，使DNA 测序缩短至2.5h，pcr片段大小分析和定量分析为10～40min。 由于该仪器具有DNA测序，pcr片段大小分析和定量分析等功能，因此可进行DNA 测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(sscp)、微卫星序列分析、长片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析，临床上可除进行常规DNA测序外，还可进行单核苷酸多态性(snp)分析、基因突变检测、hla配型、法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定等。 试剂与器材 1．bigdye测序反应试剂盒主要试剂是bigdye mix，内含pe专利四色荧光标记的ddntp 和普通dntp，amplitaq DNA polymerase fs，反应缓冲液等。 2．pgem-3zf (+) 双链DNA对照模板0.2g/l，试剂盒配套试剂。 3．m13(-21)引物tgtaaaacgacggccagt，3.2μmol/l，即3.2pmol/μl，试剂盒配套试剂。 4．DNA测序模板可以是pcr产物、单链DNA和质粒DNA等。模板浓度应调整在pcr 反应时取量1μl为宜。本实验测定的质粒DNA，浓度为0.2g/l，即200ng/μl。 5．引物需根据所要测定的DNA片段设计正向或反向引物，配制成 3.2μmol/l，即3.2pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物，如m13(-21)引物，t7引物等。 6．灭菌去离子水或三蒸水。 7．0.2ml或和0.5ml的pcr管盖体分离，pe公司产品。 8．3mol/l 醋酸钠(ph5.2) 称取40.8g naac?3h2o溶于70ml蒸馏水中，冰醋酸调ph至5.2，定容至100ml，高压灭菌后分装。 9．70%乙醇和无水乙醇。
1蛋白质的N端测序 Edman降解法：Edman降解进行蛋白质与多肽序列分析是一个循环式的化学反应过程。包括三个主要的化学步骤：（1）偶联：异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基反应；（2）环化裂解：苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解；（3）转化：噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）；为了提高灵敏度，一是采用放射性同位素、荧光基团或有色Edman试剂, 二是采用更灵敏的鉴定手段, 如用微量薄层层析、气相色谱和高压液相色谱检出PTH氨基酸。蛋白质的液相测序仪、固相测序仪和气相测序仪的原理都是Edman 降解法。此法不能用于N端封闭的蛋白质的测序。 2蛋白质的C端测序 （1）羧肽酶法：羧肽酶法的原理就是通过检测羧肽酶逐个释放氨基酸的顺序来判断蛋白质的C端序列。其中释放氨基酸的检测有两种：（1）色谱法：直接检测所释放的氨基酸；（2）质谱法：通过测定蛋白质或多肽原分子量和释放一个氨基酸以后分子量的差值来推断所释放氨基酸种类，依次类推。羧肽酶法是近年来一种应用广泛的蛋白质及多肽C端测序方法。羧肽酶有4种，即: 羧肽酶A（CPA）、羧肽酶B（CPB）、羧肽酶Y（CPY）和羧肽酶P（CPP）。其中常用的是CPY和CPP。 （2）化学法：化学法指蛋白质或多肽与化学试剂反应后，专一性的裂解并检测C端氨基酸的方法。主要有(异) 硫氰酸法和过氟酸酐法。1、(异)硫氰酸法的原理：(异)硫氰酸法又称Schlack-Kumpf降解,该方法与Edman降解的原理类似.即化学试剂（异)硫氰酸）与蛋白或多肽的α-羧基反应，形成蛋白质或多肽乙内酰硫脲,再用裂解试剂切下C端残基,形成氨基酸乙内酰酸脲,然后利用HPLC系统分离分析游离的氨基酸乙内酰酸脲。由于不同氨基酸的乙内酰酸脲在HPLC上的保留时间不同，因此可以区分各种氨基酸。C端测序仪的原理即(异) 硫氰酸法。2、过氟酸酐法的原理：C端氨基酸残基的α-羧基与混合酸酐反应后，通过酮- 烯醇转换成氧氮杂环戊酮（恶唑酮），然后利用过氟酸或TFA，把这个环从C端截掉。然后反应依次连续进行。用质谱测定反应产物的分子量，通过相邻分子量的差值就可以得到其C端序列。 另外质谱法在蛋白质测序中发挥的作用越来越大。 Edman降解（Edmandegradation）：是测定蛋白质一级结构的方法，主要是从蛋白质或多肽氨基末端进行分析。由埃德曼（P．Edman）在上世纪50年代所创立。分为耦合、切割、萃取、转化、鉴定等几个步骤。首先在pH9．0的碱性环境下，将异硫氰酸苯酯(Ph—N=C=S，
第十八章全囱幼DNA测昏仪和蛋白质囱幼测昏 仪 首页习题习题参考答案名词解释选择题 简答题 一.名词解释 1.荧光标记引物法 2.荧光标记终止底物法 3.多色荧光标记引物法 4.多色荧光标记终止底物法 5.Edman降解法 6.Sanger双脱氧链末端终I上法 7.平板电泳型DNA测序仪 8.毛细管电泳型DNA测序仪 9.缩微生物处理器 二.选择题 【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。 1.DNA的一级结构是指（）： A.D\A空间构象 B.核昔酸序列 C.碱基序列 D.氨基酸序列 E.D\A双螺旋结构 2.下列有关测序反应体系反应原理的叙述中，错误的是（） A.加入的核昔酸单体为2'-脱氧核昔三磷酸 B.低温退火时，引物与模板形成双链区
C.沿着3'-5’的方向形成新链 D.D\A聚合酶结合到DNA双链区上启动DNA的合成 E.形成的新生链与模板完全互补配对 3.双脱氧链末端终止法测序反应与普通体外合成DNA反应的主要区别是（） A.DNA聚合酶不同 B.dNTP的种类不同 C.dNTP的浓度不同 D.引物不同 E.双脱氧链末端终止法测序反应体系中还需加入ddNTP 4.下列荧光标记方法中，可以将A、C、G、T四个测序反应在同一管中完成而不影响测序结果的是（） A.单色荧光标记引物法 B.单色荧光标记终止底物法 C.多色荧光标记引物法 D.多色荧光标记终止底物法 E.多色荧光标记法 5.下列哪一荧光标记法，必需将A、T、C、G四个测序反应分管进行，但可以合并在一个泳逍内电泳（） A.单色荧光标记引物法 B.单色荧光标记终止底物法 C.多色荧光标记引物法 D.多色荧光标记终止底物法 E.多色荧光标记法 6.毛细管电泳型测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的原因是由于（） A.电极弯曲 B.电泳缓冲液蒸发使液而降低 C.毛细管未浸入缓冲液中 D.毛细管内有气泡 E.测序样本未注入毛细管中 7.毛细管电泳型测序仪电泳时产生电弧，主要原因是（） A.电泳缓冲液漏出
基因测序仪技术参数要求 一、设备名称：基因测序仪 二、数量：一台最高限价：170万元 三、技术参数要求 1、设备要求 *1.1设备用途：适用于DNA序列测定和基因型自动分析SSR/STR、Tilling、AFLP、SNP、SSCP、甲基化等多种分析；可用于二代测序结果的进一步片段分析验证、宏基因组测序、细菌鉴定分型等科研项目。用于21-三体和性染色体多倍检测、肿瘤相关基因（EGFR、KRAS、BRCA1/2、TP53等基因）、丙型肝炎病毒基因分型检测、乙型肝炎病毒耐药基因突变检测、结核杆菌耐药基因检测等临床项目（带“”项目是临床检查项目，需提供相关的试剂盒和注册证。） *1.2设备原装进口，已获得CFDA认证，可用于临床检测2、主要技术需求 2.1内部无涂层毛细管阵列，内径≤50um 2.2具备8道全自动毛细管电泳系统 2.3具备固态长寿激光光源，采用标准电源供电，无需散热2.4检测系统采用低温CCD装置，无机械位移，同时采集所有通道信号 2.5光栅同步分光装置，更换染料不必更换硬件设备 2.6可同时进行4色以上荧光实时检测,以满足高通量片段分
析应用 2.7具备24小时测序量≥180个样品,DNA序列分析精度98.5％或以上。 2.8单次测序长度最长可达1000bp及以上 2.9可进行大规模SNP的系列研究（描述24小时可检测的SNP基因位点数量） 2.10电泳操作温度：18℃-70℃ 2.11可提供配套人类、大鼠、小鼠等各种模式生物大规模STR研究试剂盒，适用于全基因组连锁分析和目的基因的定位研究工作 2.12数据分析所用软件: 提供基本的测序软件，片段分析软件等所有设备用途所需软件；提供仪器操作和数据分析所用计算机工作站 2.13可选择的荧光种类大于6种 2.14支持8联管，96孔标准板，96孔快速板等多种模式 3、配置要求 3.1主机一台 3.2计算机：原装DELL双核处理器，500G高速硬盘，2G 内存，100/1000M网络接口 3.3仪器控制和数据分析软件 3.4装机验证校准试剂盒 3.5 软件根据客户需要进行配置
受理号：CQZ1700334 医疗器械产品注册 技术审评报告 (境内) 产品中文名称：基因测序仪 产品管理类别：三类6840 申请人名称：武汉华大智造科技有限公司 国家食品药品监督管理总局 医疗器械技术审评中心
目录 基本信息 (3) 一、申请人名称 (3) 二、申请人住所 (3) 三、生产地址 (3) 产品审评摘要 (4) 一、产品概述 (4) 二、临床前研究摘要 (5) 三、临床评价摘要 (11) 四、风险分析及说明书提示 (16) 综合评价意见 (18)
基本信息 一、申请人名称 武汉华大智造科技有限公司 二、申请人住所 武汉市东湖新技术开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B2栋 三、生产地址 武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药企业加速器3.1期24栋
产品审评摘要 一、产品概述 （一）产品结构及组成 基因测序仪由主机、基因测序仪控制软件（主机内嵌集成，版本号：V1）组成，其中主机包括主体架构、操作系统主机、光学系统、XYZ-平台、芯片平台、气液系统、电子控制系统、试剂存储系统、电源系统、显示系统。 （二）各模块主要功能 主体架构为仪器提供固定支撑；操作系统主机负责仪器控制，数据采集与处理，数据存储功能；光学系统负责测序芯片荧光信号图像采集；XYZ-平台实现测序芯片扫描需要的运动及自动对焦功能；芯片平台负责测序芯片与管路的连通、芯片的温度控制及调平；气液系统负责为仪器完成生化反应提供必要流体及气体支持；电子控制系统负责仪器电子系统的调度与控制；试剂存储系统提供试剂存储的环境；电源系统提供仪器运行需要的各种电源；显示系统为实现用户交互显示的界面；控制软件实现对仪器部件的检测及仪器流路的清洗和维护的功能，执行不同类型测序流程（任务）、监控仪器的部件状态及对仪器的配置。 （三）产品适用范围 该产品采用联合探针锚定聚合测序技术，在临床上用于对来源于人体样本的脱氧核糖核酸（DNA）进行测序，以检测基因序列，这些基因序列变化可能导致疾病或疾病易感性。该仪器在临床上仅
ABI型DNA测序仪的测序原理和操作规程 DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是ABI PRISM 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程。 【原理】 ABI PRISM 310型基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3''''''''末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。 它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。PE公司还提供凝胶高分子
氨基酸序列*测定综述 【作者】 【联系方式】 【摘要】 氨基酸序列测定是一个较老的话题,早在20世纪30年代Pauling和Corey x-射线衍射方法研究氨基酸和肽。可是近几年关于氨基酸序列的测定并不多，测定氨基酸序列要花很长时间，到了较快捷分析ＤＮＡ的方法试用成功后，直接分析蛋白质的遗传密码比分析蛋白质本身更普遍。但该文仍然将对氨基酸序列测定相关研究进展作一综述。 【引文】 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使它的分子具有生化活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酶。两个或两个以上的氨基酸化学聚合成肽，一个蛋白质的原始片段，是蛋白质生成的前体。氨基酸广义上是指既含有一个碱性氨基又含有一个酸性羧基的有机化合物，正如它的名字所说的那样。但一般的氨基酸，则是指构成蛋白质的结构单位。在生物界中，构成天然蛋白质的氨基酸具有其特定的结构特点，即其氨基直接连接在α-碳原子上，这种氨基酸被称为α-氨基酸。在自然界中共有300多种氨基酸，其中α-氨基酸21种。α-氨基酸是肽和蛋白质的构件分子，也是构成生命大厦的基本砖石之一。本文对相关研究进展作一综述。 【关键词】 氨基酸,序列;氨基酸序列测定 【正文】 1.历史背景 我们的头发,指甲……以及对生命活动有催化作用的酶的成分都有蛋白质[1]。蛋白质称为“生命活动的载体”，可见其对生命的重要性。于是科学家对其进行研究，希望找到它的本质，从而对它展开对人类有益的利用。 2.前人的工作及成果 2.1 x-射线衍射方法 20世纪30年代Pauling和Corey x-射线衍射方法研究氨基酸和肽 1963年Kendrew及同事利用x-射线分析技术分析了肌红蛋白结构 2.2高效液相层析法分析 任勇等人应用高效液相层析法和微晶纤维素薄层指纹图谱法分析分析一例稀有β-链变异体:HbDOuledRabah [β19(B1)Asn→Lys]在我国人群中首次发现一例稀有β-链变异体:HbDOuledRabah [β19(B1)Asn→Lys]。先证者女,14岁,壮族,广西靖西县人。先证者母亲及其三个兄妹均为携带者,无明显临床症状。[2] 2.3二维核磁共振谱测定 谭宁华等人在植物新环肽[太子参环肽A(HA)和B(HB)]的结构研究中,应用COL 谱较成功地解决了氨基酸序列[3] 2.4SDS-PAGE及蛋白质电泳印迹技术 周圆等人在直组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的纯化与鉴定 确证该目标蛋白得到高效表达和正确加工。随后采用Bio-Gel P30凝胶过滤层析和Mono-S 阳离子交换层析对重组人NAP-1/IL-8进行了分离纯化,纯化产品达到SDS-PAGE纯。利用琼脂糖平板法测定了纯化产品的嗜中性白细胞趋化活性,推算其比活为2.8×10~5U/mg蛋白。又利用SDS-PAGE测出重组NAP-1/IL-8的分子量约为8.5kD,但根据凝胶过滤层析的洗脱时间推定,在溶液中确实存在分子量稍大于14.4kD的NAP-1/IL-8二聚体。[4] 2.5 蛋白质自动测序仪