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血清凝集试验

血清凝集试验
血清凝集试验

血清凝集试验标准操作程序

1. 检验目的

规范血清凝集试验操作程序。

2. 实验原理

用已知的抗体在载玻片上直接与细菌纯培养物或菌悬液混合,若出现肉眼可见的特异性凝集块,表示该菌菌体含有相应的抗原。

3. 操作步骤

3.1 沙门菌血清凝集试验

3.1.1首先用可疑菌与沙门菌O多价血清(A-F)进行凝集,若呈明显凝集,提示被检菌株可能属于A-F6个群范围之内,再用H因子血清第一相(特异相)定型,最后用H因子第二相辅助定型。

3.1.2若生化反应符合沙门菌,但A-F多价血清不凝集,首先考虑是否存在表面抗原(Vi抗原),因为Vi抗原能阻断O抗原于相应抗体发生凝集,加热将其破坏。应将细菌制成菌悬液,放入沸水浴中加热15-30分钟,冷却后再次做凝集试验。若除去Vi抗原后仍不凝集,此时应考虑是否为A-F以外菌群,应送专业实验室进行鉴定。

3.2 志贺菌血清凝集试验

3.2.1首先用志贺菌属4种多价血清和鲍氏志贺多价血清做玻片凝集,如凝集再进一步做血清定型(用福氏志贺菌1-6型、痢疾志贺菌1-2型以及宋内志贺菌鉴定到种、型)。一般先用福氏志贺菌血清凝集,因我国以B群最为多见,如出现生化反应符合志贺菌,而4种多价血清不凝集的菌株,应考虑为K抗原存在,将菌液加热到100℃15-30分钟后再进行凝集。

3.2.2与各型志贺菌血清不发生凝集,菌落特征与生化反应似痢疾志贺菌,可考虑非典型性痢疾血清型,应送到专业实验室进行鉴定。

3.3致病性大肠埃希菌血清凝集试验

3.3.1 先以生化反应确定为大肠埃希菌,再以抗原分析定型。

3.3.2 用接种环挑取大肠埃希菌依次于数组多价OK抗血清做玻片凝集试验(其分组血清型见试剂说明书),若与某一单价血清呈凝集反应,可初步确定为相应血清型,再用菌液与OK 抗血清确定亚型。

3.3.3如不凝集或凝集微弱,可视为阴性。再挑取另一个菌落,如上法试验,如此检查5-10个菌落。若均不凝集,可最终判断为阴性。

3.4 霍乱弧菌血清凝集试验

3.4.1先用接种环挑取一环生理盐水于玻片上,以接种针挑取少许菌落与盐水混匀,再取稀释血清1环与之混合,立即出现凝集者为阳性。

3.4.2 若有自凝现象改用生理盐水稀释的血清再做凝集。与O1群O139霍乱弧菌抗血清凝集者菌,然后再进一步对霍乱弧菌分型。

3.5 结果判断:阴性:试验一侧及对照一侧均匀浑浊。阳性:对照一侧均匀浑浊,试验一侧明显凝集。自凝:试验一侧及对照一侧凝集。

4. 注意事项

试验时应同时用生理盐水做对照,以防止出现假阳性。

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