动物细胞工程 2
一、单选题
1．下图是一种“生物导弹”的作用原理示意图，没有与肿瘤细胞结合的“生物导弹”一段时间后被机体清除。阿霉素是一种抗肿瘤药，可抑制DNA和RNA的合成，对正常细胞也有一定毒性。下列说法不正确的是
A．单克隆抗体是由杂交瘤细胞合成和分泌的
B．活化阿霉素能抑制细胞中的DNA复制和转录过程
C．在治疗中，应先注射非活化磷酸阿霉素再注射生物导弹
D．单克隆抗体特异性强，能减轻阿霉素对正常细胞的伤害
2．下列有关生物工程描述不正确的有
①依据植物体细胞的全能性，可利用花药离体培养获得单倍体幼苗
②依据基因重组原理，可利用茎尖进行组织培养获得脱毒苗
③依据基因突变原理，可利用射线处理愈伤组织获得作物新品种
④制备单抗时先利用特定的抗原蛋白饲喂小鼠，再从小鼠脾脏中分离B淋巴细胞
⑤制备单抗时为避免病毒感染，应用聚乙二醇诱导骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合
⑥体外培养杂交瘤细胞需要在培养液中添加动物血清和抗生素
⑦制备单抗时经过选择培养基初次筛选的杂交瘤细胞即可进行体内或体外培养
A．三项B．四项C．五项D．六项
3．去年12月，上海发现了H7N9病毒感染者，用该病毒的核衣壳蛋白为抗原，采用细
胞工程制备单克隆抗体。下列叙述正确的是
A．用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体
B．体外培养单个效应B细胞可以获得大量针对H7N9病毒的单克隆抗体
C．将等量效应B细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞
D．利用该单克隆抗体与H7N9病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断该病毒感染者
4．某实验室做了下图所示的实验研究。下列相关叙述，不正确的是
A．经过程①形成诱导干细胞，提高了细胞的全能性
B．过程②是诱导干细胞结构和遗传物质发生稳定性差异的过程
C．每个Y细胞只产生一种抗体，过程③需用选择培养基进行筛选
D．过程④产生的单抗在排出细胞时不需细胞膜上的载体蛋白协助
5．将携带抗P基因、不带抗Q基因的鼠细胞去除细胞核后，与携带抗Q基因、不带抗P基因的鼠细胞融合，获得的胞质杂种细胞具有P、Q两种抗性。该实验证明了
A．抗Q基因位于细胞核中
B．该胞质杂种细胞具有无限增殖能力
C．抗P基因位于细胞质中
D．该胞质杂种细胞具有全能性
二、多选题
6．犬细小病毒(CPV)单克隆抗体(Cpv McAb)可抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制，进而杀灭幼犬体内病毒。下列相关叙述，正确的是
A．在Cpv McAb的制备过程中用到了动物细胞培养和动物细胞融合技术
B．给幼犬注射CPV后，CPV的抗体检测呈阳性，说明发生了体液免疫反应
C．在获得能分泌Cpv McAb的杂交瘤细胞的过程中需进行一次筛选
D．对杂交细胞培养时，需要无菌无毒环境，且温度、气体环境等条件要适宜
7．下列关于细胞工程的有关叙述，正确的是
A．利用花药离体培养得到单倍体植株，从紫草的愈伤组织中提取紫草素，利用细胞工程培育“番茄-马铃薯”杂种植株，都利用了植物组织培养技术，而利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗得到多倍体植株没有采用植物组织培养技术
B．在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，可能会发生细胞脱分化，染色体变异或基因突变，而不可能发生细胞分化和基因重组
C．动物细胞融合与植物体细胞杂交相比，诱导融合的方法，所用的技术手段，所依据的原理均相同，都能形成杂种细胞和杂种个体
D．单克隆抗体的制备采用了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术
8．如图为某哺乳动物生殖过程示意图（b为卵细胞）。下列相关叙述中正确的是
A．动物个体①②的产生分别属于有性生殖和无性生殖
B．动物个体②的产生表明，动物细胞核也具有全能性
C．按照动物个体②的产生方式，后代的性别比例仍为1:1
D．图中a、b、c三种细胞的产生方式，仅c为有丝分裂
三、非选择题
9．2018年《细胞》期刊报道，中国科学家率先成功地应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆，获得两只克隆猴——“中中”和“华华”。回答下列问题：
（1）“中中”和“华华”的获得涉及核移植过程，核移植是指_____________。通过核移植方法获得的克隆猴，与核供体相比，克隆猴体细胞的染色体数目_______（填“减半”“加倍”或“不变”）
（2）哺乳动物的核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植，胚胎细胞核移植获
得克隆动物的难度____（填“大于”或“小于”）体细胞核移植，其原因是________________。
（3）在哺乳动物核移植的过程中，若分别以雌性个体和雄性个体的体细胞作为核供体，通常，所得到的两个克隆动物体细胞的常染色体数目____________（填“相同”或“不相同”），性染色体组合____________（填“相同”或“不同”）。
10．研究表明，HER2／neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是
乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的
生长，目前已成为有效的生物治疗手段。
（1）原癌基因的作用是____________________。
（2）H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如图所示。制备免疫小鼠用的H蛋白（抗原）时，应构建胞外区基因，转入原核细胞表达并提纯。选择胞外区的原因是________________。为了扩增出大最胞外区需要用到PCR技术。常规PCR技术一般包括变性、退火、延伸等步骤，退火的目的是_______________。设计引物是PCR技术的关键步骤之一，某同学设计的两组引物如下表所示。_________（填“引物对A”或“引物对B”）设计不合理，并说出不合理的理由：___________________________________________。
（3）制备抗H蛋白单克隆抗体时，需将H蛋白注射到小鼠体内。这样做的目的是
_______________________制备抗H蛋白单克隆抗体时，需要用到细胞融合技术，该技术的主要优点是________________________。
（4）治疗乳腺癌时，方法之一是单独使用抗H蛋白单克隆抗体，试写出治疗乳腺癌的另一种方法_________________________________。
11．癌胚抗原（CEA）是某些癌细胞表面产生的一种糖蛋白，临床上通过制备CEA的单克隆抗体来诊断癌症。回答下列问题。
(1)一般不直接用单个的B淋巴细胞培养形成细胞群的办法来生产单克隆抗体。原因是____________。
(2)制备CEA的单克隆抗体时，给小鼠注射的CEA相当于_______，能使小鼠产生免疫反应。
(3)杂交瘤细胞的扩大培养，既可在体外培养，也可注射到小鼠_______内培养。体内培养与体外培养相比，其优点是_________________________________________________。
(4)已知小鼠正常细胞中合成DNA有D和S两种途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。而小鼠骨髓瘤细胞中没有S途径，只有D途径。将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得融合细胞（一般只考虑细胞两两融合），经过多次筛选后生产单克隆抗体。请回答：
①试管中除融合的杂种细胞外，还有______种融合细胞。
②某同学设计了一种方法，尝试从培养液中分离出杂种细胞。
方法：用______________的培养液培养融合细胞，收集能增殖的细胞。
原理：_______________________
12．资料1:小鼠制备的抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕试剂盒”，检测早孕的准确率在90%以上。
资料2:葡萄糖异构酶在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸为目标氨基酸后，用有效方法以脯氨酸替代甘氨酸，结果其最适反应温度提高了10—12℃，使蛋白质空间结构更具刚性。
资料3:巴西是全球最大的甘蔗生产国，但是甘蔗易受螟虫的侵害。2017年6月8日，
巴西向世界宣布，全球首款能抵抗螟虫的转基因甘蔗已培育成功，并且批准该品种进入市场。
（1）资料1中，在该“单抗”的生产过程中，将_________________作为抗原对小鼠进行接种后，从脾脏中提取B淋巴细胞，并设法将其与鼠的骨髓瘤细胞融合，再用特定的选择培养基进行筛选，选出融合的杂种细胞，对该细胞还需进行克隆化培养和_________检测，经多次筛选，就可获得足够数量的符合需要的_________________。
（2）资料2中提到的生物技术属于____工程的范畴。在该实例中，直接需要操作的
_________________(选填“肽链结构”、“蛋白质空间结构”、“基因结构”)。
（3）资料3中获得转基因甘蔗的过程中，核心步骤是________________________，为了避免目的基因和运载体的自身连接成环和反向连接，应该采取的措施是___。
13．埃博拉病毒（EBO）呈纤维状，EBO衣壳外有包膜，包膜上有5种蛋白棘突（VP 系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞强烈识别。请回答下列问题：
（1）基因疫苗指的是DNA疫苗，要获得编码GP蛋白抗原的基因疫苗，首先要提取出病原的RNA，并将RNA____________形成DNA。要大量获得表达特异抗原的基因，可采用____________进行扩增。
（2）以GP蛋白作为疫苗比基因疫苗更安全，其原因是GP蛋白自身没有感染力，但保留有__________。为了从牛分泌的乳汁中生产GP蛋白，在基因导入牛的___________（受体细胞）前，基因的首端必须含有使其特异性表达的__________________，才能驱动转录过程，这种通过分泌乳汁来生产所需要的药品的转基因动物称为____________。转基因牛是否培育成功，可以通过_____________技术从分子水平进行检测。
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动物细胞工程12月20日 动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 一、动物细胞培养 1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理：细胞增殖 3、过程 分散成单个细胞， 制成细胞悬液 注意： ①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。 ②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。 ③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。 思考回答： ⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养? 答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。 ⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么? 答：不需要。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 ⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 答：主要是蛋白质，不行，因为胃蛋白酶作用的适宜PH约为2，当ＰＨ大于6时就会失去活性，多数动物细胞培养适宜PH为7.2－7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。（胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2－8.4，胰蛋白酶活性较高） ⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?
答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤，因此必须控制好消化时间。 ⑸、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 4、重要概念 ①细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 产生原因：培养贴附性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖。 培养要求：培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒，易于贴附。 ②细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 ③原代培养：动物组织消化后的初次培养 ④传代培养：原代培养的细胞由于接触抑制不再分裂，需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这种培养叫传代培养。 5、培养条件： ⑴无菌无毒环境：无菌——对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素。；无毒——定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害。 ⑵营养： 成分：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分。 培养基类型：合成培养基（将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基） ⑶温度和pH值：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜，多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。 ⑷气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95％空气加5％CO2的混合气体的培养箱中进行培养。O2：是细胞代谢所必需的CO2主要作用是维持培养液的pH。 6、应用：生产有重要价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。基因工程中受体细胞的培养。用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。科学家培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据。
细胞工程第一讲 一、概述 1、细胞工程（cell engineering ）定义 应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的原理方法与技术，按照人们的需要，在细胞水平上进行遗传操作，包括细胞融合、核质移植等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。 2、细胞工程的研究内容 （1）动植物细胞和组织培养 植物细胞培养主要用于育种和代谢产物制备，日本等国家用生物反应器培养人参细胞生产有效药用成分。 动物细胞培养用于制备单克隆抗体、疫苗、生长因子等。 （2）细胞融合 改良性状，培育新品种 （3）染色体工程 细胞工程 动植物细胞和组织培养 细胞融合 染色体工程 胚胎工程 细胞遗传工程 器官培养 组织培养 细胞培养 （快速繁育和产物大量制备） （改良性状，培育新品种） （培育新品种，单倍体和多倍体） （获得人们需要的成体） （无性繁殖，改变性状） 克隆 转基因技术
主要用于培育单倍体或多倍体新品种，如四倍体小麦，八倍体小黑麦 （4）胚胎工程 主要是获得人们需要的成体 如：胚胎分割技术、胚胎融合技术、卵核移植技术、体外授精技术等最成功应用于畜牧业获得优良品种与胚胎保存 对人类来说主要用于不孕症获得试管婴儿 （5）细胞遗传工程 克隆：无性繁殖，动物克隆指经无性繁殖而产生遗传性状完全相同的后代个体。 转基因技术：将外源基因整合到生物体内，能够表达并稳定遗传给后代的实验技术。 3、细胞工程的优势 （1）避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作，只需将细胞遗传物质直接转移到受体细胞中就能够形成杂交细胞。 （2）不仅可以在植物与植物之间、动物与动物之间、微生物与微生物之间，甚至可以在三者之间形成前所未有的杂交物种。 4、细胞工程发展 （1）萌芽阶段---理论渊源和早期的尝试（20世纪初-30年代中期）德国植物生理学家Haberlandt在1902年提出植物细胞的全能性。认为植物细胞有再生出完整植株的潜在能力。 美国生物学家Harrison 是公认的动物组织培养的创始人，1907年，以淋巴液为培养基观察了蛙胚神经细胞突起的生长过程，
第2章细胞工程 第2节动物细胞工程（第1课时） 【学习目标】 1.认同动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外进行的培养，由此分析、推出培养动物细胞需要满足的基本条件。 2.尝试建构动物细胞培养基本流程。 3.认同动物细胞培养是动物细胞工程的基础。 4.简述干细胞的应用；通过探讨干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险，理性看待生物技术的应用，增强社会责任感。 【重点难点】 1.动物细胞培养的过程及条件。 2.干细胞在生物医学工程中的应用。 【学习新知】 学习任务一动物细胞培养 阅读教材43-45页，完成以下内容： 活动1：通过“人造皮肤”事例，概述动物细胞培养的概念。 活动2：认同动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外进行的培养，由此分析、推出培养动物细胞需要满足的基本条件。 （1）分析机体给体内的细胞提供了哪些适宜的条件使其能够维持正常的生命活动？ （2）动细胞培养实际上是在体外模拟体内的生理条件进行的培养，你认为体外培养动物细胞需要满足哪些条件？ 活动3：尝试建构动物细胞培养基本流程。 （1）依据动物细胞培养的概念，初步建构动物细胞培养的流程。 （2）根据教材中“动物细胞培养的过程”的内容，并结合图2-12，思考、回答下列问题： ①培养前为什么要将组织分散成单个细胞？ ②怎样将组织分散成单个细胞细胞？ ③培养一段时间分裂会受阻,这是为什么？怎样解决这一问题？ ④什么是细胞贴壁、接触抑制、原代培养、传代培养？ （3）在分析、回答问题的基础上完善动物细胞培养的基本流程。 活动4：比较动物细胞培养与植物组织培养有什么相同和不同之处？
活动5:完成[自学检测1] [自学检测1] 1.判断下列有关动物细胞培养的表述是否正确。 (1)培养环境中需要O2，不需要CO2。（） (2)动物细胞培养要经过脱分化形成愈伤组织。（） (3)培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清。（） (4)培养瓶中的细胞均需要定期用胰蛋白酶处理，分瓶后才能继续增殖。（） (5)培养过程除需要无菌、无毒的环境外，还要定期更换培养液。（） 2.回答下列有关动物细胞培养的问题： (1) 细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物的细胞增殖能力，有丝分裂，老龄动物的细胞则相反，所以一般来说，细胞比动物的细胞易于培养。同样，分化程度越低的细胞增殖能力越强，所以更（“容易”或“难以”）培养。 (2) 在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面______________时，细胞通常会停止，这种现象称为细胞的______________现象。这时要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，常用的酶是______________。 学习任务二干细胞培养及其应用 活动1：阅读教材46-47页，思考、回答下列问题： （1）什么是干细胞？它有哪些类型？这些类型各有怎样的特点和哪些方面的应用？ （2）科学家是怎样获得诱导多能干细胞（iPS细胞）的？这种细胞与胚胎干细胞相比，有哪些应用优势？ （3）干细胞用于临床治疗，可能存在什么问题？ （4）你如何看待干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险？ 活动2：完成[自学检测2] [自学检测2] 3.干细胞有着广泛的应用前景，判断下列相关叙述是否正确。 (1)干细胞就是从胚胎中分离提取的细胞。（） (2)造血干细胞主要存在于成体的骨髓、外周血和脐带血中，可以分化为各种血细胞。（） (3)不同类型的干细胞，它们的分化潜能是有差别的。（）
动物细胞培养及无血清培养研究进展 摘要：细胞培养是生物学中一项重要技术，应用较为广泛，目前已渗透到细胞生物学、生物化学、临床检验学等多个领域。其中动物细胞培养是动物细胞工程中最常用的技术手段，而且动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。本文主要介绍了动物细胞培养和其中发展较快的无血清培养技术的研究应用进展。为未来实际的研究和生产作一些总结和展望。 关键词：动物细胞；细胞培养；无血清培养基 1 引言 组织培养技术创建于18世纪末，之后于1907 年美国生物学家Harrison在无菌条件下，以淋巴液为培养基在试管中培养蛙胚神经组织宣告成功后，才逐渐发展成为一种从机体获取细胞，模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖并维持结构和功能的实验技术。这种技术为细胞学、遗传学、病毒学、免疫学的研究和应用做出了重要贡献。近年来生命科学迅速发展，各种在分子水平的实验如核移植、细胞杂交、DNA 介导的基因转移等，都是借助细胞培养技术而得以实现的。然而各领域的动物细胞培养技术发展并不平衡，存在许多的局限性，使用范围有限，还未出现适合整个生命科学研究领域的培养体系。因此本文对细胞培养及大规模培养、无血清培养做一些总结。 2动物细胞培养 动物细胞培养方式包括原代和传代培养。培养方式有贴壁、悬浮以及固定化培养等方式。 2.1动物细胞培养的基本概念 细胞培养指的是从体内组织取出细胞，并为其提供一个无菌、具有适当温度及酸碱度的环境，给予充分营养，使其生长繁殖并维持其结构和功能的一种培养技术。从体内取出的细胞进行的首次培养式细胞培养最初的阶段，也称为原代培养。原代培养式细胞培养当中重要的必经环节。原代培养细胞生长到一定时候后，由于受群体环境影响，需要转移到另一个容器，这种培养称为传代培养。传代后的动物细胞与原代培物形状一致的话，则表示传代成功，这些细胞称为细胞系或细胞株。 2.2动物细胞培养技术的内容
动物细胞工程试题 1用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是（C）A都须用液体培养基 B都需用培养箱 C都要在无菌条件下进行 D都可体现细胞的全能性 解析：动物细胞离体培养主要是获得细胞的代谢产物，植物体细胞离体培养体现的是全能性。植物体细胞是固体培养基。动物体细胞培养需要二氧化碳培养箱。 动物细胞培养： 1、动物细胞的培养：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 2、动物细胞培养液的成分：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。 3、动物细胞培养液的特点：液体培养基含动物血清。 4、动物细胞培养需要满足以下条件 (1)充足的营养供给——微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。 (2)适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。 (3)无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 (4)气体环境：95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 5、动物细胞培养的过程： 取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理
分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 2下列关于细胞工程的叙述，错误的是（D） A. 电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B. 去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C. 小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体 D. 某种植物甲乙两品种的体细胞杂交与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同 解析：A正确诱导原生质体融合的方法有物理法（离心振动电刺激）化学法（聚乙二醇PEG）生物方法（灭活的病毒）. B正确去除植物细胞壁需要纤维素酶和果胶酶，将动物组织分散成单个细胞需要胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间。C正确小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合既可以无限增殖，又可产生特异性抗体。D错误，假设甲植物体细胞是2N,乙植物体细胞是2M，甲乙体细胞杂交染色体数目为2N+2M；而甲乙品种杂交染色体数目是N+M。 3制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括（A） ①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植 A．①②B．①③C．②③D．③④ 解析：单克隆抗体的制备过程是人工诱导经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，再经筛选获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，经过培养获得的杂交瘤细胞获得单克隆抗体。 4利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（D） A. 用纯化的核衣蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体 B. 体外培养单个浆细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体
动物细胞培养总结 一．实验准备 1.实验器械、器皿的清洗和消毒 （1）清洗和包装 离心管，2ml,15ml)若干，冻存管若干放进铝饭盒，用牛皮纸包裹，系紧棉绳，用笔在饭盒上和牛皮纸上标记盒内所装物品名称、数量、日期和所属人名称。 蓝枪头两盒，黄枪头白枪头各一盒用牛皮纸包裹，用棉绳扎紧。 取适量蒸馏水于4L玻璃瓶，瓶盖拧松半圈。 过滤器，250ml玻璃瓶，500ml玻璃瓶用自来水毛刷洗涤剂刷洗，蒸馏水润洗，烘干。 过滤器两部分分别包裹，先将瓶口部位用锡纸包裹后，再罩以牛皮纸，再用棉布密包起来，用棉绳扎紧。 玻璃瓶拧下瓶盖，瓶身浸酸。浸酸时应注意安全，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁以便浸酸结束后清洗耐酸手套，防止走动时酸液滴到地板上不好清洗。瓶口慢慢沉入液面下，注意缓慢降低瓶身，使液体慢慢浸入瓶内，以免产生气泡溅出酸液，发生危险。浸酸时器皿要充满酸液，勿留气泡，浸泡过夜。取出瓶身时，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁，取出后将瓶身放入盆内水中在转移至水池边清洗，以免酸液滴落地板不好清洗。换水洗几次，待水澄清后开始冲洗，每瓶都用自来水灌满，倒掉，重复15次，再用
蒸馏水漂洗5次，去离子水漂洗3次，烘干备用。 （2）消毒灭菌 1>全自动高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，放入物品，瓶类物体须拧松盖子后放最上面一筐，盖上灭菌锅盖，拧紧盖子至温度显示栏的左上角有一红点亮灯，按start开始升温。若灭有无菌水或玻璃瓶待降温至常温再打开，打开后立即拧紧，无菌水瓶口封上封口膜。若没灭瓶类物品，降温至80度左右即可打开灭菌锅，须戴上线手套取出。 2>手提式高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，检查设定是否为121度20分钟，放入物品，盖上灭菌锅盖，注意导气管一定插到锅底并不能堵塞，用手对称地拧紧锅盖螺栓，再用扳手继续拧紧。加温升压之前，先打开排气阀门，加温约半小时后见排气阀处开始排残留在锅内的冷空气，排气五分钟，关闭排气阀，继而开始升压。灭菌后不要立即打开气阀放气以免水汽喷出。待自然降温至常压才能打开气阀。 玻璃瓶须拧紧，饭盒，枪头灭菌后放入烘箱烘干备用。 2.无菌间消毒及设备检查 用84消毒液拖地，用原液按照1：29的比例兑水，抹布、拖把擦洗。配400ml 75%酒精于盆中，用酒精棉仔细擦拭CO2培养箱，超净台，超净台内物品，显微镜，桌面，若培养箱内未培养细胞可以再打开高温灭菌模式将培养箱灭菌一次。 用蒸馏水擦拭清洗水浴锅内壁，注意底座不要沾水。
细胞培养技术
细胞培养发展史及其应用 （一）前言 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harriso n)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 所谓动物细胞培养(亦称组织培养)既有别于植物细胞培养，又与微生物的培养完全不同。所谓动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工条件下的生长、增殖过程，在此过程中细胞不再形成组织。 由于动物细胞培养是在人工条件下进行的，便于调控和观察，因而成为现今研究动物的物质代谢过程、染色体的形态变化、以及遗传物质的表达调控等高难领域的既便利而又有效的新方法。同时，随着现代生物化学、分子生物学、分子遗传学、以及现代医学的发展，细胞培养也在许多应用领域充分展示了其巨大的发展潜力，并已为世人所关注。尽管如此，动物细胞培养仍是一门年轻的新学科，在发展之初被混淆于动物组织培养之中。 （二）细胞培养技术及其历史 细胞培养的历史最早可追溯到19 世纪末，据可考证的资料记载W ilhelm Roux是第一个进行动物组织培养实验的人。 1885年Wilhelm Roux 将鸡胚髓板放置于温热盐水中使之维持存活了数天，是有记录的第一个体外移植成功的例子。 1887年Arnold把恺木的木髓碎片接种到蛙的身上。当白细胞侵入这些木髓碎片后，他把这些白细胞收集在盛将盐水的小碟中，接下来观察到这些白细胞在运动，并存活了一个短的时间。
课题第三章细胞工程 第２节动物细胞工程 【学习目标】 1.简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 2.简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 3.了解体细胞核移植技术的应用前景。 预习案 【使用说明及学法指导】 1.阅读课本第53—63页，独立完成基础知识梳理和预习自测，用时10~15分钟； 2.不会的或有疑问的地方用双色笔标出，留到课堂解决； 3.正课结束后及时整理导学案，进行纠错反思。 Ⅰ.教材助读：基础知识梳理 一．动物细胞工程 1.常用的技术手段:、动物细胞核移植、、单克隆抗体的制备等。 2.基础:。 二．动物细胞培养 1.原理：____________。 2.概念:从动物机体中取出相关的组织，将它分散成，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞 生长和增殖。 3.过程： 取动物组织块 分散组织细胞:剪碎和用或胶原蛋白酶处理一段时间 配制细胞悬浮液 原代培养:具有_____生长和______抑制的特点
传代培养：????? ①先用胰蛋白酶等处理贴满瓶壁的细胞，再分瓶继续培养②10～50代左右时，细胞增殖缓慢，甚至停止 ③部分细胞核型发生改变，获得不死性，能无限增殖 4.条件 ⑴无菌、无毒的环境：对__________和所有___________进行无菌处理。 ⑵营养：合成培养基中有糖、_______、__________、无机盐、_________，通常需加入血清、血浆等。 ⑶温度和pH ：①适宜温度：_________±0.5 ℃。 ②适宜pH ：___________。 ⑷气体环境：主要是____和______，O 2是________所必需的，CO 2的主要作用是维持培养液的_____。 5.应用 ⑴生产生物制品：如_____疫苗、干扰素、_____________的生产。 ⑵检测__________，判断某种物质的______。 ⑶应用于基因工程：动物细胞是基因工程技术中常用的___________，离不开动物细胞培养。 ⑷用于_____、______、药理等方面的研究，如筛选抗癌药物等。 三．动物细胞核移植技术和克隆动物 1.理论基础：动物的细胞核具有________。 2.概念：将动物的一个细胞的________，移入一个已经去掉细胞核的__________中，使其重组并发育成一个___________，最终发育为动物个体。用_________的方法得到的动物就是克隆动物。 3.分类：包括________________和________________，其中_______________较易成功。 4.过程： 5.应用前景 ⑴在畜牧生产中：可以加速家畜遗传改良进程，促进________________。 ⑵在保护濒危物种方面：可增加这些动物的__________。 ⑶在医药卫生领域：转基因克隆动物可以作为______________生产珍贵的医用蛋白。 ⑷在治疗人类疾病方面：转基因克隆动物细胞、组织和器官可以作为___________的供体。 ⑸人的核移植胚胎干细胞经诱导分化，形成相应的组织、器官后，可以用于_________________。 ⑹研究胚胎发育及衰老过程，追踪研究疾病的__________和___________。
动物细胞工程教案 【教学目标】 1．知识目标： 1.1简述动物细胞的培养过程、条件及其应用； 1.2简述克隆动物的概念含义和基本原理 1.3简述体细胞核移植技术和动物克隆技术，以及应用前景 1.4简述细胞融合的方法过程和单克隆抗体的制备过程应用 1.5关注克隆技术的伦理问题。 2．能力目标： 2.1通过阅读、自学、质疑、讨论、总结等环节，提高获取知识、分析问题和解决问题的能力 2.2由植物体细胞杂交技术导出动物细胞融合过程，培养学生的知识迁移能力和思维能力 2.3通过设计单克隆抗体的制备过程，使学生了解生物科学认识模式发展学生的创造性能力。 3．情感态度与价值目标： 3.1 初步培养学生探索、创新和合作精神 3.2 明确知识不断更新并向前发展，认识到学无止境，形成终生学习的意识。 【教学重点】简述动物细胞的培养过程；举例说出细胞融合和单克隆抗体；关注克隆技术的伦理问题。 【教学难点】动物细胞培养过程；细胞融合技术和单克隆抗体的制备。
【教学设计思路】采用自学、指导模式对动物细胞培养技术进行较深刻、透彻地学习，这部分内容主要是解决三个问题：（1）为什么要进行动物细胞的培养？（2）什么是动物细胞的培养？（3）怎样进行动物细胞的培养？第三个问题是本节课的重点。关于动物细胞的培养过程，教师可参照教材中的动物细胞培养过程示意图进行讲解，讲解中要注意区分原代培养和传代培养这两个概念。对于动物细胞培养的条件，则要从学生已有的内环境的知识出发，启发学生自己动脑思考这个问题，以加深对培养条件的理解。为学习其他动物细胞工程打好基础。在动物体细胞核移植技术及克隆动物的教学中，可首先让学生列举所知道的克隆动物，调动学生已有的知识。随后可向学生提问：克隆动物的方法与植物组织培养一样吗？然后向学生说明目前动物体细胞克隆是通过核移植技术来实现的，以引入本节的主题。关于核移植技术发展简史，可让学生在课堂上阅读，本节的重点和难点是在动物体细胞核移植技术过程，教材中选用了“多利羊”为例，来说明体细胞核移植的过程。教师应充分利用和挖掘教材内容，带领学生一步步弄清动物体细胞核移植技术的过程。对于体细胞核移植技术的应用前景和存在的问题这部分内容，可结合本节教材“积极思维”中的有关问题，让学生讨论。在细胞融合和单克隆抗体的教学中，教师启发学生回忆植物体细胞杂交过程；通过新旧知识对比，引导学生大胆推测动物细胞融合过程，培养学生知识迁移能力，并通过课件演示细胞融合的全过程，加强教学的直观性，培养学生的观察、思维能力。教师要讲明动物细胞融合技术的意义和应用，以便自然过渡到单
第三节动物细胞工程 课前?预习导学 KEQMJVYI J XWAOXL'F 退疋$导航—* ............ .?八? 蘭物学引：：：：：：：：：：：：：：：：： 一、动物细胞与组织培养 1 ?概念：指在体外模拟___________ 环境，将动物细胞或组织在 ________ 、_________ 和营养充 足的条件下培养，使其继续生长、增殖并维持原有结构和功能的技术。 2. _____________________________________________________________ 常用技术：动物细胞工程一般包括_________________________________________________________________ 、体细胞克隆、细 胞融合、 ___________________ 等技术。 3.动物细胞培养与动物组织培养的主要区别： 动物细胞培养需要用___________ 等使组织块中的细胞离散，而动物组织培养过程则不需 要。 4. _____________________________________________________________ 培养基分类：根据营养物质的来源，可将培养基分为_________________________________________________ 和 ___________ 。 前者主要取自___________ 、动物组织提取液和鸡胚汁等。具有营养价值高、成分复杂的特 点。 后者是人工配制的，具有____________ 、便于控制实验条件的特点。 5.原代培养与传代培养。— (1) ______________________________________________ 原代培养：指从供体获得组织或细胞的 _____________________________________________________ 。 (2) _______________________________________ 传代培养：指将原代培养的细胞后转入新的 培养瓶中 _____________________________________ 。 一般情况下，传代培养_________ 次后，细胞增殖会明显________ ，甚至完全停止。 预习交流 用于培养的动物细胞与组织为何大多数要取胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织？ 二、动物体细胞克隆 1.克隆：现在克隆是指上完全相同的分子、细胞或来自同一祖先的生物个体的 2. _________________________________________ 动物体细胞克隆：指将供体体细胞的与的细胞质进行人工 组合，借助于卵细胞的发育能力，经过培养发育成胚胎进而形成的技术。体细胞克隆的关键是技术。 3.动物细胞核移植技术：一种利用显微操作技术将某种动物细胞的______ 移入同种或 异种动物的去除细胞核的成熟___________ 内的技术。 预习交流 “多利”等克隆动物的培育成功，为何只能说明动物细胞核具有全能性，而不能说明动
?一、半连续式培养 1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。采用机械搅拌式生物反应器系 统，悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基，让其生长至一定的密度，在细胞生长至最大密度之前，用新鲜的培养基稀释培养物，每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4，以维持细胞的指数生长状态，随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中，每隔一定时间，定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出，然后补加细胞或载体，或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子，继续培养，从而可维持反复培养，而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量，经过几次的稀释、换液培养过程，细胞密度常常会提高。 2.半连续式特点： ·培养物的体积逐步增加； ·可进行多次收获； ·细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。该操作方式的优点是操作简便，生产效率高，可长时期进行生产，反复收获产品，可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。 二、连续式培养 1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式，采用机械搅拌式生物反应器系统。该模 式是将细胞接种与一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基；同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。理论上讲，该过程可无限延续下去。
专题2 细胞工程 2.3 动物细胞工程知识点汇总 1. 动物细胞培养 （1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 （2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 （3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 （4）动物细胞培养需要满足以下条件 ①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 ②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。 ③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。 ④气体环境：95%空气+5%CO 2。O 2 是细胞代谢所必需的，CO 2 的主要作用是 维持培养液的pH。 （5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 （1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。 （2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。 （3）体细胞核移植的大致过程是：高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减二分裂中期的卵母细胞，去核（显微操作）（注：为什么要用卵细胞？它可以提供充足的营养；操作简便；细胞质不会抑制细胞核全能性的表达）；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛。 （4）体细胞核移植技术的应用：①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育；②保护濒危物种，增大存活数量； ③生产珍贵的医用蛋白；④作为异种移植的供体；⑤用于组织器官的移植等。 （5）体细胞核移植技术存在的问题：克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。
专题2细胞工程 2.2动物细胞工程 班级：姓名： 一、单选题 1．用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是() A．都需用CO2培养箱B．都须用液体培养基 C．都要在无菌条件下进行D．都可体现细胞的全能性 2．下列有关体细胞核移植过程的叙述，错误的是() A．在体外将从卵巢采集到的卵母细胞培养到减数第一次分裂中期 B．供体细胞不一定要来自珍稀动物 C．通过显微操作技术去除卵母细胞的细胞核和第一极体 D．使用电脉冲等方法激活重组细胞使其完成细胞分裂和发育 3．绵羊的乳腺细胞是高度特化的细胞，但用乳腺的细胞核与卵细胞的细胞质融合成一个细胞后，这个细胞核仍然保持着全能性，这主要是因为() A．细胞核内含有保持物种发育所需要的全套遗传物质 B．卵细胞的细胞质内含有物种发育所需要的全套遗传物质 C．卵细胞细胞质为细胞核提供营养物质D．细胞核与细胞质是相互依存的关系4．下列关于动物细胞培奍的叙述，正确的是（） A．恶性细胞系的细胞可进行传代培养 B．培养保留接触抑制的细胞在培奍瓶壁上可形成多层细胞 C．克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变 D．二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的 5．用于动物细胞培养的组织和细胞，大都来自胚胎和出生不久的幼龄动物，其主要原因是这样的组织细胞() A．容易产生各种变异B．具有更强的分裂能力 C．取材十分方便D．具有更强的全能性 6．下列不属于克隆的是（） A．矮牵牛花的扦插繁殖B．PCR扩增人SRY基因 C．受精卵发育成新个体D．杂交瘤细胞在小鼠体内培养 7．关于动物体细胞培养过程中细胞的活动或特性，下列表述错误的是（）A．细胞通常贴壁生长B．细胞进行有丝分裂 C．细胞之间有接触抑制现象D．细胞的遗传物质均发生改变 8．下列对动物核移植技术的描述正确的是（）
一.细胞增殖周期（cell proliferatinal cycle）概念 细胞周期是描述细胞增殖和分化交替发生变化的概念。而细胞增殖周期主要是从细胞增殖角度赋予细胞活动的概念，两者不应混为一谈。细胞增殖周期是指细胞从一次分裂结束开始生长，到下一次分裂结束所经历的过程。根据细胞增殖周期不同时期的生化特点，划分为四个连续的时期，即G1期（DNA合成前期），S期（DNA合成期），G2期（DNA合成后期），M期（有丝分裂期）。如以G1期为起点，那么细胞增殖周期的各时期应循着G1-S-G2-M的顺序进行，G1、S、G2三期合称为细胞间期，此期完成细胞生长过程。M期完成遗传物质的分配。 因此，细胞增殖周期=间期（G1期+S期+G2期）+分裂期（M期）。 二.培养细胞生命期（life span of culture cells） 很多细胞特别是正常细胞，在体外的生存不是无限的，而是具有一个生命期。索维培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。培养细胞的生命期与细胞的种类、性状和原供体的年龄、健康等情况有关。人胚二倍体成纤维细胞，在不冻存和反复传代条件下，科传30~50代，相当于150~300个细胞
增殖周期，能维持1年左右的生存时间，最后衰老凋亡。如供体为成体或衰老个体，则生存时间较短；其他细胞如肝细胞或肾细胞，生存时间更短，仅能传几代或十几代。只有当细胞发生遗传性改变，如获永生性或恶性转化时，细胞的生存期才可能发生改变。正常细胞培养时，不论细胞的种类和供体的年龄如何，在细胞生命的全过程中，大致都经历以下三个阶段：原代培养期、传代期、衰退期。 三.培养细胞一代生存期 培养细胞的生存空间和营养是有限的，当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代（Passage或Subculture）。每次传代以后，细胞的生长和增殖过程都会受一定的影响。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细胞的数量和细胞增殖的速度等有关。接种细胞数量大，细胞基数大。相同增殖速度条件下，细胞数量增加与饱和速度相对要快（实际上细胞接种数量大时细胞增殖速度比稀少时要快）；连续细胞系和肿瘤细胞系比初代培养细胞增值快；；培养液中血清含量多时细胞增殖比少时快。以上情况都会缩短传代时间。 所谓细胞“一代”一词，仅指从细胞接种到分离培养时的一段时间，这已成
1.细胞融合：又称为细胞杂交，指真核生物体细胞在体外培养条件下，用人工的方法，使两个或两个以上的细胞融合成一个双核或多核细胞的过程。分为同核融合细胞（相同细胞形成的融合细胞）和异核融合细胞（不同细胞形成的融合细胞）。 2.染色体工程：是人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体的技术。广义上讲，它还包括染色体内部的部分遗传操作。 3.试管动物：是指利用精、卵体外受精、胚胎体外培养和移植获得的各种动物，又称体外受精动物。是试管动物从供体获得精子和卵子，经过成熟培养，在体外人工条件下受精，并经过一段早期发育，再将胚胎移植入受体的子宫内。 4.动物细胞工程：是借助物理、化学、生物等手段来更新细胞的遗传物质或通过受精卵细胞的改造而达到改造生物的遗传特性和生理功能的目的，从而有效提高动物的生产性能和产品质量。因此，动物细胞工程技术的应用，在当前提高动物生产性能方面已成为最基本、最重要的技术措施之一。 5.生物技术：又称生物工程或生物工艺学，是以生物科学的原理为基础，利用生物体系和工程学原理，按照人们设计的蓝图，改良或加工生物体，以提供商品和社会服务的综合性技术科学。生物技术是生物科学和工程技术的发展在非常精密有效的基础上结合在一起，形成的多学科综合的结果。 6.细胞工程：是应用细胞生物学、发育生物学和分子生物学的理论和技术，按照人们的需要，有计划、大规模的培养生物组织和细胞，以获取生物及其产品。或改变细胞的遗传组成，以产生新的种或品种，为社会和人类提供服务。 7.抗体：是一种免疫球蛋白，当机体受到细菌、病毒或其它抗原攻击时，B淋巴细胞就增殖、产生对这些抗原相应的抗体。 6.克隆：由一个细胞繁殖而形成的具有相同遗传特征的细胞。 7.单克隆抗体：由一个抗体形成细胞大量增殖形成的克隆所产生的抗体。动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体，称为单克隆抗体。 多倍体：是由于细胞内染色体加倍而形成的，既通过抑制受精卵第二极体的排出产生三倍体或抑制第一卵裂产生四倍体。目前广泛应用的诱导方法有：生物学、物理学和化学方法。 9.细胞重组：是细胞工程中将细胞融合技术与细胞核质分离技术结合，即在融合介子诱导下与完整细胞合并，重新构成胞质杂种的过程。 10.转基因动物：借助分子生物学实验手段，将特定的目的基因从某一生物体分离出来，进行扩增和加工，再导入动物的早期胚胎细胞中，使其整合到宿主动物的染色体上，在动物的发育过程中表达，并通过生殖细胞传给后代。这种在基因组中稳定地整合有人工导入的外源基因的动物称转基因动物。 11.干细胞（SC）：是指每个具有生命的有机体在从其最初形式发展成为完整体的过程中，始终保留着部分未分化的原始细胞。 12.生殖细胞：多细胞生物体内能繁殖后代的细胞的总称。包括从原始生殖细胞直到最终已分化的生殖细胞。物种主要依靠生殖细胞而延续和繁衍。
教案—黄裕军—动物细胞工程—2018年春季第5周 教学设计理念： 随着信息技术走入课堂，如何利用信息的资源性和共享性，使学科课程的教与学的方式有所突破，不再局限于传统的单向活动和双向活动，拓展学生的学习途径。这是我应用的教学模式要突破的问题。根据学习内容让学生们承包学习任务，学生先阅读教材进行初步的学习，就会发现一些问题。通过教师的指导，让学生上网查询、搜集、筛选相关的资料，经加工提炼成为每组要发表的成果，当然也有他们没有解决的一些问题和新的想法。通过课堂为平台。引导他们互教互学，互相切磋，讨论求解，共同提高，师生之间、学生之间的互动得到了充分的运用，使问题深入，加深学生对知识的理解和应用能力。利用信息资源实现学生的自主学习。教师由教学的主宰者转变为教学的参与者、指导者，以平等的身份参与到学习中去。充分发挥学生的主体作用，发展学生的兴趣、爱好和特长，使学生的创新和实践能力、自身的综合素质得到锻炼和提高。这一教学模式的尝试充分的体现了素质教育的教学原则： 1、教学要适应这个年龄阶段学生的发展的特点； 2、让学生在经验中学习； 3、教学中努力培养学生的兴趣； 4、教学中要以学生为主体； 5、教学中要充分尊重和重视个性差异； 6、教学要多样化。 教学目标： 1、知识目标： 知道动物细胞培养技术、细胞融合技术、单克隆抗体的制备及应用。 2、能力目标： （1）、提高学生获取知识的能力、逻辑思维能力以及分析问题和解决问题的能力。（2）、使学生学会获取知识和探索生物科学的基本方法。 3、情感目标： （1）、培养学生刻苦学习、勇于探究的科学精神。 （2）、提高学生的合作意识和团队精神。 重点难点： 重点：单克隆抗体。
动物细胞培养在药物领域的应用 摘要：动物细胞培养开始于本世纪初 1962 年, 其规模开始扩大, 发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法, 利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单克隆抗体等, 已成为医药生物高技术产业的重要部分。本论文主要介绍动物细胞培养在药物领域的应用。 关键词：现代生物技术、动物细胞工程、动物细胞培养、药物领域、单克隆抗体 现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。细胞工程领域更离不开细胞培养技术，杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。 一、首先介绍下动物细胞特点及其培养的基本要求和技术 1、动物细胞特点 动物细胞没有细胞壁，只有细胞膜，细胞质，细胞核，而且大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或者半固体的表面才能生长。 体外培养的动物细胞可分为原代细胞和传代细胞。原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。通常体外大量培养的动物细胞有哺乳动物细胞、昆虫细胞、禽类细胞和鱼类细胞等。 2、动物细胞培养的要求 动物细胞培养的条件：无菌、无毒的环境；营养物质（合成培养基）；温度和pH （36.5±0.5℃，7.2~7.4）；气体环境（氧气和二氧化碳）等。 其中动物细胞对营养要求更加苛刻，包括有氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或者半乳糖，除此之外还要有血清，因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。这些都是组成培养基的重要成分。 动物细胞培养还需要防止污染问题，细菌、真菌、病毒均可以导致动物细胞在培养过程中受到感染而死亡。而生物的组织材料、操作者自身、培养基、各种器皿以及环境均会引起污染。显著的污染标志是培养基的pH迅速改变，细胞外形模糊，甚至出现漂浮的集落。 3、动物细胞培养的步骤 ①无菌操作取出目的细胞所在组织，以培养液漂洗干净； ②以锋利无菌刀具割舍多余部分，切成小组织块； ③将小组织块置解离液离散细胞（解离液含有蛋白酶类）； ④低速离心洗涤细胞后，讲目的细胞吸移至培养瓶内培养。注意，哺乳动物细胞的大量培养需要提供较大的支持界面，原因前面已经说过，那是因为哺乳动物细胞只有附着在固体或者半固体的表面才能生长。 4、动物细胞培养的方法