实验报告
课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 成绩：__________________
实验名称： 蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定 实验类型： 生化实验 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得
一、实验目的和要求
1、学习SDS －聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法
2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析
3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法
二、实验基本原理
1、电泳 是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。
2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品，主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。
3、区带电泳：是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区带电泳。
4、聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel,简称PAG) 是由丙烯酰胺（Acr)和交联试剂N,N ’-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在有引发剂（如过硫酸铵或核黄素）和增速剂（如N,N,N ’,N ’-四甲基乙二胺，TEMED ）的情况下聚合而成的。
N,N ’-甲叉双丙烯酰胺
聚丙烯酰胺凝胶三维结构
5、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
是在恒定的、非解离的缓冲系统中来分离蛋白质，这主要是由蛋白质样品所带的电荷和分子质量的差异性进行分离；在电泳过程中仍保持蛋白质的天然构象、亚基之间的相互作用及其生物活性。
6、聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为：
⑴连续系统凝胶缓冲液的pH值及凝胶浓度不变。该电泳系统具有电荷效应、分子筛效应；
⑵不连续系统凝胶缓冲离子成分、pH值、凝胶浓度、电位梯度不连续，由浓缩胶和分离胶组成。由于浓缩胶的堆积（浓缩）作用，可使样品（即使是稀释样品）在浓缩胶和分离胶的界面上先浓缩成一窄带，然后在一定浓度（或一定浓度梯度）的凝胶上进行分离。该电泳系统具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。
7、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
以PAG为支持物的电泳，由于各种蛋白质所带静电荷、分子量大小和形状不同而有不同的迁移率。为消除静电荷对迁移率的影响，在整个电泳体系中加入一定量的阴离子去污剂“十二烷基硫酸钠（简称SDS）”和“强还原剂（巯基乙醇）”后，蛋白质样品就会与SDS 结合形成带负电荷复合物，而SDS作为一种变性剂和助溶剂，它能破坏蛋白质分子内和分子间的非共价键，并结合到蛋白质分子上，使分子去折叠，破坏蛋白质分子内的二级和三级结构，使蛋白质变性而改变原有的空间构象。另外，SDS－蛋白质复合物在强还原剂（巯基乙醇）存在下，可打开蛋白质分子内或肽链间的二硫键，并能避免重新氧化，这样分离出的谱带即为蛋白质亚基。蛋白质亚基的电泳的迁移率主要取决于亚基的相对分子质量大小，而电荷的因素可以忽略。
8、蛋白质亚基相对分子质量的测方法
在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的SDS时，蛋白质－SDS复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为1.8nm，而长轴则随蛋白质的分子量成正比变化。这样的蛋白质-SDS复合物在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只主要取决于它的椭圆棒的长度即蛋白质的相对分子质量的大小，而其他因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。由于蛋白质的相对分子质量不同，所形成复合物的相对分子质量不同，在电泳中反映出不同的迁移率。当蛋白质或亚基的相对分子质量在15,000～200,000之间时，电泳迁移率与相对分子质量的对数呈直线关系，符合下列方程式：
lgMr=K－bRf
式中Mr代表相对分子质量，K代表常数，b代表斜率，Rf代表迁移率。
若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标准曲线。未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得蛋白质相对分子质量。
三、实验材料和试剂
1、实验材料：
蔗糖酶样品（样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）
2、实验试剂：
(1) 30.8%凝胶贮液：丙烯酰胺(Acr) 30g，甲叉双丙烯酰胺(Bis)0.8g，加水溶解，并加水定容到100ml，过滤。贮于棕色瓶，可在4℃保存一个月。丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体及溶液是中枢神经毒物，要小心操作。
(2) 分离胶缓冲液：3mol/L Tris-HCl pH8.9
(3) 浓缩胶缓冲液：0.5mol/L Tris-HCl pH6.7
(4) 10% SDS
(5) TEMED(N,N,N′,N′－四甲基乙二胺）(增速剂）
(6) 10%过硫酸铵（引发剂）
(7) 电泳缓冲液（pH8.3）：Tris 6g，甘氨酸28.8g，SDS 2g，用蒸馏水溶解并定至1000ml,使用时稀释1倍。
(8) 蛋白质样品溶解液（2×蛋白质样品溶解液）：
内含1%SDS，1%巯基乙醇，40%蔗糖或20%甘油，0.02%溴酚蓝，0.01mol/L
Tris-HCl pH8.0缓冲液。
(9)染色液：
0.25g考马斯亮蓝R-250，加90.8ml 50%甲醇，加9.2ml乙酸，溶解混匀后使用。
(10)脱色液：75ml乙酸，50ml甲醇，加蒸馏水875ml，混匀使用。
(11)蛋白质分子量标准溶液：
①β-半乳糖苷酶（MW 116,000），
②牛血清白蛋白(MW66,200)，
③卵清蛋白（MW 45,000），
④乳酸脱氢酶（MW 35,000），
⑤限制性内切酶Bsp981（MW 25，000），
⑥β-乳球蛋白（MW 18,400）,
⑦鸡蛋清溶菌酶（MW14,400）。
四、实验器材
1、电泳仪、垂直电泳槽及配件（长短玻璃板各1块、封胶条2条、梳子1个）；
2、微量移液器：10μl、20μl、200μl、1000μl；
3、烧杯、长滴管；
4、微量注射器50μl；
5、恒温水浴100℃；
6、高速台式离心机；
7、离心管（1.5ml、0.5ml）及离心管架；
8、￠15cm培养皿（染色、脱色用）；
9、摇床（染色、脱色用）。
五、操作步骤
1、准备电泳装置：电泳槽、电泳仪。
2、配胶及凝胶的制备
（1）配制凝胶：
不连续体系SDS－聚丙烯酰胺凝胶配制
注：1、为去除抑制胶聚合的氧，加入AP前可进行抽气处理；2、过硫酸铵和TEMED的量应根据室温或聚合情况而定；
⑵、凝胶板的制备
①分离胶的制备：
按上表配制7.5ml分离胶，混合均匀后用细长头滴管将凝胶液加至长、短玻璃板间的缝隙内，再用少许蒸馏水（或水饱和的异丙醇或正丁醇）沿长玻璃板板壁缓慢注入，约5mm 高，以封住胶面，以促使聚合并使胶面平直，约30min后，凝胶与水封层间出现折射率不同的界线，则表示凝胶完全聚合，倾去水封层的蒸馏水，再用滤纸条吸去多余的水分。②浓缩胶的制备：
按上表配制5ml浓缩胶，混匀后用细长头滴管将浓缩液加到已聚合的分离胶上方，直至离短玻璃板上得约0.5cm处，轻轻将样品槽模板（梳子）插入浓缩胶内，约30min后凝胶聚合，再放置20～30min，使凝胶“老化”。小心拔去样品槽的槽板（梳子），用滤纸吸去样品凹槽中多余的水分，将电泳缓冲液倒入上、下贮槽中，电泳缓冲液应没过短板约
0.5cm以上，即可准备加样。
3、样品处理与加样
⑴样品制备
取蔗糖酶样品（样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）各50ul（样品浓度约2～5mg/ml) ，分别放入
1.5ml离心管中，10000r/min离心3min,收集上清为样品溶液。
⑵样品处理
将样品溶液分别按等体积加入“2×蛋白质样品溶解液”，100℃保温3分钟，取出冷却后，10000r/min离心1min,取上清直接加样。
⑶加样
用微量注射器向样品槽内注入10～20μl样品混合液(每孔蛋白质上样量在20～40μg）。如样品浓度较低，可适当增加上样量。
蛋白质分子量标准溶液加10μl/孔。
4、电泳
在电泳槽中加入电泳缓冲液，上槽（加样孔端）接负极、下槽接正极，接电泳仪电源，电流控制在2～3mA/样品孔，一般样品进浓缩胶前，电流控制在10～20mA，待样品进分离胶后，将电流调到20～30mA，保持电流强度不变（恒流），待指示染料迁移至下沿约0.5～1cm处停止电泳。
5、剥胶、固定和染色
电泳结束后，取下凝胶模，用专用铲子撬开短玻璃板，将凝胶一角切下做一加样标记，将凝胶板放在￠15cm培养皿内，加入染色液，固定、染色30min左右，
6、脱色
弃去染色液，加入蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色，直至蛋白质区带清晰为止。六、实验结果
这是电泳染色后的条带
2、绘制标准曲线
由下表制作标准曲线。
染料迁移距离9.2
样品相对分子质量（KDa）116.066.245.035.025.018.414.4样品迁移距离（cm） 2.8 3.5 4.2 4.8 5.7 6.67.3 MR0.3000.3780.4560.5220.6220.7220.789 lg（MW） 5.064 4.821 4.653 4.544 4.398 4.265 4.158
七、讨论、心得
1、制作凝胶时，要注意胶板需保证干净，以免造成胶体无法凝固以及制作
出来的胶板不符合实验要求；
2、在灌胶时要加水，隔绝空气，使催化反应快速进行，进而形成凝胶，还
可使分离胶上沿平直。并且加水后，保持分离胶表面的平整性，使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上。
3、由电泳结果可知，得到的样品四所含杂蛋白种类多且杂。
您的本次作业分数为：100分单选题2.生成酮体和胆固醇都需要的酶是（）。 A HMG-CoA 合成酶 B HMG-CoA还原酶 C HMG-CoA裂解酶 D 乙酰乙酰硫激酶 E 转硫酶正确答案:A 单选题 3.乳糖操纵子的调节水平在（）。 A 复制 B 转录 C 转录后 D 翻译 E 翻译后正确答案:B 单选题 4.变构效应物对酶结合的部位是（）。 A 活性中心与底物结合的部位 B 活性中心的催化基团 C 酶的-SH基 D 活性中心以外的特殊部位 E 活性中心以外的任何部位正确答案:D 单选题 5.1分子葡萄糖经糖酵解分解为2分子乳酸时，其底物水平磷酸化次数为（）。 A 1 B 2 C 3 D 4 E 5 正确答案:D 单选题 6.酶的辅基具有下述性质（）。 A 是一种结合蛋白 B 与酶蛋白结合比较疏松 C 由活性中心的若干氨基酸残基组成 D 决定酶的专一性 E 与酶蛋白亲和力较大，一般不能用透析等物理方法彼此分开正确答案:E 单选题 7.体内转运一碳单位的载体是（）。 A 生物素 B 磷酸吡哆醛
C 四氢叶酸 D 二氢叶酸 E CoA 正确答案:C 单选题 8.原核生物转录的终止因子是（）。 A α B ρ C β D σ E Γ 正确答案:B 单选题 10.下列哪一物质含有高能键？（） A 6-磷酸葡萄糖 B 1,6-二磷酸果糖 C 1,3-二磷酸甘油酸 D 烯醇式丙酮酸 E 乳酸正确答案:C 单选题 12.肝脏不能氧化利用酮体是由于缺乏（）。 A HMGCoA合成酶 B HMGCoA裂解酶 C HMGCoA还原酶 D 琥珀酰CoA转硫酶 E 乙酰乙酰CoA硫解酶正确答案:D 单选题 14.下列关于遗传密码的基本特点，哪一点是错误的？（） A 密码无标点 B 一种氨基酸只有一种遗传密码 C 有终止密码和起始密码 D 密码专一性主要由头两个碱基决定 E 病毒、原核细胞或真核细胞都利用同一套遗传密码正确答案:B 单选题 16.三羧酸循环的第一个产物是（）。 A 乙酰CoA B 草酰乙酸 C 柠檬酸 D 苹果酸
1.关于基因表达的含义，错误的是( )。 A 某些基因表达经历的转录和翻译过程 B 包括DNA合成过程 C 某些基因的表达产物为蛋白质 D 某些基因的表达产物为RNA E 某些基因表达的产物可以不是蛋白质 正确答案:B 2.体内蛋白质分解代谢的最终产物是( )。 A 氨基酸 B 肽类 C CO2、H2O和尿素 D 氨基酸、胺类、尿酸 E 肌酐、肌酸 正确答案:C 3.DNA复制时下列哪一种酶是不需要的？( ) A DNA聚合酶 B RNA聚合酶 C 连接酶 D 拓扑异构酶 E 解链酶 正确答案:B 4.大肠杆菌DNA复制中催化新链延长的酶是( )。 A DNApolⅠ
B DNApolⅡ C DNApolⅢ D DNA连接酶 E 引物酶 正确答案:C 5.有关真核生物蛋白质生物合成叙述错误的是( )。 A 肽链合成后需经过加工修饰 B 以20种氨基酸为原料 C 作为模版的mRNA需要SD序列 D 三种RNA参与蛋白质的生物合成 E 蛋白质的合成部位是在胞液的核糖体上 正确答案:C 6.下列哪种氨基酸与鸟氨酸循环无关？( ) A 赖氨酸 B 天冬氨酸 C 瓜氨酸 D 精氨酸 E 鸟氨酸 正确答案:A 7.关于蛋白质合成错误的叙述是( )。 A 氨基酸与rRNA共价相连 B 20种氨基酸都有相应的密码
C 氨基酸与tRNA3’端连接 D mRNA是多肽连合成的直接模板 E 核糖体是蛋白质翻译的场所 正确答案:A 8.原核生物DNA复制终止涉及到( )。 A Tus蛋白加强解链酶的作用 B RNA酶水解引物 C 不需要DNA聚合酶 D 连接酶的作用不需要消耗能量 E 有多个复制终止点 正确答案:B 9.RNA引物在DNA复制中的作用是( )。 A 提供起始的模版 B 激活引物酶 C 提供DNA聚合酶所需的5'磷酸端 D 提供DNA聚合酶所需的3'羟基端 E 提供DNA聚合酶所需的能量 正确答案:D 10.细胞中DNA复制时所遵守的是( )。 A DNA聚合酶可以催化5'→3'和3‘→5’两个方向的新链聚合 B 每次只能以亲代DNA一条链作为模板 C 以3‘→5’方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是不连续进行的
一是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP+生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异同 3 请对中心法则加以阐述 4 凝胶过滤是分离蛋白质混合物最有效的方法之一,请说明其工作原理并简述用该法分离蛋白质的实验操作步骤
浙江大学2001年攻读硕士学位研究生入学考试题 考试科目:生物化学,编号555 注意:答题必须写在答题纸上,写在试卷或草稿纸上均无效 一是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP 生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异
1.【第02章】对具四级结构的蛋白质进行一级结构分析时( )。 A 只有一个自由的α-氨基和一个自由的α-羧基 B 只有自由的α-氨基，没有自由的α-羧基 C 只有自由的α-羧基，没有自由的α-氨基 D 既无自由的α-氨基，也无自由的α-羧基 E 有一个以上的自由α-氨基和α-羧基 正确答案:E 2.【第02章】蛋白质分子的一级结构概念主要是指( )。 A 组成蛋白质多肽链的氨基酸数目 B 氨基酸种类及相互比值 C 氨基酸的排列顺序 D 二硫键的数目和位置 E 肽键的数 正确答案:C 3.【第02章】关于蛋白质的三级结构描述正确的是( )。 A 结构中包含了两条或两条以上多肽链 B 维系其稳定的力是次级键 C 维持其稳定的力是共价键 D 超二级结构属于蛋白质的三级结构 E 蛋白质的三级结构是蛋白质的最高结构形式 正确答案:B
4.【第02章】维系蛋白质分子中α螺旋的化学键是( )。 A 肽键 B 离子键 C 二硫键 D 氢键 E 疏水键 正确答案:D 5.【第02章】蛋白质分子中的α螺旋和β片层都属于( )。 A 一级结构 B 二级结构 C 三级结构 D 四级结构 E 五级结构 正确答案:B 6.【第02章】α螺旋每上升一圈相当于几个氨基酸？( ) A 2.5 B 2.7 C 3.0 D 3.6 E 4.5 正确答案:D 7.【第02章】蛋白质变性是由于( )。 A 蛋白质一级结构的改变
B 组成蛋白质的共价键发生变化 C 蛋白质空间构象的破坏 D 辅基的脱落 E 蛋白质水解 正确答案:C 8.【第02章】下列关于蛋白质四级结构的有关概念，何者是错误的？( ) A 由两个或两个以上亚基组成 B 参于形成四级结构的次级键多为非共价键 C 四级结构是指亚基的空间排列及其相互间作用关系 D 组成四级结构的亚基可以是相同的，也可以是不同的 E 所有蛋白质分子只有具有四级结构，才表现出生物学活性 正确答案:E 9.【第02章】下列何种结构不属蛋白质分子构象？( ) A 右手双螺旋 B α-螺旋 C β-折叠 D β-转角 E 无规则转曲 正确答案:A 10.【第02章】关于蛋白质二级结构的描述正确的是( )。 A 属于蛋白质的空间构象 B 维系其结构稳定的主要作用力是疏水键
[考研类试卷]2010年浙江大学（生物化学）考研真题 一、不定项选择题 下列各题的备选答案中，有一个或多个是符合题意的，请选出所有符合题意的备选答案。 1 酶的催化效果是由于( )。 （A）增加反应底物和产物之间的自由能差 （B）降低反应底物和产物之间的自由能差 （C）减少反应所需的能量 （D）增加反应所需的能量 2 下列关于酶的陈述正确的是( )。 （A）酶的浓度必须与底物的浓度一致才有催化效果 （B）酶增加了反应的平衡常数，因此有利于产物的形成 （C）酶加快了底物向产物转化的速率 （D）酶可以确保把所有的底物转化为产物 （E）酶可以降低底物向产物转化的活化能 3 下列关于胞内碳水化合物特征的选项中正确的是( )。 （A）在动植物体内作为能量存储 （B）是植物组织的主要结构组成 （C）是蛋白质的结合位点
（D）是有机催化剂 （E）具有细胞间相互识别的功能 4 下列是杂多糖的有( )。 （A）肝糖原 （B）透明质酸 （C）淀粉 （D）纤维素 （E）几丁质 5 下列脂类中是膜脂的有( )。 （A）胆固醇 （B）三酰基甘油(甘油三酯) （C）磷脂酰甘油 （D）脑苷脂 （E）鞘磷脂 6 下列在280nm波长处吸光值最大的是( )。（A）色氨酸 （B）半胱氨酸 （C）赖氨酸 （D）苯丙氨酸
（E）酪氨酸 6 从截然不同的环境中分离了两种不同的菌：A是从平均水温约为40℃的温泉中获得，B是从平均水温约为4℃的冰川湖中获得。 7 哪一种菌的膜脂上含有更多的不饱和脂肪酸?( ) 8 哪一种含有更长链的脂肪酸?( ) 9 在27℃哪一种可能具有更高的膜流动性?( ) 10 下列关于乙醛酸循环的描述正确的是( )。 （A）能够将脂肪酸氧化的产物最终转变成葡萄糖 （B）在氨基酸形成过程中为柠檬酸循环提供中间介质 （C）消耗细胞内储存的草酰乙酸 （D）在植物中代替柠檬酸循环而存在 11 尿素循环发生在细胞两个不同的部位，下面的哪个中间代谢产物必须要转运进线粒体内膜?( ) （A）精氨琥珀酸 （B）瓜氨酸 （C）鸟氨酸 （D）延胡索酸 12 关于对糖异生的调控下列说法正确的是( )。 （A）糖原激活腺苷酸环化酶，形成Camp
专业：农业资源与环境 姓名：李佳怡 ____________ 学号：_J6 _______________ 日期： __________________ 地点：生物实验中心310课程名称：生物化学实验（丙） 实验名称：蔗糖酶的提取 一、实验目的和要求（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 七、实验结果与分析（必填） .指导老师：方祥年 成绩:_ _同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛 二、实验内容和原理（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 六、实验数据记录和处理 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、 学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法; 2、 巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。 二、实验内容和原理 订 1、实验内容: 线 蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理: ① 酵母细胞破碎 液体剪切法―超声波法.机械搅拌法.高压匀浆法 固体剪切法一压力和研磨 非机械法——> 物理法.化学渗透法.酶溶 本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取岀 来。 ② 蔗糖酶的初步分离纯化 蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集 样品。 由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。 实验报告 细 胞 破碎 的 常 用 方 法
三、实验材料与试剂 1、实验材料 市售干酵母粉10g/组（3?4人） 2、实验试剂 石英砂，95%乙醇（-20*0,20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。 四、实验器材与仪器 电子天平（称量干酵母粉）：研碎（每组一套）：50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）：高速冷冻离心机：恒温水浴箱（50°C）；量筒（50ml）、微量移液枪（lOOOu 1）及枪头或移液管（1ml）、玻棒、滴管等;离心管（留样品I、II用）及离心管架：制冰机：一20°C冰箱。 五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10計约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨（干磨）：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：呈:取总体积40 ml的20mmol几Tris-HCl缓冲液，分2次加研磨lOmin, 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后（托盘天平上），离心lOmin （条件:4°C、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上淸液并量出体积VI （样品I）,另留1ml上淸液（样品I ）放置一20°C冰箱保存 用于蔗糖酶蛋白含量测眾、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I）,迅速放入50°C恒温水浴，保温30min, 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min a （条件：4°C, 12000r/min） ④收集+测量：收集上淸液并量出体积V2 （样品II）,另留1ml上淸液（样品II ）放宜一20°C冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测左、测左蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上淸液加入相同体枳的一20°C的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，
1. 下列哪一项不是影响酶活性的主要因素（）。 A. 温度 B. Ph C. 激活剂 D. 酶的用量 2. 变构效应物对酶结合的部位是： A. 活性中心与底物结合的部位 B. 活性中心的催化基团 C. 酶的-SH基 D. 活性中心以外的特殊部位 3. 下列各项不属于蛋白质功能的是（)。 A. 催化功能 B. 运输功能 C. 运动功能 D. 提供能量 4. 1分子葡萄糖经糖酵解分解为2分子乳酸时，其底物水平磷酸化次数为 A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 5. 乳糜微粒中含量最多的组分是 A. 脂肪酸 B. 甘油三酯 C. 磷脂酰胆碱 D. 蛋白质 6. 下列何种作用不可能改变酶活性 A. 延长酶作用时间 B. 加入酶必需的激活剂 C. 变构酶分子发生变构效应 D. 某些酶蛋白发生化学修饰 7. 在什么情况下，一种蛋白质在电泳时既不向正级移动，也不向负极移动，而停留在原点？ A. 发生蛋白质变性 B. 与其它物质结合形成复合物 C. 电极缓冲液的pH正好与该蛋白质的pI相同 D. 电极缓冲液的pH大于该蛋白质的pI 8. 1分子葡萄糖酵解时净生成多少分子ATP A. 1
C. 3 D. 4 9. 乳糖操纵子的调节水平在（）。 A. 复制 B. 转录 C. 转录后 D. 翻译 E. 翻译后 10. 有关多肽链主链肽键形成的正确描述是（)。 A. 由一个氨基酸的α—氨基与另一个氨基酸的α—羧基形成 B. 由一个氨基酸的α—氨基与自身的α—羧基形成 C. 由一个氨基酸的侧链氨基与自身的α—羧基形成 D. 由一个氨基酸的侧链氨基与另一个氨基酸的α—羧基形成 11. 在糖原合成中每加上一个葡萄糖残基需消耗高能键的数目是 A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 12. 嘧啶从头合成途径首先合成的核苷酸为（）。 A. UDP B. ADP C. TMP D. UMP 13. 糖酵解途径的关键酶之一是 A. 乳酸脱氢酶 B. 果糖二磷酸酶-1 C. 6-磷酸果糖激酶 D. 6-磷酸葡萄糖酶 14. 在蛋白质三级结构中可存在如下化学键，但不包括： A. 氢键 B. 二硫键 C. 离子键 D. 磷酸二酯键 15. 1分子丙酮酸彻底氧化净生ATP分子数 A. 2 B. 3
浙江大学830生物化学2008年试题详解及命题点评 1 什么是膜蛋白？举例说明膜蛋白的主要特征和生物学功能（10） 细胞中大约有20%-25%的蛋白质与膜结构联系在一起，称为生物膜，是生物膜功能的主要承担者。根据蛋白分离的难易及在膜中分布的位置，膜蛋白基本可分为两大类：外在膜蛋白和内在膜蛋白。 外周膜蛋白分布于膜的脂双层的表面，通过静电力或非共价键与其他膜蛋白相互作用连接在膜上，如血影蛋白，是支撑红细胞外形的膜骨架的主要成分。其特点是易于分离，通过改变离子强度或加入加入金属螯合剂即可提取，这类蛋白质都溶于水。膜内在蛋白主要靠输水力与膜脂相结合，有的部分镶嵌在脂双层中，有的横跨全膜。例如细菌视紫红质，它能将光能装化为化学能。这类蛋白质不易分离，不溶于水。 膜蛋白与生物膜的多种生物功能紧密相关，如物质运输时，红细胞膜上的带3蛋白的阴离子运输功能，如信号传导过程中，接受信号分子的膜受体蛋白，如G蛋白，谷氨酸受体等。 【恩波翔高点评】 重点，理解基本概念，并能联系不同知识点，熟悉各种膜蛋白的功能。 2 如何理解在酶催化作用的高效性和专一性理论中论述的“来自酶与底物相互作用的结合赋予了催化反应的高效性和特异性”，并举例说明。（10） 酶对催化的反应和反应物有严格的选择性，一种酶只作用于一类化合物或一定的化学键，以促进一定的化学变化，并生成一定的产物，这种现象称为酶的特异性或专一性 有的底物特异性几乎严格地只限于一种类型底物〔（脲酶）EC．3．5．1．5等〕，也有的不太严格，能作用于多数同类化合物〔（磷酸化酶）EC 3．1．3．1和3．1．3．2等〕。在后一情况下，因化合物不同反应速度也有所不同。对光学异构体来说，也只能作用其中的一种，多数情况下，反应的类型可因酶而定。当酶与底物分子接近时，酶蛋白受底物分子诱导，其构象发生有利于底物结合的变化，酶与底物在此基础上互补契合进行反应。使底物分子接近它的过渡态，降低了反应活化能，使反应易于发生，具有高效性，且能特异的与结构上更易互补，能形成酶-底物复合物的一类底物特异的反应。特异性是酶的显著特征之一，它可能是由于酶与底物相结合的部位构造上极为适合所致。因为酶的底物特异性非常显著，致使生物体内能建立起严密的代谢反应系列，而形成代谢网。 【恩波翔高点评】 酶是常考考点，其分类，作用机理，诱导契合学说，催化效率影响因素等要完全掌握。 3 什么是G蛋白？描述生物通过G藕联蛋白受体进行型号转导的机理，并举例说明。（10） G蛋白，即GTP结合蛋白(GTP binding protein)，参与细胞的多种生命活动,如细胞通讯、核糖体与内质网的结合、小泡运输、微管组装、蛋白质合成等。 G蛋白偶联系统中的G蛋白是由三个不同亚基组成的异源三体,三个亚基分别是α、β、γ, 总相对分子质量在100kDa左右。G蛋白有多种调节功能, 包括Gs和Gi对腺苷酸环化酶的激活和抑
浙江大学生物化学考博试题 2003年秋 一、名词 变性与复性构型和构象Km 氧化磷酸化脂肪酸?-氧化核糖体中心法则辅酶与辅基人类基因组计划和后基因组计划分子伴侣 二、论述 1 生物大分子中结构与功能的关系（10） 2 糖酵解过程（10） 3 选择一种分离方法，叙述其原理和操作过程（15） 4 生物化学的最新前沿进展（15） 2004年春 一、名词 ATP 构型和构象Km 分解与合成代谢核糖体中心法则Sanger 反应变性与复性启动子基因表达 二、论述 1．生物中大分子物质构成的基本结构（10） 2．葡萄糖转化二氧化碳和水过程中相应步骤和酶（10） 3．凝胶电泳的原理及应用（15） 4．生物化学的最新前沿进展（15） 2004年秋 论述
1. 蛋白质模体和结构域（15） 2. 生物膜结构特征和生物学功能（15） 3. 生物体在同化和进化中能量的转化形式与关系（15） 4. DNA复制和转录的原理（15） 5. 真核生物基因的表达和表达的调节（20） 6. 比较离子交换、分子排阻、和亲和层析的分离原理（20）2005年春 论述 1蛋白质模体和结构域（15） 2生物膜结构特征和生物学功能（15） 3生物体在同化和进化中能量的转化形式与关系（15） 4 DNA复制和转录的原理（15） 5真核生物基因的表达和表达的调节（20） 6比较离子交换、分子排阻、和亲和层析的分离原理（20）2006年 论述 1．生物化学研究的内容与目标 2．生物膜及其功能 3．蛋白膜质体与结构域 4．水对生物体的重要作用 5． DNA复制和转录的原理 6．氨基酸以R基分几类，写出其三字母、单字母的缩写
1.细胞中DNA复制时所遵守的是( )。 A DNA聚合酶可以催化5'→3'和3…→5?两个方向的新链聚合 B 每次只能以亲代DNA一条链作为模板 C 以3…→5?方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是不连续进行的 D 新链合成时与模板链碱基互补配对存在摆动性 E 随从链的合成中产生了冈崎片段 正确答案:E 单选题 2.关于核酸碱基配对的描述下列哪一项是错的？( ) A 嘌呤与嘧啶相配对 B A与T，C与G相配对 C A与T之间有二个氢键 D G与C之间有三个氢键 E 核糖与碱基 正确答案:E 单选题 3.体内蛋白质分解代谢的最终产物是( )。 A 氨基酸 B 肽类 C CO2、H2O和尿素 D 氨基酸、胺类、尿酸 E 肌酐、肌酸 正确答案:C
单选题 4.下列哪一种物质是体内氨的储存和运输形式？( ) A 谷氨酸 B 谷氨酰胺 C 谷胱甘肽 D 天门冬酰胺 E 铵盐 正确答案:B 单选题 5.下列参与原核生物肽链延伸的因子是( )。 A IF-1 B RF-1 C IF-3 D EF-Tu E IF-2 正确答案:D 单选题 6.下列关于Km的描述何项是正确的？( ) A Km值是酶的特征性常数 B Km是一个常数，所以没有任何单位 C Km值大表示E与S的亲力大，反之则亲和力小 D Km值为V等于Vmax时的底物浓度 E Km值不会因为加入抑制剂而发生改变。
正确答案:A 单选题 7.蛋白质生物合成的肽链延长过程不包括下列哪个过程？( ) A 氨基酰-tRNA根据遗传密码的指引，进入核蛋白体的A位 B A位上的氨基酸形成肽键 C P位上无负载的tRNA脱落，P位空载 D 氨基酸脱落 E 转位 正确答案:D 单选题 8.氨基酸是通过下列哪种化学键与tRNA结合的？( ) A 糖苷键 B 磷酸酯键 C 酯键 D 氢键 E 酰胺键 正确答案:C 单选题 9.下列反应中能产生ATP最多的步骤是( )。 A 柠檬酸→异柠檬酸 B 异柠檬酸→a-酮戊二酸 C α-酮戊二酸→琥珀酸 D 琥珀酸→苹果酸
2017版浙江大学《830生物化学与分子生物学》全套考研 资料 我们是布丁考研网浙大考研团队，是在读学长。我们亲身经历过浙大考研，录取后把自己当年考研时用过的资料重新整理，从本校的研招办拿到了最新的真题，同时新添加很多高参考价值的内部复习资料，保证资料的真实性，希望能帮助大家成功考入浙大。此外，我们还提供学长一对一个性化辅导服务，适合二战、在职、基础或本科不好的同学，可在短时间内快速把握重点和考点。有任何考浙大相关的疑问，也可以咨询我们，学长会提供免费的解答。更多信息，请关注布丁考研网。 以下为本科目的资料清单（有实物图及预览，货真价实）： 2017版浙江大学《830生物化学与分子生物学》考研复习全书是浙大高分已录取的学长收集整理的，全国独家真实、可靠，是真正针对浙大考研的资料。我们将所有的资料全部WORD化，高清打印。真题编写了详细的答案解析，即使是小题也明确指出了考察的知识点，对于做题帮助更大。同时，我们在分析历年考研真题的基础上，针对浙大考研，编写了详细的复习备考讲义，明确列出考研的重点、难点和考点，可在短时间内快速把握重点，提升成绩。初试大家只需要准备我们的资料+教材+配套辅导书就足够了，不用再四处寻找其它资料。 全套资料包括以下内容： 一、浙江大学《生物化学与分子生物学》考研内部信息汇总 “备考篇”主要汇总了考浙江大学生物专业必备的一些信息，主要包括：历年复试分数线，本专业报考难度及竞争情况分析，根据历年真题的考察范围而归纳的考试大纲，学长对于政治、英语等公共课及本专业课的复习策略等。掌握初试必备的信息，才可安心复习。 二、浙江大学《生物化学与分子生物学》历年考研真题及答案解析 2016年浙江大学《生物化学与分子生物学》考研真题（含答案解析） 2015年浙江大学《生物化学与分子生物学》考研真题（含答案解析） 2014年浙江大学《生物化学与分子生物学》考研真题（含答案解析） 2013年浙江大学《生物化学与分子生物学》考研真题（含答案解析） 2012年浙江大学《生物化学与分子生物学》考研真题（含答案解析） 2011年浙江大学《生物化学与分子生物学》考研真题（含答案解析） 2010年浙江大学《生物化学与分子生物学》考研真题（含答案解析） 2009年浙江大学《生物化学与分子生物学》考研真题（含答案解析） 2008年浙江大学《生物化学与分子生物学》考研真题（含答案解析） 2007年浙江大学《生物化学》+《分子生物学》考研真题（含答案解析） 2006年浙江大学《生物化学》+《分子生物学》考研真题（含答案解析） 2005年浙江大学《生物化学》+《分子生物学》考研真题（含答案解析） 2004年浙江大学《生物化学》+《分子生物学》考研真题（含答案解析） 2003年浙江大学《生物化学》考研真题（含答案解析） 三、2017版精品复习笔记（高分版）
实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶的提取 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法； 2、巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。 二、实验内容和原理 1、实验内容： 蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理： ①酵母细胞破碎 细胞破碎的常用方法非机械法液体剪切法固体剪切法压力和研磨物理法、化学渗透法、酶溶 本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。 ②蔗糖酶的初步分离纯化 蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集样品。 由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。 三、实验材料与试剂 专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡 学号： 46 日期： 地点： 生物实验中心310 装 订 线
1、实验材料 市售干酵母粉 10g/组(3～4人） 2、实验试剂 石英砂，95%乙醇(-20℃），20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。 四、实验器材与仪器 电子天平（称量干酵母粉）；研砵（每组一套）；50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）；高速冷冻离心机；恒温水浴箱（50℃）；量筒（50ml）、微量移液枪（1000ul)及枪头或移液管（1ml)、玻棒、滴管等;离心管（留样品Ⅰ、Ⅱ用）及离心管架；制冰机；－20℃冰箱。 五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10g+约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨(干磨)：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：量取总体积40 ml的20mmol/L Tris-HCl 缓冲液，分2次加研磨10min， 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后(托盘天平上)，离心10min （条件：4℃、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上清液并量出体积V1（样品I），另留1ml上清液（样品I ）放置－20℃冰箱保存用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I），迅速放入50℃恒温水浴，保温30min， 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min。 （条件：4℃，12000r/min） ④收集+测量：收集上清液并量出体积V2（样品Ⅱ），另留1ml上清液（样品Ⅱ）放置－20℃冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测定、测定蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上清液加入相同体积的－20℃的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，
浙江大学2009年考研专业课试卷生物化学 试题和往年的题型完全不一样，多了不定项选择题，而且选择超多，达到10个，都是些很细小的东西。大题有： 1、G蛋白及其作用过程图 2、柠檬酸循环及其意义 3、糖酵解和糖异生不可逆的原因 4、血红蛋白为什么比肌红蛋白更适合运输氧 浙江大学2008年考研专业课试卷生物化学 1、什么是膜蛋白？举例说明膜蛋白的主要特征和生物学功能。(10) 2、如何理解在酶催化作用的高效性和专一性理论中论述的“来自酶与底物相互作用的结合赋予了催化反应的高效性和特 异性”，举例说明。(10) 3、什么是G蛋白？描述生物通过G蛋白受体进行信号传导的机理，并举例说明。(10) 4、脂肪酸具哪些特征适合能量储存？分析阐明胖熊如何利用脂肪冬眠，骆驼如何利用驼峰储存脂肪作为水的来源。(10) 5、什么是糖酵解和糖异生？由于糖酵解和糖异生都是不可逆的过程，因此二个途径可以同时进行。如果两个途径同时以 相同的速率进行，会导致什么结果？细胞是通过什么机制对这两个过程进行调控的。(10) 6、人消耗了大量的蔗糖之后，多余的葡萄糖和果糖是如何转化成脂肪酸的。(10) 7、水在生命过程中主要功能有哪些？与其他普通溶剂比较，水的什么性质决定水是生命不可缺少的物质，为什么？(10) 8、写出20中氨基酸的3字母和1字母的缩写，根据R基团的极性，电荷及苯环可以分成哪五类？哪些是人体必需的氨 基酸和非必需氨基酸？(20) 9、氨基酸的序列决定了蛋白质的分子构造和功能，请阐明至少两种分析和决定氨基酸序列的方法及其原理，并 比较说明这两种方法的优缺点。(20) 10、有8种酶参与三羧酸循环：柠檬酸合酶，顺乌头酸酶，异柠檬酸脱氢酶，а-酮戊二酸脱氢酶，琥珀酸脱氢酶， 延胡索酸酶和苹果酸脱氢酶，（1）写出每一种酶催化反应的平衡化学方程式。 （2）说出每一种酶催化反应需要的辅助因子。（3）写出从乙酰辅酶A到CO2代谢过程的一个平衡净反应方程式。(20) 11、作为生物化学实验室的新手，进入实验室后，首先你需要几周的时间刷瓶子和试管等，然后逐渐开始学习配制各种缓冲液和试剂。接下来你要开始一个蛋白质纯化实验。实验目的是分离一种参与柠檬酸循环的酶——即位于线粒体间质的柠檬酸盐合成酶。请根据上述要求设计这个实验（包括实验的材料，主要的实验设备仪器和药品，蛋白质分离纯化的技术及原理，描述具体的实验步骤，最后对实验可能获得的结果进行分析）。(20) 浙江大学2007年考研专业课试卷生物化学 1.什么是蛋白质？分类并举例描述蛋白质的功能，描述你最熟悉的5种蛋白质分离纯化方法的工作原理。 2.蛋白质分子变性与核酸分子变性的本质区别是什么？引起蛋白质和核酸变性的主要因素有哪些， 原理是什么？它们变性后进行复性的方法分别有哪些？（20分） 3.什么是酶？酶的国际分类法将酶分为几类？举例说明每一类酶催化反应的原理？（20分） 4.细胞呼吸分为几个阶段？简单描述这几个阶段的代谢特征。（20分） 5.真核生物mRNA分子构造通常都具有5’帽（5’cap）和3’端的多聚腺苷酸尾[3’poly(A) tail]， 简单描述它们的结构特征和可能的生物学功能。（20分） 6.什么是生物膜？生物膜的主要分子组成、结构特征及生物学功能是什么？
（生物科技行业）浙大生物 化学试题
浙江大学2001年攻读硕士学位研究生入学考试题 考试科目:生物化学,编号555 注意:答题必须写在答题纸上,写在试卷或草稿纸上均无效 壹是非题1/30 1酶反应的专壹性取决于其辅助因子的结构 2肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3E.coli连接酶摧化俩条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP生成NADPH 5亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的壹些氨基酸 7脯氨酸是α螺旋破坏者 8维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11DNA双螺旋的俩条链方向壹定是相反的 12酶影响其催化反应的平衡 13酶促反应的米氏常数和催化的底物无关 14维生素E是壹种天然的抗氧化剂 15维生素B1的辅酶形式是TPP 16ATP是体内能量的储存形式 17糖酵解过程无需氧气的参和 18胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性
19蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21DNA复制时,后滞链需多个引物 22绝缘子和增强子壹样都属于顺式作用元件 23PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24Sanger曾俩获诺贝尔奖 25核糖体上有三个和tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26生长激素释放抑制因子是壹个14肽 27脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28镰刀型贫血症患者血红蛋白和正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别29地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二写出下列物质的分子结构式1/6 1Thr2D-核糖3A4GSH5尼克酰胺6丙酮酸 三名词解释4/24 1反密码子2操纵基因3多肽核酸(peptidenucleicacid) 4折叠酶5共价调节6HumenGenomeProject 四综合题10/40 1试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3,CO2,和H2O时的代谢路线,要 求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白和肌红蛋白结构和功能的异 同
蛋白质化学： 蛋白质的基本结构单位和基本化学键； 基本结构单位：α氨基酸，基本化学键：肽键 构型：是指立体异构体中取代原子或基团在空间的取向。 一级结构：即初级结构，是指蛋白质肽链中各个氨基酸的排列顺序。 二级结构：指蛋白质多肽链主链在空间的走向，一般为有规律的空间排列，是主链的构象，而不涉及侧链基团的空间上的关系 超二级结构：指由若干相邻的二级结构单元组合在一起，彼此相互作用，形成的有规则的、在空间结构上能够辨认的二级结构组合体。又可称为基元 三级结构：指蛋白质分子中所有原子的三维空间排列。 结构域： 较大的蛋白质分子或亚基在三维折叠的过程中，多肽链往往先形成两个或两个以上的相对独立的三维实体，然后这些三维实体再通过缔合形成蛋白质的三级结构。一般将这种相对独立的三维实体称为结构域或域结构。 寡聚体蛋白质：由两个或多个肽链通过非共价键缔合在一起，构成一个完整的、有功能的聚集体。亚基：在寡聚体蛋白质中，通常将每一条单独折叠的多肽链称为亚基。 蛋白质的等电点pI； 特定的pH下，蛋白质所带的正电荷与负电荷恰好相等，即净电荷为零时溶液的pH。 蛋白质的种属差异； 不同种属的同源蛋白质,其一级结构有些变化 蛋白质α-螺旋结构； 右手螺旋，稳定键是氢键。 1.每圈螺旋含有3.6个氨基酸残基 2.每圈螺旋沿螺旋轴方向上升0.54nm 3.每个氨基酸残基绕轴旋转100。，沿轴上升0.15nm 4.多肽链主链上的每个肽键(N)中的羰基氧原子都与其后的第四个氨基酸残基(N+4)上的酰胺基形成氢键。氢键的方向与螺旋轴平行 球蛋白的结构特征； 结构紧密，具有一个疏水的内部环境和一个亲水的表面，球蛋白一般具有一个裂隙，可特异识别和瞬间结合化合物。稳定力是疏水交互作用，还有二硫键。 疏水交互作用； 蛋白质中的疏水基团彼此靠近，聚集以避开水的现象 蛋白质分子的构象与一级结构的关系； 构象：是指取代基团当单键旋转时可能形成的不同的立体结构。不涉及到共价键的断裂蛋白质的构象可以看作连续的肽平面的空间构象，取决于肽单位绕Cα-C键和N-Cα键的旋转，旋转本身受到肽链的主链和相邻残基的侧链原子之间的立体干扰的限制。
1.蛋白质变性是由于( )。 A 蛋白质一级结构的改变 B 组成蛋白质的共价键发生变化 C 蛋白质空间构象的破坏 D 辅基的脱落 E 蛋白质水解 正确答案:C 2.维系蛋白质分子中α螺旋的化学键是( )。 A 肽键 B 离子键 C 二硫键 D 氢键 E 疏水键 正确答案:D 3.下列关于酶的活性中心的叙述哪一项是正确的？( ) A 酶分子中决定酶催化活性的结构区域 B 酶的活性中心都包含有辅酶 C 所有抑制剂都与活性中心结合 D 酶的活性中心都含有金属离子 E 所有酶一旦被合成，就自行构成活性中心 正确答案:A 4.下列与脂肪酸β-氧化无关的酶是( )。 A 脂酰CoA脱氢酶
B β-羟脂酰CoA脱氢酶 C β-酮脂酰CoA转移酶 D 烯酰CoA水化酶 E β-酮脂酰CoA硫解酶 正确答案:C 5.下列何种作用不可能改变酶活性？( ) A 延长酶作用时间 B 加入酶必需的激活剂 C 变构酶分子发生变构效应 D 某些酶蛋白发生化学修饰 E 去除酶的抑制剂 正确答案:A 6.蛋白质分子的一级结构概念主要是指( )。 A 组成蛋白质多肽链的氨基酸数目 B 氨基酸种类及相互比值 C 氨基酸的排列顺序 D 二硫键的数目和位置 E 肽键的数 正确答案:C 7.双链DNA的Tm值较高是由于下列哪一组碱基含量较高所致？( ) A A+G B C+G
C A+T D C+T E A+C 正确答案:B 8.关于糖的有氧氧化的描述，错误的是( )。 A 在胞液和线粒体内进行 B 1分子葡萄糖彻底氧化过程中有6次底物磷酸化反应 C 产生的ATP数是糖酵解的18或19倍 D 是人体所有组织细胞获得能量的主要方式 E 最终产物是CO2和H2O 正确答案:D 9.下列哪一反应由葡萄糖-6-磷酸酶催化？( ) A 葡萄糖→6-磷酸葡萄糖 B 6-磷酸葡萄糖→葡萄糖 C 6-磷酸葡萄糖→1-磷酸葡萄糖 D 1-磷酸葡萄糖→6-磷酸葡萄糖 E 6-磷酸葡萄糖→1-磷酸果糖 正确答案:B 10.下列哪一物质含有高能键？( ) A 6-磷酸葡萄糖 B 1,6-二磷酸果糖 C 1,3-二磷酸甘油酸