当前位置:文档之家› 细菌生理生化实验

细菌生理生化实验

细菌的生理、生化实验简介

微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下:

一、糖酵解试验

不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。

试验方法:以无菌操作,用接种针或环移取纯培养物少许,接种于发酵液体培养基管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。接种后,置36±°C培养,每天观察结果,检视培养基颜色有无改变(产酸),小倒管中有无气泡,微小气泡亦为产气阳性,若为半固体培养基,则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡,有时还可看出接种菌有无动力,若有动力,培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力,从而进行各种细菌的鉴别,因而每次试验,常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫,溴百里蓝和An-drade指示剂。

二、淀粉水解试验

某些细菌可以产生分解淀粉的酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄

糖。淀粉水解后,遇碘不再变蓝色。

试验方法:以18~24h的纯培养物,涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板(一个平板可分区接种,试验数种培养物)或直接移种于淀粉肉汤中,于36±1°C培养24~48h,或于20℃培育5天。然后将碘试剂直接滴浸于培育表面,假设为液体培育物,那么加数滴碘试剂于试管中。当即检视结果,阳性反映(淀粉被分解)为琼脂培育基呈深蓝色、菌落或培育物周围显现无色透明环、或肉汤颜色无转变。阴性反映那么无透明环或肉汤呈深蓝色。

淀粉水解系逐步进行的过程,因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间,培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性,以最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱,因而以临用时制备为妥。

三:V-P试验

某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下,被空气中的氧氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物,称V-P(+)反应。

试验方法:

1)O’Meara氏法:将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C 培养48h,培养液1ml加O’Meara试剂(加有%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液)1ml,摇动试管1~2min,静置于室温或36±1°C恒温箱,若4h内不呈现伊红,即判定为阴性。亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者。

2)Barritt氏法:将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C 培养4天、培养液先加入a萘酚(2-na-phthol)纯酒精溶液,再加40%氢氧化钾水溶液,摇动2~5min,阳性菌常立即呈现红色,若无红色出现,静置于室温或36±1°C恒温箱,如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。

3)快速法:将%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环,乳化接种于其中,加入5%α-萘酚3滴,40%氢氧化钠水溶液2滴,振动后放置5min,判定结果。不产酸的培养物不能使用。

本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时,通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生,故应省去或以氯化钠代替。

四:甲基红(Methyl Red)试验

肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸,进一步分解中,由于糖代谢的途径不同,可产生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物,可使培养基PH值下降至以下,使甲基红指示剂变红。

试验方法:挑取新的待试纯培养物少许,接种于通用培养基,培养于36±1°C或30°C(以30°C较好)3~5天,从第二天起,每日取培养液1ml,加甲基红指示剂1~2滴,阳性呈鲜红色,弱阳性呈淡红色,阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定结果。

甲基红为酸性指示剂,pH范围为~,其pK值为。故在以下,随酸度而增强黄色,在以上,则随碱度而增强黄色,在或上下接近时,可能变色不够明显,此时应延长培养时间,重复试验。

五:靛基质(Imdole)试验

某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合,形成玫瑰吲哚,为红色化合物。

试验方法:将待试纯培养物小量接种于试验培养基管,于36±1°C培养24h时后,取约2ml培养液,加入Kovacs氏试剂2~3滴,轻摇试管,呈红色为阳性,或先加少量乙醚或二甲苯,摇动试管以提取和浓缩靛基质,待其浮于培养液表面后,再沿试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴,在接触面呈红色,即为阳性。

实验证明靛基质试剂可与17种不的靛基质化合物作用而产生阳性反应,若先用二甲苯或乙醚等进行提取,再加试剂,则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色,因而结果更为可靠。

六、硝酸盐(Nitrate)还原试验

有些细菌具有还原硝酸盐的能力,可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。

试验方法:临试前将试剂的A(磺胺酸冰醋酸溶液)和B(α-萘胺乙醇溶液)试液各等量混合、取混合试剂约、加于液体培养物或琼脂斜面培养物表面,立即或于10min内呈现红色即为试验阳性,若无红色出现则为阴性。

用α-萘胺进行试验时,阳性红色消退很快、故加入后应立即判定结果。进行试验时必须有未接种的培养基管作为阴性对照。α-萘

胺具有致癌性、故使用时应加注意。

七、明胶(Gelatin)液化试验

有些细菌具有明胶酶(亦称类蛋白水解酶),能将明胶先水解为多肽,又进一步水解为氨基酸,失去凝胶性质而液化。

试验方法:挑取18~24h待试菌培养物,以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基。于20~22℃培育7~14天。明胶高层亦可培育于36±1℃。天天观看结果,假设因培育温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观看其是不是被细菌液化,如确被液化,即为实验阳性。平板实验结果的观看为在培育基平板点种的菌落上滴加试剂,假设为阳性,10~20min后,菌落周围应显现清楚带环。不然为阴性。

八、尿素酶(Urease)试验

有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶,因为不论底物尿素是否存在,细菌均能合成此酶。其活性最适pH为。

试验方法:挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管

中,摇均,于36±1℃培育10,60和120min,别离观看结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面,不要抵达底部,留底部作变色对照。培育2,4和24h别离观看结果,如阴性应继续培育至4天,作最终判定,变成粉红色为阳性。

九、氧化酶(Oxidase)试验

氧化酶亦即细胞色素氧化酶,为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶,氧化酶先使细胞色素C氧化,然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化,产生颜色反应。

试验方法:在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴,阳性者Kovacs氏试剂呈粉红色~深紫色,Ewing氏改进试剂呈蓝色。阴性者无颜色改变。应在数分钟内判定试验结果。

十、硫化氢(H2S)试验

有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物,而产生硫化氢气体,硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。

试验方法:在含有硫代硫酸钠等指示剂的培养基中,沿管壁穿刺接种,于36±1℃培育24~28h,培育基呈黑色为阳性。阴性应继续培

育至6天。也可用醋酸铅纸条法:将待试菌接种于一样营养肉汤,再将醋酸铅纸条悬挂于培育基上空,以可不能被溅湿为适度;用管塞压住置36±1℃培育1~6天。纸条变黑为阳性。

十一、三糖铁(TSI)琼脂试验

试验方法:以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物,穿刺接种并涂布于斜面,置36±1℃培育18~24h,观看结果。

本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气(变黄);产生硫化氢(变黑)。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色。

十二、硫化氢-靛基质-动力(SIM)琼脂试验

试验方法:以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约1/2深度,置36±1℃培育18~24h,观看结果。培育物呈现黑色为硫化氢阳性,混浊或沿穿刺线向外生长为有动力,然后加Kovacs氏试剂数滴于培育表面,静置10min,假设试剂呈红色为靛基质阳性。培育基未接种的下部,可作为对照。

本试验用于肠杆菌科细菌初步生化筛选,与三糖铁琼脂等联合使用可显著提高筛选功效。

细菌的生理生化试验

实验九细菌的生理生化试验 实验九细菌的生理生化试验 1 目的 1.1 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理 1.2 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法 2 原理 各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞原核生物的特性,这种差异就表现的更加明显。不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同,所以其发酵的类型和产物也不相同,也就是说,不同微生物具有不同的酶系统。即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天,细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。 3 材料 3.1 菌种 大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的斜面菌种 3.2 培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基(葡萄糖、乳糖或蔗糖)3.3 试剂 40%NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。 3.4 器具 超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。 4 流程 糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验 5 步骤 (一) 糖类发酵试验 1 目的 了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理,并掌握其操作方法. 2 原理 可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸,可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫(即B.C.P指示剂,其pH在5.2以下呈黄色,pH在6.8以上呈紫色),经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气,可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。 3 材料 3.2菌种 大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)的斜面菌种 3.3培养基 葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管 4流程 发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录 5 步骤 5.1 试管标记图9-1 糖发酵产气 取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各A不产气;B产气

菌株生理生化鉴定实验方法

菌株生理生化鉴定实验方法 1.接触酶实验 用枪头取一个菌落放在载玻片上,加一滴3%的h2o2于菌落上,立即观察有无气泡出现。 2.淀粉水解实验(没透明化圈) 淀粉酶活性鉴定培养基:lb培养基(0.5%酵提、1%蛋白胨、1%nacl),可溶性淀粉1%,琼脂2% 挑实验菌株的单菌落在淀粉酶活性鉴别培养基中划线,30℃培育2天,构成显著菌落后,在平板上几滴加碘液,菌落周围如果存有透明化圈,则则表示淀粉水解为阳性;若仍为蓝黑色则为阴性 3.脂酶活性的鉴定实验(有晕圈) 脂酶活性鉴别培养基:lb培养基,tween801%,琼脂2% 取实验菌株的单菌落在脂酶活性鉴定培养基中划线,30℃培养2天,菌落周围若有晕圈,则为脂酶活性阳性,反之则为阴性。 4.蛋白酶活性的鉴别实验 酪明培养基(不可溶性):lb培养基,0.3%酪蛋白(先碱化1g酪蛋白加1ml1mol/l 的naoh,加水加热溶解),0.5%明胶(加热溶解),2%琼脂(没有) 牛奶双层板(可溶性):上层lb培养基提2%琼脂,下层牛奶、琼脂(牛奶琼脂混合后的浓度都就是2%先把下层好像至平板中,等待下层加热后再好像上层(存有透明化圈) 取实验菌株的单菌落在可溶性蛋白酶活性鉴定培养基及不溶性蛋白酶活性鉴定培养基上分别划线,30℃培养2天。菌株若具有可溶性蛋白酶活性和不溶性蛋白酶活性,则会在菌落周围形成透明圈。 5.纤维素水解实验 纤维素酶活性鉴定培养基:lb培养基,1%纤维素钠 挑实验菌株的单菌落在纤维素酶活性鉴别培养基上划线,30℃培育5-7天,用0.1%刚果红染色液染色30min后,用蒸馏水冲洗,再用1mol/l的hcl复染30min后冲洗,观测与否存有透明化圈。 6.甲基红实验甲基红和v-p鉴定培养基:蛋白胨0.5%,k2hpo40.5%

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告 一、引言 在微生物学中,鉴定细菌的方法有很多种,其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。 二、目的 本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验,包括试剂、操作步骤、结果解释等内容,以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。 三、材料与方法 1. 大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)培养基; 2. 硝酸盐还原试剂; 3. 糖类试剂:葡萄糖、果糖、半乳糖; 4. 氨基酸试剂:天冬氨酸、赖氨酸; 5. 酶试剂:淀粉酶、蛋白酶; 6. 无水硫酸铜溶液。 四、实验步骤及结果解释

1. 硝酸盐还原试验 步骤: (1)取一支细菌液体培养物,加入硝酸盐还原试剂; (2)观察液体颜色变化。 结果解释: 若液体变为红色,则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐,是亚硝化菌。若无颜色变化,则表示细菌不能还原硝酸盐。 2. 糖类代谢试验 步骤: (1)取三个试管,分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖; (2)加入相同量的细菌液体培养物; (3)观察试管内气泡产生情况。 结果解释: 若在葡萄糖试管内产生了气泡,则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢;若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡,则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。 3. 氨基酸代谢试验 步骤: (1)取两个试管,分别加入天冬氨酸和赖氨酸; (2)加入相同量的细菌液体培养物; (3)观察试管内气泡产生情况。

结果解释: 若在天冬氨酸试管内产生了气泡,则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢;若在赖氨酸试管内产生了气泡,则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。 4. 酶代谢试验 步骤: (1)取两个试管,分别加入淀粉和蛋白质; (2)加入相同量的细菌液体培养物; (3)观察试管内颜色变化情况。 结果解释: 若在淀粉试管内出现了透明带,则表示该细菌能够分泌淀粉酶;若在蛋白质试管内出现了变色,则表示该细菌能够分泌蛋白酶。 5. 硫代硫酸盐还原试验 步骤: (1)取一支细菌液体培养物,加入无水硫酸铜溶液; (2)观察液体颜色变化。 结果解释: 若液体变为黑色,则表示该细菌能够将硫代硫酸盐还原为硫化物。 五、结论 通过以上实验,可以初步鉴定出细菌的种类和特性。在实际应用中,

细菌鉴定的生理生化反应

细菌的生理生化反应实验 组别:周四晚第四组指导老师:李海花 【摘要】各种细菌所具有的酶系统不尽相同,对营养基质的分解能力也不一样,因而代谢产物或多或少地各有区别,可供鉴别细菌之用. 【关键词】细菌鉴定,生理生化反应,IMVIC,糖发酵,硫化氢,硝酸盐 一、实验目的: 1. 学习各种生理生化反应实验的原理 2. 学习巩固各种生理生化反应实验的接种方式并熟练掌握各种接种方法 3. 观察细菌常用生理生化反应实验结果 二、实验原理: 由于各种微生物具有不同的酶系统,所以它们能利用的底物不同,或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同,因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌,尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中,生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下: 1.糖发酵试验:糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等);产酸后溴甲酚紫指示剂可由紫色pH(6.8)变为黄色(pH5.2),产气的细菌可使半固体培养基中存有气泡. 2.IMVIC实验:主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。 1)吲哚试验: 在蛋白胨培养基中,若细菌能产生色氨酸酶,则可将蛋白胨中的色氨酸 分解为丙酮酸和吲哚,吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲 哚 2)V. P. 反应和甲基红试验: V. P. 反应:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸脱羧通过缩合和脱羧后转变成乙酰甲基甲醇(亦称三羟基丁酮),然后被还 原为2,3-丁二醇,乙酰甲基甲醇在碱性条件下,被空气中的氧气 氧化成为二乙酰,二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用生成红 色化合物。在试管中加入α-萘酚时,可促进反应进行。 甲基红反应:某些细菌在糖代谢过程中,将培养基中的糖先分解为丙酮酸,丙酮酸再被分解为甲酸、乙酸、乳酸等。有机酸的产生可由加入甲基红指 示剂的变色进行检测。甲基红变色范围为pH4.2(红)~6.3(黄)。 细菌分解葡萄糖产酸,将培养液由原来的橘黄色变为红色。 3)柠檬酸盐实验: 肠杆菌科各属细菌利用柠檬酸的能力不同,有的菌可利用柠檬酸钠作为碳源,有的则不能。某些菌分解柠檬酸形成CO2、由于培养基中钠 离子的存在而形成碳酸钠,使培养基碱性增加,根据培养基中的指示剂

实验五-细菌鉴定中常见的生理生化反应

实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应 一、实验目的。 1)了解细菌生理生化反应原理,掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。 3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。 二、实验原理。 各种细菌所具有的酶系统不尽相同,对营养基质的分解能力也不一样,因而代谢产物存在差别。以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物,从而鉴别细菌的种属,称之为细菌的生理生化反应。 1.糖(醇)类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同的糖(醇)的酶,因而发酵糖(醇)的能力各不相同,产生的代谢产物也不同:有的产酸产气,有的产酸不产气。指示剂溴甲酚紫,pH5.2黄色—pH6.8紫色,当发酵产酸时,培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。 2.甲基红试验(M.R试验) 甲基红试验,pH4.4红色~pH6.2黄色,是用来检测由葡萄糖产生的有机酸,如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产生丙酮酸,丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基的pH降低到4.2以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸,但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物,如乙醇、丙酮酸等,使pH升至大约6。 3.Voges-Proskauer试验(伏-普试验,V.P. 试验) 伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸,再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下,被氧化为二乙酰,二乙酰与培养基中所含的胍基作用,生成红色化合物为V.P.反应阳性。 4.靛基质试验 某些细菌,如大肠杆菌,能产生色氨酸酶,分解蛋白胨中的色氨酸,产生靛基质,靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合,形成玫瑰色靛基质。 5.硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸,产生硫化氢,硫化氢与培养基中的铁盐反应,形成黑色的硫化铁沉淀,为硫化氢试验阳性。 6.明胶液化实验 明胶在25度以下可维持凝胶状态,以固体状态存在,而在25度以上时明胶就会液化。有些微生物可产生一种成为明胶酶的胞外酶,水解这种蛋白质,而使明胶液化,甚至在4 度仍能保持液化状态。 7.柠檬酸盐利用试验 有的细菌如产气杆菌,能利用柠檬酸钠为碳源,因此能在柠檬酸盐培养基上生长,并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐,使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂 pH6.0(黄)~7.6(蓝),由绿色变为深蓝色。 8.淀粉水解实验 细菌水解淀粉的过程可以通过底物的变化来证明,即用碘测定不再产生蓝色。 三、实验仪器、材料和用具 实验仪器:32度恒温培养箱、4度冰箱;

细菌常见的生化反应试验

细菌常见的生化反应试验 (一)什么是生化试验? 指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。 生化试验或称生化反应:细菌的酶不完全相同,对营养物质的分解能力不一致,因此其代谢产物各异。在培养基中加入可与被测终产物反应的指示剂,产生肉眼可见的变化,如颜色的改变等,利用生化方法来鉴定细菌的试验,统称为细菌的生化试验或称生化反应 (二)生化试验的方法: 1在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。 2在培养物中加入试剂,观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 3根据酶作用的反应特性,测定酶的存在。 4根据细菌对理化条件和药品的敏感性,观察细菌的生长情况。

(三)生化试验的注意事项 1.待检菌应是新鲜培养物,培养18~24h。 2.待检菌应是纯种培养物。 3.遵守观察反应的时间。观察结果的时间,多为24或48 小时。 4.应做必要的对照试验。 5.提高阳性检出率,至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进 行试验。 (四)检验细菌的生化试验范围 :1、糖(醇)类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验 二、糖醇类代谢试验 (一)糖醇类发酵试验 (二)葡萄糖氧化发酵(O/F)试验 (三)V-P试验 (四)甲基红(Methyl Red)试验MR

(五)七叶苷水解试验(六)甘油品红试验(一)糖醇类发酵试验 1、原理:不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同,有的能分解多种糖(醇),有的只能分解1~2种糖(醇) ,有的分解糖(醇)能产酸产气,有的分解糖(醇)只产酸不产气,根据这些特点,可鉴别细菌。 常用的糖醇 单糖:葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖 双糖:乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖 三糖:棉子糖 多糖:菊糖、肝糖、淀粉 醇类:甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇 2试验方法:用接种针或环移取纯培养物少许,接种于糖发酵管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。置36±1.0℃培养1~3天,每天观察结果。 3、结果观察和记录: •产酸产气,阳性,以“⊕”表示

[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验

[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验实验六细菌的生化试验 目的要求 1.通过本试验加深对细菌生化反应原理和意义的理解; 2.掌握常规细菌生化试验操作方法。 操作步骤 一、糖类发酵(分解)试验 原理:细菌含有分解不同蔗糖(醇、苷)类的酶,因而分解各种糖(醇、苷)类的能力也不必一样。有些细菌分解某些糖(醇、苷)产酸(符号:+)、产气(符号:○),培养基由兰变黄(指示剂溴指示剂麝香草酚兰由兰遇酸福兰县的结果),并有气泡;有些产酸,仅培养基变黄;有些不分解糖类(符号:-),培养基仍为兰色。 (一)适用于需氧菌的方法 培养基用邓亨氏(Dunham)蛋白胨水溶液(蛋白胨1g,氯化钠0.5g,水100ml,pH7.6按0.5~1%的比例分别加入各种辣椒),每100ml加入1.2ml的0.2%溴麝香草酚蓝(或用1.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1ml)作指示剂。分装于试管(每一个试管事先都加有一枚倒立的小发酵管),10磅高压灭菌10分钟。 如在培养基中加入琼脂达0.5~0.7%,则成半固体,可省去倒立的小失水管。 0.2%溴麝香草酚蓝溶液配法: 溴麝香草酚蓝 0.2g 0.1N NaOH 5ml 蒸馏水 95ml

方法:从琼脂斜面的纯培养物上,用接种环取少量被检细菌接种于糖发酵管培养基中(如为半固体,应穿刺),在37℃培养,一般观察2~3天,观察时用上述符号标记之。 (二)适用于厌氧菌的方法 培养基: 蛋白胨 20g 氯化钠 5g 琼脂 1g 1.6%硫甲酚紫酒精溶液 1ml 糖 10g 硫乙醇酸钠 1g 蒸馏水 1000ml 将胨、盐、硫乙醇酸钠、琼脂和水放于水槽内,加热使融化,再加入所需的糖,调整pH到7.0,加入指示剂,分装试管,在10磅高压灭菌15分钟后,做成高层。 方法将厌氧菌的培养物用穿刺接种法接种于上述培养基的深部,于37℃培养。结果观察同需氧菌。 二、V-P试验(二乙酰试验) 原理:某些细菌能从葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇(Acetymethyl carbinol)→2,3-丁烯二醇(2,3-bytaylene cylycol),在有碱阿提斯鲁夫尔谷存在时氧化成二乙酰,后者和胨中的胍基化合物起作用,会带来粉红色的化合物。其反应式为: 2CH3H——→CH33十2CO2

细菌鉴定中常用的生理生化反应

细菌鉴定中常用的生理生化反应 1、实验原理 (1)细菌生化试验 各种细菌所具有的酶系统不尽相同,对营养基质的分解能力也不一样,因而代谢产物或多或少地各有区别,可供鉴别细菌之用。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物,从而鉴别细菌的种属,称之为细菌的生化反应。 (2)糖(醇)类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶,因而发酵糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同,如有的产酸产气,有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溟甲酚紫[P HS . 2 (黄色)一6 . 8 (紫色)] ,当发酵产酸时,可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。 (3)甲基红(Methylred )试验(该试验简称MR 试验) 很多细菌,如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸再被分解,产生甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基的pH 降低到4 . 2 以下,这时若加甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 (红色)一pH6 . 2 (黄色)。若某些细菌如产气杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸,但很快将丙酮酸脱梭,转化成醇等物,则培养基的pH 仍在6 . 2 以上,故此时加入甲基红指示剂,呈现黄色。 (4)大分子物质代谢实验. 靛基质(口引睬)试验 某些细菌,如大肠杆菌,能分解蛋白质中的色氨酸,产生靛基质(叫睬),靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合,形成玫瑰色靛基质(红色化合物)。 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸(肌氨酸、半肌氨酸等),产生硫化氢,硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐,形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。为硫化氢试验阳性,可借以鉴别细菌。 明胶液化实验 某些细菌具有胶原酶,使明胶被分解,失去凝固能力,呈现液体状态,是为阳性。淀粉水解试验(在紫外诱变中做,本实验不做) 细菌对大分子的淀粉不能直接利用,须靠产生的胞外酶(淀粉酶)将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖(或麦芽糖),再被细菌吸收利用,细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明,即用碘测定不再产生蓝色。 (5)有机酸盐及氨盐利用试验 柠檬酸盐利用试验

细菌的生理生化鉴定方法

方法 2.3.5 细菌的生理生化鉴定 1、形态学观察 采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。用革兰氏染色进行油镜观察。 ①革兰氏染色 溶液和试剂:革兰氏染液,草酸铵结晶紫染液,卢戈式碘液,95%乙醇,番红复染液等。 试验步骤:(1) 涂片:取活跃生长期菌种按常规方法涂片(不易过厚)、干燥和固定。 (2) 初染:滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1~2min,用水冲洗至流出水无色。 (3) 媒染:先用卢戈氏碘液冲去残留水迹,再用碘液覆盖1min,倾去碘液,水洗至流出水无色。 (4) 脱色:在上述涂片上流加95%乙醇溶液(一般20~30s),当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。 (5) 复染:将玻片上残留水用吸水纸吸去,用番红复染液染色2min,水洗,用吸水纸吸去残水晾干。 (6) 镜检:用油镜观察。 ②芽孢染色 (1) 制片:按常规方法涂片、干燥及固定。 (2) 加热染色:向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位,用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持5min,加热时应注意补充染液,切勿让涂片干涸。 脱色:待玻片冷却后,用缓流自来水冲洗至流出水无色。 (3) 复染:用0.5%番红水溶液复染2min。 (4) 水洗:用缓流自来水冲洗至无色。 (5) 镜检:晾干载玻片后油镜镜检。 ③鞭毛染色(硝酸银染色法)

(1) 载玻片准备:将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸20min,然后用清水充分洗净,再置于95%乙醇中浸泡,使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。 (2) 菌液制备:用接种环挑取菌落边缘菌体,悬浮于1~2mL无菌水中制成菌悬液,不能剧烈震荡。 (3) 制片:取一滴菌悬液滴到载玻片一侧,倾斜玻片,使菌悬液流向另一边,用吸水纸吸取多余的菌悬液,自然干燥。 (4) 染色:滴加硝酸银染色A液覆盖3~5min,用蒸馏水充分洗去A液,再滴加B液染色约1 min,期间可用微火加热,当涂面出现明显褐色时,立即用蒸馏水冲洗。自然干燥后用油镜观察。菌体呈深褐色,鞭毛显褐色。 (5) 镜检:用油镜镜检观察。 A、B液需现用现配(4h内效果最佳,1d内可用): A:单宁酸5g,三氯化铁1.5g,蒸馏水100mL,加1%氢氧化钠1mL,15%甲醛2mL。 B:硝酸银粉末2g,水100mL,溶解匀均,取出10mL回滴用,往90mL 溶液中加浓氨水到出现大量沉淀时再加浓氨水至溶液澄清。加10mL回滴液回滴至出现薄雾。 2、糖类分解试验 配方:蛋白胨 1.0g;NaCl 0.5g;0.2%溴百里香酚兰 1.2mL;葡萄糖 1.0g;蒸馏水100mL。 基本原理:糖类分解实验是常用的鉴别微生物的生化反应,鉴定细菌能否利用分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氨气、甲烷、二氧化碳等)。当发酵产酸是,指示剂可有紫色(pH6.8)转变为黄色(pH5.2)。气体的产生可由倒置的小管中有无气泡来证明。 试验步骤:用记号笔在试管外面分别标明发酵培养基名称和所接种的细菌的编号。取盛有葡萄糖发酵培养基的试管,按编号接种细菌,每种细菌做两个平行,可留一个空白,作为对照。在接种后要轻摇试管,防止倒置的小试管进入气泡。再将将上述已接种的和对照管置37℃温室中培养2~3d。观察颜色变化及小试管中有无气泡。

细菌生理生化试验

细菌生理生化试验 细菌生理生化试验 微生物生理生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生理生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区分的微生物。因此微生物生理生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物鉴定中常用的生理生化反应如下所示: (一) 糖、醇发酵试验 原理: 不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。有些细菌分解某些糖(醇、苷)产酸(符号:+)、产气(符号:○),培养基由紫(蓝)变黄(指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果),并有气泡;有些产酸,仅培养基变黄;有些不分解糖类(符号:-),培养基仍为紫(蓝)色。 培养基配制: 一般细菌常用休和李夫森二氏培养基: 蛋白胨:2g ,K2HPO4 :0.2g ,NaCl:5g ,糖(醇、糖苷):1% ,水洗琼脂:5~6g,蒸馏水:1000mL,PH:6.8~7.0,溴百里酚蓝:1%水溶液3mL(先用少量的95%乙醇溶解后,再加水配成1%水溶液)。先调PH后再加指示剂。 芽孢杆菌培养基配制: (NH4)2HPO4:1g ,MgSO4:0.2g ,KCl:0.2g ,酵母膏:0.2g ,糖(醇、糖苷):1%水洗琼脂:5~6g ,蒸馏水:1000mL ,溴甲酚紫:0.4%乙醇液2mL,PH:6.8~7.0。先调PH后再加指示剂。 将以上培养基分装试管,培养基高度约为4~5cm ,115℃灭菌20min。 测定的糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳

糖(1.5%)、半乳糖(1.5%)、D-山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。 注意:以上亦可用液体培养基。 接种和观察结果: 用18~24h的幼龄菌种,用穿刺针接种于培养基中,适温培养1d,3d,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。 结果记录: 产酸:+,产气:○,不产酸长气:- 。 (二) 淀粉水解试验 原理: 某些细菌可以产生分解淀粉的酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇碘不再变蓝色。 培养基配制: 牛肉膏5g;NaCl:5g;可溶性淀粉5g;琼脂:20g;蒸馏水1000mL。PH:7.2 121℃灭菌20min。 试验方法: 以18~24h的纯培养物,点接于淀粉琼脂平板(一个平板可分区接种)或直接移种于淀粉肉汤中,于36±1℃培养24~48h,或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面,若为液体培养物,则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果,阳性反应(淀粉被分解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明圈、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明圈或肉汤呈深蓝色。 淀粉水解系逐步进行的过程,因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间,培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性,以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱,因而以临用时制备为妥。 结果记录:分解:+,不分解:-。 (三) V-P试验 原理:

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告 背景 细菌鉴定是微生物学中的一项重要任务,通过对细菌的形态、生理特征和生化反应进行分析,可以确定细菌的种属和特性。生理生化反应实验是其中的关键步骤,通过观察细菌对不同物质的代谢情况,可以获取有关其代谢能力、营养需求和产物生成等信息。本报告旨在介绍常用的细菌生理生化反应实验方法,并分析实验结果以提供准确的鉴定和分类建议。 分析 1. 嗜热/嗜冷性 嗜热/嗜冷性是指细菌对温度的适应能力。常用实验方法包括在不同温度条件下进 行培养观察,并记录生长情况。根据结果可将细菌分为嗜热菌(适宜高温)、嗜冷菌(适宜低温)或中温菌(适宜中等温度)。 2. 好氧/厌氧性 好氧/厌氧性是指细菌对氧气需求的差异。常用实验方法包括在含氧和不含氧的培 养条件下观察细菌生长情况。根据结果可将细菌分为好氧菌(需氧)、厌氧菌(不需氧)或兼性厌氧菌(能在有或无氧的条件下生长)。 3. 革兰氏染色 革兰氏染色是观察细菌壁结构的常用方法。该实验通过处理细菌样品,并使用革兰染色剂将其染色,然后观察其颜色变化。根据结果可将细菌分为革兰阳性(蓝紫色)或革兰阴性(红粉色)。 4. 淀粉酶活性 淀粉酶活性实验用于检测细菌对淀粉的降解能力。该实验将待测细菌培养于含淀粉的琼脂平板上,经过一段时间后,用碘液滴定并观察是否出现透明圈。透明圈表示淀粉被降解且产生了淀粉酶。 5. 水解酪蛋白活性 水解酪蛋白活性实验用于检测细菌对酪蛋白的降解能力。该实验将待测细菌培养于含酪蛋白的琼脂平板上,经过一段时间后,用盖有硫酸铜的试管放置在平板上,观察是否出现由蓝色转变为紫色的反应。颜色变化表示细菌产生了水解酪蛋白酶。

细菌的生理生化鉴定

竭诚为您提供优质文档/双击可除细菌的生理生化鉴定 篇一:细菌生理生化鉴定 实验九细菌的生理生化试验[日期:20XX-5-30]来源:作者:孔庆学[字体:大中 小] 实验九细菌的生理生化试验 1目的 1.1了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理 1.2掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法 2原理 各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞原核生物的特性,这种 差异就表现的更加明显。不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同,所以 其发酵的类型和产物也不相同,也就是说

,不同微生物具有不同的酶系统。即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天,细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。 3材料 3.1菌种 大肠埃希氏菌(escherichiacoli)、产气肠杆菌(enterobacteraerogenes)、普通变形杆菌(proteus vulgaris)、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)的斜面菌种 3.2培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基(葡萄糖、乳糖或蔗糖) 3.3试剂 40%naoh溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。 3.4器具 超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。 4流程 糖发酵试验→V-p试验→甲基红试验→吲哚试验 5步骤 (一)糖类发酵试验

1目的 了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理,并掌握其操作方法. 2原理 可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸,可 在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫(即b.c.p指示剂,其ph在5.2以下呈黄色,ph在 6.8以上呈紫色),经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气,可在发酵培养基中放 入倒置杜氏小管观察。 3材料 3.2菌种 大肠埃希氏菌(escherichiacoli)、产气肠杆菌(enterobacteraerogenes)、普通变形杆菌(proteus vulgaris)的斜面菌种 3.3培养基 葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管 4流程 发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录 5步骤 5.1试管标记图9-1糖发酵产气

实验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验

菌落圆形,污白色,全缘,微凹,光滑 实验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验 一、实验目的: 1)了解细菌生理生化反应原理,掌握细菌鉴定lopat实验方法 二、实验材料: 猕猴桃溃疡病病原菌(分类地位薄壁菌门Gracilicutes,Proteobacteria纲假单胞菌科Pseudomonadaceae假单胞杆菌属Pseudomonas)、SPA培养基:蔗糖20g,蛋白胨5g,磷酸氢二钾0.5g,硫酸镁0.25g,琼脂15g,蒸馏水1000ml 对照SPA培养基:葡萄糖20g,蛋白胨5g,磷酸氢二钾0.5g,硫酸镁0.25g,琼脂15g,蒸馏水1000ml Thornley培养基配方:蛋白胨1g,精氨酸10g,氯化钠5g,磷酸氢二钾0.3g,酚红0.01g,琼脂6g,蒸馏水1000ml 1%二甲基对苯二胺盐酸盐,3×108 /ml的菌液(病原菌),烟草,马铃薯; 灭菌培养皿及培养基(平板)110套、未灭菌培养皿110套,接种针15个,试管110支,接种针55把,滤纸55张,试剂瓶55个,胶头滴管55支,喷壶55个 三、试验方法: 果聚糖试验(Levan formation): 用细菌悬浮液,在SPA培养基上,再用葡萄糖代替蔗糖培养基平板上分别划线。在25℃条件下培养3–7 d,形成白色、粘稠、圆顶、隆起而有闪光的菌落为阳性反应。 在此条件下,在SPA培养基上可形成前述菌落,果聚糖试验为阳性;而在用葡萄糖代替蔗糖培养基上,不形成前述菌落。 氧化酶试验(oxidase reaction): 在培养皿内放一张滤纸,滤纸上加3–4滴1%二甲基对苯二胺盐酸盐,使其湿润。用玻棒挑取生长24 h的菌苔涂在滤纸上,若菌苔在10 s内变成紫色,为阳性反应;在60 s以后变色或一直不变色,为阴性反应。 在此条件下,菌苔的氧化酶试验为阴性反应 氧化酶(细胞色素氧化酶)是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶 马铃薯软腐试验(potato erroring capacity): 在马铃薯上做刺伤伤口,将细菌接到伤口上,几天后观察,是否出现软腐。 精氨酸双水解酶检验(argine reaction): 配制Thornley培养基。每试管装3–4 ml培养基灭菌,冷却,针刺接种细菌至培养基底部,立即用凡士林封管,在27℃条件下培养7 d。 在此条件下,精氨酸双水解酶为阴性,颜色不变。 细菌的精氨酸双水解作用是将精氨酸经过两步水解,生成有机胺和无机氨。鉴定细菌的精氨酸试验,无论发酵菌还是非发酵菌,革兰阳性菌还是革兰阴性菌,测的都是精氨酸双水解酶,使用脱羧酶试验培养基。所以,赖氨酸脱羧酶,鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶用同一种基础培养基,为Moeller配方或Falkow配方,均须加盖石蜡油。对于发酵菌,细菌生长后,培养基变黄为阴性,变紫为阳性;对非发酵菌,培养基颜色不变为阴性,变黄为阳性。另有一种精氨酸双水解酶专用培养基,其中使用的是酚红指示剂。这种配方目前已不使用。细菌生化反应表中的精氨酸双水解酶的阳性百分率也不是在这种培养基上做的,所以,该配方实际已淘汰。 烟草过敏性反应(tobacoo hypersensitivity):

生理生化试验

微生物鉴定中常用生理生化试验 一、实验目的 1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同,从而说明不同微生物有着不 同的酶系统。 2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。 3.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 4.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用 二、实验原理 由于各种微生物具有不同的酶系统,所以它们能利用的底物不同,或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同,因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌,尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中,生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下: 1.淀粉水解试验:在淀粉固体培养基上接种四种细菌(枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌),培养两天以后,再往培养基中加碘液染色,若该细菌能分泌胞外淀粉酶,则能利用其周围的淀粉,淡然在染色后,其菌落周围不呈蓝色,而是无色透明圈。 2.糖发酵试验:不同的细菌分解糖的能力不同,有些细菌能利用糖发酵产酸和产气,有些则不能。酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色,且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气,则最后溶液为指示剂的紫色,且德汉氏小管中无气体。 3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。 (1)吲哚试验:在蛋白胨培养基中,若细菌能产生色氨酸酶,则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚,吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。 (2)甲基红试验(MR):某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸,后者进而被分解产生甲酸,乙酸和乳酸等多种有机酸,是培养液PH值降至4.2以下,加入甲基红后溶液呈红色。 三、实验材料 1.菌种 大肠杆菌(Escherichia coli),铜绿假单胞菌(P.Aeruginosa), 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis Cohn),产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes),普通变形杆菌(Proteus.vulgaris) 2.培养基 固体油脂培养基,固体淀粉培养基,葡萄糖发酵培养基(5支,附德汉式小管),乳糖发酵培养基(5支,附德汉式小管),蛋白胨水培养基,葡萄糖蛋白胨水培养基。 3.溶液和试剂 革兰氏染色用卢戈氏碘液,甲基红指示剂,乙醚和吲哚试剂,无菌水。 4.仪器和其他用品 平板,试管,接种环,试管架,电子天平,称量纸,玻璃棒,三角瓶,烧杯,药匙,标签纸,酒精灯,滴管。 四、实验步骤 1.制备培养基 制备固体淀粉培养基,固体油脂培养基,葡萄糖发酵培养基,乳糖培养基(内装有倒置

微生物检验之生化实验

微生物检验之生化实验 微生物检验之生化实验大全 不同的细菌具有各自的独特的酶系统,因而对底物的分解能力各异,其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又具有不同的生物化学特性,可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。掌握各种生化反应的原理和应用是细菌鉴定的基础。生理生化特性的测定主要根据Shirling & Gottlieb《InternationalJournal of Systematic Bacteriology》中鉴定的有关试验。下面是yjbys店铺为大家带来的微生物鉴定之生化实验大全的知识,欢迎阅读。 碳水化合物代谢实验 糖(醇、苷)类发酵实验 (1)原理: 细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关,故分解糖的能力各不相同,细菌分解糖类后的终产物亦不一致,在含糖培养基中加入指示剂,若细菌分解糖则产酸或产酸产气,使培养基颜色改变,从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物 (2)基本培养基: 在培养基中加入0.5%~1%的糖类(单糖、双糖、或者多糖)、醇类(甘露醇、肌醇)苷类(水杨苷、菊糖等)。培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。 (3)实验方法: 取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内,37℃培养24h,观察结果并记录。 (4)结果判定: 如果接种进去的细菌可发酵某种糖或醇,则可产酸,使培养基由紫色变成黄色,如果不发酵,则仍保持紫色。如,发酵的同时又产生气体,则在微量发酵管顶部积有气泡。 (5)应用: 是鉴定细菌最主要最基本的实验,特别是对肠杆菌科细菌的鉴定

尤为重要。 氧化型与发酵型(O/F)的测定 (1)原理: 细菌在分解葡萄糖的过程中,必需有氧的参加的,称为氧化型,细菌在分解葡萄糖的过程中,可以进行无氧降解的,称为发酵型。发酵型细菌无论在有氧或者无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。 (2)培养基: 培养基蛋白胨2g,氯化钠5g,磷酸氢二钾0.3g,葡萄糖10g,琼脂3g,1%溴麝香草酚蓝3mL,蒸馏水1000mL。将蛋白胨、盐、琼脂和水混合,加热溶解,校正pH至7.2,然后加葡萄糖和指示剂,加热溶解;分装试管,3~4mL/管;115℃,高压蒸汽灭菌20min,取出后冷却成琼脂柱。 (3)实验方法: 挑取18~24h的幼龄斜面培养物,穿刺接种,每种细菌接种两管,于其中1管覆盖1mL灭菌的液体石蜡,37℃培养24小时或更长时间。 (4)结果判定。 Β-半乳糖苷(ONPG)实验 (1)原理: 有的细菌可以产生β一半乳糖苷酶,能分解邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷,而生成黄色的邻-硝基酚,在很低浓度下也可以检测出。 (2)培养基: 邻硝基酚β-半乳糖苷0.6g,0.01mol/L pH7.5磷酸缓冲液1000mL,pH7.5的灭菌1%蛋白胨水300mL。先将前两种成分混合溶解,过滤除菌,在无菌条件下与1%蛋白胨水混合,分装试管,每管2~3mL,无菌检验后备用。 (3)实验方法: 取一环细菌纯培养物接种在ONPG培养基上置37℃培养1~3h 或24h,如有β-半乳糖苷酶,会在3h内产生黄色的邻硝基酚;如无此

安徽师范大学细菌生理生化反应结果记录

安徽师范大学细菌生理生化反应结果记录一结果观察 1葡萄糖发酵实验 直接观察试管,试管变黄者为葡萄糖发酵阳性菌,不变者为阴性菌左边为恶臭假单胞菌,有气泡并变为黄色;右边为大肠杆菌,2V。P。反应和甲基红试验: 将培养好的液体培养基分装于两个干净的小试管中,在一管中滴入2-3滴甲基红试剂,溶液变红的为甲基红阳性菌,不变的为甲基红阴性菌。在另一管中加入V。P。试剂,在37℃保温15分钟,变红者为阳性菌,不变者为阴性菌VP,图为右边为大肠杆菌,溶液变红,为阳性菌。 3吲嗓实验 在培养好的液体培养基中加入1厘米高的乙醚,振荡,静置分层,加入2-4滴吲哚试剂,在掖面交界出现红色者为吲噪反应阳性菌,不变者为阴性菌。左边为大肠杆菌,出现红色阳性菌;右边为产气杆菌,颜色不变,阴性菌。 4硝酸盐还原实验 在点滴板上滴入革里斯试剂A液和B液,如过溶液变红说明有亚硝酸盐,为硝酸盐还原阳性菌,如果不变色需要再倒出部分培养基在另外的小孔中再滴如耳苯胺试剂,如果变蓝,说明此菌为阴性菌;如果不变色,说明此菌为硝酸盐还原强阳性菌。

右下方恶臭假单胞菌,加入革里斯试剂A、B后不变色,再加入二苯胺试剂后变蓝,为阴性菌;左上方大肠杆菌为红色。 5柠檬酸盐实验 直接观察斜面,斜面变兰色者为柠檬酸盐利用阳性菌,不变者为阴性菌。 左边产生蓝色,产气杆菌阳性;右边为大肠杆菌,阴性。 6明胶水解 向培养好的明胶培养基中加入酸性氯化汞或三氯乙酸溶液,并铺满平板,菌落周围出现透明圈的菌为明胶水解阳性菌,没有透明圈的菌为阴性菌。左边为大肠杆菌,出现透明圈,阳性;右边为枯草杆菌,阴性菌 7淀粉水解实验向培养好的淀粉培养基平板上加入碘液,并铺满平板,菌落周围出现透明圈的菌为淀粉水解阳性菌,没有透明圈的菌为阴性菌。

微生物生理生化实验

【实验题目】 微生物生理生化实验 【实验目的】 1.了解生理生化的意义。 2.掌握几种常用生理生化的实验方法。 【实验器材】 1、菌种: 枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,铜绿假单胞菌,变形杆菌,产气肠杆菌 2、试剂: 卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等 3、仪器和用具: 酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等 4、培养基 淀粉培养基、油脂培养基〔大分子物质水解实验〕 葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基〔附倒置的德汉氏小管〕〔糖发酵实验〕 蛋白胨水培养基〔吲哚实验〕 葡萄糖蛋白胨水培养基〔甲基红培养基〕 【实验原理】 在所有生活细胞中存在的全部生物化学反响称之为代,代过程主要是酶促反响过程。具有酶功能的蛋白质多数在细胞,称为胞酶。许多细菌产生胞外酶,这些酶从细胞中释放出来,以促进细胞外的化学反响。各种微生物在代类型上表现出很大的差异,如表现在对大分子糖

类和蛋白质的分解能力以及分解代的最终产物的不同,反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性,这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的容。具体实验原理如下: 一、大分子物质的水解实验原理 1、淀粉水解 由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用,所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞。如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖,能分泌胞外淀粉酶的微生物,那么能利用其周围的淀粉。淀粉遇到碘会显现蓝色,因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉,菌落周围不呈蓝色,出现无色透明圈,那么该菌种能够水解淀粉。 2、油脂水解 脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸,而产生的脂肪酸可改变培养基的PH,因此在油脂培养基上接种细菌,培养一段时间后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂,假设出现红色斑点,那么说明这种菌可产生分解油脂的酶。 二、糖发酵实验原理 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反响,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再参加溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色,且德汉氏小管中会收集到一局部气体。假设细菌不能使糖产酸产气,那么最后溶液为指示剂的紫色,且德汉氏小管中无气体。

相关主题
文本预览
相关文档 最新文档