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《植物组织培养》实验教案 目录 实验一培养基母液及其它药品的制备（3学时） (2) 实验二MS培养基的制备及高压灭菌（3学时） (3) 实验三外植体的灭菌与接种（3学时） (4) 实验四植物愈伤组织诱导培养（2学时） (5) 实验五芽的诱导培养技术（3学时） (6) 实验六根的诱导培养技术 (7)
实验一培养基母液及其它药品的制备（3学时） 一、目的要求 1、通过MS培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能； 2、掌握培养基各种母液的保存方法。 二、仪器与用具 1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱； 2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签、玻璃棒、药匙、称量纸、记号笔； 3、试剂：95%酒精，0.5-1mol/LNaOH，0.5-1mol/LHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。 三、方法步骤 （一）母液的配制 母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。 优点：（1）保证各物质成分的准确性； （2）便于配制时快速移取； （3）便于低温保藏。 注意配制时，两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适
当加热。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。 4、MS有机物母液（100X） 5、生长调节剂 单独配制，浓度为0.1～2 mg/ml。 配制培养基母液时注意事项： ①一些离子易发生沉淀，可先少量水溶解，再按配方顺序依次混合； ②配制母液时用蒸馏水或重蒸馏水； ③药品应用化学纯或分析纯； ④溶解生长素时，可用少量0．5 –1mol/L的NaOH 或95%酒精溶解，溶解分裂素类用0．5 –1mol/L的HCl加热溶解。如再加蒸馏水，易产生白色沉淀，此时可加入热水。（二）母液的保存 1、装瓶：将配制好的母液分别装入试剂瓶中，贴好标签，注明各培养基母液的名称、浓缩倍数、日期。（注意将易分解、氧化者，放入棕色瓶中） 2、贮藏：4℃冰箱。 四、作业 1、写出实验报告。 2、配制培养基母液时应注意哪些事项？ 实验二MS培养基的制备及高压灭菌（3学时） 一、目的要求 掌握MS诱导培养基的配制方法及高压灭菌操作规程。 二、实验原理 植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。早在1957年Skoog即发现培养基中植物激素的类型和它们的比例，对再分化过程起着重要作用。 三、仪器与用具
论植物组织培养学习心得 摘要：经过大三一个学期，我有幸选修了一门有关丁植物组织培养的课程，作为一个人文院法学学生，我对丁理科，尤其是农学方面了解甚浅。我怀着无比激动和忐忑的心情上了这门课，毕竟对我来说这就像是开启了一个新世界的大门，所有一些知识都对我来说是新鲜的。经过一个学期的学习，我也掌握了一些植物组织培养方面的知识，虽然说并不是太多，但是我觉得这都对我以后的发展和开阔视野都提供了很大的帮助。 关键词：植物培养；植物组织与法学的关系；对自己的帮助 一、植物组织培养的学习内容 1、组织培养 植物组织培养，主要的原因有两个，第一个是为了基因转化做基础，还有一点是为了开发药用植物。 植物组织培养概念乂叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。植物组织培养概念（狭义） 指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。 它的作用大致分为三点：①组织培养是研究植物生长和分化规律的重要手段组织培养是在人工控制条件下培养外植体再生器官或植株的技术，可以在不受植株体其它部分干拢下研究被培养部分生长和分化的规律，并可以利用各种培养条件影响它们的发育进程。②组织培养是开展生物工程的基本技术各种基因转移和基因重组技术是组织培养基础上建应的。③组织培养可快速繁殖植物种苗目前组织培养在无性系的快速繁殖、无病蠹种苗培育、新品种的选育、人工种子和种
质保存、药用植物和次生物质的工业化生产等方面的应用已十分广泛。 2,马铃薯的脱蠹 脱蠹种薯是指马铃薯种薯经过一系列技术措施活除薯块体内的病蠹后, 获得 的无病蠹或极少有病蠹侵染的种薯，它具有早熟、产量高、品质好等优点。马铃薯 的产量和质量与种薯密切相关。种薯不行，产量和质量就会大打折扣，病蠹一旦侵 入马铃薯植株和块茎，就会引起马铃薯严重退化，并产生各种病症，导致马铃薯产 量大幅下降。因此，要经过一系列物理、化学、生物等技术活除薯块体内病蠹的种薯。这项技术我国早在6年前就在马铃薯主产区推行，通过这项技术可以实现大田 平■均增产30吩50% 那么到底是怎么脱蠹的呢？首先，应该做的是取材与消蠹。将欲脱蠹的品种块茎催芽，芽长4?5cm时，剪芽并剥去外叶，自来水下冲洗40min, 丁无菌室内用漂白粉溶液消蠹后，无菌水冲洗2?3次。其次第二个就是应该剥离和接种：在无菌室内，丁40倍的解剖镜下,剥取带1个叶原基的茎尖，接种丁M*尖培养基的试管中。试管中的M弘尖培养基包括大量元素、微量元素、有机成分和生长素、细胞分裂素、蔗糖和琼脂,pH值为5.8,经高压灭菌后使用，每试管接种1个茎尖。再次是有一个合适的培养条件，接种的茎尖培养丁25C、1500?3000lx光照条件下培养室内，3个月则长成3?4片叶的小植株。在无菌条件下，进行切段扩繁1 次，取部分苗进行病蠹检测。最后是病蠹检测，病蠹检测是茎尖脱蠹不可缺少的步骤，常用鉴别寄主即指示植物或血活学方法进行检测。经多次检测，及时淘汰血活学阳性反应或在指示植物上有症状的茎尖苗，无任何反应的茎尖苗即脱蠹苗用作繁殖。 3,植物组织培养应用在哪几个方面？第一点是植物组织培养是转基因技术不可或缺的技术。在我们现代科技，转基因技术是现代科技必不可缺的一项技术， 它应用丁现代生活的各个领域。尤其在植物组织培养方面很需要转基因技术。第二点，染色体不同倍性的多倍体植物产生。第三点是杂交离体培养可以克服受精前的 障碍，比如说对丁幼胚的培养，体细胞的融合。第四点是对植物进行的脱蠹。对植 物进行一系列的活除措施来使植物能大幅度的提高产量和植物的等级，让植 物长得更加健康。例如马铃薯，草莓，苹果，橘子都可以进行脱蠹。第五点是节约 地面积，并不受季节的限制。在我们学习过植物组织培养之后，我们通过技术的学习，可以对植物的种植面积进行更好的分配，而且也可以种植一些耐寒植物等都可
植物组织培养技术 植物组织培养是指将植物体的一部分接种在合成培养基上，使其按照预定目标生 长发育成新植株。近年来，花卉组织培养及快繁脱毒技术越来越多地应用于花卉种苗 繁殖生产中。 一、组织培养在花卉产业中的应用 1.快速、大量繁殖优良品种组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一。经组织 培养，可增加繁殖系数，加快繁殖速度，可生产出种性纯、品质好、产花量高的生产 性用苗。在花卉育种过程中，不断的杂交、选种极大地扩展了花卉的花形与颜色，使 得花卉在各方面都越来越接近人们的需求。但在同时，也造成了花卉基因类型的高度 异质化———子代不易有均一表现。而组培苗是在母株器官、组织或细胞的基础上发展起来的，可以保持母株的全部特性（花形、花色、株形、开花习性、抗逆性等）， 因而可以根据需要来选择集多种优良性状于一体的植株加以分生，从而得到大量与母 株一模一样的植株。 2.培育脱毒苗木采用组织培养技术，利用植株的分生组织不易感染病毒的原理，可 以对花卉植株的分生组织进行组织培养来繁殖苗木，防止亲代植株的病害传递给子代，从而达到脱毒的目的。 病毒病对长期应用营养繁殖（分株、扦插等）的观赏植物及其生产的危害相当严重。由于观赏植物多采用营养繁殖，如嫁接、分株、压条等方法繁殖时，病毒（及类 病毒）则通过营养体及刀具、土壤传递给后代，大大加速了病毒病的传播与积累，导 致病毒病的危害越来越严重。据统计，观赏植物的病毒已多达100多种，并且逐年有 新增病毒的报道。观赏植物因病毒病大大影响其观赏价值，表现在康乃馨、菊花、百合、风信子等的鳞茎、球茎与宿根类花卉及兰科植物等严重退化，花少且小，花朵畸形、变色，大大影响观赏价值，严重者甚至导致某些品种的灭绝，严重制约观赏植物 生产的发展，这也是我国切花品种跨不出国门的原因之一。组培快繁技术已应用到蝴蝶兰的栽培中非洲菊也可以通过组培快繁技术进行繁殖 植物组织培养脱毒的原理主要是利用茎尖分生组织不带毒或少带毒。感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒 的浓度也越低。分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分 裂和活跃的生长速度，因此生长点含有病毒的数量极少，几乎检测不出病毒。因此， 茎尖培养时，切取茎尖的大小对脱毒效果有很大影响，茎尖越小效果越佳，但太小时 不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。不同种类的植物和不同种类的病毒在茎尖
2019-2020学年高中生物第一章无茵操作技术实践第二节植物 组织培养技术教案苏教版选修1 1．简述植物组织培养的原理和过程。(重难点) 2．了解MS基本培养基贮备液的配制方法。(重点) 3．举例说出使用的激素及其对脱分化、再分化的作用。(难点) 1．植物组织培养 (1)概念：在无菌和人工控制的条件下，诱导离体的植物器官、组织等在适宜的培养条件下发育成完整植株的技术。 (2)原理：植物细胞的全能性，是指植物体的每个体细胞都携带来自受精卵的完整基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 2．植物组织培养的过程 (1)脱分化：由已经分化的植物细胞或组织产生愈伤组织的过程。 (2)再分化：在一定条件下继续培养脱分化的愈伤组织可以重新诱导根、芽等器官的分化。 [合作探讨] 探讨1：同一株植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因组成一定相同吗？ 提示：不一定相同，如取的是花粉，是通过减数分裂形成的，获得的愈伤组织染色体数是体细胞的一半，所以与体细胞形成的愈伤组织基因组成不同。 探讨2：同微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 提示：微生物培养基以有机营养为主。而MS培养基则需提供大量无机营养，主要包括
植物生长必需的大量元素和微量元素两大类。 探讨3：马铃薯长期种植，产量会降低而且易感染病毒，要想提高马铃薯的产量，应该怎样培育无病毒的马铃薯？ 提示：长期进行无性繁殖的植物，只有根尖和茎尖中几乎无病毒，因此可利用马铃薯的茎尖或根尖进行植物组织培养获得无病毒的马铃薯植株。 [思维升华] 1．植物组织培养的过程 离体的植物组织、器官或细胞(外植体)――→脱分化愈伤组织――→再分化 根、芽或胚状体―→新个体。 (1)愈伤组织与根尖分生组织的异同： (1)使用顺序的比较 (2)使用比例的比较
植物组织培养过程 一、培养材料的采集 组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶，有时也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般很少采用。 对于木本花卉来说，阔叶树可在一、二年生的枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚轴，草本植物多采集茎尖。 在快速繁殖中，最常用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。 二、培养材料的消毒 ,一,先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。 ,二,在无菌坏境中将材料放入70,洒精中浸泡30,60秒。 ,三,再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01,升汞水中消毒10分钟。 ,四,取出后用无菌水冲洗三、四次。 三、制备外植体 将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。然后切成0.2,0.5厘米厚的小片，这就是外植体。在操作中严禁用手触动材料。 四、接种和培养 ,一,接种 在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种4,10个。 ,二,封口 接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口。 ,三,温度
培养基大多应保持在25?左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。 ,四,增殖 外植体的增殖是组培的关键阶段，在新梢等形成后为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1个月左右后，可视情况进行再增殖。 ,五,根的诱导 继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月后即可获得键壮根系。 五、组培苗的练苗移栽 试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境，必须进行炼苗。一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基 质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保 持较高的空气湿度,相对湿度98,左右,，但基质不宜过湿，以防 烂苗。
国内外植物组织培养技术的差距 姓名：*** 学号：********* 指导教师：*** 专业班级：生物工程2009级1班 完成日期：2012-06-05
摘要 植物组织培养技术是农业生物技术中最早实现产业化并取得显著经济效益和社会效益的领域，在理论研究和生产实践中具有广泛的应用价值。通过对国内外植物组培的发展概况以及技术差距的分析，指出了我国植物组织培养技术的发展现状、目前存在的主要问题和应采取的措施，并对植物组织培养技术的发展作了展望。 关键词：组织培养概况差距展望 Abstract The plant tissue culture technology is agricultural biotechnology as the first realized industrialization and get a remarkable economic and social benefits of the field, in the theoretical research and production practice has wide application value. Through the domestic and international plant tissue and the development situation of the technology gap analysis, and pointed out the plant tissue culture technology's development present situation, the existing problems and the measures should be taken, and the development of plant tissue culture technology are discussed. Key words：Tissue culture situation gap looking
植物组织培养的基本步骤 成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。 培养基的主要成分 【水分】 【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂 【凝固剂】琼脂 【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银 培养基和组织培养用具的灭菌方式 【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟 【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂 【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌 【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒 【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌 【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸 【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭 【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口
【培养瓶表面】70%乙醇擦拭 【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒 植物外植体的灭菌方式 【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。 【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。 【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。 【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】
课题1 菊花的组织培养 ★课题目标 （一）知识与技能 1、熟悉植物组织培养的基本过程 2、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化 3、通过联系农业生产实际，培养学生活学活用，理论联系实际的能力[来源:学|科|网] （二）过程与方法 归纳MS培养基的配制方法，并设计表格比较微生物培养基与MS培养基的配方的异同。 （三）情感、态度与价值观 通过阅读植物组织培养技术的发展史，课下查阅植物组织培养技术在生产实践中应用的资料，关注学生科学态度的教育，拓展学生视野，感受科学技术在生产实践中的重要价值。★课题重点 植物组织培养过程中使用的无菌技术 ★课题难点 植物组织培养过程中使用的无菌技术 ★教学方法 启发式教学 ★教学工具 多媒体课件 ★教学过程 （一）引入新课 上节课我们探讨学习了如何从土壤中分离出尿素分解菌和纤维素分解微生物及其计数方法。这节课我们来学习研究植物的组织培养技术。
（二）进行新课 1．基础知识 知识回顾：联系“植物细胞工程”，回答下列问题： 1．1具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。 1．2植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。 活动1：阅读“植物组织培养的基本过程”，讨论并完成以下问题： 1．3细胞分化：个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。 〖思考1〗细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？ 使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。 1．4愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。 〖思考2〗填表比较根尖分生组织和愈伤组织的异同： 1．5植物组织培养的过程可简单表示为： 活动2：阅读“影响植物组织培养的条件”，讨论并完成以下问题： 1．6材料：植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开化植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。
植物组织培养技术习题 植物组织培养技术绪论 课后讨论题： 1、对植物组织培养技术的展望。 2、植物组织培养发展史的各个时期，有哪些主要的培养技术获得成功？ 课外作业题： 1、什么叫植物组织培养技术？它有哪些类型？其理论依据是什么？ 2、从外植体到小植株有哪些培养途径？ 3、试述目前植物组织培养的应用。 第1章植物组织培养实验室的基本设备和一般技术课堂讨论题： 1、为了降低生产成本，组培室的设计应注意哪些问题？ 2、在高温高压灭菌过程中应该注意的哪些问题？ 课外作业题 1、简述培养基和器具的灭菌方法和技术。 2、简述植物材料消毒的一般过程。 3、常用灭菌剂有哪些？其消毒原理是什么？各有哪些优缺点？ 4、简述植物组织培养无菌操作技术的一般过程。 第二章培养基 课堂讨论选题： 植物生长发育的必需元素有几种？必需元素的条件是什么？其
在植物体内的生理作用主要有哪几方面？ 课外作业题： 1、常用培养基分为哪几类？各类的主要特点是什么？ 2、培养基的成分有哪些？各有什么作用？ 3、试述培养基选择的方法。 4、简述培养基配制的基本过程。 第三章细胞的全能性与器官发生 复习思考题： 1、简述植物细胞全能性、细胞分化、脱分化与再分化的概念。 2、再分化有哪几种方式？它们的特点是什么？ 3、愈伤组织形成的条件是什么？其形成过程分为哪几个阶段？ 4、试述优良愈伤组织应用具备的特点及获得优良愈伤组织的方法。 5、影响茎芽分化的因素有哪些？ 第四章体细胞胚胎发生 课外作业题： 1、植物体细胞胚胎发生的概念是什么？有哪些途径？ 2、影响体细胞胚胎发生的主要因子有哪些？ 3、长期培养物形态发生潜力丧失的可能原因有哪些？ 4、愈伤组织培养中存在哪两种类型的细胞？它们的特点是什么？ 5、简述制造单胚人工种子的方法和工业化生产人工种子的步骤。
植物组织培养教学设计集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#
课题1 菊花的组织培养 ★课题目标 （一）知识与技能 1、熟悉植物组织培养的基本过程 2、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化 3、通过联系农业生产实际，培养学生活学活用，理论联系实际的能力[来源:学|科|网] （二）过程与方法 归纳MS培养基的配制方法，并设计表格比较微生物培养基与MS培养基的配方的异同。 （三）情感、态度与价值观 通过阅读植物组织培养技术的发展史，课下查阅植物组织培养技术在生产实践中应用的资料，关注学生科学态度的教育，拓展学生视野，感受科学技术在生产实践中的重要价值。 ★课题重点 植物组织培养过程中使用的无菌技术 ★课题难点 植物组织培养过程中使用的无菌技术 ★教学方法
启发式教学 ★教学工具 多媒体课件 ★教学过程 （一）引入新课 上节课我们探讨学习了如何从土壤中分离出尿素分解菌和纤维素分解微生物及其计数方法。这节课我们来学习研究植物的组织培养技术。 （二）进行新课 1．基础知识 知识回顾：联系“植物细胞工程”，回答下列问题： 1．1具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。 1．2植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。 活动1：阅读“植物组织培养的基本过程”，讨论并完成以下问题： 1．3细胞分化：个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。 〖思考1〗细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义
一、名词解释 1. 花药培养 2.继代培养 3. 体细胞杂交 4. 液体浅置培养 5. 再分化6．初代培养基；7．脱分化；8．液体培养；9．细胞全能性；10．脱毒、11.脱分化12.分化13.灭菌14.培养基15.外植体1 6.看护培养17人工种子18组织培养学19,。酶解法20花壁因子21体细胞杂交22.胞质杂交23体外受精24.液体培养基 二、填空 1．植物组织培养过程中，最常用的培养基是，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用和调节pH，大多数植物的pH要求调节在范围内。 2．可以通过、、、、等措施预防褐变的发生。 3．植物组织培养时，外植体可以是、、、。 4．应用微尖嫁接技术进行脱毒培养无病毒苗，主要程序为→→→→。 5．组织培养植株的再生途径有两条：一是发生，另一是发生。 6．在配制培养基时，可以在培养基中添加，利用其吸附能力，可以降低褐变的发生，但它对物质的吸附。 7．培养基的灭菌要求压力为、温度为、维持时间为。
8．组织培养中常用的生长素有吲哆乙酸（IAA），2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D），吲哆丁酸（IBA），萘乙酸（NAA），它们的作用强弱顺序为 > > > 。 9. 茎尖微繁殖过程一般包括五个阶段，即、、、、。 10．茎尖分生组织培养的目的主要是，其茎尖一般取毫米。 为了使脱毒效果更好，可以将茎尖分生组织培养与结合起来。脱毒处理的试管苗，在用于生产之前，必须进行。 11．污染的原因从病源菌上分析主要有两大类、。 12. 植物组织培养按培养对象分为_______、_________、_________、__________、__________等几种类型。 13. 在分离原生质体的酶溶液内，需要加入一定量的_______其作用是保持原生质体膜的稳定，避免破裂。 14. 1902年德国植物生理学家Haberlandt第一次提出植物_______的理论概念；1943年White提出植物细胞“_________”学说，并出版了《植物组织培养手册》，从而使植物组织培养成为一门新兴的学科。 15 用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在_________℃的温度范围内，而若用它高温干燥灭菌则需在_________℃的温度下1-3小时；烘干植物材料的温度是_________℃。 16。细胞全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的________和__________的
第2章植物组织培养技术 第二节植物组织培养概述 一、授课章节 第二节植物组织培养概述。 二、学时安排 2学时。 三、教学目标 1．掌握植物组织培养的含义。 2．了解植物组织培养的类型划分。 3．理解植物组织培养的应用原理。 4．掌握植物组织培养的特点和应用。 四、教学重点、难点分析 重点： 植物组织培养的含义、特点和应用。 难点： 植物组织培养的应用原理。 五、教具 电化教学设备，植物组织培养试管苗。 六、教学方法 讲授法，多媒体课件。 七、教学过程 Ⅰ.导入 前面我们学习了有关植物育种的一些知识，今天，请看我给同学们看一样东西(教师拿出试管苗)，问同学们这是什么呢？这就是我们要学的植物组织培养。 II.新课
一、植物组织培养的含义 植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体培养在人工培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整植株的过程。由于培养物脱离母株在试管内培养，故又称离体培养、试管培养。 二、植物组织培养的类型 植物组织培养由于分类依据不同可划分为不同的类型。 三、植物组织培养的应用原理 （一）植物细胞全能性 植物细胞全能性，是指植物体上每个具有完整细胞核的植物细胞，都具有该植物体的全部遗传信息和产生完整植株的能力。植物的体细胞一旦脱离所在器官或组织的束缚成为离体状态时，在一定的营养、激素和外界条件作用下，就可能表现出全能性，而生长发育成为完整的植株。
（二）细胞的分化和形态建成 （三）植物的再生功能 四、植物组织培养的特点 （一）研究材料来源单一，无性系遗传信息相同 （二）试验经济，管理方便，工作效率高 （三）培养条件人为控制，可周年连续进行试验或生产 （四）生长快，周期短，繁殖率高 五、植物组织培养的应用 （一）优良品种的快速繁殖 （二）脱毒及脱毒苗的再繁育 （三）植物新品种的培育 （四）种质资源的保存和交换 （五）有用次生代谢产物的生产 III.作业 1.简述植物组织培养的概念和培养类型。 2.植物组织培养技术有哪些特点？ 3.植物组织培养在生产上有哪些方面的应用？ 4.通过学习，你对植物组织培养技术是怎样理解的？ 第二节植物组织培养厂房的设计与构建一、授课章节 第二节植物组织培养厂房的设计与构建。 二、学时安排 2学时。
植物组织培养 作者 摘要 关键字 植物组织培养既是一种基础性研究，又是一种极具普及意义的生物技术。它具有 耗费母株材料少，繁殖速度快，繁殖率较高，用嫩茎组织培养法可以得到无病毒植株， 减轻病毒对花卉的影响，以及定向培养植物优良品种等方面的优势。植物组织培养的 基础是植物细胞的全能性理论，它从诞生到现在经历了4个时期，即理论准备和实验 开创期;研究发展时期;生产应用时期;“克隆”生物时期(肖杰，2004)。如今植 物组织培养技术已经成为农林业中极具普及意义的生物技术之一，而芍药组织培养目 前处于理论准备和实验开创期。但是对芍药进行组织培养，应用植物激素控制分化过 程及分化数量可达到繁殖目的，并节省人力物力，是芍药批量生产的最佳方法(胡映 泉，2003)。 近年来中外学者对芍药的组织培养进行了大量的研究工作，主要集中在以种子为 外植体的组织培养方面(BrukhinvB，一994;KimYS，1995年;BuchheimJAT，1994)，也利用花药(LeeB，1992)培养诱导形成单倍体植株或胚状体。众所周知，常规方法育种周期长、见效慢，极大地限制了新品种的研制与开发。 而利用植物组织培养中的花粉、花药进行单倍体育种结合温室育苗技术，可以大大缩 短育种年限，实现早期选择、提高选择效率。利用体细胞来培育新品种已成为当今育 种领域的趋势之一，对于无法结实的多倍体花卉来说，采用组织培养技术则能为其提 供一条具体的繁殖途径。对于那些产生芽变的种类来说，由于变异部位太小，难以进 行传统的扦插或嫁接繁殖，无法使这些新出现的宝贵种质保留下来;如果将发生变异 的细胞进行分离，并培养成苗则可以选育出许多新的品种，这无疑为花卉新品种的培 育提供了广阔的空间。 影响外植体污染的因素较多，除要求操作人员严格按照无菌操作程序操作外，还 与外植体的种类、取材季节、预处理方法、消毒方法、杀菌剂的使用等因素有关。在 植物组织培养中，造成污染的病原主要是霉菌、细菌和酵母菌三大类，霉菌和酵母菌 引起的污染很容易观察到，初代培养就能在外植体周围或培养基表面形成明显的菌 落，而细菌污染则存在一定的潜伏期。如果外植体培养3一5d内未表现污染症状，而 以后不断出现污染现象，表明污染主要由内生菌引起(Leifert，1990;柴向华，周俊 辉，2003)。抗生素抑菌在动物细胞培养中早己被广泛应用，在植物组织培养中尚处于开始阶 段。近年随着植物基因工程的开展，转基因过程中的除菌和抑菌越来越离不开抗菌素 所以使用抗菌素逐渐成为植物组织培养中的灭菌技术之一。在抗菌素的使用上， Falkiner(1990年)提出3个条件，即必须弄清楚要抑制菌的种类，使用的抗生素是否 对培养的植物组织有不良影响，还要确立抗生素的使用浓度、处理时间的长短。因 没有一种抗生素能对所有引起污染的微生物都有效，所以抗生素也不能完全代替灭菌 技术，最好加在培养基中，作为一种辅助防止污染的措施。 植物组织培养中外植体种类的选择以污染少、易启动为原则。带芽的外植体，如 茎尖、侧芽、带芽茎段，培养成功率高，变异率小，容易保持材料的优良特性。其中， 顶芽芽体饱满，营养丰富，侧芽较瘦弱，所以顶芽启动快，分化率高;继代培养中由 于顶端优势的作用，腋芽的生长受到抑制，生长势弱于带芽茎段。因此，用顶芽作为 外植体时，培养基中常加入细胞分裂素打破顶端优势作用，促进腋芽大量萌发，提高 繁殖系数(裘文达，1986)。据分析，外植体取材的季节以材料积累了较丰富的营养
、什么是植物组织培养? 答：植物组织培养，又称植物克隆，是指通过无菌操作分离植物体地一部分（外植体），接种到培养基上，在人工控制地条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株地过程.资料个人收集整理，勿做商业用途 、什么是"外植体"? 答：外植体泛指第一次接种所使用地植物组织、器官等一切材料.如，顶芽、茎段、叶片等.、按照外植体地不同，植物组织培养可以分成几类? 答：根据外植体地不同，植物组织培养可以分成类： ）植株培养：对完整植株材料地培养，包括扦插苗培养和种子苗培养. ）器官培养：即离体器官地培养，包括根系培养、茎段培养、叶片培养、花器培养、果实培养、种子培养. ）组织培养（各种组织、愈伤组织）：是对植物体地各部分组织进行培养，包括组织培养、薄壁组织培养、输导组织培养.资料个人收集整理，勿做商业用途 ）原生质体培养：是指用酶及物理方法除去细胞壁地原生质体地培养，包括融合培养和非融合培养. ）细胞培养（愈伤组织分离或花粉单细胞或很小地细胞团)：包括平板培养、悬浮培养、微室培养. 、植物组织培养有哪些特点? 答：植物组织培养地特点： ）培养条件可以人为控制 ）生长周期短，繁殖率高 ）管理方便，利于工厂化生产和自动化控制 、你认为植物组织培养技术在当前地农业生产上有什么价值?为什么? 答：植物组织培养技术在当前农业生产上地价值及原因： ）快速繁殖种苗 用组织培养地方法进行快速繁殖是生产上最有潜力地应用，包括花卉观赏植物、蔬菜、果树、大田作物及其他经济作物.快繁技术不受季节等条件地限制，生长周期短，而且能使不能或很难繁殖地植物进行增殖.资料个人收集整理，勿做商业用途 ）无病毒苗地培养 组织培养无病毒苗地方法已在很多作物地常规生产上得到应用，如马铃薯，甘薯，草莓，苹果，香石竹，菊花等，而且已有不少地区建立了无病毒苗地生产中心，这对于无病毒苗地培养、鉴定、繁殖、保存、利用和研究，形成了一个规范地系统程序，从而达到了保持园艺植物地优良种性和经济性状地目地.资料个人收集整理，勿做商业用途 ）在育种上地应用 植物组织培养技术为育种提供了许多手段和方法，使育种工作在新地条件下更有效地进行.主要以下几点应用：①倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显；②克服远缘杂交地不亲合性和不孕性（胚培养）；③保存种质.资料个人收集整理，勿做商业用途 ）人工种子 ①人工种子结构完整，体积小，便于贮藏与运输，可直接播种和机械化操作. ②不受季节和环境限制，胚状体数量多、繁殖快、利于工厂化生产. ③利于繁殖周期长、自交不亲和、珍贵稀有地一些植物，也可大量繁殖无病毒材料. ④可在人工种子中加入抗生素、菌肥、农药等成分，提高种子活力和品质. ⑤体细胞胚由无性繁殖体系产生，可以估定杂种优势. ）工厂化育苗
第一章第三节 课时作业 一、选择题 1.下列有关植物细胞与组织培养的叙述中，错误的是（） A .花药、胚不能作为组织培养的材料 B .植物细胞具有全能性 C.外植体指用于离体培养的植物组织片段或器官 D ?外植体可诱导出愈伤组织 解析：在进行植物组织培养的过程中，从供体植株上取下来用于培养的细胞、组织和 器官都叫做外植体。外植体可用于繁殖植株个体；花药、胚细胞也具有全能性，在特定条件下也可发育为完整的植株个体。 答案： A 2?马铃薯利用它的块茎进行无性繁殖，种植的世代多了以后往往会因感染病毒而减产， 为此农户都希望得到无病毒的幼苗进行种植。获得无病毒植株的最佳方法是（） A .选择优良品种进行杂交 B .进行远源植物体细胞杂交 C.利用茎尖细胞进行组织培养 D ?人工诱导基因突变 解析：马铃薯被植物病毒侵染后引起品质下降，可利用植物组织培养技术进行脱毒。 具体做法是选取含病毒最少或无病毒的植物细胞（如茎尖或根尖）进行组织培养，可获得无病毒植株。 答案： C 3?某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了四个实验，实 验条件除图示外其他均相同。下列各图表示实验结果，据图不能得出的初步结论是（） A .污染主要不是培养基灭菌时间短造成的 培养苴灭菌吋间/min 外植体消毒时间Anin ]00r1001- 20 2224 262830 32 34 36 -1 -
B ?污染不可能来源于组织培养所用的离体组织 C.调节培养基pH 不能解决污染问题 D ?调节培养温度不能解决污染问题 解析： 本题主要考查图文转换能力， A 、C 、D 图解所示的信息是随培养基灭菌时间、 培养基pH 和培养温度的增加，污染率在 90%上下波动，说明污染源不是这三方面的原因；而 B 图解中随离体组织消毒时间的增加污染率急剧下降， 因而，该曲线表明组织培养所用的离体 组织是污染的主要因素。 答案： B 4 ?下列关于植物组织培养中的灭菌和消毒操作，错误的是 （ ） A ?外植体可以用酒精消毒 C.操作前手需用70%酒精消毒 答案： B 5.下列实例中能体现细胞全能性的是 ①用悬浮液培养胡萝卜单个细胞可形成可育的植株 组织培养的单个细胞形成可育的完整植株 A .①② B ? C.②③ D ? 解析： 细胞的全能性是指已分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。体现细胞全 能性的是由 细胞T 生物体的实例。其中①和③都是属于由分化的细胞经过培养形成可育的植 株的实例，体现了细胞的全能性。植物用种子繁殖后代，实际上就是由一个受精卵，通过细 胞的增殖和分化发育成新个体，这是由未经分化的细胞 （受精卵）发育成新个体的过程，因此不 能体现细胞的全能性。 答案： B 6 .下列关于植物组织培养中植物激素使用的说法，不正确的是 （ ） A ?植物组织培养中的关键性激素是生长素和细胞分裂素 B .先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂和分化 C.先使用细胞分裂素，后使用生长素，细胞既分裂也分化 D ?同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向 解析： 考查植物激素对植物组织培养的影响。先用生长素，后用细胞分裂素，有利于 细胞分裂，但细胞不分化。 答案： B 7 .下列说法中错误的是（ ） A ?植物细胞进行组织培养时需要无机养料 B ?镊子等器械只需用酒精消毒 D .培养基需用高压蒸汽灭菌 （ ） ②植物用种子繁殖后代 ③用烟草 ①③ ①②③
人教版选修一植物的组织培养技术一、选择题(每小题2分,共40分。在每小题给出的四个选项中,只有一项是符合题目要求的) 1以下实验不能说明细胞具有全能性的是( ) A.胡萝卜韧皮部细胞培育成植株 B.紫色糯性玉米种子培育成植株 C.转入抗虫基因的棉花细胞培育成植株 D.利用马铃薯的茎尖培育无病毒植株 答案:B 2在植物组织培养过程中,先使用细胞分裂素,后使用生长素,实验结果是( ) A.有利于细胞分裂,但细胞不分化 B.细胞既分裂也分化 C.分化频率提高 D.有利于分化,但不分裂 答案:B 3细胞分化是生物界普遍存在的一种生命现象,下列叙述错误的是( ) A.分化发生在生物体的整个生命进程中 B.分化是基因在特定时间和空间条件下选择性表达的结果 C.未离体的体细胞不会表现出全能性 D.分化过程中遗传物质发生了改变 解析:分化是基因的选择性表达,发生在整个生命进程中;分化过程中遗传物质没有发生改变;而细胞全能性的表现必须在离体条件下进行。 答案:D 4下列有关植物细胞与组织培养的叙述,错误的是( ) A.花药、胚不能作为组织培养的材料 B.大多植物细胞具有全能性 C.外植体是指用于培养的植物组织或器官 D.外植体可诱导出愈伤组织 解析:花药和胚均可作为外植体用于植物组织培养。但不同的是由胚培育而成的植物体含有本物种正常数目的染色体,而由花药培育而成的植物体为单倍体。其原因是花药离体培养的实质是花粉粒经过有丝分裂,直接发育成植物体。 答案:A 5下列对产生花粉植株的途径的叙述,错误的是( ) A.花粉可通过胚状体阶段发育成植株 B.花粉可先形成愈伤组织再诱导分化成植株 C.通过花粉培养产生花粉植株的途径主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比 D.花粉经脱分化形成胚状体,再分化出根,然后诱导生芽 解析:产生花粉植株有两种途径:一是花粉通过胚状体阶段发育成植株;二是花粉在诱导培养基上
植物组织培养技术的应用以及在培养过程中存在的问题 摘要:介绍了植物组织培养技术的应用以及在培养过程中遇到的问题并提出解决的方法。植物组织培养技术的应用范围很广,目前主要用在离体无性系快速繁殖与无毒化、植物育种、遗传物质的保存、植物次生代谢物的生产和植物基因转化等方面。 关键词:植物组织培养;次生代谢物;基因转化;褐化 植物组织培养技术是指在无菌条件下,将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体,在人工配制的环境里培养成完整的植株。植物组织培养的依据是植物细胞“全能性”及植物的“再生作用”。1902年,德国著名植物学家G。Haberlanclt根据细胞学理论,大胆地提出了高等植物的器官和组织可以不断分割,直到单个细胞,即植物体细胞在适当的条件下,具有不断分裂和繁殖,发育成完整植株的潜力的观点。1943年,美国人White在烟草愈伤组织培养中,偶然发现形成一个芽,证实了G。Haberlanclt的论点。自G。Haberlandt提出的细胞全能性理论以来,在许多科学家的努力下,植物组织培养技术得到了迅速发展,其理论和方法逐渐趋于完善和成熟,并广泛应用于农业、林业、园艺、医药等行业,产生了巨大的经济效益和社会效益。 1 植物组织培养技术的应用前景 植物组织培养技术的应用前景很广泛,目前主要用在以下几个方面。 1.1 在植物脱毒和快速繁殖上的应用 植物脱毒和离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个方面。很多农作物都带有病毒,特别是无性繁殖植物,如马铃薯、甘薯、草莓、大蒜等。但是,感病植株并非每个部位都带有病毒,White早在1943年就发现植物生长点附近的病毒浓度很低甚至无病毒。如果利用组织培养方法,取一定大小的茎尖进行培养,再生的植株有可能不带病毒,从而获得脱病毒苗,再用脱毒苗进行繁殖,则种植的作物就不会或极少发生病毒。此法已在马铃薯、大蒜、草莓、葡萄、康乃馨等多种作物上获得成功,并产生了明显的经济效益。国外40%~80%草莓是通过试管脱毒后繁殖的,意大利每个州都有年产百万草莓无毒种苗的工厂。由于运用组织培养法繁殖植物的明显特点是快速,每年可以数以百万倍的速度繁殖,因此,对一些繁殖系数低、不能用种子繁殖的名、优、特植物品种的繁殖,意义尤为重大。同时组织培养可不受地区、气候的影响,比常规方法快数万倍到数百万倍的速度扩大繁殖,及时提供大量优质种苗。目前,观赏植物、园艺作物、经济林木、无性繁殖作物等部分或大部分都用离体快繁提供苗木,试管苗已出现在国际市场上并形成产业化。 1.2 在植物育种上的应用 植物组织培养技术对培育优良作物品种开辟了新途径。目前,国内外把植物组织培养已普遍应用于作物育种,并在以下几个方面取得了较大进展: 1.2.1 单倍体育种 单倍体植株往往不能结实,在培养中用秋水仙素处理,可使染色体加倍,成为纯合二倍体植株,这种培养技术在育种上的应用称为单倍体育种。单倍体育种具有高速、高效率、基因型一次纯合等优点,因此,通过花药或花粉培养的单倍体育种,已经作为一种崭新的育种手段问世,自从1964年Guha和Maheshwari报道利用花药培养技术由蔓陀罗花药诱导单倍体植株以来,各国科学家致力于花药培养。1974年,我国科学家用单倍体育种法育成世界上第一个作物新品种---单育1号烟草品种,现已有300种植物花药培养成功。其中我国首先培育出来的就有40余种,它们主要是粮食、油料、蔬菜、林木、果树等重要经济作物。据报道,水稻品种