实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介
实验目的：
1了解分子生物学实验室的常用仪器设备的类型及用途。
2 掌握常用仪器设备的正确操作方法。
实验原理：
分子生物学实验室常用仪器设备是顺利完成各项分子生物学实验的保障。若不会或错误地使用设备，不仅会使实验结果错误，还会给他人带来不便，有些还会带来经济损失。因此，正确使用操作仪器设备应是每位学生必须首先学会的技能。
实验室主要仪器：
微量移液器、低温离心机、PCR仪、电泳仪、恒温气浴摇床、超净工作台、灭菌锅
实验内容及操作步骤：
微量移液器：
微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。
微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。
移液器常见的四种规格分别是：
0.5～10μl(读数窗显示0.5～10.0,每转1档为0.1μl);
10～100μl(读数窗显示10.0～100, 每转1档为1μl);
20～200μl(读数窗显示20～200, 每转1档1μl);
100～1000μl(读数窗显示100～1000, 每转1档为5μl).
量液的操作步骤：
1．将微量移液器装上吸头（不同规格的移液器用不同的吸头）2．将微量移液器按钮轻轻压至第一停点；
3．垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千
万不要将吸嘴直接插到液体底部；
4．缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入
吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少；
5．等一秒钟后将吸嘴提离液面
6．平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以
排出剩余液体；
7．提起微量移液器，然后按吸嘴弹
2．量液操作注意问题：
1．未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。
2．一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。
3．不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。
4．不要用大量程的移液器移取小体积样品。
5. 移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。
台式高速离心机使用步骤
1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇
一下离心机，检查离心机是否放置平衡。
2、打开门盖，将离心管放入转子内，离心管必须成偶数对称放入，
且要事先平衡，完毕用手轻轻旋转一下转子体，使离心管架运转灵活。
3、关上门盖，注意一定要使门盖锁紧，完毕用手检查门盖是否关紧。
4、插上电源插座，按下电源开关（电源开关在离心机背面，电源座上方）。
5、设置转子号、转速、时间：
在停止状态下时，用户可以设置转子号、转速、时间，此时离心机处于设置状态，停止灯亮、运行灯闪烁；按下启动离心开始（常用，最高转速为13000r/min，时间最长为20分钟）；
注意：对应的转子一定要设置在相应的转速范围内，不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。
6、离心机时间倒计时到“0”时，离心机将自动停止，当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。
注意事项：
1、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。
2、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和均匀受力，以免产生振动。
3、离心前，离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须成偶数对称放入。
4、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。
5、离心机彻底停止后，才可开盖，取样
恒温气浴摇床
操作程序：
1）样品瓶牢固放入弹簧夹中
2）接通电源开关，仪器进入准备状态
3）参数设定，（设定温度、时间、转速等参数）
4）按启动键仪器开始工作，按暂停键可暂停托盘的旋转；
5）按下控制面板的电源键两秒，显示屏显示消失，关闭电源总开关
超净工作台
操作程序：
1）使用工作台时，先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。
2）接通电源，提前30分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累的微生物，15分钟后，关闭紫外灯，开启送风机。3）工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。
4）操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。
5）最后开启工作台紫外灯，照射消毒30分钟后，关闭紫外灯，切断电源。
注意事项：
操作时一定注意关掉紫外，防止对实验人员造成伤害
灭菌锅
操作程序：
1）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上
2）通电：将控制面板上电源开关按至ON处，若水位低（LOW）红灯亮
3）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不超过200mm×100mm ×100mm为宜，各包装之间留有间隙，堆放在金属框内，这样有利于蒸汽的穿透，提高灭菌效果，灭菌时间：121℃，20min，；
如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃器皿中，且不可装满，2/3即可，121℃，18-20min
3）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，使锅盖下压，充分压紧
4）设定时间和温度，开始灭菌
5）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气
注意事项：
如是手动的灭菌锅，在灭菌过程中，应注意排净锅内冷空气，锅内冷空气如排放不净，会影响灭菌效果，达不到彻底灭菌的目的。
要等温度降为“0”，才可打开灭菌锅锅盖；
由于高压蒸汽灭菌时，要使用温度高达120℃、两个大气压的过
热蒸汽，操作时，必须严格按照操作规程操作，否则容易发生意外事故。
PCR仪
操作步骤
1、开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”,显示10秒中后，
显示RUN-ENTER菜单：
准备执行程序。
2、放入样品管，关紧盖子。
3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键
选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：
按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。
4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择
ENTER PROGRAM,按《Proceed》，
1）命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)。
2）输入程序步骤：名字输入后，确认，然后输入相关程序
5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始
运行。
6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程
序。
用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。
如何设置一个PCR程序：
一般分为8步：
1、预变性：可用94～95℃，2～10min,一般用
5min。
2、变性：一般用95℃，30s~2min,一般
45s~1min。
3、退火：温度自定，30s~2min。
4、延伸：72℃，对于〈1kb=1min,每增加
1kb加1min。
5、循环数：一般25～35个循环(2,3,4步循环）。
6、最终延伸：72℃，5～15min。
7、保存：4℃，时间设为0。
8、END。
电泳仪
操作程序：
1．首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。
2．按电源开关，显示屏出现“欢迎使用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪…”等字样后，同时系统初始化，蜂鸣4声，设置常设置。屏幕转成参数设置状态，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。
3．确认各参数无误后，按“启动”键，启动电泳仪输出程序。在显示屏状态栏中显示Start! 并蜂鸣4声，提醒操作者电泳仪将输出
高电压，注意安全。之后逐渐将输出电压加至设置值。同时在状态栏中显示“Run”，并有两个不断闪烁的高压符号，表示端口已有电压输出。在状态栏最下方，显示实际的工作时间（精确到秒）4．电泳结束，仪器显示：“END”，并连续蜂鸣提醒。此时按任一键可止鸣
注意事项
1．电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。2．仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3．由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4.使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。
作业：
1.列出分子生物学常用仪器的名称，用途及操作时的注意事项。答：见实验内容及操作步骤中。
实验二琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测
一. 实验目的
1.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;
2.学习琼脂糖凝胶电泳的操作。
二. 实验原理
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。
溴化乙锭（EB）为扁平状分子，在紫外照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。
三. 仪器和试剂仪器
微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉
试剂
琼脂糖：1.0%；
电泳缓冲液（50 ×TAE 电泳缓冲液取Tris24.2g ，冰醋酸5.7ml ，0.25mol/L EDTA (pH8.0)20ml ，加蒸馏水至100ml ）
EB：5 μl / 100 ml TBE
电泳材料：标准分子量核酸（DL2000）
四. 操作步骤
（1）制胶（以20 mL为例）
a. 称取0.2 g 琼脂糖，加入20 ml 的1XTAE缓冲液（pH 8.0），
摇匀；
b. 微波炉加热，至琼脂糖完全溶解（要防止过热溢出三角
瓶）；
c.将制胶板放入制胶槽中，插入适当的梳子，将溶解的琼脂糖
（约50℃）加入2ul EB后，混均匀，倒入其中，直至厚度为4～
6 mm（如有气泡要把气泡赶出），在室温下冷却凝固(约30~ 45
min)；
d.小心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔完好,将胶板置于电泳
槽中。
（2）点样
用微量移液器将5 μl含蓝色染液的DL2000 加入点样孔下部。
（3）电泳
打开电源开关，调节电压至3~5 V/cm(约100 V)，可见到溴酚蓝
条带由负极向正极移动，约30-40分钟后即可观察结果。
（4）观察
将电泳好的胶置于紫外透射检测仪上，打开紫外灯，可见到橙
红色核酸条带，根据条带粗细，可粗略估计该样品DNA的浓
度。如同时有已知分子量的标准DNA进行电泳，则可通过线性DNA条带的相对位置初步估计样品的分子量。
做琼脂糖凝胶电泳应注意哪些问题？
答：1. EB为强致癌剂，使用时一定要戴手套。
2. EB废弃液要经处理后才能丢弃。