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第11卷 第11期 2009 年 11 月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 11 No. 11 Nov .，2009
的基本方式，此方法方便简单，对动物损伤较小，适合实验研究中间采样，且采血量大基本满足研究需要。主要方法如下：大鼠可腹腔麻醉，亦可不需麻醉直接固定，仰卧位固定后，皮肤局部消毒，在胸锁乳突肌下缘进针约2mm 左右，保持针管负压，针头角度30~45°。本方法优点是采血完毕后，胸锁乳突肌可将针眼自行压闭，基本不需压迫止血。减少感染机会。
６ 其他途径
除上述采血途径外，尚有摘眼球、后腔静脉、股
静脉等采血方式，但应用相对较少，缺点较多，不再做详细说明。◆
参考文献[ 1 ] 张颖，望文桢.大鼠心脏采血的几点体会[ J ] .实验动物科学，
2008，25 ( 1 )：2.[ 2 ] 车兆义，邹悦，宋清斌. 大鼠实验中几种常用的采血方法探讨 [ J ] .局解手术学杂志，2008，17 ( 2 )：84-86.[ 3 ] 罗卫国，张伟.大鼠两种采血方法介绍[ J ] . 第四军医大学吉
林军医学院学报，2000，22 ( 1 )：26.[ 4 ] 吴清洪，顾为望，林继红，等.一种大鼠采血方法介绍[ J ]. 动物
医学进展，2004，25 ( 1 )：133.[ 5 ] 齐云，蔡润兰，宋杨，等.新药长毒试验动物血液生化测定规范
化研究系列之一—采血部位对血液生化值的影响[ J ] . 中国比较医学，2006，16 ( 2 )：65-68.[ 6 ] 安丽，鲍清.大鼠颈外静脉采血的新方法[ J ] .中国比较医学
杂志，2003，13 ( 4 )：223.
慢性难愈合创面成因复杂类型多样，不仅从肉体
和精神上给患者带来极大痛苦，同时也加重了社会和家庭的经济负担。中医药治疗慢性难愈性创面具有自身的优势和特色，在中医外科临床中已得到证实。本研究通过实验观察补虚祛瘀法对创面修复肉芽组织形成期Smad3、TGF-β1的影响，以阐明其作用机理，并为中医药治疗慢性难愈性创面提供理论依据。
1 材 料
1.1 实验动物
雄性清洁级SD 大鼠30只，体重（400±20）g。上海中医药大学动物实验中心提供，动物合格证号SCXK(沪)2008-0002。
1.2 受试药物
复方愈疡散（由补虚方和祛瘀方组合而成，药物成分主要有黄芪、白术、当归、鬼箭羽等，批号：20080821-F）；补虚方（药物组成主要有黄芪、白术等，批号：20080821-B）；祛瘀方（药物组成主要有当归、鬼箭羽等，批号：20080821-Q）。以上诸药均由广西中医学院附属仁爱医院制剂室提供，同期制备及低温储藏。
1.3 实验试剂
（1）大鼠创面模型制备用药：新洁尔灭酊、0.9％生理盐水、0.1％盐酸氯胺酮。（2）免疫组化试剂：Smad3多克隆抗体(上海博士德公司，批号：
复方愈疡散对糖尿病大鼠难愈合创面Smad3 TGF-β1的影响
秦海洸1，何长杰2
（1.柳州医学高等专科学校，广西 柳州 545006；2.山东省泰安卫生学校中医教研室，山东 泰安 271000)摘 要：目的：研究补虚祛瘀法促进慢性难愈合创面愈合的机理。方法：采用改良付氏大鼠模型为研究对象，
分为模型对照组(A 组)、复方愈疡散组(B 组)、补虚方组(C 组)、祛瘀方组(D 组)，运用免疫组化法分别研究各组第10天时创面瘢痕组织中Smad3、TGF-β1的变化。结果：第10天时，B 组Smad3、TGF-β1表达低于A 组，C 组Smad3的表达低于A 组。提示复方愈疡散在实验性大鼠难愈合创面肉芽组织形成期，对TGF-β1 → Smad3信号转导通路的调控起着重要作用。
关键词：糖尿病；创面修复；瘢痕；Smad3；TGF-β1
中图分类号：R587.2 文献标识码：B 文章编号：1673-842X (2009) 11- 0218- 02收稿日期：2009-06-13基金项目：广西科技厅实验室能力提升及培育基地建设项目（桂科能：07109004-3Z）；广西自然科学基金项目（2009AM4099）作者简介：秦海洸（1970-），男，山东聊城人，副教授，博士，主要从事中医外科临床和科研工作以及临床中药学教学和科研工作。
Influence on Smad3 TGF-β1 in Chronicity Rehabilitation of Surface
of Wound by Therapeutic Methods of Fufangyuyang Pulvis
QIN Hai-guang 1，
HeE Chang-jie 2（1.Liuzhou Medical College，Liuzhou 5450006，Guangxi，China；
2.Taian Health School，Taian 271000，Shandong，China）
Abstract：
Objective: To research the mechanism of chronicity raw surface coalesced by the method of reinforce dificiency and removing blood stasis.Methods :We divided rats into four groups:A(group of hpysiologic saline),B(group of Fufangyuyang Pulvis),C(group of reinforce dificiency),D(group of removing blood stasis) ,and then treated them by different therapeutic methods.The changes of TGF-β1, Smad3 by immunohistochemistry at 10th day were observed.Results :The express of Smad3 and TGF-β1 of group B was lower than that of group A,while the express of Smad3 of group c was lower than that of group A.Conclusion :The method of reinforce deficiency and remodeling blood stasis can modulate TGF-β1→Smad3 signal transduction.
Key words：Diabetes Mellitus; Rehabilitation of surface of the wound; cicatrice; Smad3; TGF-β1
11卷辽宁中医药大学学报H00004089-M10)；TGF-β1多克隆。抗体(Santa
Cruz公司，批号：H00005023-g11)；Envisim试剂盒
(丹麦DAKO公司，批号：L30308607)。
2 方法与结果
2.1 动物分组及造模
30只大鼠随机分为模型对照组（A组，生理盐
水）、复方愈疡散组（B组）、补虚方组（C组）、祛瘀方
组（D组），每组8只。采用改良付氏糖尿病慢性难
愈合创面大鼠模型方法[1]，腹腔注射氯胺酮（0.2mL/
只）麻醉大鼠，在无菌条件下用打孔器在糖尿病模
型大鼠背中部打一圆孔，深至筋膜，直径1.8cm，创
面面积为2.54cm2，创面止血后无菌纱布包扎。造模
后每天灌胃给药1次，连用10天。各用药组给药剂
量：A组生理盐水10mL，B组含生药1.5g，C组含生
药1.05g，D组含生药0.45g。
2.2 标本采集
造模后第10天，用眼科手术剪分离留取各创面
新生肉芽组织（500±10）mg。
2.3 免疫组化实验步骤
⑴ 4组标本均用1％中性福尔马林固定，石蜡
包埋，连续切片，同时进行免疫组化Envisim二步法
测定Smad3、TGF-β1。
⑵ 图像分析：选择200倍视野，每张免疫组化
片任选3个视野，拍照后用 Adobe Photoshop CS 8.0
作分析，数据导入Excel，建立数据库。评定指标：
实验结果以细胞及基质显色面积为标准，小于5％
为-，5%~10%为+/-，10%~30%为+，30%~50%为
++，50％~80％为+++，大于80％为++++。
2.4 统计学处理
采用SPSS 11.5统计软件包对相关数据进行秩
和检验(Kruskal Wallis Test)，并用SAS 8.0统计软件
包做多个样本的两两比较。统计数据以Mean rank
和Chi-Square值表示，P<0.05，具有统计学意义。
2.5 结果
实验性创面第10天肉芽组织中Smad3 TGF-β1
的含量复方愈疡散组能明显降低改良付氏糖尿病
慢性难愈合创面大鼠模型创面新生肉芽组织的
TGF-β1及Smad3表达；补虚方组仅降低Smad3表
达；祛瘀方组对TGF-β1及Smad3表达无明显影响。
结果见表1。
表1 各组对实验性创面第10天肉芽组
织中Smad3 TGF-β1含量的影响
组 别 TGF-β
1
Smad3 n Mean rank n Mean rank
A组 8 24.80 8 24.71
B组 8 11.61* 8 11.12*
C组 8 13.89 8 11.31*
D组 8 13.71 8 15.45
Chi-Square 10.271 11.591
P(Kruskal Wallis Test) 0.039 0.028注：与生理盐水组（A组）相比*P<0.05。
3 讨 论
传统中医学认为，创面愈合过程是“腐祛肌生，肌平皮长”的过程，“祛腐生肌”的指导思想一直占有重要地位。而慢性难愈性创面常常是“祛腐而腐不脱，腐脱而肌不生”。吾师唐汉钧教授在对历代中医学文献深入研究和总结的基础上，结合自己多年临床经验，并参以现代医学研究成果，针对慢性难愈性创面提出了“补虚祛瘀”的学术观点。唐教授认为：慢性难愈性创面难以愈合之原因在于“虚瘀并存，互为标本”，“虚瘀并存”则“腐肉难脱，新肉难生”。“复方愈疡散”是在“补虚祛瘀”指导思想下配伍组方，专为慢性难愈性创面而设。在多年的临床应用中，证明此方不但促愈作用明显，而且愈后瘢痕面积小，质量佳，皮色接近正常，愈后不易复发。
在伤口愈合过程中，TGF-β1信号传递，首先是TGF-β1与其特异性Ⅰ、Ⅱ型受体结合成三元复合物，然后是Ⅱ型受体使I型受体GS区中的丝氨酸/络氨酸激酶发生磷酸化，最后由Smad3蛋白完成细胞内的信号传递[2]。转化生长因子(TGF-β1)是伤口愈合中重要的调控因子，同时也被公认为最强的致纤维化因子，激活细胞内信号转导分子Smad3是其促进胶原合成的必由途径[3]。TGF-β1信号进入细胞浆后使Smad 3和Smad 2磷酸化，与Smad 4形成多聚物，随后Smads复合物易位至细胞核，在核内激活TGF-β1反应性基因的转录。Smad 2，3为受体调节Smad，Smad 7抑制受体调节Smad的信号传导，Smad 4是受体调节Smad传导信号的伴侣[4]。专家认为调节Smad3在组织修复过程中的表达成为治疗慢性难愈合创面理想的靶点。然而，创面修复是一个动态的病理生理过程，在修复过程中分为连续而又相互重迭的3个阶段，即炎症期、肉芽组织形成期和瘢痕形成重塑期。不同时期的生长因子的表达各异，在研究中以TGF-β1、Smad3为主线，选择皮肤全缺损动物模型第10天时，观察不同方剂对创面修复过程中肉芽组织形成期信号转导的影响。
在实验中发现：第10天时，复方愈疡散组TGF-β1表达明显低于生理盐水组，Smad3分子的表达明显低于生理盐水组；补虚方组Smad3分子的表达明显低于生理盐水组。有研究表明TGF-β1对角质形成细胞的生长和趋化作用依赖于Smad3，其最终结果是抑制重上皮化。Smad3在体内传递重上皮化的抑制信号，并介导单核细胞和中性粒细胞向TGF-β1的化学趋化性迁移。Smad3介导的信号途径在体内抑制创伤愈合，因为去除Smad3可引起了重上皮化的加速和伤口面积的缩小[5]。据此，笔者认为：复方愈疡散在肉芽组织形成期的作用是减少Smad3的分泌，从而加速创面重上皮化，促进了伤口愈合。而补虚方组表现与复方愈疡散组相似，这表明复方愈疡散的作用有可能来自于组方中的补虚类中药。
由上分析，提示复方愈疡散通过对TGF-β1、Smad3分子表达的影响，直接调控创面的修复。当然创面修复过程相当复杂，有众多细胞因子的参与以及多种因素的影响，但复方愈疡散在创面修复过程中对TGF-β1→ Smad3信号转导通路的调控可能是其促进难愈性创面愈合的机制之一。◆
参考文献
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2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的
STZ诱导的小鼠糖尿病模型 糖尿病（diabetes mellitus，DM）是胰岛素抵抗和胰岛素缺乏导致的以高血糖为主要特征表现的代谢紊乱综合征，易发生心、脑、肾等并发症。糖尿病状态下血浆游离脂肪酸异常增高，心肌耗能增加，葡萄糖代谢下降，脂肪酸代谢增加，心脏内过量的脂肪酸摄取和氧化导致心肌内脂肪代谢产物的积聚引起心脏脂质毒性，并在此基袖上出现氧化应激，导致细胞调亡、内皮功能紊乱、炎症反应增加，同时出现心肌的损伤，心肌的结构和功能均发生改变，最后导致糖尿病患者的死亡。 1.实验动物 SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。 2.实验分组： 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.模型周期 24W 4.主要试剂及配制方法 柠檬酸、柠檬酸三钠、链脲佐霉素(Streptozocin,STZ) 1.柠檬酸钠缓冲液配制：将 2.10g柠檬酸加入双蒸水100ml配成柠檬酸母液，称为A液；将2.94g柠檬酸三钠加入双蒸水100ml配成柠檬酸钠母液，称为B液；将A、B液按1:1.32比例混合，pH计测定pH值，调定溶液pH=4.0，即是所需配制STZ的0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液。 2.STZ溶液的配制：将STZ溶于0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液中，新鲜配制成10mg/mL浓度的STZ溶液，并用0.22μm滤菌器过滤除菌。注意避光配制，现用现配。 5.建模方法 1.术前12h禁食 2.模型组小鼠按照120mg/kg剂量的STZ进行腹腔注射，对照组给予给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液。 3.STZ注射3d后，测空腹血糖，选择血糖高于16.7mmol/L纳入正式实验。
大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
糖尿病足的诊疗操作规程 1、目的 建立糖尿病足的临床操作规程，确保诊疗行为的规范性和可行性。 2、范围 适用于所有糖尿病足的诊疗。 3、责任人 专业组负责人。 4、依据 《中国糖尿病足诊治指南（2017）》 5、定义 糖尿病患者由于合并神经病变及各种不同程度末梢血管病变而导致下肢感染、溃疡形成和(或)深部组织的破坏。 6、内容 6.1前言 足部是糖尿病这个多系统疾病的一个复杂的靶器官。糖尿病患者因周围神经病变与外周血管疾病合并过高的机械压力，可引起足部软组织及骨关节系统的破坏与畸形形成，进而引发一系列足部问题，从轻度的神经症状到严重的溃疡、感染、血管疾病、Charcot关节病和神经病变性骨折。如果积极治疗不能充分解决下肢出现的症状和并发症，则会
造成灾难性的后果。 6.2临床表现 神经病变表现：患肢皮肤干而无汗，肢端刺痛、灼痛、麻木、感觉减退或缺失，呈袜套样改变，行走时脚踩棉絮感。 下肢缺血表现：皮肤营养不良、肌肉萎缩，皮肤干燥弹性差，皮温下降，色素沉着，肢端动脉搏动减弱或消失。6.3辅助检查 6.3.1 神经系统检查： 糖尿病周围神经病变（DPN）可以通过以下几种方法得到诊断。 ①10g尼龙丝检查法 该方法是较为简便的感觉神经检测方法，要具备一根特制的尼龙丝（其弯曲45°能够产生10g的压力）。 ②震动觉 该检查是对深部组织感觉的半定量检查。 ③踝反射、痛觉、温度觉 这3种检查方法，也可以应用于糖尿病周围神经病变的诊断。 ④神经传导速度（NCV） 过去被认为是DPN诊断的“金标准”，通常认为有两项或以上NCV减慢者结合其他症状体征及辅助检查可考虑存在DPN。
小剂量多次链脲佐菌素腹腔注射诱导1型糖尿病小鼠模型及模型鉴定 摘要：目的考察对C57BL/6J小剂量多次链脲佐菌素腹腔注射诱导1型糖尿病模型的成模率、 模型鉴定及稳定性。方法雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、链脲佐菌素50mg/kg多次 给药组，考察多次给药后链脲佐菌素对小鼠血糖、血清胰岛素、IL-10、IFN-γ、胰腺组织的影响。 结果50mg/kg多次给药诱导C57BL/6J小鼠成模率为83.64%，空腹血糖值显著升高(P<0.01)， 血清胰岛素和IL-10值明显下降(P<0.01)，血清IFN-γ含量明显增加(P<0.01)，胰腺组织中胰岛数 目显著减少，胰岛周围及胰岛内出现胰岛炎。结论小剂量(50mg/kg)多次链脲佐菌素腹腔注射 C57BL/6J可诱导稳定可靠的1型糖尿病小鼠模型。 关键词：链脲佐菌素；1型糖尿病模型；腹腔注射；小剂量多次 Multiple low dose intraperitoneal injection of streptozotocin-induced type 1 diabetes mice and model identification Abstract：Objective To investigate the molded rate of type 1 diabetes and model stability of C57BL/6J induced by intraperitoneal injection of multiple low dose strptozotocin. Method Male C57BL/6J were randomly divided into normal control group and streptozotozin 50mg/kg dose group, blood glucose, serum insulin, IL-10 and IFN-γ were measured after repeated administration of streptozotocin. Results The molded rate of multiple 50mg/kg dose group was 83.64%, the fasting blood glucose serum IFN-γ level were significantly higher than the normal group while the serum insulin and IL-10 values decreased significantly (P<0.01). The number of islets of pancreatic tissue was significant reduction and insulitis occurs surrounding the islets. Conclusion Multiple low dose (50mg/kg) intraperitoneal injection of streptozotocin in C57BL/6J can induce stable mouse model of type 1 diabetes. Key words: streptozotocin; type 1 diabetes model; intraperitoneal injection; multiple low dose 胰岛素依赖型糖尿病又名1型糖尿病，是由于机体自身反应性免疫应答攻击胰岛β细胞，使其遭破坏、功能缺失，从而导致胰岛素绝对缺乏所引起的糖尿病。由于β细胞具有产生胰岛素和调节血糖的功能，β细胞群的毁坏最终导致了血糖的失调和高糖血症的发生。这种疾病的发生通常被认为是由于遗传易感性以及免疫系统对环境的免疫应反应答亢进而引起。因此，可以说1型糖尿病是由遗传和环境因素相互作用而引起的一种代谢异常综合征。胰岛素依赖型糖尿病已成为危害青少年健康最主要的慢性病之一，其治疗仍然是全球医疗的棘手问题。糖尿病带来的危害，几乎都来自它的并发症。血糖控制良好与否与并发症密切相关，因此治疗目标是达到最佳血糖控制，以延缓或防止并发症。[1]。建立可靠的动物模型是治疗1型糖尿病的必备条件。目前诱导1型糖尿病模型的方法众多，如化学诱导法、T细胞介
实验流程 1、末次灌胃后，大鼠禁食不禁水12h，与麻醉前进行称重，行腹腔注射3%戊巴 比妥钠，0.3ml/100g 2、腹主动脉取血，留取全血标本。 3、取肝、脾、肾、胃、心脏及脑。 4、称肝、脾、肾、胃、心脏及脑组织，并分装各个组织，放入-80℃冻存。其中 肝组织剪取1g肝脏，送至肝均浆；肝10%甲醛固定做HE染色，每组5只； 肝4%戊二醛固定做电镜，每组一只； 5、小肠10%甲醛固定做HE染色，每组5只；小肠4%戊二醛固定做粪便电镜，每 组1只；其余肠组织-80℃冻存。 6、肝；制成肝均浆，1g肝脏加入9ml冰生理盐水，制成肝均浆液，离心后，取 上清液，于-80℃冻存。 7、全血标本静置30min后，进行离心，分离血清，血清和血浆均放入-80℃冻存。检测指标： 1、肝脏组织 1.1HE染色观察肝脏组织的病理学改变。 1.2透射电镜观察肝脏超微结构变化 1.3电感耦合等离子体质谱（ICP-MS） 1.4试剂盒测肝均浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化酶 （GSH-Px）、ROS活性氧水平 1.5检测肝脏组织中Western blot、NF-kB、COX-2表达情况，计算其阳性表达 率 2、血清（血浆） 2.1全自动化分析仪测谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、谷氨转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶TG 2.2酶联免疫吸附法检测血浆中肠结合脂肪酸蛋白（FABp2）、D-乳酸（D-LA）及二胺氧化酶（DAO）水平评价大鼠大肠粘膜损伤 2.3试剂盒测血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、4-HNE（羟基壬烯醛）、 谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）评价大鼠氧化应激水平 2.4酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血浆中α肿瘤坏死因子（TNF α）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)浓度 3、肠道菌群
1例糖尿病足的伤口护理 发表时间：2018-12-03T14:49:04.027Z 来源：《航空军医》2018年20期作者：许小红伊晓瑜 [导读] 下肢远端外周血管病变和下肢远端神经异常相关的足部感染，是由糖尿病足破坏深层组织和溃疡组织导致的。（解放军第一七五医院厦门大学附属东南医院门诊部福建漳州363000） 下肢远端外周血管病变和下肢远端神经异常相关的足部感染，是由糖尿病足破坏深层组织和溃疡组织导致的[1]。慢性溃疡是糖尿病足最常见的后果，致残甚至截肢是糖尿病足最严重的结局，这使得患者的生存质量大大降低，给患者心理和生理带来极大的痛苦，给患者的家庭带来沉重的经济负担。大约有15% 的糖尿病（DM）患者的足溃疡是不同程度的，被截肢的糖尿病患者大约占1%。本文对该例糖尿病足疗患者的感染伤口采用银离子敷料联合普朗特凝胶进行伤口护理，取得了令人满意的治疗效果，现整理报告如下：1 病例介绍 患者，男，58岁，退休职工，右足跟部可见一大小约3.0cm×4.0cm的椭圆形伤口，皮肤破溃深达肌层，基底部分发黑坏死伴皮下波动感，足跟部红肿、皮温高。患者糖尿病肾病、尿素症10余年，因右足跟部溃疡于2017年3月16日来我科门诊换药中心行换药护理，数字疼痛评分3分，评估Wagner分级为2级。。 2 创面处理 控制感染、有效冲洗、清洁创面。3％过氧化氢清洗创面，生理盐水洗净创面，碘伏消毒创面及周边皮肤，无菌纱布擦干伤口后选用纳米银敷料联合应用普朗特凝胶，纳米银敷料的网状棉纤维结构特性，也使得其具有理想的渗透性，能够有效促进创面渗出引流，加快创面愈合速度。普朗物凝胶能够有效清除和预防细菌生物膜的革新，可清洁、清创和提供湿性愈合环境，纳米银敷料和普朗物凝胶联合应用，能起到有效控制感染和促进组织修复的作用，加快了创面的愈合。外层敷料选用纱布绷带固定。每日换药1次，感染控制后视渗出物的颜色、量、性状可隔天或3ｄ换药１次。 伤口愈合过程： 伤口愈合的过程如图1A-D所示。 C.2017-03-25 D.2017-03-31 图1 病人伤口愈合过程 3 体会 3.1 针对该患者制定的综合性足部治疗包括积极控制血糖、营养干预、糖尿病足患教、局部清创换药、足部减压、足部皮肤护理等。临床上糖尿病足患者容易合并感染，渗出液较多，针对这样的糖尿病足伤口渗出液的管理和敷料的正确选择很重要，伤口过湿易导致肉芽水肿或周围皮肤浸渍；伤口过干，上皮细胞移行困难，故选择合适的清创换药方式对患者伤口的预后至关重要[2]。选用普朗物伤口凝胶，外层使用纳米银敷料覆盖以减少药液的蒸发及被外层绷带吸收的风险，从而保证药液的抗感染作用得到最大限度的发挥。本例患者临床实践也证明，普朗特伤口凝胶联合纳米银敷料在该患者身上取得了良好的抗感染效果，为感染控制后创面生长提供了良好的基础。 3.2 糖尿病教育在糖尿病足的诊治过程中占有重要地位，个体化的糖尿病教育可有效改善糖尿病足患者的伤口愈合情况和预后[4]。对患者做好健康宣教，包括饮食指导、血糖监测、足部护理等相关内容。包括：①糖尿病患者的高血糖抑制中性粒细胞功能，创面炎症反应弱，这直接导致了纤维母细胞生长和胶原合成减少。故血糖控制在空腹7 mmol/L 以内，餐后2 h 10mmol/L 以内，有利于伤口愈合。②告知患者正确的足部护理知识，患者依从性好，积极配合作好各项内容并按时换药，对伤口愈合起到促进作用。③告知患者伤口治疗期间足部减压的方法行走时使用轮椅、拐杖等助行器帮助行走，最好定做糖尿病足专用鞋，从而减少压力对伤口愈合的影响。参考文献 [1] 李茜.中医护理肾性水肿的临床体会[J].转化医学，2015，12（12）：7147. [2] Martini J.Diabetic foot：detection and prevention[J].Rev Med Interne，2008，29（sl2）：260-263. [3] Aragón-Sánchez J，Lázaro-Martínez JL，Quintana-Marrero Y，et al.Super-oxidized solution（Dermacyn Wound Care）as adjuvant treatmentin the postoperative management of complicated diabetic foot osteomyelitis：preliminary experience in a specialized department[J].Int J Low Extrem Wounds，2013，12（2）：130-137. [4] 中华医学会糖尿病学分会.中国2 型糖尿病防治指南（2013 版）[J].中华糖尿病杂志，2014，6（7）：447-498.
伤口湿性愈合理念 一、伤口的定义:机体受到致病因素的作用，皮肤或皮下组织的生理功能受到损伤，伴或不伴皮肤的完整性遭到破坏。 二、人类伤口照护史 4500年前人们就发现：创面被覆盖后较不覆盖愈合效果要好。长期以来，曾出现大量不同类型的敷料，有些是动植物，有些是矿物质。甚至粘土，砂和雪也用作创面覆盖物。 十九世纪欧洲人开始应用具有吸收功能的材料，如拆散的旧的绳索或碎布片等材料加工成为覆盖创面的敷料。 “棉纱布”时代”：1867年，约瑟夫.李斯特发明了棉纱布敷料对术后切口覆盖以阻隔空气中的细菌对创面的侵袭。之后的一百年，以棉纱布制品为代表的“干燥透气”理论成为当时的主流。 现代伤口愈合理论：利用伤口敷料用密闭半密闭方法保持伤口低氧、微酸、适度湿润的环境，增加细胞生长及移行速度，加速伤口愈合，并可防止痂皮形成。 三、干性愈合的缺点： 伤口脱水、结痂，不利于上皮细胞爬行 生物活性物质丢失，愈合速度缓慢 敷料与创面粘连，更换敷料时患者疼痛；再次性机械损伤 容易发生感染 换药频次快，护理量大 四、湿性愈合的优点 有利于坏死组织的溶解 维持创面局部微环境的低氧状态 有利于细胞的增殖分化和移行
保留渗出液内的活性物质并促进其释放 保持创面温度接近或恒定在人体常温：37度 保持伤口局部湿润不会形成结痂，避免再次机械性损伤，减少疼痛降低感染几率 五、选择敷料时应考虑的因素 渗出量多少 伤口的解剖部位 坏死组织的多少 伤口有无感染 有无死腔或者窦道 六、新型敷料 1、水凝胶敷料（清创胶） 成份：是由羧甲基纤维素钠加以纯净水组成 优点： –提供湿性、微酸的愈合环境 –保护创面，减轻伤口疼痛 –促进肉芽组织生长 –溶解黑痂及坏死组织 –填充窦道及腔隙类伤口 –保护外露骨膜、肌腱、内脏器官等，防止坏死 缺点: –涂抹过多容易造成伤口浸渍; –不能涂抹在正常皮肤上; –需要二级敷料固定 清创胶使用注意事项 1.少量涂抹在坏死组织上,不要涂在正常的皮肤上. 2.对于厚而硬的黑痂皮可预先用刀片在痂皮上划线,可加快清创
糖尿病烂脚长期不愈合 糖尿病“烂脚”俗称糖尿病足，是糖尿病的常见并发症之一，据世界卫生组织估计，目前全世界范围内约有1.5亿糖尿病患者，估计我国现有患者超过4千万，居世界第2位。现在全世界非外伤截肢中有５０％为糖尿病患者，仅美国一年就有４００００多名患者截肢，极大地影响糖尿病人的生活质量，严重威胁着糖尿病人的健康。 那么什么是糖尿病足呢？糖尿病足是由周围神经病变、微细管病变、大血管病变和不良的卫生诸多因素之间复杂的相互作用所导致的。糖尿病人常因足部感染引起足及下肢坏疽，称为“糖尿病足”。表现为足部麻木，感觉迟钝、发冷、疼痛等。一旦发病，由于其治疗复杂，困难大，会面临截肢等后果。因此糖尿病足部病变是糖尿病最可怕的严重并发症之一。以下就让专家为我们详细的介绍一下坏疽的原因及治疗，希望能对大家有所帮助！ 糖尿病足坏疽大致可以归纳为四点： １、糖尿病血管病变及糖尿病周围血管病变是全身血管病变的一部分，主要病理改变是动脉粥样硬化，动脉壁中层钙化，内膜纤维增生，致使血管腔狭窄，下肢及足部供血不足，最终导致肢端坏死。 ２、糖尿病微血管病变及微循环障碍糖尿病患者微血管病变、血粘度增高、微血流紊乱等因素致糖尿病微循环障碍，此为糖尿病足的病因病理基础，亦是糖尿病足预后的决定因素。 ３、糖尿病周围神经病变糖尿病周围神经病变是糖尿病患者肢体营养和代谢紊乱的重要原因，与糖尿病足的发病密切相关。 ４、足部感染足部感染是糖尿病足形成、发展及恶化为坏疽的重要原因。足部感染的原因很多，既有局部因素，如足部皮肤损伤、高危足、死腔、引流不畅等，也有全身因素，如代谢紊乱、营养不良、免疫力下降等。 糖尿病足缺血性坏死的治疗： 糖尿病足如何治疗？这是大多数糖尿病足患者及家属都非常关心的问题，一旦出现糖尿病足意味着被截肢的可能。在大型综合医院目前对于糖尿病足一般都没有好的治疗方法，只能在迫不得已的情况下给糖尿病足患者截肢。济南糖尿病医院专家在这里说一下目前糖尿病足常规疗法的基本步骤。 一，基础治疗 （1）综合治疗需要始终贯穿于整个治疗过程中，正确处理好整体与局部的关系，切忌只见局部伤口，忽略全身情况的做法，主要内容包括如下：1.控制糖尿病，尽量使血糖及血压正常；2.改善微循环及血管再通；3.抗感染；4.支持治疗。 二，内科治疗 （1）控制血糖及血压；（2）抗感染；选用敏感、广谱、足量、两种以上抗生素联合使用的原则；（3）纠正急慢性并发症：如酮症酸中毒、低蛋白血症等；积极改善心肾功能，控制高血压。（4）改善微循环；通过扩张血管、抗凝、将纤、血小板拮抗剂等途径，如ACEI、丹参液、前列腺素E、红花注射液等。（5）神经营养制剂：维生素B6、维生素B12，A TP、辅酶A、神经节甘酯等。 三，外科治疗 （1）足部感染：应用抗生素控制感染。 （2）神经足溃疡：1.应用改变压力的矫形鞋或足的矫形器来达到改变患者足的局部压力；
伤口愈合不良的常见原因及治疗方法 伤口愈合不良指伤口愈合的3个生物学阶段出现明显的停滞或延迟而导致伤口 长时间不愈合甚至伤口范围扩大，伤口床有明显的感染性或非感染性渗出，伴或不伴坏死组织；另一种情况是I型胶原肉芽过道增殖而致瘢痕过度增生、挛缩。 一、伤口愈合不良的影响因素 既往认为，伤口愈合的快慢与好坏取决于病人的体质（如贫血、体质虚弱者，其伤口愈合将会延迟）、病因及特定的伤口环境。现代研究发现，除上述因素外，营养因素、心理因素及伤口护理的操作因素也是不容忽视的影响因素。营养不良使机体免疫力下降：炎症反应期延迟，伤口易感染；营养素缺乏，组织增生受抑制，伤口增殖期停滞，因而营养因素影响者伤口愈合的全过程。心理状态因影响病人的食欲、睡眠和免疫力而影响伤口愈合，积极、乐观、向上的心理有利于伤口愈合，而消极、悲观、抑郁等负面心理则会延迟伤口愈合。任何增加病人不适感的伤口护理操作或不利于营造伤口愈合理想环境的操作都会延迟伤口愈合。 二、伤口愈合不良的临床表现 因一种或多种因素的影响，伤口愈合不良可有不同程度的临床表现：清创过程停滞、肉芽组织形成不良或延迟、无上皮再生伴典型的术后并发症（血清肿、血肿、伤口裂开和瘢痕过度形成）以及伤口感染等，上述表现均可引起更炎症的伤口愈合不良。 三、伤口愈合不良的类型与处理 （一）血清肿 1．基本概念：血清肿是指血清渗液集中渗入伤口空隙中，引起局部肿胀。 2．产生原因：可能于伤口边缘的刺激有关，如异物、凝固的坏死物、大团的结扎线、伤口张力过大（缝合过紧、创缘错位）等。 3．可能发生的并发症：因血清肿系高蛋白渗出液，富含细菌生长繁殖所需的营养，淤滞在伤口空隙中可能成为良好的培养基，使细菌易于生长而致感染。 （二）伤口血肿 1．基本概念：伤口血肿是指血液渗入伤口裂隙中，外观见伤口周围肿胀，有片状红色淤血，若继发性出血明显，病人还可出现呼吸、心率加快，血压下降等。 2．产生原因：伤口血肿产生的原因有：① 伤口血管止血不充分或结扎血管的缝线脱落；② 术后血压升高和塌陷的血管再灌注；③ 活动过度引起出血； ④ 抗凝治疗引起凝血障碍，如心脏瓣膜置换术后，应用肝素或华法令抗凝治疗； ⑤ 凝血系统疾病，如血小板减少性紫癜、血友病（第VIII因子缺乏）等。 3．可能的并发症：血肿可引起局部张力过大，伤口缝合断裂、裂开，
糖尿病大鼠尿nephrin 的检测及意义(一) 【摘要】目的：建立糖尿病大鼠模型，探讨糖尿病大鼠尿中nephrin的检测、动态变化及意义。方法：SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制成糖尿病模型，正常对照组注射等量枸橼酸缓冲液，动态检测各组大鼠24h尿微量白蛋白及肾功能，以Western-Blot方法动态检测尿中nephrin。结果：正常大鼠尿中无nephrin排泄，而糖尿病大鼠尿中可检测出nephrin，诱模早期（2周）即可出现，随着病程的延长，nephrin逐渐增多，8周达高峰后，nephrin的排泄又逐渐减少。结论：糖尿病肾病早期nephrin即可从尿中排泄，尿nephrin可作为糖尿病肾病的早期诊断指标之一，还将有助于监测、判断糖尿病肾病的病程进展。 【关键词】糖尿病肾病；大鼠；微量白蛋白;尿nephrin 〔Abstract〕Objective:Diabeticratswereinducedtoexplorethedetectionofurinarynephrinindiabeticrats,itsdyna micchangesandclinicalsignificance.Methods：SDratsweredividedinto2groups.Diabeticratsmodelwereinducedbysingleintraperitonealinjectionof streptozocin(STZ),whilethoseofnormalcontrolgroupwereinjectedwithequaldosageofcitricacidbuffe rsolution.Twentyfourhoursurinarymicroalbuminandrenalfunctionwereambulatorilymonitored,and UrinaryNephrinwasmeasuredwithWestern-Blot.Results：Thetestshowedthatnourinarynephrinwerefoundinnormalcontrolgroup,butitwasdectetedoutindia beticratsgroup,anddiscoveredattheearlystage(2weeksafterSTZinjection).Withtheextensionofcours e,urinarynephringraduallyincreased,andthengraduallydecreasedafterreachingitspeakbyweek8.Co nclusion：Thenephrincouldbeexcretedoutfromurineattheearlystageofdiabeticnephropathy.Urinarynephrinc ouldnotonlyberegardedasaspecificindexfortheearlydiagnosisofdiabeticnephropathy,butalsobeben ificialtoclinicalmonitoringandevaluatingthedegreesoftheDN. 〔Keywords〕diabeticnephropathy;rats;microalbumin;urinarynephrin 糖尿病肾病(diabetesnephropathy，DN)是糖尿病微血管病变之一，是终末期肾衰的重要原因，早期诊断和治疗可延缓其发展。DN起病隐匿，早期诊断困难，目前公认的诊断早期DN的指标是尿微量白蛋白，但也仅使DN诊断提早到依据Mogensen建议的Ⅲ期。部分糖尿病患者当发现微量白蛋白尿时，肾脏的结构损害已很明显〔1〕。因此不能单以尿微量白蛋白的出现来判断早期DN。 蛋白尿的发生与肾小球滤过屏障密切相关，nephrin是新近发现由足细胞表达、特异定位于肾小球足细胞裂孔隔膜的蛋白分子，参与肾小球滤过屏障的形成并维持其正常功能〔2〕。研究表明，实验性糖尿病模型及人类蛋白尿相关的肾小球疾病均有nephrin表达的改变，且nephrin可从尿中排泄〔3〕。而尿中nephrin排泄量增加是否可敏感反映糖尿病早期肾脏损害，目前国内尚未有报道。本文对糖尿病大鼠尿蛋白排泄率(AER)及尿液nephrin进行动态观察，旨在探讨尿nephrin在DN中的变化规律及其对早期DN的诊断意义。 1对象与方法 1.1实验动物及分组 雄性SD大鼠76只，体质量230～280g，购自江苏大学医学院实验动物中心，血糖正常。试验期间，室温控制在18～20℃，湿度48%，12小时交替照明，大鼠自由饮水进食，保持垫料干燥。实验共分对照组（n=36），糖尿病组（n=40）。对照组0周处死6只，再与糖尿病组随机分为2，4，6，8和12周5个亚组，分别于DM诱模后2，4，6，8和12周处死。 1.2糖尿病模型的建立 所有大鼠适应性喂养1周，随机取40只，禁食12h后，空腹状态下，链脲佐菌素（STZ）按55mg/kg一次性腹腔注射制备糖尿病模型，STZ临用前用枸橼酸钠缓冲液(0.1mmol/L,pH4.2)
影响伤口愈合因素 伤口的愈合类型、时间以及修复程度与创面大小、受伤原因、患者自身健康状况等多种因素有关，一般来说可以将影响伤口愈合的因素分为全身因素和局部因素两大类。全身因素包括年龄、营养状况、血管功能不全、新陈代谢疾病、免疫力低下、神经系统障碍、凝血功能障碍、药物的使用、心理因素、吸烟等；局部因素包括伤口感染、异物、结痂、坏死组织、局部太干燥或过于肿胀、局部牵拉/压迫/摩擦、局部伤口组织缺氧、无效的纤维蛋白分解。这两种因素相辅相成，决定伤口的愈合速度。 (一)全身因素 1.年龄随着年龄的增长，机体各个组织细胞自身的再生能力会逐步减弱。高龄人群较青 壮年的炎症反应减慢、新血管与胶原蛋白合成减少、真皮的附着力减低、皮脂腺功能降低致皮肤干燥、成纤维细胞的细胞周期明显延长，这些均导致伤口愈合速度的减慢。2.营养状况蛋白质的缺乏或消耗增加使机体处于营养不良的状态，导致胶原蛋白合成受 影响，伤口缺乏愈合必须的基质，影响伤口愈合；伤口愈合过程必需维生素及微量元素包括维生素A、维生素C、维生素B6、维生素B12、叶酸、铁、锌。其中维生素A缺乏可导致伤口炎症期正常的炎症反应不充分；锌参与伤口愈合的各时期，其缺乏则会影响愈合的每一步。 3.血管功能不全包括动脉功能不全和静脉功能不全两种形式。动脉功能不全时，局部组 织没有足够血流供应导致缺血缺氧、伤口愈合延迟、不愈合；静脉功能不全时，下肢回流受阻、静脉压力升高、水肿，纤维蛋白原渗出至局部组织，阻挡组织中氧气运输、营养交换、废物排出。 4. 组织氧气灌流不足组织的氧分压须≥32mmHg，才能维持细胞的再生、胶原蛋白的合成及白细胞的活性。 5. 药物使用过量的抗炎药物抑制炎症反应期，导致中性粒细胞及巨噬细胞无法进入伤口组织，成纤维细胞和表皮细胞活动受阻；化疗药物则导致炎性细胞、血小板数量降低，相关生长因子不足；大剂量的肾上腺皮质激素能明显抑制新生毛细血管的形成、成纤维细胞的增生和胶原合成，并加速胶原纤维的分解，导致愈合不良；类固醇药物稳定溶酶体膜，阻止蛋白水解酶及其他促炎因子释放，使血液中锌含量减少，影响伤口愈合。 6. 免疫力低下白细胞数减少，无法引导正常的炎性反应，影响伤口愈合的正常进程。 7. 神经系统障碍感觉系统受损患者无法保护伤口导致再损伤；活动受损导致血流缓慢；大小便失禁导致伤口污染，影响愈合。 8．心理因素焦虑、忧郁均可导致免疫力下降，影响伤口愈合。 9．凝血功能障碍伤口出血时间延长，导致巨噬细胞、成纤维细胞等不能正常发挥作用，影响伤口愈合。 10. 新陈代谢疾病糖尿病引起的动脉硬化导致血液循环受损，同时周围神经病变导致感觉缺失，而血糖过高可导致初期炎症反应受损，感染机会增加。肾功能衰竭致全身血液废物排出、血压调节、水和电解质失衡、凝血功能障碍，伤口感染机会增加。 11.吸烟吸烟者血液循环中一氧化碳与血红蛋白的结合降低了对氧的运输能力。尼古丁会使周围血管收缩，影响伤口愈合。 12．其它因素：肥胖患者脂肪丰厚，手术后切口处易发生脂肪液化，影响伤口愈合。放射线的照射：放射线会损伤小血管，造成闭塞性动脉内膜炎，并直接损伤各类细胞，致使愈合
7 摘要：目的探讨链脲佐菌素（STZ ）建成可靠、稳定的1型大鼠糖尿病模型情况。方法选取 SDF 级雄性Wistar 大鼠70只，分成3个实验组，各20只和对照组10只，实验组大鼠一次性腹腔注射STZ 30、65、100mg /kg ，对照组10只大鼠腹腔注射枸橼酸缓冲液，用拜安易血糖仪检测血糖，7d 后血糖＞16．65mmol /L 判定为1型糖尿病动物模型。观察大鼠的血糖、体质量、饮水量、胰岛素和C 肽等指标。结果大鼠注射STZ 65mg /kg 7d 后，大部分血糖值达到成模标准，并出现糖尿病表现，持续观察7周，有18只大鼠成模，未见糖尿病转复，糖尿病症状明显。结论腹腔一次性注射STZ 65mg /kg 剂量可成功制备1型糖尿病大鼠模型。 关键词：链尿佐菌素；1型糖尿病模型；大鼠 Establishment and Observation of Type I Diabetic Rat Models ZHANG Ju-biao 1， SU Xiu-lan 2，OUY-ANG Xiao-hui 1 ．（1．Department of Tumor Surger ， Inner Mongolia Autonomous Region People's Hospital ，Hohhot 010010，China ；2．Central Lab of Inner Mongolia Medical University ，Hohhot 010010，China ） Abstract ：Objective To establish type I diabetic rat models by intraperitoneal injection of streptozoto-cin and observe the stability of diabetic changes in rats．Methods 70male Wistar rats were divided into 3experiment groups of 20rats each and 1control group of 10rats．The experiment groups were intraperitoneally injected by 30mg /kg ，65mg /kg ，and 100mg /kg STZ respectively ，while the control group was injected cit-rate buffer．Bayer blood glucose meter was adopted to test the blood glucose ，setting ＞16．65mmol /L after 7d as the type 1diabetic animal model．The fasting blood glucose level ，body weight ，water intake ，insulin and C-peptide of the rats at different time points were observed /measured．Results In the group of injection by 65mg /kg STZ ，after 7days most rats reached the model blood glucose standard and had diabetic manifes-tation ，after continuous observation of 7weeks ，18rats were qualified as the model with obvious symptoms and without conversion．Conclusion With the dose of 65mg /kg of STZ through one intraperitoneal injection ，type 1diabetic rat models can successfully established． Key words ：Streptozotocin ；Type 1diabetic models ；Rat 糖尿病已成为严重威胁人类身体健康和生命的 疾病。它是一种以持续性高血糖为特征的内分泌障碍疾病，可导致全身性代谢紊乱并继发眼、肾、神经和心血管等器官的慢性进行性病变，最终引起功能损伤及衰竭。1型糖尿病及其并发症的病因、发病机制尚未完全阐明，预防和治疗仍不完善，干细胞（stem cells ）是体内存在的一类特殊细胞，有自我更新和不断增生的能力，又具有多向分化的潜能，只要掌握了胰腺干细胞的特异标志、转化调控机制、培养及分离技术，就可以体外操纵干细胞，进行大量扩增和定向诱导分化，最后将得到能分泌胰岛素的胰岛 样细胞［1-2］，用于治疗1型糖尿病。因此，建立较理 想的动物模型研究该病的发病机制和治疗具有重要意义。目前，国内外普遍使用STZ 制备糖尿病大鼠 动物模型。该项实验根据吴清洪报道的方法［3］ ，采用简单的腹腔一次注射的方法制备稳定并且可靠的动物模型。1材料与方法 1．1实验动物的选择和喂养SDF 级成熟Wistar 雄性大鼠70只（体质量220 280g ），购自内蒙古大学实验动物中心，饲养室内氨浓 度＜20g /L ， 相对湿度40% 70%，室温18 25℃，保证良好的通风，避免增加造模后大鼠的感染概率，普通饲料喂养，饮水自由。 1．2主要仪器和试剂拜安易血糖检测仪及试纸（美国Bayer 公司）；STZ （美国Sigma 公司）；胰岛素、C 肽放射免疫分析药盒（均购自内蒙古泽生耗材）。 1．3主要实验试剂的配制STZ 液称取STZ 粉剂0．2g ，溶于pH 4．5，浓度为0．1mmol/L 的枸橼酸三钠-枸橼酸缓冲液20mL 中，制成1%溶 液，经0．22μm 滤器过滤除菌，要求5min 内配制完成，配好后，10min 内用完，STZ 和枸橼酸缓冲溶液低温保存，新鲜配制。 1．4实验分组和大鼠糖尿病模型的制备采取国内外普遍使用的STZ 制备糖尿病大鼠模型，根据徐 华等［4］ 报道， 雄性大鼠易于成模，且成模后血糖稳定性好，故选取成熟雄性大鼠用于实验。将所有大鼠（70只）使用代谢笼单只喂养，适应性喂养1周， 1周内注意观察大鼠的饮食情况、体质量等健康状况， 1周后，选取空腹血糖介于2．92 6．92mmol /L 的大鼠为实验对象。将空腹血糖介于2．92 6．92mmol /L 的大鼠随机分为4组，实验组（60只）分别接受STZ 液一次性腹腔注射，剂量为30、65、100mg /kg ，对照组（10只）注射枸橼酸三钠-枸橼酸缓冲液。实验前 大鼠禁食、水12h 。分别于注射后3、 7、14、28d 采用剪尾法采集血样，用拜安易血糖仪检测空腹血糖，7d 后空腹血糖＞16．65mmol /L ，出现多饮、多食、多尿 · 533·医学综述2013年1月第19卷第2期Medical Recapitulate ， Jan．2013，Vol．19，No．2
影响伤口愈合因素 欧阳家百（2021.03.07） 伤口的愈合类型、时间以及修复程度与创面大小、受伤原因、患者自身健康状况等多种因素有关，一般来说可以将影响伤口愈合的因素分为全身因素和局部因素两大类。全身因素包括年龄、营养状况、血管功能不全、新陈代谢疾病、免疫力低下、神经系统障碍、凝血功能障碍、药物的使用、心理因素、吸烟等；局部因素包括伤口感染、异物、结痂、坏死组织、局部太干燥或过于肿胀、局部牵拉/压迫/摩擦、局部伤口组织缺氧、无效的纤维蛋白分解。这两种因素相辅相成，决定伤口的愈合速度。 (一)全身因素 1.年龄随着年龄的增长，机体各个组织细胞自身的再生能力会逐 步减弱。高龄人群较青壮年的炎症反应减慢、新血管与胶原蛋白合成减少、真皮的附着力减低、皮脂腺功能降低致皮肤干燥、成纤维细胞的细胞周期明显延长，这些均导致伤口愈合速度的减慢。 2.营养状况蛋白质的缺乏或消耗增加使机体处于营养不良的状 态，导致胶原蛋白合成受影响，伤口缺乏愈合必须的基质，影响伤口愈合；伤口愈合过程必需维生素及微量元素包括维生素 A、维生素C、维生素B6、维生素B12、叶酸、铁、锌。其中维 生素A缺乏可导致伤口炎症期正常的炎症反应不充分；锌参与伤口愈合的各时期，其缺乏则会影响愈合的每一步。
3.血管功能不全包括动脉功能不全和静脉功能不全两种形式。动 脉功能不全时，局部组织没有足够血流供应导致缺血缺氧、伤口愈合延迟、不愈合；静脉功能不全时，下肢回流受阻、静脉压力升高、水肿，纤维蛋白原渗出至局部组织，阻挡组织中氧气运输、营养交换、废物排出。 4. 组织氧气灌流不足组织的氧分压须≥32mmHg，才能维持细胞的再生、胶原蛋白的合成及白细胞的活性。 5. 药物使用过量的抗炎药物抑制炎症反应期，导致中性粒细胞及巨噬细胞无法进入伤口组织，成纤维细胞和表皮细胞活动受阻；化疗药物则导致炎性细胞、血小板数量降低，相关生长因子不足；大剂量的肾上腺皮质激素能明显抑制新生毛细血管的形成、成纤维细胞的增生和胶原合成，并加速胶原纤维的分解，导致愈合不良；类固醇药物稳定溶酶体膜，阻止蛋白水解酶及其他促炎因子释放，使血液中锌含量减少，影响伤口愈合。 6. 免疫力低下白细胞数减少，无法引导正常的炎性反应，影响伤口愈合的正常进程。 7. 神经系统障碍感觉系统受损患者无法保护伤口导致再损伤；活动受损导致血流缓慢；大小便失禁导致伤口污染，影响愈合。8．心理因素焦虑、忧郁均可导致免疫力下降，影响伤口愈合。9．凝血功能障碍伤口出血时间延长，导致巨噬细胞、成纤维细胞等不能正常发挥作用，影响伤口愈合。 10. 新陈代谢疾病糖尿病引起的动脉硬化导致血液循环受损，同时周围神经病变导致感觉缺失，而血糖过高可导致初期炎症反应