实验一二硝基水杨酸比色法测定总糖含量
（4学时）
一、实验目的
（1）掌握二硝基水杨酸比色法测定总糖的原理。
（2）学习分光光度计的使用方法。
（3）掌握比色定糖法操作技术。
二、实验原理
在碱性条件下，还原糖与3，5-二硝基水杨酸共热，3，5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物，在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖的含量。总糖可在强酸条件下水解，得到还原糖，从而间接求出样品中总糖的含量。
三、实验仪器
（1）刻度试管：25 mL；
（2）烧杯：100 mL；
（3）三角瓶：100 mL；
（4）容量瓶：100 mL；
（5）刻度吸管：1 mL，2 mL，10mL；
（6）恒温水浴；
（7）沸水浴；
（8）离心机（过滤法不用此设备），离心管或玻璃漏斗，电子天平，分光光度计。
四、实验试剂
（1）1 mg/mL葡萄糖标准液：准确称取0.250 g分析纯葡萄糖（预先80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到250 mL容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3，5-二硝基水杨酸试剂：将6.3 g 3，5-二硝基水杨酸和262 mL 2mol/L的NaOH溶液，加到500 mL含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）碘-碘化钾溶液：称取5.0 g碘、10 .0g碘化钾，用蒸馏水溶解至100mL。
（4）酚酞指示剂：称取0.1 g酚酞溶于70%乙醇至250 mL。
（5）6 mol/L HCl，6 mol/L NaOH。
（6）小麦淀粉，食用面粉。
五、实验操作
1．制作葡萄糖标准曲线
取7支刻度试管，按下表操作。
管号0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3，5-二硝基水杨酸/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 将各管内液体混匀，在100 ℃水浴中加热5 min，取出冷却至27~30 ℃后以蒸馏水定容至25 mL，将各管摇匀，将分光光度计调至540 nm 波长，用零号管调零，再读取1~6号管的吸光度，然后将读取的吸光度为纵坐标，葡萄糖mg数为横坐标，绘制出标准曲线。2．还原糖及总糖的待测液的制备
（1）还原糖待测液的制备：取3.0 g 小麦淀粉，置于100 mL 三角瓶内，缓缓加入50 mL 蒸馏水，边注水边搅拌，直至均匀溶解，将溶液置于于50 ℃恒温水浴加热20 min ，离心机过滤5 min ，用20 mL 蒸馏水清洗残液，再用离心机过滤，然后将2次上清液集中于100 mL 容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1.0 g 食用面粉，放在100 mL 的三角瓶中，加入10 mL 6 mol/L HCl 及15 mL 蒸馏水，置于沸水浴中加热水解30 min ，取1~2滴水解液于白瓷板上，加1 滴碘-碘化钾溶液，检查水解是否完全，如已经水解完全，则不显蓝色。待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂，以6 mol/L NaOH 中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤液全部收集在100 mL 的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，混匀。精确取10mL 定容过的水解液，移入另一个100mL 的容量瓶，以水稀释定容，作为总糖待测液。
（3）显色和比色，取4支25 mL 刻度试管，编号，按下表所示的量操作。
管号
还原糖测定管号 总糖测定管号 ① ② Ⅰ Ⅱ 还原糖待测液/mL 2 2 0 0 总糖待测液/mL 0 0 1 1 蒸馏水/mL
0 0 1 1 3,5-二硝基水杨酸/mL
1.5
1.5
1.5
1.5
将各管内液体混匀，在沸水浴中加热5 min ，取出冷却至36 ℃，蒸馏水定容至25 mL 。将分光光度计调至540 nm 波长，以葡萄糖零号管调零，在分虽读取①、②、Ⅰ、Ⅱ4个管的吸光度。
3．还原糖及总糖的测定
以管①、②的吸光度平均值和管Ⅰ、Ⅱ的吸光度平均值，分别是在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的含量。
(mg)
ω()/%=
100(mg)
提取液总体积查曲线所得还原糖质量测定时取用体积
还原糖样品质量
(mg)ω()/%=
0.9100(mg)
查曲线所得还原糖质量稀释倍数
总糖样品质量
六、结果处理
（1）标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。 （2）用其他含糖材料，以试验材料比较其含糖量的差异。
（3）小麦淀粉中含有何种糖？在提取总糖时，其他杂质是否会影响到测定？
实验一 二硝基水杨酸比色法测定总糖含量 1、实验操作第一步省略，见板书
2、还原糖待测液的制备选用漏斗，不用离心机 显色和比色时，加一个空白，见板书
实验二酶的生化基础实验
（3学时）
一、实验目的
（1）加深对酶的性质的认识。
（2）了解酶特性的实验原理。
（3）掌握温度对酶活力的影响，pH对酶活性的影响，唾液酶活化和抑制的三个实验。（4）了解酶催化的高效性，特异性，进一步掌握酶的代谢反应及其调控机理。
二、实验原理
酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度的特异（专一）性，即一种酶只能对一种或一类化合物起催化作用，例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都催化糖苷的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖，还原糖产物可用本乃狄试剂鉴定。
通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或者激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素对酶活性的影响。
1．温度对酶活力的影响
酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为37~40℃，植物酶的最适温度为50~60 ℃。
酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，即使加热到100 ℃，其活性并无明显改变，但在100 ℃的溶液中却很快地完全失去活性。
低温能降低或抑制酶的活性，但不能推动酶活性。
2．pH对酶活性的影响
酶的活性受环境pH的影响极为显著，不同酶的最适应的pH不同，本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。
3．唾液酶的活性和抑制
酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。
三、实验仪器
（1）分光光度计（722型或最新型），恒温水浴；
（2）锥形瓶：50 mL；
（3）量筒：100 mL；
（4）漏斗：φ4 cm；
（5）温度计：0~100 ℃；
（6）滴管；
（7）吸量管：0.2 mL，0.5 mL，1 mL，2 mL，5 mL；
（8）试管：1.5 cm×1.5 cm。
四、实验试剂
（1）Fe粉；
（2）ω(淀粉)=1%的溶液，用ω(NaCl)=0.3%的溶液配制；
（3）ω(淀粉)=0.5%的溶液，用ω(NaCl)=0.3%的溶液配制；
（4）唾液淀粉酶溶液：先用蒸馏水漱口，再含10 mL左右蒸馏水轻轻漱动，数分钟后吐出，收集在烧杯中，过滤，得到清澈的唾液淀粉酶原液，稀释100~200倍，混匀备用；
（5）碘化钾-碘溶液：将碘化钾20 g及碘10 g溶于100 mL水中，使用前稀释10倍；（6）浓度为0.1 mol/L柠檬酸溶液；
（7）浓度为0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液；
（8）pH试纸（pH=4.9~8）；
（9）ω(氯化钠)=1%的溶液；
（10）ω(CuSO4·5H2O)=1%的溶液；
（11）ω(硫酸钠)=1%的溶液；
（12）本乃狄（Benedict）试剂：17.3 g CuSO4·5H2O加100 mL蒸馏水加热溶解，冷却，173 g柠檬酸钠和100 g Na2CO3·2H2O，以600 mL蒸馏水加热溶解，冷却后将CuSO4溶液慢慢倒入柠檬酸钠碳酸钠溶液中，边加边搅匀，最后定容至1000 mL，过滤除去深沉；（13）ω(蔗糖)=2%的溶液：用分析纯蔗糖新配制；
（14）磷酸缓冲液：
A液（0.2mol/L Na2HPO4）：称取28.40 g Na2HPO4溶于1000 mL 蒸馏水中；
B液（0.1 mol/L 柠檬酸）：称取21.01 g柠檬酸溶于1000 mL蒸馏水中；
（15）实验材料：马铃薯；
（16）ω(H2O2)=2%。
五、实验操作
1．酶催化的高效性
酶催化的高效性实验：取4支试管，按下表操作。
操作项目
管号
1 2 3 4
ω(H2O2)=2% /mL 3 3 3 3
生马铃薯小块/块 2 0 0 0
熟马铃薯小块/块0 2 0 0 铁粉0 0 小匙0
现象
解释实验现象
2. 酶催化的专一性
蔗糖酶溶液的制取：取1 g干酵母，放入研钵中，加少量石英砂和水研磨，加蒸馏水50 mL，静置片刻，过滤即得。
酶催化的专一性实验：取6支干净试管，按下表操作。
操作项目
管号
1 2 3 4 5 6
ω(淀粉)=1% /mL 1 1 0 0 1 0 ω(蔗糖)=2%/mL 0 0 1 1 0 1
唾液淀粉酶原液/mL 1 0 1 0 0 0 蔗糖酶溶液/mL 0 1 0 1 0 0 蒸馏水0 0 0 0 1 1
酶促水解摇匀，37 ℃水浴中保温10 min 本乃狄试剂/mL 2 2 2 2 2 2 反应摇匀，沸水浴中保温5~10 min
现象
解释实验现象
3．温度对酶活力的影响
淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈的颜色来判断。
（1）温度对酶活力的影响1
取3支试管，按下表操作。
操作项目
管号
1 2 3
唾液淀粉酶溶液/mL 1 1 1
pH=7.0磷酸缓冲液/mL 2 2 2
在一定温度下预处理5min 0 ℃37 ℃70 ℃
ω(淀粉）=1%的溶液/mL 2 2 2
摇匀，保持各自温度继续反应，数分钟后每隔半分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2 min，各加1滴碘液，混匀，观察并记录各管反应现象。
（2）温度对酶活力的影响2
取3支试管，编号后按下表加入试剂。
管号 1 2 3 淀粉溶液/mL 1.5 1.5 1.5
稀释唾液/mL 1 1 －煮沸过的稀释唾液/mL －－ 1
摇匀后，将1号和3号两个试管放入37 ℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中，10 min 后取出，将2号试管内液体分为两半，用碘-碘化钾液来检验1、2、3号试管淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37 ℃水浴中继续保温10min后，再用碘液实验，观察其现象及结果。
4．pH 对酶活力的影响
取4个标有号码的50 mL锥形瓶，用吸管按下表添加A液和B液并制备pH=5.0~8.0 四种缓冲液。
锥形瓶号A液/mL B液/mL pH
1 5.15 4.85 5.0
2 6.05 3.95 5.8
3 7.72 2.28 6.8
4 9.72 0.28 8.0
从4个锥形瓶中各取缓冲液3 mL，分别注入4支带有号码的试管中，随后在每个试管中添加ω(淀粉)=1%的溶液1 mL和稀释唾液2mL。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为1 min，将试管中的内溶物混匀，并依次置于37 ℃水浴中保温。
待向第4管加入唾液2 mL后，每隔1 min由第3管取出1滴混合液，置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液，至混合液变为淡黄色后，向所有试管依次添加碘-碘化钾溶液溶液，添加碘-碘化钾溶液的时间间隔，从第1管起，亦为1 min。
观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。
5. 酶的抑制与激活
凡能增强酶的活性、加快酶促反应速度的物质，称为激活剂。激活剂种类很多，有①无机阳离子，如钠离子、钾离子、铜离子、钙离子等；②无机阴离子，如氯离子、溴离子、碘离子、硫酸盐离子磷酸盐离子等；③有机化合物，如维生素C、半胱氨酸、还原性谷胱甘肽等。
凡能减弱、抑制甚至破坏酶活性的物质称为酶的抑制剂，士林它可降低酶促反应速度。酶的抑制剂有重金属离子、一氧化碳、硫化氢、氢氰酸、氟化物、碘化乙酸、生物碱、染料、对-氯汞苯甲酸、二异丙基氟磷酸、乙二胺四乙酸、表面活性剂等。
酶的抑制与激活的实验可按下表操作。
操作项目
管号
1 2 3
ω(氯化钠)=1%的溶液/mL 1 0 0 ω(硫酸铜)=1%的溶液/mL 0 1 0 蒸馏水/mL 0 0 1 唾液淀粉酶溶液/mL 1 1 1 ω(淀粉)=1%的溶液/mL 3 3 3
保温反应并检查淀粉水解程度摇匀，37 ℃水浴反应1 min左右即可用碘液检查1号试管淀粉水解程度，待1号试管的反应液不再变色时取出所有试管
碘液/滴 1 1 1
现象
6. 唾液滴定酶的活化和抑制
取4个标号试管，用吸管向4个试管中按下表添加各试剂。
操作项目
管号
1 2 3 4
ω(淀粉)=1%的溶液/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 稀释唾液/mL 0.5 0.5 0.5 0.5 ω(硫酸铜)=1%的溶液/mL 0.5 －－－ω(氯化钠)=1%的溶液/mL －0.5 －－ω(硫酸钠）=1%的溶液/mL －－0.5 －蒸馏水－－－0.5
37 ℃水浴中保温10 min（注）
碘化钾-碘溶液/滴2~3 2~3 2~3 2~3 现象
注：保温时间可根据唾液淀粉酶活力调整。
解释结果，说明本实验第3管的意义。
六、实验结果处理
（1）酶的最适pH？最适温度？
（2）说明底物浓度、酶浓度、温度与pH对酶促反应速度的影响？
（3）酶有哪些催化特点？
实验三蛋白质的沉淀反应
（3学时）
一、实验目的
（1）熟悉蛋白质的沉淀反应。
（2）进一步掌握蛋白质的有关性质。
（3）掌握几种沉淀蛋白质的操作技术。
二、实验原理
多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。
三、实验仪器
（1）吸管瓶：500 mL；
（2）吸量管：5 mL、2 mL、1 mL；
（3）试管：1.5cm×15cm；
（4）漏斗；
（5）试管架；
（6）滤纸。
四、实验试剂
（1）蛋白质试液：卵清蛋白质液；
（2）硫酸铵晶体：如颗粒太大，最好研碎；
（3）饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100 mL加硫酸铵至饱和；
（4）?(乙醇)=95%的溶液；
（5）结晶氯化钠；
（6）ω(乙酸铅)=1%的溶液：1 g乙酸铅溶于蒸馏水并稀释至100 mL；
（7）ω(鞣酸)=5%的溶液：5 g 鞣酸溶于水并稀释至100 mL；
（8）ω(硫酸铜)=10%的溶液；
（9）饱和苦味酸溶液；
（10）?(乙酸)=1%的溶液：冰乙酸1 mL用蒸馏水稀释至100 mL。
五、实验操作
1．蛋白质盐析作用
向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度，蛋白质即沉淀析出，这种作用称为盐析。（1）操作方法：①取蛋白质溶液5 mL，加入等量饱和硫酸铵溶液（此时硫酸铵的浓度为50% 饱和），微微摇动试管，使溶液混和静置10 min，球蛋白即析出（无沉淀可再加少许饱和硫酸铵）。②将上述混合液过滤，滤液中加硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解，此时析出的即为清蛋白；再加水稀释，观察沉淀是否溶解。
（2）注意：①应先加蛋白质溶液，然后加饱和硫酸铵溶液。②加固体硫酸铵时不要加过量，若加到饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。
2．乙醇沉淀蛋白质
乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质点的水化层而使其沉淀析出。
操作方法：取蛋白质溶液1 mL，并向其中加晶体NaCl少许（加速沉淀并使沉淀），待溶解后再加入?(乙醇)=95%乙醇的溶液2 mL混匀，观察沉淀析出。
3．重金属盐沉淀蛋白质
蛋白质与重金属离子（如Cu2+、Ag+、Hg2+等）结合成不溶性盐类沉淀。
操作方法：取试管2支各加蛋白质溶液2 mL，一管内滴加ω(乙酸铅)=1%的溶液，另一
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他们是核糖体的组分，并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架”，蛋白质可附着在上面。这种解释很直接很形象，但是低估了rRNA在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表明，rRNA并非仅仅起到物理支架作用，多种多样的rRNA可起到识别、选择tRNA以及催化肽键形成等多种主动作用。例如：核糖体的功能就是,按照mRNA的指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催化肽键形成而实现。可以说核糖体是一个大的核酶( ribozyme)。而核糖体的催化功能主要是由rRNA来完成的,蛋白质并没有直接参与。 3 tmRNA tmRNA主要包括12个螺旋结构和4个“假结”结构，同时还包括一 个可译框架序列的单链RNA结构。tmRNA中H1由5’端和3’端两个末端形成，与tRNA的氨基酸受体臂相似。H1和H2的5’部分之间有一个由10-13nt 形成的环，类似tRNA中的二氢尿嘧啶环，称为“D”环。H3和H4，H6和H7，H8和H9，H10和H11之间分别形成Pk1，pK2，pK3，pK4。H4和H5之间则由一段包含编码标记肽ORF的单链RNA连接。H12由5个碱基对和7nt 形成的环组成，类似tRNA中的TΨC臂和TΨC环，称为“T”环。tmRNA 结构按照功能进行划分可分为tRNA类似域（TLD）和mRNA类似域（MLD），TLD主要包括H1,H2,H12,“D”环和“T”环，MDL则包括ORF和H5，这两部分分别具有类似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一类普遍存在于各种细菌及细胞器（如叶绿体，线粒体）中的稳定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的双重功能，它在一种特殊的翻译模式——反式翻译模式中发挥重要作用。同时，它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密切相关，是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别翻译或读码有误的核糖体，也识别那些延迟停转的核糖体，介导这些有问
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生物化学实验思考题
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生物化学实验考试试题
细胞破碎 1 常用的细胞破碎的方法有哪些？ 机械法：研磨，高速捣碎机;物理法:反复冻溶,超声波破碎，压榨法；化学与生物化学法:自溶，溶胀法，酶解法，有机溶剂处理。 2 有机溶剂法破碎细胞原理，常用的有机溶剂有哪些? 有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳。比如笨、甲苯、氯仿、二甲苯及高级醇等 ３酶法破碎细胞原理:酶分解作用 4反复冻融法破碎细胞原理：通过反复将细胞放在低温下突然冷却和室温下融化达到破壁作用 层析技术 1.什么叫层析技术？ 层析技术是利用混合物中各组分理化性质的差别（分子亲和力、吸附力、分子的形状和大小、分配系数等),使各组分以不同程度分布在两个相，其中一个是固定相，另一个是流动相,从而使各组分以不同速度移动而使其分离的方法。 2、按层析过程的机理，层析法分哪几类？按操作形式不同又分哪三类? 根据分离的原理不同分类,层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。 按操作形式不同又分层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。 3.指出常用层析技术的应用范围。 凝胶层析法:⑴脱盐;⑵用于分离提纯；⑶测定高分子物质的分子量;⑷高分子溶液的浓缩离子交换层析法：主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子 高效液相层析法:⑴液-固吸附层析；⑵液-液分配层析；⑶离子交换层析 ４.ＳeｐhadｅxG-１0０凝胶柱层析分离蛋白质原理是什么? 大小不同的分子经过的路线长短不同而达到分离作用。 ５．用SeｐhａdeｘG2５脱盐时蛋白质和盐哪个先出峰?蛋白质 6．相对分子量为8万和1０万的蛋白质能否在SephadｅxＧ－７5柱中分开？为什么？不能,分子量差距太小。 7．将分子量分别为a(9０000）、b(45０0０）、c（１10 000)的三种蛋白质混合溶液进行凝胶过滤层析,正常情况下,将它们按被洗脱下来的先后排序。ｃ、ａ、ｂ 8.离子交换层析与凝胶过滤哪种分辨率高?离子交换层析较高。 9.如果样品中只有Ala和His(Ala pI=6．0，Ｈis pＩ＝7.6)，在ｐH4条件下，这两种氨基酸那一种与CM(阳离子交换剂)结合的紧密?如果用pH4-7的洗脱液梯度洗脱，那种氨基酸先洗脱出来？Aｌa 10. 柱层析时湿装柱的注意事项有哪些？ 用水灌注、不能有气泡。 11.说说离子交换层析中洗脱液的选择原则
临床生物化学实验原理、分析方法及检测技术 中国中医研究院广安门医院临床检测中心 生物化学实验——是把化学(分析技术)和生物化学(实验反应原理)的方法应用于疾病的诊断、治疗、监控的实验分支。 一个生化实验的最后测定结果应包括四大部分来完成。 一、实验反应原理及分析方法（理论依据） 二、实验检测技术（手段）生化仪的分析技术。 三、质量控制程序（质量保证）室内质控、室间质评、仪器、试剂、人员五要素。 四、临床意义（目的）咨询服务、异常结果的解释。 实验反应原理及分析方法(理论依据) 一个生物化学实验的反应原理设计，首先要找出所检测的化学特性，如测定体液（首先是血液）中酶的含量血液中除少数酶（如凝血溶血酶、铜氧化酶及假性胆碱脂酶等）含量较多外，血液正常生理状况下含量微乎其微。一般每毫升含微微克（Pg）水平，要直接测定如此微量物质是相当困难的。用免疫化学方法可测定全部酶蛋白分子含量（不论其有无活性）而用化学方法测定只能测定酶的催化活性，间接计算出酶的含量。目前利用酶具有催化活性这一特性，在临床上已普遍应用测定酶蛋白，同时还可以测定三大代谢的产物，如糖、脂类、蛋白质、这样也就建立起利用酶促反应的一级反应测定代谢物的方法。一级反应—反应速度与底物浓度成正比，因此只有当酶反应为一级反应时，才能准确测定底物含量，（如测定血糖、总甘油三脂、总胆固醇等）。从此在临床试剂盒的方法中出现了以酶为试剂测定各种代谢产物。 临床化学方法的分类 特别是自动生化仪方法的特点 以往临床化学实验都采用比色法进行各个项目的测定，这是因为比色法具有微量、迅速、准确的优点，特别适合于微量的生物体体液中各项物质测定。 在一般比色法中，手工使用比色计或分光光度计可以测定各种反应溶液的吸光度，但由于很难控制测定时间和反应温度，很难准确记录反应过程中吸光度变化，因此，毫不奇怪在很长一段时间内我们所使用的方法，都是在呈色反应达到完全或者反应达到平衡时，吸光度达到稳定时才进行测定。即所谓平衡法或终点法。 但自从自动生化仪出现后，从根本上改变了上述情况。通过各项先进技术，人们可以精确测定反应的动态过程。并可以准确计算任何一段反应时间内的反应速率，这样大大开阔了临床化学家对方法选择。除经典的终点法外还可以进行动态测定。这样不仅缩短了操作时间，大大提高了工作效率，还可进行一些用常规比色方法不能进行的测定。如测定酶反应的初速 度（V o ）等等。测酶初速度（V o ）只能用分光光度法。 因此，用好自动生化仪一个重要前提必须对自动生化仪可以提供的测试方法类型有所了解。 生化自动分析仪特点： 1 精确测定反应的动态过程； 2 准确计算任何一段反应时间内的反应速率； 3 除经典的终点法外还可以进行动态测定。 分析方法的分类
实验一二硝基水杨酸比色法测定总糖含量 （4学时） 一、实验目的 （1）掌握二硝基水杨酸比色法测定总糖的原理。 （2）学习分光光度计的使用方法。 （3）掌握比色定糖法操作技术。 二、实验原理 在碱性条件下，还原糖与3，5-二硝基水杨酸共热，3，5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物，在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖的含量。总糖可在强酸条件下水解，得到还原糖，从而间接求出样品中总糖的含量。 三、实验仪器 （1）刻度试管：25 mL； （2）烧杯：100 mL； （3）三角瓶：100 mL； （4）容量瓶：100 mL； （5）刻度吸管：1 mL，2 mL，10mL； （6）恒温水浴； （7）沸水浴； （8）离心机（过滤法不用此设备），离心管或玻璃漏斗，电子天平，分光光度计。 四、实验试剂 （1）1 mg/mL葡萄糖标准液：准确称取0.250 g分析纯葡萄糖（预先80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到250 mL容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。 （2）3，5-二硝基水杨酸试剂：将6.3 g 3，5-二硝基水杨酸和262 mL 2mol/L的NaOH溶液，加到500 mL含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中备用。 （3）碘-碘化钾溶液：称取5.0 g碘、10 .0g碘化钾，用蒸馏水溶解至100mL。 （4）酚酞指示剂：称取0.1 g酚酞溶于70%乙醇至250 mL。 （5）6 mol/L HCl，6 mol/L NaOH。 （6）小麦淀粉，食用面粉。 五、实验操作 1．制作葡萄糖标准曲线 取7支刻度试管，按下表操作。 管号0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3，5-二硝基水杨酸/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 将各管内液体混匀，在100 ℃水浴中加热5 min，取出冷却至27~30 ℃后以蒸馏水定容至25 mL，将各管摇匀，将分光光度计调至540 nm 波长，用零号管调零，再读取1~6号管的吸光度，然后将读取的吸光度为纵坐标，葡萄糖mg数为横坐标，绘制出标准曲线。2．还原糖及总糖的待测液的制备
幻灯片1 基本公共卫生 服务项目培训会 幻灯片2 ●十二项基本公共卫生服务项目内容 ●第一项：城乡居民健康档案管理服务规范 ●第二项：健康教育服务规范 ●第三项：预防接种服务规范 ●第四项:0～6岁儿童健康管理服务规范 ●第五项:孕产妇健康管理服务规范 ●第六项:老年人健康管理服务规范 ●第七项:高血压患者健康管理服务规范 ●第八项:2型糖尿病患者健康管理服务规范 ●第九项:重性精神疾病患者管理服务规范 ●第十项:传染病及突发公共卫生事件报告和处理服务规范 ●第十一项:卫生监督协管服务规范 ●第十二项：中医药健康管理工作 幻灯片3 （一）建立居民健康档案 ●为谁建？ ●重点人群、接受服务的人群、逐步扩展到全人群 ●怎么建？ ●门诊、入户服务（调查）、疾病筛查、健康体检等多种方式 ●在自愿的基础上 ●统一、规范：统一档案编码、识别码和健康问题编码。依据卫生部《健康档案卫 生服务信息基本数据元标准》（试行稿）和规范。 ●内容是什么？ ●个人基本信息 ●主要健康问题（健康体检） ●重点人群管理记录和其他医疗卫生服务记录 ●管理要求： ●建立健康档案管理制度，设施、设备，明确档案管理责任人。 ●管理方式要易于检索，实行有效动态管理。注意保护居民隐私。 幻灯片4
（二）健康教育 ●资料：健康教育宣传资料—每年发放≥12种内容； ●音像资料—每年播放≥6种。 ●健康教育宣传栏：在辖区内按照标准设置，中心≥2个，站≥1个，每季度至少更新 内容1次。 ●健康知识讲座：中心每月≥1次，站每两月≥1次。 ●健康教育咨询服务：中心≥6次/年（利用各种健康主题日或节假日）。 ●健康教育年度计划。 每项健教活动要有完整的健教活动记录和资料，并存档保存。每年做好健教工作的总结评价。 幻灯片5 （三）预防接种●辖区内所有居住满3个月的适龄儿童进行预防接种登记建证（卡），建证（卡）率和国 家免疫规划疫苗接种率不低于90%。 ●合理安排接种门诊日，按照有关要求提供计划免疫服务。安排受种者在接种后留观室 留观30分钟。 ●处理、报告和登记疑似预防接种异常反应要有记录，填写报告卡。 ●及时登记疫苗出入库和报废、破损情况，疫苗储存数量要与登记数相符，及时清理过 期疫苗。 幻灯片6 服务对象 ●辖区内0～6岁儿童和其他重点人群 幻灯片7 服务内容1 ●儿童预防接种证（卡）管理。 ●及时为辖区内所有居住满3个月的0～6岁儿童建立预防接种证和预防接种卡 ●根据国家免疫规划疫苗免疫程序，对适龄儿童进行常规接种。 ●开展乙肝、麻疹、脊灰等疫苗强化免疫、查漏补种和应急接种工作。 ●通知。采取预约、通知单、电话、手机短信、网络、口头、广播通知等适宜方式，通知 儿童监护人，告知接种疫苗的种类、时间、地点和相关要求。 ●定点接种 ●入户巡回的方式进行预防接种。 ●在流动人口相对集中的地区，可设立临时接种点。 幻灯片8 服务内容2 ●接种前的工作。 ●应查验儿童预防接种证（卡、薄）或电子档案，核对受种者姓名、性别、出生日期 及接种记录，确定本次受种对象、接种疫苗的品种。 ●询问受种者的健康状况以及是否有接种禁忌等，告知受种者或者其监护人所接种疫 苗的品种、作用、禁忌、不良反应以及注意事项，
Ⅰ生物化学基本实验技术 一、分光光度法 （一）原理 光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400—760nm。短于400nm的光线称为紫外线（200—400nm为紫外光区），短于200nm 的叫远紫外线，再短的就是X射线和γ射线了。长于760nm的光线称为红外线（760—500000nm为红外区），再长的就是无线电波了。 可见光区的电磁波，因波长不同而呈现不同的颜色，这些不同颜色的电磁波称为单色光，单色光并非单一波长的光，而是一定波长范围内的光，太阳及钨丝灯发出的白光，是各种单色光的混合光，利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光，即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等，这就是光谱。 当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过，因此光线射出溶液之后，部分光波减少。例如，可见光通过有色溶液后，或红外线通过多种气体后，部分光波被吸收。不同的物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此每种物质都具有其特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成正比，故可利用各种物质的不同的吸收光谱特征及其强度对不同物质进行定性和定量的分析。 在可见光范围内，利用溶液的颜色深浅来测定溶液中物质含量的方法，称为比色法。采用适当的光源、棱镜和适当的光源接受器，可使溶质浓度的测定范围不仅仅局限于可见光，尚可扩大到紫外光区和红外光区。这就是分光光度法。 分光光度法是生物化学中最有价值的测定方法之一。通过测定紫外、可见或红外的特征吸收光谱可以鉴定未知化合物；通过测量在某一波长的光吸收可以测定溶液中未知化合物的浓度。 分光光度法所依据的原理是Lambert和Beer定律。 1．Lambert定律一束单色光通过透明溶液时，一部分波长的光波被吸收，被吸收光波的量与溶液厚度有一定的比例关系。 即：
生化实验技术 一、选择题 1、某蛋白质pI为7.5，在pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为 A、向负极移动 B、向正极移动 C、不运动 D、同时向正极和负极移动 2、进行酶活力测定时 A、底物浓度必须极大于酶浓度 B、酶浓度必须极大于底物浓度， D、酶能提高反应的平衡点 C、与底物浓度无关 3、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高，是因为具有下列哪种效应？ A、浓缩效应 B、电荷效应 C、分子筛效应 D、粘度效应 4、分离鉴定氨基酸的纸层析属于 A、亲和层析 B、吸附层析 C、离子交换层析 D、分配层析 5、下面关于多聚酶链式反应（PCR）的叙述哪一个是不正确的？ A、是Mullis 在1984年发明的一种体外扩增DNA的技术。 B、根据DNA复制的基本原则，反应体系中需要加入RNA聚合酶以合成引物 C、在PCR反应体系中，需要特定引物、四种脱氧核苷酸三磷酸、镁离子等 D、需要模板DNA，即待测的DNA片段 二、是非题（在题后括号内打√或×） 1、蛋白质在小于等电点的pH溶液中，向阳极移动，而在大于等电点的pH溶液中，将向阴极移动。 2、酶的比活力可表示酶纯度。 3、3、提纯酶时，只需求其总活力，就可以知其纯度是否提高了。 三、问答题： 1、盐析法沉淀蛋白质时，往往需要将pH调到蛋白质等电点附近，为什么？ 2、试分别阐述分配层析和吸附层析法分离鉴定氨基酸的原理和操作步骤。 1、3、以DNA的分离纯化为例，阐述生物大分子分离纯化的基本原则原理和注意事项。 4、电泳现象的产生与蛋白质的分子结构有何关系？ 5、在pH6.5的谷氨酸和丙酮酸混合液中，加入适量的新鲜猪肝匀浆后于37℃水浴中保温30分钟，煮沸后蛋白质沉淀，将上清液点在层析滤纸上，用酚水饱和液进行层析，层析结束后用茚三酮显色出现两条带，这两条带各是什么物质：说明原因？ 6、测定酶活力时，应注意哪些事项？为什么？ 7、聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么特点？试述聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的基本原理和主要操作步骤。 8、如果你从动物肝脏中分离提取到了一种物质，猜测它可能是转氨酶，你怎样确定它是蛋白质？又如何判断它是酶？请简述你的方案。 9、试比较核酸测序和蛋白质测序在方法策略上的异同。 10、阐述核酸、蛋白质一级结构研究和大规模测序的必要性以及对生命科学发展的重大影响。 四、名词解释 吸附层析分配层析分子筛层析离子交换层析亲和层析
前言 1.本课程主要讲述了哪些实验技术，其中被称为生化实验室中三大实验技术的是？ 答：层析技术、电泳技术、离心技术、分光光度技术、免疫化学技术。其中层析技术、电泳技术、离心技术是生物学的三大实验技术。 第一章生物化学基本操作与要求 1.洗涤液的种类配置与应用 答：（1）铬酸洗液（称取5g重铬酸钾粉末置于250mL烧杯中，加水5mL，尽量使其溶解，慢慢加入浓硫酸100mL，边加边搅拌。冷却后贮存备用，若颜色变绿，表示洗液已失效。）用于洗涤玻璃器皿。（2）浓盐酸，洗去水垢或某些无机盐沉淀。（3）30%硝酸，洗涤CO2 测定仪器及微量滴管（4）45%尿素，洗涤蛋白制剂、血样（5）有机溶剂，洗涤油脂、脂溶性染料（6）去污粉，一般污染物 2.化学试剂的分级 答： 3.什么是准确度、精密度？ 答：准确度表示实验分析测量值与真实值相接近的程度。误差。精密度是指在相同条件下多次测量结果互相吻合的程度，表现了测定结果的再现性。偏差。 4.如何提高实验的准确度、精密度？ 答：准确度：减少系统误差1.仪器校正2.空白试验3.对照实验；精密度：减少偶然误差 1.平均取样 2.多次取样。 第二章层析技术 1.层析技术及其原理 答：层析技术是一种基于被分离物质的物理、化学、生物学特性的不同，使它们在某种机制中移动速度不同而进行分离和分析的方法。 2.名词：固定相、流动相、分配系数 答：固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂、凝胶、离子交换剂等）也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解、交换等作用。 流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等。 分配系数：是指在一定的条件下，某种组分在固定相和流动相中含量的比值， Kd=固定相中的总量/流动相中的总量。 3.层析法的分类 答：按流动相的形式分：气相色谱法1.气固色谱法2.气液色谱法，液相色谱法1.液固色谱法2.液液色谱法；按固定相的形式分：1.柱层析法2.纸层析法3.薄层层析法。 4.几种主要凝胶的中英文名称、型号、及型号数字代表的含义 答：葡萄糖凝胶（dextran型号Sephadex G-10~200数字代表凝胶的吸水率） 聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide主要型号有Bio-Gel P-2~300,数字代表它们的排阻极限的10-3）琼脂糖凝胶（agarose Sepharose,Bio-Gel A）
《生物化学实验》内容 课程类型：制药工程专业必修 实验总学时：32课时 开设实验项目数：8个 适用对象：2017制药工程1、2班 实验教师：段志芳 一、实验目标及基本要求 生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。 包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。 四、要求 （1）实验过程中同组人可以配合进行； （2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据； （3）实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做； （4）对实验结果进行简单的分析.
实验一植物组织中可溶性总糖的提取 一、实验目的 1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。 2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。 3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。 二、实验原理 可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。 三、实验用品 1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电加热板或电 炉或电热套或水浴锅均可。可共用。 2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻璃棒1根； 100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）；不锈钢刮勺1个；剪刀1把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。 3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。 4.其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；纸巾若干；标签纸若干。每个洗 手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。 四、实验操作 取新鲜植物叶片，洗净表面污物，用滤纸吸去表面水分。称取0.5g，剪碎，加入5～10ml蒸馏水，在研钵中磨成均浆，转入锥形瓶中，用蒸馏水少量多次冲洗研钵，洗出液也转入锥形瓶中，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液冷却后过滤到100ml容量瓶中，同法残渣再提取2~3次，将提取液合并至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。贴好标签，保存至冰箱中，用于实验二。 五、实验结果与讨论 1、观察产品颜色是否与理论相符，若不符合，分析原因。 2、结合实验二结果计算含量 六、实验注意事项
1.何为离心技术？它有什么用处？ 离心技术是利用物体高速旋转时产生强大的离心力，使置于旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离之目的。离心机转子高速旋转时，当悬浮颗粒密度大于周围介质密度时，颗粒离开轴心方向移动，发生沉降；如果颗粒密度低于周围介质的密度时，则颗粒朝向轴心方向移动而发生漂浮。 用处：它是分离细胞器和生物大分子物质基本的必备手段之一，它是测定某些纯品物质的部分性质的一种方法。 2.简述离心机的分类 （1）工业用：低速，高速，超速离心机 （2）试验用：1制备：a普通离心机：台式普通，台式超速离心机。B冷冻离心机：大容量，高速，超速冷冻离心机。2分析：分析超速离心机。 3.简述层析法的基本原理及分类 原理：所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量比）不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。分类;氧化铝柱，活性炭柱，纸上，液相，高效液相，硅胶薄层，聚酰胺薄层，离子交换，凝胶，亲和，金属螯合，疏水，共价层析 4.简述层析技术的一般过程，层析技术可运用在哪些方面？过程：1层析柱的制作，2加样，3洗脱，4检测与鉴定 运用：1小分子有机物质的纸层析及薄层层析。2用吸附柱层析分离，纯化胡萝卜素。3用亲和层析法分离青豌豆凝集素。4凝胶过滤测蛋白质相对分子量。5用hplc分析维生素 5．分光光度发的基本原理。运用 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。 运用：1蛋白质含量的测定2氨基酸含量的测定3糖类含量的
生物化学实验讲义 化学工程与技术学院 基础部
实验一酪蛋白的制备 一、目的 学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。 二、原理． 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为 4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 三、器材 1 、离心机 2、．抽滤装置 3、精密pH试纸或酸度计 4、电炉 5、烧杯 6、温度计． 四、试剂与材料 1、牛奶 2500mL 2、95％乙醇 1200mL 3、无水乙醚 1200mL
4、0.2mol／L pH 4.7醋酸—醋酸钠缓冲液 3000mL 5、．乙醇—乙醚混合液2000mL 五、操作 1、将100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预 热至40℃、pH 4.7的醋酸缓冲液100 mL。用精密pH 试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟(3 000r／min)。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 2、用水洗沉淀3次，离心10分钟(3000r／min)， 弃去上清液。 3、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬 浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 4、将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯晶。 5、准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白g／100mL牛乳(g％) 得率： 测得含量 % 100 理论含量
思考题 1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？ 实验二 小麦萌发前 后淀粉酶活力的比较 一、目的 1.学习分光光度计的原理和使用方法。 2.学习测定淀粉酶活力的方法。 3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。 二、原理 种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在。淀粉酶 能使淀粉分解为麦芽糖。 2 （C 6H 10O 5）n +nH 2O nC 12H 22O 11 麦芽糖有还原性，能使3，5---二硝基水杨酸还原 成棕色的3-氨基-5-硝基水扬酸。后者可用分光光度计 测定。 OH COOH NO 2O 2N OH COOH O 2N NH 2 3,5 —二硝基水杨酸还原反应（棕色）
生物化学实验技术试卷 学号____________________姓名_____________________考试成绩____________________ 一、选择题(只有一个正确答案，多选无效，每题2分) 1.对于分光光度法优于比色法的描述，下列哪一项是错误的： A.可扩展到紫外区 B.谱带宽度更小 C.必须使用石英比色坏 D.可以绘制吸收光谱曲线 E.具有较高测量精度 2.电泳系统中热效应取决于下列哪项因素 A.电流强度 B.支持物的电渗作用 C.颗粒所带净电荷数及其大小，形状 D.溶液的pH值 E.溶液的离子强度 3.进行DNA的琼脂糖凝胶电泳时，下列哪步操作是错误的： A.称取琼脂糖配制一定浓度的琼脂糖溶液 B.将样品放置于电泳槽阳极侧然后加入溶化的琼脂糖凝胶 C.胶凝后，加入电泳缓冲液，拔出样品梳 D.样品液与溴酚蓝缓冲液混合，再加入样品孔中 E.电泳结束后以溴化乙锭染色，紫外光下观察区带 4.关于离子交换层析的描述下列哪一项不正确： A.离子交换剂通常不溶于水 B.阳离子交换剂常可离解出带正电的基团 C.阴离子交换剂常可离解出带正电的基团 D.阳离子交换剂常可离解出带负电的基团 5. 电泳系统电场引力F的大小取决于：（） A. 粒子荷电量Q B. 电场强度E C. 粒子荷电量Q及电场强度E D. 粒子半径 6. 在非分子筛的连续电泳系统中，不同种类的带电物质其泳动率取决于： A. Q/r比值。 B. 电场强度 C. 颗粒所带净电荷数 D. 颗粒大小，形状 7. 高压电泳是指: A. 电场强度>20伏/cm，总电压>500伏 B. 电场强度>500伏/cm C. 总电压>100伏 D. 总电压>200伏 8. 电泳缓冲液常用离子强度为: A. 0. 2～2.0之间 B.0.02～2.0之间 C.0.1~1.0之间 D.. 0.02～0.2之间 9. 电泳分离技术适用于分离下列哪种类型的混合物 A. 各种离子和非离子混合物 B. 非离子混合物 C. 离子混合物 D. 有机混合物 10. 电泳时由于电极反应产碱产酸，故通常电极液要用缓冲溶液。 A. 阴极产酸, 阳极产碱B阴极产碱. 阳极产酸 C. 阴极产O2 D. 阳极产H2 11. 层析图是指 A.某组分的流出曲线 B. 某组分的层析峰 C.整个层析分离过程所得的各组分流出曲线 D.层析分离过程所得的单组分流出体积
生物化学实验技术操作指导 天津科技大学 生物化学课程组 2006.12 目录 生物化学实验须知?????????????????????????????? 2实验室一些常用知识介绍??????????????????????????? 3实验一：离子交换法分离氨基酸??????????????????????? 7实验二：垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质????????????????? 9实验三：马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验???????????????????13实验四：碱性蛋白酶活力的测定???????????????????????16 实验五:植物组织中DNA和RNA的提取和鉴定????????????????19实验六：糖酵解中间产物的鉴定????????????????????????22实验七：综合设计实验—蛋白质的制备及其含量测定???????????????24 实验八：还原糖和总糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法）?????????????35实验九：发酵过程中无机磷的利用???????????????????????37
实验十：氨基酸的分离鉴定—纸层析法?????????????????????39 实验十一：细菌血栓溶解酶活性测定??????????????????????41 实验十二：可溶性糖的硅胶G薄层层析?????????????????????43 实验十三：植物材料中总黄酮的提纯与鉴定???????????????????44 实验十四：IEF/SDS-PAGE双向电泳分离鉴定蛋白质???????????????45 附录??????????????????????????????????49 一、实验室主要仪器使用操作规程与注意事项??????????????????49 二、常用缓冲溶液的配制???????????????????????????55 三、硫酸铵饱和度的常用表??????????????????????????60 生物化学实验须知 1．实验室规则 (1) 实验课必须提前5分钟到实验室,不迟到,不早退，应自觉遵守课堂纪律。 (2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。 (3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。 (4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。 (5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。课后写出实验报告, 由课代表收齐交给教师。 (6)仪器损坏时, 应如实向教师报告, 真填写损坏仪器登记表, 然后补偿一定金额。 (7)每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。 2．实验记录 实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。 实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。原始记录必须准确、简练、清楚。 3．实验报告的书写 实验结束后,应及时整理和总结实验结果, 写出实验报告。 （1）标题