第３４卷第３期２０
１５年 ５月华 中 农 业 大 学 学 报Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＶｏｌ．３４ Ｎｏ．３
Ｍａｙ
２０１５，２７～３５西瓜果斑病菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白的筛选和功能预测
潘 宏１，２ 高天一１ 吴明德１ 杨 龙１ 张 静１ 李国庆
１
１．华中农业大学植物科学技术学院，武汉４３
００７０；２．天津农学院图书馆，天津３００３８４摘要 利用ＫＥＧＧ和ＳＴＲＩＮＧ数据库分析比较瓜类果斑病菌（西瓜嗜酸菌）（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ｃｉｔｒｕｌｌｉ，Ａｃ）和主要植物病原细菌Ⅱ型分泌系统（Ｔ２ＳＳ）的基因组成，收集有试验证据的植物病原细菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白序列信息，与已测序并经注释的果斑病菌ＡＡＣ００－１菌株基因组进行序列比对，筛选出候选的果斑病菌同源Ｔ２ＳＳ分泌蛋白。通过对筛选出的分泌蛋白的信号肽、代谢通路、蛋白互作网络及其在植物细胞中的定位进行分析，预测部分分泌蛋白的生物学功能。
关键词 细菌性果斑病；瓜类果斑病菌（西瓜嗜酸菌）
；分泌蛋白；筛选；功能中图分类号 Ｓ ４３２．４＋２；Ｓ ４３６．４２ 文献标识码 Ａ 文章编号 １０００－２４２１（２０１５）０３－００２７－
０９收稿日期：２０１４－０８－
１２基金项目：国家公益性行业（农业）科研专项（２０１００３０６６
）潘 宏，硕士，副研究馆员．研究方向：生物信息软件应用．Ｅ－ｍａｉｌ：ｐａｎｈｏｎｇ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ通信作者：李国庆，博士，教授．研究方向：植物病害生物防治．Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｏｑｉｎｇ
ｌｉ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 细菌性果斑病（
ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｆｒｕｉｔ ｂｌｏｔｃｈ，ＢＦＢ）是严重威胁瓜类生产的一种毁灭性病害，在世界多个国家已将其列为重要检疫性病害，其病原菌为瓜类
果斑病菌（西瓜嗜酸菌）（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ｃｉｔｒｕｌｌｉ，Ａｃ
）［１］
。ＢＦＢ主要通过种子传播，病菌通过带菌种子传播到幼苗，引起幼苗发病，但在西甜瓜成株期病害症状不明显，到瓜类接近成熟时在果实上爆发果
斑病［２］
。在病害防治方面，种子处理、种子检疫、药物防治等措施对ＢＦＢ的防效均有限，迄今尚无对Ａｃ有抗性的种质资源。
Ａ．ｃｉ
ｔｒｕｌｌｉ是革兰氏阴性细菌，其主要致病因子有Ⅱ型分泌系统（Ｔ２ＳＳ）、Ⅲ型分泌系统（Ｔ３ＳＳ）、Ⅳ型菌毛（ｔｙｐｅⅣｐｉｌｉ）、鞭毛和群体感应等［３］。Ｔ２
ＳＳ是革兰氏阴性细菌中结构保守的分泌系统。典型的Ｔ２ＳＳ由一套１２～１６个ｇｓｐ基因组成大型操纵子，其产物是一个超大分子的复合体（也称分泌子，ｓｅｃｒｅｔｏｎ），横跨在细菌的双层膜上［３－
４］。在人类、动物和植物病原细菌中，细菌通过Ｔ２ＳＳ分泌系统将致病相关的蛋白从周质分泌到胞外，这些蛋白包
括毒力因子、毒素或侵染寄主需要的溶解酶［５］
。在非病原细菌中，细菌通过Ｔ２ＳＳ分泌的锚定蛋白吸收环境中的矿物质［６］
。Ｔ２
ＳＳ既可通过一般分泌途径（Ｓｅｃ），也可通过双精氨酸途径（Ｔａｔ）分泌蛋白［７］
。Ｊｏｈｎｓｏｎ等［８－９］利用Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－
１菌株研究了Ｔ２ＳＳ和Ｔ３ＳＳ对细菌在西瓜种子和幼苗定殖的影响，结果表明缺失Ｔ３ＳＳ结构基因ｈｒ
ｃＣ，导致细菌没有致病性，接种ＡＡＣ００－１ΔｈｒｃＣ的幼苗不表现症状，且不能产生过敏性坏死反应，但ＡＡＣ００－
１ΔｈｒｃＣ在西瓜种子萌发时仍与野生型有相同的定殖水平。与之相比，Ｔ２ＳＳ结构基因ｐｕｌＯ的突变体在种子中的定殖能力明显降低，ＡＡＣ００－
１ｐｕｌＯ：：Ｔｎ
ＧＦＰ在萌发的种子上的群体密度较野生型ＡＡＣ００－
１明显降低，幼苗的发病率从野生型的９１．５％降至１１％。由此可推测，Ｔ３ＳＳ对ＡＡＣ００－１引起病害有重要作用，但对细菌在植物组织中的定殖没有太大作用，而Ｔ２
ＳＳ则可能影响细菌的定殖和种子到幼苗的传播。ＢＦ
Ｂ是典型的种传病害，细菌从种子到幼苗的转移和定殖在果斑病的发生中有重要作用，但Ａｃ的Ｔ２ＳＳ可以分泌哪些蛋白以及这些蛋白在细菌的定殖和传播中起何作用尚没有研究报道。因此，深入研究果斑病菌Ｔ２
ＳＳ的功能及其分泌蛋白将有助于了解Ａｃ的发病机制。
Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－
１菌株的基因组序列由Ｊｏｉｎｔ Ｇｅｎｏｍｅ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＪＧＩ）测序并于２００７年发布（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＮＣ＿０
００８７５２），为瓜类细菌性果斑病的研究提供了基础信息。笔者利用ＫＥＧＧ中注释的ＡＡＣ００－
１基因组信息和其他植物病原细菌基因组信息，分析比对其Ｔ２
ＳＳ的基因组成，根据DOI:10.13300/https://www.doczj.com/doc/5411006372.html,ki.hnlkxb.2015.03.022
华中农业大学学报第３４卷
已报道的植物病原细菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白谱，与Ａｃ基因组进行序列比对和信号肽分析，筛选出与Ａｃ同源的Ｔ２ＳＳ分泌蛋白，并对筛选出的分泌蛋白的功能、分泌蛋白的互作、分泌蛋白在已知细菌代谢通路中的位置进行分析，旨在为深入研究果斑病菌从种子到幼苗定殖和传播的分子机制提供科学依据。
１ 材料与方法
１．１ 数据来源
１）文献资料。检索ＰｕｂＭｅｄ、ＣＡＢ等学术文献数据库和谷歌学术搜索引擎获得公开发表的、有试验证据支持的植物病原细菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白信息。主要检索词：Ｔ２ＳＳ、分泌蛋白（ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｓｅ－ｃｒｅｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｓｅｃｒｅｔｏｍｅ）、胞外毒素（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｔｏｘｉｎ，ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、胞外蛋白（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｅｘｏｐｒｏｔｅｉｎ，ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅａｓｅ）等。文献检索结果用Ｚｏｔｅｒｏ文献管理软件保存。
２）基因序列。从ＫＥＧＧ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅ－ｎｏｍｅ．ｊｐ／ｋｅｇｇ／）获取人工注释的Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉＡＡＣ００－１菌株和其他植物病原细菌菌株全基因组序列。ＫＥＧＧ中无菌株全基因组序列信息的分泌蛋白序列从ＮＣＢＩ的核酸数据库下载。
１．２ 分析方法
１）Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－１菌株的Ｔ２ＳＳ基因结构分析。利用ＫＥＧＧ对Ｔ２ＳＳ的注释，查找Ａｃ和主要植物病原细菌的Ｔ２ＳＳ基因组成，用ＳＴＲＩＮＧ ９．１（ｈｔｔｐ：／／ｓｔｒｉｎｇ－ｄｂ．ｏｒｇ／）比对分析主要植物病原细菌的Ｔ２ＳＳ基因结构。
２）Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ同源Ｔ２ＳＳ分泌蛋白序列比对。将文献中报道的、通过试验验证为Ｔ２ＳＳ分泌系统分泌的蛋白序列分别用ＮＣＢＩ ＢｌａｓｔＰ（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）和ＳＴＲＩＮＧ ９．１与Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－１基因组序列比对，采用缺省阈值输出比对结果。如果一个分泌蛋白序列通过ＳＴＲＩＮＧ比对，在Ａｃ基因组中有１条同源序列，则采用ＳＴＲＩＮＧ的比对结果，并参考ＮＣＢＩ ＢｌａｓｔＰ的比对分数；如果一个分泌蛋白序列在ＳＴＲＩＮＧ中没有得到同源序列，则舍弃。
３）分泌蛋白信号肽分析。分别用Ｓｅｃ信号肽分析工具ＳｉｇｎａｌＰ ４．１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖ－ｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／）和Ｔａｔ信号肽分析工具ＴａｔＰ １．０（ｈｔ－ｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴａｔＰ／）分析Ａｃ的同源Ｔ２ＳＳ分泌蛋白序列是否含有Ｓｅｃ和Ｔａｔ信号
肽区域。
４）分泌蛋白的功能预测。用ＳＴＲＩＮＧ９．１预测分泌蛋白的功能和蛋白间的互作关系，利用ＫＥＧＧ检索分泌蛋白在Ａｃ代谢通路中的位置。用ＴａｒｇｅｔＰ１．１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴａｒｇｅｔＰ／）预测分泌蛋白进入植物细胞后在植物细胞内的定位。
２ 结果与分析
２．１ Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－１菌株的Ｔ２ＳＳ基因结构Ｔ２ＳＳ可分为３个主要功能组分：内膜平台（ＩＭｐｌａｔｆｏｒｍ），由Ｇｓｐ Ｃ、Ｆ、Ｌ、Ｍ、Ｅ组成；起活塞作用的假菌毛，由Ｇｓｐ Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ组成；负责向外膜分泌物质的外膜复合体（ＯＭ ｓｅｃｒｅｔｉｎ），主要由Ｇｓｐ Ｄ组成［３］。Ｋｏｒｏｔｋｏｖ等［１０］根据最新的Ｔ２ＳＳ结构和生物化学研究成果将Ｔ２ＳＳ的结构分成４个部分：假菌毛、外膜复合体、内膜平台和ＡＴＰ酶，将Ｇｓｐ Ｅ（ＡＴＰ酶）单独作为一个组分。果斑病菌有２套Ｔ２ＳＳ基因（表１），除Ａａｖｅ＿０９２６外，其余基因位于同一条染色体链上（图１）。
表１ Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－１Ⅱ型分泌系统基因组成
Ｔａｂｌｅ １ ＴｙｐｅⅡｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－１基因１）ｇｓｐ１
Ｇｅｎｅ ｇｓｐ１
基因ｇｓｐ２
Ｇｅｎｅ ｇｓｐ２
蛋白
Ｐｒｏｔｅｉｎ
蛋白功能２）
Ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎＡａｖｅ＿１０６８Ｇｓｐ Ｅ ＡＴＰａｓｅ
Ａａｖｅ＿４１６０Ａａｖｅ＿０９１６Ｇｓｐ Ｅ ＡＴＰａｓｅ
Ａａｖｅ＿４１５０Ａａｖｅ＿０９１７Ｇｓｐ Ｄ ＯＭ ｓｅｃｒｅｔｉｎ
Ａａｖｅ＿０９１８Ｇｓｐ Ｎ Ｕｎｋｎｏｗｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎＡａｖｅ＿４１５２Ａａｖｅ＿０９１９Ｇｓｐ Ｍ ＩＭ ｐｌａｔｆｏｒｍ
Ａａｖｅ＿４１５３Ａａｖｅ＿０９２０Ｇｓｐ Ｌ ＩＭ ｐｌａｔｆｏｒｍ
Ａａｖｅ＿４１５４Ａａｖｅ＿０９２１Ｇｓｐ Ｋ Ｐｓｅｕｄｏｐｉｌｉｎ
Ａａｖｅ＿４１５５Ａａｖｅ＿０９２２Ｇｓｐ Ｊ Ｐｓｅｕｄｏｐｉｌｉｎ
Ａａｖｅ＿４１５６Ａａｖｅ＿０９２３Ｇｓｐ Ｉ Ｐｓｅｕｄｏｐｉｌｉｎ
Ａａｖｅ＿４１５７Ａａｖｅ＿０９２４Ｇｓｐ Ｈ Ｐｓｅｕｄｏｐｉｌｉｎ
Ａａｖｅ＿４１５８Ａａｖｅ＿０９２５Ｇｓｐ Ｇ Ｐｓｅｕｄｏｐｉｌｉｎ
Ａａｖｅ＿４１５１Ａａｖｅ＿０９２６Ｇｓｐ Ｃ ＩＭ ｐｌａｔｆｏｒｍ
Ａａｖｅ＿４１５９Ａａｖｅ＿３９７４Ｇｓｐ Ｆ ＩＭ ｐｌａｔｆｏｒｍ
１）Ｔ２ＳＳ基因的组成和编号来自ＫＥＧＧ Ｍｏｄｕｌｅ ａａｖ＿Ｍ００３３１（ＴｙｐｅⅡｇｅｎｅｒａｌ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ），Ａａｖｅ＿４１５１（Ｇｓｐ Ｆ）由
Ｊｏｈｎｓｏｎ等［９］的分析结果补充。Ｇｅｎｅ ｎａｍｅ ａｎｄ ＩＤ ａｒｅ ｆｒｏｍ
ＫＥＧＧ Ｍｏｄｕｌｅ ａａｖ＿Ｍ００３３１（Ｔｙｐｅ ＩＩ ｇｅｎｅｒａｌ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓ－
ｔｅｍ），ｗｉｔｈ Ａａｖｅ＿４１５１ｆｏｒｍ Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ［９］；
２）Ｔ２ＳＳ结构蛋白功能名称来自Ｋｏｒｏｔｋｏｖ等［１０］。Ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｕｎｃ－
ｔｉｏｎ ｒｅｆｅｒｓ ｔｏ Ｋｏｒｏｔｋｏｖ ｅｔ ａｌ［１０］．
在ＫＥＧＧ的Ｔ２ＳＳ直系同源基因表中［１１］，根癌土壤杆菌Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ Ｃ５８和番茄细菌性溃疡病菌Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｍｉｃｈｉ－ｇａｎｅｎｓｉｓ ＮＣＰＰＢ ３８２没有Ｔ２ＳＳ基因；水稻细菌性谷枯病菌Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ ＢＧＲ１、菊狄克氏菌
８２
第３期潘 宏等：西瓜果斑病菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白的筛选和功能预测
Ｄｉｃｋｅｙ
ａ ｄａｄａｎｔｉｉ Ｅｃｈ７０３、软腐病菌Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｔｒｏｓｅｐ
ｔｉｃｕｍＳＣＲＩ１０４３和Ｐ．ｗａｓａｂｉａｅ ＷＰＰ１６３、丁香假单胞Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ Ｂ７２８ａ、番茄细菌性斑点病菌Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ．ｔｏｍａｔｏ ＤＣ３０００、水稻白叶枯病菌Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙ
ｚａｅＫＡＣＣ １０３３１各有１套Ｔ２ＳＳ基因；茄科劳尔氏菌Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍＧＭＩ１０００除了有１套完整的Ｔ２ＳＳ基因外，还有多个ｇｓｐ
Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｅ基因；菜豆晕疫病菌Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ．ｐ
ｈａｓｅｏｌｉｃｏｌａ１４４８Ａ、柑橘溃疡病菌Ｘ．ａｘｏｎｏｐ
ｏｄｉｓ ｐｖ．ｃｉｔｒｉ ３０６、白菜黑腐病菌Ｘ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ８００４和Ｘ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ＡＴＣＣ ３３９１３、番茄疮痂病菌Ｘ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ．ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ ８５－１０均有２套Ｔ２ＳＳ基因；与瓜类果斑病菌Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－
１同属的水稻病原细菌Ａ．ａｖｅｎａｅ
ＡＴＣＣ １９８６０同样也有２套Ｔ２ＳＳ基因。以Ａｃ的Ｔ２ＳＳ基因为结点，用ＳＴＲＩＮＧ比对植物病原细菌的Ｔ２ＳＳ同源序列（图１）。由图１可知，与Ａｃ同属的Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ｓｐ．
ＪＳ４２菌株（图１－Ｆ）的Ｔ２ＳＳ基因的序列长度和排列顺序与ＡＡＣ００－１（图１－Ｅ）的第１套Ｔ２ＳＳ一致，但Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ｓｐ．ＪＳ４２菌株只有１套Ｔ２ＳＳ。Ｘ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ（图１－Ｃ）的第２套Ｔ２ＳＳ基因除Ｎ基因外，其余基因都与Ａｃ的第２套Ｔ２ＳＳ排列相同。Ｒ．ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ（图１－Ｄ）的Ｔ２ＳＳ除两端的ｇｓｐ Ｃ和ｇｓｐ
Ｆ外，其余基因排列顺序均和Ａｃ的第１套Ｔ２ＳＳ的基因相同。此外，Ｒ．ｓｏ
ｌａｎａｃｅａｒｕｍ还有２套缺少假菌毛的Ｔ２ＳＳ基因（只有ｇｓｐ
Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｅ）与Ａｃ的第２套Ｔ２ＳＳ高度同源。由图１还可知，５个假菌毛基因ｇｓｐ
Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ和Ｋ排列顺序最保守。外膜分泌子ｇｓｐ Ｄ、内膜平台ｇｓｐ Ｆ和Ａｔｐ酶ｇｓｐ
Ｅ的排列顺序有变化。Ａｃ的Ａａｖｅ＿３９７４（ｇｓｐ Ｆ）基因没有位于Ｔ２ＳＳ基因簇内，在图上未能标示出，但Ｄ．ｄａｄａｎｔｉｉ（图１－Ａ）、Ｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍ（图１－Ｂ）、Ｘ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ（图１－Ｃ）、Ｒ．ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ（图１－Ｄ）的ｇｓｐ
Ｆ均位于Ｔ２
ＳＳ基因簇内
。图１ 植物病原细菌Ｔ２ＳＳ基因结构比对（可信分数为０．７００
）Ｆｉｇ．１ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ
ｔｙｐｅ ＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ（ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ ｓｃｏｒｅ ０．７００）２．２ 预测的Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ
Ｔ２ＳＳ分泌蛋白文献检索共获得１７篇通过试验鉴定的植物病原细菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白的文献。其中，研究中采用的野生型菌株有１０个，分别为Ｂ．ｇ
ｌｕｍａｅ ＢＧＲ１［１２］
（Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ登录号ＮＣ＿０１２７２４和ＮＣ＿０１２７２），Ｄ．ｄａｄａｎｔｉｉ（＝Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙ
ｓａｎｔｈｅｍｉ）３９３７［１３－
１４］（ＮＣ＿０１４５００）；Ｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍ（＝Ｅ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃａ）ＳＣＲＩ１０４３［１５］（ＮＣ＿００４５４７）；Ｐ．ｗａｓａｂｉａｅ ＳＣＣ３１９３［１６］
；Ｒ．ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍＧＭＩ１０００［１７］
（ＮＣ＿００３２９５）；Ｘ．ａｘｏ－
ｎｏｐ
ｏｄｉｓ ｐｖ．ｃｉｔｒｉ ３０６［
１８－
１９］
（ＮＣ＿００３９１９）；Ｘ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ８００４［２０］
（ＮＣ＿００７０８６）；Ｘ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ．ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ ８５－１０［２１］
（ＮＣ＿００７５０８）；Ｘ．ｏｒｙ
ｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙｚａｅ ＢＸＯ１［２２］和Ｘ．ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙ
ｚａｅ Ｔ７１７４Ｒ［２３］
。菌株Ｐ．ｗａｓａｂｉａｅ ＳＣＣ３１９３、Ｘ．ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙ
ｚａｅＢＸＯ１和Ｘ．ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙ
ｚａｅ Ｔ７１７４Ｒ在ＫＥＧＧ和ＮＣＢＩ中没有全基因组序列信息，在Ｇｅ
ｎＢａｎｋ中也没有分泌蛋白序列信息，因此，在本试验中分别采用ＫＥＧＧ注释的Ｐ．ｗａｓａｂｉａｅ ＷＰＰ１６３（ＮＣ＿０１３４２１）和Ｘ．ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙ
ｚａｅ ＫＡＣＣ １０３３１（ＮＣ＿００６８３４）菌株的序列与Ａｃ进行比对。文献中已鉴定的分泌蛋白共有１１０个，通过与Ａｃ基因组序列对比，得到２３条Ａｃ同源序列。这些序列按蛋白功能可分为细胞壁降解酶、菌毛和鞭毛蛋白和其他毒力因子（表２）。９２
华中农业大学学报
第３４卷
表２ 预测的瓜类果斑病菌ＡＡＣ００１的Ｔ２ＳＳ分泌蛋白
Ｔａｂｌｅ ２ Ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｔｙｐｅ ＩＩ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－１基因ＩＤ／蛋白ＩＤ
Ｇｅｎｅ ＩＤ／Ｐｒｏｔｅｉｎ
ＩＤ蛋白
Ｐｒｏｔｅｉｎ
信号肽１）
Ｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅ
比对基因ＩＤ
／蛋白ＩＤＡｌｉｇｎｍｅｎｔ ｇ
ｅｎｅ ＩＤ／Ｐｒｏｔｅｉｎ ＩＤＢｌａｓｔＰ分数ＢｌａｓｔＰｓｃｏｒｅＢ
ｌａｓｔＰＥ值
ＢｌａｓｔＰ
Ｅ－ｖａ
ｌｕｅ比对序列来源菌株
Ａｌｉｇ
ｎｍｅｎｔｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａ
ｉｎ植物细胞壁降解酶Ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌ ｗａｌｌ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ Ａ
ａｖｅ＿２１０２／ＹＰ＿９７０４５７ＣｅｌｌｕｌａｓｅＳｅｃ
Ｔａｔａｃｂ
ｈＡ：ＲＳｐ０５８３／ＮＰ＿５２２１４４９３．２ ７ｅ－２１Ｒ．ｓｏ
ｌａｎａｃｅａｒｕｍＧＭＩ１０００ Ａ
ａｖｅ＿２９２４／ＹＰ＿９７１２６６Ｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅ ＴａｔＥｇ
ｌ：ＲＳｐ０１６２／ＮＰ＿５２１７２３７６．３ ７ｅ－１６Ｒ．ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍＧＭＩ１０００ Ａ
ａｖｅ＿３３９６／ＹＰ＿９７１７２８Ｐｕｔａｔｉｖｅ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ
Ｔａｔ
ＥＣＡ２２２０／ＹＰ＿０５０３１３
７４．３ ２ｅ－１６Ｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍＳＣＲＩ１０４３
Ａ
ａｖｅ＿３４３４／ＹＰ＿９７１７６５Ｐｅｃｔａｔｅ ｌｙａｓｅ Ｓｅｃｐ
ｅｌＡ：Ｄｄａ３９３７＿０３３７０／ＹＰ＿００３８８３９６７
ｐｅｌＤ：Ｄｄａ３９３７＿０３３７２／ＹＰ＿００３８８４１０９
ｐｅｌＥ：Ｄｄａ３９３７＿０３３７１／ＹＰ＿００３８８４１０８１５６１５８１５５３ｅ－４３９ｅ－４４９ｅ－４３Ｄ．ｄａｄａｎｔｉｉ
３９３７ Ａ
ａｖｅ＿３５９０／ＹＰ＿９７１９１５Ｘｙ
ｌａｎａｓｅＳｅｃ
ＴａｔａＸＯＯ４４２８／ＹＰ＿２０３０６７
４３８
１ｅ－
１５４Ｘ．ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙ
ｚａｅＫＡＣＣ １０３３１菌毛和鞭毛蛋白Ｐｉｌｉ ａｎｄ ｆｌａｇｅｌｌｕｍ ｐ
ｒｏｔｅｉｎｓ Ａａｖｅ＿３５５１／ＹＰ＿９７１８７６Ｔｆｐ ｐｉｌｕｓ ａｓｓｅｍｂｌｙ
ｐｒｏｔｅｉｎｔｉｐ
－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｄｈｅｓｉｎＰｉｌＹ１－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎＴａｔ
ａ
ｐ
ｉｌＹ１：ＸＡＣ２６６５／ＮＰ＿６４２９７６１５２ ５ｅ－３８Ｘ．ａｘｏｎｏｐ
ｏｄｉｓｐ
ｖ．ｃｉｔｒｉ ３０６ Ａ
ａｖｅ＿４４２２／ＹＰ＿９７２７３６Ｆｌａｇｅｌｌａｒ ｈｏｏｋ ｃａｐｐｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ ＦｌｇＤ－ＥＣＡ１７０４／ＹＰ＿０４９８０５ １１４ １ｅ－
３１Ｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍＳＣ
ＲＩ１０４３ Ａ
ａｖｅ＿４４２３／ＹＰ＿９７２７３７Ｆｌａｇｅｌｌａｒ ｈｏｏｋｐｒｏｔｅｉｎ ＦｌｇＥ－ｂｇｌｕ＿１ｇ３３１４０／ＹＰ＿００２９１３０８０２６５ ３ｅ－８４ Ｂ．ｇ
ｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿４４２５／ＹＰ＿９７２７３９Ｆｌａｇｅｌｌａｒ ｂａｓａｌ－ｂｏｄｙｒｏｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ＦｌｇＧ－ＥＣＡ１７０７／ＹＰ＿０４９８０８ ３３５ ２ｅ－１１６Ｐ．ａｔｒｏｓｅｐ
ｔｉｃｕｍＳＣ
ＲＩ１０４３ Ａ
ａｖｅ＿４４２９／ＹＰ＿９７２７４３Ｆｌａｇｅｌｌａｒ ｒｏｄ ａｓｓｅｍｂｌｙｐｒｏｔｅｉｎ ＦｌｇＪ－ＥＣＡ１７１０／ＹＰ＿０４９８１１ １７５ １ｅ－５２Ｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍＳＣ
ＲＩ１０４３ Ａ
ａｖｅ＿４４３０／ＹＰ＿９７２７４４Ｆｌａｇｅｌｌａｒ ｈｏｏｋ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ ＦｌｇＫ－
Ｐｅｃｗａ＿１８７７／ＹＰ＿００３２５９２６５１５６
１ｅ－
４１Ｐ．ｗａｓａｂｉａｅＷＰ
Ｐ１６３其他毒力因子Ｏｔｈｅｒ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒｓ Ａ
ａｖｅ＿０７４５／ＹＰ＿９６９１１９Ｆｉｓ ｆａｍｉｌｙ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｒｅｇｕｌａｔｏｒ，ＴｈｉＪ／ＰｆｐＩ－ｂｇｌｕ＿２ｇ０５０９０／ＹＰ＿００２９０８１９１３２６ １ｅ－１１３ Ｂ．ｇ
ｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿１２２６／ＹＰ＿９６９５９１Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｈａｐ
ｅｒｏｎｅＤｎａＫ
－ｂｇｌｕ＿１ｇ０６３４０／ＹＰ＿００２９１０５３１１０５０ ０．０ Ｂ．ｇｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿１３６５／ＹＰ＿９６９７３０ＮＡＤ－ｄｅｐ
ｅｎｄｅｎｔ ａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ－ｂｇｌｕ＿１ｇ
２５２５０／ＹＰ＿００２９１２３０５７３７ ０．０ Ｂ．ｇｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿１３９１／ＹＰ＿９６９７５６ＶｉｒＫ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｃ ＸＡＣ０４３５／ＮＰ＿６４０７９０ １４７ ３ｅ－４６Ｘ．ａｘｏｎｏｐ
ｏｄｉｓｐ
ｖ．ｃｉｔｒｉ ３０６ Ａ
ａｖｅ＿１４７１／ＹＰ＿９６９８３６Ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ－
ｂｇｌｕ＿２ｇ０１４６０／ＹＰ＿００２９０７８６９
３０８ ３ｅ－
１００Ｂ．ｇ
ｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿２８６７／ＹＰ＿９７１２０９ＮＡＤ－ｄｅｐ
ｅｎｄｅｎｔｅｐｉｍｅｒａｓｅ／ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅＴａｔａ
ｂｇｌｕ＿１ｇ
２９１３０／ＹＰ＿００２９１２６８０
３４８ ２ｅ－１２１ Ｂ．ｇｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿３０７１／ＹＰ＿９７１４１１Ｔｈｉａｍｉｎｅ－ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅＴａｔ
ａｂｇｌｕ＿１ｇ
０３１９０／ＹＰ＿００２９１０２２４
１８９ ３ｅ－５７ Ｂ．ｇｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿３４０８／ＹＰ＿９７１７３９Ａｎｋｙ
ｒｉｎＳｅｃ
Ｔａｔｂｇｌｕ＿１ｇ１３８２０／ＹＰ＿００２９１１２３５１３８ ５ｅ－４０ Ｂ．ｇｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿３６４３／ＹＰ＿９７１９６６Ｉｍｐｏｒｔ ｉｎｎｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅｔｒａｎｓｌｏｃａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ Ｔｉｍ ４４Ｓｅｃｂｇｌｕ＿１ｇ３０８２０／ＹＰ＿００２９１２８４９
１４５ １ｅ－４０ Ｂ．ｇｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿４１８９／ＹＰ＿９７２５０３Ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ＬｉｐａｓｅＳｅｃＴａｔａｂｇｌｕ＿２ｇ０７７３０／ＹＰ＿００２９０８４２６２０６ ９ｅ－６４ Ｂ．ｇ
ｌｕｍａｅ ＢＧＲ１ Ａ
ａｖｅ＿４２９６／ＹＰ＿９７２６１０Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｂｉｎｄｉｎｇｆａｍｉｌｙ ６ｐｒｏｔｅｉｎＳｅｃＴａｔａＸＡＣ０８１７／ＮＰ＿６４１１６９ １００８ ０．０Ｘ．ａｘｏｎｏｐ
ｏｄｉｓｐ
ｖ．ｃｉｔｒｉ ３０６ Ａ
ａｖｅ＿４５３８／ＹＰ＿９６８７１７Ｔｕｆ１（ｅｌｏｎｇ
ａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ｔｕ）－
ｂｇｌｕ＿１ｇ０２４３０／ＹＰ＿００２９１０１４８
７３０
０．０
Ｂ．ｇ
ｌｕｍａｅ ＢＧＲ１１）Ｓｅｃ：表示有Ｓｅｃ信号肽；Ｔａｔ：表示有Ｔａｔ信号肽和功能域；Ｔａｔａ：表示有Ｔａｔ信号肽，但没有Ｔａｔ功能域；－：表示既无Ｓｅｔ信号肽也无Ｔａｔ信号肽。 Ｓｅｃ：Ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ Ｓｅｃ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ；Ｔａｔ：Ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ Ｔａｔ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐ
ｔｉｄｅ ａｎｄ Ｔａｔ ｍｏｔｉｆ；Ｔａｔａ：ＰｏｔｅｎｔｉａｌＴａｔ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｕｔ ｎｏ Ｔａｔ ｍｏｔｉｆ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ；－：Ｎｏ Ｓｅｃ ｏｒ Ｔａｔ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｉｇ
ｎａｌ．０３
第３期潘 宏等：西瓜果斑病菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白的筛选和功能预测
２．３ Ｔ２ＳＳ分泌蛋白信号肽
典型的Ｔ２ＳＳ分泌蛋白具有Ｓｅｃ信号肽Ｎ－末端，但文献报道Ｔ２ＳＳ也可通过Ｔａｔ途径分泌蛋白［７］。５个Ａｃ细胞壁降解酶序列均有信号肽序列，其中３个有Ｓｅｃ信号肽，２个有Ｔａｔ信号肽和Ｔａｔ功能域；５个鞭毛蛋白既没有Ｓｅｃ信号肽、也没有Ｔａｔ信号肽（表２）。
在１２个其他毒力因子中，Ａａｖｅ＿１３９１（ＶｉｒＫｐｒｏｔｅｉｎ）、Ａａｖｅ＿３４０８（ａｎｋｙｒｉｎ）、Ａａｖｅ＿４１８９（Ｔｒｉａ－ｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ｌｉｐａｓｅ）、Ａａｖｅ＿４２９６（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｂｉｎｄ－ｉｎｇ ｆａｍｉｌｙ ６ｐｒｏｔｅｉｎ）、Ａａｖｅ＿２８６７（ＮＡＤ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｐｉｍｅｒａｓｅ／ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ）有Ｓｅｃ信号肽；Ａａｖｅ＿２８６７（ＮＡＤ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｐｉｍｅｒａｓｅ／ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ）、Ａａｖｅ＿３０７１（Ｔｈｉａｍｉｎｅ－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ）、Ａａｖｅ＿４１８９（Ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ Ｌｉｐａｓｅ）、Ａａｖｅ＿４２９６（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｆａｍｉｌｙ ６ｐｒｏｔｅｉｎ）有Ｔａｔ信号肽，但没有典型的双精氨酸结构功能域。Ａａｖｅ＿３４０８（ａｎｋｙｒｉｎ）是２３个序列中唯一的既有Ｓｅｃ信号肽也有Ｔａｔ信号肽功能域的分泌蛋白（表２）。２．４ Ｔ２ＳＳ分泌蛋白功能预测
１）Ｔ２ＳＳ分泌蛋白的互作。利用ＳＴＲＩＮＧ９．１预测了２３个Ａｃ候选分泌蛋白的互作网络（图２）。其中Ａａｖｅ＿０７４５、Ａａｖｅ＿１３６５、Ａａｖｅ＿１３９１、Ａａｖｅ＿１４７１、Ａａｖｅ＿２８６７、Ａａｖｅ＿３４０８（ａｎｋｙｒｉｎ）和Ａａｖｅ＿４２９６与其他蛋白之间无显著的互作关系。Ａａｖｅ＿４１８９与Ａａｖｅ＿４１９０、Ａａｖｅ＿３５５１与Ａａｖｅ＿３５５２两对蛋白在多个细菌的基因组中都是相邻基因，在Ａｃ中，这２对蛋白分别相距４ｂｐ和８ｂｐ。Ａａｖｅ＿３ ０ ７
１
蛋白由球体表示如果蛋白有三维结构数据，则球体上显示有蛋白结构。有色球体为输入的蛋白或与输入蛋白有直接互作关系的
蛋白。白色球体表示经较高次数的迭代计算预测到的互作蛋白。蛋白之间的连线表示预测的蛋白功能互作，图示有７种颜色的连线，分别表示不同的蛋白互作证据。Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｒｅ ｓｈｏｗｎ ａｓ ｓｐｈｅｒｅｓ（ｗｉｔｈ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ，ｉｆ ａｖａｉｌａｂｌｅ）．Ｃｏｌｏｒｅｄ ｓｐｈｅｒｅｓ ａｒｅ
ｉｎｐｕｔ ｏｒ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｐｕｔ．Ｗｈｉｔｅ ｎｏｄｅｓ ｈａｖｅ ａ ｈｉｇｈｅｒ ｉｔｅｒａｔｉｏｎ．Ｅｄｇｅｓ ｄｅｐｉｃｔ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｌｉｎｋｓ，ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ ７ｌｉｎｅｓ，
ｏｎｅ ｃｏｌｏｒ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｔｙｐｅ ｏｆ ｅｖｉｄｅｎｃｅ．
图２ 由ＳＴＲＩＮＧ预测的Ｔ２ＳＳ分泌蛋白间的互作（可信分数为０．７００，表示与每个蛋白互作得分最高的１０个蛋白）Ｆｉｇ．２ Ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ（ＰＰＩ）ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｆ ２３ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｔｙｐｅ ＩＩ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ａ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－１ｕｓｉｎｇ ＳＴＲＩＮＧ（ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ ｓｃｏｒｅ ０．７００，ｓｈｏｗｎ ｎｏ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ １０ｉｎｔｅｒａｃｔｏｒｓ）
１
３
华中农业大学学报第３４卷
与Ａａｖｅ＿３０７０（ｔｈｉＧ，ｔｈｉａｚｏｌｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ）和Ａａｖｅ＿３０６７（ｐｈｏｓｐｈｏｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）有密切的互作关系。鞭毛基因的互作关系保守，在图２中聚为一簇，并通过Ａａｖｅ＿０９４５（ＧｒｏＬ，ｃｈａｐｅｒｏｎｉｎ Ｇｒｏ－ＥＬ）与另外２个分泌蛋白Ａａｖｅ＿４５３８（ｔｕｆ１，ｅｌｏｎｇａ－ｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ｔｕ）、Ａａｖｅ＿１２２６（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｐｅｒｏｎｅＤｎａＫ）产生互作关系。
２）Ｔ２ＳＳ分泌蛋白涉及的代谢通路。利用ＫＥＧＧ中的代谢数据库分析分泌蛋白的功能。结果表明，Ａａｖｅ＿２１０２和Ａａｖｅ＿２９２４的功能相同，在淀粉和蔗糖代谢途径上将纤维素分解成纤维二糖。Ａａｖｅ＿１３６５是琥珀酸半醛脱氢酶，参与谷氨酸盐、酪氨酸、赖氨酸等多个氨基酸的代谢，反应物是琥珀酸半醛（ｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｓｅｍｉａｌｄｅｈｙｄｅ），产物是琥珀酸。Ａａｖｅ＿３０７１与它的２个互作蛋白Ａａｖｅ＿３０７０、Ａａｖｅ＿３０６７均是硫胺素（维生素Ｂ１）合成途径中的酶。Ａａｖｅ＿４１８９位于甘油脂类代谢通路，产物是三酰甘油或脂肪酸。其余分泌蛋白在ＫＥＧＧ中尚未注释代谢通路信息。
３）Ｔ２ＳＳ分泌的鞭毛蛋白。在ＫＥＧＧ鞭毛蛋白的结构模型（ＫＥＧＧ Ｐａｔｈｗａｙ ａａｖ０２０４０Ｆｌａｇｅｌｌａｒａｓｓｅｍｂｌｙ）中，比对得到的Ａｃ鞭毛蛋白均位于细菌胞外（图３，红色标示Ｔ２ＳＳ分泌的鞭毛蛋白，黄色标示ＳＴＲＩＮＧ预测的其他鞭毛互作蛋白，ＦｌｇＪ位于鞭毛内部未标示）。其中ＦｌｇＥ是鞭毛勾蛋白（钩子蛋白，ｈｏｏｋ），ＦｌｇＫ是链接钩子和鞭毛丝的链接蛋白，ＦｌｇＤ是钩子帽子蛋白，ＦｌｇＧ是传动杆蛋白，ＦｌｇＪ在ＭＳ环（ＦｌｉＦ）内腔上方组装传动杆帽子蛋白
。
红色方框表示候选的Ｔ２ＳＳ分泌鞭毛蛋白，黄色方框表示ＳＴＲＩＮＧ预测的鞭毛互作蛋白，绿色方框表示Ａｃ其他的鞭毛蛋白，白色为非Ａｃ基因组蛋白，圆角方框示另一个代谢通路。Ｒｅｄ ｂｏｘ，ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｔｙｐｅ ＩＩ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｙｅｌｌｏｗ ｂｏｘ，ｉｎｔｅｒａｔｏｒ ｗｉｔｈ ｃａｎｄｉ－ｄａｔｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ＳＴＲＩＮＧ．Ｇｒｅｅｎ ｂｏｘ，ｏｔｈｅｒ ｆｌａｇｅｌｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ａｃ．Ｗｈｉｔｅ ｂｏｘ，ｇｅｎｅ ｎｏｔ ｉｎ Ａｃ ｇｅｎｏｍｅ．Ｒｏｕｎｄｅｄ ｒｅｃｔａｎｇｌｅ，ａｎｏｔｈｅｒｐａｔｈｗａｙ．
图３ 瓜类果斑病菌中Ｔ２ＳＳ分泌的鞭毛蛋白在ＫＥＧＧ鞭毛蛋白结构模型（ａａｖ０２０４０，Ｆｌａｇｅｌｌａｒ ａｓｓｅｍｂｌｙ）中的位置Ｆｉｇ．３ Ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ２ＳＳ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｂｙ Ａｃ ｏｎ ｔｈｅ ＫＥＧＧ ｐａｔｈｗａｙ（ａａｖ０２０４０，Ｆｌａｇｅｌｌａｒ ａｓｓｅｍｂｌｙ）
２
３
第３期潘 宏等：西瓜果斑病菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白的筛选和功能预测
４）分泌蛋白在植物细胞中的定位预测。按Ｓｉｇ－ｎａｌＰ ４．１和ＴａｔＰ １．０结果剪切细菌分泌蛋白的Ｓｅｃ信号肽和Ｔａｔ信号肽序列后，用ＴａｒｇｅｔＰ １．１分析分泌蛋白进入植物细胞后可能的亚细胞位置，试验结果显示有３种分泌蛋白定位于植物细胞的叶绿体中，５种分泌蛋白定位于植物细胞的线粒体中，其他分泌蛋白可定位于植物细胞的任何亚细胞结构中（表３）。
表３ 分泌蛋白在植物细胞中的定位１）
Ｔａｂｌｅ ３ Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ
基因ＩＤＧｅｎｅ ＩＤ信号肽
ＳＰ
序列长度／ａａ
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｅｎｇｔｈ
分数 Ｓｃｏｒｅ
叶绿体转
运肽ＣＴＰ
线粒体靶
向肽ＭＴＰ
信号肽
ＳＰ
其他
Ｏｔｈｅｒｓ
定位
Ｌｏｃａｔｉｏｎ
可信度２）
Ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ
植物细胞壁降解酶Ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌ ｗａｌｌ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ
Ａａｖｅ＿２１０２Ｓｅｃ ３６８ ０．１３１ ０．０７６ ０．０７６ ０．８５３－２ Ａａｖｅ＿２１０２Ｔａｔ ３７８ ０．０８９ ０．１０９ ０．２３４ ０．５９５－４ Ａａｖｅ＿２９２４Ｔａｔ ４１１ ０．２７６ ０．１０９ ０．４２０ ０．２６２Ｓ５ Ａａｖｅ＿３３９６Ｔａｔ ３１４ ０．０４７ ０．２５２ ０．０５５ ０．８６６－２ Ａａｖｅ＿３４３４Ｓｅｃ ４８０ ０．３２９ ０．１０３ ０．０８６ ０．６７０－４ Ａａｖｅ＿３５９０Ｓｅｃ ３０４ ０．０３４ ０．３６５ ０．１１４ ０．６６６－４ Ａａｖｅ＿３５９０Ｔａｔ ２８８ ０．１４６ ０．０９４ ０．０６３ ０．９３０－２ Ａａｖｅ＿３５５１Ｔａｔ １ ４５７ ０．３５７ ０．１００ ０．１３２ ０．７３７－４菌毛和鞭毛蛋白Ｐｉｌｉ ａｎｄ ｆｌａｇｅｌｌｕｍ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
Ａａｖｅ＿４４２２－２１６ ０．６２０ ０．０４４ ０．０３４ ０．５１８Ｃ５ Ａａｖｅ＿４４２３－４２５ ０．２４６ ０．１４８ ０．１３５ ０．４７１－４ Ａａｖｅ＿４４２５－２６０ ０．１２６ ０．１１８ ０．０５９ ０．６３６－３ Ａａｖｅ＿４４２９－３００ ０．５２９ ０．０４５ ０．２７５ ０．２５０Ｃ４ Ａａｖｅ＿４４３０－６４２ ０．０５４ ０．６１３ ０．１５２ ０．０４１Ｍ３其他毒力因子Ｏｔｈｅｒ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒｓ
Ａａｖｅ＿０７４５－２２６ ０．０３４ ０．４０８ ０．０８９ ０．８４８－３ Ａａｖｅ＿１２２６－６５４ ０．２０２ ０．０８９ ０．２１４ ０．７４６－３ Ａａｖｅ＿１３６５－４７９ ０．０９０ ０．１９６ ０．０３８ ０．８１１－２ Ａａｖｅ＿１３９１Ｓｅｃ １２１ ０．１７０ ０．１１２ ０．０７６ ０．７７７－２ Ａａｖｅ＿１４７１－４４４ ０．００５ ０．７４６ ０．０４０ ０．３８６Ｍ４ Ａａｖｅ＿２８６７Ｔａｔ ２２６ ０．０３５ ０．１６６ ０．０７６ ０．９０７－２ Ａａｖｅ＿３０７１Ｔａｔ ２６８ ０．００７ ０．４３９ ０．３１６ ０．５０８－５ Ａａｖｅ＿３４０８Ｓｅｃ ２０１ ０．１００ ０．１２２ ０．０５０ ０．８９０－２ Ａａｖｅ＿３４０８Ｔａｔ １９９ ０．１４１ ０．１３３ ０．０５６ ０．８６６－２ Ａａｖｅ＿３６４３Ｓｅｃ ３２１ ０．３２７ ０．４０９ ０．００４ ０．２４０Ｍ５ Ａａｖｅ＿４１８９Ｓｅｃ ２８３ ０．００２ ０．２３７ ０．３３１ ０．５０７－５ Ａａｖｅ＿４１８９Ｔａｔ ２８６ ０．００２ ０．５５８ ０．１７４ ０．４２０Ｍ５ Ａａｖｅ＿４２９６Ｓｅｃ ７４４ ０．７４１ ０．１６８ ０．０２９ ０．２４９Ｃ３ Ａａｖｅ＿４２９６Ｔａｔ ７２９ ０．１９８ ０．５０４ ０．０６０ ０．１８４Ｍ４ Ａａｖｅ＿４５３８－３９６ ０．０４５ ０．３１７ ０．１４０ ０．８１３－３１）ＣＴＰ：Ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｐｅｐｔｉｄｅ；ＭＴＰ：Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ；Ｓ：代谢途径Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ；Ｃ：叶绿体Ｃｈｌｏｒｏ－ｐｌａｓｔ；Ｍ：线粒体Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｏｎ；－：胞内其他位置Ａｎｙ ｏｔｈｅｒ ｌｏｃａｔｉｏｎ；
２）可信度等级（ＲＣ）从１～５，１表示预测强度最大。Ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ ｃｌａｓｓ ｆｒｏｍ １ｔｏ ５，ｗｈｅｒｅ １ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ；
１：ＲＣ＞０．８００，２：０．８００≥ＲＣ≥０．６００，３：０．６００≥ＲＣ≥０．４００，４：０．４００≥ＲＣ≥０．２００，５：ＲＣ＜０．２００．
３ 讨 论
多数植物病原细菌有１～２套Ｔ２ＳＳ基因，但这２套基因在功能上如何分工还没有详细报道。仅Ｆｅｒｒａｎｄｅｚ等［２４］发现Ｄ．ｄａｄａｎｔｉｉ ３９３７的第２套Ｔ２ＳＳ（Ｓｔｔ，ｓｅｃｏｎｄ ｔｙｐｅ ｔｗｏ）可分泌一个锚定在细菌外表面（不分泌到植物环境中）的果胶裂解酶同源蛋白ＰｎｌＨ，ＰｎｌＨ通过Ｔａｔ途径穿过内膜。ＰｎｌＨ在Ａｃ中没有同源序列。本试验比对得到的５个细胞壁降解酶中，Ａａｖｅ＿２９２４和Ａａｖｅ＿３３９６均有Ｔａｔ信号肽和功能域，Ａｃ中２套Ｔ２ＳＳ基因的功能有待进一步研究。
鞭毛对细菌粘附及定殖在生物或非生物表面都起着重要作用，但一般认为，鞭毛胞外的结构蛋白是由鞭毛自身分泌的［２５］。ＫＥＧＧ的代谢通路（ａａｖ０２０４０）也是这样注释的，但３个独立的试验研究结果表明［１２，１６，２６］，植物病原细菌的Ｔ２ＳＳ可分泌鞭毛蛋白，且这些鞭毛蛋白基因在Ａｃ和其他植物细菌基因组中是相邻的（图２）。由此可推测，Ｔ２ＳＳ可能参与了鞭毛组装过程。
在植物细胞间定殖是细菌入侵植物体的第一步。此阶段植物通过识别细菌的保守分子特征识别入侵者并诱导防卫反应。这种诱导称为微生物或病原菌诱导的分子模式ＭＡＭＰ或ＰＡＭＰ（ｍｉｃｒｏｂｅ－
３
３
华中农业大学学报第３４卷
ｏｒ ｐａｔｈｏｇｅｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎ），植物的这种防卫反应叫做ＭＡＭＰ或ＰＡＭＰ诱导的免疫（ＭＡＭＰ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ＭＴＩ或ＰＡＭＰ ｔｒｉｇ－ｇｅｒｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ＰＴＩ）［２７］。本研究比对得到的毒力因子中，Ａａｖｅ＿４５３８（ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ｔｕ）是细菌中最丰富的蛋白，也是植物免疫反应的开关［２８］。在Ａｃ中Ａａｖｅ＿４５３８是否由Ｔ２ＳＳ分泌到胞外，并与瓜类作物的ＭＴＩ（或ＰＴＩ）相互作用，进而对Ａｃ的定殖过程起重要作用，值得进一步研究。
锚定蛋白重复序列（ａｎｋｙｒｉｎ ｒｅｐｅａｔ，ＡＮＫ）是真核生物中广泛存在的蛋白－蛋白互作功能域（ｐｒｏ－ｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆ）。人类病原细菌可通过多个分泌系统将锚定蛋白分泌到寄主细胞中，因细菌锚定蛋白与寄主锚定蛋白有相同的结构，细菌可利用锚定蛋白模拟或调控寄主细胞的某些功能［２９］。Ａｃ中比对得到的锚定蛋白Ａａｖｅ＿３４０８的功能有待进一步研究。
大多数植物病害是在１９世纪末或２０世纪初鉴定的，而瓜类细菌性果斑病菌则是在１９６０年以后才有报道，直到１９８０年以后才造成经济损失［３］。相比于其他植物病原细菌，果斑病菌的研究报道文献较少。本研究详细分析了已报道的植物病原细菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白谱，结合ＫＥＧＧ和ＳＴＲＩＮＧ等生物信息学工具对果斑病菌中同源的Ｔ２ＳＳ分泌蛋白及其功能进行了解析。除文中已讨论和分析的毒力因子外，还有协助蛋白折叠和再折叠的ｄｎａＫ分子伴侣蛋白（Ａａｖｅ＿１２２６）、在寄主细胞内起复制和扩散作用的ＶｉｒＫ蛋白（Ａａｖｅ＿１３９１）等。本试验得到的毒力因子均为细菌生理生化过程中重要的酶，并可定位在植物细胞的叶绿体、线粒体和其他细胞组分中。这些信息可为深入研究果斑病菌在种子传播和幼苗定殖过程中的分子机制提供理论依据。
致谢 试验设计和分析过程中得到中国农业科学院植物保护研究所赵廷昌研究员、王铁霖博士和华中农业大学植物科学技术学院吕学良博士、曾丽梅博士、于琳博士等提供的宝贵意见和热情帮助，谨致谢意！
参 考 文 献
［１］ 高天一，潘宏，别之龙，等．葫芦种子带菌对幼苗细菌性果斑病发生和侵染途径的影响［Ｊ］．华中农业大学学报，２０１４，３３（５）：３６－３９．
［２］ 赵廷昌，孙福在，王兵万，等．哈密瓜细菌性果斑病病原菌鉴定
［Ｊ］．植物病理学报，２００１，３１（４）：３５７－３６４．
［３］ ＢＵＲＤＭＡＮ Ｓ，ＷＡＬＣＯＴＴ Ｒ．Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ｃｉｔｒｕｌｌｉ：ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇｂａｓｉｃ ａｎｄ ａｐｐｌｉｅｄ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ｔｏ ｔａｃｋｌｅ ａ ｇｌｏｂａｌ ｔｈｒｅａｔ ｔｏ ｔｈｅ ｃｕ－
ｃｕｒｂｉｔ ｉｎｄｕｓｔｒｙ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０１２，１３（８）：８０５－８１５．
［４］ ＤＯＵＺＩ Ｂ，ＦＩＬＬＯＵＸ Ａ，ＶＯＵＬＨＯＵＸ Ｒ．Ｏｎ ｔｈｅ ｐａｔｈ ｔｏ ｕｎ－ｃｏｖｅｒ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｔｙｐｅⅡｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．ＰｈｉｌｏｓｏｐｈｉｃａｌＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｂ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２，３６７（１５９２）：１０５９－１０７２．
［５］ ＲＯＮＤＥＬＥＴ Ａ，ＣＯＮＤＥＭＩＮＥ Ｇ．ＴｙｐｅⅡｓｅｃｒｅｔｉｏｎ：ｔｈｅ ｓｕｂ－ｓｔｒａｔｅｓ ｔｈａｔ ｗｏｎ′ｔ ｇｏ ａｗａｙ［Ｊ］．Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１３，１６４（６）：５５６－５６１．
［６］ ＬＥ ＢＬＡＳＴＩＥＲ Ｓ，ＨＡＭＥＬＳ Ａ，ＣＡＢＥＥＮ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｔａｒｖａｔｉｏｎ ｔｒｉｇｇｅｒｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｒｅｓｃｅｎｔｕｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳ ＯＮＥ，２０１０，５
（１２）：ｅ１４１９８．
［７］ ＪＨＡ Ｇ，ＲＡＪＥＳＨＷＡＲＩ Ｒ，ＳＯＮＴＩ Ｒ Ｖ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｔｙｐｅ ｔｗｏ ｓｅ－ｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｄｏｕｂｌｅ－ｅｄｇｅｄ ｓｗｏｒｄｓ ｆｏｒ ｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２００５，１８
（９）：８９１－８９８．
［８］ ＪＯＨＮＳＯＮ Ｋ Ｌ，ＭＩＮＳＡＶＡＧＥ Ｇ Ｖ，ＷＡＬＣＯＴＴ Ｒ Ｒ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆ ｔｙｐｅⅢａｎｄ ｔｙｐｅⅡｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｎ Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ａｖｅｎａｅ ｓｕｂｓｐ．ｃｉｔｒｕｌｌｉ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｓｅｅｄ ａｎｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００９，９９（６ｓ）：Ｓ５９．
［９］ ＪＯＨＮＳＯＮ Ｋ Ｌ．Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｈｏｓｔ－ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎ－ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｔｈａｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｓｅｅｄ－ｔｏ－ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｃｉ－ｄｏｖｏｒａｘ ｃｉｔｒｕｌｌｉ［Ｄ］．Ａｔｈｅｎｓ：Ｌｉｂｒａｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｏｒｇｉａ，２０１０．
［１０］ＫＯＲＯＴＫＯＶ Ｋ Ｖ，ＳＡＮＤＫＶＩＳＴ Ｍ，ＨＯＬ Ｗ Ｇ Ｊ．Ｔｈｅ ｔｙｐｅⅡｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ：ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ ａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１２，１０（５）：３３６－３５１．
［１１］Ｏｒｔｈｏｌｏｇ ｔａｂｌｅ Ｍ００３３１［ＥＢ／ＯＬ］．／２０１４－０４－２５．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｅｇｇ．ｊｐ／ｋｅｇｇ－ｂｉｎ／ｖｉｅｗ＿ｏｒｔｈｏｌｏｇ＿ｔａｂｌｅ？ｍｄ＝Ｍ００３３１．
［１２］ＧＯＯ Ｅ，ＫＡＮＧ Ｙ，ＫＩＭ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｑｕｏｒｕｍｓｅｎｓｉｎｇ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒ－ｎａｌ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１０，９（６）：３１８４－３１９９．
［１３］ＨＡＳＳＡＮ Ｓ，ＨＵＧＯＵＶＩＥＵＸ－ＣＯＴＴＥ－ＰＡＴＴＡＴ Ｎ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ ｔｗｏ ｆｅｒｕｌｏｙｌ ｅｓｔｅｒａｓｅｓ ｉｎ Ｄｉｃｋｅｙａ ｄａｄａｎｔｉｉ ３９３７ａｎｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｆｅｒｕｌｏｙｌ ｅｓｔｅｒａｓｅ ａｎｄ ｏｆ ｐｅｃｔａｔｅ ｌｙａｓｅｓ ｂｙ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２０１１，１９３（４）：９６３－９７０．
［１４］ＨＡＳＳＡＮ Ｓ，ＳＨＥＶＣＨＩＫ Ｖ Ｅ，ＲＯＢＥＲＴ Ｘ，ｅｔ ａｌ．ＰｅｌＮ ｉｓ ａｎｅｗ ｐｅｃｔａｔｅ ｌｙａｓｅ ｏｆ Ｄｉｃｋｅｙａ ｄａｄａｎｔｉｉ ｗｉｔｈ ｕｎｕｓｕａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒ－ｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２０１３，１９５（１０）：２０９７－２２０６．［１５］ＣＯＵＬＴＨＵＲＳＴ Ｓ Ｊ，ＬＩＬＬＥＹ Ｋ Ｓ，ＨＥＤＬＥＹ Ｐ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｄｓｂａｐｌａｙｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｆａｃｅｔｅｄ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｃｒｅ－ｔｅｄ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｂｙ ｔｈｅ ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａｓｕｂｓｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃａ［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，２８３（３５）：２３７３９－２３７５３．
［１６］ＬＡＡＳＩＫ Ｅ，ＰＯＬＬＵＭＡＡ Ｌ，ＰＡＳＡＮＥＮ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｎｉｐＰ．ｗｏｆ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗａｓａｂｉａｅ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｌ－
４３
第３期潘 宏等：西瓜果斑病菌Ｔ２ＳＳ分泌蛋白的筛选和功能预测
ｇ
ＫＬｆｌａｇｅｌｌａｒ ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１４，１６０：１７９－１８６．［１７］ＬＩＵ Ｈ，ＺＨＡＮＧ Ｓ，ＳＣＨＥＬＬ Ｍ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｐｙｒａｍｉｄｉｎｇ
ｕｎｍａｒｋｅｄｄｅｌｅｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｐ
ｒｏ－ｔｅｉｎｓ ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｔｏ ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌ－ｗａｌｌ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ ｃｏｎｔｒｉｂ－ｕｔｅ ｔｏ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２００５，１８（１２）：１２９６－
１３０５．［１８］ＧＵＯ Ｙ，ＦＩＧＵＥＩＲＥＤＯ Ｆ，ＪＯＮＥＳ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｈｒｐｇ
ａｎｄ Ｈｒｐｘ ｐｌａｙｇｌｏｂａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｔｒａｉｔｓ ｏｆ Ｘａｎ－ｔｈｏｍｏｎａｓ ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ．ｃｉｔｒｉ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎ－ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２０１１，２４（６）：６４９－
６６１．［１９］ＹＡＭＡＺＡＫＩ Ａ，ＨＩＲＡＴＡ Ｈ，ＴＳＵＹＵＭＵ Ｓ．ＨｒｐＧ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｙｐ
ｅⅡｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ．ｃｉｔｒｉ［Ｊ］．Ｊｏｕｒ－ｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ
，２００８，７４（２）：１３８－１５０．［２０］ＭＥＮＧ Ｑ Ｌ，ＴＡＮＧ Ｄ Ｊ，ＦＡＮ Ｙ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ
ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎ Ｍｉｐ ａｎｄ ＰｒｔＡ ｏｎ ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉ－ｔｙ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐａｔｈｏｖａｒ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ［Ｊ］．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１１，３２３（２）：１８０－１８７．［２１］ＳＺＣＺＥＳＮＹ Ｒ，ＪＯＲＤＡＮ Ｍ，ＳＣＨＲＡＭＭ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒ－
ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｘｃｓ ａｎｄ Ｘｐｓ ｔｙｐｅⅡｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙ
ｓｔｅｍｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐ
ｅｓｔｒｉｓ ｐｖ．ｖｅｓｉｃａｔｏ－ｒｉａ［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｐｈｙｔｏｌｏｇ
ｉｓｔ，２０１０，１８７（４）：９８３－１００２．［２２］ＲＡＪＥＳＨＷＡＲＩ Ｒ，ＪＨＡ Ｇ，ＳＯＮＴＩ Ｒ Ｖ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｎ ｉｎ ｐ
ｌａｎｔａ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｘｙｌａｎａｓｅ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙｚａｅ ｉｎ ｐｒｏ－ｍｏｔｉｎｇ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｎ ｒｉｃｅ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃ－ｔｉｏｎｓ，２００５，１８（８）：８３０－
８３７．［２３］ＦＵＲＵＴＡＮＩ Ａ，ＴＳＵＧＥ Ｓ，ＯＨＮＩＳＨＩ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ
ｆｏｒＨｒｐｘｏ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅⅡｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙｚａｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２００４，１８６（５）：１３７４－
１３８０．［２４］ＦＥＲＲＡＮＤＥＺ Ｙ，ＣＯＮＤＥＭＩＮＥ Ｇ．Ｎｏｖｅｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ
ｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
，２００８，６９（６）：１３４９－１３５７．［２５］孙琳琳．Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ
ｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓ鞭毛丝亚基蛋白的翻译后修饰及ＦｌａＡ和ＦｌａＢ功能差异研究［Ｄ］．杭州：浙江大学图书馆，２０
１３．［２６］ＣＯＲＢＥＴＴ Ｍ，ＶＩＲＴＵＥ Ｓ，ＢＥＬＬ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ａｎｅｗ ｑｕｏｒｕｍ－ｓｅｎｓｉｎｇ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａ－ｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃａ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｖｉａ ｔｈｅ ｔｙｐｅ ＩＩ ｔａｒｇｅｔｉｎｇｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２００５，１８（４）：３３４－
３４２．［２７］ＮＥＷＭＡＮ Ｍ Ａ，ＳＵＮＤＥＬＩＮ Ｔ，ＮＩＥＬＳＥＮ Ｊ Ｔ，ｅｔ
ａｌ．ＭＡＭＰ（ｍｉｃｒｏｂｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎ）ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｉｎｐ
ｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，２０１３，４：１３９．［２８］ＡＬＢＥＲＴ Ｍ，ＪＥＨＬＥ Ａ Ｋ，ＦＵＥＲＳＴ Ｕ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｔｗｏ－ｈｙ
ｂｒｉｄ－ｒｅ－ｃｅｐｔｏｒ ａｓｓａｙ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｓ ｓｗｉｔｃｈ－ｏｎｆｏｒ ｐｌａｎｔ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１３，１６３（４）：１５０４－
１５０９．［２９］ＡＬ－ＫＨＯＤＯＲ Ｓ，ＰＲＩＣＥ Ｃ Ｔ，ＫＡＬＩＡ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ｄｉ－ｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ａｎｋｙｒｉｎ ｒｅｐｅａｔｓ ｉｎ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
，２０１０，１８（３）：１３２－１３９．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅⅡｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎ Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ｃｉｔｒｕｌｌｉ ＡＡＣ００－
１ＰＡＮ Ｈｏｎｇ１，
２ ＧＡＯ Ｔｉａｎ－ｙｉ １ ＷＵ Ｍｉｎｇ－ｄｅ１ ＹＡＮＧ Ｌｏｎｇ１ ＺＨＡＮＧ Ｊｉｎｇ１ ＬＩ Ｇｕｏ－ｑｉｎｇ
１
１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇ
ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００７０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｉａｎｊｉｎ Ａｇ
ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｌｉｂｒａｒｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００３８４，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｆｒｕｉｔ ｂｌｏｔｃｈ（ＢＦＢ）ｉｓ ａ ｓｅｖｅｒｅ ｓｅｅｄ－ｂｏｒｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｎ ｍｅｌｏｎｓ．Ｔｈｅ ｔｙｐｅⅡｓｅｃｒｅ－ｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔ２ＳＳ），ｏｎｅ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒｓ，ｍａｙ
ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｇｅｎｅｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ Ｔ２ＳＳ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ２ＳＳ ｃｌｕｓｔｅｒｓ ｉｎ Ａｃｉ－ｄｏｖｏｒａｘ ｃｉｔｒｕｌｌｉ（Ａｃ）ｓｔｒａｉｎ ＡＡＣ００－１ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｓｐ
ｅｃｉｅｓ ｖｉａＫＥＧＧ ａｎｄ ＳＴＲＩＮＧ ｄａｔａｂａｓｅｓ．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，Ｔ２ＳＳ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ａｃ ｓｔｒａｉｎ ＡＡＣ００－１ｗｉｔｈ ｈｏｍｏｌｏ－ｇｙ
ｔｏ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ ｐｒｏｏｆｅｄ Ｔ２ＳＳ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂａｓｅｄ ｏｎ ＢＬＡＳＴＰ ｓｅａｒｃｈ．Ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌｓ，ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｐａｔｈｗａｙｓ，ｐｒｅｓｕｍｅｄｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ｔ２ＳＳ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ａｃ ｓｔｒａｉｎ ＡＡＣ００－１ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ｖａｌｕａｂｌｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｏ－ｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ａｃ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｔｒａｎｓｍｉｓ－ｓｉ
ｏｎ．Ｋｅｙ
ｗｏｒｄｓ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｆｒｕｉｔ ｂｌｏｔｃｈ；Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ｃｉｔｒｕｌｌｉ；ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ；ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ；ｆｕｎｃｔｉｏｎ（责任编辑：陈红叶）
５３
西瓜枯萎病的发病原因及其防治措施 种西瓜的人最担心都就是西瓜种植了却没有收获，或者很多不好的因素严重影响了西瓜的收益。但是往往很多不能预期的外界因素导致了西瓜的减产甚至绝收，这让很多瓜农朋友懊恼，这些病害到底怎么发生的呢？自己在种植西瓜的时候想宝贝一样的呵护，怎么西瓜还是得病了呢？但是从现在开始瓜农朋友们再也不用担心了，西瓜病害防治技术让你摆脱西瓜病害的烦恼。今天为大家讲解一下西瓜枯萎病的发病原因及其防治措施。西瓜枯萎病又叫蔓割病，萎蔫病，是西瓜种植中发生频率最高的病害之一。往往会造成西瓜严重减产甚至绝收，是影响西瓜产量的重要因素之一。西瓜枯萎病的主要症状枯萎病从苗期到成熟期都会发生，以伸蔓期到结果期发病最重。苗期发病叶子下垂，真叶褶皱，枯萎变黄。根部变成黄白色，须根少，瓜苗倒伏枯死。成株发病缓慢，茎根部开始变软，出现绿黄色水渍，后逐渐干枯，表皮粗糙，根茎初裂如刀割。发病初期植株白天枯萎早晚正常，病情加重后早晚也无法恢复，最后全部枯死。西瓜枯萎病病原菌与发病规律西瓜枯萎病是真菌引起的通过土壤传染的病害。病菌以菌丝体，厚垣孢子或菌核在土壤、残病体在土壤中越冬，成为次年初侵染源。病原通过植株根部伤口或者根毛顶部细胞间隙侵入，在8--34摄氏度时都可以诱发西瓜枯萎病，24-28摄氏度为病害发生最佳温度。特别是在雨后晴天，久旱后下雨或者时雨时晴的天气易于发病，重插地发病最为普遍。西瓜枯萎病防治措施西瓜枯萎病以预防为主，一旦发病，一般情况下很难治愈，只能减轻症状。1、合理轮作。轮作年限旱地为7-8年，水田为3-4年。苗床土消毒，育苗用土壤和肥料选用无菌土壤，一般土壤可用50%可湿性粉剂150的药土撒
xx86.2%铜大师 防治细菌有特效 xx种业先锋良种有限公司 细菌性病害名录大全 粮食作物细菌病害： 1、水稻： *水稻细菌性条斑病、*水稻白叶枯病、水稻基腐病、水稻细菌性褐条病、水稻细菌性褐斑病。 2、马铃薯： *马铃薯青枯病、马铃薯软腐病、马铃薯黑胫病、马铃薯环腐病。 3、*甘薯瘟病； 4、xx茎腐病； 5、小麦xx； 6、木薯细菌性枯萎病； 果树细菌病害： 1、*柑桔溃疡病（包括脐橙、橙、柚、文旦、柠檬、巨桔、枳壳、枳橙等）； 2、*沙田柚溃疡病； 3、梨根癌病、梨火疫病； 4、桃细菌性穿孔病（包括李、杏、油桃、樱桃等）； 5、苹果根癌病；
6、菠萝心腐病； 7、枇杷芽枯病、枇杷癌肿病； 8、核桃黑斑病； 9、猕猴桃溃疡病； 10、芒果细菌性黑斑病； 11、果树细菌性根癌病（包括桃、梨、苹果、板栗、梅、李、杏、葡萄等）； 瓜菜类细菌病害： 1、*西瓜细菌性青枯病、西瓜细菌性果腐病； 2、茄科蔬菜青枯病（番茄、茄子、辣椒）软腐病、疮痂病； 3、*黄瓜细菌性角斑病（黄瓜、甜瓜、丝瓜） 4、*十字花科蔬菜软腐病、细菌性黑腐病、细菌性黑斑病（大白菜、甘蓝、萝卜、花椰菜等） 5、*菜豆细菌性角斑病（菜豆、扁豆、豇豆、豌豆、绿豆等） *菜豆细菌性疫病（菜豆、扁豆、豇豆、、绿豆） 6、*xx瘟病（xx腐败病、xx腐烂病） 7、*瓜类青枯病 8、*辣椒细菌性斑点病（辣椒疮痂病）、辣椒细菌性叶斑病； 9、萝卜黑腐病； 10、葱类细菌性软腐病； 11、莴苣细菌性斑点病；
12、芋艿细菌性斑点病，芋艿腐败病（即芋软腐病、芋艿腐烂病）； 13、芹菜软腐病； 14、魔芋软腐病； 15、葱类细菌性软腐病；挪威86.2%铜大师 防治细菌有特效 经济作物类细菌病害： 1、*棉角斑病，棉红叶根腐病； 2、*花生青枯病； 3、油菜黑腐病；、油菜软腐病、油菜细菌性黑斑病； 4、*大豆细菌性叶烧病、大豆细菌性斑点病、大豆细菌性斑疹病； 5、甜菜软腐病、甜菜细菌性根癌病、甜菜细菌性尾腐病（根尾腐烂病）、甜菜细菌性斑枯病； 6、芝麻细菌性角斑病、芝麻青枯病； 7、*烟草青枯病、烟草角斑病、*烟草野火病、烟草软腐病（空茎病）； 8、向日葵细菌性茎腐病； 9、甘蔗白条病； 10、咖啡细菌性叶斑病； 11、xx细菌性叶斑病； 其它作物细菌性病害： 1、xx青枯病、xx细菌性黑枯病、xx疫病； 2、茶树细菌性根癌病；
瓜类细菌性果斑病的发生规律及防治 瓜类细菌性果斑病（Bacterial fruit blotch of melon，简称BFB）是一种国际性的检疫性病害，主要为害西瓜、甜瓜、南瓜、西葫芦等葫芦科作物，此外，该病原菌还可侵染番茄、胡椒和茄子等作物。近年来，随着瓜类作物种植面积的增加，瓜类细菌性果斑病发病日趋严重，在美国、澳大利亚、中国、哥斯达黎加、巴西、印度尼西亚、土耳其等国均大面积暴发，给这些地区的瓜类生产造成了毁灭性的影响。瓜类细菌性果斑病主要为害瓜类作物的幼苗和果实，高温多雨潮湿的年份发病较重，一般田块发病率在45%～75%，严重时高达100%，该病的发生严重危害了瓜类产业的健康发展。 细菌性果斑病于1965年首次在美国佛罗里达州的西瓜上发现。随后迅速扩展，2000年，细菌性果斑病在美国东南部西瓜主产区严重发生，引起西瓜果实腐烂，甚至绝产，给当地的经济造成严重损失。我国自1986年开始，陕西、河北、山西、海南、吉林、新疆、内蒙古、福建、台湾等地相继报道了该病的发生。2000年内蒙古巴彦淖尔盟厚皮甜瓜细菌性果斑病大规模发生，平均减产46%，商品瓜率仅有1/3；2002年冬季海南省西瓜育苗场中由BFB造成的毁苗率也高达30％～80％，给瓜农造成严重的经济损失。由于瓜类细菌性果斑病具有发病迅速、传播速度快、暴发性强等特点，使得该病害已成为影响我国瓜类生产的主要病害之一。因此，掌握瓜类细菌性果斑病的发生规律和防治技术对于控制该病的大规模发生，具有十分重要的意义。 1 发病症状 瓜类细菌性果斑病从苗期至成株期均可发病，病菌可为害叶片、茎及果实。 1.1 幼苗症状瓜类幼苗感病，子叶的叶尖和叶缘先发病，出现水浸状小斑点 （彩色图版1），并逐渐向子叶基部扩展形成条形或不规则形暗绿色水浸状病斑（彩色图版2）。
蛋白酶产生菌的筛选
蛋白酶产生菌的筛选 组别：第*组 班级：生工**班 组员：*** 指导老师：*** 一、实验目的 学习从自然界中分离蛋白酶产生菌
二、实验内容 蛋白酶产生菌的分离 三、实验原理 许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是最常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到奶粉培养平板并进行培养，根据奶粉平板的水解圈做初筛。将初筛的蛋白酶产生菌接入产酶培养基振荡培养，测定蛋白酶的活力，最终得到产蛋白酶的芽孢杆菌。也可直接将细菌接种到奶粉培养平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。 四、实验材料和用具 1.材料：土壤样品 2.试剂：牛肉膏蛋白胨培养及平板、奶粉培养基平板、 45mL无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液、 3.仪器及用具：紫外分光光度计、显微镜、恒温水浴锅、 摇床、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌 移液管、无菌试管、量筒、容量瓶、漏 斗、试剂瓶、漏斗、载玻片、滤纸、擦镜 纸。
五、操作步骤 （一）配制所需培养基 按照以下配方配制所需的培养基 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g，琼脂 1.5～2.0g，水 100ml，pH 7.2 配制200mL 奶粉培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g， 琼脂 2.0g，水 100ml，pH 7.0～7.2 脱脂奶粉 3g，配制200mL （二）分离 1.采集土壤样品，用无菌水植被1:10土壤悬液。 2.取1:10土壤悬液5 mL，注入已灭过菌的试管中，将此试 管放入75～80℃水浴中热处理10min以杀死非芽孢细 菌。 3.取加热处理过的土壤悬液100～200μL，涂布接种到牛肉 膏蛋白胨培养平板，后将平板倒置，于30～32℃下培养 24～48h. 4.对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透 明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否 为芽孢杆菌。 （三）筛选
西瓜常见病虫害及防治方法 常见病害 1、西瓜枯萎病 又名萎蔫病、蔓割病。其典型症状是萎蔫，初在病株茎蔓基部的叶片萎蔫，似缺水状，中午明显，早晚尚可恢复，病茎蔓基部呈黄褐色，基部缢缩，常有茶褐色胶质物溢出，病根变褐，高湿时病蔓上有粉红色霉层。西瓜枯萎病自幼苗至成熟期都可发生，以结果期发病最重。主要从根部开始发病，直至维管束组织，引起导管变褐，叶片萎蔫、发黄，根系变褐、腐烂，全株凋枯而死。常造成大面积整株死亡，西瓜严重减产。由于西瓜枯萎病病菌在土壤中可存活5-6年，连作会加重病害的发生。西瓜枯萎病的发生与气候和土壤关系密切，土质粘重，地势低洼，排水不良，耕作粗放，整地不平，对西瓜根系发育不利，发病都会加重。土壤温度在24-30℃，多雨潮湿时病势发生较快；过分干旱也易发病。 2、西瓜蔓枯病 在西瓜整个生育期地上各部分均可发生，引起叶蔓等枯死，高湿多雨、连作，偏施氮肥都有利于病害的发生，高温干旱时，病害发生渐趋缓和。蔓枯病主要发生在茎蔓上，也侵害叶片和果实。茎蔓上发病，节附近产生灰白色椭圆形至不规则病斑。病斑上密生小黑点，严重时病斑环绕茎及分杈处。叶片染病，病斑圆
形或不规则形，黑褐色，病斑上生小黑点，湿度大时病斑迅速扩及全叶，叶片变黑枯死。瓜染病，开始产生水渍状病斑，后病斑中央变褐呈星状开裂，内部呈木栓状干腐，最后腐烂。 蔓枯病与枯萎病在大田表现极为相似，易相混。其主要区别是：蔓枯病根无异样，剖视内部维管束不变色，而枯萎病烂根，剖视内部维管束变褐色。 3、西瓜炭疽病 苗期子叶边缘成圆形或半圆形黑褐色病斑，外围有黄褐色晕圈，近地面茎基部变黑褐色，缢缩，猝倒。病部生黑色的小粒点，湿度大时，病斑上生粉红色粘质物，成株叶片上形成不规则形或圆形黑褐色水渍状长圆形黑褐色、凹陷病斑，若病斑绕茎一周时，引起叶片和植株枯死，幼瓜受害，初形成暗绿色稍隆起的泡状斑，后扩大呈水渍状凹陷圆形褐色病斑，病斑上生粉红色粘质物并呈轮纹状，严重时病斑连片、龟裂、腐烂，其上生许多小黑点。 西瓜炭疽病在西瓜各生长期都可发生，以生长中后期危害较重，叶片、瓜蔓受害重，生长后期受害造成烂果。该病在适温(24℃-26℃)、高湿时发病很快，日均温度大于32℃时病害可得到抑制，但运输和贮藏中的果实炭疽病仍可严重发生，引起感病品种果实大批腐烂。西瓜盛花期至长果期是炭疽病的发病高峰期。 4、西瓜疫病 西瓜疫病在西瓜整个生长期地上各部分均可发生，尤以蔓茎基部和嫩茎节部发病较多，多雨、高温、连作有利于该病的发生，
常见的细菌性病害以及防治药剂 根据农业部农药检定所《农药登记管理信息汇编》和《农药电子手册》等资料查询，我们搜索到在菜豆、黄瓜、水稻等主要农作物上的细菌性病害主要有： 细菌性斑点病、细菌性穿孔病、细菌性角斑病、细菌性茎基腐病、细菌性条斑病、细菌性疫病和细菌性条纹病等7种。在注册登记防治细菌性病害的有效农药成分中，单剂主要有如下产品： 1、噻菌铜（龙克菌），国内仅有浙江龙湾化工独家登记并生产原药，农药制剂正式登记证号为PD，在防治黄瓜细菌性角斑病时，按照500—600倍稀释喷雾或者灌根，是防治蔬菜（白菜、黄瓜）、果树（柑橘、桃树、猕猴桃）、果类（西瓜、甜瓜）和水稻等农作物细菌性病害的新型理想药剂。 2、噻枯唑（叶枯唑），目前国内有45家企业51个登记证件。浙江龙湾化工日产95%叶枯唑原药3吨，农药制剂（叶青双）正式登记证号为PD85153—8，对水稻500倍稀释喷雾，对防治水稻细菌性条斑病和白叶枯病有效。 由于在水稻上登记时间超过20多年，水稻已经产生了很大的抗药性，叶枯唑防治效果在不断地下降。由于登记企业过多，市场竞争无序，价格非常混乱，其已处于没落状态。 3、氢氧化铜，国内有52家企业73个登记证件，但在水稻上未曾登记，在经济作物如蔬菜（黄瓜、辣椒和西瓜）、果树（柑橘、葡萄和荔枝）和烟草登记广泛，是常见的防治蔬菜细菌性病害的无机铜制剂。在花期和幼果期比较敏感，不可与酸性农药混用，宜单独喷洒。与春雷霉素的混剂对苹果、葡萄、大豆和藕等作物的嫩叶敏感，因此一定要注意浓度，宜在下午4点后喷药。由于登记企业比较多，价格悬殊大，真假难辩，市场也极其混乱。 4、乙蒜素，国内有39家企业54个登记证件，登记作物广泛，对细菌和真菌都有一定的防治效果，也是比较常见的防治细菌性病害的药剂。 5、春雷霉素，国内有28企业登记54个农药证件，登记作物广泛，在果树、蔬菜和水稻上均有应用，杀菌谱比较广泛，对细菌、真菌均具有一定的防
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西瓜细菌性果斑病研究进展 作者：赵廷昌， 孙福在， 王兵万， Zhao Tingchang， Sun Fuzai， Wang Binwan 作者单位：赵廷昌,孙福在,Zhao Tingchang,Sun Fuzai(中国农业科学院植物保护研究所 北京 100094)， 王兵万,Wang Binwan(湖南农业大学植保系) 刊名： 植保技术与推广 英文刊名：PLANT PROTECTION TECHNOLOGY AND EXTENSION 年，卷(期)：2001,21(3) 被引用次数：12次 引证文献(12条) 1.魏娜.钱国良.李晓霞.张志峰.刘凤权.胡白石瓜类细菌性果斑病菌tvrR基因的克隆及其对致病性的影响[期刊论文]-南京农业大学学报 2010(6) 2.蔡学清.鄢凤娇.林玉.胡方平西瓜细菌性果斑病拮抗内生细菌的分离和筛选[期刊论文]-福建农林大学学报（自然科学版） 2009(5) 3.宋蕤.刘箐.刘雅莉.文朝慧.王军平.张丽萍.侯建雄.刘志杰西瓜细菌性果斑病菌快速免疫PCR检测[期刊论文]-植物检疫 2009(2) 4.粟寒.吴翠萍.李彬.黄艳霞.高渊免疫检测试纸条法检测西瓜子中的瓜类果斑病菌[期刊论文]-植物检疫 2009(1) 5.周洪友.杨静.宋娟荧光假单胞工程菌株对甜瓜细菌性果斑病的生物防治[期刊论文]-中国植保导刊 2009(1) 6.徐福寿.王笑.谢关林.苏婷.余山红免疫捕捉PCR法检测西瓜种子带细菌性果斑病菌[期刊论文]-果树学报 2008(2) 7.黄月英西瓜细菌性果斑病的检测与防治[期刊论文]-福建农业科技 2008(2) 8.韦志扬西瓜嫁接苗细菌性果斑病的发生与防治[期刊论文]-广西热带农业 2007(6) 9.周桂珍.王兰芳.严成灼.张时兴西瓜细菌性果斑病调查初报[期刊论文]-中国植保导刊 2006(9) 10.胡俊.黄俊霞.刘双平.杨利国.翟艳霞.李勇.路妍不同哈密瓜品种对细菌性果斑病抗病性及发展动态的研究[期刊论文]-华北农学报 2006(6) 11.王钦英.李国英.任毓忠.姚慧贤.王付成种子处理对籽瓜细菌性果斑病防治效果的研究[期刊论文]-北方园艺2006(2) 12.赵廷昌.孙福在.王建荣.谢杨军药剂处理种子防治哈密瓜细菌性果斑病[期刊论文]-植物保护 2003(4) 本文链接：https://www.doczj.com/doc/5411006372.html,/Periodical_zbjsytg200103023.aspx
植物细菌性病害比较全面知识 细菌性病害主要类群有棒杆、假单胞杆、野杆、黄单胞杆、欧文杆五个菌属。革兰氏染色除棒杆菌呈阳性外其它四个菌属都是阴性。 细菌病害主要特点是——非专性寄生菌，与寄主细胞接触后通常是先将细胞或组织致死，然后再从坏死的细胞或组织中吸取养分，因此导致的症状是组织坏死、腐烂和枯萎，少数能引起肿瘤这是分泌激素所致。初期受害组织表面常为水渍或油渍状、半透明，潮湿条件下有的病部有黄褐色或乳白色胶粘、似水珠状的菌脓；腐烂型往往有臭味。这是细菌病害的重要标志。 细菌与真菌的区别主要在于真菌受病植物一般症状有霉状物、粉状物、锈状物、丝状物及黑色小粒点，而细菌则无。这是田间诊断的重要依据。由细菌引起的病害种类、受害植物种类及危害程度仅次于真菌性病害，而且近年来有上升趋势。 一、植物细菌病害的主要症状 症状是植物发病后外部显示的表现型。每一种病害都有它特有的症状表现，是我们描述、命名、诊断和识别病害的主要依据。（症状：植物发病后出现的反常现象，包括病症和病状。病状：是指发病植物本身所表现出来的反常现象。病症：是指病原物在植物体上表现出来的特征性结构。） 1.植物受细菌侵染后产生的病状有： 斑点型：植物由假单孢杆菌侵染引起的病害中，有相当数量呈斑点状。通常发生在叶片和嫩枝上，叶片上的病斑常以叶脉为界线形成的角形病斑，细菌为害植物的薄壁细胞，引起局部急性坏死。细菌病斑初为水溃状，在扩大到一定程度时，中部组织坏死呈褐色至黑色，周围常出现不同程度的半透明的退色圈，称为晕环。如水稻细菌性褐斑病、黄瓜细菌性角斑病、棉花细菌性角斑病等。 叶枯型：多数由黄单孢杆菌侵染引起，植物受侵染后最终导致叶片枯萎。如黄瓜细菌性叶枯病。如水稻白叶枯病、黄瓜细菌性叶枯病、魔芋细菌性叶枯病等。 青枯型：一般由假单孢杆菌侵染植物维管束，阻塞输导通路，致使植物茎、叶枯萎。如番茄青枯病、马铃薯青枯病、草莓青枯病等。 枯萎型：大多是由棒状杆菌属引起，在木本植物上则以青枯病假单胞杆菌为最常见，一般由假单孢杆菌侵染植物维管束，阻塞输导通路，引起植物茎、叶枯萎或整株枯萎，受害的维管束组织变褐色，在潮湿的条件下，受害茎的断面有细菌粘液溢出。如番茄青枯病、马铃薯枯病、草莓青枯病等。 溃疡型：一般由黄单孢杆菌侵染植物所致，后期病斑木栓化，边缘隆起，中心凹陷呈溃疡状。如柑桔溃疡病、菜用大豆细菌性斑疹病、番茄果实细菌性斑疹病等。 腐烂型：多数由欧文氏杆菌侵染植物后引起腐烂。植物多汁的组织受细胞侵染后通常表现腐烂症状，细菌产生原粘胶酶，分解细胞的中胶层，使组织解体，流出汁液并有臭味。如白菜细菌性软腐病、茄科及葫芦科作物的细菌性软腐病、以及水稻基腐病等。 畸型：由癌肿野单胞杆菌的细菌可以引起植物的根、根颈或侧根以及枝杆上的组织过度生长，形成畸形，呈瘤肿状或使须根丛生。假单胞杆菌也可能引起肿瘤。如菊花根癌病等。 2.植物受细菌侵染后产生的病症有： 蔬菜细菌性病害与其他病害的区别，一是蔬菜植株病变部位无明显附属物（如菌丝、霉、毛、粉等）；二是发病后期病变部位往往有菌脓出现，而真菌病害则有霉状物（菌丝、孢子等）。 1、斑点型和叶枯型细菌性病害的发病部位，先出现局部坏死的水渍状半透明病斑，在气候潮湿时，从叶片的气孔、水孔、皮孔及伤口上有大量的细菌溢出粘状物——细菌脓。
蛋白酶产生菌的筛选 组别：第*组 班级：生工**班 组员：*** 指导老师：*** 一、实验目的 学习从自然界中分离蛋白酶产生菌
二、实验内容 蛋白酶产生菌的分离 三、实验原理 许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是最常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到奶粉培养平板并进行培养，根据奶粉平板的水解圈做初筛。将初筛的蛋白酶产生菌接入产酶培养基振荡培养，测定蛋白酶的活力，最终得到产蛋白酶的芽孢杆菌。也可直接将细菌接种到奶粉培养平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。 四、实验材料和用具 1.材料：土壤样品 2.试剂：牛肉膏蛋白胨培养及平板、奶粉培养基平板、45mL 无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液、 3.仪器及用具：紫外分光光度计、显微镜、恒温水浴锅、摇 床、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液 管、无菌试管、量筒、容量瓶、漏斗、试剂 瓶、漏斗、载玻片、滤纸、擦镜纸。 五、操作步骤
（一）配制所需培养基 按照以下配方配制所需的培养基 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g， 琼脂 1.5～2.0g，水 100ml，pH 7.2 配制200mL 奶粉培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g， 琼脂 2.0g，水 100ml，pH 7.0～7.2 脱脂奶粉 3g，配制200mL （二）分离 1.采集土壤样品，用无菌水植被1:10土壤悬液。 2.取1:10土壤悬液5 mL，注入已灭过菌的试管中，将此试 管放入75～80℃水浴中热处理10min以杀死非芽孢细菌。 3.取加热处理过的土壤悬液100～200μL，涂布接种到牛肉 膏蛋白胨培养平板，后将平板倒置，于30～32℃下培养24～48h. 4.对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明 的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。 （三）筛选 1、从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种奶粉斜面培养基，再转接奶粉培养基平板上，30～32℃下培养24～48h。
西瓜枯萎病的综合防治技术 一、主要症状 枯萎病在西瓜苗期至结果期都能发生。但以结瓜初期发病为重。苗期发病，瓜苗顶端呈失水状，子叶和叶片萎垂，茎蔓基部萎缩变褐猝倒；成株发病，始病期一般在植株开花结瓜前后，由下部叶片开始萎蔫，逐渐向上发展，主蔓基部软化缢缩，初呈水渍状，后干枯纵裂病部常伴以树脂状胶汁溢出，干后呈红黑色，维管束呈褐色，湿度大时，病部常产生白色或粉红色霉层。急性发病初期白天萎蔫，早晚恢复，数天后全株枯死。开花坐果前后最易发病。 二、发病特点 病原是半知菌，病菌主要在未腐熟有机肥物中或在15～30厘米深的土壤中越冬或是种子带菌越冬。在适宜的环境下，病菌可通过雨水、浇水、农具操作以及带菌的堆肥等传播为害。主要通过根部伤口或从根毛顶端细胞间侵入，因此，地下害虫多或者线虫发生多的瓜田，一般枯萎病发生也重，但发病主要条件决定于当年侵染的菌源量。一般头茬种植西瓜发病较轻，平均发病率为1.04%，重茬田西瓜发病重，平均发病率为29.4%，最高发病率可达52%。另外，地势低洼、排水不畅、偏施氮肥，瓜类根系发育不良等均有利于该病的发生。 三、综合防治技术 坚持以农业防治为主，药剂防治为辅的原则。采取轮作换茬、合理施肥，嫁接防病，田间管理和药剂防治相结合的综防措施。 （一）农业防治 1、轮作换茬防病：提倡西瓜与其它作物（非瓜类）进行3至4年以上的轮作，恶化病菌生存环境，控制病菌基数。其中以水旱轮作对控制枯萎病菌更有效。 2、合理施肥：减少氮肥用量，增施磷钾肥，特别是钾肥，禁施硫铵及氯化钾等含氯离子的肥料。基肥以有机肥为主，禁用病残体沤制韵未腐熟的肥料。 3、嫁接防病：用葫芦作砧木，进行嫁接，能有效减轻枯萎病的发生。据试验，嫁接可减少43.2%的发病率，控病效果可达90%以上。 4、加强田间管理：采用深沟高畦栽培，浇水在晴天上午进行，忌大水漫灌，雨后及时排水，西瓜缓苗及座瓜后及时追施促壮肥、膨果肥。另外，田间发现病株要及时拔除，并置于田外处理。 （二）药剂防治 1、土壤消毒：在播种或栽植前，用80%多菌灵、绿亨一号、敌克松，按1∶100比例配置成药土，撤入苗床或定植穴中每穴2-3两。 2、大田防治：发病初期选用甲托、百克，农抗120和瓜枯宁对西瓜枯萎病防治效果均较好。方法1：首推选用用甲托1000倍液+主要成分为乙蒜素的“克菌”每只50斤水灌根（每穴1斤药液）和“恶。.甲”叶面喷雾同时进行，方法2：发病初期用喷淋15%恶霉灵水剂450倍液喷淋，，方法3：用40%瓜枯宁600倍液一次灌根（每穴1斤药液）。另外，根据以往经验，也可用绿亨一号2000倍进行灌根，还可用故克松或托布津原粉1份加面粉20份调成糊汰涂于基部。
农作物细菌性病害大全 细菌性病害名录大全 粮食作物细菌病害： 1、水稻：*水稻细菌性条斑病、*水稻白叶枯病、水稻基腐病、水稻细菌性褐条病、水稻细菌性褐斑病。 2、马铃薯：*马铃薯青枯病、马铃薯软腐病、马铃薯黑胫病、马铃薯环腐病。 3、*甘薯瘟病； 4、玉米茎腐病； 5、小麦黑颖病； 6、木薯细菌性枯萎病； 果树细菌病害： 1、*柑桔溃疡病（包括脐橙、橙、柚、文旦、柠檬、巨桔、枳壳、枳橙等）； 2、*沙田柚溃疡病； 3、梨根癌病、梨火疫病； 4、桃细菌性穿孔病（包括李、杏、油桃、樱桃等）； 5、苹果根癌病； 6、菠萝心腐病； 7、枇杷芽枯病、枇杷癌肿病； 8、核桃黑斑病； 9、猕猴桃溃疡病； 10、芒果细菌性黑斑病； 11、果树细菌性根癌病（包括桃、梨、苹果、板栗、梅、李、杏、葡萄等）； 瓜菜类细菌病害： 1、*西瓜细菌性青枯病、西瓜细菌性果腐病； 2、茄科蔬菜青枯病（番茄、茄子、辣椒）软腐病、疮痂病； 3、*黄瓜细菌性角斑病（黄瓜、甜瓜、丝瓜） 4、*十字花科蔬菜软腐病、细菌性黑腐病、细菌性黑斑病（大白菜、甘蓝、萝卜、花椰菜等） 5、*菜豆细菌性角斑病（菜豆、扁豆、豇豆、豌豆、绿豆等） *菜豆细菌性疫病（菜豆、扁豆、豇豆、、绿豆） 6、*姜瘟病（姜腐败病、姜腐烂病） 7、*瓜类青枯病 8、*辣椒细菌性斑点病（辣椒疮痂病）、辣椒细菌性叶斑病； 9、萝卜黑腐病； 10、葱类细菌性软腐病； 11、莴苣细菌性斑点病； 12、芋艿细菌性斑点病，芋艿腐败病（即芋软腐病、芋艿腐烂病）； 13、芹菜软腐病； 14、魔芋软腐病； 15、葱类细菌性软腐病； 经济作物类细菌病害： 1、*棉角斑病，棉红叶根腐病；
怎样防治西瓜枯萎病 怎样防治西瓜枯萎病？西瓜枯萎病是土传根病，感病时间长，从苗期到瓜膨大后期；植株染病部位多，从根部到种子均可系统侵害。因此，防治西瓜枯萎病要早治，多次消费品，从播种抗病品种开始，保护根部不轻罪或少受土中枯萎病菌侵染为主，采用系统配套综合防治措施。（1）选用抗病品种如京欣1号、丰收2号、丰收3号、85-26、齐源P2、郑抗2号等。（2）种了处理用50%复方多菌灵胶悬剂500倍液，或50%苯菌灵可湿性粉剂1000倍液，或高锰酸钾1000倍液，侵种1小时，用清水冲洗干净备用。（3）苗床土及营养钵土处理苗床土每平方米用50%复方多菌灵胶悬剂12克，或50%苯菌灵可湿性粉剂6克，加适量水（或细土）拌匀后，撒在土表，上下左右翻匀，床药土厚20厘注。若在连作或间隔1-2年的瓜地内育苗，用药量需加倍。营养纸钵育苗，每立方米土用50%复方多菌灵胶悬剂150克，或50%苯菌灵可湿性粉剂75克，与土充分拌匀后制钵育苗。（4）移栽前喷药移栽前用50%复方多菌灵胶悬剂500倍液，或50%苯菌灵可湿性粉剂1000倍液，喷灌苗子2-3次，培育壮苗，防治苗床期病害。（5）移栽前药剂处理瓜垄（畦）土壤根据不同地块每克土壤中含枯萎病菌孢子量度多少，分为轻（生地或间隔5年以上瓜地）和中、重（连作或间隔1-3年瓜地）两类病地，并采用相应防治对策。轻病地（每克土壤含孢子1-3x102个）可处植中抗品种，移栽期开始药剂灌根2-3次；中（每克土壤含孤儿院子5-6x102个）、重（每克土壤含孢子7-10x102个）病地，在必须种植高抗品种的基础上，移栽前3-7天用药剂处理田间土壤，栽前结合瓜畦（垄）施肥，每亩用50%复方多菌灵胶悬剂1-2公斤，或50%苯菌灵可湿性粉剂0.5-1公斤，或40%拌种双
番茄细菌性斑疹病 图片简介: 茄细菌性斑疹病又称细菌性微斑病。该病为细菌性病害，植株地上部分均可发病，尤以叶缘和未成熟果实病症最为明显。叶片发病出 现深褐色至黑色斑点，四周有黄色晕圈；叶柄和茎发病出现黑色斑 点；幼嫩绿果发病，先出现稍隆起的小斑点，果实近成熟时围绕斑 点的组织仍保持较长时间绿色。
番茄灰霉病 图片简介: 该病是由真菌引起的。主要发生在花期和结果期。叶片发病从叶尖开始，出现水浸状浅褐色病斑，呈V字形，潮湿时病部长出灰霉， 干燥时病斑呈灰白色。果实发病主要在青果期，先侵染残留的柱头
或花瓣，后向果面和果梗发展。花萼发病变为暗褐色，随后干枯。茎发病后初期产生水浸小点，后扩展成长条形病斑。真菌;茄子;气流传播;雨水传播;农事传播;伤口侵入 番茄顶裂果
图片简介: 番茄顶裂果主要是由于畸形花花柱开裂的结果。直接原因是番茄开花时，对花器供给的养分不足造成的。生产中在低温季节或在大棚 中定植过早尤其严重。生理性病害;花期养分不足;定植过早;番茄 番茄病毒病(苜蓿型)
图片简介: 由病毒引起的病害。高温、干旱有利于发病和传播。田间管理差，分苗、定苗、整枝等农事操作中病健株互相摩擦碰撞，都会导致发 病。病毒性病害;高温干旱;田间管理差;苜蓿型;
番茄病毒病(花叶型) 图片简介: 由病毒引起的病害。高温、干旱有利于发病和传播。田间管理差，分苗、定苗、整枝等农事操作中病健株互相摩擦碰撞，都会导致发 病。花叶型表现为叶色浓淡不均，黄绿相间，叶片皱缩，明脉，花 少果小而劣，严重减产。病毒性病害;高温干旱;田间管理差;花叶型;
蛋白酶产生菌的分离、活化选育、发酵及酶活力的测定 许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其它微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈做初筛。也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养，分离筛选其它蛋白酶产生菌。本实验主要包括：蛋白酶产生菌的分离纯化、产酶微生物菌种的选育、产酶微生物的发酵与酶活力的测定、蛋白酶产生菌的生长及生长曲线、培养基优化。 通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离蛋白酶产生菌的方法，菌种的纯化技术、高产菌的选育技术；了解蛋白酶产生菌的生长情况，学会绘制其生长曲线；学会培养基优化的方法；了解蛋白酶的性质及蛋白酶的测定原理；掌握蛋白酶的发酵及酶活力测定方法。 1 实验材料 1.1 实验样品 校园内土壤样品 1.2实验仪器与材料 牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液番红；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、血球计数板、试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、，玻棒、电子天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（ pH 5．5—9．0）、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、培养皿、胶头滴管、分光光度计（应符合GB9721的规定）等。 2实验方法与步骤 2.1 培养基的配制方法 1.称量 按培养基配方比例依次准确地称药品放入烧杯中。 2.溶化 在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。 3.调pH 4.分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。 5．包扎 塞好棉花的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆扎，用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
西瓜常见病害 （一）西瓜枯萎病又叫萎蔫病、蔓割病、死秧病，我省各地均有发生，因造成死秧失收，是西瓜的毁灭性病害。病株生长缓慢，根和茎维管束变成褐色。初发病株白天萎蔫夜间恢复，5-6天后全株枯死。根部腐朽成麻丝状。在开花到初瓜期发生最重。 该病由尖镰刀菌侵染致病，以菌丝体、厚垣孢子和菌核在土壤、病残体及未经腐熟的有机肥中越冬，并能在土壤中存活5-6年，多的达10年以上。种子上附着的分生孢子也可越冬，可进行远距离传播。地下害虫、农具、人为操作和灌溉水，也可以传病。天气高温、多雨、土壤湿度大、排水不良、偏施氮肥、施用带菌有机肥、连作发病重。 防治方法： 1.合理轮作：与旱田作物实行7-8年轮作。 2.选种抗病品种：根据当地情况，因地制宜地选种高产抗病优良品种. 3.种子消毒：用70%甲基硫菌灵(甲基托布津)可湿性粉剂100倍液，浸种消毒60分钟。 4.播种或移栽时施用药土：用50%多菌灵、70%甲基硫菌灵(甲基托布津)可湿性粉剂按药：土(肥)比为1：10制成药土(药肥)，播种或移栽时，每穴撒施药土(药肥)10克左右，预防土壤中病菌的侵染。 5.灌根防治：对田间发现的病株，抓住发病初期用30%甲霜·噁霉灵(瑞苗清)水剂300 0倍液；或70%甲基硫菌灵(甲基托布津)可湿性粉剂500-1000倍液灌根防治。每株灌药液0. 25升左右。一次灌根未治愈的，隔几天再灌1次。 6.拔除病株，集中烧毁，消灭菌源：对田间发现的死亡瓜秧，及时拔除，集中烧毁，不能随处乱扔。对病株拔除后的病穴，要撒石灰或施入灌根药液消毒。 7.田间卫生：西瓜收获后，将瓜秧集中烧毁，消灭菌源。 （二)西瓜疫病 西瓜疫病俗称“死秧”，我省各地均有发生。成株期发病，在茎节部出现暗绿色纺锤形水渍状斑点，病部明显缢缩，并逐渐变褐腐烂，造成茎蔓及叶片萎垂死亡。果实受害皱缩软腐，表面长出白霉。
黄瓜细菌性角斑病有哪些病症 细菌性角斑病原菌随病残体在土壤中或以带菌种子越冬，为翌年初次侵染菌源。种子上的病菌在种皮和种子内部可存活1～2年，播种后直接侵染子叶，病菌在细胞间繁殖，借雨水反溅、棚顶水珠下落、昆虫等传播蔓延，从寄主自然孔口和伤口侵入，经7～10天潜育后出现病斑，潮湿时产生菌脓，那角斑病的防治方法有哪些呢？防治本病应采取农业防治为主，药剂防治为辅的综合防治措施，在无病区或无病植株上留种，防止种子带菌，催芽前应进行种子消毒；提高果园管理水平和用波尔多液、多菌灵、嘧菌酯百菌清、氟硅唑咪鲜胺、甲基托布津等杀菌剂，10－15天喷洒一次，共三次，交替使用，进行防治，一起来了解一下黄瓜细菌性角斑病有哪些病症吧？ 幼苗和成株期均可受害，但以成株期叶片受害为主。主要危害叶片、叶柄、卷须和果实，有时也侵染茎。子叶发病，初呈水浸状近圆形凹陷斑，后微带黄褐色干枯；成株期叶片发病，初为鲜绿色水浸状斑，渐变淡褐色，病斑受叶脉限制呈多角形，灰褐或黄褐色，湿度大时叶背溢出乳白色浑浊水珠状菌脓，干后具白痕，后期干燥时病斑中央干枯脱落成孔，潮湿时产生乳白色菌脓，蒸发后形成一层白色粉末状物质，或留下一层白膜。茎、叶柄、卷须发病，侵染点水浸状，沿茎沟纵向扩展，呈短条状，湿度大时也见菌脓，严重的纵向开裂呈水浸状腐烂，变褐干枯，表层残留白痕。瓜条发病，出现水浸状小斑
点，扩展后不规则或连片，病部溢出大量污白色菌脓。 条件适宜病斑向表皮下扩展，并沿维管束逐浙变色，并深至种子，使种子带菌。幼瓜条感病后腐烂脱落，大瓜条感病后腐烂发臭。瓜条受害常伴有软腐病菌侵染，呈黄褐色水渍腐烂。浩瀚高科农业专家提醒：角斑病易与霜霉病混淆而用错药，使病害屡治不愈。一般霜霉病叶片病斑背面有黑色或紫色霉层，病斑后期不穿孔，瓜条不受害；角斑病叶背病斑溢出菌脓，穿孔，瓜条受害有臭味。土壤中的病菌通过灌水、风雨、气流、昆虫及农事作业在田间传播蔓延。病菌由气孔、伤口、水孔侵入寄主。发病的适宜温度18一26℃，相对湿度75%地势低洼，排水不良，重茬，氮肥过多，钾肥不足，种植过密的地块，病害均较重。 介绍的黄瓜细菌性角斑病有哪些病症的内容，当出现上述症状时要及时治理，本网生物灾害安全小知识库中还有很多关于角斑病的知识，感兴趣的可以继续关注哟！
陇东大学 学士学位毕业论文（设计）蛋白酶产生菌的筛选及产酶条件优化 生命科学与技术学院 08生物技术班 作者： 指导教师： 蛋白酶产生菌的筛选及产酶条件优化 何泰杜旭谢丽娟，刘丽萍
(陇东学院生命科学与技术学院，甘肃庆阳745000) 摘要：采用陇东学院污水处理厂附近土壤、农田土壤及养殖场附近土壤作为样品，利用牛奶水解圈筛选模型从中分离筛选得到产蛋白酶能力较高的菌株whr1，初步鉴定该菌株属于芽孢杆菌。并对其产酶条件进行优化，结果显示该菌最适培养时间为24h，最佳碳源为质量浓度1% 蔗糖，最佳氮源为质量浓度1.5%酵母膏，最适初始pH值为6.0，最适发酵温度为35℃。 关键词：菌种筛选，鉴定，蛋白酶，条件优化 Protease produced the screening of the bacteria and the optimization of the enzyme production conditions （College of life science and technology, Longdong University, Qingyang 74500, Gansu, China） Abstract：The sewage treatment plant soil near east institute, soil and soil samples near farms .Using milk hydrolysis circle screening model separating screening in high ability get protease whr1 strains. Preliminary appraisal of the fungus belong to bacillus. After the optimization of the condition, the capability of whr1 was improved, the optimal condition is: The time is 24h; carbon source is sucrose 1%; nitrogen source is Y east extract 1.5 %, the pH is 6.0; fermentation temperature is 30℃. Keyword: Screening，Identified，Protease, Conditions optimization 0引言 蛋白酶是水解蛋白质肽键的一类酶的总称，是一类广泛应用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面的重要工业用酶[1]，也是目前世界上产销量最大的商业酶，其市场占有率约占整个商品酶销售量的60％，微生物蛋白酶从微生物中提取，不受资源、环境和空间的限制，具有动物蛋白酶和植物蛋白酶所不可比拟的优越性[2,3]。目前，蛋白酶的研究仍注重于新品种的发掘，并通过分离筛选、发酵条件优化和诱变育种或构建基因工程菌等综合手段获得高产蛋白酶的优良菌株[4,10]。我国的蛋白酶研究还存在如微生物资源开发不足，蛋白酶种类较少，酶制剂品种单一等问题。 本论文从以下几方面对蛋白酶产生菌株进行较为系统的研究：从土壤中筛选出产蛋白酶能力较高菌株。对筛选出的菌株进行形态学的鉴定，将菌株初步确定到属。研究产蛋白酶菌株发酵产酶条件，对培养基成分和发酵条件进行优化，确定最佳培养基配方和发酵条件，进一步提高菌株的产酶活力。
挪威86.2%铜大师 防治细菌有特效 敦煌种业先锋良种有限公司 细菌性病害名录大全 粮食作物细菌病害： 1、水稻：*水稻细菌性条斑病、*水稻白叶枯病、水稻基腐病、水稻细菌性褐条病、水稻细菌性褐斑病。 2、马铃薯：*马铃薯青枯病、马铃薯软腐病、马铃薯黑胫病、马铃薯环腐病。 3、*甘薯瘟病； 4、玉米茎腐病； 5、小麦黑颖病； 6、木薯细菌性枯萎病； 果树细菌病害： 1、*柑桔溃疡病（包括脐橙、橙、柚、文旦、柠檬、巨桔、枳壳、枳橙等）； 2、*沙田柚溃疡病； 3、梨根癌病、梨火疫病； 4、桃细菌性穿孔病（包括李、杏、油桃、樱桃等）； 5、苹果根癌病； 6、菠萝心腐病； 7、枇杷芽枯病、枇杷癌肿病； 8、核桃黑斑病； 9、猕猴桃溃疡病； 10、芒果细菌性黑斑病； 11、果树细菌性根癌病（包括桃、梨、苹果、板栗、梅、李、杏、葡萄等）； 瓜菜类细菌病害： 1、*西瓜细菌性青枯病、西瓜细菌性果腐病； 2、茄科蔬菜青枯病（番茄、茄子、辣椒）软腐病、疮痂病； 3、*黄瓜细菌性角斑病（黄瓜、甜瓜、丝瓜） 4、*十字花科蔬菜软腐病、细菌性黑腐病、细菌性黑斑病（大白菜、甘蓝、萝卜、花椰菜等） 5、*菜豆细菌性角斑病（菜豆、扁豆、豇豆、豌豆、绿豆等） *菜豆细菌性疫病（菜豆、扁豆、豇豆、、绿豆） 6、*姜瘟病（姜腐败病、姜腐烂病） 7、*瓜类青枯病 8、*辣椒细菌性斑点病（辣椒疮痂病）、辣椒细菌性叶斑病； 9、萝卜黑腐病； 10、葱类细菌性软腐病； 11、莴苣细菌性斑点病； 12、芋艿细菌性斑点病，芋艿腐败病（即芋软腐病、芋艿腐烂病）； 13、芹菜软腐病； 14、魔芋软腐病； 15、葱类细菌性软腐病；
哈密瓜细菌性果斑病的发生与防治 ? 植物保护? 阿勒泰在近几年发展起来无公害哈密瓜生产,为农 牧民开辟了增收新门路.但随之而来,甜瓜角斑病开始发 生,且蔓延很快,特别是下潮地块危害较重,严重地影响了 瓜叶生长和瓜体膨大. 一 ,症状表现 甜瓜角斑病,病原为丁香假单胞细菌变种.整个生育 期均可发生.主要危害叶片,也危害茎蔓和果实.发病初期 产生水渍状黄褐色小点,呈不规则褐色斑.病斑后期破裂 穿孔,严重时造成果实腐烂. 二,发病特点 病菌随病株残体在土壤和种子上越冬.田问病原菌通 过灌溉水,雨滴飞溅,气流和昆虫传播,从伤VI,自然孔VI 侵入,造成多次重复侵染.特别是多雨时,瓜田湿度大,病 害易流行.如果阴雨转晴,气温上升快,有利于病情好转: 三,防治措施 1,农业方法 (1)选用适合当地的抗病耐病品种. (2)收获岳,及时清除田问病残体,以减少翌年初次 侵染源: (3)轮作,要求前茬作物不能是葫芦科作物: (4)加强田问管理,合理密植,增强瓜类专用肥和叶面 肥,以减少肥害和伤VI的侵入,提高植株正常生长的抗病性: 2,药荆防治
(1)种子消毒处理:选用种子量0.2%的70%敌克松可 湿性粉剂拌种 (2)病株用72%农用链霉素4000倍液,或64q'c杀毒矾 可湿性粉剂800倍液喷施. (3)对于甜瓜角斑病防治,要"预防为主,综合防 治".选用农药防治时,一定要交替使用,特别要掌握好农药的正确混用方法. (836500) 1998年以来,阿勒泰地区哈密瓜每年 发生一种细菌性病害,发病率100%,平均 减产46%,商品瓜率仅有1/3.2001年中国农 科院植保所赵廷昌研究员,鉴定为细菌性 果斑病,病原为燕麦食酸菌西瓜亚种. 一 ,病害特点 1,典型症状.该病可侵染子叶,真叶和 果实,引起叶枯和瓜腐,茎,叶柄,根不受侵 染.叶片上的症状与黄瓜细菌性角斑病在 黄瓜叶片上的症状基本相似,但叶脉也可 侵染,并沿叶脉蔓延.子叶发病时病斑暗褐 色,沿主脉逐渐发展为黑褐色坏死斑.真叶 上病斑呈圆形或多角形,暗褐色,周围有黄 晕圈,通常沿叶脉发展.田间湿度大时病斑 背面可溢出白色菌脓,叶基沿叶脉可见水 浸状斑点.在果实朝上的表皮,首先出现水 渍状小斑点,逐渐变褐,稍凹陷.发病初期 病变只局限在果皮,果肉组织仍然正常,但已严重影响瓜的商品价值.罹病中期以后,病菌可单独或随同腐生菌蔓延到果肉,使果肉成为水渍状.病斑老化后表皮龟裂,常常
真菌性病害和细菌性病害的区别 在农作物侵染性病害中，主要有真菌性病害和细菌性病害两种，其中真菌性病害约占病害的80％。由于真菌性病害和细菌性病害的病源不同，其防治方法和药剂使用也截然不同。所以，正确诊断区别两种病害，是防治这两种病害的关键。其诊断依据主要是两种病害的病症特点： 一、真菌性病害 1．根肿菌属和粉痂菌属。多引发细胞膨大分裂，使受害部位呈根肿或瘿瘤。 2．霜霉属和盘梗霉属真菌。多引发霜霉病，腐生和弱寄生菌，使作物的花、果实、块根、块茎等储藏器官的组织坏死。 3．子囊菌亚门真菌中的白粉菌。在寄主的叶片下面呈白色或灰色的霉层，布满整个叶片，后期散生黑色小点。 4．担子菌亚门中的黑粉菌和锈菌。可诱发黑粉病和锈病。 5．半知菌亚门的真菌。引发寄主发生性的组织坏死，其中无孢子目病原真菌，主要侵害根部和茎基部，造成根腐和茎基腐。
6．芽孢纲病原真菌。以侵害作物的疏导组织为主，造成全株系统发病，如枯萎病，黄萎病等。 7．腔孢菌纲的黑盘孢菌。其表现症状为常见的炭疽病，病斑为同心轮纹排列的小黑点，有的还分泌粉红色或白色的黏液。 8．球壳菌目的真菌。引起的病状类型较多：斑点型的，主要危害叶片；溃疡型的，主要危害茎、枝条；腐烂型的，被害部位形成干腐或湿腐。 由于真菌性病害的类型、种类繁多，引起的病害症状也千变万化。但是，凡属真菌性病害，无论发生在什么部位，症状表现如何，在潮湿的条件下都有菌丝、孢子产生。这是判断真菌性病害的主要依据。 二、细菌性病害 细菌性病害主要表现为：坏死与腐烂，萎蔫与畸形。坏死、腐烂与畸形，都是细菌破了薄细胞壁细胞组织所导致的后果。在其网状叶脉的叶片上，病斑呈多角斑，病斑周围有黄色的晕环。在肥厚组织或果实上的病斑，多为圆形。在柔嫩肉、多汁的组织上，组织死亡易生腐烂。有的部位被害后发生促进性病变，形成肿瘤，这种现象多发生在根或茎上。萎蔫是细胞侵染维管束的结果，可局部或全部发生。维管束细胞被破坏后，水分、营养物质不能正常输送，会造成植株萎蔫死亡。细胞性病害