分类号：密级：公开
学号：2012409004 单位代码：10759
石河子大学
硕士学位论文
血清CAMKIV水平与新疆哈萨克族、维吾尔族、汉族原发性高血压相关性研究
学位申请人赵若飞
指导教师王忠
申请学位类别临床医学硕士
专业名称临床医学
研究领域内科学
所在学院医学院
中国·新疆·石河子
2015年6月
Serum Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases IV levels and correlation among patients with Essential Hypertension of Kazakhs、Uygurs and Han in Xinjiang
A Dissertation Submitted to
Shihezi University
In Partial Fulfillment of the Requirements
for the Degree of
Master of Medicine
By
Zhao Ruo-fei
(Internal Medicine)
Dissertation Supervisor:Prof.Wang Zhong
June,2015
石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明
学位论文独创性声明
本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。
研究生签名：时间：年月日
使用授权声明
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研究生签名：时间：年月日
导师签名：时间：年月日
摘要
目的：检测新疆哈萨克族、维吾尔族、汉族原发性高血压（EH）患者血清钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（CAMKIV）水平，并分析其与血压、肥胖、血脂指标等的相关性。方法：选自2012年11月～2013年7月在玛纳斯县旱卡子乡、伊犁哈萨克自治州伊宁市进行流行病学调查的哈萨克族170例、维吾尔族164例，以及同期在石河子大学医学院第一附属医院体检中心参加健康体检的汉族174例作为研究对象，根据血压水平分为哈萨克族、维吾尔族、汉族EH组，哈萨克族、维吾尔族、汉族对照组，收集入选者的一般资料，测量血压、身高、体重、腰围（WC）、臀围，并计算体重指数（BMI）、腰臀比（WHR），采取空腹肘静脉血5ml，测定血清CaMKIV、空腹血糖(FPG)、血尿酸、尿素、血脂指标等并进行比较。用酶联免疫吸附试验法（ELISA）测定血清CaMKIV水平。采用SPSS 17.0统计软件，用t检验、方差分析、Pearson相关分析、多元逐步回归分析等统计学方法进行数据分析。
结果：（1）哈萨克族EH组SBP、DBP、WHR、LDL-C、BUA、Cys-C均显著高于对照组（P<0.05）；维吾尔族EH组SBP、DBP、WC、WHR、TG、FPG、Cys-C均显著高于对照组（P<0.05），HDL-C显著低于对照组（P<0.05）；汉族EH组SBP、DBP、WC、WHR、BMI、LDL-C、FPG、Cys-C均显著高于对照组（P<0.05）；其余指标三个民族EH组与其正常对照组相比，水平相当，差异无统计学意义（P>0.05）。
（2）在哈萨克族、维吾尔族、汉族EH组中：哈萨克族、汉族EH组比较，WC、WHR、BMI、TC、LDL-C、HDL-C均高于汉族EH组，TG低于汉族EH组，差异有统计学意义（P<0.05）；维吾尔族、汉族EH组比较，HDL-C低于汉族EH组，差异具有显著性（P<0.05）；哈萨克族、维吾尔族EH组比较，WC、WHR、BMI、TC、LDL-C、HDL-C 均高于维吾尔族EH组，TG低于维吾尔族EH组，差异具有显著性（P<0.05）。
（3）在哈萨克族、维吾尔族、汉族对照组中：哈萨克族、汉族对照组比较，DBP、WC、WHR、BMI、TC、HDL-C、FPG、Cys-C均高于汉族对照组，TG、BUA均低于汉族对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；维吾尔族、汉族对照组比较：维吾尔族TG显著低于汉族对照组（P<0.05）；哈萨克族、维吾尔族对照组比较，DBP、WC、WHR、BMI、TC、HDL-C、FPG、Cys-C均高于维吾尔族对照组，TG低于维吾尔族对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。
（4）哈萨克族、维吾尔族、汉族EH组血清CaMKIV水平均明显低于其对照组（P<0.05）；三个民族EH组组间比较：哈萨克族EH组CaMKIV水平最低，与维吾尔族、汉族EH 组比较差异均具有统计学意义（P<0.05），维吾尔族EH组CaMKIV水平最高，与汉族EH组比较差异有统计学意义（P<0.05）；三个民族对照组组间比较：哈萨克族对照组CaMKIV水平显著低于维吾尔族、汉族对照组（P<0.05），汉族对照组CaMKIV水平与维吾尔族比较差异有统计学意义（P<0.05）。
（5）在哈萨克族EH组中，血清CaMKIV水平分别与SBP、DBP、BMI、WHR、TG、
Cys-C呈负相关（P<0.05）；哈萨克族健康对照组中，血清CaMKIV水平分别与BMI、WC、TC呈负相关（P<0.05）。
（6）在维吾尔族EH组中，血清CaMKIV水平分别与SBP、DBP、BMI、WC、Cys-C 呈负相关，与HDL-C呈正相关（P<0.05）；维吾尔族健康对照组中，血清CaMKIV水平分别与BMI、Cys-C呈负相关（P<0.05）。
（7）在汉族EH组中，血清CaMKIV水平分别与SBP、DBP、BMI、Cys-C呈负相关（P<0.05）；汉族健康对照组中，血清CaMKIV水平与BMI呈负相关（P<0.05）。（8）以CaMKIV为因变量，对各因素进行多元逐步回归分析发现：在哈萨克族EH组中，SBP、DBP、BMI是影响血清CaMKIV水平的独立危险因素，哈萨克族健康对照组中，BMI是影响血清CaMKIV水平的独立危险因素；在维吾尔族EH患者中，SBP、DBP 是影响血清CaMKIV水平的独立危险因素，HDL-C是影响血清CaMKIV水平的独立保护因素，在维吾尔族健康对照组中，BMI是影响血清CaMKIV水平的独立危险因素；在汉族EH组中，SBP、DBP、Cys-C是影响CaMKIV水平的独立危险因素，在汉族健康对照组中，BMI是影响CaMKIV水平的独立危险因素。
结论：1.三个民族高血压患者血清CaMKIV水平降低，推测CaMKIV与原发性高血压的发生、发展相关。
2.三个民族原发性高血压患者血清CaMKIV水平与血压、肥胖、血脂、胱抑素C等存在相关性，提示血清CaMKIV水平可能受遗传、生活方式及膳食习惯影响。
3.哈萨克族高血压患者血清CaMKIV显著低于汉族、维吾尔族，并且肥胖及糖脂代谢紊乱发生较多，这也可能是哈萨克族高血压发病率高的原因。
关键词：原发性高血压，血清钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV，哈萨克族，维吾尔族，汉族
论文类型：B（应用研究）
Abstract
Object：To explore the changes of serum Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases IV (CaMKIV) levels
in the patients with essential hypertension (EH) of Xinjiang Kazakhs,Uygurs,Han,and analyse the
correlations beween the serum CaMKIV levels and blood pressure,obesity,blood lipids,et al.
Methods:Totally 170 kazaks and 164 Uygurs cases that came from the epidemiological investigation from November2012 to July 2013in Hankazi township and Yining of Yili Autonomous Prefecture of Xinjiang and 173 Han cases that came from physical examimation center of our hospital were selected for the subject.According to their blood pressure, they were divided into EH group of Kazakh and control group of Kazakh, EH group of Uygur and control group of Uygur, EH group and control group of Han,By physical examination and questionnaire,we collected basic datas,blood presseure,body height, weight, waist circumference (WC),hip circumference were measured,and calculate waist-hip ratio (WHR),body mass index (BMI).Total 5ml fasting elbow venous blood was draw to detect the fasting plasma glucose (FPG), Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases IV (CaMKIV), triglyceride (TG), total cholesterol (TC),blood uric acid (BUA).Serum CaMKIV was detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).The datas were analyzed with t-test, One-way ANOV A, Pearson correlation and multiple stepwise regression analysis. Results:(1) The SBP, DBP, WHR, LDL-C, BUA, Cys-C in the EH group of Kazakh was significantly higher than that in control group(P<0.05); The SBP, DBP, WC, WHR TG, FPG,Cys-C in the EH group of Uygur was significantly higher than that in control group(P<0.05); The SBP, DBP, WC, WHR, LDL-C BMI, FPG,Cys-C in the EH group of Han was significantly higher than that in control group(P<0.05);The other datas were no significant difference (P>0.05).
(2)The WC, WHR, BMI, TC, LDL-C, HDL-C in the EH group of Kazakh was significantly higher than that in the EH group of Han,and TG was significantly lower than that in the EH group of Han(P<0.05);The HDL-C in the EH group of Uygur was significantly lower than that in the EH group of Han(P<0.05);The WC, WHR, BMI, TC, LDL-C, HDL-C in the EH group of Kazakh was significantly higher than that in the EH group of Uygur, and TG was significantly lower than that in the EH group of Uygur(P<0.05).
(3) The DBP, WC, WHR, BMI, TC, HDL-C, FPG, Cys-C in the control group was significantly higher than that in the control group of Han,and The TG, BUA was significantly lower than that in the control group of Han(P<0.05); The TG was in the control group of Uygur was significantly lower than that in the control group of Han (P<0.05); The DBP, WC, WHR, BMI, TC, HDL-C, FPG, Cys-C in the control group of Kazakh was significantly higher than that in the control group of Uygur, and TG was significantly lower than that in the control group of Uygur(P<0.05).
(4) The serum CaMKIV in the EH group of Kazakh, Uygur,Han was significantly lower than that in the control groups (P<0.05);Among the three EH groups, the serum CaMKIV of Kazakh was the lowest (P<0.05);the serum CaMKIV in the EH group of Han was significantly lower than that in the EH group of Uygur(P<0.05). The serum CaMKIV in the control group of Kazakh was significantly lower than that in the control groups Uygur and Han (P<0.05),and the serum CaMKIV in the control group of Uygur was significiantly higher than that in the group of Han(P<0.05).
(5) In the EH group of Kazakh,the serum CaMKIV level was negatively correlated with SBP, DBP, BMI, WHR, TG, Cys-C (P<0.05); In the control group of Kazakh,the serum CaMKIV level was negatively correlated with BMI,WC,TC (P<0.05).
(6) In the EH group of Uygur,the serum CaMKIV level was negatively correlated with SBP, DBP, BMI, WC, Cys-C (P<0.05); In the control group of Uygur, the serum CaMKIV level was negatively correlated with BMI, Cys-C (P<0.05).
(7) In the EH group of Han,the serum CaMKIV level was negatively correlated with SBP, DBP, BMI, Cys-C (P<0.05); In the control group of Uygur, the serum CaMKIV level was negatively correlated with
BMI (P<0.05).
(8) Multiple regression analysis showed that SBP, DBP and BMI were independent risk factors to affect the CaMKIV in the EH group of Kazakh; BMI was independent risk factors to affect the CaMKIV in the control group of Kazakh;In the EH group of Uygur, SBP and DBP were independent risk factors to affect the CaMKIV,HDL-C was independent protect factor to affect the CaMKIV,and BMI was independent risk factors to affect the CaMKIV in the control group of Uygur; In the EH group of Han, SBP, DBP and Cys-C were independent risk factors to affect the CaMKIV,and BMI was independent risk factor to affect the CaMKIV in the control group of Han.
Conclusion:1.The serum CaMKIV levels are decreased in the patients with EH of Kazakh, Uygur and Han,and prompting serum CaMKIV levels associated with the occurrence and development of essential hypertension.
2. The serum CaMKIV levels in the patients with EH of Kazakh, Uygur and Han are correlated with blood pressure,obesity,Cys-C,and blood lipids,and infer the level of serum CaMKIV may influenced by genetics, lifestyle and dietary habits.
3.The serum CaMKIV levels both in EH and control group of Kazakh are significantly lower than Uygur and Han,and obesity, metabolic disorders are much more than Uygurs and Han ,that maybe the reason that the morbidity of Kazakh EH is higher than that of Han and Uygur.
4.The obesity, FPG, blood lipids in the patients with EH of Kazakh are higher than than of Han and Uygur Key word: Essential Hypertension，Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases IV，Kazakh，Uygur，Han
T ype Of Dissertation：B（Applied research）
目录
摘要................................................................................................................................. I Abstract...........................................................................................................................III 缩略语中英文对照表...................................................................................................... VI 前言.. (1)
材料与方法 (4)
1材料 (4)
1.1研究对象及分组 (4)
1.2纳入及排除标准 (4)
2主要实验仪器及试剂 (5)
2.1主要实验仪器 (5)
2.2主要试剂 (5)
3方法 (6)
3.1临床资料的收集 (6)
3.2质量控制 (7)
3.3血清CAMKIV水平检测 (7)
3.4统计学分析 (8)
结果 (9)
1. 三民族一般资料及实验室资料对比分析 (9)
2. 哈萨克族、维吾尔族、汉族血清CaMKIV水平对比分析 (10)
3. 血清CaMKIV与新疆哈萨克族、维吾尔族、汉族相关性分析 (11)
3.1血清CaMKIV与哈萨克族各指标相关性分析 (11)
3.2血清CaMKIV与维吾尔族各指标相关性分析 (12)
3.3血清CaMKIV与汉族各指标相关性分析 (12)
4. 血清CaMKIV与各指标的多元逐步回归分析 (13)
讨论 (15)
结论 (20)
参考文献 (21)
文献综述 (25)
附录：高血压调查表 (33)
致谢 (35)
作者简介 (36)
导师评阅表 (37)
缩略语中英文对照表
英文缩写英文全称中文对照
EH NO essential hypertension
nitric oxide
原发性高血压
一氧化氮
ET-1 Endothelin-1 内皮素-1 EDCF endothelium-derived constricting factors 内皮依赖性血管收缩因子NOS nitric oxide synthase 一氧化氮合成酶eNOS endothelial nitric oxide synthase 内皮型一氧化氮和酶iNOS inducible nitric oxide synthase 诱导型一氧化氮和酶nNOS neuronal nitric oxide synthase 神经源型一氧化氮合酶CaM calmodulin 钙调蛋白
CaMK Ca2+/calmodulin-dependent protein
kinases
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶
CaMKK Ca2+/Calmodulin-dependent protein
kinase kinase
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶
激酶
CaMKII Ca2+/calmodulin-dependent protein
kinases II
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶
II
CaMKIV Ca2+/calmodulin-dependent protein
kinases IV
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶
IV
PP2A proteinphosphatase 2A 蛋白磷酸酶2A SBP systolic blood pressure 收缩压
DBP diastolic blood pressure 舒张压
WC waist circumference 腰围
WHR waist-hip ratio 腰臀比
BMI body mass index 体重指数
TC total cholesterol 总胆固醇
TG Triglyceride 甘油三酯
HDL-C high density lipoprotein-cholesterol 高密度脂蛋白胆固醇LDL-C low density lipoprotein-cholesterol 低密度脂蛋白胆固醇FPG fasting plasma glucose 空腹血糖BUN blood urea nitrogen 血（清）尿素氮Cys-C cystatin C 胱抑素C BUA blood Uric acid 血尿酸
HRP horse Radish Peroxidase 辣根过氧化酶TMB tetramethylbenzidine 四甲基联苯胺ELISA enzyme linked immunobsorbent assay 酶联免疫吸附试验SPSS statistical package for social science 社会科学统计软件包
前言
（Introduction）
原发性高血压（essential hypertension，EH）作为常见的心脑血管疾病之一，近年来其患病率在全球范围内呈上升趋势[1-2]。3次大规模高血压病普查结果显示，我国的高血压患病率1959年为5.11%，1979年增加两个百分点，为7.73%，1991年上升为11.88%，递增升高[3]。根据调查结果估计，到2006年中国的高血压患者约为2亿[4]。高血压是一种慢性、进行性心血管综合征，是多种心脑血管疾病、肾脏病的重要病因和危险因素，既往研究表明血压升高能明显增加心脑血管意外、肾功能衰竭的危险性。我国疾病预防控制中心2009年初公布的统计数据表明，我国心脑血管病死亡率居死亡原因之首，约占各类疾病死亡构成的40%。可见，高血压已经严重威胁人类的寿命，如何有效控制高血压是社会面临的重大公共卫生问题。
新疆是多民族聚集地区，有其特有的饮食及生活习惯，又是高血压高发地区。2010年调查显示新疆成年人高血压患病率标准化后为36.21%，其中，哈萨克族高血压患病率为48.69%，维吾尔族为28.50%，汉族高血压患病率为33.42%[5]。一项针对新疆博尔塔拉蒙古自治州高血压患病率调查显示，哈萨克族、维吾尔族及汉族高血压患病率分别为40.5%、35.6%、33.2%[6]，以上均显著高于我国平均水平[7]。大量的研究表明，高血压发病与遗传有关，且存在种族差异，与社会环境、生活习惯密切相关，各民族原发性高血压发病率不同，多项研究表明（1992）不同民族存在不同的遗传易感因素特点。因此，通过研究新疆多民族原发性高血压与基因变异的关系，实现高血压防治的个体化治疗，成为目前高血压防治研究工作的热点。
然而EH发病机制复杂，研究多认为是遗传易感性与生存环境因素长期相互作用的结果[8]。目前已经被认可的机制涉及神经兴奋性改变、水钠储留等，然而这些机制并不能解释由于动脉弹性改变引起的单纯收缩期高血压和脉压差增大，关于动脉弹性的研究近年来成为人们研究的热点。目前已经明确的影响血管内皮功能的活性物质有内皮素-1（endothelin-1，ET-1）、一氧化氮（nitric oxide，NO）、内皮依赖性血管收缩因子（endothelium-derived constricting factors，EDCF）等。心血管相关的危险因素如：吸烟、血脂代谢紊乱、血糖升高、高同型半胱氨酸血症等，可以使血中氧自由基生成增多，增强NO灭活，从而影响动脉壁结构和功能。既往研究证实，NO具有舒张血管、调节血压、抑制血管平滑肌细胞增殖、抑制血小板聚集和白细胞粘附，在心血管疾病的病理生理进程中发挥重要的保护作用。NO在体内的生成受一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）的调节，目前在哺乳动物体内已经发现3种不同细胞来源及表达活性的NOS同工酶，分别为内皮型NOS(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)、诱导型NOS (inducible nitric oxide synthase，iNOS)和神经元型NOS(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)，由不同染色体上的基因编码（Moncada等，1991）。研究表明：三种
同工酶均参与血管内皮动脉粥样硬化过程但又各自扮演不同的重要角色[9-11]。其中发现nNOS主要存在神经组织、骨骼肌；iNOS主要表达在巨噬细胞；eNOS主要存在于血管内皮细胞、心肌细胞、血小板以及肥大细胞等实质细胞中，而在血管功能调节中起决定作用的是eNOS。
钙调蛋白（calmodulin，CaM）是钙结合蛋白的一种，在细胞内信号转导中发挥重要作用，Ca2+与CaM的复合物（Ca2+?CaM）有多种生理功能。在平滑肌Ca2+?CaM可以激活NOS，由后者催化生成的NO扩散至平滑肌，可引起血管舒张。Ca2+?CaM还可以通过激活依赖于CaM的蛋白激酶，促使底物蛋白磷酸化来发挥调节作用。NOS是含有CaM的多亚基酶，eNOS在细胞内呈构成型表达，调控其活性的信号通路复杂，其中位于不同位点的氨基酸残基的磷酸化在其活性调控中发挥关键作用。目前关于调控eNOS 活性的研究多集中于翻译后修饰调控[12]，而蛋白激酶和磷蛋白磷酸酶介导的磷酸化和去磷酸化网络是调节eNOS活性的主要的翻译后修饰[13]。既往研究已经表明，eNOS的磷酸化位点多发生于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸位点，而在众多的磷酸化位点中，eNOS最经典的功能性的磷酸化序列是位于还原酶区的丝氨酸位点(Ser1177)和位于CaM结合区的苏氨酸位点(Thr495)[12]，也就是经典的AKt/eNOS信号转导通路。
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶（Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases，CaMK）是一类多功能的蛋白激酶，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，被Ca2+·CaM所调节，其作用底物非常广泛，CaMK通过对相关酶或蛋白质的位点进行磷酸化修饰，发挥相应的调节作用。当血管内皮受到刺激后，CaM从eNOS结合区的解离受到抑制，导致eNOS 内部的电子转移率上调[14]，eNOS的Ser1177位点及Thr495位点磷酸化激活，eNOS活性上调，从而调节NO的生成增多。CaMK主要包括I、II、III和IV四种类型（Jett等.1987），在信号转导中发挥重要作用。心脏中CaMK主要包括I、II和IV，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II（Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases II，CaMKII）含量最多，目前研究认为，CaMKII信号系统在心律紊乱[15]、缺血性心脏病[16]、心肌肥厚[17]、扩张型心肌病和慢性心功能不全[18、19]的病理进程中起着重要作用，采用药理学或转基因技术抑制CaMKII活性能够保护受损心肌[20]；钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I （Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases I，CaMKI）的作用机制尚不明确，在器质性心脏病中其活性和表达未见改变；钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV （Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases IV，CaMKIV）含量较少，研究相对较少，迄今为止，关于CaMKIV的研究多局限在神经系统。
研究表明，作为Ca2+信号通路中关键激酶的CaMKIV，具有多功能性。CaMKIV包括α、β两种亚型，后者包括一个N-末端扩展，其结构与CaMKII基本相同[21]。在胞质中CaMKIV是一个由钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶（Ca2+/Calmodulin-dependent protein kinase kinase，CaMKK）和蛋白磷酸酶2A（proteinphosphatase 2A，PP2A）组成的复合体，是无活性的。当胞内Ca2+浓度增加时，部分Ca2+结合CaM，然后Ca2+/CaM 复合物结合CaMKIV，改变CaMKIV构象，暴露出可被磷酸化的活性环，从而使CaMKIV
具备激酶活性。例如：被一系列级联反应激活后，CaMKIV转移到细胞核，调节T细胞发育，激活T细胞，参与树突状细胞分化和存活，以及维护骨髓造血干细胞功能。最近的一些研究发现，人类CaMKIV基因多态性与原发性高血压相关，CaMKIV在调节血管弹性与心肌细胞方面发挥着重要作用。
2007年，国外学者Levy D等在一项原发性高血压全基因组关联性研究中发现CaMKIV rs10491334基因多态性与原发性高血压相关。2012年，美国心脏协会杂志（Journal of the American Heart Association）报道敲除CaMKIV基因可导致小鼠高血压，同时发现其机制可能是通过影响eNOS磷酸化过程，调节eNOS活性，导致NO生成减少及生理作用下降，损伤血管内皮功能，促进高血压的病理进程。但是目前国内关于CaMKIV在心血管方面的研究较少，CaMKIV在高血压发病中的机制尚不明确。
关于新疆哈萨克族、维吾尔族、汉族EH的发病机制，目前已开展的研究包括胰岛素抵抗、脂联素受体基因多态性、血清抵抗素、脂联素、视黄醇结合蛋4、硫化氢、血尿酸水平与新疆哈萨克族、维吾尔族、汉族EH的相关性，但有关CaMKIV与新疆哈萨克族、维吾尔族、汉族EH的相关性研究未见报道。已有研究表明，CaMKIV基因具有多态性，CaMKIV在不同民族间的表达是否具有差异性尚未见报道，与健康类似人群血清水平比较亦未见报道，其与血脂代谢、肥胖度指标是否具有相关性需要进一步研究。本研究通过检测三个民族EH组及健康对照组血清CaMKIV水平，了解哈萨克族、维吾尔族、汉族EH患者血清CaMKIV的浓度及其与正常血压组年龄近似人群的差异，并分析血清CaMKIV水平与血脂紊乱、腰围、体重指数、血尿酸等高血压传统危险因素是否具有相关性，进一步探究哈萨克族原发性高血压发病率高的原因，为揭示三个民族原发性高血压的发病机制提供新的理论依据，为其防治寻找新思路，为分析高血压预后探寻更为便捷的指标，因此进行这项研究极具有临床意义。
材料与方法
（Materials & Methods）
1材料
1.1研究对象及分组
研究对象：选自2012年11月～2013年7月在玛纳斯县旱卡子乡、伊犁哈萨克自治州伊宁市进行流行病学调查的哈萨克族人群170例、维吾尔族人群164例，以及石河子大学第一附属医院同期进行健康体检的汉族人群174例作为研究对象。
分组：根据入选对象血压水平进行分组：①哈萨克族原发性高血压组85例，其中男性44例，女性41例，年龄在35-75岁之间，平均（50.89±8.49）岁；②维吾尔族原发性高血压组82例，其中男性42例，女性40例，年龄在35-75岁之间，平均（51.34±9.47）岁；③汉族原发性高血压组87例，其中男性44例，女性43例，年龄在35-75岁之间，平均（50.74±8.12）岁；对照组：在上述流行病学调查的基础上，以1:1配比的方式选择对照组，配比原则：年龄不超过3岁，性别、民族、居住地相同，其中哈萨克族对照组85例，男性44例，女性41例，年龄在35-75岁之间，平均（48.54±7.26）岁；维吾尔族对照组82例，其中男性42例，女性40例，年龄在35-75岁之间，平均（48.62±9.32）岁；汉族对照组87例，男性44例，女性43例，年龄在35-75岁之间，平均（48.72±7.54）岁。
1.2纳入及排除标准
EH组纳入标准：
1）参照《2010年中国高血压防治指南》高血压诊断标准：收缩压≥140mmHg和(或）舒张压≥90mmHg；
2）年龄在30-75岁之间；
3）所有入选者保持膳食、体重相对稳定，近2周未服用任何降压药。
对照组纳入标准：
1）在上述流行病学调查的基础上，以1:1配比的方式选择对照组。配比原则：年龄不超过3岁，性别、民族、居住地相同；
2）除外正服用抗高血压药物者，收缩压小于140mmHg和舒张压小于90mmHg。
所有入选对象均签署知情同意书。
排除标准：
1）一年内曾接受减肥治疗的高血压患者，继发性高血压、糖尿病病史；
2）各种心肌病、心脏瓣膜病、心功能2级或以上、外周血管病；
3）脑出血或脑梗塞<6个月患者；
4）明确诊断肿瘤并接受放疗或化疗者、明显肝肾功能异常者；
5）长期服用避孕药物或妊娠、哺乳期女性。
2主要实验仪器及试剂
2.1主要实验仪器
1）全自动血生化分析仪：OLYMPUS AU-2700（由石河子大学医学院第一附属医院检验科检测完成）；
2）-80℃低温冰箱：中国，Haier；
3）架盘药物天平：北京医用天平厂生产，HC TP 11B10型；
4）超速离心机：北京医用离心机厂生产；LD5-2A型；
5）试管架、冻存盒若干（国产）；
6）自动酶联免疫分析仪：美国PE公司生产，EL-800型；
7）高精度加样器及吸头（1000、100、50、20、10ul）：若干；
8）漩涡混匀器：金坛市国旺实验仪器厂生产，XH-C型；
9）电热恒温水温箱：上海医用恒温设备厂生产，HH-W21-600型；
10）微量混合器：汕头市广播仪器厂生产，WH-76A型；
11）立式压力蒸汽灭菌器：上海博迅实业有限公司医疗设备厂生产，YXQ-LS-50SII 型；
12）体重秤及皮尺
2.2主要试剂
人钙调素依赖性蛋白激酶4（CAMK4）酶联免疫分析试剂盒
试剂盒由联硕生物科技（上海）有限公司提供，检测的敏感度为4pg/ml，批内变异系数小于9%，批间变异系数小于15%，严格对其进行质量控制。
试剂盒组成：
说明书1份
封板膜2片（96）
密封袋1个
酶标包被板1*96孔
标准品：360pg/ml 0.5ml*1瓶
标准品稀释液 1.5ml*1瓶
酶标试剂6ml*1瓶
样品稀释液6ml*1瓶
显色剂A液6ml*1瓶
显色剂B液6ml*1瓶
终止液6ml*1瓶
30倍浓缩洗涤液20ml*1瓶
3方法
3.1临床资料的收集
1）基本信息：采用统一的调查表，由专业人员进行面对面式询问，其一般情况包括：姓名、性别、年龄、族别、既往史、个人史、生活习惯(包括膳食、运动、吸烟)等，父母或兄弟姐妹患高血压、冠心病、脑卒中等病史、服药情况等。
2）血压测量：严格按照《2011中国血压测量指南》[22]由专业医护人员操作，采用标准的汞柱式血压计，受试者测血压前1个小时停止剧烈活动，在安静的环境中静坐休息至少10min，测量时取坐位，上肢平于心脏水平，测其肱动脉血压，每个受试对象连续测量3次，每次至少间隔1min。分别采用Korotkoff第I音（首次听到的响亮拍击声）和第五音确定为收缩压（systolic blood pressure，SBP）和舒张压（diastolic blood pressure，DBP）。取3次测量数值的平均值为目标值。
3）相关指标测量：根据2003年中华人民共和国卫生部疾病控制司公布的《中国成人超重和肥胖症预防与控制指南（试行）》标准[23]：严格测量身高、体重、腰围、臀围，即：要求所有的调查对象空腹、免冠、脱鞋，穿单衣进行测量身高、体重、腰围（waist circumference，WC）、臀围。具体操作：测量身高使用标准米尺，最小刻度为1cm，将米尺垂直固定于地面，体检者直立，平视前方，两脚跟并拢，保持后枕部、肩部、臀部贴近量尺。测量体重使用经过校正的医用体重秤，严格读数，精确到0.1kg。WC测量：嘱受试者直立，平静呼吸，使两脚分开25-30cm，取肋弓下缘至骼前上棘连线的中点水平面，其为最小周径，在正常呼气末用软尺测量周径的长度，数值精确到1cm。臀围：取臀部的最大周径，即连接两侧股骨粗隆，取其水平面周径。
4）肥胖度指标计算：①体重指数(body mass index，BMI)=体重/身高2(kg/m2)。②腰臀比(waist-hip ratio，WHR)=腰围/臀围。
5）标本采集与生化指标检测：采集清晨空腹肘静脉血15ml，现场离心（4000r/min，离心5min）分离血清，分为两份，一份标本当日送回我院检验科，完成空腹血糖（fasting plasma glucose，FPG）、甘油三酯（triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）、血尿酸（blood uric acid，BUA）、胱抑素C（Cystatin C，Cys-C）等的检测；另一份血清于冻存盒中置于-80℃保存，用于CaMKIV 浓度检测。
6）血清CaMKIV水平的检测，采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunobsorbent assay，ELISA）法，主要仪器：EL-800型自动酶免分析仪。