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目录 第一章、施工现场实验员工作管理 (1) 一、委托制度 (1) 二、标准养护室测试检查记录 (1) 三、工地实验管理 (1) 四、见证管理 (6) 第二章、水泥与钢筋材料试验 (10) 第一节、水泥 (10) 第二节、钢筋 (14) 第三章、其它原材料试验 (20) 第一节、砂子 (20) 第二节、石子 (24) 第四章、混凝土性能试验 (24) 第一节、普通砼 (27) 第二节、抗渗抗冻砼 (32) 第三节、泵送砼 (33) 第四节、大体积砼 (34) 第五章、建筑砂浆 (34) 一、砌筑砂浆 (35) 第六章、土工试验分析 (37)
第一节、土工试验概述 (37) 第二节、土工的工程分类 (37) 第三节、土的基本物理指标 (37) 第四节、含水率试验 (38) 第五节、密度试验 (39) 第六节、回填土试验 (43) 第七节、灰土 (44) 第八节、压实系数 (44) 第一章施工现场试验工作管理 、委托制度 1．凡送试各种原材料检验的单位，必须认真填写试验委托单。试验委托单要写明编号、试验名称、委托单位、取样地点、试件数量、产地、用于工程的部位、送样日期、需用日期和要求试验项目、需用试验报告份数及其他必须注明的内容。委托单必须有工地技术负责人和送试人签名或盖章。 2．各种配合比试验委托必须填写委托单。委托单要写明使用工程名称和部位、强度等级、各种原材料的产地、鉴定情况及掺合料、外加剂等。必须根据工程进度提前提出申请。 3．混凝土和砂浆试验报告、配合比申请单、工程部位等由委托单位填写。试验室负责填写收样日期、试验编号、试验结果，办理签字盖章手续 4．试样要和委托单对号无误 、标准养护室测试检查制度 1．标准养护室要设置混凝土养护架，砂浆和水泥试件养护箱。养护温度和湿度采用自动控制装置和喷淋式控制。 2?标准养护室的温度应保持在20 C 士2 C，相对湿度在90 %以上。记录温湿度分别用温度记录仪和湿度计。 3．进入标准养护室的试件应根据编号、龄期，并按顺序连续摆放进行养护。试件要摆放整齐，出入养护室要按编号、龄期有条不紊地进行。
实验记录 24/2/2014 一、细胞培养 一、培养基的配制 a. RPMI 1640 1×（with L-glutamine）类培养基组分：RPMI ，10%FBS（胎牛血清），双抗生素（penicillin，盘尼西林（青霉素），streptomycin，链霉素）； 配制方法：500 ml RPMI(一瓶) + 50 ml FBS + 5 ml 双抗生素 b. DMEM 1×类培养基组分：DEMI，10% FBS，双抗生素； 配制方法：500 ml DMEM(一瓶) + 50 ml FBS + 5 ml 双抗生素 二、培养细胞RNA的提取 1.从培养箱中拿出6孔板（每孔培养2 ml），吸出培养液； 2.PBS清洗；用大枪管吸取PBS加入每个培养孔中（枪头不要触碰培养板，防止交叉污染），用1 ml枪吹匀清洗（把培养板倾斜，吸溶液指最高处打出）。重复以上操作一次。 3. 每孔中加1 ml Trizol ，吸出放-80℃冰箱冷冻。 三、培养细胞DNA的提取 1.从培养箱中拿出6孔板（每孔培养2 ml），吸出培养液； 2.PBS清洗；用大枪管吸取PBS加入每个培养孔中（枪头不要触碰培养板，防止交叉污染），用1 ml枪吹匀清洗（把培养板倾斜，吸溶液至最高处打出）。重复以上操作一次。 3. 向培养板中加酶消化（时间较长，放进培养箱，看到有白色悬浮后取出），取出加DMEM类培养基； 4. 吸出至1.5 ml 离心管，3600 rpm，4 min离心； 5. 吸出上清（不要触及沉淀），加PBS 1ml清洗，3600 rpm，4 min离心； 四、常用细胞系（人） 名称细胞类型来源核型培养液 A431 上皮型表皮细胞肿瘤非整倍体（76，XX）DMEM+10%FBS HeLa 上皮样宫颈癌非整倍体（81-83，XX）MEM+NEAA 10%FBS Hep G2 上皮样肝细胞癌非整倍体（55，XY）MEM+NEAA 10%FBS MEM：极限必需培养液（Eagle）；NEAA：非必需氨基酸；DMEM：Dulbecco’s MEM改良培养液；RPMI：Roswell Park Memorial 研究所；BrdU：5-溴脱氧尿苷；APRI：腺苷磷酸核糖转移酶 实验室除snu系列与国产7721用1640培养基，其它用DMEM培养基。 五、原代培养----肝细胞 1.切除乳鼠肝脏组织放进小烧杯中，用PBS或培养液漂洗2-3次，去除血污； 2.加少量培养液，用剪子把组织剪碎，1 平方mm左右，再用吸管吹打； 3.加含10%小牛血清的1640培养液，制成均匀的细胞悬液，移入培养瓶，将组织块放在培养瓶底部，采用薄层营养液培养法，盖上瓶盖。 4.换液，只将旧的培养液吸弃，换上新的培养基。 六、传代培养 1.显微镜观察是否需要传代 细胞生长良好：上清液清亮，无悬浮物，折光性好，均质而透明，胞膜完整，胞内颗粒少，无空泡和脂滴。细胞生长不良：悬浮物多，发差增大，胞膜不完整，胞质中颗粒多，出现空泡和脂滴。
警示：这些材料所叙述的实验可能是危险的，因此需要高标准的安全训练、特殊的设备和装置，并在合适的人员监管下才能进行。对于履行这样的安全程序和措施，你负有全部的责任和义务，并独自承担其风险。对于所提供的任何材料的内容或其执行情况，MIT 将不负任何责任和义务，不承担任何风险。法律提示 麻省理工学院化学系 实验室手册 5.301 化学实验技术 Katherine J Franz和Kevin M Shea编写 Rich L Danheiser和Timonthy M Swager教授协助编写 J Haseltine, Kevin M Shea和Sarah A Tabacco修改 IAP 2004
目录 1．简介 1.1. 概述 3 1.2. 教材 4 1.3. 导读 5 1.4. 等级 6 1.5. 日程安排 7 1.6. 怎样使用本手册 8 1.7. 实验室介绍 9 2. 转移和萃取技术 2.1. CC：“乙酯的轻松之旅” 14 2.2. EE：酸、碱及其互变 17 3. 重结晶纯化固体 3.1. CC：怎样对樟脑球进行重结晶？ 19 3.2. EE：单晶培养 21 4. 蒸馏纯化液体 4.1. CC：“桃子是怎样进入香蕉的？” 24 4.2. EE：高海拔下应该怎么操作? 26 5. 快速柱色谱纯化法 5.1. CC：“外观可能是欺骗性的” 28 5.2. EE：设定速度 30 6. 蛋白质鉴定和误差分析 6.1. CC：“牛的心脏里有什么呢？” 32 6.2. EE：“我心坚如磐石” 35 7. 原创性研究介绍 7.1. Mn(salen)配合物催化烯烃的环氧化反应 37 1
单克隆抗体的制备 1975年，K?hler和Milstein创立了杂交瘤技术制备单克隆抗体，单克隆抗体具有特异性高，灵敏度高，重复性好，可供应量大，检测时间短以及能够查出混合物中的少量成分等优点。 1试验材料 1.1试验动物和细胞 雌性6～8周龄BALB/c小鼠 SP2/0骨髓瘤细胞 1.2主要实验试剂 HRP标记羊抗小鼠IgG、福氏完全佐剂（FCA）、福氏不完全佐剂（FIA）、聚乙二醇（PEG）、二甲基亚砜（DMSO）、降植烷、TMB底物、HAT(50×)、HT(50×)、三抗溶液（100×）小鼠单抗Ig类和亚类鉴定用ELISA试剂盒均为SIGMA公司； DMEM粉、特级胎牛血清（FBS）均为GIBCO公司； 牛血清白蛋白（BSA） 1.3主要实验仪器和耗材 CO2细胞培养箱（Thermo和上海新苗医疗器械制造有限公司WJ-160B-Ⅲ） 酶联检测仪（BIO-RAD Model 680） 血球计数板（上海求精生化试剂仪器有限公司） pH计（Sartorius赛多利斯科学仪器） APL高压灭菌锅（CL-32L） 生物安全柜(ESCO北京五州东方科技发展有限公司) 三恒电泳仪（JY600C） 数显恒温磁力搅拌器（78HW-1，杭州仪表电机有限公司） 电子分析天平（Sartorius赛多利斯科学仪器） 分光光度计（WPA Biowav eⅡ+） 进口液氮罐（Thermo） Protein A柱 恒温水浴锅（HH-2金坛市科兴仪器厂） 微型台式真空泵（GL-80ZB型，海门市） 电热恒温培养箱（DHP-9032上海天恒医疗器械） 低速离心机 (L-550长沙湘仪离心机仪器有限公司) 高速冷冻离心机（SIGMA 2-16PK） 倒置显微镜（Nikon TS100） 超低温冰箱(Thermo) 96孔酶标板（） 96孔、24孔细胞培养板、T25培养瓶、35mm培养皿、60mm培养皿、100mm培养皿、冻存管0.22μm过滤器(PALL) 2主要试剂配制 2.1常规试剂配制 PBS（或PB）（0.02mol/L，pH7.4）： A液（0.2 mol/L Na2HPO4）：Na2HPO4·12H2O 71.64g,加蒸馏水至1000ml；
第一部分组织和细胞蛋白样品的制备 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 组织和细胞的来源： 1.1.2 仪器设备 机械组织匀浆器 低温高速离心机(>40,000 g) 超速离心机 超生细胞破碎仪 超纯水装置 1.1.3 试剂 三氯醋酸(TCA) 丙酮 二硫苏糖醇(DTT) 尿素 CHAPS PMSF EDTA 乙醇 磷酸 考马斯亮蓝R350 抑肽素A 亮肽素 ●试剂纯度均应是分析纯或以上。
1.1.4 溶液配制 (1)PBS： NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na2HPO4 1.44 g, KH2PO4，溶于800 ml水中，用HCl调pH至7.4，用纯水定容至1 L； (2)EDTA 储存液： 18.61 g Na2EDTA·2H2O，溶于70 ml纯水中，用10 mol/L NaOH调节pH值至8.0 (约 需2 g NaOH颗粒)，定容为100 ml。可高压灭菌后分装备用； (3)亮肽素储存液(50 μg/ml，100×) 10 mg/ml溶于水，-75℃保存；使用时配成50 μg/ml储液，-20℃保存； (4)抑肽素储存液(70 μg/ml，100×) 1 mg/ml溶于甲醇，-75℃保存；使用时配成70 μg/ml储液，-20℃保存； (5)PMSF储存液(10 mM, 100×): 17.4 mg PMSF，溶于1ml异丙醇中，-20℃保存。 (6)DTT 储存液(1 M): 0.31 g DTT溶于2 ml H2O中，-20℃保存(DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处 理，可过滤除菌)。 (7)裂解液: Lysis buffer A (9 M urea, 4% w/v CHAPS, 1% w/v DTT, 0.5% CA and a cocktail of protease inhibitors) Final concentration Amount 9 M 10.8 g Urea (FW 60.06, Sigma, >99.5%) 4% (w/v) 0.8 g CHAPS (FW 614.89, Sigma, >98% Ultrapure H2O to 20 ml prepare fresh or store in aliquots at –20℃ A cocktail of protease inhibitors DTT(FW 154.25, Promega) 1% 13 μL/200 μL Lysis buffer (15.5×stock), -20℃
Western Blot 实验技术手册 Western Blot是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白根据分子量大小分开，然后转移到固相载体（杂交膜）上，然后通过抗原抗体反应检测杂交膜上的靶蛋白是否存在，从而检测到靶蛋白在待检测样本中的表达情况。目前Western Blot已经是蛋白检测的最常用和成熟的技术之一. 一、Western Blot基本操作流程图 细胞/组织蛋白提取 ↓蛋白定量、蛋白变性 上样、电泳 ↓ 一转膜 ↓ 封闭 ↓ 孵育一抗 ↓洗膜 孵育二抗 ↓洗膜 底物孵育 ↓ 曝光或显色 二.Western Blot操作步骤 1.蛋白提取、处理 蛋白提取的质量直接决定着WB结果的好坏，因此，根据样本类型和检测类型选择合适的蛋白制备方法是至关重要的。使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或者组织样品. 对于贴壁培养的细胞，经预冷的PBS漂洗2次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂，然后吸净PBS，加入预冷的裂解液，最后用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温和地转移至预冷的微量离心管中，4℃离心12,000 rpm，20 min（根椐细胞种类不同调整离心力），轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀. 对于组织样品，用灭菌的预冷的工具分离目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解，将组织块放在圆底的微量离心管或Eppendorf管中，加入液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于-80°C，每约5 mg加入约300 μl 预冷的裂解液lysis buffer，冰浴匀浆后置于4℃摇
动2小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例，（最终的蛋白浓度至少达到0.1 mg/ml, 理想的蛋白浓度应为1-5 mg/ml).，4℃离心12,000 rpm，20 min，轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀 提取蛋白后进行蛋白的定量，蛋白的快速定量方法主要蛋白本身的发色基团，或者与其他显色剂反应产生的紫外吸收来进行定量.目前常用的主要有直接紫外吸收法，Bradford法、和Lorry法或BCA法，一般推荐用BCA法. BCA测定方法如下: A．酶标板操作 2、根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工 作液，充分混匀； 3、各孔加入200μL BCA工作液； 4、把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋 白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线； 5、稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充 分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值； 6、根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释 液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/ul）。 三、样品处理 一般的抗体只能识别抗原蛋白中的部份序列结构（表位），因此，为使抗体能够达到结合该表位而需要将蛋白样本进行变性，使之打开折叠的空间结构，蛋白变性一般使用含阳离子变性去污剂如SDS的上样buffer （loading buffer），并于95-100°C 煮沸5分钟，对于多次跨膜蛋白，可以于70°C 加热5-10分钟，标准的上样buffer称为2X Laemmli buffer，上样时与样本混合后变性上样即可，为了减少样品的稀释比例，也可制备4 X或6 X的上样缓冲液，如果上样buffer称为2X Laemmli buffer，上样时与样本1：1混合后变性上样即可. SDS的阴离子环绕蛋白肽键使之带负电荷，蛋白分子量不同，结合的SDS数量不同，所带负电荷也不同，电泳迁移速度不同，因此SDS-PAGE电泳可将不同分子量的蛋白分离开。 四、PAGE电泳分离蛋白和转膜、封闭 1）、电泳 聚丙酰胺凝胶PAGE电泳根椐蛋白分子量进行分离蛋白，PAGE胶是由两种化合物聚合而成的，即丙烯酰胺（acr）和N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis).，聚合需加入过硫酸铵及DMAP 或TEMED，凝胶为中性、水溶性、三维网状结构。凝胶的孔径取决于总丙烯酰胺的百分含量（%T)）和交联度（%C），T%=(a+b)/m*100%; 和C%=a/(a+b)*100%,其中: a=双体(bis)的重量;b=单体(arc)的重量;m=溶液的体积(ml) 。丙烯酰胺总量增加，则孔径减小，5%C 构成最小的孔径，任何的%C增加或降低，孔径都增加，凝胶的百分浓度组成需两个参数，
河南农业职业学院 实验室工作手册 学年第学期 年月日至年月日 实验室名称 所属部门 实验实习指导教师 系部负责人签字 审阅日期：年月日 目录 一、实验室技术人员职责 二、实验室学期工作计划 三、实验项目开出情况记录 四、实验情况统计 五、其他工作情况记录 六、实验室建设情况记录 七、设备运行维护记录 八、承担其他任务情况 九、学期工作总结 十、实验室工作评价
一、实验室技术人员职责 1、认真执行实验室工作条例。学习、研究课程教学大纲和实验指导书。掌握有关实验的基本原理与技术知识，不断提高实验理论水平和实验技术水平。 2、与实验指导教师密切配合完成教学和科研实验任务。认真做好教学实验的准备工作，参加实验预做，写出预做实验报告，参与指导学生实验，不断提高实验教学质量。 3、负责实验所需仪器设备、材料的准备工作。每次实验前负责将实验所需仪器设备、实验器材、低值易耗品等准备齐全、摆放整齐；实验后负责检查清点回收。 4、在实验过程中，应指导学生认真执行操作规程，发现有不遵守操作规程者应进行劝告，不听劝告者可令其停止实验。 5、搞好仪器设备管理，负责对仪器设备的清点、检修、保养。做好帐卡登记，保证帐、卡、物一致。对确实需要报废的仪器设备，应及时上报处理。 6、做好实验室的清洁卫生，防电、防水、防火、防盗，发现隐患及时报告 7、认真做好实验室基本信息的收集整理和实验室工作档案管理。 8、严格执行实验室的各项规章制度，完成学院、系（部）安排的各项任务。 9、实验室专职技术人员实行坐班工作制。在实验过程中，不得脱离岗位。 10、实验专职技术人员应认真填写《实验室工作手册》，详细记载各项工作的情况，期末将《实验室工作手册》交所属部门。 二、实验室学期工作计划
基因工程实验技术（2013修订版） 西北农林科技大学 生物化学与分子生物学系 2013.12
基因工程实验技术 （2013修订版） 目录 实验一、小麦GAPDH总RNA提取 实验二、RT-PCR扩增目的基因cDNA（小麦GAPDH截短体）实验三、核酸琼脂糖电泳分析 实验四、质粒的提取 实验五、表达载体和目的片段的酶切 实验六、载体和外源DNA的连接 实验七、感受态细胞的制备及转化 实验八、重组质粒筛选、鉴定及转化 实验九、目的基因诱导表达 实验十、Western Blotting检测 附录1DNA的纯化与回收 附录2培养基制备和细菌培养 附录3小麦3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）信息 附录4表达载体pGEX4T-1图谱 附录5标准分子量图
小麦GAPDH截短体的重组与表达实验流程图 小麦幼苗 总RNA提取 RT-PCR扩增 GAPDH截短体基因 片段胶回收 表达载体构建 表达菌株转化 诱导表达 Western杂交
小麦GAPDH截短体的重组与表达 1小麦总RNA提取 （Trizol法） 1.1材料 小麦幼苗 1.2仪器设备 高速冷冻离心机、低温冰箱、核酸电泳设备、液氮罐、研钵、剪刀、镊子等 1.3试剂配制及器具处理 ①0.1％的DEPC H2O（DEPC：焦碳酸二乙酯） ②器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和1.5ml和0.2ml的EP管等用纱布包裹，在0.1％的DEPC H2O中浸泡过夜（37℃），高压灭菌，80℃烘干备用。剪刀、镊子和药匙等160℃烘烤6h以上。 ③无RNA酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃×2h）装蒸馏水，然后加入0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 ④Trizol ⑤75%乙醇：用新打开的无水乙醇和DEPC处理过的水配制75%乙醇（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。 ⑥氯仿(最好用新的)。 ⑦异丙醇(最好用新的)。 1.4操作步骤 1.4.1Trizol法提取总RNA ①先在研钵中加入液氮，再将小麦叶片剪成小段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50～100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中（注意研磨粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%），充分混合均匀。 ②室温放置5min，然后加入200μL的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。 ③12000rpm离心10min，取上层水相于一新的EP管中（千万不要将中间的沉淀层和下层液混入，否则重新离心分离），加入500μL异丙醇，温和颠倒混匀。室温放置10min，12000rpm离心10min。 ④小心地弃去上清液，加入1ml的75%乙醇，涡旋混匀，4℃下12000rpm离心5min。 ⑤重复步骤④。 ⑥弃去上清液（尽量将残余液体除去），室温或真空干燥5～10min（注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度）。用30μL DEPC处理过的水将RNA溶解，必要时可55℃～60℃水浴10min。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。 [注意] ①整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。
计算机网络实验指导书 海南大学信息科学技术学院信息安全系 二零一六年十月 编辑：谭毓银温德志CCIE#45288 校审：王隆娟，邢琳
目录 实验 1 常见网络设备和测试命令介绍与及双绞线制作 (1) 实验 2 Packet Track 模拟器介绍及基本操作 (26) 实验 3 IP地址分类及子网划分 (42) 实验 4 交换机的基本配置与管理 (61) 实验 5 交换机VLAN配置 (70) 实验 6 路由器的基本配置及静态路由配置 (75) 实验7 路由器RIP动态路由配置 (82) 实验8 静态NAT配置 (89)
实验1：常见网络设备和测试命令介绍及双绞线制作 实验目的：了解常见的网络设备及其特点； 了解常用网络测试命令及使用； 掌握双绞线的制作与测试； 实验器材：集线器（HUB）、交换机（SWITCH）、路由器（ROUTER）； 双绞线、同轴电缆、光纤、测线仪、压线钳、非屏蔽双绞； RJ-45水晶头。 实验内容： 1 常见的网络设备 1.1 集线器简介 集线器的英文称为“Hub”。“Hub”是“中心”的意思，集线器的主要功能是对接收到的信号进行再生整形放大，以扩大网络的传输距离，同时把所有节点集中在以它为中心的节点上。它工作于OSI(开放系统互联参考模型)参考模型第一层，即“物理层”。集线器与网卡、网线等传输介质一样，属于局域网中的基础设备，采用CSMA/CD（一种检测协议）访问方式。 集线器属于纯硬件网络底层设备，基本上不具有类似于交换机的"智能记忆"能力和"学习"能力。它也不具备交换机所具有的MAC地址表，所以它发送数据时都是没有针对性的，而是采用广播方式发送。也就是说当它要向某节点发送数据时，不是直接把数据发送到目的节点，而是把数据包发送到与集线器相连的所有节点，如图1所示。 图1-1 集线器部署图
一、原材料进厂要求 二、水泥试验作业指导书 三、掺合料试验作业指导书 四、外加剂试验作业指导书 五、混凝土试验作业指导书 六、砂石试验作业指导书 七、沥青试验作业指导书 八、沥青混合料试验作业指导书 九、水泥稳定碎石试验作业指导书 十、路基路面检测作业指导书 十一、砂石试验作业指导书 十二、试验室仪器设备操作规程 ZBSX-92A型震击式标准振筛机操作规程HJW-60型单卧轴强制式砼搅拌机操作规程NJ-160B型水泥净浆搅拌机操作规程 FZ-31型沸煮箱操作规程 HP-40型混凝土渗透仪操作规程 101-2型电热鼓风恒温干燥箱操作规程JYE-300C水泥恒应力压力试验机操作规程KZJ-500型电动抗折试验机操作规程 JJ－5型水泥胶砂搅拌机操作规程 ZS－15型水泥胶砂振实台操作规程
DYE-2000型数字式压力试验机操作规程NLD-3型水泥胶砂流动度测定仪操作规程ZHJ-CX型混凝土振动台操作规程 FBT-9自动比表面积仪操作规程 FSY-150B型负压筛析仪操作规程 HG-800砼贯入阻力仪操作规程 YH-40B恒温恒湿标准养护箱操作规程 十三、离心式沥青混合料分离器操作规程十四、混合料最大理论相对密度仪操作规程十五、构造深度仪操作规程 十六、渗水系数仪操作规程 十七、灌砂筒操作规程 十八、标准恒温水浴操作规程 十九、多功能电动击实仪操作规程 二十、电动脱模器操作规程 二十一、沥青延度仪操作规程 二十二、电脑沥青针入度操作规程 二十三、路面材料强度试验仪操作规程 二十四、马歇尔电动击实仪操作规程 二十五、全自动沥青软化点仪操作规程 二十六、全自动沥青混合料拌和机操作规程二十七、电脑马歇尔稳定度仪操作规程
SiRNA与RNAi实验技术手册 RNA是生物体内最重要的物质基础之一，它与DNA和蛋白质一起构成生命的框架，但长久以来，RNA分子一直被认为是小角色。然而，一系列发现表明——这些小分子RNA事实上操纵着许多细胞功能。它可通过互补序列的结合反作用于DNA，从而关闭或调节基因的表达。甚至某些小分子RNA可以通过指导基因的开关来调控细胞的发育时钟。RNA干涉（RNAi）是在线虫中发现的，在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。 此后，科学家们还明白，RNAi还有其他形式，它既是一种了解基因功能的强大工具，又是很多生物的基因组所采用的一种在演化上来讲很古老的防卫方法。 一、什么是siRNA和RNAi？ 双链RNA经酶切后会形成很多小片段，称为siRNA，这些小片段一旦与信使RNA(mRNA)中的同源序列互补结合，会导致mRNA失去功能，即不能翻译产生蛋白质，也就是使基因“沉默”了，双链RNA对基因表达的阻断作用就被称为RNA干预（RNA interference, RNAi ）。 二、RNAi的作用机制是什么？ 目前RNAi的作用机理主要是在线虫，果蝇，斑马鱼等生物体内阐明的。生物体内的双链RNA可来自于RNA病毒感染、转座子的转录产物、外源导入的基因。这些来源的双链RNA 诱发了细胞内的RNAi机制，结果是病毒被清除、转座子的表达被阻断、外源导入基因表达被阻断，同时与其同源的细胞基因组中的基因表达也被阻断。 通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。 A、在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因病毒感染等各种方式引入的双链RNA，切割将RNA降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs)，每个片段的3’端都有2个碱基突出。
分子生物学实验室 实验一 氯化钙法大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验二 细菌质粒DNA 的提取 实验三 琼脂糖凝胶电泳 实验四 细菌基因组DNA 的提取与琼脂糖凝胶电泳 实验五 质粒DNA 限制性内切酶实验 实验六 聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因 实验七 胶回收法纯化DNA 与琼脂糖凝胶电泳 南京工业大学制药与生命科学学院 生物工程与技术基础实验与工程实训中心
《分子生物学实验》教学大纲 英文名称： Molecular biology 学分：1 学时：32 教学对象：生物工程专业、制药工程专业、药剂学专业、食品学专业、生物技术专业 教学目的：在开设的理论课程的基础上，结合实验课程的教学，使学生能较全面系统的掌握分子生物学的基本操作，拓宽专业知识面，加深对专业知识的理解，强化动手能力。。 基本要求：了解分子生物学的实验操作原理，掌握有关实验仪器的使用方法。 实验内容： 实验一.细菌质粒DNA的提取及酶切实验 （8学时） 基本要求: 通过学习碱变性抽提法对大肠杆菌中的质粒的抽提，掌握质粒DNA的小量制备方法，了解碱裂解法制备质粒DNA的原理。进一步了解限制性 内切酶的特性及酶切反应过程，掌握DNA的酶切技术。 重点: 掌握质粒DNA的小量制备方法，了解碱裂解法制备质粒DNA的原理。进一步了解限制性内切酶的特性，掌握DNA的酶切技术。 难点: 掌握质粒DNA的小量制备方法及DNA的酶切技术。 实验二. 细菌基因组DNA的提取 （4学时） 基本要求: 了解细菌基因组DNA的提取的目的，原理，掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法 重点: 掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法 难点: 掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法 实验三. 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验（4学时） 基本要求: 了解大肠杆菌感受态细胞的制备原理及转化反应的目的，应用范围及操作过程，掌握重组DNA质粒转化大肠杆菌的操作技术。 重点: 掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的操作技术
实验室手册 目 录 序号 内容 页码 1. 实验室方针 2. 概述 3. 实验室人员岗位职责 3.1实验室负责人职责 3.2测试技术人员主要职责 3.3计量、测试人员主要职责 4. 测试 4.1零部件精密测量 4.2产品试验质量控制 5. 计量器具及测试设备管理 5.1计量器具入库、流转及台帐管理 5.2计量器具标识管理 5.3计量器具质量控制 5.4计量器具故障和事故分析报告 5.5测试设备控制 6. 环境控制 6.1实验室环境条件控制 6.2实验室安全保密 7. 测量系统分析 8. 统计技术 9. 培训 10. 质量记录 10.1检定证书及检测数据公正性 10.2相关质量记录 1 实 验 室 方 针 真实客观 公正有效 顾客满意 2 概 述 本实验室隶属于LEO有限公司质保部。是为满足公司从原材料采购验收、产品开发及批量生产直至最终产品的各项检测及试验需求而设立的。计量系统属国防计量三级技术机构。并于1991年通过国防计量认可，1996、2001年通过国防计量认可复查。能满足ISO/IEC17025中内部实验室的要求。 实验室包括计量室、产品试验室、热表处理检验室、橡胶硫化试验室。包括长度、热工、电工、无线电、力学、化学、产品综合性能等专业检测、试验工作。同时开展检测、试验设备（含非标准试验设备）的检定、校准、鉴定等工作。 有完善的ISO9001、QS9000/VDA6.1、ISO/TS16949体系,较为先进的检测、试验设备和专业技术检测人员，检测、试验手段齐全，其测试结果真实可靠。 检 测 机 构 图 3 实验室人员岗位职责 3.1 实验室负责人岗位职责 3.1.1贯彻国际、国内有关质量、标准、计量等方面的政策、法规和法令。 3.1.2保证实验室设备仪器的配备，人员素质，各实验室环境条件等。负责组织检测试验人员的培
IP技术实验手册 IP教研室编 南京信息职业技术学院
目录 1 实验环境使用介绍 (1) 1.1 Packet Tracer5.0的基本界面 (1) 1.2 选择设备 (2) 1.3 配置不同设备 (3) 2 交换机、路由器基本设置 (6) 2.1 实际工作环境中交换机配置方式 (6) 2.1.1 配置交换机前的准备工作 (6) 2.1.2 配置交换机 (6) 2.2 实际工作环境中路由器配置方式 (8) 2.3 配置远程登陆交换机 (8) 2.3.1实验目的 (8) 2.3.2 实验设备 (8) 2.3.3 拓扑结构 (8) 2.3.4 工作流程 (8) 2.3.5 注意事项 (10) 2.4 配置远程登陆路由器 (10) 2.4.1 实验目的 (10) 2.4.2 实验设备 (10) 2.4.3 拓扑结构 (10) 2.4.4 工作流程 (10) 2.4.5 注意事项 (12) 3 单交换机上划分VLAN (12) 3.1 实验目的 (12) 3.2 实验设备 (12) 3.3 拓扑结构 (12) 3.4 工作流程 (12) 3.5 验证测试 (13) 4 跨交换机实现相同VLAN之间的通信 (13) 4.1 实验目的 (13) 4.2 实验设备 (13) 4.3 拓扑结构 (14) 4.4 工作流程 (14) 5 静态路由实现区域网络的连通 (15) 5.1 实验目的 (15) 5.2 实验设备 (16) 5.3 拓扑结构 (16) 5.4 场景描述 (16) 5.5 工作流程 (16) 5.6 注意事项 (17) 6 RIP协议实现区域网络的连通 (18)
（员工管理）实验技术人员实验准备手册
温州医学院 实验技术人员实验准备手册 学院(中心) 实验室 课程名称课程类型 授课学期学年学期 专业年级 课程负责人 实验准备人员 温州医学院教务处制 注： 1、本《实验技术人员实验准备手册》的内容必须及时填写。学期结束时，上交实验中心归档。 2、封面的课程类型按必修课、选修课或开放实验填写，且注明课程内实验、独立设课实验或集中综合性实验，如：选修课（独立设课实验）。 3、实验准备卡中的实验开始日期填写本实验项目的第壹次学生实验时间。 实验准备须知
实验教学工作是高等学校教学工作的重要组成部分，于学生创新精神和实验能力培养过程中具有不可替代的作用。为了规范实验教学过程，提高我校本科实验教学质量，现根据《温州医学院实验教学工作条例》、《温州医学院仪器设备管理办法》、《温州医学院实验工作人员工作规程》、《温州医学院低值品、易耗品及实验材料管理办法》和《温州医学院实验室安全、卫生管理制度》制定本手册，请各位实验技术人员认真做好实验准备工作。 壹、实验室布局合理，实验室家具、仪器设备整齐，桌面、仪器上无灰尘，地面无灰尘、无纸屑等垃圾和积水，地面、墙面、门窗及管道线路、开关板上无积灰和蜘蛛网等杂物，坚持每天壹小扫，每周壹大扫的卫生制度。 二、实验室所有的电器，室内的线路、开关、插座等用品设备，于交付使用前，应进行安装检查后，才能接通电源，且做到定期检查和维修。电源要有良好的接线，使用有金属外壳或能产生静电的电器设备，必须使外壳接地，以防操作人员不慎触电。 三、做好仪器设备维修和保养工作，对仪器设备进行经常性的检查、检测、保养工作，建立切实可行的维护保养制度，定期进行检修，且做好检修记录。贵重精密仪器设备要有使用记录，且进行定期校验，以确保其准确性、灵敏度。建立贵重精密仪器设备的技术档案。 四、认真学习化学危险品的保管知识，危险品燃烧的灭火知识及其它应急知识，掌握保管方法，做好放射性同位素及其制品安全管理，认真检查安全设施，消除事故隐患，做好安全保卫工作。 五、系统掌握本学科的基本理论、本实验室有关实验的原理和实验技术，熟练地掌握本实验室各种仪器设备的使用，根据实验教学任务，做好实验预做，且做好记录，总结经验，改进实验。做好消耗材料、试剂和元器件的准备，确保实验仪器设备完好，，如发现问题应积极和带教人员沟通，妥善解决。
实验室化学技术手册 -麻省理工
警示：这些材料所叙述的实验可能是危险的，因此需要高标准的安全训练、特殊的设备和装置，并在合适的人员监管下才能进行。对于履行这样的安全程序和措施，你负有全部的责任和义务，并独自承担其风险。对于所提供的任何材料的内容或其执行情况，MIT 将不负任何责任和义务，不承担任何风险。法律提示 麻省理工学院化学系 实验室手册 5.301 化学实验技术 Katherine J Franz和Kevin M Shea编写 Rich L Danheiser和Timonthy M Swager教授协助编写 J Haseltine, Kevin M Shea和Sarah A Tabacco修改 IAP 2004
目录1．简介 1.1. 概述3 1.2. 教材4 1.3. 导读5 1.4. 等级6 1.5. 日程安排7 1.6. 怎样使用本手册8 1.7. 实验室介绍9 2. 转移和萃取技术 2.1. CC：“乙酯的轻松之旅”14 2.2. EE：酸、碱及其互变17 3. 重结晶纯化固体 3.1. CC：怎样对樟脑球进行重结晶？19 3.2. EE：单晶培养21 4. 蒸馏纯化液体 4.1. CC：“桃子是怎样进入香蕉的？”24 4.2. EE：高海拔下应该怎么操作? 26 5. 快速柱色谱纯化法 5.1. CC：“外观可能是欺骗性的”28 5.2. EE：设定速度30 6. 蛋白质鉴定和误差分析 6.1. CC：“牛的心脏里有什么呢？”32 6.2. EE：“我心坚如磐石”35 7. 原创性研究介绍 7.1. Mn(salen)配合物催化烯烃的环氧化反应37 1
实验一蛋白是否表达 1.1 实验步骤和所需时间 实验步骤所需时间 1、用15ml 离心管取5 ml LB培养基，加相应抗性，挑取4个转化子37℃过夜活化。 5-16h 工作时间或过夜 2、用15ml 离心管取5 ml LB培养基，加相应抗性，接种过夜活化的菌 液50ul，37℃摇菌至菌液OD600为0.8，加IPTG至最终浓度0.1mM诱 导4h。 8h 3、取40μl菌液于1.5ml EP管中加入20μl 3 × loading buffer，煮沸。 1h 4、将煮沸后样品跑SDS-PAGE胶，每个孔上样量10-20ul。若目的蛋白 分子量≥15KD，用浓度12%的SDS-PAGE胶；若目的蛋白分子量＜15KD， 用浓度15%的SDS-PAGE胶。 3h 5、SDS-PAGE胶用染色液染色30min。 0.5h 6、SDS-PAGE胶用脱色液脱色1h。 1h 7、将脱色好的SDS-PAGE胶拍照保存，分析结果。 10min 8、挑取表达量最高的转化子，保存甘油菌（800ul菌液加200ul 75%甘油）。总共时间：2-3天 1.2实验所需材料配方 LB培养基（+抗生素）：LB配方如下（1L），蛋白胨10g、酵母粉5g、氯化钠10g。 IPTG：母液浓度为1mol/L。 SDS-PAGE相关试剂： 30 % 丙烯酰胺贮存液 称取29 g丙烯酰胺，1 g N-N’甲叉双丙烯酰胺，加蒸馏水溶解定容至100 ml（约加65ml）， 过滤后装入棕色瓶中4 ℃保存； 1.5 M Tris-Cl (pH 8.8) 18.17 g Tris溶于90 ml去离子水，用浓盐酸调pH至8.8，定容至100 ml，4 ℃保存； 1 M Tris-Cl (pH 6.8) 12.1 g Tris溶于90 ml去离子水，用浓盐酸调pH至6.8，定容至100 ml，4℃保存； 10 %(w/v) 过硫酸铵(AP) 0.1g加入1.5mlEP管中，加水1ml溶解，4℃可保存两周。 10 %(w/v) 十二烷基硫酸钠（SDS） 称取100 g SDS溶于900 ml的无菌去离子水中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解，用水 定容至1L。 3×loading buffer 2.5ml 1M Tris-HCl(pH6.8 同浓缩胶)、2mg溴酚蓝、2ml 10%SDS、4ml甘油，加水溶解 并稀释至10ml，此溶液用于非还原型SDS-PAGE，如用于还原型SDS-PAGE，则1ml再加 0.2ml β-巯基乙醇。 10×电泳缓冲液 30g Tris, 144g Glycine, 10g SDS, pH8.3 考马斯亮蓝染色液(1L) 考马斯亮蓝R-250 0.1 g 异丙醇250 ml 蒸馏水650 ml 冰醋酸100 ml
实验室手册质量体系文件 目录 序号内容页码 1. 实验室方针 2. 概述 3. 实验室人员岗位职责 3.1实验室负责人职责 3.2测试技术人员主要职责 3.3计量、测试人员主要职责 4. 测试 4.1零部件精密测量 4.2产品试验质量控制 5. 计量器具及测试设备管理 5.1计量器具入库、流转及台帐管理 5.2计量器具标识管理 5.3计量器具质量控制 5.4计量器具故障和事故分析报告 5.5测试设备控制 6. 环境控制 6.1实验室环境条件控制 6.2实验室安全保密 7. 测量系统分析 8. 统计技术 9. 培训 10. 质量记录 10.1检定证书及检测数据公正性 10.2相关质量记录 1 实验室方针 真实客观公正有效顾客满意 2 概述 本实验室隶属于LEO有限公司质保部。是为满足公司从原材料采购验收、产品开发及批量生产直至最终产品的各项检测及试验需求而设立的。计量系统属国防计量三级技术机构。并于1991年通过国防计量认可，1996、2001年通过国防计量认可复查。能满足ISO/IEC17025中内部实验室的要求。 实验室包括计量室、产品试验室、热表处理检验室、橡胶硫化试验室。包括长度、热工、电工、无线电、力学、化学、产品综合性能等专业检测、试验工作。同时开展检测、试验设备（含非标准试验设备）的检定、校准、鉴定等工作。 有完善的ISO9001、QS9000/VDA6.1、ISO/TS16949体系,较为先进的检测、试验设备和专业技术检测人员，检测、试验手段齐全，其测试结果真实可靠。 检测机构图 3 实验室人员岗位职责 3.1 实验室负责人岗位职责 3.1.1贯彻国际、国内有关质量、标准、计量等方面的政策、法规和法令。 3.1.2保证实验室设备仪器的配备，人员素质，各实验室环境条件等。负责组织检测试验人