吸光光度分析法
大纲要求：
1.掌握吸光光度分析法的特点、基本原理、测定方法和计算方法；
2.理解物质对光的选择性吸收和光吸收曲线；
3.掌握朗伯一比耳定律的应用及摩尔吸光系数，了解引起偏离朗伯
一比耳定律的原因；
4.了解分光光度计的主要部件，各部件的作用及仪器的工作原理；
5.了解显色反应的特点，掌握显色条件的选择；
6.掌握分光光度法的应用和测量条件的选择。
基本内容：
一、吸光光度分析概述
基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法称为吸光光度法，包
括比色法，可见分光光度法及紫外分光光度法等。
有些物质的溶液是有色的，若物质的溶液本身是无色或浅色的，但
它们与某些试剂发生反后生成有色物质。有色物质溶液颜色的深浅与其
浓度有关，浓度愈大，颜色愈深。如果是通过与标准色阶比较颜色深浅
的方法确定溶液中有色物质的含量，则称为目视比色法，如果是使用分
光光度计，利用溶液对单色光的吸收程度确定物质含量，则称为分光光
度法。
吸光光度法主要用于测定试样中的微量组分，具有以下特点：
a.灵敏度高。常可不经富集用于测定质量分数为10-2～10-5的微量组
分，甚至可测定低至质量分数为10-6～10-8的痕量组分。通常所测试的浓
度下限达10-5～10-6mol·L-1。
b.准确度高。一般目视比色法的相对误差为5%～10%，分光光度法为
2%～5%。
c.应用广泛。几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或
间接地用分光光度法进行测定。
d.仪器简单、操作方便、快速。
二、吸光光度分析的基本原理
1、光的基本性质
光是一种电磁波，同时具有波动性和微粒性。
我们将眼睛能够感觉到的那一段的光称为可见光，也就是我们日常所
组合而成的复合光(即由不同波长的光所组成的光)。理论上，将仅
具有某一波长的光称为单色光，单色光由具有相同能量的光子所组成，
两种适当颜色的单色光按一定强度比例混合也可得到白光。这两种单色
光称为互补色，如图9.１所示，图中处于对角线上的两种单色光为互补
色光。例如绿色光和紫色互补，黄色光和蓝色光互补等。
2、物质的颜色和物质对光的选择性吸收
颜色是物质对不同波长光的吸收特性表现在人视觉上所产生的反
如果把不同颜色的物体放在暗处，什么颜色也看不到。当光束照射到物
体上时，由于不同物质对于不同波长的光的吸收、透射、反射、折射的
程度不同而呈现不同的颜色。溶液呈现不同的颜色是由溶液中的质点(离
子或分子)对不同波长的光具有选择性吸收而引起的。当白光通过某一有
色溶液时，该溶液会选择性地吸收某些波长的色光而让那些未被吸收的
色光透射过去即溶液呈现透射光的颜色，亦即呈现的是它吸收光的互补
色光的颜色。
3、光吸收曲线
当依次将各种波长的单色光通过某一有色溶液，测量每一波长下有
色溶液对该波长光的吸收程度(吸光度A)，然后以波长为横坐标，吸光度
为纵坐标作图，得到一条曲线，称为该溶液的吸收曲线，亦称为吸收光
谱。图9.2是四种浓度KMnO4溶液的吸收曲线。
从图可见：
①同一溶液对不同波长的光的吸收程度不同。如：KMnO
4对绿色光区
中525nm的光吸收程度最大,此波长称为最大吸收波长，以λmax或λ最大表
以，KMnO 4溶液呈现紫红色。
②不同浓度的KMnO
4溶液的光吸收曲线形状相似，不同物质吸收曲线的形状和最大吸收波长均不相同。光吸收曲线与物质
特性有关，故据此可作为物质定性分析的依据。
③同一物质不同浓度的溶液，在一定波长处吸光度随溶液的浓度的
增加而增大。这个特性可作为物质定量分析的依据。在测定时，只有在
λmax 处测定吸光度，其灵敏度最高，因此，吸收曲线是吸光光度法中选择
测量波长的依据。
三、吸光光度分析的基本定律
1、朗伯—比耳定律
如果同时考虑溶液浓度与液层厚度对光吸收程度的影响，将朗伯定律
与比耳定律结合起来，则可得 lg
I I 0
=Kbc
该式称为朗伯—比耳定律的数学表达式。上述各式中I 0，I 分别为入
射光强度和透射光强度；b 为光通过的液层厚度(cm)；c 为吸光物质的浓
度(mol ·L -1)；k 1，k 2和K 均为比例常数，与吸光物质的性质、入射光波
长及温度等因素有关。
溶液对光的吸收程度lg I I
与吸光物质的浓度和光通过的液层厚度的乘积
成正比。
应用该定律时，应注意：(1)朗伯-比耳定律不仅适用于有色溶液，
也可适用于其他均匀非散射的吸光物质(包括液体、气体和固体)；(2)该
定律应用于单色光，既适用于可见光，也适用于红外光和紫外光，是各
类吸光光度法的定量依据；(3)吸光度具有加和性，是指溶液的总吸光度
等于各吸光物质的吸光度之和。根据这一规律，可以进行多组分的测定
及某些化学反应平衡常数的测定。这个性质对于理解吸光光度法的实验
操作和应用都有着极其重要的意义。
2、吸光度、透光率、吸光系数、摩尔吸光系数
上式中的lg
I I
项表明了溶液对光的吸收程度，定义为吸光度，并用符
号A 表示；同时，I 0/I 是透射光强度与入射光强度之比，表示了入射光
透过溶液的程度，称为透光度(以%表示，为透光率)，以T 表示，所以上
式又可表示为： A = lg
I I 0
= lg T 1=Kbc
式中的比例常数K 值随c ，b 所用单位不同而不同。如果液层厚度b 的单
位为cm ，浓度c 的单位为g ·L -1，K 用a 表示，a 称为吸光系数，其单位
是L ·g -1·cm -1
，则上式写为：A =abc
如果液层厚度b 的单位仍为cm ，但浓度c 的单位为mol ·L -1，则常
数K 用ε表示，ε称为摩尔吸光系数，其单位是L ·mol -1·cm -1,此时朗伯
—比耳定律写为： A =εbc
吸光系数a 和摩尔吸光系数ε是吸光物质在一定条件、一定波长和
溶剂情况下的特征常数。同一物质与不同显色剂反应，生成不同的有色
化合物时具有不同的ε值，同一化合物在不同波长处的ε也可能不同。
在最大吸收波长处的摩尔吸光系数，常以ε
max 表示。ε值越大，表示该有色物质对入射光的吸收能力越强，显色反应越灵敏。所以，可根据不同
显色剂与待测组分形成有色化合物的ε值的大小，比较它们对测定该组
分的灵敏度。
四、吸光光度分析方法及仪器
㈠、分光光度计及其基本部分
分光光度计通常由下列五个基本部件组成：
㈡、测定方法
1、比较法 比较法是先配制与被测试液浓度相近的标准溶液c
s 被测
试液c
x ,在相同条件下显色后，测其相应的吸光度为A s 和A x ，根据朗伯—
比耳定律： A s =εs b x c ； A x =εx b s c
两式相比得：
x s A A =x bc bc s εε 则得： x c =s x
A A s c
应当注意，利用上式进行计算时，只有当x c 与s c 相近时，
否则将有较大误差。
b ．标准曲线法 测量一系列标准溶液的吸光度，将吸光度对浓度
作图，绘制标准曲线，然后根据被测试液的吸光度，从标准曲线上查得
而且误差较小。
五、显色反应及其条件的选择
1、显色反应
测定某种物质时，如果待测物质本身有较深的颜色，就可以进行直接测
定，但大多数待测物质是无色或很浅的颜色，故需要选适当的试剂与被
测离子反应生成有色化合物再进行测定，此反应称为显色反应，所用的
试剂称为显色剂。
显色反应主要有配位反应和氧化还原反应，当同一组分可与多
种显色剂反应生成不同的有色化合物。选用哪一种显色反应呢？对显色
反应的选择，有下列考虑：
a.首先是选择灵敏度高，即摩尔吸光系数大的反应。但是，在分析
化学中接触到的试样大多是成分复杂的物质，必须认真考虑共存组分的
干扰，即希望显色反应的选择性好，干扰少。需要指出的是，在满足测
定灵敏度的前提下，选择性的好坏常常成为选择显色反应的主要依据。
b.有色化合物的组成恒定，符合一定的化学式。对于形成不同配位
比的配位反应，必须注意控制实验条件，使其生成一定组成的配合物，
以免引起误差。
c.有色化合物的化学性质应足够稳定，至少保证在测量过程中溶液
如日光照射、空气中的氧和二氧化碳的作用等，此外，也不应受溶液中
其他化学因素的影响。
d.有色化合物与显色剂的关系差别要大，即显色剂对光的吸收与配
合物的吸收有明显区别，一般要求两者的吸收峰波长之差△λ(称为对比
度)大于60nm。
2、显色条件的选择
确定了显色反应以后，还要确定合适的反应条件，这一般是通过实
验研究来确定的：
⑴、反应体系的酸度
对某种显色体系，最适宜的pH范围与显色剂、待测元素及共存组分的
性质有关。目前，仍然是通过实验来确定。其方法是保持其它实验条件
相同，分别测定不同pH条件下显色溶液和空白溶液相对于纯溶剂的吸光
度，显色溶液和空白溶液吸光度之差值呈现最大而平坦的区域，即为该
显色体系最适宜的pH范围。
⑵、显色剂的用量
为了使显色反应进行完全，一般需加人过量的显色剂。但显色剂不是
越多越好。对于有些显色反应，显色剂加入太多，反而会引起副反应，
对测定不利。在实际工作中，通常根据实验来确定显色剂的用量。
⑶、显色反应时间
有些显色反应瞬间完成，溶液颜色很快达到稳定状态，并在较长时
间内保持不变；有些显色反应虽能迅速完成，但有色配合物的颜色很快
开始褪色；有些显色反应进行缓慢，溶液颜色需经一段时间后才稳定。
因此，必须经实验来确定最合适测定的时间区间。实验方法为配制
制作吸光度-时间曲线，根据曲线来确定适宜时间。
⑷、显色反应温度
通常，显色反应大多在室温下进行。但是，有些显色反应必需加热至
一定温度才能完成。
⑸、溶剂
六、光度测量误差及测量条件的选择
1.光度测量误差
⑴、偏离朗伯—比耳定律所引起的误差
在实际工作中，经常出现标准曲线不呈直线的情况，特别是当吸光
这种情况称为偏离朗伯-比耳定律。若在曲线弯曲部分进行定量分析，将
会引起较大的误差。偏离朗伯-比耳定律的原因主要是仪器或溶液的实际
条件与朗伯-比耳定律所要求的理想条件不一致。
引起这种偏离的因素很多，大致可分为两类：一类是物理性的，即
仪器性的因素；另一类是化学性因素。
①物理性因素
物理性因素引起的偏离中最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。
②化学性因素
可能引起对朗伯-比耳定律的偏离。
⑵、仪器测量误差
仪器测量误差可能来源于光源不稳定、实验条件的偶然变动、读数
不准确及仪器噪音等。其中透光度与吸光度的读数误差是衡量测定结果
的主要因素。也是衡量仪器精度的主要指标之一。在实际测定时，只有
使待测溶液的透光度T在15%～65％之间，或使吸光度A在0．2～0．8
之间，才能保证浓度测量的相对误差较小(∣E
r∣<4％)。当透光度
T=36.8％或A=0.434时，浓度测量的相对误差最小。
2、测量条件的选择
⑴、选择适当的入射光波长
根据吸收曲线，以选择被测组分具有最大吸收时的波长(λmax)
的光作为入射光，这称为“最大吸收原则”。选用λ
max
不仅灵敏度高，而且能减少或消除由非单色光引起的对朗伯一比耳定律
的偏离。但是若在λmax处有其他吸光物质干扰测定时，则应根据“吸收最
大，干扰最小”的原则来选择测量波长，即可选用灵敏度稍低但能避开
干扰的入射光进行测定。
⑵、控制合适的吸光度读数范围
前面已指出，吸光度在0.2～0.8时，测量结果的准确度较高，
一般应控制标准溶液和被测试液的吸光度在0.2～0.8范围内。可通过控
制溶掖的浓度或选择不同厚度的吸收池(比色皿)来达到目的。
⑶、选择适当的参比溶液
它可以消除由于吸收池壁及溶剂、试剂对入射光的反射和吸收带来的误
差，并可扣除干扰的影响。参比溶液的选择方法如下：
a.如果仅待测物与显色剂的反应产物有色时，可用纯溶剂作参比溶
液，称为“溶剂空白”。一般用蒸馏水作参比溶液。
b.当样品溶液无色，而显色剂及试剂有色时，
试剂的溶液作参比溶液，称为“试剂空白”。
c.当样品溶液中其他离子有色，而试剂、显色剂无色时，应采用不加
显色剂的样品溶液作参比溶液，称为“样品空白”。
此外，有时可改变加入试剂的顺序，使待测组分不发生显色反应，
可以用此溶液作为参比溶液。总之，选择参比溶液总的原则是，使试液
的吸光度真正反映待测组分的浓度。
七、吸光光度分析的应用
分光光度法广泛地应用于微量组分的测定，也能用于多组分和常量
组分的测定。同时还用于研究化学平衡、配合物组成及弱酸(或弱碱)离
解常数的测定等。这里仅简单介绍高含量组分和多组分的测定。
1、示差吸光光度法
2、多组分的测定
例题：
例1、某有色溶液在1cm 比色皿中的A=0.400。将此溶液稀释到原浓度的一半后，转移至3cm 的比色皿中。计算在相同波长下的A 和T 值。
解：设b 1=1cm ，b 2=3cm ，A 1=0.400，C 2=0.5C1，A 2=?
A 1=εb 1C 1，A 2=εb 2C 2，得A 2=0.60%2510106.02
===--A T
o
-1
-1
3
4
以除去干扰物质，然后加入显色剂，将体积调至50.00mL.
此溶液在510nm 处吸光度为0.467
，在656nm 处吸光度为0.374
，吸收池厚度为1cm 。计
算钴镍在土壤中的含量（以
μg ·g -1
表示）。
解：根据题意列出方程组A 1
=ε1x bC x
+ε1Y bC
y ，A
2=ε2X bC
x +ε2Y
bC y
已知：A 1=0.476
，A 2=0.374；ε1x =3.64×104，ε2X =1.24×103，ε1Y =5.52×103ε2Y =1.75×104 解得C x =0.96×10-5mol ·L -1，C y =2.07×10-5mol ·L -1
M x =[C x ×0.05×2×58.9332]/0.376=152μg ·g -1；
M y =[C y ×0.05×2×58.6934]/0.376=323μg ·g -1
例3、以邻二氮菲光度法测定Fe (Ⅱ)，称取试样0.500g ，经处理后，加入显色剂，最后定容为50.0mL ，用1.0 cm 吸收池在510 nm 波长下测得吸光度A=0.430，计算试样中的w(Fe)(以百分数表示)；当溶液稀释一倍
后透射比是多少？（ε510=1.1×104） 解：540.430(Fe) 3.9101.0 1.110A c b ε-===???
353(Fe)50.010(Fe)(Fe)100%0.5003.91050.01055.85 100%0.022%0.500c M w ---???=?????=?= 溶液稀释一倍，
430.0
例4、有一浓度为 2.0×10-4mol ·L -1的某显色溶液，当b
1=3cm 时测得
A
1=0.120。将其稀释一倍后改用b 2=5cm 的比色皿测定，得A 2=0.200（λ
相同）。问此时是否服从朗伯-比尔定律？
解：假设此时符合朗伯—比尔定律，A=εbc ，则摩尔吸光系数
4
1111100.23120.0-??==c b A ε=200，42222100.15200.0-??==c b A ε=400
因为ε1≠ε2，所以假使条件不成立，即此时不符合朗伯—比尔定律
★ 练习题：
一.判断题:
1.有色溶液的透光率随着溶液浓度增大而减小，所以透光率与溶液浓度成
反比关系。（ ）
2.在分光光度法中，根据在测定条件下吸光度与浓度成正比的朗伯-比尔
定律的结论，被测定溶液浓度越大，吸光度也越大，
（ ）
3.因为透射光（或反射光）和吸收光按一定比例混合而成白光，故称这两
种光为互补色光。（ ）
4.在实际工作中，应根据光吸收定律，通过改变吸收池厚度或待测溶液浓
度，使吸光度的读数处于0.2～0.7
（ ）
5.
溶液的吸光度与吸光物质的浓度和液层厚度的乘积成正比。（ ）
二、选择题:
1、一有色溶液对某波长光的吸收遵守朗伯-比尔定律。当选用2.0cm 的
比色皿时,测得透射比为T ,若改用1.0cm 的吸收池,则透射比应为
A 、2T
B 、T /2
C 、T 2
D 、T 1/2
2、符合朗伯-比尔定律的一有色溶液,当有色物质的浓度增加时,最大吸
收波长和吸光度分别是( )
A.不变、增加
B.不变、减少
C.增加、不变 D 减少、不变
3、以下说法错误的是( )
A 摩尔吸光系数ε随浓度增大而增大；
B 吸光度A 随浓度增大而增大
4、有一化合物在某一波长处吸收系数很大，则表示（）：
A测定该化合物时灵敏度不高B该化合物在测定波长处透光率很高
C该化合物对测定波长处的光吸收能力很强
D该化合物测定时溶液的浓度很高E测定时光程很长
5、用普通分光光度法测得标液C
1的透光度为20%，试液的透光度为12%若以示差吸光光度法测定，以C
1为参比，则试液的透光度为（）
A、40%
B、50%
C、60%
D、70%
6、在吸光光度分析中，常出现标准曲线不通过原点的情况，下列说法中
不会引起这一现象的是（）
A、待测溶液与参比溶液所用比色皿不一样；
B、参比溶液选择不当
C、显色反应的灵敏度太低；
D、显色反应的检测下限太高。
三、填空题:
1、以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，测量某物质对不同波长光的吸收
程度，所获得的曲线称谓；光吸收最大处的波长叫做，
可用符号表示。
2、吸光光度法中测量条件的选择应注意，、、等几点。
3、吸光光度法中,吸光度读数为 ,浓度测量误差最小,此时透
光率为。
4、用普通吸光光度法测得标液c
1的透射比为20%,试液透光率为12%。若以示差法测定,以标液c
1作参比,则试液透光率为_____,相当于将仪器标
尺扩大______倍。
5、在相同条件下,测定某物质浓度,当浓度为c时,T=80%,若浓度为2c
时,T=______。
四.计算题:
2、某亚铁螯合物的摩尔吸收系数为12000L/(moL·cm),若采用1.00cm的
吸收池,欲把透光率读数限制在0.200至0.650之间,分析的浓度范围是多
少?
3、某吸光物质X的标准溶液浓度、为1.0×10-3mol·L-1，其吸光度A=0.699
一含X的试夜在同一条件下测量的吸光度为A=1.000。如果以上述标准溶
液作参比，试计算：⑴试夜的吸光度为多少？⑵用两种方法测得的T值各
为多少？
**** 方法验证报告 方法名称:《生活饮用水标准检验方法金属指标》GB/T5750.6- 2006 铝铬天青S分光光度法 项目负责人： 报告编写人： 报告日期：
目录 1方法概要 (3) 1.1目的 (3) 1.2测定原理 (3) 2 仪器与化学试剂 (3) 2.1仪器 (3) 2.2试剂 (3) 3简要操作步骤 (3) 4方法确认程序 (4) 4.1 标准曲线的绘制： (4) 4.2 方法检出限： (4) 4.3方法精密度实验 (5) 4.4方法准确度实验： (6) 5评价与验证结论 (7) 5.1评价 (7) 5.1.1空白值最低检出限评价 (7) 5.1.2精密度评价 (7) 5.1.3准确度评价 (7) 5.2结论 (7)
1方法概要 1.1目的 根据实验室的检测能力和条件以及检测检验机构资质认定评审准则的要求，确认开展铝《生活饮用水标准检验方法金属指标》GB/T5750.6-2006 项目的检测能力，通过试验进行 分析总结，编制此方法验证报告。 1.2测定原理 在pH6.7~7.0范围内，铝在聚乙二醇锌基苯醚和溴代十六烷基吡啶的存在下与铬天青S 反应生成蓝绿色的四元胶输，比色定量。 2 仪器与化学试剂 2.1仪器 3简要操作步骤 取25.0mL于50mL具塞比色管中。 另取50mL比色管8支，分别加入铝标准使用溶液0mL，0.20 mL，0.50mL，1.00mL，2.00mL，3.00mL，4.00 mL和5.00 mL，加纯水至25mL。 向各管滴加1滴对硝基酚溶液，混匀，滴加氨水至浅黄色，加硝酸溶液至黄色消失，再
多加2滴。 加3.0 mL 铬天青S 溶液，混匀后加1.0 mL 乳化剂OP 溶液，2.0 mLCPB 溶液，3.0 mL 缓冲液，加纯水稀释至50 mL ，混匀，放置30min 。 于620nm 波长处，用2cm 比色皿以试剂空白为参比，测量吸光度。 绘制工作曲线，从曲线上查得样品中硫酸盐质量。用（1）式计算。 绘制标准曲线，从曲线上查出水样管中铝的质量。 计算 v m ）ρ（ Al -----------------------------（1） 式中：ρ（Al ）------水样中铝的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L ） m-----从标准曲线上查得的铝的质量，单位为毫克（μg ） V------水样体积，单位为毫克（mL ） 4方法确认程序 4.1 标准曲线的绘制： 取50mL 比色管8支，分别加入铝标准溶液0mL ，0.20mL ，0.50mL ，1.00mL ， 2.00mL ，3.00mL ，4.00 mL 和5.00mL 。各加纯水至25mL 。 4.2 方法检出限： 参考《环境监测 分析方法标准制修订技术导则》（HJ 168-2010），按照样品分析的全部步骤，若能测试目标物质，重复7次空白试验，将各测定结果换算为样品中的浓度或含量，计算7次平行测定的标准偏差，按HJ 168-2010 A.1.1中公式(A.1)计算方法检出限。 若空白中未检出目标物质，参考《环境监测 分析方法标准制修订技术导则》（HJ 168-2010），为了能反映分析方法在整个分析处理过程的误差, 配置浓度为预期方法检出限3倍（一般规定是2～5倍）的样品，按照给定分析方法的全过程进行处理和测定，共进行7次平行测定，计算7次平行测试的标准偏差，按照HJ 168-2010 A.1.1中公式(A.2)(A.3)计算出检
第七章分光光度法 分光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。（在选定波长下，被测定溶液对光的吸收程度与溶液中吸光组分的浓度有简单的定量关系）。根据被利用的光波长范围可分为可见、紫外、红外光谱法。利用可见光进行分光光度分析时，通常将被测定组分通过化学反应转变成有色化合物，然后进行吸光度的测量。因此分光光度法在一定意义上使用着比色法，吸光光度法等名词，本章重点讨论可见分光光度法。 一、分光光度法 （一）光的基本性质 光是电磁波。其波长范围很广，如果以波长或频率为序排列可得到如下电磁波谱图。 光谱名称波长范围跃迁类型分析方法 X—射线远紫外光近紫外光可见光近紫外光中红外光远红外光微波 无线电波0.1—10nm 10—200nm 200—400nm 400—760nm 0.76—2.5μm 2.5—5.0μm 500—1000μm 0.1—100cm 1—1000m K.L层电子 中层电子 价电子 分子振动 分子振动和低位 转动 分子振动 X—射线光谱法 真空紫外光度法 紫外可见光度法 比色可见光度法 近红外光谱法 中红外光谱法 远红外光谱法 微波光谱法 核磁共振光谱法 光有微粒二象性，波动性是指光按波的形式传播。如光的折射、衍射、偏振和干涉等，光的波长λ，频率γ与速度c的关系为： λγ = c 式中λ以cm表示，γ以Hz表示，c为光速2.7979×1010cm/s（真空中） 光同时又具有粒子性，如电效应就明显地表现其粒子性。 光是由“光微粒子”（光量子或光子）组成的，光量子的能量可表示为 γh E=h为普朗克常数6.6262×10-34J.S 可见上式把光的波粒两相性用h统一起来了。 结论：不同波长（或频率）的光，其能量不同，短波的能量大，长波的能量小。（二）物质对光的吸收 吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。 原子吸收光谱是由原子外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波而引起的。原子吸收分光光度法就是根据原子的这种性质所引起来的。分子吸收光谱比较复杂。这是由分子结构的复杂性引起的，在同一电子能级中有几个振动能级，而在同一振动能级中又有几个转动能级，电子能级之间的能量差一般为1~20电子伏特。因此，电子能级跃迁而产生的吸收光谱，位于紫外-可见光部分。这种又价电子跃迁而产生的分光光谱称为电子光谱。 在电子能级变化时，不可避免地也伴随着分子振动和转动能级的变化，因此，分子的电子光谱通常比原子的线状光谱复杂的多，呈带状光谱。如果用近红外线
生活饮用水标准检验方法金属指标铝铬天青S分光光度法 1.范围 本标准规定了用铬天青S分光光度法测定生活饮用水及其水源水中的铝。 本法适用于生活饮用水及其水源水中铝的测定。 本法的最低检测质量为0.20μg，若取25mL水样，则最低检测质量浓度为 0.008mg/L。 水中铜、锰、及铁干扰测定。1mL抗坏血酸（100g/L）可消除25μg铜、20μg锰的干扰。2mL巯基乙酸醇（10g/L）可消除25μg铁的干扰。 2.原理 在pH6.7~7.0范围内，铝在聚乙二醇辛基苯醚（OP）和溴代十六烷基吡啶（CPB）的存在下与铬天青S反应生成蓝绿色的四元胶束，比色定量。 3.试剂 3.1铬天青S溶液(1g/L） 3.2乳化剂OP溶液（3+100） 3.3溴代十六烷基吡啶（3g/L） 3.4乙二胺-盐酸缓冲液（pH6.7~7.0） 3.5氨水（1+6） ）=0.5mol/L] 3.6硝酸溶液[c（HNO 3 3.7铝标准储备溶液[ρ（Al）=1mg/mL] 3.8铝标准使用溶液[ρ（Al）=1μg/mL] 3.9对硝基酚乙醇溶液（1.0g/L） 4.仪器 4.1具塞比色管：50mL，使用前需经硝酸（1+9）浸泡除铝。 4.2酸度计 4.3分光光度计 5.分析步骤 5.1取水样25.0mL于50mL具塞比色管中。
5.2另取50mL 比色管8支，分别加入铝标准使用溶液 0mL,0.20mL,0.50mL,1.00mL,2.00mL,3.00mL,4.00mL 和5.00mL ，加纯水至25mL 。 5.3向各管滴加1滴对硝基酚溶液，混匀，滴加氨水至浅黄色，加硝酸溶液至黄色消失，再多加2滴。 5.4加3.0mL 铬天青S 溶液，混匀后加1.0mL 乳化剂OP 溶液，2.0mLCPB 溶液，3.0mL 缓冲液，加纯水稀释至50mL ，混匀，放置30min 。 5.5于620nm 波长处，用2cm 比色皿以试剂空白为参比，测量吸光度。 5.6绘制标准曲线，从曲线上查出水样管中铝的质量。 6. 水样中铝的质量浓度计算 V m Al )(ρ 式中： )(ρAl ——水样中铝的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L ） m ——从标准曲线上查的水样管中铝的质量，单位为微克（μg ） V ——水样体积，单位为毫升（mL ） 7. 精密度和准确度 5个实验室对浓度为20μg/L 和160μg/L 的水样进行测定，相对标准偏差均小于5%，回收率为94%~106%。
第二节分光光度法 (一)基础知识 分类号：P2-O 一、填空题 1．分光光度法测定样品的基本原理是利用朗伯—比尔定律，根据不同浓度样品溶液对光信号具有不同的，对待测组分进行定量测定。 答案：吸光度(或吸光性，或吸收) 2．应用分光光度法测定样品时，校正波长是为了检验波长刻度与实际波长的，并通过适当方法进行修正，以消除因波长刻度的误差引起的光度测定误差。 答案：符合程度 3．分光光度法测定样品时，比色皿表面不清洁是造成测量误差的常见原因之一，每当测定有色溶液后，一定要充分洗涤。可用涮洗，或用浸泡。注意浸泡时间不宜过长，以防比色皿脱胶损坏。 答案：相应的溶剂(1+3)HNO3 二、判断题 1．分光光度计可根据使用的波长范围、光路的构造、单色器的结构、扫描的机构分为不同类型的光度计。( ) 答案：正确 2．应用分光光度法进行试样测定时，由于不同浓度下的测定误差不同，因此选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，透光度在20％～65％或吸光值在0.2～0.7之间时，测定误差相对较小。( ) 答案：正确 3．分光光度法主要应用于测定样品中的常量组分含量。( ) 答案：错误 正确答案为：分光光度法主要应用于测定样品中的微量组分。 4．应用分光光度法进行样品测定时，同一组比色皿之间的差值应小于测定误差。( ) 答案：错误 正确答案为：测定同一溶液时，同组比色皿之间吸光度相差应小于0.005，否则需进行校正。 5．应用分光光度法进行样品测定时，摩尔吸光系数随比色皿厚度的变化而变化。( ) 答案：错误 正确答案为：摩尔吸光系数与比色皿厚度无关。 三、选择题 1．利用分光光度法测定样品时，下列因素中不是产生偏离朗伯—比
紫外分光光度法在药物分析中的应用 蒋贤森临床52 2152001037 摘要 药物分析是分析化学的一个重要应用领域，在药物分析工作中经常出现含复杂成分的药物或复方药物，对此经典的容量分析，重量分析等化学分析方法往往难于处理，一般都要借助于仪器分析方法，我国在药物分析方法上的研究经过几十年的发展已经有了很大的进步，用于药品质量控制的分析方法日益增多，使用的仪器类型日趋先进，并且仪器分析所占的比率越来越大，常用的仪器分析方法有紫外红外分光光度法气相色谱法液相色谱法毛细管电泳质谱法热分析法等，这些方法都有各自的特点和应用范围，紫外分光光度法由于具有方法简便灵敏度和精确度高重现性好可测范围广等明显优点，加之其仪器价格相对低廉易于维护因而越来越为分析工作者所重视，发展成为仪器分析方法中应用最广泛的方法以我国历版药典为例，紫外分光光度法的应用在其中占据很大的比例，高居各种仪器分析方法之首。虽然不断有新的分析方法出现，但紫外分光光度法因为具有灵敏度高快速准确等特点一直是制剂含量测定的首选方法，紫外分光光度法可广泛应用于分析合成药物，生物药品以及中药制剂等各种药物。 对紫外分光光度法，在飞速发展的现代药物分析领域中的可靠性
和作用作了总结，以大量的文献和数据说明紫外分光光度法仍然是有效可行的一种药物分析方法，紫外分光光度法发展到今天已经成为一种非常成熟的方法，衍生出许多种具体的应用方法如：双波长和三波长分光光度法差示分光光度法导数分光光度法薄层扫描紫外光谱法光声光谱法热透镜光谱分析法催化动力学分光光度法速差动力学分光光度法流动注射分光光度法以及化学计量学辅助的紫外分光光度法等等。 这些方法大都可用于药物分析的含量测定之中。 在此仅介绍其中的几种方法。 关键词：紫外分光光度法双波长三波长分光光度法差示分光光度法导数分光光度法 双波长三波长分光光度法 普通的单波长分光光度法要求试样透明无浑浊，对于吸收峰相互重叠的组分，或背景很深的试样分析往往难以得到准确的结果，双波长分光光度法简称双波长法，是在传统的单波长分光光度法的基础上发展起来的。使用二个单色器得到二个不同波长的单色光，它取消了参比池，通过波长组合在一定程度上能消除浑浊背景和重叠谱图的干扰，双波长法一般要求有二个等吸光度点，而三波长法，则只需在吸收曲线上任意选择三个波长 1 2 3 处测量吸光度，由这三个波长处的吸光度 A1 A2 A3计算 A A 与待测物浓度成正，因而可通过 A-C
比色法及分光光度法 第一节 一、填空题。 1.比色法及分光光度法同化学分析法比较具有___________、_____________、_____________、_______________等四个特点。 2.光的波长范围在___________称为可见光，波长小于__________称为紫外光，波长大于___________称为红外光。 3.____________通过三棱镜就可分解为____________________，这种现象称为光的色散。 4.光吸收程度最大外的波长叫做_____________，用_________表示。 5.同物质不同浓度的溶液λmax不变，具有____________的吸收曲线，不同物质具有__________的吸收曲线，可以此进行物质的___________。 6.物质呈现一定的颜色是由于___________。 7.同一物质不同浓度在一定波长处吸光度随浓度增加而________,这个特性可作为_________的依据。 二、选择题。 1.已知光的波长λ=800nm，则它应属于（） A、红光 B、紫光 C、红外光 D、紫外光 2.Fe（SCN）3溶液（红色）的吸收光颜色为（） A、红色 B、黄色 C、蓝色 D、蓝绿色 3.绿光的互补色为（） A、紫红色 B、橙色 C、绿蓝 D、蓝绿色 4.二苯硫腙的CCl4溶液吸收580~600nm范围的光，它显（）色。 A、绿色 B、蓝色 C、紫色 D、黄色 三、判断题。 1.白光是一种可见光。（） 2.同一物质不同浓度的有色溶液λmax不变。（） 3.在λmax处测定吸光度则灵敏度最高。（） 4.比色法及分光光度法同化学分析比较，准确度高，灵敏度低。（） 5.硫酸铜溶液因吸收了白光中的红色而呈现蓝色。（） 第二节光吸收定律 一、填空题。 1.光吸收定律又称_______，它表明当_______________垂直通过______________，溶液的吸光度A与______________及____________成______。其数学表达式为_______________。 2.偏离朗伯—比耳定律的因素有________、_________、_________、_______等四方面。 二、选择题。 1.某有色溶液，其他测定条件相同，若增加液层厚度，则其吸光度A( ) A、增加 B、不变 C、减小 D、不确定 2.某有色溶液，其他测定条件相同，若增加液层厚度，则其透射比T（） A、增加 B、不变 C、减小 D、不确定 3.若某有色溶液透射比为0.333，则其吸光度为（） A、0.333 B、0.500 C、0.666 D、0.478 4.若某溶液ε=1.1×104L\（mol·cm），с=3.00×10－5mol/L,b=2.0cm，则A为（） A、0.10 B、0.32 C、1.30 D、0.66 三、判断题。
4.14铝 4.14.1 范围 本方法规定了用铬天青S分光光度法测定生活饮用水及其水源水中的铝。 本法适用于生活饮用水及其水源水中铝的测定。 本法的最低检测质量为0.20μg，若取25mL水样，则最低检测质量浓度为0.008mg/L。 水中铜、锰、及铁干扰测定。1mL抗坏血酸（100g/L）可消除25μg铜、20μg锰的干扰。2mL巯基乙酸醇（10g/L）可消除25μg铁的干扰。 4.14.2. 原理 在pH6.7～7.0范围内，铝在聚乙二醇辛基苯醚（OP）和溴代十六烷基吡啶（CPB）的存在下与铬天青S反应生成蓝绿色的四元胶束，比色定量。 4.14.3. 试剂 4.14.3.1铬天青S溶液(1g/L） 4.14.3.2乳化剂OP溶液（3+100） 4.14.3.3溴代十六烷基吡啶（3g/L） 4.14.3.4乙二胺-盐酸缓冲液（pH6.7～7.0） 4.14.3.5氨水（1+6） 4.14.3.6硝酸溶液[c（HNO3）=0.5mol/L] 4.14.3.7铝标准储备溶液[ρ（Al）=1mg/mL]
4.14.3.8铝标准使用溶液[ρ（Al）=1μg/mL] 4.14.3.9对硝基酚乙醇溶液（1.0g/L） 4.14.4. 仪器 4.14.4.1具塞比色管：50mL，使用前需经硝酸（1+9）浸泡除铝。4.14.4.2酸度计 4.14.4.3分光光度计 4.14. 5. 分析步骤 4.14. 5.1取水样25.0mL于50mL具塞比色管中。 4.14. 5.2另取50mL比色管8支，分别加入铝标准使用溶液0mL,0.20mL,0.50mL,1.00mL,2.00mL,3.00mL,4.00mL和5.00mL，加纯水至25mL。 4.14. 5.3向各管滴加1滴对硝基酚溶液，混匀，滴加氨水至浅黄色，加硝酸溶液至黄色消失，再多加2滴。 4.14. 5.4加3.0mL铬天青S溶液，混匀后加1.0mL乳化剂OP溶液，2.0mLCPB溶液，3.0mL缓冲液，加纯水稀释至50mL，混匀，放置30min。 4.14. 5.5于620nm波长处，用2cm比色皿以试剂空白为参比，测量吸光度。 4.14. 5.6绘制标准曲线，从曲线上查出水样管中铝的质量。 4.14.6.计算 水样中铝的质量浓度计算 m ρ（Al）=V 式中：
艾科锐公司化学基础知识考试题 分光光度法 科室姓名成绩时间 一、单项选择题（20分） 1、一束___通过有色溶液时，溶液的吸光度与浓度和液层厚度的乘积成正比。（B ） A、平行可见光 B、平行单色光 C、白光 D、紫外光 2、________互为补色。（A ） A、黄与蓝 B、红与绿 C、橙与青 D、紫与青蓝 3、摩尔吸光系数很大，则说明_____（C ） A、该物质的浓度很大 B、光通过该物质溶液的光程长 C、该物质对某波长光的吸收能力强 D、测定该物质的方法的灵敏度低。 4、下述操作中正确的是_____。（C ） A、比色皿外壁有水珠 B、手捏比色皿的磨光面 C、手捏比色皿的毛面 D、用报纸去擦比色皿外壁的水 5、用邻菲罗啉法测定锅炉水中的铁，pH需控制在4~6之间，通常选择____缓冲溶液较合适。（D ） A、邻苯二甲酸氢钾 B、NH3—NH4Cl C、NaHCO3—Na2CO3 D、HAc—NaAc 6、紫外－可见分光光度法的适合检测波长范围是_______。（C ） A、400～760nm； B、200～400nm C、200～760nm D、200～1000nm 7、邻二氮菲分光光度法测水中微量铁的试样中，参比溶液是采用_____。（B ） A、溶液参比； B、空白溶液； C、样品参比； D、褪色参比 8、722型分光光度计适用于________。（A ） A、可见光区 B、紫外光区 C、红外光区 D、都适用 9、722型分光光度计不能测定________。（C ） A、单组分溶液 B、多组分溶液 C、吸收光波长＞800nm的溶液 D、较浓的溶液 10、下列说法正确的是________。（B ） A、透射比与浓度成直线关系； B、摩尔吸光系数随波长而改变； C、摩尔吸光系数随被测溶液的浓度而改变； D、光学玻璃吸收池适用于紫外光区 11、控制适当的吸光度范围的途径不可以是（C ） A、调整称样量 B、控制溶液的浓度 C、改变光源 D、改变定容体积12．双波长分光光度计与单波长分光光度计的主要区别在于（B ） A. 光源的种类及个数 B. 单色器的个数 C. 吸收池的个数 D. 检测器的个数 比尔定律的范围内，溶液的浓度、最大吸收波长、吸光度三者-在符合朗伯特13.的关系是（B ） A. 增加、增加、增加 B. 减小、不变、减小 C. 减小、增加、减小 D. 增加、不变、减小
铝铬天青S分光光度法 Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
4.14铝 4.14.1 范围 本方法规定了用铬天青S分光光度法测定生活饮用水及其水源水中的铝。 本法适用于生活饮用水及其水源水中铝的测定。 本法的最低检测质量为0.20μg，若取25mL水样，则最低检测质量浓度为0.008mg/L。 水中铜、锰、及铁干扰测定。1mL抗坏血酸（100g/L）可消除25μg 铜、20μg锰的干扰。2mL巯基乙酸醇（10g/L）可消除25μg铁的干扰。 4.14.2. 原理 在pH6.7～7.0范围内，铝在聚乙二醇辛基苯醚（OP）和溴代十六烷基吡啶（CPB）的存在下与铬天青S反应生成蓝绿色的四元胶束，比色定量。 4.14.3. 试剂 4.14.3.1铬天青S溶液(1g/L） 4.14.3.2乳化剂OP溶液（3+100） 4.14.3.3溴代十六烷基吡啶（3g/L） 4.14.3.4乙二胺-盐酸缓冲液（pH6.7～7.0） 4.14.3.5氨水（1+6） 4.14.3.6硝酸溶液[c（HNO3）=0.5mol/L] 4.14.3.7铝标准储备溶液[ρ（Al）=1mg/mL]
4.14.3.8铝标准使用溶液[ρ（Al）=1μg/mL] 4.14.3.9对硝基酚乙醇溶液（1.0g/L） 4.14.4. 仪器 4.14.4.1具塞比色管：50mL，使用前需经硝酸（1+9）浸泡除铝。 4.14.4.2酸度计 4.14.4.3分光光度计 4.14. 5. 分析步骤 4.14. 5.1取水样25.0mL于50mL具塞比色管中。 4.14. 5.2另取50mL比色管8支，分别加入铝标准使用溶液0mL,0.20mL,0.50mL,1.00mL,2.00mL,3.00mL,4.00mL和 5.00mL，加纯水至25mL。 4.14. 5.3向各管滴加1滴对硝基酚溶液，混匀，滴加氨水至浅黄色，加硝酸溶液至黄色消失，再多加2滴。 4.14. 5.4加 3.0mL铬天青S溶液，混匀后加 1.0mL乳化剂OP溶液，2.0mLCPB溶液，3.0mL缓冲液，加纯水稀释至50mL，混匀，放置30min。 4.14. 5.5于620nm波长处，用2cm比色皿以试剂空白为参比，测量吸光度。 4.14. 5.6绘制标准曲线，从曲线上查出水样管中铝的质量。 4.14.6.计算 水样中铝的质量浓度计算 ρ（Al）
铬天青-S分光光度法测定水中铝含量方法改进 【摘要】改进水中铝的测定条件结果，改进后铝的浓度在0.05ug/ml～0.25ug/ml范围内，其标准系列线性良好，相关系数r=0.9998，结论：改进铝的测定方法，操作简单、快速、保障测定结果的准确度。 【关键词】铝铬天青-S 水最佳吸收波长 水中铝的测定通常采用国标法中的分光光度法，通过控制溶液的酸度（pH=5.5～6.1），以铬天青-S为显色剂，显色半小时后，于λ=545nm、L=1cm、空白溶液作参比，测定其吸光度。因为该方法中铬天青本身具有颜色，在显色反应中剩余量又各不相同，故实验结果线性不理想，相关系数r﹤0.999。本人通过Al-铬天青-S和铬天青-S的吸收曲线，其它操作条件不变的情况下，通过改变测量波长，使工作曲线的线性有明显好转，相关系数达到r=0.99983，以此提高分析结果的准确度。 1 实验部分 1.1 仪器 分光光度计—普析通用新世纪PHS-3D型酸度计 数显电热恒温水浴锅 1.2 试剂 抗坏血酸溶液（10g/L），用时现配 六次甲基四胺溶液（300g/L） 铬天青-S乙醇溶液（0.3g/L）：称取0.30g铬天青-S置于洗净的烧杯中，加水和无水乙醇各约25ml，搅拌溶解后，加约475ml水，最后用无水乙醇稀释到1000ml，混匀后贮存于棕色瓶中。 铝标准贮存溶液（250ug/ml）：精称0.2500g金属铝片（分析纯）置于聚乙烯杯中，加约20ml水，加3.0g氢氧化钠，待反应速度缓慢后，将聚乙烯杯置于水浴上加热至试样溶解完全。用（1+1）盐酸缓慢中和至出现沉淀后，加入过量20ml （1+1）盐酸，加热至溶液澄清，冷却。将溶液转移至1000ml容量瓶中，用水稀释到刻度线，混匀。 铝标准溶液（5ug/ml）：移取10.00ml铝标准贮存溶液于500ml容量瓶中，加4.0ml（1+1）盐酸，用水稀释至刻度线，混匀。
第十章 吸光光度法 吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。 吸光光度法或光度分析根据入射光的波长范围可分为紫外吸收光谱法、可见分光光度法、红外光谱法。可见吸光光度法又分为比色法（光电比色法和目视比色法）和分光光度法。 目视比色法：基于有色物质溶液颜色的深浅与其浓度有关，浓度愈大，颜色愈深。通过与标准色阶比较颜色深浅的方法确定溶液中有色物质的含量。目视法仪器简单，操作简便，但灵敏度和准确度不如分光光度法，只是在一些准确度要求不高的分析中仍有一定的实用性。如果用光电比色计代替人眼观察，则为光电比色法。 分光光度法：如果是使用分光光度计，利用溶液对单色光的吸收程度来确定物质含量，则称为分光光度法。 分光光度法灵敏度较高，可不经富集直接测定低至5510%-?微量组分。一般情况下，测定浓度的下限也可达0.11()g ppm g μ，相当于含量为0.001% 0.0001%的微量组分。 如果是采用高灵敏度的显色试剂，或事先将待测组分加以富集，甚至可能测定低至 6710%10%--的组分。 虽然光度法的准确度相对于重量分析法和滴定分析法要低得多，通常分光光度法的相对误差为2%5%（比色法为5%20%），但这已经能满足一般微量组分测定准确度的要求。若用差示分光光度法，其相对误差甚至可达0.5%，已接近重量分析法和滴定分析法的误差水平。相反滴定分析法或重量分析法却难于完成这些微量组分的测定。 光度分析技术比较成熟，所需仪器相对廉价，操作简便易行，已广泛用于工农业生产和生物、医学、临床、环保等领域。几乎所有的金属元素和众多的有机化合物都可用光度法测定。 我们主要学习可见分光光度法。 §10.1物质对光的选择性吸收 一、光的基本性质 光是一种电磁波，具有波动性和微粒性。 光的折射、衍射、偏振和干涉等现象可用光的波动性来解释。描述波动性的重要参数是波长（cm ），频率ν（Hz ）。它们与光速的关系是： c νλ = 真空中101310c cm s -=? 光电效应、光的吸收和发射等，只能用光的微粒性才能解释，即把光看作是带有能量的微粒流。这种微粒称为光子或光量子。单个光子的能量E 决定于光的频率。 c E h h νλ == E 为光子的能量（J ），h ：普朗克常数（346.62610J s -?） 理论上，将仅具有某一波长的光称为单色光，单色光由具有相同能量的光子组成。由不同波长的光组成的光称为复合光。 当人为地按照波长将电磁波划分为不同的区域时，得到电磁波谱或光谱（见表10-1）。
4.14铝 欧阳光明（2021.03.07） 4.14.1 范围 本方法规定了用铬天青S分光光度法测定生活饮用水及其水源水中的铝。 本法适用于生活饮用水及其水源水中铝的测定。 本法的最低检测质量为0.20μg，若取25mL水样，则最低检测质量浓度为0.008mg/L。 水中铜、锰、及铁干扰测定。1mL抗坏血酸（100g/L）可消除25μg铜、20μg锰的干扰。2mL巯基乙酸醇（10g/L）可消除25μg 铁的干扰。 4.14.2. 原理 在pH6.7～7.0范围内，铝在聚乙二醇辛基苯醚（OP）和溴代十六烷基吡啶（CPB）的存在下与铬天青S反应生成蓝绿色的四元胶束，比色定量。 4.14.3. 试剂 4.14.3.1铬天青S溶液(1g/L） 4.14.3.2乳化剂OP溶液（3+100）
4.14.3.3溴代十六烷基吡啶（3g/L） 4.14.3.4乙二胺-盐酸缓冲液（pH6.7～7.0） 4.14.3.5氨水（1+6） 4.14.3.6硝酸溶液[c（HNO3）=0.5mol/L] 4.14.3.7铝标准储备溶液[ρ（Al）=1mg/mL] 4.14.3.8铝标准使用溶液[ρ（Al）=1μg/mL] 4.14.3.9对硝基酚乙醇溶液（1.0g/L） 4.14.4. 仪器 4.14.4.1具塞比色管：50mL，使用前需经硝酸（1+9）浸泡除铝。 4.14.4.2酸度计 4.14.4.3分光光度计 4.14. 5. 分析步骤 4.14. 5.1取水样25.0mL于50mL具塞比色管中。 4.14. 5.2另取50mL比色管8支，分别加入铝标准使用溶液0mL,0.20mL,0.50mL,1.00mL,2.00mL,3.00mL,4.00mL和5.00mL，加纯水至25mL。 4.14. 5.3向各管滴加1滴对硝基酚溶液，混匀，滴加氨水至浅黄色，加硝酸溶液至黄色消失，再多加2滴。
第五章分光光度法 一、A 1、比吸收系数的含义是指 A、在一定波长下，溶液浓度为1％(v ／v)，厚度为1cm时的吸收度 B、在一定波长下，溶液浓度为1％(w ／v)，厚度为1cm时的吸收度 C、在一定波长下，溶液浓度为1％(w ／v)，厚度为1dm时的吸收度 D、在一定波长下，溶液浓度为1％(v ／v)，厚度为1dm时的吸收度 E、在一定波长下，溶液浓度为1g／ml，厚度为1cm时的吸收度 2、紫外-可见吸收光谱属于 A、电子跃迁光谱 B、分子振动光谱 C、发射光谱 D、荧光光谱 E、原子吸收光谱 3、紫外-可见分光光度计的检测器的作用是 A、检测是否有吸收 B、检测吸收强弱 C、将光信号转换成电信号 D、将光信号转换成数据 E、将光信息转换成比例关系的电信号 4、钬玻璃可用于 A、滤光片 B、单色器 C、吸收池 D、波长校正 E、吸收度准确性检定 5、当溶液的厚度不变时，吸光度的大小取决于 A、光的波长 B、溶液的浓度 C、光线的强弱 D、溶液的颜色 E、仪器的性能6、公式A=-lgT=Ecl中，A、T、E、c、 l分别表示 A、A-吸光度、T-透光率、E-吸收系数、 c-待测物浓度、l-液层厚度 B、A-吸光度、T-光源、E-吸收系数、 c-待测物浓度、l-光路长度 C、A-透光率、T-吸收度、E-吸收系数、 c-待测物浓度、l-液层厚度 D、A-吸光度、T-透光率、E-能量、c- 浓度、l-光路长度 E、A-透光率、T-吸收度、E-光波长度、 c-浓度、l-吸收系数 7、分光光度法的定量基础是 A、Nemst方程式 B、Van Deemter方程 C、布拉格方 程 D、朗伯比尔定律 E、拉斐尔定律 8、在紫外分光光度法中，供试品溶液 的浓度应使吸光度的范围在 A、0.1～0.3 B、0.3～0.7 C、0.3～0.5 D、0.5～0.9 E、0.1～0.9 9、分子的价电子吸收光的能量后，由 低能量的基态转变为高能量的激发态 的过程称为 A、激发 B、跃迁 C、突跃 D、红移 E、蓝移 10、可见光区的电磁波长范围是 A、50～500m B、100～200nm C、400～760nm D、200～400nm E、2.5～50nm 11、紫外光区的电磁波长范围是 A、200～400nm B、400～760nm C、100～200nm D、50～500nm E、0.76～2.5nm 12、紫外分光光度计常用的光源是 A、氘灯 B、钨灯 C、卤钨灯 D、Nernst灯 E、硅碳棒 13、紫外-可见分光光度计的基本结构 示意图是 A、光源→单色器→吸收池→检测器→ 数据记录与处理器 B、激发光源→单色器→样品池→单色 器→检测器→数据记录与处理器 C、光源→单色器→样品池→检测器 D、光源→样品池→单色器→检测器→ 数据记录器 E、光源→样品池→检测器→数据记录 与处理器 14、《中国药典》红外分光光度法的 应用主要是 A、鉴别 B、检查 C、含量测定 D、A+B E、B+C 15、有一羟基类物质，其红外光谱的 特征吸收峰为 A、3750～3000cm-1 B、3300～ 3000cm-1 C、3000～2700cm-1 D、2400～ 2100cm-1 E、1900～1650cm-1 16、用于官能团鉴别 A、紫外-可见分光光度法 B、红外分光光度法 C、直接电位法 D、x衍射光谱 E、荧光分析 17、《中国药典》规定采用红外光谱 法鉴别药物的具体方法为 A、对照品对照法 B、对照图谱法 C、光谱解析法 D、压片法 E、薄膜 法 18、腈基的红外特征吸收峰 A、3750～3000cm-1 B、3300～ 3000cm-1 C、3000～2700cm-1 D、2400～ 2100cm-1 E、1950～1900cm-1 19、红外分光光度计常用的检测器为 A、光电池 B、光电管 C、光电倍增 管 D、光二极管阵列 E、高莱池 二、B 1、A.能斯特灯B.玻璃吸收池 C.氢灯 D.石英吸收池 E.钨灯 <1> 、红外光谱仪的光源 <2> 、紫外分光光度计的光源常用 <3> 、紫外光区测定和可见光区测定 物质均可选用的吸收池是 <4> 、只能用于可见光区测定物质选 用的吸收池是 2、A.ε B. C.A D.L E.T <1> 、透光率<2> 、摩尔吸收系数 <3> 、被测溶液的厚度(cm) <4> 、比吸收系数 3、A.200～400nm B. C.400～760nm D.760～2500nm E.cm-1 <1> 、比吸收系数<2> 、紫外光
水中铝的铬天青S分光光度检测法 一、实验目的 了解紫外分光光度法检测的一般过程，初步掌握水中铝检测的S-络天青紫外分光光度法的操作流程，通过实验检测实际水样品中铝的含量，分析主要影响因素。 二、原理 测定生活饮用水中铝的目的是掌握水中铝的含量。铝是地球上含量最丰富的金属，分布广泛，地壳中铝的含量约为8%，仅次于氧和硅，居第3 位。水处理中使用铝盐混凝剂会导致出厂水中铝含量升高，供水管网中如果铝残余浓度很高在管壁上会形成铝的沉积，当出厂水铝浓度超过0.1 mg/L-0.2 mg/L时，将使管网水色度发生变化。饮用水中铝的来源比较复杂，主要有以下两方面：一是土壤中的铝进入水体；二是给水处理中采用的药剂如铝盐、石灰使出厂水余铝升高。铝是一种低毒且为人体非必需的微量元素，是引起多种脑疾病的重要因素，摄入过多可致老年性痴呆。 在pH为6.7-7.0的范围内，铝在聚乙二醇辛基苯醚（OP）和溴代十六烷基吡啶（CPB）的存在下与铬天青S反应生成蓝绿色的四元胶束，比色定量。 三、材料 1. 药品： 2. 玻璃仪器和耗材：烧杯，胶头滴管，玻璃棒，量筒，具塞比色管（50mL） 3. 仪器设备：紫外分光光度计，超声波清洗仪。 四、实验所需溶液配制步骤 1. 铬天青S溶液（1g/L）：称取0.1g铬天青S溶于100mL乙醇溶液（1+1）中，混匀。 2. 乳化剂OP溶液（3+100）：吸取 3.0mL乳化剂OP溶于100mL纯水中。
3. 溴代十六烷基吡啶（CPB）溶液（3g/L）：称取0.6gCPB溶于30mL乙醇（95%）中，加水稀释至200mL。 4. 氨水（1+6） 5. 乙二胺-盐酸缓冲液：取无水乙二胺100mL，加纯水200mL，冷却后，缓缓加入190mL盐酸，混匀 6. 硝酸溶液（0.5mol/L） 7. 铝标准储备液：称取8.792g硫酸铝钾溶于纯水中，定容至500mL。贮存于聚四氟乙烯或聚乙烯瓶中。 8. 铝标准使用液：临用时用铝标准储备溶液稀释而成（稀释为储备液的千分之一浓度）。 9. 对硝基酚乙醇溶液（1.0g/L）：称取0.1g对硝基酚，溶于100mL乙醇（95%）中。 五、分析步骤 1. 取水样25.0mL于50mL具塞比色管中。 2. 另取50mL比色管8支，分别加入铝标准使用液0、0.2、0.5、1.0、2.0、 3.0、 4.0和 5.0mL，加纯水至25mL。（这一步由指导老师完成） 3. 向各管加1滴对硝基酚溶液，混匀，加氨水至浅黄色，加硝酸溶液至黄色消失后，再多加2滴。 4. 加3.0mL铬天青S溶液，混匀，加1.0mL乳化剂OP，2.0mLCPB溶液，3.0mL 缓冲液，加纯水稀释至50mL，混匀，放置30min。 5. 于620nm波长处，用2cm比色皿以试剂空白为参比，测量吸光度。 6. 绘制标准曲线，从曲线上查出水样中铝的含量。 六、计算 水中铝的质量浓度计算： ρ（Al）= m/V ρ（Al）——水样中铝的质量浓度，mg/L; m——从标准曲线查得水样管中铝的质量，μg；
紫外-可见分光光度法在食品检测中的应用 关键词：紫外-可见分光光度法；紫外分光光度计；食品检测 引言：紫外可见分光光度计对于分析人员来说是最有用的分析工具之一，几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计，在食品检测中同样也是如此，它可以用来进行食品的多种成分分析和检测，应用十分广泛。 1．1 紫外可见分光光度法 紫外可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。 朗伯一比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当一束平行单色光通过单一均匀的、非散射的吸光物质溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度c和液层厚度b的乘机成正比： A=a×b×c(式中，a为吸光系数) 1．2 紫外可见分光光度计 紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。 各种型号的紫外可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由5个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。 1.2.1. 光源：提供入射光的装置； （1）钨灯或碘钨灯：发射光λ范围宽，但紫外区很弱，通常取此λ> 350nm 光为可见区光源 （2）氢灯或氘灯：气体放电发光光源，发射150~400nm的连续光谱， 用作紫外区，同时配有：稳压电源（稳定I0 ）；光强补偿装置；聚 光镜等。 1.2.2. 单色器：将来自光源的光按波长的长短顺序分散为单色光并能随意调节所需波长光的一种装置。 （1）色散元件——把混合光分散为单色光的元件是单色器的关键部分！）常用的元件有：棱镜——由玻璃或石英制成，它对不同λ的光有不同的折射率，将复合光分开。但：光谱疏密不均长λ区密，短λ区疏 光栅——由抛光表面密刻许多平行条痕（槽）而制成，利用光的衍射作用和干扰作用使不同λ的光有不同的方向，起到色散作用。（光栅色散后的光谱是均匀分布的）（2）狭缝——入口狭缝：限制杂散光进入出口狭缝：使色散后所需λ的光通过（3）准直镜——以狭缝为焦点的聚光镜其作用为：将来自于入口狭缝的发散光变成单色光把来自于色散元件的平行光聚集于出口狭缝 1.2.3. 吸收池：装被测溶液用的无色、透明、耐腐蚀的池皿光学玻璃吸收池——只能
综述 分光光度法在环境监测中的应用（1） 尹洧 （北京市化工环保监测站北京100022） 摘要本文综述了分光光度法的特点以及在环境监测中的应用，并就这方面的最新技术及进展作了介绍。 关键词分光光度法环境监测水和废水空气和废气室内空气 1．紫外可见分光光度法1 1.1概述 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律。即物质在一定波长的吸光度与它的吸收介质的厚度和吸光物质的浓度呈正比。 当分子中含有一个或更多的生色基团（即具有不饱和键的原子基团），辐射就会引起分子中电子能量的改变。常见的生色团有： C=O, -N=N-, -N=O, -C≡N, C=S 如果两个生色团之间只隔一个碳原子，则形成共轭基团，会使吸收带移向较长的波长处（即红移），且吸收带的强度显著增加。当分子中含有助色基团（有未共用电子对的基团）时，也会产生红移效应。常见的助色基团有：-OH, -NH2, -SH, -Cl, -Br, -I。 紫外可见分光光度法从问世以来，在应用方面有了很大的发展，尤其是在相关学科发展的基础上，促使分光光度计仪器的不断创新，功能更加齐全，使得光度法的应用更拓宽了范围。目前，分光光度法已为工农业各个部门和科学研究的各个领域所广泛采用，成为人们从事生产和科研的有力测试手段。我国在分析化学领域有着坚实的基础，在分光光度分析方法和仪器的制造方面在国际上都已达到一定的水平。 1.2特点 分光光度法对于分析人员来说，可以说是最有用的工具之一。几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计。分光光度法的主要特点为： （1）应用广泛 由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收，因此均可借此法加以测定。到目前为止，几乎化学元素周期表上的所有元素（除少数放射性元素和惰性元素之外）均可采用此法。
《仪器分析》课程单元教学设计 情境有色、无色可显色物质的分析 任务可见分光光度法 教学目标设计 序号 4 上课地点理实一体 化教室 授课形式讲授、学生操作练习 教学目标 能力（技能目标）知识目标 1、邻二氮菲分光光度法测定微量铁； 2、邻二氮菲光度法测铁条件试验； 3、混合液中Co2+和Cr3+双组分的光度 法测定； 4、差示法测定样品中高含量镍； 5、配合物组成的光度测定； 6、分光光度法测定金属离子。 1、学习并掌握可见光谱的单组分体系的定量分 析，学会绘制工作曲线； 2、学习并掌握多组分体系的定量测定方法，学 会相关计算方法。 教学重点1、学习并掌握可见光谱的单组分体系的定量分析，学会绘制工作曲线； 2、学习并掌握多组分体系的定量测定方法，学会相关计算方法。 教学难点1、学习并掌握可见光谱的单组分体系的定量分析，学会绘制工作曲线； 2、学习并掌握多组分体系的定量测定方法，学会相关计算方法。 能力训练任务及案例 教师帮助学生对仪器的各个主要组成部件的功能、特点有深入的了解，并能正确操作仪器，能够将颜色、光、分析联系在一起的仪器，它从技术上达到了什么要求，能否满足我们探索之需？让学生在研究中认识仪器的功能、特点。引导学生多观察、多思考、多提问。
教学进程设计（下面各格均可合并） 步骤教学内容教学方法教学 手段 学生活动时间分配 可见光谱的单组分体系的定量分析引导学生探讨工作曲 线法、比较法的研究方 法。 教师举 例、点评、 归纳概括 引出知识 点。 任务 引导 绘制工作曲线，进行相关计 算。 45分钟 邻二氮菲分光光度法测定微量铁引导学生探讨如何配 制标准系列溶液，测定 吸光度，找出吸光度和 溶液浓度的关系。 学生在教师的指导下完成 操作练习，并绘制吸收曲 线、工作曲线，进行相关计 算。 180分钟 分光光度法测定金属离子引导学生探讨如何配 制标准系列溶液，测定 吸光度，找出吸光度和 溶液浓度的关系。 学生在教师的指导下完成 操作练习，并绘制吸收曲 线、工作曲线，进行相关计 算。 180分钟 多组分体系的定量测定方法引导学生探讨双组分 体系的光度法、差示 法。 双组分体系的光度法、差示 法的数据处理方法。 45分钟 混合液中Co2+和Cr3+双组分的光度法测定引导学生探讨如何配 制Co2+和Cr3+混合溶 液，测定吸光度，找出 吸光度和溶液浓度的 关系。 学生在教师的指导下完成 操作练习，并绘制吸收曲 线、工作曲线，进行相关计 算。 180分钟 差示法测定样品中高含量镍引导学生探讨如何配 制高含量镍的标准系 列溶液，找出吸光度和 溶液浓度的关系。 学生在教师的指导下完成 操作练习，绘制普通法、差 示法工作曲线，进行相关计 算。 180分钟 分光光度法的应用引导学生探讨配合物 组成的测定方法。 摩尔比法、连续变化法的图 谱绘制。 45分钟 配合物组成的光度测定1 引导学生探讨如何配 制摩尔比法系列溶液 学生在教师的指导下完成 操作练习，绘制摩尔比法曲 线，进行相关计算。 180分钟 配合物组成的光度测定1 引导学生探讨如何配 制连续变化法系列溶 液 学生在教师的指导下完成 操作练习，绘制摩尔比法曲 线，进行相关计算。 180分钟