1．临床微生物学的概念是什么？
临床微生物学是研究微生物的形态、结构、分类、生命活动规律的一门科学，包括细菌学、病毒学、真菌学等。是临床医学的基础之一，指导感染性疾病的诊断、治疗和预防。2．临床微生物学实验检查大概分几步骤？
①从患者标本分离培养微生物。②对标本中分离到的微生物进行培养、鉴定。
③进行药物敏感性试验，解释和预报结果。④阶段性分析药物敏感性实验，预测耐药趋势，监控和指导临床合理用药。
3．什么是感染性疾病及影响因素？
凡是由病原微生物引起的疾病统称为感染性疾病，而感染性疾病的发生主要与病原体的侵袭力及宿主的抵抗力密切相关。别外，临床上抗生素的大量滥用，引起了正常菌群失调和大量耐药菌株的出现，从而加重了机体的内源性感染机率，这一定程度又加重了感染性疾病的发生。
4．临床医师主要需要从临床微生物学实验室得到什么？
①能为临床提供医学决策的相关信息。②指导临床正确收集标本的原则。③安全及时的送检标本。④微生物的正确鉴定和药物敏感性试验结果。⑤能快速地报告实验结果，并做出相关的结果解释。⑥能及时反馈医院内细菌感染分布、耐药状况和流行趋势等。
5．临床医师应如何避免感染性疾病的爆发流行？
①遵循病原学诊断，避免无指症用药。②正确及时的采集标本，按要求及时送检微生物实验室检查。③重视实验室的鉴定及药敏结果，结合临床患者病情合理使用抗生素。④注意经验性治疗与靶向治疗相结合，依据病原学诊断及时调整治疗方案，改为针对性治疗。⑤加强同临床微生物实验室交流沟通，积极配合实验室做好院内感染监测、预防和控制工作。
6．临床标本采集的一般原则是什么？
①在最适宜的时间收集标本，最好在使用抗生素之前或感染急性期采集。②采集标本要有代表性和针对性，不同情况应区别对待，适宜地采取相应的方法收集标本，如尿液标本疑为厌氧菌感染时，应行耻骨上缘穿刺术取膀胱尿培养。③采集标本必须来自实际感染的部位，严格无菌操作尽可能避免外源性污染。④收集标本应当使用合适的收集器材、容器和培养基，以保证最大限度的发现微生物。
⑤标本采集、运送过程中要有专人负责，避免人为操作失误。⑥采集标本不仅要防止被污染，同时也要注意安全，防止传播和自身感染。
7．采集过程中需要加抗凝剂的标本应注意什么？
对任何容易形成凝块的标本都应使用抗凝剂，因为如微生物被已凝固的物质包围，生长较困难。另外，像胸水、腹水等液体标本一旦凝固，很难接种培养，直接影响微生物的培养鉴定。目前，微生物学标本最常用的抗凝剂是多聚茴香脑磺酸钠SPS（Sodium polyanethol sulfonate），但其浓度不得超过0.025%(W/V)，否则会抑制一些奈瑟菌和厌氧性链球菌的生长。肝素也是常用抗凝剂之一，主要用于病毒培养，因为它能抑制革兰氏阳性菌和酵母菌的生长。柠檬酸盐和乙二胺四乙酸通常不用于微生物学标本。
8．标本运送过程中应注意些什么？
标本采集后，除了要及时送检外，另外在运送过程中要注意尽量保持标本的原有性状。对于不能及时送检的要用专用运送培养基运送，而对一些含有脆弱细菌的标本，需加入特别的保存剂。例如，尿液中加入硼酸能有效地抑制细菌生长，较好的保持尿液中菌落的数量；粪便中加入磷酸盐缓冲液有助于保持粪便中像志
贺菌、沙门菌等的脆弱细菌。此外，甲醛溶液、绍丁溶液有助于保存寄生虫的滋养体和包囊，使其维持便于识别的形态。
9．如何采集血液标本及注意事项？
疑为菌血症或败血症时，一般情况下应在病人发热初期或发热高峰时采集，原则上应在抗菌治疗前尽早取血做细菌培养。若已用抗菌药物或疗效不佳时，在可能条件下停药24小时后再做血培养。连续做血培养3次，各次采血应在不同部位的血管穿刺，禁从静脉插管内抽血。当骨髓炎时或长期使用抗菌药物患者，抽取骨髓培养阳性率会远高于血液培养。对成人每瓶血培养应采血8～10ml，婴儿为1～2ml，儿童3～5 ml，骨髓为1～2 ml。如不能及时送检，应将已注血的培养瓶在室温存放，并不得超过12小时。注意事项：①不能用碘酒消毒瓶盖，只需70％酒精消毒瓶盖。②严格作好患者抽血部位的无菌操作。③同时作厌氧和需氧培养时应先将标本接种到厌氧瓶中，然后再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。④如不能及时送检应于室温存放，切勿放冰箱存放。
10．采集痰标本时应注意些什么？
当疑为呼吸道感染性疾病时，应让患者取晨痰送检。取痰前用清水反复漱口后用力自气管咳出第一口痰于灭菌容器内，立即送检。对于痰量少或无痰的患者可采用支气管镜或气管穿刺法取得。为了避免污染菌的干扰，最好连查3次。注意事项：①采集标本以清晨为佳，为减少口腔正常菌群污染标本，采集前应充分漱口。②取痰标本应是深部的痰液而不是唾液，否则会影响检查结果。③作结核分枝杆菌检查，痰量要多或留取24小时痰液，婴儿肺结核要用胃管取痰。④约有1／4～1／2肺部感染患者可能发生菌血症，应同时作血培养。⑤对一些特殊患者可采用支气管镜采集法及气管穿刺法取痰。
11．如何采集尿液标本及注意事项？
临床上有泌尿系统感染、肾结核、结石和无症状性菌尿等疾病指征时，通常应采集晨起第一次尿液（中段尿）送检。原则上应选择在抗菌治疗前采集，若已用药应停药一周后采集尿液送检。采集标本前，女性先以肥皂水清洗外阴部，再以灭菌水或1：1000高锰酸钾水溶液冲洗尿道口，然后排尿弃去前段尿，留取中段尿10ml左右于无菌容器内，立即加盖送检。男性先用肥皂水清洗尿道口，后用清水冲洗，就可采集中段尿。包皮过长者，为防止污染，可将包皮翻开冲洗，再取中段尿。疑为尿道炎时，可将最初3～4ml尿收集在灭菌容器中。如反复检查为同一细菌，也应考虑为病原菌。必要时可采用膀胱穿刺术取尿。注意事项：①尿液标本的采集和培养中最大的问题是污染杂菌，故应严格进行无菌操作。②尿液标本采集后应尽快送检（1－2小时内），否则会影响细菌检查的正确性。③多数药物均通过尿液排泄，因此，无论用何种方法采集尿液均宜在用药之前进行。
④尿液中不得含有防腐剂或消毒剂。⑤疑为结核分枝杆菌时，可用清洁容器，留24小时尿取其沉渣10～15 ml送检。
12．穿刺液包括哪些？采集中应注意些什么？
穿刺液主要包括脑脊液、胆汁、胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等。在正常人体中，上述体液均是无菌的，有感染的情况下检出的细菌，应视为病原菌，应给予及时正确的治疗。怀疑为脑膜炎的病人，用腰穿方法采集脑脊液2 ml左右，在常温下15分钟内送检。标本不可置冰箱内保存，否则会使病原菌死亡。胆汁及其它穿刺液采集到无菌针管或无菌试管内立即送检。注意事项：①标本采集应在用药之前。②严格无菌操作，避免污染。③作脑脊液培养时，建议同时作血培养。④为防止穿刺液的凝固，最好在无菌试管中先加入灭菌肝素。
13．创伤和化脓性标本采集方法是什么？
软组织的急性化脓性炎症、化脓性疾病、脓肿和创伤感染等疾病可根据临床要求取标本送检。对开放性感染和已溃破的化脓灶，标本采集前先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，再用灭菌拭子采取脓液及病灶深部的分泌物。如为慢性感染，污染严重，很难分离到致病菌，可取感染部位下的组织，研磨成组织匀浆后送检。闭锁性脓肿可行手术引流或穿刺法取标本于灭菌容器或灭菌注射器内送检。注意事项：①尽可能在用药前采集标本，采集前一定要作好清洗、消毒工作。
②不能立即送检的标本，应放4℃保存；培养淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌的标本除外。③深部脓肿常由包括厌氧菌在内的混合细菌感染所致, 若有条件应作厌氧菌培养，采集标本应遵守厌氧菌感染标本的采集原则。
14．粪便标本培养应如何采集？
腹泻为大便送检的重要指征，婴幼儿和小儿可见高热惊厥。当疑为细菌性痢疾、肠炎、肠结核和顽固性腹泻时，应在急性期采集，亦最好在用药之前，以提高检出率。肠热症患者应在两周以后采集。采用自然排便法或直肠拭子法，挑取有脓血，粘液部位的粪便2－3ｇ置于无菌容器中送检。注意事项：①为提高检出率，要采集新鲜粪便作培养。②腹泻病人应尽量在急性期采集标本（3天以内），以提高阳性率。③虽粪便含有多种杂菌，但应尽量采用无菌容器。
15．生殖道标本的采集原则和注意事项是什么？
当疑为生殖道感染性疾病时，首先排除是否有不洁性交史，然后根据症状确定检查方向。对于男性患者来讲，先检查尿道是否有脓性分泌物，再依次是前列腺液、精液。采集标本时应清洗尿道口，再用无菌拭子擦取尿道口脓性分泌物或深入尿道内2-4厘米取分泌物，检查精液患者应禁欲5天以上，采用体外排精法射精于灭菌容器送检。对于女性患者，先用窥器扩张阴道，然后用灭菌棉拭子取阴道后穹隆处或宫颈分泌物作培养或涂片镜检。注意事项：①生殖器是开放性器官，标本采集过程中应遵循无菌操作以减少杂菌污染。②阴道内有大量正常菌群存在，采取宫颈标本应避免触及阴道壁。③疑产妇有宫腔感染，待胎儿娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送检。④沙眼衣原体在宿主细胞内繁殖，采集时尽可能多的取上皮细胞。
16．哪些标本不能作厌氧菌培养及如何运送标本？
痰、支气管镜采样(无特殊保护套)、咽拭子、排出的尿及阴道拭子不能做厌氧菌培养，粪便标本厌氧菌培养，只能做难辨梭菌的培养。在运送中最常用的是注射器运送法，此外还有无氧小瓶运送法、棉拭运送法、组织块运送法、大量标本运送法。标本采集后应尽快送到实验室，最迟不超过半小时。标本不应放在冰箱里，因为低温对一些厌氧菌有害。
17．细菌的超微形态及革兰氏阳性和阴性菌的区别如何？
细菌是一类原核细胞型微生物，体积微小，基本形态有球形、杆形和螺形三种。之所以称原核是指其核则不是一个具体的结构，没有核膜。细菌的基本结构包括细胞壁、细胞膜、细胞浆、核质和胞浆颗粒等。除动物细胞无细胞壁外，各类生物的细胞具有不同的细胞壁。例如，植物的细胞壁由纤维素构成，霉菌的细胞壁则为几丁质，细菌细胞壁的成分为肽聚糖、垣酸和脂多糖。革兰氏阳性菌细胞壁厚，肽聚糖骨架通过四肽侧链和五肽桥连接成为三维空间。不含有芳香氨基酸和含硫氨基酸。革兰氏阴性细菌的细胞壁薄，除少量肽聚糖构成细胞壁的内层外，由大量脂多糖构成其外层，并有脂蛋白形成镶嵌结构，其中含有芳香氨基酸和含硫基酸。
18．细菌的特殊结构都有哪些？其功能是什么？
细菌的特殊结构主要有鞭毛、菌毛、荚膜和芽胞。鞭毛是细菌的运动器官，由简单的角蛋白–肌蛋白组成。菌毛分为普通菌毛及性菌毛两种，普通菌毛能与宿主细胞表面的菌毛受体相结，发挥粘附作用，而性菌毛中空呈管状，能在细菌之间通过接合传递遗传物质，故性菌毛与细菌的遗传变异有关。荚膜是细胞壁外的一层多糖物质具有抗原性，能抵抗机体吞噬细胞的吞噬作用。芽胞是某些细菌的繁殖体，在一定环境条件下，由于胞浆脱水浓缩而成一个圆形或卵圆形小体，具有多层膜结构，对外界理化因素抵抗力强，可潜伏数年或几十后重新繁殖生长。19．什么是L型细菌？其形成原因？
L型细菌是一类细胞壁缺陷的细菌，形态各异大小不一，染色时不易着色，且着色不均匀，革兰阳性菌和革兰阴性菌均可形成，又称为“原生质体和原生质球”，凡能破坏肽聚糖结构都可诱导细菌形成L型，其表现为具有明显的多形性，革兰染色阴性，能通过细菌滤器，对渗透压敏感。L型细菌的主要意义在于仍有致病性，能引起间质性炎症。而且是临床上感染漏诊的主要原因之一。
20．脂多糖由哪几部分组成？其功能是什么？
脂多糖是由类脂和多糖组成，是革兰阴性菌的内毒素，包括类脂A、核心多糖和特异多糖等三部分。类脂A是内毒素的毒性分子，与细菌的致病性有关，无种属特异性，故不同的革兰阴性菌感染时，其毒性大致相同。核心多糖具有细菌属和组的特异性，同一属和组的细菌，其核心多糖均相同。特异性多糖是脂多糖的最外层，构成重要的菌体表面抗原，从而决定了种或型的特异性。
21．如何才能更好的发现和鉴定微生物？
首先，选择适合特定标本类型的初次培养基，为了发现所有潜在的重要致病菌，还应选择适当的孵育温度和气体。其次，对初次培养基上所发现的分离物应确定它们进一步鉴定的内容。最后，在已鉴定的细菌中确定哪种要进行抗微生物敏感性试验。
22．正常菌群的含义是什么？
人自出生后，外界的微生物就逐渐进入人体。在正常人体皮肤、粘膜及外界相通的各种通道（如口腔、鼻咽腔、肠道和泌尿道）等部位，存在着对人体无害的微生物群，包括细菌、真菌、螺旋体、支原体等。它们在与宿主的长期进化过程中，微生物群的内部及其与宿主之间互相依存、互相制约，形成一个能进行物质、能量及基因交流的动态平衡的生态系统习惯称之为正常菌群（Normal flora）。正常菌群大部分是长期居留于人体的又称为常居菌，也有少数微生物是暂时寄居的，称为过路菌。
23．正常菌群的生理作用是什么？
①生物拮抗作用：正常菌群通过粘附和繁殖能形成一层自然菌膜,是一种非特异性的保护膜,可促机体抵抗致病微生物的侵袭及定植,从而对宿主起到一定程度的保护作用。正常菌群除与病原菌争夺营养物质和空间位置外，还可以通过其代谢产物以及产生抗生素、细菌素等起作用。可以说正常菌群是人体防止外袭菌侵入的生物屏障。②刺激免疫应答：正常菌群释放的内毒素等物质可刺激机体免疫系统保持活跃状态，是非特异免疫功能的一个不可缺少的组成部分。③合成维生素：有些微生物能合成维生素，如核黄素、生物素、叶酸、吡哆醇及维生素K 等，供人体吸收利用。④降解食物残渣：肠道中正常菌群可互相配合，降解末被人体消化食物残渣，便于机体进一步吸收。
24．什么是条件致病菌和菌群失调？
在一定条件下，正常菌群中的细菌也能使人患病：①由于机体的防卫功能减弱,引起自身感染。例如皮肤粘膜受伤（特别是大面积烧伤）、身体受凉、过度疲劳、长期消耗性疾病等，可导致正常菌群的自身感染；②由于正常菌群寄居部位的改变，发生了定位转移，也可引起疾病。例如大肠杆菌进入腹腔或泌尿道，可引起腹膜炎、泌尿道感染。因此，这些细菌称为条件致病菌。在正常情况下，人体和正常菌群之间以及正常菌群中各细菌之间，保持一定的生态平衡。如果生态平衡失调，以至机体某一部位的正常菌群中各细菌的比例关系发生数量和质量上的变化，称为菌群失调。
25．引起菌群失调的原因有哪些？
菌群失调的常见诱因主要是抗生素、同位素、激素的不合理使用，另外患有慢性消耗性疾病时肠道、呼吸道、泌尿生殖道的功能失常也是重要原因。去除诱因后一般可使菌群复常，也有长期失调难于逆转的情况。
26．临床上常见菌群失调症有哪些？
临床上常见的菌群失调症有：①耐药性葡萄球菌繁殖成优势菌而发生腹泻，偶尔发生致死性葡萄球菌脓毒血症；②变形杆菌和假单胞菌生长旺盛并侵入组织发生肾炎或膀胱炎；③白色念珠菌大量繁殖，引起肠道、肛门或阴道感染，也可发展成全身感染；④艰难梭菌在结肠内大量繁殖，并产生一种肠毒素及细菌毒素，导致假膜性肠炎。
27．常用培养基有哪几种？其成分主要是什么？
常用培养基有普通培养基、营养培养基、选择培养基和增菌培养基。培养基的主要成分有氮源、碳源、无机盐、水分及一些生长因子，它们主要为细菌的生长繁殖提供营养和生长环境。
28．通常培养基中根据需要可加入哪些抑制剂和指示剂？
依据细菌生长代谢特性，可选择性的加入某些抑制剂和指示剂。常用抑制剂有胆盐、煌绿、玫瑰红酸、亚硫酸钠、亚硒酸钠、某些染料以及多种抗生素物质。常用指示剂有酚红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、溴酚红、中性红、中国蓝、甲基红、酸性复红等。
29．标本接种技术有几种？
①平板接种法：初次接种成功后，连继划线或分四区划线接种。②液体接种法：将试管倾斜30度角，接种环触到试管的内壁研磨数次，然后让试管回复到原来的直立位置淹没接种部位，这样可以避免气泡的产生。③琼脂斜面接种法：首先将接种针插入斜面正中，垂直刺入底部，抽出接种针令其在斜面琼脂上作S形划线。④穿刺接种法：本法多用于双糖、半固体或明胶等高层培养基的接种，由培养基中央刺到距管底约半厘米处，然后沿穿刺线退出接种针。⑤倾注培养法：该法常用液体标本的细菌定量计数。方法是用无菌吸管吸取原标本或经适当稀释的标本各1 ml ，分别置于直径为9cm 的无菌平皿内，倾入已融化并冷至50 ℃左右的培养基约15 ml ，立即混匀待凝固后倒置于35±1 ℃培养18 ～24 小时，做菌落计数。
30.细菌产生耐药性的机制有哪些?
①细菌产生可破抗生素或使之失去抗菌作用的酶。如β-内酰胺酶、氨基糖苷类钝化酶、拓扑异构酶等。②对抗菌药物的渗透性降性。主要表现：外膜通透性降低及药物泵出系统。③抗生素作用靶位的改变。如细菌的青霉素结合蛋白改变，导致对β-内酰胺类抗生素的耐药。④代谢途径的改变。如在肠球菌培养基中加入亚叶酸，肠球菌利用亚叶酸后可对磺胺-甲氧嘧啶由敏感转为耐药。
31．β-内酰胺酶的分类及作用机制是什么？
β-内酰胺酶是一群酶，根据分子学结构可将其分为四群。①A群β-内酰胺酶为丝氨酸蛋白酶，主要作用于青霉素类药物，编码基因位于染色体或质粒上，可从一个细菌转移至另一个细菌。②B群β-内酰胺酶为金属酶，其活性部位为结合锌离子的硫醇基。③C群β-内酰胺酶主要是头孢菌素酶，存在于革兰氏阴性菌染色体上，可被诱导或重组。④D群β-内酰胺酶为苯唑西林酶。大量试验证实，β-内酰胺类抗生素和细胞壁前体的存在都可以诱导β-内酰胺酶的合成，其作用机制为β-内酰胺酶与催化细菌细胞壁肽聚糖合成的青霉素结合蛋白空间结构相似，可竞争性水解药物β-内酰胺环使酰胺键断裂而失去抗菌活性，其水解效率是细菌耐药性的主要决定因子。
32．临床上重要的β-内酰胺酶主要有哪几种？
①超广谱β-内酰胺酶，主要由克雷伯菌属和大肠埃希菌产生，对第三代头孢和氨曲南耐药，而对碳青霉烯类和头霉烯类敏感。②对β-内酰胺抑制剂敏感性下降的β-内酰胺酶，主要原因之一是菌株β-内酰胺酶的过度表达，另一机制就是产生诱导耐酶抑制剂的β-内酰胺酶，常表现对酶抑制剂复合药的敏感性下降，而对第一代头孢菌素敏感。③质粒介导的AMPC酶，常见于克雷伯菌、弗劳地枸椽酸杆菌、阴沟杆菌、奇异变形和蜂房哈夫尼菌等，表现对一代至三代头孢菌素、头霉素类、氨基糖苷类耐药，但对碳青霉烯类、四代头孢菌素和喹诺酮类敏感。
④水解碳青霉烯类的β-内酰胺酶，常见铜绿、鲍曼等非发酵菌属，表现以碳青霉烯类和单环β-内酰胺类抗生素为代表的多重耐药。
33．耐酶抑制的广谱β-内酰胺酶的产生机制是什么？如何筛选鉴别？
大量含酶抑制复合药的使用，可诱导原本对酶抑制剂敏感的酶大量产生，使细菌对酶抑制剂的敏感性下降；另一机制产生了源于TEM-1、TEM-2、SHV-1和OXY-2的耐酶抑制剂的β-内酰胺酶(IRT)，大肠埃希菌最易产生IRT。区分是TEM-1、TEM-2或SHV-1的大量表达还是IRT，可用头孢菌素敏感试验鉴别，纸片法表型为阿莫西林和替卡西林耐药，对阿莫西林/克拉维酸和替卡西林/克拉维酸中介或耐药，而对头孢菌素敏感。
34．常用β-内酰胺酶抑制剂有哪些？又有何区别？
β-内酰胺酶抑制剂与β-内酰胺酶有较高的亲和性，以竞争性和不可逆的抑制方式发挥作用，与β-内酰胺类抗生素联用能增强后者的抗菌活性。常用β-内酰胺酶抑制剂有克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦。克拉维酸可由链霉菌培养液中分离得到，除了对β-内酰胺酶有抑制剂作用外，同时也可作用青霉素结合蛋白靶位，与β-内酰胺类抗生素共同影响细菌生长。舒巴坦是半合成的酶抑制剂，其抑酶作用和克拉维酸相似，但穿透革兰阴性菌外膜能力差，可抑制由质粒或染色体介导的β-内酰胺酶(Ⅰ型染色体介导酶除外)。他唑巴坦也是半合成酶抑制剂，其抑酶作用范围广，抑制作用优于克拉维酸和舒巴坦。
35．β-内酰胺类抗生素的作用机制是什么？
青霉素类乃至整个β-内酰胺类抗生素的作用机制是阻断肽聚糖合成的最后阶段即肽聚糖链的组装和三维结构的构建。该阶段反应通常由几种酶催化完成，如转糖基酶(催化N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡糖胺之间形成β-1,4糖苷键)、转肽酶(催化四肽侧链与五肽桥形成D-丙氨酰D-丙氨酸肽链)、羧肽酶、内肽酶等。不同的β-内酰胺类抗生素在不同程度上抑制上述酶的作用，从而抑制细菌细胞壁的完整性，使菌体形成丝状体或球形体，最终溶解死亡。
36.氨基糖苷类抗生素的作用机制是什么？
氨基糖苷类由链霉菌属和小单胞菌属发酵滤液中提取，能与细菌核糖体30S亚基发生不可逆的结合，抑制MRNA的转录和蛋白质合成，导致细菌死亡，同时该类抗生素还能依靠其离子的吸附作用，吸附在菌体的表面，造成细胞膜的损伤，导致膜的渗漏使胞内的K+ 、嘌呤等重要生命物质外漏，为杀菌类抗生素。与细胞壁合成抑制药物联合使用时可产生协同作用，破坏细胞壁完整性，使药物易于进入菌体而达到核糖体作用靶位。
37.喹诺酮抗生素的作用机制？
喹诺酮类抗生素作用于DNA旋转酶，DNA旋转酶在原核细胞DNA复制过程中引入负超螺旋结构，使复制叉移动时不因张力太大而不能前进。由于药物拮抗了该酶干扰了细菌DNA复制、修复和重组，药物还能通过革兰阴性菌的外膜微孔和借助磷脂渗透作用进入细菌细胞，对繁殖期的细菌均有杀菌作用。
38．糖肽类抗生素的作用机制？
肽类抗生素是由氨基酸通过肽键连接而成化合物，结构上具有较大异源性，抗菌谱窄，但抗菌作用强，具有肾毒性不良反应。作用机制是与肽聚糖合成中间产物D-丙氨酰-D丙氨酸末端形成复合物，可阻断肽聚糖合成过程中转糖基酶、转肽酶及羧肽酶的作用，从而阻止了细胞壁的合成。
39．大环内酯类抗生素作用机制是什么？
该类抗生素的分子结构中具有14-16原子的大脂肪内酯环，可逆的结合在细菌核糖体50S大亚基的23S单位上抑制肽酰基转移酶，影响核蛋白位移，抑制细菌蛋白合成和肽链的延伸。现常用有克拉霉素、阿齐霉素等抗菌活性强、抗菌谱广的药物。
40．抗菌药物敏感性试验(AST)意义方法有哪些?
AST的意义：①可预测抗菌治疗效果，即AST试验结果为敏感时，治疗可能有效；试验结果为耐药时，治疗一定失败；而中介意味着高于常规治疗剂量或药物浓度集中的生理部位可能有效。②指导临床医生合理选择抗生素，可依据实验结果调整经验性治疗于靶向治疗。
AST的方法：①测量药物最小抑菌浓度的琼脂稀释法和肉汤稀释法。②测量含药纸片周围直径大小的K-B纸片琼脂扩散法。③结合扩散法和稀释法原理特点的E 试验。④最低杀菌浓度的测定。⑤联合药物敏感性试验，可为临床选用最有效的抗菌药物组合提供实验依据。
41．耐药性的产生机理是什么？
抗微生物药物对微生物群体有很强的选择压力，使天然能耐受它们的微生物或经诱导变异产生抗药抗性的微生物存活下来。微生物的变异是其进化基础，变异有多种机制，小的变异包括碱基对的点突变，可以改变抗微生物药物的作用靶点和干扰它们的活性。大的变异是一大段DNA作为一个整体重新排列，这种变化常由在染色体中可以独立移动的特殊基因单位，即转座子或插入序列产生。细菌基因的变异还可通过质粒，噬菌体或可转移的基因单位获取外源性DNA而产生。耐药性可通水平或垂直传插在不同种或同种间扩散。这种现象发生的例子如葡萄球菌盒式染色体SCC mec在获得性耐药中发挥了很重要的作用。其中SCC mec可称为抗生素耐药岛：它包含对甲氧西林产生耐药的mecA基因，有的SCC mec还包含对非β-内酰胺抗生素和重金属产生耐药的质粒和转座子。还有四环素抗性转座子在淋球菌、人支原体之间的传播。这些机制使细菌具有能产生抗任何微生物药物抗性的能力。
42.常用的生化鉴定培养基有哪些？
（一）糖发酵培养基
（1）成分
蛋白胨水或肉膏液（p H7.4）100 ml
所需糖、醇或糖苷类物质0.5 ～1.0g
16g／L 溴甲粉紫乙醇溶液0.1 ml
（2）制法
①将上述各物质加热溶解后，分装试管。
②高压（55.161kPa）灭菌15 分钟，备用。
③如需观察产气反应，应于分装前在试管中加一倒置的小玻管。
④亦可制成半固体发酵管，即于上述成分中加入4 ～6g／L 的琼脂，加热溶化后分试管。
（3）用途观察细菌对糖、醇或苷发酵能力，用于鉴定细菌。
（二）氧化－发酵（O －F）培养基
（1）成分
蛋白胨 2g
氯化钠 5g
K2HPO4 0.3g
葡萄糖 10g
2g／L 溴麝香草酚蓝溶液12 ml
水1000 ml
（2）制法
①将蛋白胨、盐类加水溶解后，校正pH 至7.2 。
②加入葡萄糖、琼脂，加热溶解后，加入指示剂，分装试管。
③高压（68.95kPa）灭菌15 分钟，使成高层琼脂，备用。
（3）用途测定细菌分解葡萄糖的代谢类型用。
（三）克氏铁琼脂
（1）成分
蛋白胨或多胨20g
牛肉膏 3g
酵母浸膏 3g
乳糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
拘橼酸铁铵 0.5g
硫代硫酸钠 0.5g
琼脂 14g
酚红 0.025g
水1000 ml
（2）制法
①将上述各成分（酚红除外）混合，加热溶解，校正p H 至7.4 ，加入酚红。
②分装试管，每管约3 ml 。
③高压（68.95kPa）灭菌15 分钟，趁热取出，立即置成深底层斜面（斜面及底层约各占一半），凝固后备用。
（3）用途鉴别肠杆菌科细菌
（四）三糖铁琼脂
（1）成分
多胨或胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
硫代硫酸钠 0.3g
硫酸亚铁 0.2g
琼脂 15g
水1000 ml
4g／L 酚红溶液6 ml
（2）制法
①除酚红外，将上述各成分混合。加热溶解，校正p H 至7.4 ，加入酚红。
②分装试管，每管3 ～4 ml ，高压（68.95kPa）灭菌15 分钟。
③趁热取出，置成底层较深的斜面，凝固后备用。
（3）用途鉴别肠杆菌科细菌。
（五）胰蛋白胨水
（1）成分
胰胨或其他含色氨酸丰富的胨 1g
氯化钠 0.5g
水100 ml
（2）制法
①将胰胨、氯化钠加入水后，加热溶解，校正pH 至7.2 ～7.4 ，分装试管。
②高压（68.95kPa）灭菌15 分钟即成。
（3）用途细菌靛基质试验用。
（六）葡萄糖蛋白胨水
（1）成分
蛋白胨 0.5g
葡萄糖 0.5g
磷酸氢二钾 0.5g
水100 ml
（2）制法
①将上述成分混合于水中，加热溶解后校正pH 至6.8 ～7.2 ，分装试管。
②高压（68.95kPa）灭菌15 分钟即成。
（3）用途细菌甲基红，V －P 试验用。
（七）构橼酸盐培养基
（1）成分
枸橼酸钠（含2 H2O） 0.2g
硫酸镁（含7 H2O） 0.02g
磷酸二氢铵 0.1g
磷酸氢二钾 0.1g
氯化钠 0.5g
琼脂 2g
水100 ml
2g／L 溴麝香草酚蓝乙醇溶液4 ml
（2）制法
①将上述各成分（溴麝香草酚蓝除外）混合加热溶解，校正p H 至6.8 ，再加入指示剂混匀，分装试管。
②高压（103.43kPa）灭菌15 分钟后，趁热取出置成斜面，备用。
（3）用途细菌构橼酸盐及无机铵利用试验用。
（八）氨基酸脱羧酶培养基
（1）成分
氨基酸 1.0g
蛋白胨 0.5g
酵母浸膏 0.3g
葡萄糖 0.1g
吡多醛盐酸盐 0.5 mg
水100 ml
16g／L 溴甲酚紫乙醇溶液0.1 ml
（2）制法
①将上述各成分（溴甲酚紫除外）混合加热溶解后，校正pH 至6.8 ，加入指示剂，混匀。
②分装小试管，每管约0.5 ～1.0 ml ，于每管内加入液体石蜡一层（约5 m m）。
③高压（103.43kPa）灭菌15 分钟后，备用。
（3）用途鉴别肠杆菌科及弧菌科细菌用。
（九）尿素培养基
（1）成分
蛋白胨 1g
氯化钠 5g
磷酸二氢钾 2g
葡萄糖 0.1g
尿素 2g
水1000 ml
4g／L 酚红溶液3 ml
（2）制法
①将上述各成分（酚红除外）混合，加热溶解，校正pH 至6．8 ，再加入酚红混匀，分装试管。
②高压（68．95kPa）灭菌15 分钟，备用。
（3）用途鉴定细菌能否产生尿素酶。
（十）Thornley 精氨酸培养基
（1）成分
L －精氨酸1.0g
蛋白胨 0.1g
氯化钠 0.5g
K2HPO4 0.03g
琼脂0.3g
水100 ml
酚红0.001g
（2）制法
①将上述成分（酚红除外）混合加热溶解后，校正pH 至7.0 ～7.2 ，加入酚红混匀，分装小试管。
②高压（103.43kPa）灭菌15 分钟后，备用。
③同时配制不含精氨酸的培养基作为对照。
（3）用途用于检测细菌能否产生精氨酸双水解酶，主要用于肠杆菌科，假单胞菌属及非发酵菌的鉴定。
（十一）甘油品红培养基
（1）成分
牛肉膏10g
蛋白胨20g
水1000 ml
甘油1 ml
100g／L 碱性品红乙醇溶液0.2 ml
100g／L 无水亚硫酸钠水溶液（新鲜配制） 1.66 ml
（2）制法
①将牛肉膏、蛋白胨、水加热溶解后，校正pH 至8.0 ，加入甘油混匀。
②高压（103.43kPa）灭菌15 分钟后，备用。
③临用时，加入碱性品红及亚硫酸钠液，分装试管。
（3）用途鉴定沙门菌属细菌用。
（十二）马尿酸钠培养基
（1）成分
马尿酸钠1g
肉浸液（pH7.4）100 ml
（2）制法
①将马尿酸钠溶于肉浸液内，分装于小试管内。
②高压（103.43kPa）灭菌15 分钟后备用。
（3）用途鉴定B 群链球菌用。
43.常用的生化鉴定试验有哪些?
一、碳水化合物的代谢试验
（一）糖类发酵试验
（1）原理
各种细菌含有不同的分解糖（醇、苷）类的酶，分解糖类的能力各有不同，且不同细菌分解同一种糖的代谢产物也不一定相同。细菌分解糖类后形成的代谢产物随细菌种类而异，有的产酸，有的产酸产气。可根据糖分解的特性鉴别细菌。
（2）种类
种类很多。常用的单糖类有：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖等。双糖类有乳糖、麦芽糖、蕈糖等。多糖类有菊糖、淀粉、糊精。醇类包括甘露醇、甘油、侧金盏花醇、卫矛醇、山梨醇、肌醇等。
（3）方法
细菌经分离纯化后，根据待检菌的分解特性选择合适的含糖培养基，将纯种细菌接种该培养基中，置温箱内培养数18-24小时，取出观察结果。
（4）结果
能分解糖产酸的细菌，培养基中指示剂是否呈现酸性反应。。不能分解该糖则无颜色变化。产气可使半固体培养基内或液体培养基中的倒置小管内出现气泡，固体培养基则出现裂痕。
（5）应用
糖分解试验是细菌生化试验中最常用的生化反应。可依据细菌分解糖的能力各异而区分和识别不同的细菌。如沙门菌能发酵葡萄糖，但不发酵乳糖，大肠杆菌能发酵葡萄糖和乳糖。脑膜炎球菌能分解葡萄糖和麦芽糖，而淋球菌只能分解葡萄糖，不分解麦芽糖。
（二）氧化－发酵试验（OF 试验）
（1）原理
细菌在分解糖的过程中，根据有无分子氧参加，分为氧化型和发酵型。能在无氧环境中不能分解葡萄糖，称为氧化型。可进行无氧降解的，称发酵型。发酵型细菌在有氧和无氧的环境中都能分解葡萄糖。兼性厌氧菌为发酵型细菌。不分解葡萄糖的细菌称产碱型。
（2）方法
取2支HL(Hugh-Leifson)培养管,用接种针挑取少许纯培养细菌，穿刺接种至两支培养基的管底，将其中1 支在接种后加无菌液体石蜡或者凡士林在培养基表面，高度约1cm 。然后将两支培养管置35 ℃孵育48 小时后观察结果。
（3）结果
培养基由绿色变黄表示细菌分解葡萄糖产酸，颜色不变表示不分解葡萄糖。两管培养基均变黄色为发酵型，若加液体石蜡的一管颜色不变而另一管变黄色为氧化型，两管均不变色为产碱型。
（4）应用
O F 试验可区分细菌的代谢类型，有助于鉴别区分细菌。如肠杆菌科细菌都是发酵型细菌，绝大多数的非发酵菌为氧化型或产碱型细菌。葡萄球菌为发酵型而微球菌为氧化型。
（三）七叶苷水解试验
（1）原理
七叶苷经细菌水解生成七叶素，七叶素能与培养基中构橼酸铁的二价铁离子结合生成黑色的化合物，使培养基变黑。
（2）方法将细菌接种于七叶苷培养基上，在35 ℃孵育过夜。
（3）结果细菌生长并使培养基变黑为阳性。
（4）应用主要用于区分肠球菌、D群链球菌和其他链球菌，前两者阳性。也可用于革兰氏阴性杆菌和厌氧菌的鉴别试验。
（四）淀粉水解试验
（1）原理
细菌产生淀粉酶可将培养基周围琼脂中的淀粉水解。加碘液后，菌落周围形成无色透明区。而琼脂中没分解的淀粉与碘作用产生蓝色。试剂可用卢戈碘液或革兰染液中的碘液。
（2）方法
将细菌划线接种或点种在淀粉血清琼脂平板或水解酪蛋白琼脂（M －H 琼脂）
平板，经35 ℃培养过夜，在菌落上滴加碘液。
（3）结果
菌落周围出现透明区，而其他部位培养基呈蓝色为阳性。
（4）应用
某些细菌如白喉杆菌具有淀粉酶，本试验呈阳性，可用此试验鉴别细菌。（五）β半乳糖苷酶试验
（1）原理
某些细菌具有β半乳糖苷酶，该酶可分解邻－硝基苯－β－D －半乳糖苷(ONPG)，生成黄色的邻硝基酚。
（2）方法
用接种环在三糖铁培养基上刮取一环新鲜菌龄的菌苔，加于无菌盐水0.25 ml 中制成浓菌悬液，加入甲苯1滴，充分振摇，将试管置于37 ℃水浴中5分钟，加入ONPG 溶液0.25 ml ，在37 ℃水浴中保温，于20分钟、4小时、18小时和24小时观察结果。
（3）结果
出现黄色为阳性反应，不变色为阴性反应。通常在20 ～30 分钟内显色。（4）应用
此试验是测定不发酵或迟发酵乳糖的细菌是否产生半乳糖苷酶。由于细菌分解乳糖要有两种酶，一是半乳糖昔渗透酶，另一是半乳糖苷酶。当缺乏渗透酶时，乳糖不能进入细胞，乳糖分解就不能进行。这两种酶都是在乳糖存在的条件下诱导细菌产生。迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG 为阳性，如埃希菌属、枸橼酸杆菌属。不发酵乳糖的细菌为阴性，如沙门菌属、变形杆菌属。可用本试验作为迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定方法。
（六）甲基红试验
（1）原理
细菌在糖代谢过程中,能分解葡萄糖产生丙酮酸，并进一步将丙酮酸代谢为乳酸、乙酸、甲酸等,使培养基的p H 值下降到4.5以下，加入甲基红指示剂即显红色。某些细菌虽能分解葡萄糖，但产酸量少，培养基酸碱度在pH 值5.4 以上，加入甲基红指示剂呈黄色。甲基红变色范围为pH 值4.0 ～6.0。
（2）方法
将细菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置35 ℃培养2～4天。2天后取出部分菌液滴加2滴试剂，若为阴性结果，继续培养至4天再试。
（3）结果
红色为阳性，橘红色为弱阳性,黄色为阴性。
（4）应用
可鉴别肠杆菌科内各菌属。沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、埃希菌属为阳性，肠杆菌属、哈夫尼亚菌属为阴性。较常用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的区别，前者阳性，后者阴性。
（七） VP 试验
（4）原理
某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，并进一步脱羧成为乙酰甲基甲醇。后者在碱性环境中被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰可与培养基中精氨酸的胍基起作用，生成红色化合物。若培养基内含胍基太少，可加入少量肌酸、肌酐等含胍基的化合物，可加速此反应。
（2）培养基葡萄糖蛋白胨水培养基。
（3）试剂
a.奥梅拉试剂：氢氧化钾40g 溶于水10 ml ，加肌酸0．3g 。
b.贝立脱试剂：甲液：6 ％α萘酚乙醇溶液。乙液：40 ％氢氧化钾。
（4）方法
a. 奥梅拉法：将细菌接种在上述培养基内，置35℃培养48小时。在培养液2 ml 中加入奥梅拉试剂0.2 ml ，置50℃水浴中2小时或37 ℃4小时，充分振摇，观察结果。
b. 贝立脱法：接种及温育同上。在培养液2 ml 中加入贝立脱试剂甲液1 ml 及乙液0.4 ml ，混合后置37℃中30分钟观察结果。如为阴性应继续置37℃4小时再观察。
（5）结果呈红色为阳性。
（6）应用
常与甲基红试验一起使用。可区别肠杆菌科细菌。本试验阳性，甲基红试验阴性，反之亦然。大肠埃希菌VP阴性而产气肠杆菌阳性。
注：试剂甲液在室温阴暗处可保存1 个月，乙液可长期保存。
（八）甘油复红试验
（1）原理
细菌分解甘油产生丙酮酸，丙酮酸脱羧而为乙醛，乙醛与无色的复红生成醌式化合物，显紫红色。
（2）方法
将细菌接种于甘油复红肉汤培养基，在35 ℃培养8天，每天观察结果。将未接种的培养基在35℃培养，作为对照。
（3）结果
紫色为阳性（＋＋），紫红色为阳性（＋），与对照管颜色相同为阴性。（4）应用主要用于沙门菌属菌种间的鉴别。
二、蛋白质和氨基酸的代谢试验
（一）吲哚（靛基质）试验
（1）原理
有些具有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，吲哚可与对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色。
（2）试剂
柯凡克（Kovac）试剂：对二甲基氨基苯甲醛5g ，戊醇75 ml ，浓盐酸50 ml 。将对二甲基氨基苯甲醛加入乙醇内，振摇使溶，徐徐加入浓盐酸，边加边摇即成。
欧氏（Ehrlich）试剂：对二甲基氨基苯甲醛4g ，95 ％乙醇380 ml ，浓盐酸80 ％ml 。配法与柯凡克试剂相同。
（3）方法
将细菌接种于蛋白陈水培养基中，置35℃培养1 ～2 天，沿管壁徐徐加入柯凡克试剂或欧氏试剂0.5 ml ，试剂浮于培养基之上，使成两层，即刻观察结果。（4）结果
两液面交界处呈现红色为阳性，无红色为阴性。
（5）应用
主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。
注：有些细菌产生吲哚量少，需用乙醚或二甲苯提取后才能与试剂起反应。如黄杆菌。
（二）硫化氢试验
（1）原理
某些细菌分解培养基中含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）生成硫化氢，硫化氢遇铅或铁离子形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀物。
（2）方法
将细菌接种于醋酸铅培养基或克氏铁、三糖铁琼脂培养基中，置35℃培养24～48小时，但惟赫夫尼亚菌需培养7天。每天观察颜色变化。
（3）结果
醋酸铅培养基变黑色为阳性，不变色为阴性。KI 或TSI 琼脂在底层和斜面交界处出现黑色沉淀为阳性。
（3）应用
主要用于肠杆菌鉴别。沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属硫化氢试验阳性，但沙门菌属中也有部分菌为阴性。此外，腐败谢尔瓦菌是非发酵菌中唯一能产生硫化氢的细菌。
（三）尿素酶试验
（1）原理
某些菌能产生尿素酶，此酶能分解尿素形成氨，使培养基变碱，酚红指示剂随之变红色。
（2）方法
将细菌接种于尿素培养基，置35℃过夜培养观察结果，阴性反应者应观察4 天。（3）应用
主要用于肠杆菌科的鉴定。其中变形杆菌、克雷伯菌、摩氏摩根菌、和结肠耶尔森菌、雷极普罗菲登斯菌为阳性。
（四）明胶液化试验
（1）原理
细菌分泌的胞外蛋白水解酶，能分解明胶为氨基酸，使之失去原有的凝固力而液化。
（2）方法
将细菌接种于明胶培养基，在20℃培养7天，每天观察结果。若室温较高，培养基自行融化时，可在冰箱内放置30 分钟后取出观察结果。
明胶平板法：在营养琼脂中加入1 ％明胶倾注平板，可分成4 个区，每区划线接种1种细菌，经1 ～2 天培养，在培养基表面加氯化汞溶液（氢化汞12g ，水80ml ，浓盐酸16ml），在菌落周围出现透明带，表示细菌液化明胶。
（3）结果
明胶培养基半固体变成液体为阳性。明胶平板法菌落周围出现透明带为阳性。（4）应用
根据细菌能否液化明胶，可有助于细菌的种、属的鉴定。如阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌、沙雷菌、铜绿假单胞菌等为阳性。
（五）苯丙氨酸脱氨酶试验
（1）原理
细菌产生的苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基生成苯丙酮酸，与氯化铁作用形成绿色化合物。
（2）方法
将待检细菌大量接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面,在35℃培养过夜。滴加10％三氯化铁4 ～5滴，由斜面培养物上方流下。立即观察结果,延长反应时间会引起退色。
（3）结果斜面显示绿色为阳性。
（4）应用
本试验特异性较高。变形杆菌属、摩根菌属及普罗菲登斯菌为强阳性，其他肠杆菌科细菌大多为阴性。可用于肠杆菌科细菌的鉴定。
（六）氨基酸脱羧酶试验
（1）原理
细菌如具有某种氨基酸脱羧酶，能使氨基酸脱羧、产生胺和CO2，使培养基变碱，指示剂变色。
（2）培养基
最常用的有3 种：赖氨酸脱羧酶培养基、鸟氨酸脱羧酶培养基、精氨酸脱羧酶培养基及对照培养基。
（3）方法
将细菌接种在上述含氨基酸的培养基及不含氨基酸的对照培养基中，接种后用无菌石蜡油覆盖，高度至少5m m 。在35℃培养4日观察结果。
（4）结果
开始阶段培养基由于葡萄糖分解呈酸性而呈黄色，以后变为紫色为阳性结果，若仅发酵莆萄糖显黄色为阴性。对照管应为黄色。
（5）应用
本实验可以作为肠杆菌科细菌鉴定的重要方法，对链球菌和弧菌科细菌鉴定也有重要作用。
（七）精氨酸双水解试验
（1）原理
某些细菌可降解精氨酸为瓜氨酸和胺，瓜氨酸可降解为鸟氨酸、氨和二氧化碳。鸟氨酸又可受脱羧酶的作用，生成腐胺和二氧化碳。氨和腐胺可使培养基变碱，酚红指示剂随之变红色。
（2）方法
将细菌穿刺接种在索恩利（Thornley）培养基，并封以灭菌石蜡油，在35℃培养1 ～4 天，每天观察培养基颜色变化。
（3）结果
培养基转为红色为阳性。
三、碳源和氮源利用试验
（一）枸橼酸盐利用试验
（1）原理
当细菌利用铵盐作为惟一氮源，并利用枸橼酸作为惟一碳源时，便可在枸橼酸盐培养基上生长，分解枸橼酸钠，生成碳酸钠，使培养基呈碱性。
（2）方法
将细菌接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，在35℃培养1～4天，每天观察培养基颜色变化。
（3）结果
西蒙氏枸橼酸盐培养基斜面上有细菌生长，且培养基变蓝色为阳性；培养7天
无细菌生长，培养基颜色不变保持绿色为阴性。柯氏枸橼酸培养基斜面变红色为阳性，保持淡黄色不变色为阴性。
（4）应用
常用于肠杆菌科细菌各菌属之间鉴别。埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属、耶尔森菌属为阴性，枸橼酸杆菌、沙门菌、克雷伯菌属、沙雷菌为阳性。此外，也有助于假单胞菌、气单胞菌的鉴定。
（二）丙二酸盐利用试验
（1）原理
细菌能利用丙二酸盐作为惟一碳源时，则能分解丙二酸钠生成碳酸钠，使培养基变碱性。
（2）方法
将细菌接种于丙二酸盐培养基培养基，置35℃培养过夜后观察结果。
（3）结果
培养基由绿色变成蓝色为阳性，无颜色改变是阴性。
（4）应用
本试验有助于鉴别肠杆菌科细菌。克雷伯菌属和亚利桑那菌为阳性，肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和哈夫尼亚菌属有不同生物型反应，其他菌属为阴性。
（三）马尿酸钠水解试验（三氯化铁法）
（1）原理
某些细菌具有马尿酸水解酶，可使马尿酸钠水解，产生苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸与三氯化铁试剂结合，形成苯甲酸铁沉淀。
（2）方法
将细菌接种于马尿酸钠培养基中，置35℃培养48小时后，离心沉淀，取上清液0.8ml ，加入三氯化铁试剂0.2ml ，立即混匀，经10 ～15 分钟观察结果。（3）结果
出现恒定的沉淀物为阳性，若有沉淀物出现，轻摇后就消失为阴性。
（4）应用
B群链球菌能分解马尿酸盐，呈阳性反应，其他链球菌为阴性。
（四）马尿酸钠水解试验（茚三酮法）
（1）原理
细菌水解马尿酸钠后形成的甘氨酸，在强氧化剂茚三酮的作用下，氧化脱氨基，生成氨、二氧化碳和醛，茚三酮则生成了还原型茚三酮。氨、二氧化碳与残留的茚三酮起反应，形成紫色化合物。
（2）方法
将菌液0.4 ml和等量的1％马尿酸钠溶液混合后，于35℃培养2小时，加入0．2 ml茚三酮试剂混匀，出现紫色为阳性。
（4）应用
B群链球菌能分解马尿酸盐，呈阳性反应，其他链球菌为阴性。
四、细菌酶类试验
（一）触酶（过氧化氢酶）试验
（1）原理
细菌的呼吸酶使细菌在代谢过程中形成过氧化氢，若细菌同时产生触酶，则可把过氧化氢分解为水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
（2）方法
挑取纯培养菌落1接种环，置于洁净的玻片上或小试管内，滴加适量3％
过氧化氢溶液。在1分钟内见有大量气泡产生，判为阳性结果。
（3）应用
葡萄球菌和微球菌属呈阳性，链球菌和肠球菌呈阴性。可用于革兰阳性球菌的初步区分。
（二）氧化酶试验
（1）原理
氧化酶也称细胞色素氧化酶，是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。在本试验中，氧化酶并不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞色素C 氧化，随后此氧化型细胞色素C 再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。
（2）试剂
a 盐酸四甲基对苯二胺1g 、抗坏血酸1g ，水100 ml ，盛于棕色瓶内，避光在4 ℃保存。
b 萘酚1g 、95 ％乙醇95 ml 、盛于棕色瓶内，在4 ℃避光保存。
（3）方法
a 取滤纸一小块，涂抹菌苔少许，加试剂a，立即呈粉红色，迅速转为紫红色者为阳性。
b 在滤纸上先滴加少许试剂a，再滴加等量的试剂b，然后涂抹待测菌，立即呈现蓝色者为阳性，2分钟无颜色变化为阴性。
（4）应用
主要用于奈瑟菌属和非发酵菌的鉴定，绝大多数菌为阳性，也用于肠杆菌科细菌的确定，该科细菌氧化酶试验都为阴性。本试验也有助于识别气单胞菌和邻单胞菌。
注：试剂在空气中易发生氧化，加入抗坏血酸可减缓氧化，未加抗坏血酸的试剂需每星期新鲜配制。实验时避免接触含铁的物质。因葡萄糖发酵可抑制氧化酶活性，实验菌苔不宜采用含葡萄糖的培养基上的菌落。
（三）硝酸盐还原试验
（1）原理
硝酸盐培养基中的硝酸盐（NO3）可被某些细菌还原为亚硝酸盐（N04），后者与醋酸作用生成亚硝酸。亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯磺酸，再与α萘胺结合成红色的N-α萘胺偶氮苯磺酸。
（2）试剂
a 甲液：对氨基苯磺酸0.8g ；5 mol／L 乙酸100 ml 。
b 乙液：α萘胺0.5g ；5mol／L 乙酸100 ml 。
c 锌粉：少许。
（3）方法
将待检菌接种于硝酸盐培养基(内置一小倒管)，置35℃温育1 ～4 天，每天吸出培养液少许，试验前临用时等量混合试剂甲液和乙液，在培养液中加1 ～2 滴混合试剂，阳性者立即出现红色。并观察小倒管，如有气泡产生，表示有氮气产生。若加入硝酸盐还原试剂不出现红色，可加入锌粉少许，如出现红色证明产生芳基肼，表示硝酸盐仍存在；如不产生红色，表示硝酸盐已被还原为氮和氨。
（4）应用
本试验是细菌鉴定中的重要生化反应。肠杆菌科细菌为阳性反应（极少数例外，
如痢疾志贺菌Ⅰ型为阳性）。如铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌等假单胞菌可产生氮气。而不动杆菌属均为阴性。
（四）磷酸酶试验
（1）原理
磷酸酶可使单磷酸酯水解。反应基质若是磷酸酚酞，经该酶水解后可释放出酚酞，在碱性条件下呈红色。
（2）方法
将被检细菌接种磷酸酚酞平板上，置35℃培养18 ～24 小时，在平板盖内加1 滴浓氨水熏蒸片刻。观察菌落，呈粉红色为阳性。
（4）应用
本试验有助于致病葡萄球菌与其他葡萄球菌的鉴别，前者呈阳性，后者呈阴性。（五）凝固酶试验
（1）原理
致病性葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集。葡萄球菌产生的凝固酶有两种，一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，可用玻片法测出。另一种是游离凝固酶，此酶生成后释放于培养基中，可用试管法测出。
（2）方法
a 试管法：于无菌试管内加入兔血浆0.5ml ，再加入葡萄球菌16 ～18 小时肉汤培养物0.5 ml ，轻轻转动试管，使混匀。置37℃水浴中3 ～4 小时，结果观察，凝固者为阳性。
b 玻片法：取未稀释的兔浆1滴及盐水1滴分别置于清洁载玻片上，挑取试验菌分别与盐水及血浆混合，立即观察结果。如血浆中有明显颗粒出现而盐水中无自凝现象者为阳性。结合凝固酶试验也可用纤维蛋白原致敏的红细胞与试验菌作玻片凝集试验，则更为敏感。若以血浆－IgG 双标记胶乳试齐可同时测定A 蛋白和纤维蛋白原的亲和因子，更可提高金黄色葡萄球菌的检出率，而且较简便快速。
（3）应用
用于鉴定葡萄球菌的种，金黄色葡萄球菌和中间葡萄球菌为阳性结果，其他葡萄球菌为阴性。
（六） DN A 酶试验
（1）原理
DNA酶可水解DNA长链，形成数个单核苷酸组成的寡核苷酸链。长链DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸可溶于酸。在菌落平板上加入盐酸后，若在菌落周围出现透明环，而其他部位呈浑浊，表示该菌具有DNA酶。
（2）方法
将待测菌在DNA 琼脂平板上做点状接种，经35℃培育过夜，在平板加适量1 mol／L盐酸。观察在菌落周围有透明环出现，判为阳性结果，无透明环为阴性。（3）应用
金黄色葡萄球菌及肠杆菌科中的沙雷菌、变形杆菌为阳性。
44．孤菌科包括哪几个菌属？
包括一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性的细菌，其有4个菌属：弧菌属、气单胞菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属。
45．与人类感染相关的弧菌有哪些？
01 群霍乱弧菌（V．cholerae O1 group）
O139 群霍乱弧菌（V．cholerae group）
非O1 群霍乱弧菌（V．cholerae non －O1group）
副溶血性弧菌（V．parahaemolyticus）
霍利斯弧菌（V．hollisae）
拟态弧菌（V．minicus）
河弧菌（V．fluvialis）
创伤弧菌（V．vulnificus）
溶藻弧菌（V．alginolyticus）
少女弧菌（V．damsela）
麦氏弧菌（V．metschnikovii）
辛辛那提弧菌（V．cincinnatiensis）
弗尼斯弧菌（V．furnissii）
46．弧菌属细菌的生物学特性是什么？
本属细菌为发酵型，革兰染色阴性，形态呈直的、弯曲、月牙形或逗点形。大部分菌种为兼性厌氧。氧化酶试验阳性。细菌生长对营养要求不高，可分解多种碳水化合物、有机酸盐和氨基酸。钠离子可刺激弧菌属所有菌种生长。各菌种具有极端鞭毛，运动活泼如穿梭状。广泛分布于淡水及海水中，人体肠道中也偶有这类细菌存在。
47．弧菌属同气单胞菌属和邻单胞菌属如何区分？
试验弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属
O/129敏感试验S/S R/R S/S
TCBS生长试验+ - -
耐盐试验
0%NACL -/+ + +
6%NACL + - -
48．霍乱弧菌的生化特性是什么？
兼性厌氧。营养要求不高，在普通琼脂上生长良好。16℃～44℃均可生长，以37℃为最适宜。具耐碱性，在pH8.2～9.0的碱性胨水或碱性平板上生长迅速。根据该特性初次分离常选用pH8.5的碱性胨水进行选择性增菌培养，可抑制其它杂菌生长。经35℃4h ～6h 增菌后可在液体表面大量繁殖形成菌膜。常用的选择性培养基有硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平(Thiosufale-citratebilesalts -sucrose ，TCBS)。霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色；含亚碲酸钾的选择
平板双洗琼脂平板、庆大霉素琼脂平板，霍乱弧菌在平板上生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲，形成灰褐色菌落中心。
49．霍乱弧菌的初步诊断方法有哪些？
（1）直接涂片
悬滴检查：取患者粪便制成悬滴标本（亦可用压滴法），检查细菌的动力。霍乱弧菌无论是古典生物型或E1 －tor 生物型均呈现极活泼的穿梭状运动。O1 群霍乱多价血清制动试验阳性，可作早期推测性报告。
临床微生物学与检验测试题及答案——细菌感染的实验室检查与诊断及细菌生理 一、名词解释 1.血清学诊断 2.培养基 3.基础培养基 4.选择培养基 5.鉴别培养基 6.菌落 二、填空题 1.实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选 择、、有直接关系。 2.辅助诊断风湿热的抗“O”实验属于。 3.血清学试验一般需作两次，其血清分别取自疾病 的和.第二次抗体效价比第一 次时方有诊断意义。 4.对流行性脑炎患者进行细菌学检查，可采集的标本 有、和。 5.进行病原菌的分离培养时，从有正常菌群部位采取的标本应接种 于培养基或培养基。 6.细菌感染实验室检查中，常用的血清学方法 有、和三大类。 7.属于直接凝集反应的血清学试验有和。 三、单项选择题 1.目前在传染病的预防接种中，使用减毒活疫苗比使用灭活疫苗普遍，关于其原因下述不正确的是 A.减毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗 B.减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长 C.减毒活疫苗能在机体内增殖或干扰野毒株的增殖及致病作用，灭活疫苗则不能 D.减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型IgA，故适用于免疫缺陷或低下的患者 E.减毒活疫苗一般只需接种一次即能达到免疫效果，而灭活疫苗需接种多次 2.白百破三联疫苗的组成是
A.百日咳类毒素，白喉类毒素，破伤风类毒素 B.百日咳死疫苗，白喉类毒素，破伤风类毒素 C.百日咳死疫苗，白喉死疫苗，破伤风类毒素 D.百日咳活疫苗，白喉活疫苗，破伤风死疫苗 E.百日咳活疫苗，白喉死疫苗，破伤风死疫苗 3.使用时要注意防止Ⅰ型超敏反应的免疫制剂是 A.丙种球蛋白 B.胎盘球蛋白 C.抗毒素 D.白细胞介素 E.干扰素 4.关于胎盘球蛋白的叙述，错误的是 A.由健康产妇的胎盘和婴儿脐带中提取制备 B.一般含IgM C.一般不会引起超敏反应 D.主要用于麻疹，甲型肝炎和脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预防 E.免疫效果不如高效价的特异性免疫球蛋白 5.伤寒病人发病第一周内，分离病原菌应采取的标本是 A.血液 B.尿液 C.粪便 D.呕吐物 E.脑脊液 6.咽喉假膜标本涂片染色后，镜检出有异染颗粒的棒状杆菌，其临床意义在于诊断 A.结核病 B.军团病 C.白喉
临床微生物学与检验习题集 本习题集由三部分构成,第一部分为基础题,主要测试学生对每一章节内容的掌握程度;第二部分为综合题,侧重考查学生综合分析问题的能力及对本门课程掌握的程度;第三部分为病例分析题,考查学生利用所学知识解决实际问题的能力。 第一部分基础题 绪论 二、选择题 1．下列描述的微生物中,不就是所有微生物共同特征的就是 A 个体微小 B 分布广泛 C 种类繁多 D 只能在活细胞内生长繁殖 E 结构简单 2．不属于原核细胞型微生物的就是 A 细菌 B 真菌 C 支原体 D 衣原体 E 立克次体 3．属于真核细胞型微生物的就是 A 螺旋体 B 放线菌 C 真菌 D 细菌 E 立克次体 4.下列那种微生物属于非细胞型微生物 A 细菌 B 衣原体 C 支原体 D 病毒 E 立克次体 二、选择: 1．与真核细胞结构相比较,细菌所特有的一种重要结构就是 A 核蛋白体(核糖体) B 线粒体 C 高尔基体 D 细胞膜 E 细胞壁 2．与细菌运动有关的结构就是 A 鞭毛 B 菌毛 C 纤毛 D 荚膜 E 轴丝 3．与内毒素有关的细菌结构就是 A 外膜层 B 核膜 C 线粒体膜 D 荚膜 E 细胞膜 4．芽胞与细菌致病有关的特征就是 A 抗吞噬 B 产生毒素 C 耐热性 D 粘附于感染部位 E 侵袭力 5．细菌核质以外的遗传物质就是 A mRNA B 核蛋白体 C 质粒 D 异染颗粒
E 性菌毛 6.与细菌粘附功能有关的细菌结构就是 A 菌毛 B 荚膜 C 中介体 D 胞浆膜 E 细胞膜 7.不属于细菌基本结构的就是 A 鞭毛 B 细胞质 C 细胞膜 D 核质(拟核) E 细胞壁 8.细菌内毒素的主要成份就是 A 肽聚糖 B 蛋白质 C 鞭毛 D 核酸 E 脂多糖 9.与细菌感染侵袭相关的结构就是 A 中介体 B 细胞膜 C 异染质颗粒 D 芽胞 E 荚膜 10.青霉素的抗菌作用机理就是 A 干扰细菌蛋白质的合成 B 抑制细菌的核酸代谢 C 抑制细菌的酶活性 D 破坏细菌细胞壁中的肽聚糖 E 破坏细胞膜 11.细菌的L型就是指 A 细菌的休眠状态 B 细胞壁缺陷型细菌 C 非致病菌 D 不可逆性变异的细菌 E 光滑型—粗糙型菌落(S—R)变异 12.溶菌酶杀菌的作用机理就是 A 裂解聚糖骨架的β-1,4糖苷键 B 竞争肽聚糖合成中所需的转肽酶 C 与核蛋白体的小亚基结合 D 竞争性抑制叶酸的合成代谢 E 破坏细胞膜 13.关于细菌的L型,错误的说法就是 A 主要就是由肽聚糖结构的缺损引起的 B 可在体外试验中形成 C 呈多形性 D 需在高渗透压的培养基中分离培养E失去产生毒素的能力而使其致病力减弱 14.细菌的革兰染色性不同就是由于 A 细胞核结构的不同 B 细胞壁结构的不同 C 细胞膜结构的不同 D 磷酸壁的有无 E 中介体的有无 15.细菌哪种结构的功能类似真核细胞的线粒体 A 核蛋白体 B 中介体 C 胞质颗粒 D 质粒 E 核质 16.需用电子显微镜才能观察到的结构就是 A 荚膜 B 异染颗粒 C 鞭毛 D 菌毛
《临床微生物学检验》题目 一、单选题 1.下列检查中除哪项外均可用于霍乱的诊断：E A.大便悬滴法检查 B.大便碱性蛋白胨水培养 C.大便涂片革兰染色 D.霍乱血清凝集试验找特异性抗体 E.血培养找霍乱弧菌 2.近年来发现对痢疾杆菌较敏感的抗菌药物为：D A.卡那霉素 B.庆大霉素 C.SMZ D.氟喹诺酮类 E.氨苄青霉素 3.在钩端螺旋体病血清学试验中，国内以下列哪种试验有较高的特异性和敏感性：A A.显凝试验 B.炭凝试验 C.红细胞凝集试验 D.红细胞溶解试验 E.补体结合试验 4.乙脑患者早期的特异性诊断检查：E
A.腰穿检测脑压 B.脑脊液化验检查 C.头颅CT检查 D.补体结合试验检测乙脑IgG抗体 E.酶联免疫吸附试验，检测乙脑IgM抗体 5.流行性斑疹伤寒的实验室诊断方法常选：C A.血常规 B.病原体接种分离 C.外斐反应 D.立克次体凝集试验 E.补体结合试验 6.血清流行病学调查时，若需要长期保存血清应臵于：D A.－4℃冰箱 B.－8℃冰箱 C.－10℃冰箱 D.－20℃冰箱 E.以上都不对 7.用于血清流行病学调查的静脉采血量一般为：E A.1ml以下 B.1～2ml C.2～3ml D.3～5ml E.5ml以上
8.能长期或永久保存血清的温度条件是：E A.4℃ B.-10℃ C.-20℃ D.-40℃ E.-70℃ 9.志贺菌属中，下列哪一项不正确：E A.在普通琼脂平板上生长形成中等大小、半透明的光滑型菌落 B.K抗原为型特异型抗原 C.O抗原为群特异性抗原 D.分解葡萄糖，产酸不产气 E.分解乳糖，产酸产气 10.宋内氏志贺氏菌有两个变异相，急性患者分离的菌株一般是：A A.Ⅰ相 B.Ⅱ相 C.Ⅰ相或Ⅱ相 D.Ⅰ相和Ⅱ相 E.以上都不对 11.有关细菌培养基的描述，哪项是不正确的：B A.按物理状态可分为液体、固体和半固体三类 B.SS培养基属于鉴别培养基 C.血琼脂平板属于营养培养基 D.蛋白胨水为常用的基础培养基 E.庖肉培养基属于厌氧培养基
一、选择题(A型): !、下列细菌中哪一种细菌在血平板上一般不出现溶血环? A、金黄色葡萄球菌 B、表皮葡萄球菌 C、甲型链球菌 D、肺炎双球菌 2、进行玻片法血浆凝固酶试验不需要下列哪种材料? A、免血浆 B、生理盐水 C、2%红细胞悬液 D、待检细菌 3、UMI系统不包括下列哪一项试验? A、尿素酶 B、甲基红 C、靛基质 D、动力 4、麦康凯培养基和克氏双糖铁共有的成分是: A、葡萄糖 B、酚红 C、中性红 D、乳糖 5、对浓汁标本进行细菌学鉴定,下列哪一项试验一般不包括在内? A、涂片染色镜检 B、血平板分离培养 C、血浆凝固酶试验 D、抗"O"试验 6、乙链在血清肉汤中的生长情况是： A、完全沉淀生长 B、均匀混浊生长 C、部分沉淀生长 D、形成菌膜 7、甲基红试验和VP试验阳性表明被检菌具有以下哪一特性： A、分解乳糖产酸产气 B、分解葡萄糖生成丙酮酸 C、生成甲醇、甲醛 D、以上全部 8、下列哪一项不符合霍乱弧菌的特点 A、有动力 B、抵抗力较强 C、耐碱不耐酸 D、在自然界广泛存在，人是唯一易感者 9、对于一个脓汁标本，首先应进行的检验步骤是： A、涂片镜检 B、接种血平板 C、含硫氨基酸 D、苯丙氨酸 10、抗"O"试验管法中，溶血素应预先用还原剂处理，原因是： A、还原被氧化的S溶血素，恢复溶血能力 B、溶血素O对热不敏感 C、溶血素S对氧敏感 D、以上全错 11、观察乙型溶血性链球菌典型形态，选择哪一种培养基可得理想结果： A、普通琼脂平板 B、普通肉汤 C、血琼脂平板 D、血清肉汤 12、对脑膜炎奈瑟氏菌的标本采送，哪一种是错误的？ A、低温 B、保温 C、防干燥 D、快速 13、区别志贺氏菌和沙门氏菌可采用下列哪种试验？ A、氧化酶试验 B、乳糖发酵试验 C、葡萄糖发酵 D、动力试验 14、下列哪一项可用于区别肺炎双球菌和甲型链球菌？ A、胆汁溶菌试验和甘露醇发酵试验 B、溶血试验和胆汁溶菌试验 C、菊糖发酵试验和胆汁溶菌试验 D、溶血试验和菊糖发酵试验
1.微生物microorganism：是存在于自然界的一大群形体微小、结构简单、肉眼直接看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百至数万倍才能观察到的微小生物。 2.微生物学microbiology：是生物学的一个分支，是研究微生物的类型、分部、形态结构、生命活动及其规律、遗传、进化，以及人类、动物、植物等相互关系的一门科学。 3.医学微生物学medical microbiology：主要是研究与医学和疾病有关的病原微生物的生物学特性、致病性、免疫性，以及特异性诊断和防治措施的学科，目的是控制和消灭微生物引起的感染性疾病，以保证和提高人类的健康水平。 4.细菌L型bacterial L form：细菌在体内外受到各种直接或间接的理化或生物因素影响后导致细胞壁肽聚糖直接破坏或合成被抑制进而形成一种细胞壁缺失或缺陷的细菌。 5.?原生质体protoplast：细菌变成为L型后，细胞壁完全缺失，细菌仅被一层细胞膜包裹。 6.原生质球spheroplast：源于革兰阴性菌的L型。 7.中介体mesosome：细菌细胞膜可内陷形成一种特有的结构，是部分胞膜折叠形成的泡囊状、管状或薄层状结构，在电子显微镜下方能看到。 8.?质粒plasmid：是细菌染色体外的遗传物质，存在于细胞质中，是小的双股闭合环状DNA分子，可独立于染色体存在并复制，也可整合到染色体上。 9.芽孢：很多革兰阳性菌在一定条件下可在菌体内部形成具有多层膜包裹的原型或卵圆形的小体，是细菌代谢处于相对静止状态、维持生存、具有特殊抵抗力的休眠结构。 10.热原质pyrogen：是细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热的的物质。 11.?噬菌体bacteriophage or phage：是感染细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物的病毒，只能在活的宿主菌内复制，噬菌体的DNA不仅随着它的感染可在宿主菌之间及宿主菌与噬菌体之间传播，而且还能赋予宿主菌某些生物学性状。 12.?毒性噬菌体virulent phase：为感染宿主后，能在宿主菌细胞内独立复制增殖，产生许多子代噬菌体并最终裂解细菌的噬菌体。 13.溶源性细菌lysogenic：染色体上有前噬菌体的细菌。 14.溶原性噬菌体lysogenic phase：为感染宿主菌后，将其基因组整合到宿主菌染色体上或像质粒存在于细胞之中，随细菌的DNA复制而复制，并随细菌的分裂而传代的噬菌体。15.转座子transposon，Tn：是一类在细菌的染色体、质粒或噬菌体之间自行移动的遗传成分，是细菌基因组中一段特异的具有转位特性的独立DNA序列。 16.突变mutation：是细菌遗传物质的结构发生突然而稳定的改变，导致的变异可传于后代。 17.?转化transformation：是供体菌游离的DNA片段直接进入受体菌，使受体菌获得新的性状。 18.?接合conjugation：是细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质（质粒）从供体菌转移给受体菌。 19.?转导transduction：是以温和噬菌体为载体，将供体菌的遗传物质转移到受体菌中，使后者获得新的性状。 20.?溶原性转换lysogenic conversion：是侵入细菌的噬菌体在溶原期可以前噬菌体形式在
临床微生物学检验技术复习练习试题 厌氧性细菌及检验 选择题 A 型题 1．下列产生外毒素的细菌中哪种细菌产生的毒素引起食物中毒 A 霍乱弧菌 B 肉毒杆菌 C 白喉杆菌 D 链球菌 E 破伤风杆菌 2．预防和治疗破伤风的方法是: A 清创处理 B 有效抗生素治疗 C 注射破伤风抗毒素血清 D A+B E A+B+C 3．当一民工因铁钉深刺足底造成外伤送医院急诊时，医生应首先考虑给予注射 A．破伤风类毒素 B．破伤风抗毒素 C．白百破三联疫苗 D．丙种球蛋白 E．破伤风菌苗 4.王某，48岁，建筑工人；因牙关紧闭、四肢痉孪而入院。8天前，右脚被铁钉扎伤，伤口深，但几日后自愈。5日后右腿有些麻木和疼痛，且咀嚼不便，吞咽困难，最后全身抽搐，四肢痉挛。入院诊断为破伤风，请问下述哪项是最佳治疗原则 A 注射青霉素 B 注射破伤风抗毒素和白百破疫苗 C 注射破伤风抗毒素和青霉素 D 注射破伤风抗毒素 E 注射青霉素和白百破疫苗 5．鉴定破伤风杆菌有无致病性的最重要的根据是 A G+细长杆菌 B 顶端圆形芽孢 C 有周身鞭毛 D 专性厌氧生长 E 产生特异性外毒素 6．破伤风梭菌除致破伤风病外，还能引起何种疾病E A．菌血症 B．食物中毒
C．组织坏死 D．坏死性肠炎 E．以上均不是 7．下列搭配哪项不恰当： A 大肠杆菌EHEC组——出血性肠炎 B 炭疽杆菌——气性坏疽 C 破伤风杆菌——脐带风 D 淋球菌——尿道炎 E 脑膜炎球菌——流行性脑脊髓膜炎 8．不是肉毒梭菌特点的是 A 芽胞位于菌体次极端，菌体呈网球拍状 B 严格厌氧 C 致病物质主要是肉毒毒素 D 引起疾病主要是细菌性食物中毒 E 肉毒毒素作用机制是阻止神经组织释放乙酰胆碱 B型题 A 常因滥用抗生素所致的疾病 B 常经呼吸道所致的疾病 C 常经消化道所致的疾病 D 常经产道所致的疾病 E 常因战伤所致的疾病 1．假膜性肠炎 2．气性坏疽 3．肉毒中毒 X型题 1．可能引起食物中毒较常见的细菌有 A 金葡菌 B 伤寒杆菌 C 产气荚膜杆菌 D 破伤风杆菌 E 副溶血性弧菌 2．产气荚膜芽孢梭菌引起的疾病有 A 气性坏疽 B 坏死性肠炎 C 产褥热 D 食物中毒 E 伪膜性肠炎 3．有迁徙性生长现象的是 A 链球菌 B 变形杆菌
临床微生物学检验技术试题及答案 A1题型 1. 机体抵抗病原微生物的屏障结构包括 A、皮肤与粘膜 B、血脑屏障 C、胎盘屏障 D、免疫系统 E、A、B和C 答案E 2. 有关内毒素的描述哪项是错误的 A、均由革兰氏阴性菌产生 B、其化学成分为脂多糖 C、160℃，2~4小时才被破坏 D、毒害效应具有组织器官选择性 E、毒性作用较弱 答案D 3. 下列描述哪项是错误的 A、病原菌致病力的强弱度称为毒力 B、毒力主要由侵袭力和毒素所决定 C、破伤风毒素属于内毒素 D、侵袭力是指病原菌突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力 E、以上均不是 答案C 4. 下列哪种成分不属于外毒素 A、脂多糖 B、痉挛毒素 C、肉毒毒素 D、表皮剥脱毒素 E、霍乱肠毒素
答案A 5. 下列哪种成分不属于外毒素 A、金黄色葡萄球菌肠毒素 B、产毒性大肠杆菌肠毒素 C、白喉毒素 D、表皮剥脱毒素 E、类脂A 答案E 6. 内毒素的毒性作用包括 A、发热反应 B、白细胞反应 C、内毒素血症与内毒素休克 D、以上都是 E、A和C 答案D 7. 慢性志贺菌感染的病程一般在（）以上 A、两周 B、一个月 C、两个月 D、六周 E、七周 答案C 8. 志贺菌随饮食进入体内，导致人体发病，其潜伏期一般为 A、一天之内 B、1-3天 C、5-7天 D、7-8天 E、8天以后 答案B 9. 下列关于结核分支杆菌描述正确的是
A、类脂质为胞壁中含量最多的成分 B、产生外毒素 C、产生内毒素 D、耐药性低 E、一般采用革兰氏染色 答案A 10. 我国的卫生标准中，每升饮用水中不得超过（）个大肠杆菌 A、1 B、3 C、5 D、7 E、8 答案B 11. 大肠杆菌指数测定时，37℃培养24小时，能发酵乳糖（）为阳性 A、产酸 B、产酸产气 C、产酸不产气 D、产气不产酸 E、以上都不产生 答案B 12. 下列何种细菌为革兰氏阴性菌 A、脑膜炎奈瑟菌 B、结核分支杆菌 C、铜绿假单细胞 D、枯草芽孢杆菌 E、白喉棒状杆菌 答案C 13. 下列何种细菌为革兰氏阳性杆菌 A、大肠杆菌 B、铜绿假单细胞
临床微生物学及检验习题集 第一部分基础题绪论一、名词解释:微生物()、微生物学()、医学微生物学( )二、选择题1．下列描述的微生物中，不是所有微生物共同特征的是A个体微小B 分布广泛C 种类繁多D 只能在活细胞内生长繁殖E 结构简单2．不属于原核细胞型微生物的是A 细菌B真菌 C支原体 D 衣原体E立克次体3属于真核细胞型微生物的是 A 螺旋体 B 放线菌 C 真菌 D 细菌 E 立克次体4下列那种微生物属于非细胞型微生物 A 细菌B衣原体 C支原体 D病毒 E立克次体 细菌的形态及结构 一、名词解释：1.肽聚糖（）2.脂多糖()3. 质粒（）4. 异染颗粒()5. 革兰染色()6. 芽胞()7荚膜() 二、选择：1．及真核细胞结构相比较，细菌所特有的一种重要结构是A核蛋白体（核糖体）B线粒体C高尔基体 D细胞膜 E 细胞壁2．及细菌运动有关的结构是A鞭毛B菌毛C纤毛D荚膜E轴丝3．及内毒素有关的细菌结构是A外膜层B核膜C线粒体膜D荚膜E细胞膜4．芽胞及细菌致病有关的是A抗吞噬B产生毒素C耐热性D粘附于感染部位E侵袭力 5．细菌核质以外的遗传物质是 A B 核蛋白体 C质粒D异染颗粒 E性菌毛 6．及细菌粘附功能有关的细菌结构是A菌毛B荚膜 C中介体D 胞浆膜E细胞膜
7．不属于细菌基本结构的是A鞭毛B细胞质C 细胞膜D核质（拟核）E细胞壁 8．细菌内毒素的主要成份是 A 肽聚糖 B 蛋白质 C鞭毛 D 核酸E脂多糖 9．及细菌感染侵袭相关的结构是A 中介体B 细胞膜 C异染质颗粒D 芽胞E 荚膜 10．青霉素的抗菌作用机理是A 干扰细菌蛋白质的合成B抑制细菌的核酸代谢C抑制细菌的酶活性D破坏细菌细胞壁中的肽聚糖E破坏细胞膜11细菌的L型是指：A细菌的休眠状态B细胞壁缺陷型细菌C非致病菌D不可逆性变异的细菌E光滑型—粗糙型菌落()变异 12．溶菌酶杀菌的作用机理是：A裂解聚糖骨架的β-1，4糖苷键 B竞争肽聚糖合成中所需的转肽酶C及核蛋白体的小亚基结合 D竞争性抑制叶酸的合成代谢 E破坏细胞膜 13．关于细菌的L型错误的是：A主要由肽聚糖结构的缺损引起的B可在体外试验中形成C呈多形性D需在高渗透压的培养基中分离培养E失去产生毒素的能力而使其致病力减弱 14．细菌的革兰染色性不同是由于A细胞核结构B细胞壁结构C 细胞膜结构同D磷酸壁的有无 E中介体的有无15．细菌哪种结构类似真核细胞线粒体A核蛋白体B中介体C胞质颗粒D质粒 E 核质16．需用电子显微镜才能观察到的结构是A荚膜B异染颗粒C鞭毛D菌毛 E芽胞17．革兰染色所用试剂的顺序是A稀释
临床微生物学检验技术试题及答案A1题型 1、人类ABO血型抗原包括 A、A抗原 B、B抗原 C、O抗原 D、AB抗原 E、A抗原和B抗原 答案：E 2、ABO血型物质在人体中可引起哪几种Ab产生 A、抗B抗体 B、抗AB抗体 C、抗A抗体 D、抗O抗体 E、抗A和抗B抗体 答案：E 3、免疫耐受就是 A、非特异性无反应性 B、特异性无反应性 C、机体无反应性 D、免疫抑制性 E、对任何抗原都不反应 答案：B 4、迟发型皮肤过敏反应与下列哪种物质有关 A、IgE B、IgA C、活化B细胞 D、活化T细胞 E、活化NK细胞
答案：D 5、佐剂作用是 A、将Ag送入机体各部位 B、将Ag固定在局部 C、增强Ag免疫原性 D、赋予Ag免疫原性 E、增强机体对Ag的免疫应答 答案：E 6、下列哪种物质既有非特异性免疫也参与特异性免疫反应 A、IgG B、干扰素 C、IgA D、前列腺素 E、补体 答案：E 7、TDH 细胞是 A、产生Ab细胞 B、天然杀伤细胞 C、细胞毒细胞 D、迟发变态反应T细胞 E、依Ab杀伤T细胞 答案：D 8、关于霍乱弧菌是否侵入上皮细胞，下列说法正确的是 A、不侵入 B、侵入 C、在特定条件下侵入 D、具有侵袭基因的霍乱弧菌侵入 E、侵入后局限于上皮细胞内 答案：A 9、葡萄球菌能产生多种溶血素，其中最主要的是
A、α、β溶血素 B、α、γ溶血素 C、β、γ溶血素 D、δ、ε溶血素 E、α、γ溶血素 答案：A 10、与其他肺部感染病原菌相比较，铜绿假单胞菌的毒力特点是 A、产生外毒素 B、具有内毒素 C、产生溶血素 D、产生绿脓素 E、具有菌毛 答案：D 11、有荚膜的流感嗜血杆菌含有荚膜多糖抗原称作： A、V抗原 B、M抗原 C、A抗原 D、X抗原 E、S抗原 答案：B 12、下列关于铜绿假单胞菌叙述中，正确的是 A、革兰氏阳性球菌 B、革兰氏阳性杆菌 C、无芽孢 D、具有荚膜 E、无鞭毛 答案：C 13、下列何种微生物具有荚膜结构 A、军团菌 B、支原体
临床微生物学与检验测试题及答案一一细菌感染的实验室检查与诊断及细菌生理 一、名词解释 1. 血清学诊断 o 拉圭苴 2. 培养基 3. 基础培养基 4. 选择培养基 5. 鉴别培养基 6. 菌落 二、填空题 1. 实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选 择、____________________ 、____________________ 有直接关系。 2. 辅助诊断风湿热的抗“ O'实验属于_____________________ 。 3. 血清学试验一般需作两次，其血清分别取自疾病 的____________________ 和 __________________ .第二次抗体效价比第一 次____________________ 时方有诊断意义。 4. 对流行性脑炎患者进行细菌学检查，可采集的标本 有____________________ 、 ___________________ 和___________________ 。 5. 进行病原菌的分离培养时，从有正常菌群部位采取的标本应接种 于____________________ 培养基或 _____________________ 培养基。 6. 细菌感染实验室检查中，常用的血清学方法 有____________________ 、 _____________________ 和______________________ 三大类。 7. 属于直接凝集反应的血清学试验有 _____________________ 和______________________ 三、单项选择题 1. 目前在传染病的预防接种中，使用减毒活疫苗比使用灭活疫苗普遍，关于其原因下述 不正确的是 A. 减毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗 B. 减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长 C. 减毒活疫苗能在机体内增殖或干扰野毒株的增殖及致病作用，灭活疫苗则不能 D. 减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型IgA ,故适用于免疫缺陷或低下的患者
临床微生物学检验 确保高压效果的可靠性。 【适用范围】 蒸气式高压锅。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．将水加到高压锅内至其刻度线，将欲灭菌物品放入锅内，关闭锅门，拧紧螺丝并确认已经封闭。 2．打开排气阀。 3．打开蒸汽开关，向锅内输入蒸汽或接通电源，使产生蒸汽。 4．观察排气阀的排气情况，待排出的气体由冷气变为蒸汽，压力表达到0.05mPa 时，关闭排气阀。 5．观察压力表，当压力升至0.15mPa时，开始计时。 6．压力达0.15mPa后，可调节进气阀，减少进气量，维持压力并使其稳定在 0.15mPa。电加热时，可切断电源，维持压力持续15分钟，至多不超过30分 钟，否则营养物质破坏。 7．关闭进气阀门或切断电源，让锅内物品自然冷却，不可马上打开排气阀，以免发生意外。 8．待锅内压力降为零时，可打开锅盖，取出物品。 操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日
确保培养箱温度恒定。 【适用范围】 各种类型隔水式、温度设定为27℃、35℃、42℃、56℃培养箱。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【操作方法】 1．培养箱应放置于水平地面（或坚固的水平台），电源电压须匹配。 2．从注水口先将隔水箱内的水注满到浮标要求的位置。 3．将温度调节旋扭调至所需温度，然后将电源开关拨至“开”处。 4．每次使用时应在培养箱顶部插入标准温度计，监测实际温度。 5．培养箱工作温度波动范围应控制在±10C以内。 6．培养箱正面贴有温度记录表，记录每天上班和下班时温度，如温度超出正常范围，指示该温度的刻度应划上红圈，并把修正温度记录下来。 7．培养箱内外应保持清洁。 操作人员部门主管质量负责人 姓名唐玉贞检验科检验科 日期 06年06月06日
临床微生物学检验技术考试题库及答案 2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。 3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素） 4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白） 5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。是溶菌酶、青霉素作用部位） 6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子 7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质）*将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标 8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。高渗环境生长。（环丙沙星） 9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。 10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。 11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长 12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。 13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法； 14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～ 10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。 15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。 16、透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构；扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。
临床微生物学检验 题型 单选（4选1） 多选（5选多） 判断改错（错误的并改正） 简答（适当解释说明） 论述（案例分析，具体阐述） 革兰氏染色属复染法，初染，媒染，脱色，复染4个过程 革兰阳性（呈紫色）革兰阴性（呈红色） 第二章 1.细菌大小以微米（μm）为测量单位。 2.细菌结构： ①附属结构：鞭毛、菌毛（光镜下看不见，不能作为鉴定依据，没鉴定价值）或纤毛； ②表层结构：糖萼（荚膜或粘液层）； ③内部结构：细胞质、质粒、芽孢。 3.细菌功能： ①动力（鞭毛是细菌的运动器官），观察细菌动力可用悬滴法或压滴法在显微镜下直接观察其运动，也可将细菌穿刺接种半固体培养基观察动力。 鞭毛具有鉴定价值，采用鞭毛特殊染色（如镀银染色）可观察有无鞭毛及鞭毛数量、分布；一般染色不能看见鞭毛（如革兰氏染色）。 4.芽孢的功能：①对热力、干燥、辐射、化学消毒剂等具有强大抵抗力； ②以是否杀死芽孢作为物品消毒灭菌判断效果的指标。 ③芽孢在菌体的位置和直径大小随菌种不同，这种形态特点有助于细菌鉴别。 5.细菌生长曲线（要求整个过程，结合生长曲线记忆4个时期比较容易，可能是简答题） 细菌二分裂方式进行繁殖。 以倾注平板法计数孵育后的菌落数换算菌落形成单位（CFU）。 生长曲线：连续检测细菌不同培养时间的CFU，以CFU为纵坐标，培养时间为横坐标作出一条反映细菌生长数变化的规律曲线。 典型的生长曲线分为迟缓期、对数生长期、稳定期、衰亡期。 ①迟缓期。也称为准备时期，是细菌适应环境的过程。特点：细菌的核酸、蛋白质、辅酶等物质合成增加，细胞体积增大，细菌数量恒定或极少量增加。 ②对数生长期。特点：细菌以最大的速率生长和分裂，细菌数量成对数增加。细菌代谢活跃、稳定，其大小、形态、染色性和生化反应典型，对外界因素反应敏感，是检测细菌生物学性状和进行药物敏感性试验的适宜阶段。不添加培养基下一般细菌对数期维持4~8h。 ③稳定期。特点：由于培养基中营养物质消耗、有害代谢产物积累和P H等环境变化，细菌生长速率降低，细菌死亡数增加使生长繁殖菌数和死亡菌数处于动态平衡，细菌数量达到最大，即处于稳定期。此时期细菌合成代谢产物较多，通常维持10h。向培养基系统中补充营养物质，取走代谢产物，改善培养条件，可延长稳定期。由于代谢产物较多，是细菌生化反应试验鉴定的最佳时期。 ④衰亡期。特点：细菌死亡速率逐步增加，活菌数减少，死亡数大于增加数，细菌形态不典型，甚至出现自溶，该时期的细菌不能用于细菌的鉴定和研究工作。 6.细菌的生化反应：由于不同细菌所具有的酶系统各不相同，对营养物质的分解能力也不一致，因而其代谢产物不同。根据此特点，利用生化试验的方法来检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的反应。 7. 灭菌：破坏和去除物体上所有微生物（包括病原微生物和非病原微生物）和细菌芽孢的方法。
临床微生物学与检验测试题及答案
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临床微生物学与检验测试题及答案——细菌感染的实验室检查与诊断及细菌生理 一、名词解释 1.血清学诊断 2.培养基 3.基础培养基 4.选择培养基 5.鉴别培养基 6.菌落 二、填空题 1.实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选 择、、有直接关系。 2.辅助诊断风湿热的抗“O”实验属于。 3.血清学试验一般需作两次，其血清分别取自疾病 的和.第二次抗体效价比第一 次时方有诊断意义。 4.对流行性脑炎患者进行细菌学检查，可采集的标本 有、和。 5.进行病原菌的分离培养时，从有正常菌群部位采取的标本应接种 于培养基或培养基。 6.细菌感染实验室检查中，常用的血清学方法 有、和三大类。 7.属于直接凝集反应的血清学试验有和。 三、单项选择题 1.目前在传染病的预防接种中，使用减毒活疫苗比使用灭活疫苗普遍，关于其原因下述不正确的是 A.减毒活疫苗的免疫效果优于灭活疫苗 B.减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长 C.减毒活疫苗能在机体内增殖或干扰野毒株的增殖及致病作用，灭活疫苗则不能 D.减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型IgA，故适用于免疫缺陷或低下的患者 E.减毒活疫苗一般只需接种一次即能达到免疫效果，而灭活疫苗需接种多次
2.白百破三联疫苗的组成是 A.百日咳类毒素，白喉类毒素，破伤风类毒素 B.百日咳死疫苗，白喉类毒素，破伤风类毒素 C.百日咳死疫苗，白喉死疫苗，破伤风类毒素 D.百日咳活疫苗，白喉活疫苗，破伤风死疫苗 E.百日咳活疫苗，白喉死疫苗，破伤风死疫苗 3.使用时要注意防止Ⅰ型超敏反应的免疫制剂是 A.丙种球蛋白 B.胎盘球蛋白 C.抗毒素 D.白细胞介素 E.干扰素 4.关于胎盘球蛋白的叙述，错误的是 A.由健康产妇的胎盘和婴儿脐带中提取制备 B.一般含IgM C.一般不会引起超敏反应 D.主要用于麻疹，甲型肝炎和脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预防 E.免疫效果不如高效价的特异性免疫球蛋白 5.伤寒病人发病第一周内，分离病原菌应采取的标本是 A.血液 B.尿液 C.粪便 D.呕吐物 E.脑脊液 6.咽喉假膜标本涂片染色后，镜检出有异染颗粒的棒状杆菌，其临床意义在于诊断 A.结核病 B.军团病
CNAS-CL42 医学实验室质量和能力认可准则在 临床微生物学检验领域的应用说明 Guidance on the Application of Accreditation Criteria for the Medical Laboratory Quality and Competence in the Field of Clinical Microbiology 中国合格评定国家认可委员会
前言 本文件由中国合格评定国家认可委员会（CNAS）制定，是CNAS根据临床微生物学检验的特性而对CNAS-CL02：2012《医学实验室质量和能力认可准则》所作的进一步说明，并不增加或减少该准则的要求。 本文件与CNAS-CL02：2012《医学实验室质量和能力认可准则》同时使用。 在结构编排上，本文件章、节的条款号和条款名称均采用CNAS-CL02：2012中章、节条款号和名称，对CNAS-CL02：2012应用说明的具体内容在对应条款后给出。 本文件的附录A为规范性附录。附录的序号及内容与CNAS-CL02:2012不对应。 本文件于2012年制定，本次为第1次修订换版。
医学实验室质量和能力认可准则 在临床微生物学检验领域的应用说明 1 范围 本文件规定了CNAS对医学实验室临床微生物学检验领域的认可要求。 临床微生物学检验领域中涉及的病毒血清学检验、基因扩增检验、寄生虫检验等应符合相关专业领域应用说明的要求。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件。 CNAS-RL02 能力验证规则 3 术语和定义 4 管理要求 4.1 组织和管理责任 4.1.1.2 实验室为独立法人单位的，应有医疗机构执业许可；实验室为非独立法人单位的，其所属医疗机构执业证书的诊疗科目中应有医学实验室，自获准执业之日起，开展医学检验工作至少2年。 4.1.1.4 e) 应根据工作流程及性质定期实施生物安全风险评估，根据生物安全理论和技术的新进展制定、修订相应的生物安全操作和防护规程并进行培训，以减小职业暴露的危险。当工作流程及性质发生变动时，应及时实施再评估。 应制定生物安全事故和危险品、危险设施等意外事故的预防措施和应急预案，并对全体人员进行培训。 至少应规定如下安全要求： （a）不同控制区域的防护措施及合适的警告； （b）已知或有潜在经空气、气溶胶传播危险的样品或病原体在生物安全柜内操作； （c）样品安全运送及处理，如：工作人员接种疫苗，戴手套和进行呼吸道防护（适用时），确保容器密封性，嗅平板时的潜在危害及其防护等； （d）渗漏样品的处理措施；
临床微生物学检验技术试题及答案 1.在对病人进行诊断时，常采用血清学方法，Ag-Ab反应有许多特点，但Ag-Ab反应主要特点是 A、分阶段性 B、可逆性 C、敏感性高 D、特异性 E、非特异性 答案：D 2.革兰氏染色是重要的细菌鉴别染色之一其媒染剂（卢戈氏碘液）所起的作用 A、增加摄取染料作用，不易脱色 B、固定初染细菌 C、对下一步脱色起促进作用 D、杀死细菌 E、破坏细菌细胞壁 答案：A 3.血清制品的保存常加一些防腐剂，防止杂菌生长，常用的是硫柳汞常用浓度为 A、0.001% B、0.01% C、0.1% D、1% E、10% 答案：B 4.能在SS琼脂上生长出的大肠埃希氏菌呈现______色 A、浅红 B、深红 C、微黄 D、无 E、深灰
答案：B 5.在用血清学方法诊断或进行流行病学调查时，常采用Ag与Ab反应，进行此反应必须有电解质参与，电解质量与反应有关，当电解质超出最佳浓度时 A、提高反应敏感性 B、降低敏感性 C、不反应 D、反应不变 E、提高特异性 答案：A 6. 肺炎链球菌在临床上主要引起下列何种疾病 A、脓胸 B、大叶性肺炎 C、肺纤维化 D、肺结节 E、支气管炎 答案：B 7. 颗粒型细菌抗原（死或活菌）在哪种反应中采用 A、沉淀反应 B、琼脂扩散 C、中和试验 D、凝集试验 E、对流电泳 答案：D 8.抗酸染色的结果判定 A、菌体着兰色为抗酸菌 B、菌体着红色为抗酸菌 C、菌体着绿色为抗酸菌 D、菌体着黄色为抗酸 E、菌体无色为抗酸菌 答案：B
9. 下列何种培养基适合军团菌培养 A、庆大霉素培养基 B、BCYE琼脂培养基 C、巧克力平板 D、PPLO培养基 E、Korthof培养基 答案：B 10. 冻干菌种待完全干燥后，需将安瓶中空气抽成真空，当用真空火花检测器检测时，火花是什么颜色证明为真空 A、红色 B、黄色 C、白色 D、紫色 E、兰绿色 答案：D 11.戊烷脒选择性培养基，胆汁湟绿培养基适用于什么细菌培养 A、霍乱弧菌 B、白喉杆菌 C、破伤风杆菌 D、布鲁氏菌 E、炭疽杆菌 答案：E 12.活性炭酵母琼脂培养基CYE是适用于培养什么细菌 A、分离鼠疫杆菌 B、布鲁氏菌培养 C、白喉杆菌培养 D、肠道细菌培养 E、军团菌的培养 答案：E 13.牛肉膏汤是常用的培养基，但它有一个特点是什么
临床微生物学检验复习重点 第一章生物安全和医院感染 1.实验室生物安全保障：指单位和个人为防止病原体或毒素丢失、被盗、滥用、转移或有意释放而采取的安全措施。 2.医院感染（NI）：在医疗机构中获得的感染。包括外源性和内源性，外源性来自于另一感染者/环境内源性：患者，正常菌群迁徙至其他部位等导致病原体过度生长。 第二章临床微生物检验标本的采集 1.标本的一般采集原则 1.1早期采集病程早期、急性期或症状典型时，使用抗生素或其他抗菌药物之前。 1.2无菌采集：采集的标本应无外源性污染。消毒，无菌容器。 1.3根据目的菌的特性用不同的方法采集 1.4采集适量标本伤寒-1周：血液 2周：粪便和尿夜 1.5安全采集 2.厌氧菌：在有氧条件下不生长，在无氧条件下生长的细菌。 2.1厌氧菌感染的条件：组织缺氧或氧化还原电势降低→原因：局血障：血管损伤、肿瘤压迫、烧伤、动脉硬化、组织水肿、坏死、有异物等，刺伤，大面积外伤 2.2厌氧菌感染的临床特征 （1）分泌物具典型的腐臭，血性渗出物呈黑色。在紫外线下可发红色荧光(产黑色素普氏菌或卟啉单胞菌感染)。 （2）感染组织局部有大量气体产生→皮下有捻发音时为产气荚膜梭菌。 （3）部位为黏膜附近 （4）长期使用氨基糖苷类抗生素无效者，新近流产史，胃肠术后 （5）深部外伤枪伤，咬伤后继发感染 （6）分泌物经革兰染色后，有细菌，规培：阴性液体及半固体培养基深部生长 第三章临床细菌学检验技术 1.细菌形态学检查→显微镜检其菌体形态 1.1涂片 1.2干燥 1.3固定 1.4 染色：（1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。 （2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 （3）（3）脱色：将载玻片上的水甩净，并衬以白背景，用95%酒精滴 洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒，立即用水冲净酒精。 （4）复染：用复红液染1—2分钟，水洗。 1.5镜检：干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。 固定的目的 ①杀死微生物，固定其细胞结构； ②保证菌体能牢固地粘附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉； ③改变菌体对染料的通透性，一般死细胞原生质容易着色。 实验原理 细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性 复合物，乙醇能使它溶解，所以染色的前二步结果是一样的，但在G+细胞中， 乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘的复合物分子太 大，不能通过细胞壁，保持着紫色。在Gˉ细胞中，乙醇处理不但破坏了胞壁外
临床微生物检验 1、微生物的分类：（三型八大类)**全部是重点** 2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。 3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素） 4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白） 5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。是溶菌酶、青霉素作用部位） 6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子 7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质） *将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标 8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。高渗环境生长。（环丙沙星） 9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。 10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。 11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长 12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。 13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法； 14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。 15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。
临床微生物学检验技术试题及答案 A1型题] 以下每一考题下面有A、B、C、D、E 5个备选答案，请从中选一个最佳答案，并在答题卡将相应题号的相应字母所属方框涂黑 1．对外界抵抗力最强的细菌结构 A．细胞壁 B．荚膜 C．芽胞 D．核质 E．细胞膜 2．变异最易出现在 A．迟缓期 B．对数期 C．稳定期 D．衰亡期 E．以上均可 3．I型细菌特性 A．需用低渗含血清培养基 B．抗原性不变 C．对青霉素敏感 D．呈高度多形性 E．以上均错 4．关于外毒素 A．性质稳定，耐热 B．毒性较强 C．无抗原性 D．主要由革兰阴性菌产生，少数革兰阳性菌也可产生 E．以上均对
5．吞噬细胞吞噬细菌后，后果 A．引起组织损伤 B．杀死细菌 C．不能杀死细菌 D．引起细菌体内扩散 E．以上均对 6．酒精消毒最适宜的浓度 A．20％ B．25％ C．50％ D．75％ E．90％ 7．脑膜炎球菌 A．G+肾形双球菌 B．专性需氧，普通培养基中不能生长 C．对理化因素抵抗力强 D．可分解甘露醇 E．标本直接涂片，细菌不可能位于中性粒细胞内。8．伤寒杆菌 A．有O、H、Vi抗原 B．可用免疫血清鉴定菌型 C．有鞭毛 D．主要引起细胞免疫 E．以上均正确 9．破伤风特异性治疗，可用 A．抗生素 B．抗毒素 C．类毒素 D．细菌素 E．破伤风菌苗
10．与细菌结核杆菌致病性有关的是A．结核杆菌索状因子 B．磷脂 C．蜡质D D．硫酸脑甙脂 E．以上均是 11．鼠疫杆菌 A．鼠是重要传染源传播媒介 B．临床上有腺鼠疫和败血型鼠疫两类C．可通过蚊子传染给人 D．病人微循环障碍，有黑死病之称E．在陈旧培养物中菌体形态单一 12．可直接观察到病毒体大小的办法A．电镜观察法 B．光镜观察法 C．X线衍射法 D．超速离心法 E．超过滤法 13．经垂直感染导致畸胎的病毒A．麻疹病毒 B．风疹病毒 C．流感病毒 D．乙脑病毒 E．甲肝病毒 14．流感病毒最易变的结构是 A．核蛋白 B．M蛋白 C．甲型流感病毒的HA D．乙型流感病毒的HA