感染性疾病血清学标志物检验质量保证
一、定义
?质量保证( Quality Assurance,QA):为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。
?室内质量控制（Internal Quality Control,IQC):由实验室工作人员,采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。
?室间质量评价（External Quality Assessment, EQA ):为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的办法，连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。当EQA 用来为执业许可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实验室能力验证（Proficiency testing, PT )。在以前的文献中，EQA 常描述室间质量控制。
?批( Run)：在相同条件下所获得的一组测定。
?均值（Mean）
?标准差（Standard deviation,SD或s)
?变异系数（Coefficient of variation,CV）
?正态分布(Gaussian distribution):当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦即正态分布，又称高斯分布。
?正态分布的基本统计学含义可用均数（）、标准差（s）和概率来说明。
二、临床实验室常规检验步骤
（一）标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。
（二）实验室测定：标本接收、贴标签、样本处理、检测、测定的有效性和临床诊疗价值。（三）报告和解释：结果发出、结果解释和临床管理。
（四）质量保证、室内质控和室间质评之间的关系
三、临床免疫检验方法
（一）三大“标记”免疫检验技术:荧光标记、放射性核素标记和酶标
（二）其它标记免疫测定技术：发光物标记、金标、元素标记等
（三）免疫沉淀和免疫凝集试验
四、感染性疾病血清学标志物
肝炎病毒标志物：HBsAg 、抗HCV 等、抗HIV、梅毒抗体、其它抗原、抗体。
五、检验方法
１、ELISA
２、应用酶标原理的自动化分析仪
３、应用其它标记物的自动化分析仪
４、RIA
六、自动化免疫分析仪的基本原理
１、基本上均为固相免疫测定，固相以磁性微粒最为普遍，其次是聚丙烯微孔板条和试管。２、均为标记免疫测定，标记物最常用的是酶（碱性磷酸酶，辣根过氧化物酶），其次是元素，发光标记物等；
３、通常采用发光或荧光测定方式（常使用的酶发光或荧光底物如AMPPD （Dioxetanes), 鲁米诺，4-甲基伞型酮磷酸盐等；
七、酶联免疫吸附试验（ELISA ）
（一）影响ELISA 测定的因素
１、试剂盒的因素
（１）实验操作
（２）影响ELISA 试剂盒质量的因素
Ａ、固相材料:聚苯乙烯塑料
Ｂ、抗原:纯化、合成和基因工程抗原
Ｃ、抗体：多抗、单抗和基因工程抗体
Ｄ、酶结合物：酶免疫测定的核心成份
Ｅ、色原底物：OPD 和TMB
Ｆ、运输贮存
（二）酶免疫测定操作中的注意事项
１、标本的收集、运送和保存
Ａ、标本类型及采集容器
ａ、最常用的标本：血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液。
ｂ、建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。采集容器最好为一次性无菌密闭容器。
Ｂ、标本采集时间及患者准备
ａ、激素和治疗药物：可的松峰值在早晨4～6点之间；生长激素、促黄体激素（LH ）和促卵泡激素（FSH ）均以阵发性方式释放，须在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。再如治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。
ｂ、感染性病原体抗原、抗体
ｃ、肿瘤标志物
ｄ、特定蛋白
Ｃ、可能影响测定结果的标本因素
ａ、内源性干扰因素：类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗性抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子、总蛋白浓度等
ｂ、外源性干扰因素：溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝固不全、反复冻融
Ｄ、标本的保存
用于抗体检测的血清或血浆样品应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2 -8℃。
２、试剂准备
（１）从冰箱中取出的试剂，待温度与室温平衡后使用；
（２）所用蒸馏水或去离子水应保证质量。
３、加样
（１）加样不可太快，避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。
（２）从滴瓶中滴加试剂，除了要注意滴加角度外，滴加速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。
（３）全自动加样系统的标本“交叉污染”问题
加样器
加样器的类型
（１）单道连续可调式移液器
（２）多通道连续可调式移液器
（３）单道连续移液器
（４）单道移液管配合使用的移液器
P 型移液器的型号和取液范围
（１）型号所用量程范围（μL ）
（２）GILSON eppendorf
（３）P2 0.1 ? 2
（４）P10 0.5 ? 10 0.5 ? 10
（５）P20 2 ? 20 2 ? 20
（６）P100 20 ? 100 10 ? 100
（７）P200 30 ? 200 20 ? 200
（８）P1000 200 ? 1000 100 ? 1000
加样器的使用
吸液的位置
（１）把按钮压至第一停点垂直握持移液器，使吸嘴浸入液样中，浸入液体深度视型号而定：（２）P2 和P10 ≤1mm
（３）P20 和P100 2 -3mm
（４）P200 和P1000 2 -4mm
（５）P5000 3 -6mm
（６）P10ML 5 -7mm
P 型移液器的应用范围
（１）P2 ，P10 : 超微量计量及移液，应用于DNA 定序及酶分析等。
（２）P20 ，P100 ，P200 和P1000 应用于一般水溶液、酸、碱的计量和移液。
（３）P5000 和P10ML 大体积移液和计量。
P 型移液器技术指标
加样器的校准
４、温育
（１）常采用的温育温度有43℃、37℃、室温和4℃等。
（２）温育所需时间与温度成反比，即温育温度高，则所需时间相对较短。
（３）温育时，微孔板应置于水浴（浮于水面）或湿盒中，以使反应溶液的温度迅速与室温平衡。
（４）“边缘效应”的排除: 使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。
５、洗板
（１）每次温育后洗板是否彻底，与非特异背景显色有很大关系。
（２）洗板液一般为含0.05% Tween20 的中性PBS 。
（３）Tween20 为一种非离子去垢剂，既含亲水基团，也含疏水基团。
（４）洗涤作用机理，借助其疏水基团与固相上蛋白的疏水基团形成疏水键，从而削弱蛋白与固相的吸附，同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下，促使蛋白质脱离固相而进入液相
（５）洗板液中Tween20 浓度高于0.2%，可使包被于固相上的抗原或抗体解吸附而影响试验测定下限。
６、显色
（１）加入底物A 和B 后，应振荡混匀
（２）当底物为OPD 时，显色反应应避光进
（３）一般商品试剂盒显色反应条件为37℃或室温反应15～30 min 。从理论上说，37℃30分钟才可以使HRP 的底物催化反应完全，尽管在最初的10分钟内，绝大部份催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37℃下反应25～30分钟后，终止反应比色测定。
７、比色
（１）加酸终止显色反应后，比色测定前应振荡混匀
（２）测定时，要注意酶标仪的波长是否已调至合适
（３）比较好的酶标仪可选择单波长或双波长比色测定，所谓双波长比色，即在敏感波长（此时对所显色具最大光吸收）如450 nm 和非敏感波长（所测得的光吸收为微孔板上的划痕、污迹以及指纹等所致），最后从仪器得到的读数为在敏感波长测得的吸光度与非敏感波长测得的吸光度之差。
８、结果判断
（１）按照试剂盒确定的Cut-off 值判断结果
（２）ELISA 测定的“灰区”（可疑结果的含义）
９、结果报告及解释
（三）ELISA 测定的主要问题
１、酶免一步法的“HOOK EFFECT”问题
（１）一步法的“HOOK EFFECT”产生的原因：定性酶免疫测定的CUT-OFF 值
（２）酶免疫测定出现假阳性的原因
Ａ、操作及仪器因素：加样、洗板、自动化加样系统的标本间“交叉污染”
Ｂ、标本因素：RF 、补体、异嗜性抗体、动物抗体、动物抗体、高浓度Ig 、溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全
（３）酶免疫测定出现假阴性的原因
Ａ、操作、试剂及仪器因素：标本未加、试剂过期或变质、仪器针孔堵塞、标本“交叉污染”Ｂ、标本因素：补体、自身抗体、反复冻融
２、结果的判断
八、临床免疫检验的室内质控问题
１、临床免疫检验室内质控不太受重视的原因有三: 一方面可能是质控品来源有限或价格因素；其次是尚没有意识到；再有就是不知从何做起。
２、使用统一合格的校准品开展室内质控才是解决各实验室结果可比性差同时也是保证检验质量的唯一有效的途径。
３、室内质控的内涵并不仅仅是使用质控物进行统计学质控，它包括分析前、分析中和分析后的质量控制三个方面。
４、免疫检验室内质控既有与临床生化室内质控共性的一面，也有其特性的地方
九、室内质量控制（IQC ）
IQC 主要包括三个方面：
（1）测定前的质量控制；
（2）统计学质量控制；
（3）质量控制的评价。
十、统计质控方法
（一）基线测定
（二）质控规则的表达方式及定义
１、Levey-Jennings 质控图方法
基本的统计学含义：稳定条件下，在20个IQC 结果中不应有多于1个结果超过2 SD （95.5% 可信限）限度；在1000个测定结果中超过3 SD （99.7% 可信限）的结果不多于3个。
如以±3 s 为失控限，假失控的概率为0.3%。
２、Levey-Jennings 质控图结合Westgard 多规则质控方法
３、累积和( CUSUM) 质控方法
４、“即刻法”质控方法
“即刻法”质控方法的实质是一种统计学方法,即Grubs 异常值取舍法；只要有3个以上的数据即可决定是否有异常值的存在。
十一、IQC 的局限性
１、在免疫测定中IQC 可能测不出的误差
２、测定前测定中测定后
样本鉴定不对样本吸取不对结果记录错误
样本贮存中变质试剂加入不对
３、此类误差的发生率在不同的实验室有所不同，一般要求小于0.1%，且应均衡地分布于测定前、测定中和测定后的不同阶段。
十二、室间质量评价（EQA ）
１、EQA
２、Proficiency testing (PT)
十三、乙肝标志物检测的问题
乙肝“两对半”、抗HBc IgM、HBV DNA
乙型肝炎病毒( Hepatitis B Virus )
乙肝“两对半”：乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体（抗HBs）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（抗HBe）、乙肝核心抗体（抗HBc）
（一）HBsAg 测定中可能存在的问题
１、在HBsAg 的测定中，最大的问题是假阴性问题:
（１）HBsAg 含量低于所用方法的测定下限之下。如感染的“窗口期”、急性期后或恢复期、自限性感染末期的携带者等。
（２）编码HBsAg 的HBV S 基因的突变
（３）HCV/HDV 重叠感染对HBV 复制和/或HBsAg 的表达的抑制作用。
（４）测定方法所用抗体对HBV 不同基因型检测敏感性的不同。
（５）HOOK EFFECT
２、编码HBsAg 的HBV S 基因的突变对检测的影响
（１）HBV 容易发生突变，较其他DNA 病毒的突变率要高10倍
（２）突变主要集中在核心启动子、前核心区和编码病毒包膜蛋白的 a 决定簇的基因区域。
（二）目前的商品试剂盒对HBsAg 突变株的测定能力
可归为三类：
１、突变HBsAg 和野生型均可检出。
２、不能检出突变HBsAg 。
３、与野生型抗原相比，突变HBsAg 的检出能力明显降低。
使用酶标多克隆抗体的商品试剂，大多数可归为第一和第三类。
（三）HBV S 基因变异所致HBsAg 假阴性的最大的问题
１、输血安全性。尤其是逃逸突变株流行较广的地区，在HBV 高流行区域，突变株的流行率也高
２、导致疫苗免疫的失败。要在进行人群HBV 分子流行病学的基础上，考虑研制针对主要流行HBsAg 变异株的乙肝疫苗，保证免疫的有效性。
（四）HBsAg 的变异所致的不常见的HBV 标志物模式或不一致的结果。
１、单独抗HBc 阳性。
２、HBsAg 阴性但HBeAg 阳性。
３、血清HBsAg 阴性但抗HBc 和抗HBs 阳性。
４、HBsAg （HBeAg ）和抗HBs （大多为<100 IU/ml 的低滴度）同时存在。
５、使用不同厂家的HBsAg 试剂盒得到的不一致结果。
（五）HBV 不同基因型对检测敏感性的影响
１、HBV 基因型依其全基因组大于8%的变化而分为八型，命名为 A 到H 。基因型A 主要存在于白人，而基因B 和 C 主要在亚洲人群。
２、以单抗为基础建立的HBsAg 免疫测定方法，当用于生产单抗的病毒株与流行人群的亚型/基因型或变异株不同时，可能得不到可靠的结果
（六）总抗HBc
１、机体对HBV 抗原的免疫应答最早出现的是对HBcAg 的细胞免疫应答，随后是体液免疫应答产生抗HBc ，总抗HBc 包括抗HBc IgM 、IgA 、IgG 和IgE 等。
２、抗HBc 不是保护性抗体。抗HBc 在血中呈低滴度且与抗HBs 同时存在，是既往感染的标志。
３、在HBV 高流行人群中，抗HBc 常作为疫苗免疫前的筛检方法。
３、在欧洲和美国，抗HBc还是血液筛查的一个指标。在我国，抗HBc没有作为血液筛查指标，其主要原因是抗HBc检测的假阳性导致血液废弃过多。
抗HBc 测定方法：竞争ELISA 模式
（七）抗HBc 测定存在的最大问题
１、假阳性
２、单项抗HBc 阳性结果的解释
（八）抗HBc 测定假阳性的主要原因
１、血清（浆）中存在交叉反应性抗体或干扰性物质
２、一个主要原因：前母B 淋巴细胞的非特异激活，导致未感染HBV 的IgA 或IgM 相关分子的产生
（九）抗HBc 检测特异性的改善
１、使用还原剂如二硫苏糖醇( dithiothreitol) 、重亚硫酸钾（potassium bisulfite ）和半胱氨酸等预处理血清标本
２、具有标本预处理的抗HBc 试验的特异性在99.8%至99.9%之间。
３、在竞争性抗HBc 免疫测定中，只有抑制值大于或等于90%者可考虑为真正的阳性
（十）单项抗HBc 真阳性
１、常为HBV DNA 阳性
２、常见于吸毒者、HIV 感染者和HBV/HCV 重叠感染者，在吸毒者中最高（>40%），在妊娠妇女中单独抗HBc 反应性的检出率为1.2%
（十一）单项抗HBc 阳性反应性的确认步骤
１、首先要确认测定结果的特异性，排除假阳性，可按下图中的步骤进行。
２、第二步是，如果单项抗HBc 反应为真阳性，则应确定HBV 感染阶段。单项抗HBc 阳性一般见于HBV 感染恢复期后（抗HBs 消失或抗HBs 浓度低）或在HBsAg 清除期（携带末期），此时，HBsAg 浓度处于最敏感HBsAg 测定方法的测定下限之下（<0.15 ng/ml ）。３、少部份单项抗HBc 阳性患者推测为自限性急性HBV 感染的窗口期，此时，HBsAg 消失，几周后，抗HBs 出现。
十四、“对话”
（一）检验科与临床的对话
检验申请单的正确填写；标本的采集、运送、保存；检验方法的可靠性和局限性；检验结果的适当解释
（二）临床与检验科的对话
病人的临床诊断情况；所开检验项目用于诊疗的目的；标本采集的程序正确性；患者的其它检验项目情况
乙肝病毒血清标志物的临床意义（即常说的乙肝五项或称两对半） 序号HBsA g 表 面抗 原 抗 -HBs HBsA b 表 面抗 体 HBeA g E 抗原 抗 -HB e HBe Ab E 抗 体 抗 -HBc HBcA g 核 心抗 体 临床意义出现率 9种常见模式 1 - - - - - 过去和现在未感染过HBV。1-30% 2 - - - - + (1)既往感染未能测出抗-HBs；(2)恢复期HBsAg已 消，抗-HBs尚未出现；(3)无症状HBsAg携带着。 5-10% 3 - - - + + (1)既往感染过HBV；(2)急性HBV感染恢复期； (3) 少数标本仍有传染性。①HBV感染已过；②抗HBs 出现前的窗口期 2-10% 4 - + - - - (1)注射过乙肝苗有免疫；(2)既往感染；③假阳性1-6% 5 - + - + + 急性HBV感后康复。0.5-5% 6 + - - - + (1)急性HBV感染；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染 性弱。 10-15% 7 - + - - + 既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢复期。5-15% 8 + - - + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性HBsAg携带者； (3)传染性弱。即俗称的“小三阳”。 5-10% 9 + - + - + 急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制，传染强。 即俗称的“大三阳”。 30-40% 16种少见模式 1+ - - - - (1)急性HBV感染早期,急性HBV感染潜伏期； (2)
0 慢性HBV携带者，传染性弱。1 1 + - - + - (1)慢性HBsAg携带者易转阴；(2)急性HBV感染趋向 恢复。 1 2 + - + - - 急性HBV感染早期或慢性携带者，传染性强。1 3 + - + + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性携带者。1 4 + + - - - (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感 染。 1 5 + + - - + (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感 染。 1 6 + + - + - 亚临床型或非典型性感染。1 7 + + - + + 亚临床型或非典型性感染。1 8 + + + - + 亚临床型或非典型性感染早期。 HBsAg免疫复合物， 新的不同亚型感染。 1 9 - - + - - (1)非典型性急性感染；(2)见于抗-HBc出现之前的 感染早期，HBsAg滴度低而呈阴性，或呈假阳性。 2 - - + - + 非典型性急性感染。 2 1 - - + + + 急性HBV感染中期。 2 2 - + - + - HBV感染后已恢复。 2 3 - + + - - 非典型性或亚临床型HBV感染。2 4 - + + - + 非典型性或亚临床型HBV感染。
肿瘤标志物的联合检测及意义 核心提示:1、甲胎蛋白（AFP）AFP是胚胎期肝脏和卵黄囊合成的一种糖蛋白，在正常成人血循环中含量极微＜20g/L。AFP是诊断原发性肝癌的最佳标志物，诊断阳性率为60%～70%。血清AFP＞400g/L持续4周，或200～400g/L持续8周者，结合影像检查，可作出原发性肝癌的诊断。急 1、甲胎蛋白（AFP）AFP是胚胎期肝脏和卵黄囊合成的一种糖蛋白，在正常成人血循环中含量极微＜20μg/L。AFP是诊断原发性肝癌的最佳标志物，诊断阳性率为60%～70%。血清AFP＞400μg/L持续4周，或200～400μg/L持续8周者，结合影像检查，可作出原发性肝癌的诊断。急慢性肝炎，肝硬化患者血清中AFP浓度可有不同程度升高，其水平常＜300ug/L。生殖胚胎性肿瘤（睾丸癌，畸胎瘤）可见AFP含量升高。 2、癌胚抗原（CEA) 癌胚抗原是从胎儿及结肠癌组织中发现的一种糖蛋白胚胎抗原，属于广谱性肿瘤标志物。血清CEA正常参考值＜5μg/L。CEA在恶性肿瘤中的阳性率依次为结肠癌（70%）、胃癌（60％）、胰腺癌（55％）、肺癌（50％）、乳腺癌（40％）、卵巢癌（30％）、子宫癌（30%）。部分良性疾病直肠息肉，结肠炎，肝硬化，肺病疾病也有不同程度的CEA 水平升高，但升高程度和阳性率较低。CEA属于粘附分子，是多种肿瘤转移复发的重要标志。 3、癌抗原125（CA125）CA125存在于上皮卵巢癌组织和病人血清中，是研究最多的卵巢癌标记物，在早期筛查、诊断、治疗及预后的应用研究均有重要意义。CA125对卵巢上皮癌的敏感性可达约70%。其他非卵巢恶性肿瘤（宫颈癌、宫体癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、结/直肠癌、乳腺癌）也有一定的阳性率。良性妇科病（盆腔炎、卵巢囊肿等）和早期妊娠可出现不同程度的血清CA125含量升高。 4、癌抗原15-3（CA15-3）CA15-3可作为乳腺癌辅助诊断，术后随访和转移复发的指标。对早期乳腺癌的敏感性较低（60%），晚期的敏感性为80%，转移性乳腺癌的阳性率较高（80%）。其他恶性肿瘤也有一定的阳性率，如：肺癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、原发性肝癌等。 5、糖类抗原19-9（CA19-9）CA19-9是一种与胃肠道癌相关的糖类抗原，通常分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠及正常成年人胰腺、胆管上皮等处。检测患者血清CA19-9可作为胰腺癌、胆囊癌等恶性肿瘤的辅助诊断指标，对监测病情变化和复发有很大意义。胃癌、结/直肠癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌等患者的血清CA19-9水平也有不同程度的升高。某些消化道炎症CA19-9也有不同程度的升高，如：急性胰腺炎、胆囊炎、胆汁淤积性胆管炎、肝炎、肝硬化等。 6、癌抗原50（CA50）CA50是胰腺和结、直肠癌的标志物，是最常用的糖类抗原肿瘤标志物，因其广泛存在胰腺、胆囊、肝、胃、结直肠、膀胱、子宫，它的肿瘤识别谱比CA19-9广，因此它又是一种普遍的肿瘤标志相关抗原，而不是特指某个器官的肿瘤标志物。CA50在多种恶性肿瘤中可检出不同的阳性率，对胰腺癌和胆囊癌的阳性检出率居首位，占94.4%；其它依次为肝癌（88%）、卵巢与子宫癌(88%)和恶性胸水（80%）等。可用于胰腺癌、胆囊癌等肿瘤的早期诊断，对肝癌、胃癌、结直肠癌及卵巢肿瘤诊断亦有较高价值。 7、糖类抗原242（CA242）CA242是与胰腺癌、胃癌、大肠癌相关的糖脂类抗原。血清CA242用于胰腺癌，大肠癌的辅助诊断，有较好的敏感性（80%）和特异性（90%）。肺癌，肝癌，卵巢癌患者的血清CA242含量可见升高。 8、胃癌相关抗原（CA72-4）CA72-4是目前诊断胃癌的最佳肿瘤标志物之一，对胃癌具有较高的特异性，其敏感性可达28-80%，若与CA19-9及CEA联合检测可以监测70％以上的胃癌。CA72-4水平与胃癌的分期有明显的相关性，一般在胃癌的Ⅲ-Ⅳ期增高，对伴有转移
肿瘤标志物的临床解析 全网发布：2011-06-23 21:59 发表者：曹水江(访问人次：4326) 肿瘤标志物（tumor marker)定义 1978年NCI提出 1979年确认并开始使用 由肿瘤组织产生的存在于肿瘤组织本身，或分泌至血液或其他体液，或因肿瘤组织刺激，由宿主细胞产生而含量明显高于正常参考值的一类物质。 应当具备：特异性强；敏感性好 肿瘤标志物常用检测技术 免疫学检测技术 酶免疫测定技术, 荧光免疫测定技术, 放射免疫测定技术（RIA), 免疫组织化学技术 分子生物学检测技术 DNA提取技术, DNA杂交技术, 限制性内切酶片段长度多态分析（RFLP）,PCR技术 肿瘤标志物分类 蛋白质类肿瘤标志物 甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA）β 2微球蛋白本-周蛋白铁蛋白前列腺特异性抗原甲状腺球蛋白SCC-Ag CYFRA21-1，组织多肽抗原（tissue polypeptide antigen，TPA） 糖类肿瘤标志物 CA19-9 CA50 CA242 CA72-4 CA125 CA15-3(CA-27-29) 酶类肿瘤标记物 α-L-岩藻糖苷酶碱性磷酸酶酸性磷酸酶乳酸脱氢酶神经元特异性烯醇化酶 激素类肿瘤标志物 促肾上腺皮质激素降钙素儿茶酚胺类人绒毛膜促性腺激素 多胺类肿瘤标志物 5-羟色胺 蛋白质类肿瘤标志物(9) 甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA）β 2微球蛋白本-周蛋白铁蛋白前列腺特异性抗原甲状腺球蛋白SCC-Ag CYFRA21-1 甲胎蛋白（AFP） 1956年在人胎儿血清中发现,单链糖蛋白590aa, MW70000, 胎儿6周开始合成，12-15周高峰，出生后1-2年降至成人水平, 正常妊娠中期达90-500ng/ml, 正常参考值：＜10ug/L AFP临床意义 （1）原发肝癌 80% AFP>400ng/ml, 原发肝癌近20% AFP正常 （2）病毒性肝炎、肝硬化绝大部分AFP<400ng/ml (3）内胚层癌、畸胎瘤、睾丸癌、卵巢癌、胃癌与其伴肝转移者AFP可升高 （4）妇女妊娠3个月后，AFP开始升高，7-8个月时达高峰，一般在400ng/ml以下，分娩后3周恢复正常
课程名称：临床免疫学检验技术课题名称：免疫标记技术 组员：朱恩鹏拉巴卓嘎 张燕培汪婷婷
免疫标记技术 免疫标记技术指用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学（或生物）发光剂等作为追踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。藉助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定，可以在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定。因此，免疫标记技术在敏感性、特异性、精确性及应用范围等方面远远超过一般免疫血清学方法。近年来，随着分子生物学、细胞生物学、基础免疫学和免疫化学等学科的发展以及现代高新技术建立的仪器分析的应用，免疫标记技术也不断完善和更新。各种新技术和新方法不断涌现，至今已成为一类检测微量和超微量生物活性物质的免疫生物化学分析技术，在医学和其他生物学科的研究领域及临床检验中应用十分广泛。 根据试验中所用标记物的种类和检测方法不同，免疫标记技术分为免疫荧光技术、放射免疫技术、免疫酶技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定等。 第一节放射免疫技术 放射免疫标记技术是将同位素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合，以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法，由于此项技术具有灵敏度高（可检测出毫微克（ng）至微微克（pg），甚至毫微微克（fg）的超微量物质，特异性强（可分辨结构类似的抗原）、重复性强、样品及试剂用量少、测定方法易规范化和自动化等多个优点。因此，在医学及其他生物学科的研究领域和临床实验诊断中广泛应用于各种微量蛋白质、激素、小分子药物及肿瘤标志物等的分析与定量测定。 （一）放射免疫测定（RIA） 放射免疫测定（Radio immunoassay , RIA）是1959 年Yalow 和Berson 首先创建的经典放射免疫分析技术，用于血清中胰岛素含量的测定。30 多年来，由于此项技术灵敏、特异、并已制成多种标准试剂盒，使用方便，应用范围十分广泛。目前国外已成功地应用RIA检测的物质多达300余种，国内研究的被测物质也达百余种，试制的RIA试剂盒已有60余种，是测定各种微量物质不可缺少的手段。 （二）免疫放射测定（IRMA）
1．甲胎蛋白（AFP） AFP是早期诊断原发性肝癌最敏感、最特异的指标，适用于大规模普查，如果成人血AFP 值升高，则表示有患肝癌的可能。 AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌，70~95%患者的AFP升高，越是晚期，AFP含量越高，但阴性并不能排除原发性肝癌。AFP水平在一定程度上反应肿瘤的大小，其动态变化与病情有一定的关系，是显示治疗效果和预后判断的一项敏感指标。AFP值异常高者一般提示预后不佳，其含量上升则提示病情恶化。通常手术切除肝癌后二个月，AFP值应降至2 0ng/ml以下，若降的不多或降而复升，提示切除不彻底或有复发、转移的可能。在转移性肝癌中，AFP值一般低于350-400ng/ml。 妇产科的生殖腺胚胎癌、卵巢内胚窦癌AFP也会明显升高。AFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者。某些消化道癌也会出现AFP升高现象。孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂、无脑症、食管atresia或多胎，AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有Down’s综合征的危险性。 正常参考值：0～15 ng/ml 2．癌胚抗原（CEA） 在正常成人的血液中CEA很难测出。CEA是一种重要的肿瘤相关抗原，70-90%的结肠腺癌患者CEA高度阳性，在其它恶性肿瘤中的阳性率顺序为胃癌（60-90％）、胰腺癌（70-80％）、小肠腺癌（60-83％）、肺癌（56-80％）、肝癌（62-75％）、乳腺癌（40-68％）、泌尿系癌肿（31-46％）。胃液（胃癌）、唾液（口腔癌、鼻咽癌）以及胸腹水（肺癌、肝癌）中CEA的阳性检测率更高，因为这些肿瘤“浸泡液”中的CEA可先于血中存在。CEA含量与肿瘤大小、有无转移存在一定关系，当发生肝转移时，CEA的升高尤为明显。 CEA测定主要用于指导各种肿瘤的治疗及随访，对肿瘤患者血液或其他体液中的CEA浓度进行连续观察，能对病情判断、预后及疗效观察提供重要的依据。CEA的检测对肿瘤术后复发的敏感度极高，可达80%以上，往往早于临床、病理检查及X光检查。 大量临床实践证实，术前或治疗前CEA浓度能明确预示肿瘤的状态、存活期及有无手术指征等。术前CEA浓度越低，说明病期越早，肿瘤转移、复发的可能越小，其生存时间越长；反之，术前CEA浓度越高说明病期较晚，难于切除，预后差。 在对恶性肿瘤进行手术切除时，连续测定CEA将有助于疗效观察。手术完全切除者，一般术后6周CEA回复正常；术后有残留或微转移者，可见下降，但不恢复正常；无法切除而作姑息手术者，一般呈持续上升。CEA浓度的检测也能较好地反映放疗和化疗疗效。其疗效不一定与肿瘤体积成正比，只要CEA浓度能随治疗而下降，则说明有效；若经治疗其浓度不变，甚至上升，则须更换治疗方案。 CEA检测还可对经手术或其他方法治疗使CEA恢复正常的病人，进行长期随访，监测其复发和转移。通常采用以下方案：术后第六周一次；术后三年内，每月一次；3-5年每三月一次；5-7年每半年一次；7年后一年一次。若发现升高，两周后再测一次，两次都升高则提示复发和转移。 正常参考值：0～5 ng/ml 3．癌抗原125（CA125 CA125是卵巢癌和子宫内膜癌的首选标志物，如果以65U/ml为阳性界限，Ⅲ-Ⅳ期癌变准确率可达100%。CA125迄今为止是用于卵巢癌的早期诊断、疗效观察、预后判断、监测复发及转移的最重要指标。CA125测定和盆腔检查的结合可提高试验的特异性。对输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、乳腺癌和间皮细胞癌诊断的符合率也很高，良性病变阳性率仅2%。CA125水平的升高是女性生殖系肿瘤复发的信号。 动态观察血清CA125浓度有助于卵巢癌的预后评价和治疗控制，经治疗后，CA125含量可
乙肝病毒感染免疫应答及常用血清标志物临床意义 乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝病毒科,具有明显的种属及嗜肝特性(尽管其亦可感染肝以外的组织、器官或细胞,如脾、辜丸、人外周血单个核细胞等),可致持续性病毒感染。我国在世界上属于乙型肝炎病毒感染的高发区,乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的携带者己超过10%,通常判断mv感染及其状况的指标为HBV的血清学标志物,如HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗mc(即所谓的"两对半")、抗HBc IgM和HBV DNA等,了解这些指标在什么情况下出现及其临床意义,对于我们检验工作者来说,亦具有重要意义。 1. 机体对HBV感染的免疫应答 机体感染HBV后,HBV的包膜和核壳抗原作为外来抗原物质可激发机体产生针对其的细胞和体液免疫应答。细胞免疫应答通过T细胞膜上抗原受体复合体的α自异二聚体识别经抗原提呈细胞处理的与HLA分子结合的病毒抗原短肤进行,而体液免疫应答是基于B细胞表面的免疫球蛋白受体特异识别原始的未经处理的分泌型或结构型病毒抗原,且根据在抗原结合中是否需要T细胞辅助,又分为T细胞依赖性和T细胞非依赖性两种方式。 1.1.细胞免疫应答 机体对HBV感染的细胞免疫应答包括HLKII和I类限制性T细胞应答。HBV的包膜抗原和核壳抗原均可激发机体的川一个或多个表位的HLA一II类限制性CD4+和I类限制性CD8+T 细胞应答。机体感染HBV后,最早出现的对HBV的T细胞免疫应答针对的是HBV的核壳抗原(HBcAg),且反应强烈,相对来说,针对mv包膜抗原(HBsAg等)的T细胞应答则要弱得多。一般认为,对HBV核壳抗原的这种强烈的HLA-II类限制性T细胞应答与病毒的清除有重要关系。其机制主要是通过诱导病毒特异的细胞毒T淋巴细胞(CTL)作用及通过旁路机制辅助HBV 包膜特异性的B细胞产生抗ms中和抗体。后者在急性乙型肝炎的抗HBs的产生中具有重要作用,因为在急性乙肝时,针对msAg的HLA一II类限制性T细胞应答很弱。在慢性HBV感染,外周血中针对所有HBV抗原的T细胞应答与急性肝炎时相比较明显要弱,肝组织中可检测到有T细胞应答,但应答率亦较低。当慢性肝炎出现急性发作时,随着病毒复制活跃,血循环中HBV DNA和HbeAg大量增加,机体针对病毒衣壳的特异性T细胞反应出现增强,但此时由于HbsAg浓度无明显变化,针对病毒包膜抗原的T细胞仍较弱。这表明针对病毒核衣壳的II类限制性TE细胞应答可能依赖于衣壳抗原一定阙水平的表达,而病毒包膜特异性的T细胞应答由于持续高水平的HBsAg的存在受到抑制。 急性自限性乙型肝炎患者体内存在强烈的针对HBV包膜、衣壳及多聚酶的多个表位的多克隆性HLA-I类限制的细胞毒T淋巴细胞(CTL)应答。目前已确定的CTL表位大多为HLA-A2限制的。不同患者的CTL应答所识别的病毒抗原表位有所不同,大多数都可识别核心18~27,包膜183~191,250~258,335~343和多聚酶455~463的表位,少数识别其它表位,说明对HBV 的CTL的反应有个体差异。到目前为止,在核衣壳抗原上只发现了一个HLA-A2限制的CTL 表位,而HBV包膜抗原中有11个识别表位,多聚酶有5个,与II类限制性CD4+T细胞应答正好相反。所产生的针对病毒包膜抗原的强烈的CTL反应可能与包膜抗原的强亲水性有关。一些CTL识别表位常常位于与病毒特异性功能有关的病毒氨基酸序列中。如核衣壳141~151位点与HBcAg定位于胞核以及mv基因包装信号有关,该位点同时又是HLA-A51和HLA-AW68限制的CTL的识别表位:又如HBV包膜250~269位点与HBsAg跨膜有关,同时又是HLA-A2限制的细胞表位。CTL识别表位与病毒特异性功能相关序列一致的现象在机体抗病毒免疫中具有重要意义,因为如果病毒的这些CTL识别表位在机体的免疫压力下发生变异从而逃避免疫清除,这种变异也势必影响病毒的生活周期。急性HBV感染者对HBV所有抗原均有强烈的CTL 反应,而慢性持续感染者常常仅呈现微弱的甚或检测不到的病毒特异CTL反应。 1.2. 体液免疫应答 对HBV包膜抗原的体液免疫应答是T细胞依赖的。由于抗HBV包膜抗原的抗体通常是在急性
乙肝病毒血清标志物实验室检测的临床意义 乙肝病毒（以下简称HBV）血清标志物实验室检测（即乙肝两对半检测）的临床意义对临床医生和被检对象至关重要。为了解HBV血清标志物的意义更好的为服务对象提供更高质量的解释和服务工作，现就HBV五项血清标志物常见模式的临床意义和少见模式（HBsAg、抗-HBs、HBeAg /抗-HBe同时阳性）的临床意义进行解释。 一HBV五项血清标志物常见模式的临床意义 现在国内大多数的医疗机构对HBV的检测通常采用五项血清学标志物联检，并且已经习惯了把五项结果作为一种模式全面分析了解HBV感染后的免疫状态，并以此作为诊断和疗效观察的依据。现就HBV常见的十种模式及其相应的临床意义总结见表1（摘自文献1）。 表1 HBV五项血清标志物常见模式及临床意义 模式HBsAg 抗-HB s HBeA g 抗-HBe 抗-HBc 临床意义 1 - - - - - ①过去和现在未感染过HBV；②窗 口期 2 - - - - + ①既往感染未能测出抗-HBs；②恢复期HBsAg已消失，抗-HBs尚未出现；③隐匿性HBV感染 3 - - - + + ①既往感染过HBV；②急性HBV感染恢复期；③抗-HBs出现前的窗 口期 4 - + - - - ①注射过乙肝疫苗，有免疫力 5 - + - + + ①急性HBV感染后康复；②既往感 染有免疫力 6 + - - - + ①急性HBV感染；②慢性HBsAg携 带者；③传染性弱 7 - + - - + ①既往感染，有免疫力；②急性H BV感染，恢复期 8 + - - + + ①急性HBV感染趋向恢复；②慢性 HBsAg携带者 9 + - + - + ①急性或慢性乙型肝炎感染，提示 HBV复制，传染性强。 1 0 + - - - - ①急性HBV感染早期或潜伏期；② 慢性HBV携带者，传染性弱。
病毒性肝炎血清标志物检查(一) 【摘要】病毒性肝炎的病原体为肝炎病毒，目前已明确的肝炎病毒有，5种，即甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)、戊型肝炎病毒(HEV)。除HBV为双链DNA病毒外，其余均为单链RNA病毒。我国是病毒性肝炎的高发区，尤以HAV、HBV、HCV的感染更为突出。因此，准确、快速地检测肝炎病毒的标志物，对于病毒性肝炎的防治具有重要的意义。临床上根据各种肝炎病毒有特异性的血清标志物，能准确地进行病毒性肝炎的分型。 【关键词】病毒性肝炎血清标志物 (一)甲型肝炎病毒IgM、IgG抗体(抗-HAVIgM、抗-HAIgG) 目前主要通过ELISA检测抗-HAVIgM和抗-HAVIgG两种血清标志物对甲型肝炎进行病原学的检测。 在甲型肝炎感染的早期(发病后几天)血清中即可出现抗-HAVIgM，滴度很快升至峰值并持续2～4周，发病后1～2个月滴度和阳性率下降，于3～6个月消失。因此，抗-HAVIgM阳性，尤其是滴度较高时(>103)，常表明急性HAV感染或复发。抗-HAVIgG出现较抗-HAVIgM稍晚，几乎可终身存在，抗-HAVIgG抗体阳性，则表示过去曾受过HAV感染，但体内已无HAV，是一种保护性抗体，可用于甲型肝炎(简称甲肝)的流行病学调查。 (二)甲型肝炎抗原(HAV-Ag) 在粪便或肝组织中检测到HAV-Ag可作为急性甲肝的证据，但检测不到HAV-Ag也不能排除感染甲肝的可能性，因为HAV-Ag的排出期很短，而且通常只在潜伏晚期。 发病前1～2周内，感染者可通过常规粪便检测HAV-Ag而被发现。此时尚未出现ALT／AST 升高，也未出现抗甲肝抗体。早期发现对于预防治疗很重要(在接触者中给予免疫球蛋白预防)。 粪便中HAV-Ag排泄的持续时间与传染持续时间之间的相关性很好。如果粪便HAV-Ag阴性，那么特殊的卫生措施，例如粪便消毒或隔离患者，就势在必行。 (三)乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg) 1．HBsAg是检测HBV感染的主要标志，主要在感染HBV后1～2个月在血清中出现，可以维持数周、数月、数年，也可能长期存在。 2．血清HBsAg阳性提示HBV感染，可见以下几种情况：乙型肝炎潜伏期和急性期；②慢性迁延性肝炎、慢性活动肝炎、肝硬化、肝癌；③慢性HBsAg携带者。 3．HBsAg也可从许多患者的体液和分泌物中测出，如唾液、乳汁、精液、阴道分泌物等。4．HBsAg阴性的HBV感染也有报道，可能与S基因变异使其抗原性和免疫原性改变所致。HBsAg阴性、HBV-DNA阳性的患者中发现其124位的半胱氨基缺失，结果导致HBsAg的分泌障碍。目前，临床检测发现HBsAg和抗-HBs同时阳性的检出率有增高趋势，提示有免疫复合物的形成、HBV多种亚型的交叉感染，以及机体免疫功能紊乱等多种可能。 (四)乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs) 1．抗-HBs是机体针对HBsAg产生的中和抗体，它是一种保护性抗体，能够清除病毒，防止HBV感染，在急性乙肝中出现最晚，表示机体开始恢复，其抗体可持续多年，滴度与特异性保护作用相平行。 2．抗-HBs阳性意义：既往曾经感染过HBV，但现已恢复，且对HBV有一定的免疫力；②乙肝疫苗接种后已产生抗体。 3．抗-HBs如果以与HBsAg形成免疫复合物的形式出现，提示可能与肝细胞的免疫病理损伤有关。 (五)乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg) 1．HBeAg位于Dane颗粒的核心部分，是一种可溶性抗原，其合成受HBV遗传基因调控，
血清肿瘤标志物 肿瘤标志物又称肿瘤标记物，是指特征性存在于恶性肿瘤细胞，或由恶性肿瘤细胞异常产生的物质，或是宿主对肿瘤的刺激反应而产生的物质，并能反映肿瘤发生、发展，监测肿瘤对治疗反应的一类物质。肿瘤标志物存在于肿瘤患者的组织、体液和排泄物中，能够用免疫学、生物学及化学的方法检测到。 一、血清肿瘤标志物的特征 1、只存在于肿瘤细胞，而在正常组织或非肿瘤组织中则不存在； 2、肿瘤细胞大量分泌进入血液，可以采用灵敏度较高的方法定量或定性检测。 3、该种物质的含量与肿瘤细胞负荷或肿瘤组织的大小呈平行关系，并能通过定性或定量检测应用于临床，以反映癌症患者的病期早晚和治疗预后。 二、血清肿瘤标志物根据其化学性质可以分为以下几种 1、蛋白质类肿瘤标志物，如甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（Cy21-1）、鳞癌相关抗原（SCC）、等； 2、糖类肿瘤标志物，如CA-125、CA19-9、CA15- 3、CA50、CA242等； 3、酶类肿瘤标志物，如酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）等； 4、激素类肿瘤标志物，如绒毛膜促性腺激素（HCG）等。 三、体检时的血清肿瘤标志物，是不是能够对癌症早期发现呢？ 近年全国死亡病因统计显示，恶性肿瘤居首位。因此，如何早期发现癌症以降低病死率成了癌症防治的重心。除临床征象及影像学手段之外，由检测肿瘤标志物早期查出癌症，愈来愈被人们重视。 但到目前为止，绝大多数肿瘤标志物还不能达到这种目的。 这是因为许多肿瘤早期血清肿瘤标志物并不升高，而等到血清中检测到肿瘤标志物时已经处于中晚期。
四、血清肿瘤标志物在临床应用中有什么价值呢？ 目前临床应用的血清肿瘤标志物在判断与肿瘤的相关性方面还存在一定的局限性，因此如何判断这些标志物的价值就显得非常重要。 实际上，医学界对于实验室检测项目的价值评价是有具体的标准的，一是灵敏度，一是特异性。 所谓的灵敏度也就是真阳性率或阳性率，其计算方式是所有参加测定的人数中超过正常参考值的人数与已经确定患某种肿瘤并参加该肿瘤标志物测定的总人数的比值（百分比）。 假如1000名前列腺癌患者测定血清前列腺特异抗原（PSA），超过正常参考值者为730名，则真阳性率为73%。 所谓的特异性也就是真阴性率，其计算方式是所有参加测定的人数中检查结果在正常参考值范围以内的人数与肯定不患某种肿瘤并参加该肿瘤标志物测定的总人数的比值（百分比）。 例如测定1000名肯定不是肝癌者的血清AFP，在正常参考范围内者为960名，则真阴性率为96%。 ACTL技术：以携带肿瘤相关抗原基因的重组腺相关病毒转染树突状细胞为基础的靶向性抗肿瘤细胞免疫治疗技术。 我们要求肿瘤标志物的测定具有较高的灵敏度和特异性，但任何一种肿瘤标志物都不可能达到100%的灵敏度和100%的特异度，因此选择应用于临床的肿瘤标志物的标准应该是真阳性率和真阴性率越高越好，而假阳性率和假阴性率越低越好。
肿瘤标志物tumor marker 肿瘤标志物tumor marker是指在肿瘤发生和增殖过程中,由肿瘤细胞所产生或分泌并释放到血液、细胞、体液中，反映肿瘤存在和生长的一类物质。包括特异性标志物和广谱性标志物。能用化学、免疫和分子生物学方法进行定量地检测。包括蛋白质、激素、酶和多胺以及癌基因产物等。 肿瘤标志物的血清水平一般与恶性肿瘤的发生、发展、消退、复发等具有良好的相关性。在正常组织或良性疾病中不产生或产生极微。因此，通常通过肿瘤标志物的血清水平测定，可以获得有关恶性肿瘤的辅助诊断、疗效观察、评判预后以及预报复发等方面的信息。 肿瘤抗原可以是肿瘤标志物，但肿瘤标志物不一定是肿瘤抗原。能刺激人体产生抗体的异常物质就叫抗原，简单地说，抗原都是些不好的物质，它进入人体后能刺激人体产生相应的抗体，抗原和抗体结合能发生相应的免疫反应。外来抗原进入人体后，人体立刻会产生相应抗体，并与这些抗原斗争，抗体与抗原的斗争就是人体自我保护的一种免疫反应。 理想中的肿瘤标志物有哪些特征 ①灵敏度高,能早期发现和早期诊断肿瘤; ②特异性好,仅肿瘤患者阳性,能对良恶性肿瘤进行鉴别诊断; ③能对肿瘤进行定位,具有器官特异性; ④与病情严重程度?肿瘤大小或分期有关; ⑤能监测肿瘤治疗效果和肿瘤的复发; ⑥能预测肿瘤的预后。 但至今还没有一种肿瘤标志物能完全满足上述要求 需要强调的一点是：我们并不是只在肺癌患者中检测到这些肿瘤标志物，也就是说不能根据这些标志物的变化来确诊是肺癌或者某一种癌症甚至都不能确定是癌症，确诊还需要我们的细胞学诊断依据。 肺癌肿瘤标志物 癌胚抗原（CEA）正常参考值：血清＜5ug／L。临床意义：①血清CEA升高主要见于结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等，其他恶性肿瘤也有不同程度的阳性率。②CEA连续随访检测，一般情况下，病情好转时血清CEA浓度下降，病情恶化
乙型肝炎感染血清标志物检测结果及临床意义 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb 临床意义 -- -- -- -- -- 过去和现在未感染过HBV + -- -- -- -- (1)急性HBV感染早期,急性HBV感染潜伏期；(2)慢 性HBV携带者，传染性弱。 + -- + -- + 急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制，传染强。 即俗称的“大三阳”。 + -- -- + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性HBsAg携带者； (3)传染性弱。即俗称的“小三 阳”。 + + -- -- + (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次 感染。 （3）免疫复合物的存在。 + -- -- -- + (1)急性HBV感染；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染 性弱。 -- + -- + + 急性HBV感后康复。 -- -- -- -- + (1)既往感染未能测出抗-HBs(2)恢复期HBsAg已消，抗 -HBs尚未出现；(3)无症 状HBsAg携带者。 -- + -- -- -- (1)注射过乙肝苗有免疫；(2)既往感染；③假阳性。 -- + -- -- + 既往感染过乙肝病毒，现病毒已基本清除，身体在康 复。 -- -- -- + + (1)既往感染过HBV； (2)急性HBV感染恢复期；(3) 少数标本仍有传染性。+ -- + + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性携带者。 + + -- + -- 亚临床型或非典型性感染。 + + -- -- -- (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感 染。 + -- -- + -- (1)慢性HBsAg携带者易转阴；(2)急性HBV感染趋向 恢复。 -- + + -- -- 非典型性或亚临床型HBV感染。 -- -- + -- + 非典型性急性感染。注意爆发性乙肝 -- -- + + + 急性HBV感染中期。 -- -- + -- -- (1)非典型性急性感染；(2)见于抗-HBc出现之前的感 染早期，HBsAg滴度低而呈 阴性，或呈假阳性。 -- + + -- + 非典型性或亚临床型HBV感染。 + + + -- + 亚临床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫复合物， 新的不同亚型感染。 -- + -- + -- HBV感染后已恢复
AFP：甲胎蛋白： 甲胎蛋白是一种糖蛋白，英文缩写AFP。正常情况下，这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失，因此正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克／升。但当肝细胞发生癌变时，却又恢复了产生这种蛋白质的功能，而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加，甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标。 检测甲胎蛋白的方法有好几种，放射免疫法测得的甲胎蛋白大于500微克／升、且持续４周者，或甲胎蛋白在200～500微克／升、持续８周者，在排除其它引起甲胎蛋白增高的因素如急、慢性肝炎、肝炎后肝硬化、胚胎瘤、消化道癌症后，需再结合定位检查，如B超、CT、磁共振（MRI）和肝血管造影等即可作出诊断。不过，正常怀孕的妇女、少数肝炎和肝硬化、生殖腺恶性肿瘤等情况下甲胎蛋白也会升高，但升高的幅度不如肝癌那样高。肝硬化病人血清甲胎蛋白浓度多在25～200微克／升之间，一般在２个月内随病情的好转而下降，多数不会超过2个月；同时伴有转氨酶升高，当转氨酶下降后甲胎蛋白也随之下降，血清甲胎蛋白浓度常与转氨酶呈平行关系。如果甲胎蛋白浓度在500 微克／升以上，虽有转氨酶升高，但肝癌的可能性大，转氨酶下降或稳定，而甲胎蛋白上升，也应高度怀疑肝癌。 甲胎蛋白在肝癌出现症状之前的8个月就已经升高，此时大多数肝癌病人仍无明显症状，肿瘤也较小，这部分患者经过手术治疗后，预后可得到明显改善，故肝硬化、慢性肝炎病人、家族中有肝癌患者的人应半年检测一次。 CEA：癌胚抗原 CEA最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，故名癌胚抗原。CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病，15％～53％的病人血清CEA也会升高，所以CEA不是恶性肿瘤的特异性标志，在诊断上只有辅助价值。此外，血清CEA水平与大肠癌的分期有明确关系，越晚期的病变，CEA浓度越高。 97％的健康成人血清CEA浓度在2．5ng／mI以下。 原发性结肠癌患者CEA增高占45－80%。除原发性结肠癌以外，腺胰癌、胆管癌、胃癌。食道癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系统的肿瘤阳性率也很高，一般在50－70%。
乙型肝炎病毒血清五项标志物（“两对半”）的 临床意义 1. 乙型肝炎表面抗原(HBsAg) HBsAg是机体感染HBV的标志，也是在机体血清中首先出现的病毒标志物。HBsAg出现的时间，与机体感染HBV的途径和感染的剂量有关。如果系输用HBsAg 阳性血，2周后即可检测到HBsAg，如用RIA法检测，于接种后6天，血清中即可出现HBsAg阳性；如感染剂量少，HBsAg出现阳性的时间可达3～4个月，甚至6个月；一般在感染HBV后4～6周可出现HBsAg阳性。HBsAg出现阳性后1～7周(平均约4周)才出现肝炎症状和肝功能异常。经血感染者，其潜伏期约为2个月；经口感染者，其潜伏期大约为3个月。 急性乙肝病程一般持续１－３个月，80%～90%的患者可以临床治愈［1］。H BsAg阳性在血中一般持续１－６周，长者可达２０周（14－148天）；在肝炎症状出现后1～4周或血清转氨酶达高峰后1～12周消失，如果HBsAg阳性持续超过6个月仍不转阴则称为持续阳性或慢性携带状态; 如系急性乙肝，HBsAg 持续阳性超过6个月则提示慢性化。我国HBV感染(急性和慢性)的人群中每年大约有4%～10%的HBsAg阳性者转阴，同时每年又有约4%～10%的人群由易感人群成为受感染者，因而，人群HBV感染状态在不断变化［2］。HBsAg阳性持续的时间和急性乙肝慢性化的比例与感染者的年龄有关，年龄愈小，形成持续感染或病情慢性化的概率愈大；围产期感染的婴儿80%将成为HBsAg的携带者；幼儿期感染者约30%将成为持续HBsAg携带者，正常成年人感染HBV后形成持续性感染的比例可能在5%以下；社会普通人群中约35%～50%的HBsAg阳性 携带者是在母婴围产期感染的［3］。 临床上，HBsAg阳性可见于急性乙肝患者的潜伏期、急性期；慢性乙肝，无症状携带者；部分肝硬化和肝癌患者的血清中和受HBV感染的肝细胞浆中。 HBsAg阳性一般来说表明机体内存在HBV感染，但阴性也不能完全排除H BV感染。原因是：①可能由于HBV和HBsAg含量极少，检测方法不够灵敏而漏检，或因试剂质量和操作问题而出现假阴性；②S基因变异引起HBsAg的表达和分泌发生障碍，体内虽存在HBV，但血清中测不到HBsAg或很少[5,6]；③S
肿瘤标志物的组合及意义（很全很靠谱！） 2015-04-08 肿瘤标志物（Tumor markers，TM）是恶性肿瘤发生和增殖过程中，肿瘤细胞基因表达而合成分泌的，或由机体对肿瘤反应而异常产生或升高的，反映肿瘤存在和生长的一类物质，存在于病人的血液、体液、细胞或组织中，可用生物化学，免疫学及分子生物学等方法测定，对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、观察疗效、监测复发和预后评价具有临床价值。 肿瘤标志物（Tumor markers，TM）是恶性肿瘤发生和增殖过程中，肿瘤细胞基因表达而合成分泌的，或由机体对肿瘤反应而异常产生或升高的，反映肿瘤存在和生长的一类物质，存在于病人的血液、体液、细胞或组织中，可用生物化学，免疫学及分子生物学等方法测定，对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、观察疗效、监测复发和预后评价具有临床价值。 但是，现用的肿瘤标志物敏感性和特异性均有限，对肿瘤早期阶段（Ⅰ，Ⅱ期）的阳性率低，至今尚未发现“金标准”的肿瘤标志物。并且，有些肿瘤细胞可产生多种标志物，单一的肿瘤标志物难以准确反映肿瘤的复杂性。因此，采用联合检测将是提高肿瘤标志物诊断价值的有效方法。首先，我们简单的介绍一下我们目前临床上常用的肿瘤标志物及其反映的肿瘤情况： 1甲胎蛋白（AFP） AFP是胚胎期肝脏和卵黄囊合成的一种糖蛋白，在正常成人血循环中含量极微＜20 μg/L。AFP是诊断原发性肝癌的最佳标志物，诊断阳性率为60%～70%。血清AFP＞400 μg/L持续4周，或200～400 μg/L持续8周者，结合影像检查，可作出原发性肝癌的诊断。急慢性肝炎，肝硬化患者血清中AFP浓度可有不同程度升高，其水平常＜300 ug/L。生殖胚胎性肿瘤（睾丸癌，畸胎瘤）可见AFP含量升高。 2癌胚抗原（CEA） 癌胚抗原是从胎儿及结肠癌组织中发现的一种糖蛋白胚胎抗原，属于广谱性肿瘤标志物。血清CEA正常参考值＜5 μg/L。CEA在恶性肿瘤中的阳性率依次为结肠癌（70%）、胃癌（60％）、胰腺癌（55％）、肺癌（50％）、乳腺癌（40％）、卵巢癌（30％）、子宫癌（30%）。部分良性疾病直肠息肉，结肠炎，肝硬化，肺病疾病也有不同程度的CEA水平升高，但升高程度和阳性率较低。CEA属于粘附分子，是多种肿瘤转移复发的重要标志。 3癌抗原125（CA125） CA125存在于上皮卵巢癌组织和病人血清中，是研究最多的卵巢癌标记物，在早期筛查、诊断、治疗及预后的应用研究均有重要意义。CA125对卵巢上皮癌的敏感性可达约70%。其他非卵巢恶性肿瘤（宫颈癌、
IPF急性加重的病因及血清标志物中国医科大学呼吸疾病研究所康健特发性肺纤维化(IPF)急性加重最先在日本得到重视,目前在欧美和亚洲其他国家和地区也受到高度关注。本届亚太呼吸年会邀请了日本和美国学者,对IPF急性加重进行了专题报告。 IPF急性加重的病因和机制 来自美国密歇安大学的特夫斯(Toews)教授作了题为“IPF急性加重概述”的专题报告。他指出,某些IPF 患者在病情相对稳定期间,如发生呼吸状态的急性恶化,被称为IPF急性加重。 IPF急性加重的病因还不清楚,其可能的病因和机制包括:(1)可能是原发疾病过程中一个不同的病理生理学表现;(2)可能是未确诊的一种疾病过程的临床表现,例如病毒感染,特别是疱疹病毒感染,可引起急性恶化;(3)可能是肺部急性应激的后果,并进一步导致IPF内在的异常纤维增殖过程的加速。 目前人们对IPF急性加重的病理生物学认识所知甚少。将来可能会在以下几个生物学机制研究方面取得成果:上皮细胞的完整性、纤维细胞功能、间质金属蛋白酶(MMP)-9、转化生长因子(TGF)-β、异常的凝血和纤溶、遗传易感性等。 由于IPF急性加重的病例数较少,需要进行多中心的全国性或国际性病例登记,前瞻性地收集患者的临床数据和生物学样本,以便拥有足够的样本量和研究资料,这样才有可能取得重要研究进展。 IPF急性加重的血清标志物 来自日本广岛大学的服部(Hattori)做了题为“IPF急性加重的血清标志物”的专题报告。他说日本的一些研究发现,血清KL-6(Ⅱ型肺泡上皮细胞膜上的一种糖蛋白,可脱落入血)、表面活性蛋白(SP)-A和SP-D水平升高,与间质性肺病存在密切关联。KL-6是一种复杂的唾液酸多糖,存在于糖蛋白中。SP-A和SP-D是亲水的表面蛋白,属于C-型凝集素(lectin)超家族中的胶原凝集素(collectin)亚族。有研究发现上述蛋白在循环中的水平能够区分间质性肺病与其他肺部疾病,并与肺间质病患者的疾病活动相关,而且对肺间质病的预后有预测价值。 在日本,上述蛋白的循环水平已被用作间质性肺病的标志物。因为这些蛋白的主要来源是肺泡Ⅱ型细胞,在循环中检测到这些蛋白,可能是由于创伤导致的肺泡上皮完整性丧失和(或)肺泡Ⅱ型细胞群数增加。 IPF患者循环KL-6、SP-A和SP-D水平升高,但因病人的临床特征不同,这3种蛋白升高的方式也有所不同。例如,SP-A和SP-D的血清水平与高分辨(HR)CT上磨玻璃影的程度相关;而血清KL-6的水平不但反映磨玻璃影的程度,而且也反映蜂窝肺的程度。在IPF患者确诊时或第一次就诊时,KL-6和SP-D高水平提示预后差,而SP-A高水平并不提示预后差。 快速进展的IPF病人,KL-6、SP-A和SP-D的循环水平显著升高。这些蛋白水平的突然升高,在IPF急
(1) AFP：甲胎蛋白： (2)CEA：癌胚抗原 (3)CA199：糖类抗原199 (4)CA125：癌抗原125 (5)CA153：肿瘤抗原153 (6)CA50：癌抗原50 (7)CA242：糖类抗原242 (8)β2—MG：β2—微球蛋白 (9)Fe Pro：血清铁蛋白： (10)NSE：神经元特异性烯醇化酶 (11)HCG：人绒毛膜促性腺激素 (12)TNF：肿瘤坏死因子 AFP：甲胎蛋白： 甲胎蛋白是一种糖蛋白，英文缩写AFP。正常情况下，这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失，因此正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克／升。但当肝细胞发生癌变时，却又恢复了产生这种蛋白质的功能，而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加，甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标。 检测甲胎蛋白的方法有好几种，放射免疫法测得的甲胎蛋白大于500微克／升、且持续４周者，或甲胎蛋白在200～500微克／升、持续８周者，在排除其它引起甲胎蛋白增高的因素如急、慢性肝炎、肝炎后肝硬化、胚胎瘤、消化道癌症后，需再结合定位检查，如B超、CT、磁共振（MRI）和肝血管造影等即可作出诊断。不过，正常怀孕的妇女、少数肝炎和肝硬化、生殖腺恶性肿瘤等情况下甲胎蛋白也会升高，但升高的幅度不如肝癌那样高。肝硬化病人血清甲胎蛋白浓度多在25～200微克／升之间，一般在２个月内随病情的好转而下降，多数不会超过2个月；同时伴有转氨酶升高，当转氨酶下降后甲胎蛋白也随之下降，血清甲胎蛋白浓度常与转氨酶呈平行关系。如果甲胎蛋白浓度在500 微克／升以上，虽有转氨酶升高，但肝癌的可能性大，转氨酶下降或稳定，而甲胎蛋白上升，也应高度怀疑肝癌。甲胎蛋白在肝癌出现症状之前的8个月就已经升高，此时大多数肝癌病人仍无明显症状，肿瘤也较小，这部分患者经过手术治疗后，预后可得到明显改善，故肝硬化、慢性肝炎病人、家族中有肝癌患者的人应半年检测一次。 CEA：癌胚抗原 CEA最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，故名癌胚抗原。CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病，15％～53％的病人血清CEA也会升高，所以CEA不是恶性肿瘤的特异性标志，在诊断上只有辅助价值。此外，血清CEA水平与大肠癌的分期有明确关系，越晚期的病变，CEA浓度越高。 97％的健康成人血清CEA浓度在2．5ng／mI以下。