糖基转移酶的研究概述 邓传怀 （河北大学生命科学学院２０１２生物技术中国保定０７１０００） 摘要糖基转移酶在生物体内催化活化的糖连接到不同的受体分子，如蛋白、核酸、寡糖、脂上，糖基化的产物具有很多生物学功能并具有高度的底物专一性。本文综述了糖基转移酶的种类、功能、特性及其在组合生物合成中的应用与研究前景。 关键词糖基转移酶结构功能应用 Outline about research of glycosyltransferases Deng Chuanhuai ( College of Life Sciences , Biotechnology 2012, Hebei University , Baoding ) Abstract Glycosyltransferase catalyzing the biosynthesis of the sugar attached to different activated receptor molecules, such as proteins, nucleic acids, oligosaccharides, the lipid glycosylation product has many biological functions with a high degree of substrate specificity[1]. In glycosylation project, carried out by enzymatic protein glycosylation and important means of natural glycosylated glycoproteins to study the structure and function of glycoproteins[2].This article provides anoverview of the categories, functions, characteristics of Gtfs, their app lications in combinatorial biosynthesis, and the p rospects for research. Key Words Glycosyltransferase Structure and Function Application 糖基转移酶是广泛存在于内质网和高尔基体内的一大类酶类[3]，参与体内重要的活性物质如糖蛋白和糖脂中糖链的合成。其作用是把相应的活性供体(通常是二磷酸核苷NDP-糖)
α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase)使用说明 货号：G8820 规格：1g/5g 级别：BR 其他名称：α-D-葡萄糖苷酶;α-葡糖苷酶 CAS号：9001-42-7 提取来源：黑曲霉 产品简介： α-葡萄糖苷酶（α-Glucosidase，EC 3.2.1.20）又被称为α-葡萄糖苷水解酶或葡萄糖基转移酶（GTase），是一种α-D-葡萄糖苷酶。它可以从低聚糖类底物的非还原末端切开α-1,4-糖苷键释放出葡萄糖，或将游离的葡萄糖残基转移到另一糖类底物形成α-1,6-糖苷键，从而得到非发酵性的低聚糖。α-葡萄糖苷酶来源广泛，在人体糖原的降解和动植物、微生物的糖类代谢方面具有重要的生理功能。α-葡萄糖苷酶广泛应用于食品和发酵工业、化学工业以及医学应用等行业。 酶活定义： 每小时产生1μg葡萄糖所需的酶量定义为一个α-葡萄糖苷酶活力单位。 酶活检测方法：参见QB2525-2001。 产品特性： 酶活力：300000U/g 最适作用温度：50℃，合适的作用温度：50-55℃。 最适作用pH：5.0，合适的作用pH：4.8-5.4。
外观：淡白色粉末或淡黄色液体，分子量约为68.5KD，无臭无味，溶于水，不溶于乙醚和乙醇。 用途： 生化研究。能水解葡萄糖苷(Glucoside)成葡萄糖和其他组成物质，是一种具有生物催化剂功能的蛋白质。本产品的建议添加量为800U/g干物质，根据实际情况改变添加量。 抑制剂： 铜、钛、钴等金属离子对本品有一定的影响。铅、铝、锌等金属离子对本品有较强的抑制作用。 贮存： 建议密封储藏于干燥、低温的环境中（≤25℃），最好在冷藏条件下（4-8℃）储藏。25℃以下，液体可以储存3个月，保质期内酶活不会降低于产品标示的活力；4℃以下，可较长时间储存。
血库组考试姓名： 一、选择题：（每题一分，共30分） 1、血液中的有形成分有哪些？（） A、糖、脂肪、蛋白质 B、无机盐、白蛋白、球蛋白 C、红细胞、白细胞、血小板 D、红细胞、白细胞、血小板、蛋白质 2、Rh血型系统的抗体一般是什麽？（） A、IgG B、IgA C、IgM D、IgD 3、血小板的主要功能？（） A、携带氧 B、抵御炎症感染 C、参与凝血机制 D、增加血液粘稠 4、关于红细胞ABO血型特性，下列说法哪项正确？（） A、凡红细胞上具有A抗原者为A型；有B抗原者为B型；A和B抗 原都没有者为O型；A和B抗原均有者为AB型 B、血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺少相应的抗原 C、许多组织细胞上有规律的存在着A、B、H抗原 D、以上均是 5、下列关于红细胞ABO血型鉴定说法哪项不正确？（） A、用已知抗体型特异性试剂血清检测红细胞的抗原，称之正定型或 红细胞定型 B、用已知血型的试剂红细胞检测血清中的抗体则称为反定型或血清 定型 C、O型血清在红细胞ABO亚型鉴定中不起作用 D、O型红细胞用于检查是否存在不规则抗体 6、对于弱D患者来说，应输何种血液？（） A、Rh(-) B、Rh(+) C、Rh(-)或Rh(+)均可 D、弱D
7、交叉配血不合时，哪些情况下可做抗体筛查？（） A、有输血史、妊娠史或短期内需多次输血者 B、只要配血不合就做抗体筛查 C、常规筛查 D、必要时 8、红细胞血型鉴定时，如发生红细胞缗钱状形成，可用下列哪种方法来 解决？（） A、在37℃下行血型鉴定 B、将被检者红细胞用生理盐水洗涤后鉴定血型 C、用新鲜制备的标准血清鉴定血型 D、用5%红细胞悬液鉴定血型 9、下列关于红细胞血型哪项是错误的？（） A、A型红细胞含A抗原 B、B型血清中有抗A C、AB型血清中没有抗A抗B D、O型红细胞上无任何抗原 10、反定型的主要目的是？（） A、发现新的血型 B、正定型的补充 C、对血型判断无意义 D、鉴别亚型或血型抗原凝聚力 11、临床上造成ABO血型鉴定和交叉配血试验错误最常见的原因是？（） A、ABO标准血清质量不高 B、红细胞悬液浓度过浓过淡 C、冷凝集 D、责任心不强，工作粗枝大叶 12、新生儿进行血型鉴定时，一般只进行？（） A、正定型 B、反定型 C、正定型与反定型 D、不需鉴定 13、血液发出，受血者和供血者血样应在什麽条件下保存几天？（） A、应在2-6℃保存7天 B、常温下保存7天 C、零下保存一个月 D、22℃保存7天 14、最易引起致命性溶血性输血反应的同种抗体是？（）
期末考核 课程：Glycobiology 植物糖基转移酶研究进展 ：*** 学号：*** 班级：*** 时间：****
植物糖基转移酶研究进展 摘要:糖基转移酶一类是能够催化糖基从激活的供体转移到特定的受体分子上的一类酶，在生物体中普遍存在并形成了超基因家族。糖基转移酶广泛参与植物生命活动的各种生物学过程。本文综述了近年来的研究报道，综述了糖基转移酶的分类、分离鉴定方法及在生物学功能方面的研究进展，期望为相关研究工作提供参考。 关键词:植物糖基转移酶，分类，分离鉴定，生物学功能 糖基转移酶（Glycosyltransferases，GT，EC 2.4.x.y）是一类催化糖基转移的酶，通过产生糖苷键将供体糖分子或相关基团转移至特异的受体上。糖基转移酶几乎存在于所有的生物体中，其所催化的糖基化反应是最重要的生物学反应之一，直接参与二糖、单糖苷、聚糖苷等的生物合成。糖基供体分子包括双糖、多糖、1-磷酸糖、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸，植物中最常见的供体为UDP-Glc。受体可以是糖类、脂类、蛋白质、抗生素和核酸。糖基转移酶催化供体-受体形成α、β两种糖苷键，产物为多糖、糖蛋白、糖脂以及糖苷化合物等。全基因组测序发现真核生物中约1%的基因编码糖基转酶。 1糖基转移酶的分类 目前，对糖基转移酶的分类主要根据Campbell等提出的GT Family 分类系统（数据收录在CAZy数据库中）。糖基转移酶作为高度分歧的多源基因家族，根据蛋白氨基酸序列的一致性、催化特性以及保守序列对其进行分类。因此，一特定的糖基转移酶既可以通过生物化学的方法鉴定其底物，也可以通过生物信息学方法研究其与已知酶基因或酶蛋白氨基酸序列的同源性对其进行分类。目前，依据这种分类方法，糖基转移酶被分为94个家族。根据其的折叠方式可将绝大多数酶分为两个超家族，GT-A超家族和GT-B超家族（图1）。根据催化反应机制、产物的立体化学异构性，在这两个超家族中糖基转移酶又分为反向型和保留型两大类（图2）。 GT-A型折叠的空间结构有两个紧密相连的β/α/β类Rossmann折叠区域。GT-A家族成员需要一个D-X-D基序用来结合二价金金属离子（多为Mn2+），这有助于UDP-糖供体的PPi在酶活性位点上的固定，对于催化反应是不可或缺的。GT-A难以识别UDP-糖供体以外的供体，所以受体的多样性较低。GT-B型折叠的空间含有两个正对的β/α/β类Rossmann折叠区域，连接方式灵活。GT-B成员无需二价金属离子维持活性，这是GT-B与GT-A家族成员的一个显著区别。此外，通过结构分析和PSI-BLAST发现了由跨膜GT组成GT-C超家族，其折叠方式全为反向型，活性位点位于长环部，一般含有8-13个跨膜螺旋。
糖生物学研究进展 张文辉 （单位：航天医学工程研究所 学号：w24013 E-mail：pangzizhang503@https://www.doczj.com/doc/572050573.html,）摘要：本文主要介绍了糖化学和生物学相结合产生的新学科－糖生物学的概况，主要研究内容、特点及在医学领域中研究动向。 关键词：糖生物学，研究内容，动向。 糖生物学是糖的化学和生物学研究相结合而产生的一门新兴学科,主要研究糖缀合物糖链的结构生物合成和生物学功能,其研究领域包括糖化学、糖链生物合成、糖链在复杂生物系统中的功能和糖链操作技术.糖生物学一经提出,便得到了科学界的广泛认同,并在西方发达国家受到高度重视,在即将到来的后基因组学时代,糖生物学研究更是揭示生命本质所不可缺少的重要方面.已知糖链在细胞内可修饰调控蛋白质、脂类的结构与功能,在细胞外环境参与免疫应答、感染和癌症等过程中的细胞识别但对其作用机制还不完全清楚.近10年来,随着分析技术的进步和分子生物学的发展,糖的研究也取得的了巨大进展,糖生物学研究正成为生命科学研究中又一新的前沿和热点. 糖生物学研究内容： 糖生物学以生物大分子的组成部分糖链为研究对象,研究它作为信息分子在多细胞生物高层次生命活动中的功能,主要包括糖链的结构和功能两个方面的内容。糖链的结构具有惊人的多样性、复杂性和微观不均一性,其一级结构的内容不仅包括各糖基的排列顺序,还包括各糖基的环化形式、各糖基本身异头体的构 型、各糖基间的连接方式以及分支结构的位点和分支糖链的结构。6种单糖形成带分支的六糖有1012异构体。糖链结构的复杂性给糖链的研究带来了很大的困难,同时也使它能携带巨大的生物信息。实际上,糖链的种间特异性、组织特异性以及发育特异性都很强,并且都来源于糖基转移酶不同时间和不同空间的表达。因此,糖基转移酶的研究已成为了当前糖生物学的研究重点。糖复合物中糖链的功能多种多样,如从空间上调节糖复合物的整体结构,保护多肽链不被蛋白酶水解,防止与抗体识别等。近年来的研究表明:糖链作为信息分子涉及多细胞生命的全部空间和时间过程,如精卵识别、组织器官形态形成、老化、癌变等,在血液和淋巴循环中,起着动态的更为灵敏的信号识别和调控作用,涉及到多种严重疾病的发生过程,如炎症和自身免疫病等。关于糖链的生物学作用,有如下一般规则:1)很难预知某一特定的糖链的功能和对生物体的重要性;2)同一寡糖序列在生物体的不同部位和不同的个体发育阶段有不同的功能;3)较为专一的生物作用通常是通过不寻常的序列或常见序列的不寻常表达或修饰来介导的,而这些特殊的糖链也常是毒素和病原体的识别目标。归根结底,糖链的共同特点是介导专一的“识别”和“调控”生物学的过程,因此对糖链的生物学作用也只能逐个地分别研究。当前,糖生物学研究得最多的仍然是糖蛋白。在糖蛋白中,糖链对蛋白质的功能起修饰作用,它通过影响蛋白质的整体构象从而影响由构象决定的所有功能,如蛋白质的正确折叠、细胞内定位、抗原性、细胞-细胞黏附和结合病原体等。在糖脂中人们已经证明了血型的决定物质是糖链,在神经组织及脑中更是存在大量的糖脂,但它们的生理意义至今仍了解得不多。蛋白聚糖主要有维持或抑制细胞生长以及在正常发育和病理条件下结合、贮存及向靶细胞释放生长因子和参与信号转导等作用。细胞表面糖复合物上的糖链是信息功能的承担者,承担着细胞-细胞和细胞-胞外基质的相互作用。[1]
糖基转移酶与糖基转移酶抑制剂 摘要：糖基转移酶在生物体内催化活化的糖连接到不同的受体分子，如蛋白、核酸、寡糖、脂和小分子上，糖基化的产物具有很多生物学功能。其是糖蛋白、糖脂中糖链生物合成的关键酶之一。与此同时，对糖基化抑制剂的研究也是必要的。两者在治疗一些因为糖基转移酶非正常表达引起的疾病有很大作用。 关键词：糖基转移酶；糖基化；糖基化抑制剂 前言：糖基转移酶是广泛存在于内质网和高尔基体内的一大类酶，参与体内重要生物活性物质如糖蛋白和糖脂中糖链的合成，其作用是把相应的活性供体(通常是二磷酸核苷NDP-糖)的单糖部分转移至糖、蛋白质、脂类和核酸等，完成后者的糖基化加工，实现其生物学功能。因此糖基转移酶的表达和活性的变化与许多疾病联系在一起，并可作为某些疾病的诊断标志，如α-1,3-半乳糖基转移酶活性在体内的再现会引发自身免疫反应，导致类风湿，并在器官异体移植中引起排斥反应；N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶、岩藻糖基转移酶等在成熟细胞中活性的明显升高被视为肿瘤发生的重要标志，并且被认为是肿瘤迁移恶化的重要原因。因此设计合成糖基转移酶抑制剂，对于寻找抗肿瘤、抗免疫系统等新药研究有重要意义。 1 糖基转移酶的存在 糖蛋白是通过蛋白质的糖基化组装实现的，而糖基化过程则通过多种糖基转移酶完成——在肽链合成的同时或合成后，在糖基转移酶的催化下，糖链被连接到肽链的特定糖基化位点上。糖基转移酶具有高度的底物专一性，即同时对糖基的供体和受体具有专一性。对糖基转移酶进行研究，是糖基化研究的第1步。目前已对多种糖基转移酶的结构以及编码它们的基因研究清楚,并认为糖链的合成没有特定的模板，而是通过糖基转移酶将糖基由其供体转移到受体上。糖链可以认为是基因的次级产物,一个基因编码一个糖基转移酶,一个糖基转移酶专一地催化一个糖苷键的合成；这样一条糖链的合成就需要一个多酶系统,也就对应了一个基因组。下文简要介绍几类重要的糖基转移酶。 1.1 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(N-acetylglucosa-minyl-transferase,Gnt) 糖蛋白中糖链通过还原端的N-乙酰氨基葡萄糖以β-1,4糖苷键与蛋白质肽链上Asn-XXX-Ser/Thr序列(XXX为除脯氨酸以外的氨基酸)中Asn残基上的氨基(-NH2)相连，被称为N-糖链。真核细胞中N-糖链的合成途径高度保守，其第1步合成由GnT完成。1999年, Strasser等依据动物GnT保守区序列设计简并引物，从烟草文库中分离到编码GnT的基因GnTI，这也是植物中第1个被鉴定的GnT基因。随后利用同样的方法从拟南芥、马铃薯中分离和鉴定出一系列GnT基因, 这些基因与动物GnT基因均有较高的序列相似性。后续研究发现
1.2蛋白质糖基化类型与特点 蛋白质的糖基化是一种最常见的蛋白翻译后修饰,是在糖基转移酶作用下将糖类转移至蛋白质,和蛋白质上特殊的氨基酸残基形成糖苷键的过程。研究表明,70%人类蛋白包含一个或多个糖链,1%的人类基因组参与了糖链的合成和修饰。哺乳动物中蛋白质的糖基化类型可分为三种:N-糖基化、0-糖基化和GPI糖基磷脂酰肌醇锚。大多数糖蛋白质只含有一种糖基化类型,但是有些蛋白多肽同时连有N-糖链、O-糖链或糖氨聚糖。 (l) N-糖基化:糖链通过与蛋白质的天冬氨酸的自由NH 基共价连接,将这种 2 糖基化称为N-糖基化。N-连接的糖链合成起始于内质网(ER),完成于高尔基体。N-糖链合成的第一步是将一个14糖的核心寡聚糖添加到新形成多肽链的特征序列为Asn-X-Ser/Thr(X代表任何一种氨基酸)的天冬酰胺上,天冬酰胺作为糖链受体。核心寡聚糖是由两分子N-乙酰葡萄糖胺、九分子甘露糖和三分子葡萄糖依次组成,第一位N-乙酰葡萄糖胺与ER双脂层膜上的磷酸多萜醇的磷酸基结合,当ER膜上有新多肽合成时,整个糖链一起转移。寡聚糖转移到新生肽以后,在ER 中进一步加工,依次切除三分子葡萄糖和一分子甘露糖。在ER形成的糖蛋白具有相似的糖链,由Cis面进入高尔基体后,在各膜囊之间的转运过程中,原来糖链上的大部分甘露糖被切除,但又由多种糖基转移酶依次加上了不同类型的糖分子,形成了结构各异的寡糖链。血浆等体液中蛋白质多发生N-糖基化,因此N-糖蛋白又称为血浆型糖蛋白。 (2) O-糖基化:糖链与蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的自由OH基共价连接。0-糖基化位点没有保守序列,糖链也没有固定的核心结构,组成既可是一个单糖,也可以是巨大的磺酸化多糖,因此与糖基化相比,0-糖基化分析会更加复杂。0-连接的糖基化在高尔基体中进行,通常第一个连接上去的糖单元是N-乙酰半乳糖,连
第九章红细胞血型 单选（15题） 1 Rh(D)阴性的人红细胞上缺乏（ B）抗原。 A H抗原 B D抗原 C E抗原 D C抗原 2 免疫反应初期最早出现的抗体为（D ） A IgG B IgD C IgE D IgM 3 在（A ）周的胎儿中，其内皮细胞表面已能检测到ABH抗原，一般在儿童（）月才能在红细胞上充分表现抗原性。 A 5-6 18 B 12 6 C 5 12 D 7 18 4 红细胞血型抗体主要分为（C ）类。 A IgG 和 IgD B IgM 和 IgA C IgG 和 IgM D IgG 和 IgE 5 Rh血型系统包括（D ） A 抗-D 、抗-C、抗-E B 抗-d、抗-c、抗-e C抗-D、抗-C、抗-E、抗-d、抗-c、抗-e D抗-D、抗-C、抗-E、抗-c、抗-e 6 ABO 血型抗体最佳反应温度为（C ） A 37℃ B 22℃ C 4℃ D 室温 7 对DU型的人，献出的血液应输给（ B ）患者。 A Rh阴性 B Rh阳性 C DU型 D D变异型 8 O型分泌型人的唾液中有（ C ） A A物质 B B物质 C H 物质 D A、B、H物质 9 新生儿出生时，其红细胞与抗-A抗-B反应强度比成人（B ） A 强 B 弱 C 一样 D 不清楚 10 Rh 血型抗体最佳反应温度为（A ） A 37℃ B 22℃ C 4℃ D 室温 11 人类ABO基因位于（A ）号染色体上。 A 9 B 21 C 15 D 6
12 A亚型鉴定时，区分A1和A2可用（D ）血清。 A 抗-A B B 抗-H C 抗-A2 D 抗-A1 13 在Rh血型系统中，（A ）抗原的抗原性最强。 A D B C C E D d 14 大部分Rh抗体属于（A ）类。 A IgG B IgD C IgE D IgM 15 父母均为Rh阳性，子女的Rh血型为（C ） A Rh阳性 B Rh阴性 C Rh阴性或Rh阳性 判断（20题） 1 新生儿刚出生时，红细胞上的抗原特性就能充分表现。(×) 2 O型红细胞并非只用于检查不规则抗体，还作为反定型实验的阴性对照。（√） 3 广义上血液中任何的多态性都可称为血型。（√） 4 1900年Landsteiner将人的红细胞血型分为A、B、O、AB四种血型(×) 5 ABO血型抗体在人出生前尚未产生，一般出生几个月后才开始形成自己的抗体，5-6岁时具有较高的效价。（√） 6 超强D、不完全D和弱D都是D变异型。（√） 7 Rh抗原在胎儿期就得到充分发育，出生后Rh抗原检测与成人反应相同。（√） 8 血型抗原与疾病或健康在统计学上没有相关性。(×) 9 IgM和IgG类抗体都可以通过胎盘破坏胎儿血液中的红细胞，引起新生儿溶血病。(×) 10 Rh抗体主要通过输血或妊娠免疫而产生。（√） 11红细胞中充满血红蛋白，其主要作用是携氧。（√） 12 人的血型抗体水平终身不变。(×) 13 DU型的献血者均应当做Rh阴性的献血者。(×) 14 Rh阴性的受血者输注血浆、血小板时一定要输注Rh阴性的(×) 15 Rh阴性献血者的血浆也要做特殊标记，只能输给Rh阴性的人。(×) 16 有些血型抗原与疾病或健康状况在统计学上有相关性。（√） 17 遗传或获得性疾病皆可导致血型抗原表达的改变。（√）
糖苷酶及抑制剂的深入研究(doc 9 页) 部门： xxx 时间： xxx 整理范文，仅供参考，可下载自行编辑
糖苷酶及其抑制剂的研究 摘要：糖苷酶是生命体正常运转的关键性酶，糖苷酶抑制剂可抑制糖苷酶的活性，阻断碳水化合物的分解，因此对一些糖代谢紊乱性疾病如糖尿病、肥胖病等有临床应用价值。本文研究了糖苷酶中的β－半乳糖苷酶、β－葡萄糖苷酶以及蔗糖酶的抑制剂。重点研究了β－半乳糖苷酶的分子结构和活性基团，并从结构出发筛选其抑制剂，发现此酶的抑制剂种类较少且抑制活性较低。本实验采用混合交叉筛选法筛选了多种金属离子和氨基酸对β－半乳糖苷酶的抑制作用，同时也筛选了天然产物和合成化合物。 关键词：糖苷酶β－半乳糖苷酶β－葡萄糖苷酶蔗糖酶抑制剂的筛选混合交叉法 1、前言 糖苷酶和糖基转移酶不仅参与了体内碳水化合物的消化，而且是糖脂、糖蛋白生物合成中寡糖链的修剪酶，它对糖蛋白中寡糖链的形成极为重要；糖链的组成与结构是糖蛋白特异生物功能的识别部位，因此糖苷酶
活性对糖蛋白生物合成有关键作用，而后者又涉及到免疫反应、神经细胞的分化、肿瘤的转移以及病毒和细菌的感染. 因此, 糖苷酶不仅是生命体正常运转的关键性酶,同时又是许多疾病的相关酶. 与病毒感染、癌症及一系列新陈代谢紊乱性疾病如糖尿病、肥胖病有关。由于糖苷酶重要的生物学意义，糖苷酶抑制剂的研究也引起了人们的极大兴趣。 糖苷酶抑制剂即是可抑制糖苷酶的活性，阻断碳水化合物的分解，抑制淀粉、麦芽糖、蔗糖转变成单糖；影响糖脂、糖蛋白生物合成中寡糖链的修剪；所以糖苷酶抑制剂不但对一些糖代谢紊乱性疾病如糖尿病、肥胖病等有临床应用价值[1] ，而且可作为抗AIDS病毒[2]、抗鼠白血病毒[3]的潜在治疗试剂。 本论文重点研究了糖苷酶中的β－半乳糖苷酶 β－半乳糖苷酶（β－galactosidase）又称β－D－半乳糖苷水解酶，（β－D－galactosid- -e galacto-hydrolase ,EC.3.2.1.23）,商品名为乳糖酶（Lactase），它广泛存在于豆类及其他各种动植物体内和微生物中。它能够催化β－半乳糖苷化合物中的β－半乳糖苷键发生水解，还具有转半乳糖苷的作用。由于它具有糖苷键结构特异性，可作为乳糖降解和双糖合成催化剂[4,5]，并有水解生物体内储存的多糖和半乳糖残基.引起血型转化等生理功能[6,7]而受到人们广泛关注，成为生物化学和酶催化化学的重要研究课题。 β－半乳糖苷酶的应用有着长远的历史，最初在食品工业中用来降解乳
糖苷酶及其抑制剂的研 究 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998
糖苷酶及其抑制剂的研究 摘要：糖苷酶是生命体正常运转的关键性酶，糖苷酶抑制剂 可抑制糖苷酶的活性，阻断碳水化合物的分解，因此对一些 糖代谢紊乱性疾病如糖尿病、肥胖病等有临床应用价值。本 文研究了糖苷酶中的β－半乳糖苷酶、β－葡萄糖苷酶以及蔗 糖酶的抑制剂。重点研究了β－半乳糖苷酶的分子结构和活性 基团，并从结构出发筛选其抑制剂，发现此酶的抑制剂种类 较少且抑制活性较低。本实验采用混合交叉筛选法筛选了多 种金属离子和氨基酸对β－半乳糖苷酶的抑制作用，同时也筛 选了天然产物和合成化合物。 关键词：糖苷酶β－半乳糖苷酶β－葡萄糖苷酶蔗糖酶抑制剂的筛选混合交叉法 1、前言 糖苷酶和糖基转移酶不仅参与了体内碳水化合物的消化，而且是糖脂、糖蛋白生物合成中寡糖链的修剪酶，它对糖蛋白中寡糖链的形成极为重要；糖链的组成与结构是糖蛋白特异生物功能的识别
部位，因此糖苷酶活性对糖蛋白生物合成有关键作用，而后者又涉 及到免疫反应、神经细胞的分化、肿瘤的转移以及病毒和细菌的感染. 因此, 糖苷酶不仅是生命体正常运转的关键性酶,同时又是许多疾病的相关酶. 与病毒感染、癌症及一系列新陈代谢紊乱性疾病如 糖尿病、肥胖病有关。由于糖苷酶重要的生物学意义，糖苷酶抑制 剂的研究也引起了人们的极大兴趣。 糖苷酶抑制剂即是可抑制糖苷酶的活性，阻断碳水化合物的分解，抑制淀粉、麦芽糖、蔗糖转变成单糖；影响糖脂、糖蛋白生物合成中寡糖链的修剪；所以糖苷酶抑制剂不但对一些糖代谢紊乱性 疾病如糖尿病、肥胖病等有临床应用价值[1] ，而且可作为抗AIDS病毒[2]、抗鼠白血病毒[3]的潜在治疗试剂。 本论文重点研究了糖苷酶中的β－半乳糖苷酶 β－半乳糖苷酶（β－galactosidase）又称β－D－半乳糖苷水解酶，（β－D－galactosid- -e galacto-hydrolase ,EC.3.2.1.23）,商品名为乳糖酶（Lactase），它广泛存在于豆类及其他各种动植物体内和微生物中。它能够催化β－半乳糖苷化合物中的β－半乳糖苷键发生水解，还具有转半乳糖苷的作用。由于它具有糖苷键结构特 异性，可作为乳糖降解和双糖合成催化剂[4,5]，并有水解生物体内储存的多糖和半乳糖残基.引起血型转化等生理功能[6,7]而受到人们广 泛关注，成为生物化学和酶催化化学的重要研究课题。
关于血型的知识 关于血型的知识 1.是谁第一个发现了血型？世界上第一个发现红细胞血型的人是奥地利维也纳大学助教landsteiner，那是在1900年。这一划时代的发现，为以后安全输血提供了重要保证，为此，他获得了1930年的诺贝尔奖，并赢得了“血型之父”的美誉。开始时，他只发现了人类红细胞血型a、b、三型。1902年他的学生deastello和sturli又发现了a、b、之外的第4型。后来国际联盟卫生保健委员会将这4型正式命名为a、b、o、ab型，这就是现在人们熟知的红细胞abo血型系统。在以后的数十年里，科学家又相继发现了几种血型。1940年landsteiner和iener发现了rh血型，到1995年，共发现23个红细胞血型系统，外加一个低频率抗原组、高频率抗原组和尚未形成体系的血型集合，抗原总数193个。1958年法国的dausset首先发现人类白细胞抗原，到1995年已公布hla表型特异性112种，hla等位基因已达503个。血小板血型抗原是在1957年后陆续被发现的。 2、目前发现人类有哪些血型系统？有abo血型系统、mn血型系统、p血型系统、rh血型系统、hla血型系统等二十多个血型系统。 3、与输血关系最大的是哪一个血型系统？是abo血型系统。 4、哪一年世界卫生组织把abo血型系统的血型正式向全世界统一命名为a、b、o、ab四种血型？1921年。 5、abo血型系统是如何定型的？abo血型系统是以人体红细胞上的抗原与血清中抗体而定型的。凡红细胞上含有a抗原，而血清中含有抗b抗体的称为a型；红细胞上含有b抗原，而血清中含有抗a抗
体的称为b型；红细胞上含有a和b抗原，而血清中无抗a、抗b抗体的称为ab型；红细胞上不含有a、b抗原，而血清中含有抗a和抗b 抗体称为o型。 6、 abo血型与红细胞上的抗原有什么关系？凡红细胞上有a抗原的为a型；有b抗原的为b型；有a、b抗原的为ab型；无a、b抗原的为o型。 7、血型是由什么决定的？人类的血型是由遗传决定的，子女的血型是由父母双亲的染色体遗传而来，人血中的红细胞、白细胞、血小板以及血浆蛋白等都分成不同的型。除单卵双生外，可以说世界上很难找到二位血型完全相同的人。 8、abo血型与输血有什么关系？输血时一般情况下要同型相输，否则体内存在的抗体与输入的红细胞抗原相结合会引起严重的输血反应。例如：如果a型血输入b型人体内，a型血红细胞上的a抗原就会和b型血清中的抗a抗体发生凝集反应，使红细胞大量破坏，产生一系列综合症状，并危及生命。所以正确的鉴定血型是安全输血必不可少的前提。 9、abo血型鉴定的原理是什么？abo血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无a抗原或和b抗原，将血型分为a型、b型、ab型及o型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定abo血型。所谓正定型是用已知抗a和抗b分型血清来测定红细胞上有无相应的a 抗原或和b抗原，所谓反定型是用已知a细胞和b细胞来测定血清中有无相应的抗a或抗b。
微生物糖苷酶的新型突变酶———硫代糖苷酶的产生及应用 3 卢丽丽 肖 敏33 赵 晗 (山东大学微生物技术国家重点实验室 济南 250100) 摘要:微生物糖苷酶的酸碱功能氨基酸突变酶能催化硫代糖苷的合成,这类酶被称为硫代糖苷酶。目前发展的硫代糖苷酶有β2硫代葡糖苷酶、β2硫代甘露糖苷酶、β2硫代半乳糖苷酶、α2硫代木糖苷酶和α2硫代葡糖苷酶,来源于细菌和古细菌,能合成多种硫代糖苷。最近,硫代糖苷酶被应用于糖蛋白的糖基化修饰,首次人工合成硫代糖蛋白。微生物糖苷酶合成功能的新延伸,对糖生物学、生物技术和制药业的发展将有着重要意义。关键词:糖苷酶,硫代糖苷酶,合成 中图分类号:Q5,Q81 文献标识码:A 文章编号:025322654(2007)0420769204 N ovel Mutants of Microbial G lycosidases ———G eneration and Application of Thioglycoligases 3 LU Li 2Li XI AO M in 3 3 ZH AO Han (State K ey Laboratory o f Microbial Technology ,Shandong Univer sity ,Jinan 250100) Abstract :Acid Πbase mutants of glycosidases ,namely thioglycoligases ,are able to catalyze thioglycosides synthesis.N ow ,many thioglycoligases ,including β2thioglucoligase ,β2thiomannoligase ,β2thiogalactoligase ,α2thioxyloligase and α2thioglucoligase ,have been developed from bacteria and archaebacteria ,and applied in synthesizing various thioglycoligases.Recently ,thioglycoligases have been used to glycosylate the glycoprotein and firstly generate the thioglycoprotein.The novel extended synthetic function of glycosidases w ould prom ote the development of glycobiology ,biotechnology and pharmacy. K ey w ords :G lycosidases ,Thioglycoligases ,Synthesis 3国家“863”高技术研究发展计划项目(N o.2006AA10Z 338) 国家十五攻关计划项目(N o.2004BA713B04206) 33通讯作者 T el :0531288365128,E 2mail :m inxiao @https://www.doczj.com/doc/572050573.html, 收稿日期:2006209227,修回日期:2006211222 微生物糖苷酶来源广泛,种类繁多。有些糖苷酶除具有水解活性外,还具有转基活性,该性质使其成为糖类合成的重要工具,被用于大规模合成多种O 2糖苷。近三年研究发现,微生物糖苷酶的一类新型突变酶即硫代糖苷酶(thioglycoligases )能催化硫代糖苷(thioglycosides )的合成,这一发现引起了科学家的极大兴趣。 硫代糖苷是O 2糖苷类似物,糖单位组成和空间结构与O 2糖苷类似,不同之处仅在于糖苷键通过硫原子起连接作用,不易被糖苷酶水解,具有重要的研究价值:①由于化学水解和酶解速率低,可以解决O 2糖苷易被内源糖苷酶水解的问题,从而作为O 2糖苷替代品,应用于药物疗法 [1～3] ;②作为糖苷酶的 竞争性抑制剂,与糖苷酶形成稳定的复合物用于X 2 射线晶体结构分析 [4,5] ,研究糖苷酶特异性和作用 机制,探索其突变或缺陷引起人类疾病的分子机理;③用于制备亲和树脂纯化糖苷酶蛋白[6] ;④作为 非降解性配体用于凝集素研究等等 [7,8] 。由于硫代 糖苷在生物技术和制药业方面的潜在价值越来越受到关注,相应地,其大量获得也成为当今研究的热点。传统的化学法合成步骤繁琐,糖基转移酶法合成供体昂贵且酶来源有限。而硫代糖苷酶作为一类新型催化剂,其微生物来源十分广泛,合成方法简单,合成产物种类丰富,甚至还能合成硫代糖蛋白,用于药用糖蛋白的生产,因而显示出极大的优点,具有很好的应用前景。
题名: 糖苷酶与糖基转移酶催化转糖反应的特征与机理研究 作者: 周坤 答辩日期: 2013-1-23 中文摘要: 糖苷化合物的生物合成在合成领域中占有重要地位，然而目前报道的生物合成方法，无论是糖苷酶还是糖基转移酶，均无法实现效率与收益的双赢，因此寻找特异、有 效的糖苷类化合物的合成工具，并对其催化特性与催化机制的研究成为生物转糖的 一个重要方面。本文以生物转糖为研究对象，应用实验与计算结合的手段，进行了 生物转糖酶的筛选及其与底物识别结合等性质研究。基于所建立的快速有效的筛选 方法，对来自海洋的样品进行了筛选，首次从中国黄海海域筛选得到1株具有高效 转糖活性的菌株DL001。菌的形态学研究及16SrDNA序列分析表明，该菌为节杆 菌。对转糖产物的结构鉴定表明该菌能以α-1,4和α-1,6方式向底物转糖。采用四 步柱层析联用的方法，从DL001菌的发酵液上清中分离得到具有转糖活性的糖苷 酶AG-I。底物特异性分析表明该酶对水解底物和糖基供体的专一性高，但却能以葡 萄糖苷、木糖苷和烷基醇作为糖基受体。其中该酶对pNP-糖苷化合物的转糖效率 高达42-60%，并能进一步以转糖产物为受体继续发生糖基化反应，表明该酶可作 为一个有效的生物合成工具用于工业合成。我们以酵母来源的α-糖苷酶和羟基香豆 素类化合物为研究对象，组合应用对接方法、分子表面的静电势和轨道能分析等方 法，来阐明α-糖苷酶与其配体产生特异性结合的关键特征。结果表明，氢键、分子 静电势和分子轨道能量等特征对配体与α-糖苷酶特异性识别有重要作用，并且这些 特征作为一种推动力促使配体以最优构象与受体α-糖苷酶相互作用。我们建立了一 个糖基化位点的数据库，并基于此构建了一个基于先验概率的判别分析模型用于糖 基化位点的预测。进一步的特征分析表明位置R1上的氨基酸性质及所有位点中与 疏水性相关的氨基酸性质对糖基化影响较大，而糖基化位点C端的二级结构性质和 N端的的物化性质对糖基化的影响也不可忽略。这个模型不仅为糖基化位点的预测 提供了一个有效工具，并为深入理解糖基化的影响因素提供有效信息。考虑到我们 模型的公共可获得性，我们提供了一个可下载的程序供人们来预测糖基化位点。
血型与输血复习题 一、名称解释 1、输血学:是研究、开发和应用以输血为中心的相关内容，确保临床输血的安全性和治疗 效果的独立学科。 2、血型:即血液的遗传学差异。人类的血型包括红细胞血型，白细胞血型及血清血型。属 于血型血清学的研究范围。血型血清学是用免疫学的理论和方法来研究血型的一门科学。 红细胞的遗传学差异称为红细胞血型。 3、血型系统：血型受独立基因控制，由若干个相互关联抗原抗体组成的血型体系。 4、血型鉴定： 5、新生儿溶血：孕妇血浆中如有Rh抗体，妊娠Rh血型不配合胎儿时，其中IgG类的Rh 抗体可以通过胎盘进入胎儿体内，破坏胎儿有相应抗原的红细胞，引起新生儿溶血病。6、不规则抗体：抗原刺激机体所产生的抗体。因不经常存在于血清中，故称为不规则抗体， 又称为免疫抗体 7、红细胞悬液： 8、冷沉淀物：因冷却而沉淀的物质，是由新鲜冰冻血浆于4℃融化后，通过分离获得的低温 下不溶解的血浆蛋白成分。 9、红细胞输注：全血经离心分离出血浆即可制备出红细胞，由于分离制备方法和浓度的不 同，可以制备成多种红细胞制剂，将不同的红细胞制剂输注给患者，即称为红细胞输注。 10、自体输血：是指采集受血者自身血液，或回收受血者手术中或创伤区无污染的血液，以满足患者自身手术或将来应急情况用血需要。 11、成分输血：是指用物理或化学的方法将血液的各种有效成分分离，分别制成高纯度或高浓度的制剂，根据患者的疾病需要选择性的补充所需的血液成分的输血方法。 12、全血输注：指血液全部成分的输注，包括血细胞、血浆抗凝剂和保存液。全血输注分为新鲜全血和保存全血两种。 13、交叉配血： 14、输血反应： 15、免疫性输血反应： 16、非溶血性发热性输血反应： 17、输血相关移植物抗宿主病： 18、血小板输注无效：由于免疫因素或其他因素使输注的血小板迅速破坏，从而使输注效果不良甚至完全无效，称为血小板输注无效。 19、输血相关疾病：
Analysis of glk 12，15 葡萄糖通过葡萄糖激酶的ATP依赖的磷酸化是由通过根据弗兰克尔和Horecker 的使用过量的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶监测细胞提取物中NADPH的形成。反应体系为 2 ml，50 mM Tris buffer pH7.65；10 mM MgCl2；50mM甘露糖；加入0.1mL酶。在反应中，NADP+被还原生成NADPH，其产量与样品GLK活性呈正相关，NADPH在340nm处有一吸收峰，因此测吸光度，每分钟记录一次直至吸光度不再变化，测出每分钟光密度的增加值。根据以下公式计算：酶活性=吸光度变化（min）/6.22（NADPH吸光系数） Analysis of manB 中文 酶的测定原理是根D-甘露糖-l-磷酸作底物,反应后经酸水解无机磷的减少而测定。标准的反应溶液中,含有D-甘露糖-1-磷酸(0.5m mol/l) 、D-葡萄糖-2,6-二磷酸 ( 0.0 1mmo l/L),醋酸镁 (2.5m mol /L),组氨酸(5m mol /L),Tris -Hcl(10 mmol/ l,pH8.0 )的缓冲液和微克量的酶液。反应总体积为 50μL,在30 ℃下反应10分钟,然后加4.25 mL 0.74 mol /L H2SO4 .消化20 分钟,再加125 m1 钼酸铵和25 μL F -S试剂 ,在100℃水浴下煮沸7 -10分钟,冷却,在670 nm波长下测光密度。以酶液先消化后加底物经同样处理的样品作对照测光密度。以两者的光密度正差显示酶活性。 Analysis of gmd and wcaG 17 利用分光和色谱测定试验系统进行测量GDP-D-甘露糖4,6-脱水酶和GDP-4-酮-6-脱氧-D-甘露糖3,5-差向异构酶-4-还原酶的活性。GDP-D-甘露糖4,6-脱水酶标准测定体系含有50mM的Tris/盐酸缓冲液pH7.5，10mM的氯化镁，4mM的GDP-D-甘露糖，50μMNADPH+和GMD含粗提物终体积为100μL。该反应在37℃进行60分钟，每隔一段时间测量一次。最后加入1900μL 100mM NaOH终止反应并在37℃下孵育20min，然后在320nm下测吸光度。GDP-4-酮-6-脱氧-D-甘露糖3,5-差向异构酶-4-还原酶活性测量依靠加入在第一步骤中的反应，然后通过在340 nm和37℃下测量NADPH的消耗量测定。 Analysis of fuct 1-。。 标准测定混合物含有38nM寡糖受体，20mM的MnCl2，1％的Triton X-100，50mM的二甲胂-HCl缓冲液（pH值 5.8），0.37 μM GDP-岩藻糖（270.0 mCi/mmol），和酶（0.4 mg protein），100μL的终体积。温育在37℃，1h。终止反应用300μL氯仿/甲醇（2/1，v/v），然后将产物通过TLC，乙醇/吡啶/ 1-丁醇/水/乙酸(100/10/10/30/3, by vol)在下层相分离。掺入糖脂的放射性活度是用图像分析仪和并用液体闪烁计数器测定。
糖苷酶及其抑制剂的研究 摘要：糖苷酶是生命体正常运转的关键性酶，糖苷酶抑制剂可抑制糖苷酶的活性，阻断碳水化合物的分解，因此对一些糖代谢紊乱性疾病如糖尿病、肥胖病等有临床应用价值。本文研究了糖苷酶中的β－半乳糖苷酶、β－葡萄糖苷酶以及蔗糖酶的抑制剂。重点研究了β－半乳糖苷酶的分子结构和活性基团，并从结构出发筛选其抑制剂，发现此酶的抑制剂种类较少且抑制活性较低。本实验采用混合交叉筛选法筛选了多种金属离子和氨基酸对β－半乳糖苷酶的抑制作用，同时也筛选了天然产物和合成化合物。 关键词：糖苷酶β－半乳糖苷酶β－葡萄糖苷酶蔗糖酶抑制剂的筛选混合交叉法 1、前言 糖苷酶和糖基转移酶不仅参与了体内碳水化合物的消化，而且是糖脂、糖蛋白生物合成中寡糖链的修剪酶，它对糖蛋白中寡糖链的形成极为重要；糖链的组成与结构是糖蛋白特异生物功能的识别部位，
因此糖苷酶活性对糖蛋白生物合成有关键作用，而后者又涉及到免疫反应、神经细胞的分化、肿瘤的转移以及病毒和细菌的感染. 因此, 糖苷酶不仅是生命体正常运转的关键性酶,同时又是许多疾病的相关酶. 与病毒感染、癌症及一系列新陈代谢紊乱性疾病如糖尿病、肥胖病有关。由于糖苷酶重要的生物学意义，糖苷酶抑制剂的研究也引起了人们的极大兴趣。 糖苷酶抑制剂即是可抑制糖苷酶的活性，阻断碳水化合物的分解，抑制淀粉、麦芽糖、蔗糖转变成单糖；影响糖脂、糖蛋白生物合成中寡糖链的修剪；所以糖苷酶抑制剂不但对一些糖代谢紊乱性疾病如糖尿病、肥胖病等有临床应用价值[1] ，而且可作为抗AIDS病毒[2]、抗鼠白血病毒[3]的潜在治疗试剂。 本论文重点研究了糖苷酶中的β－半乳糖苷酶 β－半乳糖苷酶（β－galactosidase）又称β－D－半乳糖苷水解酶，（β－D－galactosid- -e galacto-hydrolase ,EC.3.2.1.23）,商品名为乳糖酶（Lactase），它广泛存在于豆类及其他各种动植物体内和微生物中。它能够催化β－半乳糖苷化合物中的β－半乳糖苷键发生水解，还具有转半乳糖苷的作用。由于它具有糖苷键结构特异性，可作为乳糖降解和双糖合成催化剂[4,5]，并有水解生物体内储存的多糖和半乳糖残基.引起血型转化等生理功能[6,7]而受到人们广泛关注，成为生物化学和酶催化化学的重要研究课题。 β－半乳糖苷酶的应用有着长远的历史，最初在食品工业中用来降解乳糖含量以满足乳糖不适症患者的需要，然而随着生物技术的发