一、流式细胞仪在白血病免疫分型诊断的概述
近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。流
式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列
及其分化程度。
1．流式细胞仪诊断白血病的依据
⑴FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达
⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。
⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、
表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分
化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。
2．流式细胞仪诊断白血病的意义
⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进
一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，
对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标
记。③混合性白血病。④部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴
别尚有一定困难。⑤慢性淋巴细胞白血病。⑥微小残留白血病。
⑵临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不好。
⑶疾病监测：可监测病程的发展，疗效，可进行微小残留白血病的检测。
二、免疫分型常用的免疫标志及其意义
1．白血病系列分化抗原
T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。
B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。
NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。
髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物酶）。
红白血病：GlyA（血型糖蛋白A）。
巨核细胞白血病：CD41、CD42、CD61。
2．白血病系列非特异性抗原
CD34、HLA－DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38联合运用于免疫分型。一般而
言，干/祖细胞CD34＋、HLA－D R＋、CD38－，原始细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38＋，而幼
稚细胞（如早幼粒细胞）CD34－、HLA－D R－、CD38＋。
3．白血病分化阶段抗原
T细胞抗原CD4、CD8。
B细胞抗原：CD10、Cyμ（胞浆μ链）、SmIg（表面膜免疫球蛋白）、CD38和CyIg（胞浆
免疫球蛋白）、CD11C。
4．白细胞共同抗原
CD45为白细胞共同抗原，其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细
胞（blasts ）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达CD45。用SSC/CD45 PerCP双参数分析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞。用两个系列或阶段特异性McAb加CD45进行三色免疫荧光染色，经FSC、SSC、McAbl-FITC 、McAb2-PE、CD45PerCP
五参数分析，可特异地分析原幼白血病细胞的免疫表型而不受成熟细胞的干扰。
三、白血病及淋巴瘤免疫分型
1．AML
M O：有低的SSC和FSC。在CD45－SSC图上出现在淋巴细胞位置上，至少表达一个特异性标
志如CD13或CD116，但MPO比CD13与CD33更灵敏。一般淋系标志阴性，但也可表达CD7
或CD4。一般HLA－DR、CD34阳性，有些研究表明CD7与CD34共表达在AML且预后差。
M1：流式上M1与M0相似不易区分，M1一般CD13＋、CD33＋、HLA－D R－，但CD34表达少
于M0，可能表达部分CD15。
M2：M0 与M1的主要区别是成熟度增加，blasts 减少，CD15较M1较显著，CD34弱于M1，
CD13有时表达强于CD33，多数病例HLA－D R（-）。CD45－SSC图显示从髓系blast 区至成
熟骨髓细胞区的连续细胞带，CD45－SSC图有助于确定blasts 比例。
M3、高颗粒性，具较高的SSC，但CD45较成熟C少，多数情况HLA－D R（- ）或表达减少，CD34少于M2、一般CD13弱（＋），可有CD2表达。
M4与M5：两型表型相似，但M4较M5表达更多的CD34（＋），较之M0、M1，M4与M5有更
大的FSS和SSC，CD45－SSC图上，成熟C出现在单核区，重要的表型为CD13、CD33、HLA
－DR、CD14和CD15，CD33可表达强于CD13，CD33（＋）、CD13（－）、CD34（－）很可能
为M5，但只出现在少数病人中，部分M5可见CD56（＋）。
M6：M6 较少见且特征不明显，一般HLA－D R，CD34、CD13、CD33阳性，CD45－SSC图显示
主要为红系成份。
M7：巨核细胞白血病，在AML中少于1％。一般CD61（GpⅢa）和/ 或CD41（GpⅡb- Ⅲa）
阳性，而注意由于血小板粘附在blasts 上造成的假阳性，可以用流式双色分析在EDTA存在下，测G pⅡb/ Ⅲa与CD34以减少激活血小板的粘附。
2．ALL：
ALL是儿童中最常见的恶性肿瘤，约占全部肿瘤的25％，在成人，ALL约占急性白血病的25％，我们将ALL分为 B 祖细胞型，CD10＋或CD10－，前 B 细胞型，B细胞型，T 细胞型。
B祖细胞型ALL：
在幼儿约占ALL 的65％～70％，青少年为55％～60％，成人为50％。在儿童，约90％病例
CD10＋，在幼儿只有少于50％病例CD10＋，blasts 一般FSC、SSC很少，是FAB标准的L1
或L2，一般TdT(+)HLA-DR(+) ，CD19(+)，此型又分为 2 个亚型，CD10＋和CD10－，前者预
后好，多数病例CD24＋，CD34＋，CD20表达随成熟度增加而增加，B祖细胞被定义为sIg- 。前B 细胞型ALL：
此亚型约占儿童ALL的25％，细胞一般为CD19＋，CD24，HLA－D R＋，胞浆CD22＋，CD10
＋，TdT 随CD20变化，CD34多为阴性，前 B 亚型被认为比 B 祖型预后更差，这与t(1 ；19)
出现相关并由此产生E2A－PBX1融合蛋白，它的表型为CD19＋、CD10＋、CD9＋，不同程度
CD20表达，CD34－，确认此表型有助于诊断基因上不确定的病例。
B细胞型ALL：
成熟B细胞型ALL约占ALL2％～5％，B细胞型ALL较之B祖细胞型ALL有更大的FSC和SSC，
在CD45－SSC图上出现在淋巴和单核细胞区域，即FAB标准的L3，表型为CD19、CD20、CD22、
CD24且sIg（多数为IGM）多数病例CD10＋。但成熟抗原及sIg 使之区别于更早的 B 系ALL，
极少数成熟 B 细胞ALL无FAB－L3 形态。
T－ALL：多数病例有大的FSC、SSC，在CD45－SSC图上可能出现在淋系未成熟细胞和髓系
未成熟细胞或单核细胞区，多数表现为胸腺亚型，最常见亚型为皮质晚期表达，CD1、CD2、CD5、CD7、CD4/ CD8双阳与极少膜表面CD3、TdT多为阳性。另一常见亚型为皮质早期表达
CD2、CD5、CD7、TdT强表达。髓质期亚型表达CD2、CD5、CD7、与CD3＋CD4＋/CD3+CD8+,
很少见TdT表达。前T 细胞亚型，表达CD7胞浆CD3＋且无其它T 细胞抗原，T 细胞肿瘤的
特征是丧失T 细胞抗原而表现出其它异常抗原组合。
杂合型白血病：
随着流式技术的广泛应用，我们发现许多病例并不能严格划分为淋系或髓系，真正的双表型病人多为t(9 ；22) 或（11q23），现在杂合型的误诊率很高。最常导致误诊的原因是在分析
中未能排除非白细胞，过度强调弱的非特异性结合，忽略了某些抗体缺乏系特异性，最重要的系特异性抗原在B系、T 系、髓系分别为CD22、CD3和MPO。
3．CML：
由于慢性期显著的细胞分化，在CD45－SSC图上除了髓系细胞占主导外，只显示一个正常骨
髓像，CML可确诊，CML起病与发展相对缓慢，慢性期的持续 1 年左右最终发展为加速期和
急变期。流式细胞技术对急变期亚型的诊断具有极高价值。直接影响到治疗效果。
急变期CML主要表现为髓系，偶为淋系，髓性急变可表现出多种形态包括未分化细胞。淋性急变具典型形态特征，为CD10＋B 祖细胞ALL 极少有T 细胞型ALL。
4．CLL：
CLL细胞主要为较正常淋巴细胞稍大的小淋巴细胞。免疫分型主要为：SIgM、SIgD 弱表达，
B系抗原为CD19、CD20、CD43、CD79a与CD5共表达，CD23表达使得CLL 区别于帽细胞淋巴
癌MU，即（CLL：CD23＋，MCL：CD23－），CD10－、CD23－、CD11c和CD25、CD20常弱表
达，尽管CLL起病慢，但CLL病人的生存率变化很大，有染色体异常的病预后不良，最常见
的三联体trisony12 、14q、13q、11q，免疫表型上没有特异的变化而免疫表型的变化并不
是提示染色体异常。最近，有研究表明，三联体trisony12 与SIg、CD20表达量高度相关，
与CD23－相关与FMC7相关。
B型前淋巴细胞白血病（B－DLL）较CLL更为严重，流式细胞技术在区分B－DLL和CLL上
发挥很大作用，B－DLL多为CD5－，CD22＋，表达更强的sig 。
MU病人平均生存率不超过 5 年，与CLL在形态上很难区分，与CLL相似有CD5＋B 祖细胞，
但Sig 表达强于CLL，且CD22－。
另一与CLL难于区分的是FCC，细胞为强Sig 、CD5－、CD10＋、CD23＋，具 B 系表型：对于
诊断为CLL，CD5、FMC7、CD22与SIg ，CD20异常强表表达的病例我们要考虑是否为DLL、
MCC或CLL的亚型（trisomy12 ）因为它们危险性更大。
四、流式细胞仪免疫分型实验
1．样本采集、运输、保存和操作
⑴样本类型：适用于多种临床标本，如外周血、骨髓穿刺液、骨髓活检物、淋巴样组织活检
物、浆液、脑脊液、皮肤、黏膜（内窥镜活检物）、细针穿刺物等等。
⑵抗凝剂的选择：外周血标本可采用EDTA、ACD或肝素抗凝。如果用同一份血标本做白细胞
计数和流式分析，则应用EDTA抗凝。骨髓穿刺可用肝素。其他体液用EDTA、ACD或肝素均可，但保存的样本活性可能会降低，EDTA的优点是成熟髓性细胞贴壁造成的损失及血小板
聚集较小，但细胞散射光特征丢失较肝素标本快；由于相对大量的ACD会通过改变pH而影响骨髓细胞活性问题，通常不推荐用ACD做骨髓穿刺抗凝剂。
⑶样本的保存：样本的完整性和细胞活性与抗凝剂的选择、运输、保存和温度息息相关。
①理想状态下，样本应在采集后立刻进行处理和染色。
②短期保存（ 1 小时或更短）应在室温(18- 22℃);
③长时间保存血或骨髓标本室温即可，有些样本可能4℃为佳。
④标本保存的时间上限取决于标本类型及其保存条件。
⑤肝素抗凝的血和骨髓通常可保存至48-72 小时；
⑥EDTA抗凝的血和骨髓可保存至12－24 小时。
⑦ACD抗凝的血和骨髓可保存至72 小时，但
⑧对于只做胞内染色的样本，可固定细胞以长期保存。但?quot; 固定－染色" 的方法取决于
要分析的抗原特性和染色方式，采用之前一定要进行新鲜标本的对照和验证实验。
2．样本制备
⑴单细胞悬液的制备
①血和骨髓：天然单细胞悬液。当有血凝块时，应用50um尼龙网过滤，同时进行细胞计数
和血涂片以判断靶细胞群体是否仍然存在。
②组织块：机械分离和酶分离两种方法。分离不仅是要获得最大产量的单细胞悬液，还要尽量保证细胞结构的完整性和抗原性。大多数淋巴样组织可用轻柔的机械方法快速分离，并保持收获细胞的相对完整。某些组织由于细胞间连接紧密，需在机械分离的基础上用蛋白水解
酶如胰蛋白酶、胃蛋白酶。骨髓标本亦可能因骨细胞成分污染而需要酶消化。但使用酶法一定要确认酶的使用没有改变、减弱靶抗原的表达，细胞活性没有显著降低。
⑵分离靶细胞群体
样本的任何处理方式都可能导致靶细胞群体的丢失。所以应尽可能使用最接近原始标本状态
的处理过程。去除红细胞是流式分析要求的至少步骤。两种方法：
①红细胞裂解：较佳。操作简单、快、并最可能保持原始标本的白细胞分布。溶血剂的选
择应基于其选择性去除成熟红细胞而最小程度的影响其他细胞的特点。最好在染色后溶血。
若在染色前溶血，需确认：抗原性不被溶血过程改变；溶血剂被彻底洗去，细胞和抗体结
合的动力反应未受影响；所用溶血剂不含固定剂，否则会影响细胞活性及表面标记结果。
②度梯度离心：白血病细胞回收较好并可能得到富集，同时去除死细胞。但费时，白血病
细胞的相对频率较难分析，某些重要细胞群体可能选择性丢失。根据密度梯度原理，若白血病细胞没有与淋巴细胞相似的浮力密度即可能丢失。所以用此方法时应检查各层细胞特性以
防止靶细胞的丢失。
⑶估细胞悬液
①样本外观：有严重溶血和血凝块的标本可能会有白细胞的损坏以及细胞亚群的丢失或改
变，应弃用。
②细胞丢失和分布：确认细胞形态和原始标本相似。密度梯度离心之后更应检查细胞分布。
可做血涂片判断。
③细胞计数和浓度调整：厂家推荐的抗体浓度通常是假定靶细胞数量在正常范围内
(500,000-1,000,000 ／testAb) 。白细胞数量上的显著变化会带来染色模式的变化。而白血
病标本常常有异常的白细胞数量，骨髓标本也可能被外周血稀释，这些标本的细胞性可能有
极大的变异。因此有些标本没有足够的细胞做流式分析，有些则由于细胞量大，正常浓度下
的抗体相对不足，不能饱和所有的结合位点，导致假阳性结果。所以染色前的细胞计数非常
必要。推荐方法：WBC<1000/uL: 用200uL 全血并调整相应溶血剂用量；WBC:1000-10000/uL,
用100uL 全血并用溶血剂标准量；WBC:10000-20000/uL, 用50uL 全血并调整相应溶血剂用
量；WBC>20000/uL，用稀释至(2)(3) 范围内。骨髓标本常常要在PBS1:10 稀释后计数。应
该指出，由于不同的标本中不同系列的细胞比例不同，调整细胞总数不一定合适每一个系列
特异的抗体。实验室若选择不同于厂家推荐的方法（如自己稀释抗体），抗体一定需要进行
测试以得到抗体和细胞的最佳比率。
④细胞活性：死细胞对许多抗体有非特异性染色，有些抗原同时存在于胞膜和胞浆，这就使
样本的细胞活性检测变得重要，尤其毖揪顺な奔涞脑耸浜痛⒋妫蚨匝镜闹谱鞴
滩惶宄薄＜觳獾姆椒ㄍǔＳ辛街郑阂皇鞘凳钡牧魇郊觳猓豪糜馊玖螾I 、7-AAD或
EMA（ethidium monoacide ）。活细胞将拒染这些染料。此方法的优势是细胞表面标志和活
性分析可同时进行，通过设门即可得到活细胞的染色特性。尤其适用于高度坏死的样本。样
本染色后需固定。应在加固定剂之前洗去多余的7AAD，以保证区分的是固定前细胞的死活
状态。但随着时间延长，7AAD会在固定的细胞群体重新分配，死活细胞的区分变难。对于
染色后常规固定并在固定后12 小时以上分析的标本，最好用EMA。EMA与死细胞DNA稳定的
共价结合保证了长时间固定后仍能很好地区分固定前的死活状态。二是手工检测：使用
Trypan blue 或其他细胞活性染料。
⑷细胞染色
①细胞表面染色：大多数可帮助白血病免疫分型的抗原都在细胞膜上。但由于许多抗原也同时存在细胞内，所以在细胞表面抗原检测时应特别注意保持细胞膜的完整以保证检测的特异
性。例如免疫球蛋白重链在细胞内和表面的存在有着不同的意义，检测表面标记必须是未固
定的活细胞。
②细胞内染色：有些胞内特异性抗原的检测对白血病的免疫分型尤为重要，如TdT, MPO, cCD3, cCD22, 以及胞浆内Ig 的表达。胞内染色的关键是使细胞膜通透，把抗体导入胞浆而
不影响细胞结构的完整性。要保证固定和透膜的步骤不影响有关标记的抗原性以及和抗体的
结合。③胞膜和胞内的同时染色：通常，先胞膜染色，固定，膜通透和胞内染色，最后是DNA染色。固定剂和通透剂都可能对细胞和参数有不同的多重影响，应根据情况选择。每一
步染色对荧光素的选择和抗体的选择都很重要。如，用于表面标记的荧光素应不被随后的固
定和通透步骤所影响，而对于胞内染色，所用的荧光素应足够小能穿透到胞膜内。
3. 抗体组合的确定：
选择抗体组合的技术性考虑：基于血液肿瘤的复杂性，提供一个通用的抗体选择策略是不现
实的。国际上迄今也没有一致性的抗体组合。应该意识到，没有一个神奇的既小又功能齐全
的抗体组合可以解决所有的临床相关答案。一个局限性的小组合也可能影响对样本的正确评
估和分类。确认细胞异常的能力与所用抗体的数量直接成正比。
⑴选择抗体组合的基本原则如下：
1）所选的抗体组合应足够宽，可以鉴别样本中的所有细胞亚群包括正常和异常群体。抗体
的数量越多，检测的灵敏度越高。应该指出，由于肿瘤细胞常常缺少细胞的正常标记或表达
异常，所以特异性抗体一定程度上的重复选择有时是必要的。
2）抗体的选择应可以区分正常和异常细胞，正常细胞可作为实验的内参照，异常细胞的表
达比例也更准确。如现在用CD45抗体来区分正常和幼稚细胞，此方法尤其在幼稚细胞含量
少时更显优势。
3）荧光强度和表位密度应同时考虑。对表达少的抗原表位应尽可能选择强度强的荧光素。
4）必要时用活性检测排除死细胞较强的非特异性染色。国外统计，约70%组织样本和48% 血或骨髓标本有活性检测结果。
5）实验人员应了解所用抗体的反应细胞谱，以及与特定荧光素结合后的染色模式。相同的
CD编号的不同抗体可能有不同的结合模式。
⑵常用的方案考虑：大而全的抗体组合：全面了解抗原表达，无需额外染色，省时但费用高。先用筛查试剂了解样本的一般情况，再根据所得信息采用第二线特异性更高的抗体组。
经济，但费时，也需要正确的抗体选择的策略性决定。但考虑到所用时间和设备费用，只有约30%国外实验室采用此法。基于临床或形态学的资料，选用有目标性的抗体组合以确认可
疑的诊断或分类。
4. 样本获取
通常，每个标本应获取1-2x104 个有核细胞的荧光和散射光信号，微小残余病变分析则需
5x104 个细胞。恶性细胞常有较宽的大小和粒度范围，获取时最好收集无门的数据以保留所
有未知异常细胞群体的所有特性。免疫荧光信号要求对数放大和至少256 道的分辨率。无论选择对数或线性放大都要以保证异常细胞都能被检测到。
5. 数据分析
只有通过多参数分析，才能最大程度地区分异质的样本中的正常和异常细胞。多参数分析意味着综合细胞的光散射和多色荧光特征。最少的要求应是 4 个参数（2 个光散射和 2 个荧光参数）。采用的参数越多，分析步骤越复杂，流式免疫分型的灵敏度越高。
⑴分析技术：数据的分析方式随样本的特性、抗体组合及临床情况的不同而变化。但总的
原则是要用多参数的数据创造可以区分正常和异常细胞的图形，如FSCvs. SSC, FL vs. FL, Scatter vs.FL 等，散射光与荧光参数的综合分析常常能提供有效的信息。
⑵分析步骤：首先分析所有细胞的抗原表达情况，鉴别出正常细胞和异常细胞群体，正常细胞的表现可以作为整个实验染色过程的内部参照，提供实验一致性与否的客观证据，异常细胞则通过进一步设门分析确定表型特点。
⑶设门：即选择特殊的细胞群体分析其各个参数的表现，是一个基本的分析技巧。把分析局限在门内的细胞群体的前提是门内的细胞代表所有感兴趣的细胞，而且没有其他细胞的污染。一般来说，不同疾病的设门策略亦不同，常用的FSCvs. SSC的设门方式可能不总是适
用于L&L 分析，如在急性白血病中，CD45和SSC的双参数显示是鉴别幼稚细胞的一个简单
而有效的方法；在B细胞淋巴瘤中用一个全B细胞的抗体设门来看抗κ链和抗λ链的表现；T 细胞淋巴瘤时用一个全T 细胞抗体设门使肿瘤细胞的分型更加明确。另外，通过细胞特异
的抗原表达确定其光散射区域的"backgate" 的方法也很实用，如通过CD14vs.CD45的双参数
分析区分多个区域的淋巴、单核和粒细胞群体。
⑷分析异常细胞群体：确定异常细胞群体后要进一步分析其免疫分型。分析抗原表达要注意：
①在L&L 中，定性的描述（阳性或阴性）通常要比阳性百分率的计算更有价值。只有在设
门内细胞全部是感兴趣的细胞而且荧光分布的形状可以非常清楚地区分阳性和阴性亚群的
【全科临床论著】 218例急性白血病流式细胞术免疫表型分析 赵皓,余晾,吕合作,郑宏波,项平 【摘 要】 目的 研究急性白血病(AL)免疫表型特征及诊断价值。方法 采用流式细胞术(FC M)对218例初诊急性 白血病患者进行免疫分型。结果 急性髓系白血病(AML)患者均表达两种以上髓系抗原,其中部分伴有淋系抗原 (C D7)表达。急性淋系白血病(ALL)患者均表达淋系抗原,部分表达一种或两种髓系抗原。14例混合型白血病同时表 达两种以上淋系和髓系抗原标志。4例慢粒急淋变既表达髓系抗原又表达淋系抗原。结论 FC M免疫分型是在细胞形 态学和细胞化学染色基础上对急性白血病诊断与分型的重要补充。 【关键词】 急性白血病;免疫表型;流式细胞术 【中图分类号】 R733.7 R446.63 【文献标识码】 A 【文章编号】 167424152(2010)1021239202 Ana lysis of Imm unophenotype in218Ca ses w ith Acute L eukem i a by Flow Cyto m etry ZHAO Hao,YU L iang,LV He2zuo, et al.Central L aboratory,the First A ffiliated Hospital of B engbu M edical College,B engbu233004,A nhui,China 【Abstract】O bjecti ve To exp l ore the acute Leukem ia i m munophenotype and its diagnosis value.M ethods A ssay the i m mune phenotype in218patients with acute leuke m ia by fl ow cyt ometer.Results The patients with acute myel oid leukem ia(AML)ex2 p ressed more than t w o kinds of myel oid antigens;part of the m exp ressed ly mphatic antigens(CD7).The patients with acute ly m2 phoblastic leuke m ia(ALL)exp ressed ly mphatic antigens;part of them exp ressed one or t w o kinds of myel oid antigens.Fourteen patients with m ixed acute leuke m ia(MAL)showed t w o kinds or more ly mphoid and myel oid antigens.Four patients with chr onic granular differentiated t o acute ly mphatic leukem ia not only exp ressed myel oid antigens but als o exp ressed ly mphatic antigens. Conclusi on The i m munophenotype by fl ow cyt ometry is the i m portant supp lementary t o acute leuke m ia diagnosis and typ ing in mor phol ogy and cyt oche m ical dyeing foundati on. 【Key words】 Acute leuke m ia;I m munophenotype;Fl ow cyt ometry 白血病细胞是一种高度异源性、异质性并具有一定增殖活力的恶性细胞。传统的F AB(法国、美国和英国形态学标准)分型是在细胞形态学和细胞化学染色基础上进行的,对急性白血病诊断与分型有其局限性。流式细胞术(Fl ow cyt ometry,M)是根据白血病细胞表面和胞内的特异性抗原,采用单克隆抗体对白血病细胞的来源和分化阶段进行更精细的检测和判断,从而弥补F AB分型的不足,对确定诊断、选择治疗方案和判断预后具有重要意义[1]。本文采用FC M对218例AL患者进行免疫表型分析,现将结果报告如下。 1 资料与方法 111 临床资料 218例患者为我院2008年10月-2010年2月血液科住院患者,年龄10～79岁,男性132例,女性86例。112 研究方法 1.2.1 取材 E DT A2K2抗凝骨髓或血液标本1m l。 1.2.2 仪器与试剂 F ACSCalibur流式细胞仪,购自BD公司。单克隆抗体:F I T C标记的CD2、C D33、HLA2DR、C D15、CD10,PE 标记的CD7、C D13、C D34、C D11b、C D19,Per CP标记的CD45, APC标记的CD5、CD14、CD20、C D45,同型对照I gG1/I gG2a以及混合抗体CD3/M P O/CD79a,透膜剂F I X&PER M及溶血素,以上试剂均购自BD公司,鞘液为自配的P BS缓冲液。 1.2.3 试验方法 表面标志染色:在各试管中分别加入E D2 T A2K2抗凝骨髓或血液50μl,按表1中的抗体组合分别加入相应的抗体或同型对照(F I TC、PE及PercP标记的抗体为30μl, APC标记的抗体为5μl)室温避光孵育15m in,分别加1000μl 溶血素,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。胞内标志染色:先用CD452APC同上进行表面染色、溶血、洗涤,然后加200μl 作者单位:233004安徽省蚌埠医学院第一附属医院中心实验室 通讯作者:赵皓,电子信箱:icecool1980@https://www.doczj.com/doc/4e14262396.html, 固定液室温固定细胞15m in,P BS洗涤细胞一次,去上清,加200μl透膜液及胞内染色抗体或同型对照30μl,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。检测结果采用Cell Q uest软件进行分析:首先,在FSC/SSC散点图中,根据细胞大小和颗粒度进行设门选中有核细胞群体;然后,在C D45/SS C散点图中,根据CD45表达强度和颗粒度,对有核细胞进行设门,选中幼稚细胞群体;最后,再对幼稚细胞群体进行分析,确定各种标志的阳性率。判断阳性的标准为:胞内染色标志CD3/M P O/CD79a>10%,其他表面标志>20%。 表1 AL流式细胞术免疫分型抗体组合 抗体A1A2A3A4A5A6B1B2 F I TC I gG1CD2CD33DR CD15CD10I gG1CD3 PE I gG2a CD7CD13CD34CD11b CD19I gG2a MP O Per Cp CD45CD45CD45CD45CD45CD45-CD79a APC I gG1CD5--CD14CD20CD45CD45 2 结果 119例经临床确诊的AML各种抗原表达的阳性率依次为M P O(95.80%)、C D13(90.76%)、C D33(81.51%)、HLA2DR (73.95%)、CD34(54.62%)、CD15(30.25%)、C D11b (22.69%)、CD14(10.92%),其中有19例AML患者伴有淋系抗原C D7的表达。 经临床确诊为ALL的83例患者中,经FC M免疫分型,有21例为T系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD3 (100.00%)、C D7(100.00%)、CD2(90.48%)、CD5(85.71%)、HLA2DR(61.90%)、C D34(42.86%),其中有4例患者伴有CD13等髓系抗原的表达;有62例为B系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD79a(100.00%)、CD19(93.55%)、CD20 (82.26%)、C D10(69.35%)、HLA2DR(83.87%)、CD34 (69.35%),其中有5例患者伴有CD13等髓系抗原的表达。
近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。 1．流式细胞仪诊断白血病的依据 ⑴FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达 ⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。 ⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。 2．流式细胞仪诊断白血病的意义 ⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。③混合性白血病。④部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。⑤慢性淋巴细胞白血病。⑥微小残留白血病。 ⑵临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不好。 ⑶疾病监测：可监测病程的发展，疗效，可进行微小残留白血病的检测。 二、免疫分型常用的免疫标志及其意义 1．白血病系列分化抗原 T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。 B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。 NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。 髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物酶）。 红白血病：GlyA（血型糖蛋白A）。 巨核细胞白血病：CD41、CD42、CD61。 2．白血病系列非特异性抗原 CD34、HLA－DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38联合运用于免疫分型。一般而言，干/祖细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38－，原始细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38＋，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34－、HLA－DR－、CD38＋。 3．白血病分化阶段抗原 T细胞抗原CD4、CD8。 B细胞抗原：CD10、Cyμ（胞浆μ链）、SmIg（表面膜免疫球蛋白）、CD38和CyIg（胞浆免疫球蛋白）、CD11C。 4．白细胞共同抗原 CD45为白细胞共同抗原，其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达CD45。用SSC/CD45 PerCP双参数分析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞。用两个系列或阶段特异性McAb加CD45进行三色免疫荧光染色，经FSC、SSC、McAbl-FITC、McAb2-PE、CD45 PerCP五参数分析，可特异地分析原幼白血病细胞的免疫表型而不受成熟细胞的干扰。
2013版WHO软组织肿瘤免疫表型大全2014-11-06艾迪康病理诊断 主要根据2013年“WHO肿瘤分类——软组织和骨肿瘤”翻译而来 第1章脂肪细胞肿瘤（adipocytictumours） 良性 1、脂肪瘤（lipoma） 免疫表型：成熟脂肪细胞表达S-100、leptin和HMGA2阳性。 2、脂肪瘤病（lipomatosis） 免疫表型：和正常脂肪相似。 3、神经脂肪瘤病（lipomatosisof nerve）
免疫表型：因为病变的所有成分均存在于正常神经内，故免疫组化对诊断没有帮助。 4、脂肪母细胞瘤（lipoblastoma）/脂肪母细胞瘤病（lipoblastomatosis）免疫表型：脂肪细胞表达S-100和CD34，原始间叶细胞常表达desmin。 5、血管脂肪瘤（angiolipoma） 免疫表型：血管内皮成分CD31等内皮标记阳性，细胞性血管脂肪瘤增生的梭形细胞CD31阳性，证明为血管内皮。 6、软组织平滑肌脂肪瘤（myolipomaof soft tissue） 免疫表型：梭形细胞SMA和desmin染色弥漫强阳性，证明为平滑肌分化；ER 和PR阳性也有报道；HMB-45阴性。 7、软骨样脂肪瘤（chondroidlipoma） 免疫表型：成熟脂肪细胞S-100强阳性，脂肪母细胞S-100弱阳性，随脂肪细胞逐渐成熟S-100染色逐渐增强。无脂肪母细胞分化特征的细胞S-100阴性。少数病例角蛋白阳性，但EMA一致阴性。 8、梭形细胞脂肪瘤/多形性脂肪瘤（spindlecell lipoma/pleomorphic lipoma） 免疫表型：梭形细胞脂肪瘤和多形性脂肪瘤中的梭形细胞均为CD34强阳性， S-100罕见阳性，偶见desmin阳性。
血细胞形态特征和常见血液病的血液学特征 第一节血细胞的生成、发育规律及正常形态学特征 一、血细胞的生成： （一）红细胞系统（红系） 多能干细胞髓系干细胞红系祖细胞 原红早幼红中幼红晚幼红网织红红细胞 分裂次数 1次 1次 2次无 故一个原红可生成16个红细胞。 （二）粒细胞系统（粒系） 多能干细胞髓系干细胞粒单系祖细胞粒系祖细胞 原粒早幼粒中幼粒（三种）晚幼粒杆状核粒细胞分叶核粒细胞分裂次数 1次 1次 2-3次无 故一个原粒可生成16个以上成熟粒细胞。 （三）单核细胞系统 多能干细胞-------------单核细胞 -------进入组织成为组织细胞---------抗原刺激成为巨噬细胞。 （四）淋巴浆细胞系统 全能干细胞淋系干细胞淋系祖细胞（B）原始淋巴（B）幼稚淋巴细胞（B）淋巴细胞（B）原始浆细胞幼稚浆细胞浆细胞 （五）巨核细胞系统 多能干细胞---------------产板巨------裸核、血小板 二、各期细胞正常形态学特征 【红细胞系统】 （一）各期红细胞的形态特点 1．原始红细胞（pronormoblast）： 胞体：直径15~20μm、圆形或椭圆型，边缘常有钝角状或瘤状突起。 胞核：圆形、居中或偏于一旁，约占细胞直径的4/5，核染色质呈颗粒状，比原始粒红细胞粗而密，核仁1-2个，大小不一，染浅蓝色。 胞质：量少，深蓝色，不透明，有油画蓝感，在核周围常形成淡蓝区。 2. 早幼红细胞（eary normoblast） 胞体：直径10-18μm、圆形或椭圆型。 胞核：圆形或椭圆型，占细胞2/3以上，居中或稍偏位，核染色质可浓集成粗密小块，较原红细胞粗糙，核仁模糊或消失。 胞质：量多，染不透明蓝或深蓝色，仍可见瘤状突起及核周淡蓝区。
急性白血病（Acute leukemia）形态学分型在法、美、英（FAB）合作组分型基础上，1988年天津白血病分类、分型讨论会建议试行以下分型法；（一）急性淋巴细胞白血病（ALL）可分为3个亚型：L1型，细胞分化较好，以小淋巴细胞为主，治疗反应较好；L2型，以大淋巴细胞为主，有大小不均，治疗反应相对较差；L3型，以大细胞为主，大小较一致，治疗缓解率很低。（二）急性非淋巴细胞白血病（ANLL）可分为7个亚型；1、M1即急性粒细胞白血病未分化型，骨髓中原始粒细胞≥90％（非幼红系细胞）。2、M2即急性粒细胞白血病部分分化型又分为2个亚型。M2a骨髓中原粒细胞占非幼红细胞的30－80％，单核细胞＞20％，早幼粒细胞以下阶段＞10％。M2b骨髓中异常的原始及早幼粒细胞增多，以异常的中幼粒细胞增生为主，其胞核常有核仁，有明显的核浆发育不平衡，此类细胞＞30％。3、M3即急性早幼粒细胞白血病，骨髓中以颗粒增多的异常早幼粒细胞增生为主，占非幼红细胞的＞30％，其胞核大小不一，胞浆中有大小不等的颗粒，又分二亚型；M3a 为粗颗粒型，嗜苯胺兰颗粒粗大，密集甚或融合。M3b为细颗粒型，嗜苯胺兰颗粒密集而细小。4、M4即为粒－单核细胞白血病，按粒和单核细胞形态不同，可包括下列四种亚型；M4b以原始和早幼粒细胞增生为主，原幼单和单核细胞占非红系细胞的＞20％。M4b以原幼单核细胞增生为主，原始和早幼粒细胞占非红系细胞的＞20％。M4c原始细胞即具粒系，又具单核细胞系形态特征细胞＞30％。M4Eo除上述特征外，有嗜酸颗粒粗大而园。着色较深的嗜酸性粒细胞，占5－30％。 5.M5 为急性单核细胞白血病，又可分二个亚型；M5a 未分化型，骨髓原始单核细胞占非系细胞的≥80％。M5b 部分分化型，其骨髓中原始和幼稚单核细胞占非红系细胞的＞30％，原单核细胞＜80％。 6.M6 红白血病，骨髓中幼红系细胞＞50％，且常有形态学异常，骨髓非红系细胞中的原始粒细胞（或原始＋幼单核细胞）＞30％，血片中原粒（或原单）细胞＞5％，骨髓中非红系细胞中原粒细胞（或原＋幼单）＞20％。7.M7 巨核细胞白血病未分化型外周血有原巨核（小巨核）细胞；骨髓中原巨核细胞＞30％，原巨核细胞由组化电镜或单克隆抗体证实；骨髓造血细胞少时往往干抽，活检有原始和巨核细胞增多，网状纤维增加。分化型骨随及外周血中以单园核和多园核病态巨核细胞为主。
急性髓系白血病的免疫表型分析及临床 意义 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的探讨成人急性髓细胞白血病(AML)的免疫表型特征及临床意义。方法采用流式细胞仪对113例AML患者进行免疫表型分析。结果髓系抗原表达阳性率依次为CD13＞CD33＞CD15＞CD14，AML患者CD34阳性表达率为35.40％。113例患者中有28例(24.78％)伴有淋系抗原表达，以CD7多见，表达阳性率为71.43％，其次CD19表达阳性率为35.71％。Ly+AML与Ly－AML相比较，两者在个别形态学亚型、临床体征及CD34表达差异有统计学意义，而在异常染色体核型检出率方面无统计学意义。CD+34组CR率(69.23％)较其阴性组(78.05％)低，但两者差别无统计学意义；Ly+AML组CR 率为52.94％(9/17)，低于Ly－AML组78％(39/50)，其中，CD+7组CR率(41.67％)与其阴性组(80％)相比差别有统计学意义。结论 AML 患者高表达CD13、CD33，部分患者同时表达髓系、淋系抗原；CD34及CD7阳性与治疗反应显著相关。 【关键词】急性髓系白血病免疫表型骨髓细胞 随着系列单克隆抗体的应用，白血病细胞免疫分型的广泛开展，使白
血病得到正确的诊断和分型，而免疫标记结合FAB(法、美、英三国学者制定)形态学分型［1］，对急性髓系白血病(AML)各亚型的鉴别及特殊类型急性白血病(AL)的发现、指导治疗及判断预后有重大意义。本文对113例急性髓系白血病的免疫分型及临床特点进行分析，现报告如下。 1 资料和方法 1.1 病例资料宁夏医科大学附属医院血液科2002—2007年间的住院初治AML患者113例，男58例，女55例，年龄14～76岁，中位年龄39岁。根据骨髓细胞形态学、细胞化学染色及免疫分型而确诊。FAB分型：M04例，M114例，M230例，M318例，M49例，M528例，M65例，CML急变5例。 1.2 免疫表型分析受检者抽取骨髓或外周血经肝素抗凝，采用活细胞三色免疫荧光法标记，流式细胞仪检测(型号为FACS Calibur，美国Becton-Dickinson公司生产)，通过二维点图分析抗原表达情况；所用单克隆抗体均为美国BD公司产品。B淋巴细胞系单抗：CD10、CD19、CD20；T淋巴细胞系单抗：CD3、CD5、CD7；髓系单抗：CD13、CD14、CD15、CD33；造血干/祖细胞单抗：CD34。结果判定用Cell Quest 软件分析，CD45/SSC设计中的白血病细胞群表面标记检测阳性率≥20％判断为阳性。 1.3 细胞遗传学检查染色体标本采自治疗前骨髓，用直接培养法和24h短期培养法，按常规制备染色体并进行R显带染色分析20～30个中期分裂相，根据《人类细胞遗传学国际命名制(ISCN)》(1995)
入院记录 姓名：工作单位：无 性别：女职业：农民 年龄：45岁入院日期：2010年04月26日09时09分 民族：汉族记录日期：2010年04月26日 籍贯：病史陈述者：患者本人 婚姻：已婚可靠程度：可靠 家庭地址： 主诉：反复乏力、头晕5月余。 现病史：患者于入院前5月无明显诱因出现乏力、头晕，恶心，食欲下降，全身不适症状，伴有高热，最高体温达400C，咳嗽，无咳痰，腹胀，无明显腹痛，无鼻衄、牙龈出血，无便血、血尿。患者就诊，血常规检查回示：WBC 49.5×109/L，RBC 1.46×1012/L, HGB 53g/L，PLT 5×109/L；诊断为：贫血；给予输注浓缩红细胞改善贫血，血浆预防出血，血小板增加血小板计数，预防出血，清开灵、头孢呋辛钠联合左氧氟沙星抗感染，未进行任何特殊检查及明确诊断，给予输注青霉素注射液等药物治疗，乏力、高热症状未明显好转，并呈进行性加重，出现乏力、头晕加重，体温40OC，经患者家属要求，转我院诊断治疗，我院急诊科以"重度贫血"收住我科，患者入院后，急查血常规回示：WBC 47.6×109/L，RBC 1.25×1012/L, HGB 46g/L，PLT 4×109/L；骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1）；给予第一周期DA方案（DNR 40mg d1-3 ，Ara-c 200mg d1-7）静脉化疗；预防化疗副作用，抗感染及对症、支持治疗；2010年01月04日复查骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1-PR）；第二周期DA方案（DNR 40mg d1-3 ，Ara-c 200mg d1-7）静脉化疗，积极预防骨髓抑制等治疗，定期腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病，2010年01月28日复查骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1-CR）；2010年02月08日给予第三疗程给予大剂量阿糖胞苷化疗（Ara-c 2000mg d1-3）+大剂量甲氨碟呤化疗，复查血常规：WBC 1.12×109/L，L 0.68×109/L,RBC 2.17×1012/L，HGB 67g/L，PLT 59×109/L；病情好转出院；患者于2010年03月17日再次来我科就诊，骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1-CR）；给予MA方案（MIT 10mg d1-3，Ara-c 200mg d1-7）静脉化疗，预防化疗副作用，及对症、支持治疗,2010年03月24日给予腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病，复查血常规：WBC 1.49×109/L，L 0.76×109/L, RBC 2.02×1012/L，HGB 68g/L，PLT 178×109/L；患者病情好转出院。目前患者为进一步治疗来我科化疗，我科以"急性粒细胞白血病未分化型（M1型）"收住。自发病以来，患者精神差，食欲、睡眠欠佳，大小便正常，体重无明显变化。 既往史：既往体健，否认肝炎、结核、伤寒等传染病史，否认心脏病、糖尿病等慢性病史，否认外伤及手术史。否认输血及血制品史。否认食物及药物过敏史，预防接种史不详。 个人史：生于原籍，无疫区居住史。生活规律，无粉尘、毒物及放射性物质接触史，无特殊不良嗜好。 月经史：14,3-5/28-30,2010年04月18日。既往色暗红,量中等,无痛经。 婚育史：已婚，育有1子2女，现爱人和孩子身体健康，家庭关系和睦。 家族史：家庭成员中无类似疾病，否认家族遗传病史。
临床上常见的恶性淋巴瘤免疫表型特征: 1、T细胞和NK细胞淋巴瘤 (1)前体T淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)：此型淋巴瘤TDT，CD7，cCD3表达最具特征。同时还可表达CD38，CD2，CD5，CD10;LCA，CD3常阴性。髓系相关抗原CD13和/或CD33在此型中常有表达。 (2)T前淋巴细胞淋巴瘤(T-PLL)：表达T细胞相关抗原，约60%病例CD4+/CD8-，而CD4+/CD8+或CD4-/CD8+较少，不表达TDT，CD10可与T-LBL区别。 (3)成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)：表达T细胞相关抗原，绝大部分病例呈CD4+/CD8-，通常不表达CD7，特征为几乎全部病例CD25阳性，粒酶B，TIA-1阴性。 (4)NK-T细胞淋巴瘤：瘤细胞表达CD56、CD3，多数病例表达粒酶B、穿孔系，约90%以上病例表达细胞毒性颗粒相关蛋白TIA-1。一般不表达CD4/CD8、CD25、CD57，B细胞和组织细胞分化抗原阴性。 (5)血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AILT)：CD45R0、CD3阳性，通常CD4阳性细胞多于CD8+，滤泡树突状细胞标记物CD21阳性，常可异常表达CD5、CD7。 (6)外周T细胞淋巴瘤(PTL)：T细胞相关抗原阳性，但常有部分丢失，尤以CD7、CD5多见，以大细胞为主者，可见CD30+/-，但ALK、EMA阴性可与ALCL区别。 (7)间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)：特征性肿瘤大细胞表达CD30，多数表达EMA，约10-20%表达CD15，须注意与HL区别。60-80%表达ALK，据报导此标记物阳性表达者5年生成率可达80%，儿童常ALK、EMA共表达，成人多为ALK+/EMA-或ALK-/EMA+。ALCL 在多数情况下仅表达少数T细胞相关抗原，通常CD45R0，CD2、CD4阳性，而CD3、CD5、CD7常不表达。 2.B细胞恶性淋巴瘤： (1)前B淋巴母细胞淋巴瘤(B-LBL)：瘤细胞表达TdT、HLA-DR，CD79a，几乎全部病例表达CD19、大多数病例表达CD10，还不同程度表达cCD22。LCA、CD20常阴性。 (2)B前淋巴细胞淋巴瘤(B-PLL)：强表达B细胞相关抗原，1/3病例可异常表达CD5，SIg阳性。不表达CD23可与CLL/SLL鉴别。 (3)慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤(CLL/SLL)：同时表达CD5、CD23、CD43及B 细胞相关抗原，但CD20表达可能很弱。不表达CD10、CyclinD1。CD5异常表达为其持征，但CD5对组织处理，尤其是组织固定要求较高，要注意假阴性。 (4)套细胞淋巴瘤(MCL)： 同时表达CyclinD1、CD5和B细胞相关抗原，但CyclinD1敏感性较差，组织固定和抗原修复方式是染色的关键。近年推出的兔源性单抗效果好些。KI-67的高表达与不良预后有关。此型不表达CD10、CD23，可与CLL/SLL、FL鉴别。
中国人血液淋巴细胞免疫表型参考值调查 来源:https://www.doczj.com/doc/4e14262396.html,时间:2007-10-06 字体:[大中小] 收藏我要投稿 文章出处：朱敏转载请注明出处 【摘要】目的建立健康中国成人血液淋巴细胞免疫表型分析参考值。方法用Simultest IMK-Lymphocyte试剂盒的荧光抗体对102例健康中国成人血液进行染色，以FACSort流式细胞仪进行分析，Simulset程序获取数据并分析结果，SPSS软件进行统计。结果18～65岁健康中国成人淋巴细胞参考值范围CD+3细胞是50%～84%（955～2 860/μl），CD-3CD+19细胞为5%～18%(90～560/μl)，CD+3CD+4细胞为27%～51%(550～1 440/μl)，CD+3CD+8细胞为15%～44%(320～1 250/μl)，CD-3、CD+16和/或CD+56细胞为7%～40%(150～1 100/μl)，CD+3CD+4/CD+3CD+8比值为0.71～2.87。随着年龄增长CD+3CD+4细胞略有升高，CD+3CD+8细胞略有降低。NK细胞在大年龄组女性低于男性，且有统计学差异(P＜0.05)。与高加索人和美国人相比，中国人的CD+3CD+8细胞和NK细胞(CD-3，CD+16和/或CD+56)的相对值(百分率)与绝对值均高，CD-3CD+19细胞和CD+3CD+4细胞仅相对值较低，但绝对值不少。CD+3CD+4/CD+3CD+8比值向低值漂移。结论种族、性别、年龄和环境因素可影响健康人淋巴细胞表型分布。 Reference values on blood lymphocyte immunophenotype in healthy Chinese adult Zhu Lihua, Wang Jianzhong, First Hospital, Beijing Medical University, Beijing,100034 【Abstruct】Objective To establish the reference values on blood lymphocyte immunophenotype in healthy Chinese adults.Method Staining whole blood with fluorescein-conjugated monoclonal antibodies supplied by simultest TM IMK lymphocyte kit, we analyzed 102 healthy Chinese residents (age range 18～65 years) by FACSort flow cytometer, acquired results by Simultest programme, and performed statistical analysis by SPSS software.Results The 95% reference ranges in absolute counts per microliter of whole blood (percentage of lymphocytes) for CD+3, CD+3CD+4, CD+3CD+8, CD-3CD+19, CD-3/CD+16 and/or CD+56 cells were 955 to 2 860 (50% to 84%), 550 to 1 440 (27% to 51%), 320 to 1250 (15% to 44%), 90 to 560 (5% to 18%), 150 to 1 100 (7% to 40%) respectively. The CD+3CD+4/CD+3CD+8 ratio was 0.71 to 2.87. CD+3CD+4 cells increased and CD+3CD+8 cells decreased slightly with age. Women were compared to men in old age group, NK cells (CD-3/CD+16 and/or CD+56) were lower (P＜0.05). Compared with Caucasians and Americans, Chinese had higher percentage and absolute numbers of CD+3CD+8 and NK cells, but had lower percentage of CD-3CD+19 and CD+3CD+4 cells without absolute number change. So CD+3CD+4/CD+3CD+8ratio skew to the lower values.Conclusion The race, age and environment could influence the reference value of lymphocyte immunophenotype. 【Key words】Lymphocyte immunophenotype Reference value Flow cytometry 淋巴细胞免疫表型分析在原发或获得性免疫缺陷病、自身免疫性疾病的辅助诊断和移植免疫的监测中具有重要作用。随着流式细胞仪的广泛应用，采用流式细胞术进行淋巴细胞免疫表型分析已逐渐成为临床检验的常规工作之一。各国的流式细胞术实验室均建立了自己的参考值，并对其种族、性别、年龄等影响因素进行了探讨。目前我国还没有用流式细胞术、采用双染色分析淋巴细胞免疫表型参考值的报告。为此我们对102例健康成人进行了淋巴细胞免疫表型分析，现报告如下。材料和方法 一、研究对象 102例标本均取自于无免疫性疾病、无现症、不吸烟、体检健康、血细胞计数及肝、肾功能检查正常的成人。年龄18～65岁，其中男性54人，女性48人。首先按男女性别分为两大组，每组中又以40岁为界，≤40岁者为小年龄组（男24人，女19人），＞40岁者为大年龄组（男30人，女29人）。
一、流式细胞仪在白血病免疫分型诊断的概述 近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾用过的荧光显微镜或 APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM ）。流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。 1.流式细胞仪诊断白血病的依据 ⑴ FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达 ⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。 ⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现岀与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。 2.流式细胞仪诊断白血病的意义 ⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国 际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL ）或急性未分 化白血病（AUL ）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。③混合性白血病。④部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。⑤慢性淋巴细胞白血病。⑥微小残留白血病。 ⑵ 临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不 好。 ⑶ 疾病监测：可监测病程的发展，疗效，可进行微小残留白血病的检测。 二、免疫分型常用的免疫标志及其意义 1?白血病系列分化抗原 T淋巴细胞白血病：CD3 CD5 CD7。 B淋巴细胞白血病：CD10 CD19 CD22 NK淋巴细胞白血病：CD16 CD56 CD57。 髓系白血病：CD13 CD14 CD33 MPO（髓过氧化物酶）。 红白血病：GlyA （血型糖蛋白A）o 巨核细胞白血病：CD41 CD42 CD61o 2?白血病系列非特异性抗原 CD34 HLA— DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38联合运用于免疫分型。一般而言，干/祖细胞CD34^、HLA- DF^、CD38-，原始细胞CD34^、HLA- DR+、CD38^，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34 —、HLA- DR-、CD38^o 3?白血病分化阶段抗原 T纟田胞抗原CD4 CD8 B细胞抗原：CD10 Cy g（胞浆卩链）、SmIg （表面膜免疫球蛋白）、CD38和Cylg （胞浆免疫球蛋白）、CD11C 4?白细胞共同抗原
白血病分类和分型 保定第七医院肿瘤科穆铁军 时间：年月日时分 地点：肿瘤科医办室 参加人员： 白血病是造血系统的一种恶性疾病。其特征为一种或几种血细胞成分的自发性、进行性异常增殖，具有质和量改变的异常白细胞（白血病细胞）在骨髓和其他器官的广泛浸润，导致正常血细胞进行性减少，临床以贫血、出血、发热、白血病细胞浸润为主要表现。 白血病的治疗是根据不同类型选择不同治疗方案，故今日讲解白血病的分类分型。 分类 一、按自然病程及细胞的成熟度分类 （一）急性白血病起病急、病情重、自然病程一般在六个月以内。骨髓及外周血中主要为异常的原始细胞和早期幼稚细胞。 （二）慢性白血病起病缓、发展慢，病程一般一年以上，骨髓和外周血以较成熟的细胞占多数。 二、按细胞类型分类 分为淋巴细胞型、粒细胞型、单核细胞型及一些少见类型，如红白血病、巨核细胞型、浆细胞型、嗜酸细胞型、嗜硷细胞型白血病等。 三、按外周白细胞的多少分类 （一）白细胞增多性外周血中白细胞明显增多，并有较多幼稚细胞出现。 （二）白细胞不增多性外周血中白细胞不增多或甚至低于正常。血片中没有或较难找到幼稚细胞。 分型 一、急性白血病分型 急性白血病分为急性淋巴细胞性白血病（ALL）和急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）两大类，结果如下： ①ANLL分为8个亚型：急性髓性白血病微分化型（M0）、粒细胞白血病未分化型（M1）、粒细胞白血病部分分化型（M2）、早幼粒细胞型（M3）、粒-单核细胞型（M4）、单核细胞型（M5）、红白血病（M6）、巨核细胞型（M7）； ②ALL分为三个亚型：FAB分型：L1、L2和L3型。
近年来又根据细胞的免疫学特点，ALL根据免疫表型不同可分为B-细胞和T-细胞两大类。2000WHO将急性淋巴细胞白血病（ALL）分为三种亚型：（1）前体B细胞急性淋巴细胞白血病（细胞遗传学亚型）：t（9；22）（q34；ql1），BCR/ABL；t（4；llq23），（MLL重排）；t（1；19）（q23；p13）；（E2A/PBX1）；t（12；21）（p12；q22），（ETV/CBFα）。（2）前体T细胞急性淋巴细胞白血病（T—ALL）。（3）Burkitt细胞白血病。FAB分型中的急淋形态学亚型分型方法，因可重复性较差，现已基本放弃，不再把急性淋巴细胞白血病分为L1、L2、L3。骨髓中幼稚细胞>25%时诊断采用ALL的名称，幼稚细胞≤25%称为母细胞淋巴瘤。我们这里介绍白血病的类型分类分型，主要是因为白血病治疗方式和治疗效果往往是根据病的类型而不同的。 二、慢性白血病分型 可分为：慢性淋巴细胞白血病(慢淋)；慢性粒细胞白血病(慢粒)；慢性粒－单核细胞白血病；单核细胞；红血病。 三、特殊类型白血病， 可分为：慢粒急变；低增生性；淋巴肉瘤；组织细胞肉瘤；浆细胞；多毛细胞；嗜酸性粒细胞；嗜碱性粒细胞；组织嗜碱细胞；巨核细胞；未分化型急性白血病。
BD FACScanto ll白血病免疫分型六色试剂搭配六色试剂 第一管 CD7 FITC 340737 CD33 PE 347787 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD10 PE-CY7 341092 CD20 APC 340941 CD19 APC-CY7 348794 第二管 CD15 FITC 347423 CD11b 347557 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD34 PE-CY7 348791 CD56 APC 341025 HLA-DR APC-CY7 335796 第三管 CD2 FITC 347593 CD13 PE 347837 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD5 PE-CY7 348790 CD22 APC 340933
CD14 APC-CY7 333945 溶血素 349202 7 color setup beads 335775 流式上样管，无菌无盖125支/包 352052 6 color TBNK reagent kit 337166 第一管 CD7 FITC 340737 CD33 PE 347787 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD10 PE-CY7 341092 CD20 APC 340941 CD19 APC-CY7 348794 第二管 CD15 FITC 347423 CD11b 347557 CD45 PerCP-CY5.5 340953 CD34 PE-CY7 348791 CD56 APC 341025 HLA-DR APC-CY7 335796 第三管 CD2 FITC 347593
急性髓细胞白血病M2亚型细胞形态学及细 胞遗传学分析 作者：谢守军，王娜，彭兴荣，郝长来 【摘要】目的：了解急性粒细胞白血病AML-M2亚型的细胞形态学及细胞遗传学特征。方法：对23例以FAB分类标准确诊的AML-M2初发患者的细胞形态学及细胞遗传学资料进行回顾性分析；应用骨髓细胞短期培养法制备染色体标本，以R显带技术进行核型分析。结果：34%M2a、92%M2b患者白血病细胞内可见Auer小体，Auer小体在M2b 患者细胞中检出率明显高于M2a患者；M2患者白血病细胞POX染色呈强阳性反应，在M2a细胞表达多为弥散细颗粒状，而在M2b呈局灶团块状。23例患者中18例有克隆性染色体异常，异常核型检出率78.3%（18/23）。16例M2a患者无一致性的染色体异常。7例M2b患者均有特异性的t(8;21)异常，其中3例伴有y染色体丢失。结论：M2白血病组内异质性较大，M2a和M2b似乎具有各自独特的细胞形态学及细胞遗传学特性。 【关键词】急性粒细胞白血病； AML-M2；细胞形态学；细胞遗传学 急性粒细胞部分分化型白血病(acute myelomonocytic leukemia, AML-M2) 是一组异质性较大的髓细胞白血病，常伴有特殊的染色体异常。其诊断标准由FAB协作组于1976年提出，在FAB分型的基础上，国内又将其分为M2a和M2b，后者由我国首先提出，1980年被列入国内急性非淋巴细胞白血病分型标准中的一种特殊亚型。
2001年WHO分型中特别提出4种有再现性遗传学异常的急性髓细胞白血病，其中t(8;21)(q22,q22)与M2b密切相关。细胞形态学和细胞遗传学对AML-M2白血病的诊断、治疗和预后判断具有重要意义。为了解AML-M2的细胞形态学及细胞遗传学特点，报告57例研究资料。 1 资料与方法 1.1 研究对象：57例均为2003年至2006年12月在我院血液室按FAB标准确诊的M2初诊治患者，其中23例进行了染色体核型分析。M2的诊断标准按文献［1］。 1.2 试剂：瑞氏-姬姆萨（Wright-Gimsa）染液：珠海贝索生物技术有限公司。α-NAE,PAS和POX试剂盒购自中国医学科学院血研所科技公司。 1.3 形态学检查：骨髓及血涂片经瑞氏-姬姆萨染色后分类计数，常规进行POX、α-NAE（NaF）和PAS组化染色。 1.4 染色体核型分析：取患者初诊治疗前的骨髓，经24～48h 培养后，收集细胞常规制片，应用R显带技术进行核型分析。分析中期细胞数16～42个，根据细胞遗传学国际命名体制（ISCN，1995）［2］对核型进行描述。至少2个细胞有同样的染色体增加或结构重排，或者3个细胞有同样的染色体丢失方可确认为一个异常可隆。 1.5 统计学处理：两均数比较应用t检验，统计数据采用SPSS10.0分析软件处理。 2 结果 2.1 临床特征：57例患者中男32例，女25例，中位年龄40