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Overview
Fast and reproducible extraction of subcellular proteomes from mammalian cells
ProteoExtract? Subcellular Proteome Extraction Kit (S-PEK) is designed for fast and
reproducible extraction of subcellular proteomes from adherent and suspension-grown
mammalian cells. The S-PEK takes advantage of the different solubilities of certain subce
compartments in the four selected reagents. In the case of adherent cells, the procedure is
performed directly in the tissue culture dish without the need for cell removal. Cells or the
parts of the cells remain attached to the plate during sequential extraction of subcellular
compartments, until the appropriate extraction reagent is used. Thus, the early destruction
the cellular structure by enzymatic or mechanical detachment of cells from the tissue cultu
plate and any mixing of different subcellular compartments is prevented. For
suspension-grown cells, extraction starts with gentle sedimentation and washing of the cel
The stepwise extraction delivers four distinct protein fractions from one sample:
?Cytosolic fraction (F1)
?Membrane/organelle protein fraction (F2)
?Nucleic protein fraction (F3)
?Cytoskeletal fraction (F4)
Proteins are obtained in the native state making the S-PEK suitable for many downstream
applications such as 1D and 2D gel electrophoresis, immunoblotting, enzyme activity assa
and protein microarrays.
Sample size: 3-5x106or 25-50 mg tissue.
Catalogue
Number
539790
Brand
Family
Calbiochem?
Synonyms S-PEK Kit
Features and benefits ?Stepwise extraction resulting in four distinct subcellular proteomes from one sample ?Highly reproducible
?No ultracentrifugation steps
?Fast—needs just 2 hours with 45 minutes hands-on time
?Produces proteins suitable for functional studies
Application
Data
A:Adherent SAOS cells were extracted according to the Detailed Protocol
Subcellular Extraction of Proteins From Adherent Cells as outlined above. Im
i-iv show the morphology of the cells before and after each extraction s
(200-fold enlarged). The SAOS cells remained attached throughout the extrac
procedure. B:An aliquot of each fraction from A were subjected to SDS-
analysis (F1-F4 = fractions 1-4). The data demonstrate clear differences in
protein banding patterns among the 4 fractions. C:Aliquots of each frac
from A were separated by SDS-PAGE and transferred to PVD membrane for blot
with the indicated antibodies. For c-Fos, the fractions were subjected t
immunoprecipitation, prior to Western blotting, to enrich for any c-Fos pre
in each fraction. The data demonstrate that each marker protein is specific
enriched within the appropriate fraction.
A431 cel ls were stimulated with 0.2 μg/ml TNF-αfor the indicated times. At end of each induction period the cells were extracted as outlined in the Deta Protocol for Subcellular Extraction of Proteins from Adherent Cells. The prot from an aliquot of each fraction were separated by SDS-PAGE and transferre PVD membrane for Western blot analysis using an antibody specific for NF-The data indicate that there is measurable translocation of NF-κ B from cytoplasm to the nucleas as early as 5 min after TNF-α stimulation.
*Tested on rat liver and bovine liver tissue.
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.doczj.com/doc/4c780001.html, HighPure Plasmid Mini Kit 高纯质粒小量快速提取试剂盒 目录号：PL03 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存 50次 （PL0301） 100次 （PL0302） 200次 （PL0303） 平衡液室温5ml 10ml 20ml RNaseA（10mg/ml）-20℃150μl 250μl 500μl 溶液P1 4℃15 ml 25 ml 50 ml 溶液P2 室温15 ml 25 ml 50 ml 溶液P3 室温20 ml 35 ml 70 ml 去蛋白液PE 室温16ml 31.5 ml 63 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml 20ml 吸附柱AC 室温50个100个200个 收集管（2ml）室温50个100个200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml） 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。 2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分 钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍：
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机， 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议 接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基，过夜培养14-16个小时，可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。 4. 质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知 道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。 5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗 脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在－
PH0311|细菌细胞总蛋白提取试剂盒 (Bacterial Cell Protein Extraction Kit) Catalog No：PH0311Size：?50T Storage：Store@4℃ ◆产品简介 1、总论：经典的细胞蛋白质分离流程由下述主要步骤组成：清洗组织或细胞；裂解细胞；离心去沉淀获得可溶性蛋白质粗提物（可依据目标蛋白质的理化特性特别的调配裂解缓冲液）；通过有机溶剂或盐析等沉淀离心、层析、电泳等方法进一步纯化，得到目的产物蛋白。 2、本试剂使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白的蛋白提取。本产品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。 ◆产品存储 Store at4℃(本试剂在室温干燥条件下，可保存6个月。溶菌酶贮存液、100×蛋白酶抑制剂和50%甘油2-8℃保存) ◆试剂组成 试剂盒组成PH0311-50 细菌细胞蛋白裂解液50ml 细菌细胞漂洗液120ml 溶菌酶贮存液3ml 100×蛋白酶抑制剂0.6ml 50%甘油10ml 说明书1份 ◆使用说明 1、离心收集细菌细胞,按照每克湿菌取用5-6ml细菌细胞漂洗液的比例，于20℃～37℃将细胞悬浮起来后，4℃，12000g，1-2min离心除去细菌细胞漂洗液，漂洗2次。（离心只是收集细胞，转速、时间可自行调整。） *如果细菌细胞漂洗液不够，也可以用TE buffer（H=7.4--7.6）代替。 2、离心除去细菌细胞漂洗液后，按每克湿菌细胞，加入5ml细菌细胞蛋白裂解液，250ul溶菌酶贮存液和50ul100×蛋白酶抑制剂，混悬细菌细胞样品。
酵?母蛋?白质快速微量提取试剂盒 Yeast Protein Miniprep Kit 常温运输、4℃保存（溶液B成分二需-20℃保存），有效一年。 自备酵母培养基 产品及特点 本产品用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法，适合于各种形态的 各种酵母材料。本产品的其主要特点是： 1.破壁效率高，能达到80-90%。 2.可以处理各种酵母样品。 3.操作简单，得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分 析。 规格及成分成份 50次包装 溶液A 100 mL 溶液B成分一 50 mL 溶液B成分二 1.5 g 玻璃珠，400μL 5 g 使用方法准备工作：将溶液B成分二（干粉）全部加到50mL溶液B成分一中，充分摇晃使之全部溶解，成为溶液B，然后分装成小分（体积根据每次实验的样 品数决定）并放-20℃长期保存。
1、 将酵母细胞接种到5mL YPD 培养基中，30℃摇晃（250rpm/分钟）过 夜培养使其OD600达到0.5～2.0。 2、 把酵母细胞培养物转到装有2mL 预冷溶液A 的10-15 mL 离心管中， 混匀。 3、 4℃ 5000g 离心5分钟沉淀酵母细胞，吸出上清液。 4、 用30μL 溶液B 悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5mL 塑料离心管中。 5、 100℃下保温3分钟，使蛋白酶失活，样品存放于-20℃。 6、 加入0.1g 的玻璃珠。 7、 在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。 8、 加入70 μl 溶液B，稍加振荡，置100℃保温1分钟。 9、 取5-20μl 抽提液上样直接进行SDS-PAGE 凝胶电泳。 关联推荐 4X 蛋白上样缓冲液 BCA 蛋白检测试剂盒 蛋白marker ECL 发光检测液
精品文档 。 1欢迎下载 E.Z.N.A.? 质粒小提试剂盒操作规程（英文版译文） （适用于No. D6942, D6943 & D6944） 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培 养基进行培养。37℃强力摇动（~300rpm ）孵育12-16h 。使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉 淀对于获得高质量的DNA 非常重要。 4. 加入250μl 溶液II ，倒置、转动试管数次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。 可能需要孵育2min 。不要用力混合，以免使染色体DNA 断裂，减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min 。溶液II 不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl 溶液III ，立即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。为避免 形成局部沉淀，加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼．．．． 的吸取上清液，加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。确保离心沉淀未受扰动，确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g 离心1分钟，使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入500μl HB 缓冲液清洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除，以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清 洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完全通过柱子，丢弃滤过液。 注意：DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释（5倍稀释），如果DNA 清洗液稀 释液经过冷藏，则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤：重复清洗，加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ，使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作，不可 遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。将30-50μl （取决于终产物的期望浓度） 洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上，使之于室温下静置1-2min 。≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。可以进行二次洗脱，以收集残存的DNA 。 13. DNA 的产量和质量：分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA 的浓度计算如下： DNA 浓度=A 260×50×（稀释倍数）μg/ml A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者，DNA 的产量（及质量）有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式，但也可能存在串联体形式。 张小强 翻译
大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号：DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围： 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不 能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍： 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点： 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定，产量高（典型的产量10ml全血可提取出150-500μg），OD260/OD280 典型的比值达 1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到2,500 x g，并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70％乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA（不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大）。 4.本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 （20μl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit (目录号：HS0103) 产品包装 试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml) 150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml) 50个 （注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存） 保存条件 本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。 产品简介 本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.
使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 产品特点 1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。 2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。 3. 纯度高：所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 操作步骤 1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。 （注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次） 2. 加入250 ul Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。 （注意：是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀；菌体沉淀是否悬浮充分，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低） 3. 加入250 ul Buffer P2，温和颠倒混匀6 ~ 8次，直到溶液变得清亮粘稠。 （注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组DNA片段的污染，所用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏，如未完全变得清亮，可能是菌体太多，可增加Buffer P2的用量，在后续的操作中Buffer P3的用量也要相应增加） 4. 加入350 ul Buffer P3，立即温和颠倒混匀6 ~ 8次，可见白色沉淀物产生，室温静置2 min，然后12,000 rpm离心3 ~ 5 min。 （注意：Buffer P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清） 5. 小心将上清液转移到离心吸附柱Spin Columns PA中，静置2 min，让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min，弃收集管中的废液。 6. 向吸附柱中加入500 ul去蛋白液，12,000 rpm离心1 min，弃收集管中废液。 （注意：如果宿主菌是endA-，如DH5α若TOP10，此步骤可省略。如果宿主菌是endA+，如TG1、BL21、HB101、JM101等，此步骤不可省略，因这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒。如果提取低拷贝质粒
Overview ?Description ?References ?Product Information ?Applications ?Biological Information ?Safety Information ?Product Usage Statements ?Storage and Shipping Information ?Supplemental Information ?Prix & Disponibilité Prix & Disponibilité Référence DisponibilitéConditionnement QtéPrix Quantité 539790-1KIT En stock Contacter le Service Clients 1 kit à la validation de la commandePlus d'informations —Ajouter aux favoris Ajouter au panier Description
Overview Fast and reproducible extraction of subcellular proteomes from mammalian cells ProteoExtract? Subcellular Proteome Extraction Kit (S-PEK) is designed for fast and reproducible extraction of subcellular proteomes from adherent and suspension-grown mammalian cells. The S-PEK takes advantage of the different solubilities of certain subce compartments in the four selected reagents. In the case of adherent cells, the procedure is performed directly in the tissue culture dish without the need for cell removal. Cells or the parts of the cells remain attached to the plate during sequential extraction of subcellular compartments, until the appropriate extraction reagent is used. Thus, the early destruction the cellular structure by enzymatic or mechanical detachment of cells from the tissue cultu plate and any mixing of different subcellular compartments is prevented. For suspension-grown cells, extraction starts with gentle sedimentation and washing of the cel The stepwise extraction delivers four distinct protein fractions from one sample: ?Cytosolic fraction (F1) ?Membrane/organelle protein fraction (F2) ?Nucleic protein fraction (F3) ?Cytoskeletal fraction (F4) Proteins are obtained in the native state making the S-PEK suitable for many downstream applications such as 1D and 2D gel electrophoresis, immunoblotting, enzyme activity assa and protein microarrays. Sample size: 3-5x106or 25-50 mg tissue. Catalogue Number 539790 Brand Family Calbiochem? Synonyms S-PEK Kit Features and benefits ?Stepwise extraction resulting in four distinct subcellular proteomes from one sample ?Highly reproducible ?No ultracentrifugation steps ?Fast—needs just 2 hours with 45 minutes hands-on time ?Produces proteins suitable for functional studies
细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 产品简介： 碧云天的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便地从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白。 本试剂盒通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。 约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。 膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。 本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。 保存条件： -20℃保存，一年有效。 注意事项： 需自备PMSF。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。 PMSF(ST506)可以向碧云天订购。 使用本试剂盒抽提到的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA法蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。抽提获得的细胞膜蛋白不适合用Bradford法测定蛋白浓度。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1.准备试剂：室温融解并混匀膜蛋白抽提试剂A和B，融解后立即置于冰浴上。取适量的膜蛋白抽提试剂A和B备用，在 使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 2.准备细胞或组织样品： a. 对于细胞 (1) 收集细胞 对于贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。 对于悬浮细胞：培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。 (2) 洗涤细胞：用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5分钟沉淀 细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。 (3) 细胞预处理：把1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞中，轻轻并充分悬浮细胞， 冰浴放置10-15分钟。 b. 对于组织： 取约100毫克组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15分钟。注：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。
E.Z.N.A.?质粒小提试剂盒操作规程（英文版译文） （适用于No. D6942, D6943 & D6944） 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的1-5ml的LB培养基进行培养。37℃强力摇动（~300rpm）孵育12-16h。使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml细菌室温10,000 x g离心1min。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。 4. 加入250μl溶液II，倒置、转动试管数次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。可能需要孵育2min。不要用力混合，以免使染色体DNA断裂，减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min。溶液II不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl溶液III，立即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。为避免形成局部沉淀，加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g离心10分钟。白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼 ．．．．的吸取上清液，加入装配在2ml收集管中的小量纯化柱I中。确保离心沉淀未受扰动，确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g离心1分钟，使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液，重新使用2ml收集管；加入500μl HB缓冲液清洗柱子，室温10,000 x g离心1分钟，使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除，以保证获得高品质的DNA以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液，重新使用2ml收集管；加入700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液清洗柱子，室温10,000 x g离心1分钟，使溶液完全通过柱子，丢弃滤过液。 注意：DNA清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释（5倍稀释），如果DNA清洗液稀释液经过冷藏，则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤：重复清洗，加入另外的700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g离心2min，使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作，不可遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml微量离心管中。将30-50μl（取决于终产物的期望浓度）洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上，使之于室温下静置1-2min。≥13,000 x g离心1min洗脱DNA。可以进行二次洗脱，以收集残存的DNA。 13. DNA的产量和质量：分别在波长260nm和280nm处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA的浓度计算如下： DNA浓度=A260×50×（稀释倍数）μg/ml A260/A280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者，DNA的产量（及质量）有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA是超螺旋单体形式，但也可能存在串联体形式。 张小强翻译
全蛋白提取试剂盒 Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit 产品编号：C510003 包装规格：50 Assays 产品简介 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer 匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。获得的全蛋白可 用于Western Blot 、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down 和EMSA 等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀 的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107 个培养细胞或200 mg 动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以 使用50次。 产品特点 1. 提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性 2. 整个操作过程只需要30分钟左右 3. 即可以用于培养细胞（50x107 个），有可以用于动物组织（50x200 mg ）蛋白质的提取 4. 避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性 5. 不需要超速度离心，可以同时处理多个样品 运输和保存条件 常温运输，收到后请将磷酸酶抑制剂，蛋白酶抑制剂和PMSF 于 -20℃保存，其余2-8℃保存，保质期一年。 试剂盒组成 成分 C510003 Lysis buffer 50 mL 蛋白酶抑制剂 50 μL 磷酸酶抑制剂 250 μL PMSF 500 μL 操作步骤 A. 实体组织蛋白的提取 1. 在每1 mL 预冷的Lysis Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂,1 μL 蛋白酶抑制剂和10 μL PMSF 混匀。冰上保存数分钟待用。 2. 将100-200 mg 固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3 mm ×3 mm 左右的小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用PBS 洗涤两次，离心取沉淀后加入0.5～1 mL 上述配制好的预冷的Lysis Buffer ，4℃玻璃匀浆器上下手动匀浆15-30次。或超声破碎细胞，每次30s ， 3～4次，每次间隔1 min ，置于冰上冷却。均质匀浆或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％，同时没有明显的组织小块。 3. 取组织匀浆液转移到1.5 mL 预冷的离心管，冰上放置10 min 左右, 期间取出剧烈震荡2-3次； 4. 15000 g （13000 rpm)，4℃离心10 min ，取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，进行蛋白定量和其他蛋白质相关实验。 5. 分装保存于-70℃，避免反复冻融。 s a n g o n b i o t e c h
微量临床样品基因组DNA快速提取试剂盒 目录号：DN25 目录编号包装单位 DN2501 50次 适用范围： 适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签等微量样品中分离纯化基因组DNA。 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次 裂解液ML 室温11 ml 结合液CB 室温15 ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 漂洗液WB 室温15ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Poly Carrier -20℃200 μl 洗脱缓冲液EB 室温10 ml 蛋白酶K粉（可选） 20mg/ml -20℃20 mg 吸附柱AC和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果储存事项：
1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分 钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后， 加入1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。 3.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。仔细阅读注意事项4。 4. 产品介绍： 本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA 从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。 产品特点： 1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。 3.配备了Poly Carrier用于充分收集特别微量DNA。 4.多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规 操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
全蛋白提取试剂盒（中） 货号：BC3711 规格：50T/100T 有效期：至少1年。 产品组成： 名称50T100T Storage 裂解液（中）50ml100ml2-8℃ 磷酸酶抑制剂（100×）0.5ml1ml -20℃ 蛋白酶抑制剂（100×）0.5ml1ml PMSF（100×）0.5ml1ml 产品说明： 本试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为温和，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。 操作方法： 1、组织总蛋白的提取 1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF；混匀，放置在冰上备用； 2)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入 0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作； 3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4℃12000g离心30min； 4)吸取上清至新的管中； 5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。） 2、细胞总蛋白的提取 1)裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml； 2)贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液；在冰上用细胞
刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min。 3)悬浮细胞：4℃400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s， 放置冰上裂解10min，重复3-4次； 4)裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min； 5)将上清移入新的EP管中；进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。） 注意事项： 1.实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境。 2.PSMF（有毒）现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解。
1.加2g土壤到15mL Bead Tube中 2.加入0.25mLSR1和0.8mLSR2之后，加入2.5mL Bead Solution到Bead Tube 3.加入3.5mL酚：氯仿：异戊醇25:24:1到试管中，加盖后涡旋混合直到分层消失。 4.最大转速涡旋震荡15min 5.室温，2500g离心10min 6.取出后，小心地转移上层水相到干净的15mL收集管中，弃掉下层酚 7.加1.5mL SR3到水相中，然后涡旋混匀，4℃孵育10min 8.室温，2500g离心10min。转移上清到一个新的15mL收集管中 9.加入5mL SR4溶液到装有上清的收集管中，混匀，室温孵育30min 10.室温，2500g离心30min 11.倒掉上清，将收集管倒置在纸上5min 12.震荡SR5混合。加1mL SR5到15mL收集管中，并反复吹打使完全重悬。 13.为每一个RNA样品准备一个RNA Capture Column A．拿去15mL收集管的盖子，将RNA Capture Column放入15mL收集管中。 B．加2mL SR5到RNA Capture Column中，让其完全流尽。 14.从第12步加入RNA样品至RNA Capture Column中，然后让其在重力作用下流尽。收集 液体。 15.用1mLSR5清洗柱子。重力流尽，收集洗脱液。 16.转移柱子到新的收集管，加入SR6震荡混合，然后加入1mL SR6到RNA Capture Column 洗脱RNA到15mL收集管中，重力流尽。 17.转移洗脱的RNA到2.2mL收集管中，并且加入1mL SR4.颠倒至少一次混合，然后-20℃ 孵育最少10min 18.室温13000g离心15min浓缩RNA 19.倒掉上清并倒转收集管在纸上10min晾干 20.用100μL SR7溶液重悬RNA沉淀，去除其中的基因组
双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒使用说明 货号:PC0040 产品简介: 样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。 形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度强碱性溶液中，双缩脲与CuSO 4 成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。该方法测定范围为1~10mg蛋白质，适用于蛋白质浓度高的样品，尤其是动物材料。 自备仪器和用品: 可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1瓶，5mg/mL，4℃保存。 样品中可溶性蛋白质提取: 1.液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。 2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取 约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释） 3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比 例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定步骤: 1.分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。 2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂一，混匀后 室温静置15min，于540nm比色，记为A空白管。 3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL标准液，1000μL试剂一，混匀后 室温静置15min，于540nm比色，记为A标准管。 4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL待测液，1000μL试剂一，混匀后 室温静置15min，于540nm比色，记为A测定管。 样品中蛋白质浓度计算： C待测（mg/mL）=C标准管×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) =5×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) 注意事项： 1.样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml 须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验，确保蛋白浓度在1~10mg/ml范围内。 2.待测样品蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸 铵、Tris缓冲液干扰，提取液中应不含这些物质；否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。
1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）加入500 μL的平衡液BL, 12000 rpm（~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子） 2.取5-15ml 过夜培养的菌液加入离心管中，12000 rpm (~13400g ）离心1 min，尽量吸 除上清。 注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。 3.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μL溶液Pl （请先检查是否已加入RNaseA ) ，使 用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。 注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。质粒 4.向离心管中加入500μL溶液P2 ，温和地上下翻转6-8 次使菌体充分裂解。注意：温和 地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA 。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。 5.向离心管中加入700 μL溶液P3 ，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀，此时会出 现白色絮状沉淀。12000rpm ( ~13400g ）离心10 min，此时在离心管底部形成沉淀。 注意：P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。 6.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs （过滤柱放入收集管中）, 12000rpm （~13400g ）离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）, （如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5 吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。 7.12000rpm (~13400g）离心l min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。 8.向吸附柱CP4 中加入500μL去蛋白液PD，12000rpm（~13400g）离心l min，倒掉收 集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。 9.向吸附柱CP4 中加入600μL漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm （~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。注意：加入漂洗液PW后，如果室温静置2-5 min，有助于更好地去除杂质。 10.向吸附柱CP4 中加入600μL漂洗液PW , 12000rpm（13400g）离心l min，倒掉收集管 中的废液。 11.将吸附柱CP4 重新放回收集管中置于12000rpm（~13400g ）离心2 min，目的是将吸 附柱中残余的漂洗液去除。 注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP4 开盖，置于室温放置数min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 12.将吸附柱自科置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300μL洗脱 缓冲液TB ，室温放置2 min，12000rpm（~13400g ）离心l min将质粒溶液收集到离心管中。 注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中．重复步骤 12 。洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH 值在 7.0-8.5 范围内（可以用NaOH 将水的pH 值调到此范围）, pH 值低于7.0 会降低洗脱 效率。洗脱缓冲液体积不应少于100μL，体积过小影响回收效率。且DNA产物应保存