甲型肝炎病毒IgM检测ELISA法作业指导书
原理
本法是用抗人μ链捕获待测血清中特异性IgM，然后用HA V 与特异性—IgM抗体反应，再加酶标记抗M抗体，最后加底物显色。
标本采集
采集前病人准备：受检者应空腹。
标本种类：血清或血浆。
标本要求：采集病人静脉血2ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
标本运输：密封，室温运输。
标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
试剂
6.1 试剂名称：抗HA V—IgM检测ELISA试剂盒
6.2 试剂生产厂家：郑州博赛生物技术研究所
6.3 包装规格：48Test/Kit
6.4 试剂盒组成：
包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴
性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
仪器设备
仪器名称：自动酶标仪
仪器厂家：KHB
仪器型号：ST360
操作步骤
平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100(l，空下四孔准备加对照。
加标本和留空白：将每份待检标本各5(l分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。加对照：在预先空下的四孔中用加样器分别加入阴性对照一孔，阳性对照三孔，每孔100(l，标好位置。对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。
温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育20分钟。洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应
保持30-60秒的浸泡时间）。
加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体100(l，轻拍混匀。8.10 温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。
8.11 洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.12 显色：每孔加入底物A、B各50(l，轻拍混匀，置37℃暗处10分钟。
8.13 终止：每孔加终止液50(l，混匀。
8.14 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9. 结果判断与分析
9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值＝阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2 结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为阳性
样品OD值S/C.O<1者为阴性
10. 质量控制：每次均应有阴阳对照，其OD值应在要求范围内。
参考值范围：阴性
12. 临床意义：血清中抗HA V-IgM在亚临床期即已出现，其
滴度在感染后3个月维持在1000以上，已被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。
13. 操作性能：特异性强，灵敏度高，重复性好。
14. 方法局限性
15. 注意事项
15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4 所有样品都应按传染源处理。
15.5 封口膜使用说明
15.5.1 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）410页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。