硫酸铵溶液饱和度计算表
注：本表为室温（25℃）下数据，该温度下饱和硫酸铵的浓度为4.1mol/L,即将761g硫酸铵溶于1L水中。同时鉴于4-25℃之间数据没有明显变化，所以表中数据也可用于4℃。饱和溶液加入法是指将预先调好PH的饱和硫酸铵溶液逐步加至相应的蛋白质溶液中，使其达到一定的硫酸铵浓度（或饱和度），令蛋白质沉淀下来。不同饱和度所需要加入的饱和硫酸铵的量可以用如下公式计算：V=V0 (S2—S1)/(100—S2) 其中v为应加入饱和硫酸铵溶液的体积，V0 是蛋白质溶液的原始体积，S2是所要达到的硫酸铵饱和度，S1 原来溶液的硫酸铵饱和度。
在0℃硫酸铵终浓度，% 饱和度 硫酸铵初浓度，％饱和度 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 每100ml 溶液加固体硫酸铵的克数 0 10.6 13.4 16.4 19.4 22.6 25.8 29.1 32.6 36.1 39.8 43.6 47.6 51.6 55.9 60.3 65.0 69.7 5 7.9 10.8 13.7 16.6 19.7 22.9 26.2 29.6 33.1 36.8 40.5 44.4 48.4 52.6 57.0 61.5 66.2 10 5.3 8.1 10.9 13.9 16.9 20.0 23.3 26.6 30.1 33.7 37.4 41.2 45.2 49.3 53.6 58.1 62.7 15 2.6 5.4 8.2 11.1 14.1 17.2 20.4 23.7 27.1 30.6 34.3 38.1 42.0 46.0 50.3 54.7 59.2 20 0 2.7 5.5 8.3 11.3 14.3 17.5 20.7 24.1 27.6 31.2 34.9 38.7 42.7 46.9 51.2 55.7 25 0 2.7 5.6 8.4 11.5 14.6 17.9 21.1 24.5 28.0 31.7 35.5 39.5 43.6 47.8 52.2 30 0 2.8 5.6 8.6 11.7 14.8 18.1 21.4 24.9 28.5 32.3 36.2 40.2 44.5 48.8 35 0 2.8 5.7 8.7 11.8 15.1 18.4 21.8 25.4 29.1 32.9 36.9 41.0 45.3 40 0 2.9 5.8 8.9 12.0 15.3 18.7 22.2 25.8 29.6 33.5 37.6 41.8 45 0 2.9 5.9 9.0 12.3 15.6 19.0 22.6 26.3 30.2 34.2 38.3 50 0 3.0 6.0 9.2 12.5 15.9 19.4 23.0 26.8 30.8 34.8 55 0 3.0 6.1 9.3 12.7 16.1 19.7 23.5 27.3 31.3 60 0 3.1 6.2 9.5 12.9 16.4 20.1 23.1 27.9 65 0 3.1 6.3 9.7 13.2 16.8 20.5 24.4 70 0 3.2 6.5 9.9 13.4 17.1 20.9 75 0 3/2 6.6 10.1 13.7 17.4 80 0 3.3 6.7 10.3 13.9 85 0 3.4 6.8 10.5 90 0 3.4 7.0 95 0 3.5 100 0
甲醇-醋酸-水(35：4：61)取醋酸4ml，甲醇35ml，加入水61ml中，混匀，即得。本液应临用新制。 甲醇-水-磷酸(47：53：0.2)取磷酸0.2ml、甲醇47ml，加入水53ml中，混匀，即得。本液应临用新制。 甲醇-0.2mol/L醋酸溶液-冰醋酸(67：33：1)取 3.3ml的醋酸加水至100ml，混匀；取冰醋酸1ml，甲醇67ml，加入上述醋酸溶液33ml中，混匀，即得。 甲醇-水(85：15)或(3：7)取甲醇85ml或3ml，分别加入水15ml或7ml 中，混匀，即得。本液贮存于具塞玻璃瓶中，密塞保存。 甲醇-0.1%磷酸溶液(85：15)取磷酸0.1ml加入水100ml中，混匀，取上述磷酸溶液15ml加入甲醇85ml中，混匀，即得。本液应临用新制。 0.025%甲基红乙醇溶液取甲基红0.025g，加入乙醇使溶解成100ml，即得。本液贮存于具塞玻璃瓶中，密塞保存。 0.01mol/L、0.02mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液 取0.01mol/L、0.02mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L、1mol/L氢氧化钠滴定液 2.5mol/L氢氧化钠溶液取澄清的氢氧化钠饱和溶液14ml加入水使成100ml，混匀，即得。本液应贮存于密闭的聚乙烯塑料瓶中。 0.4%、0.5%、1%、2%、4%、20%、40%氢氧化钠溶液取氢氧化钠0.4g、0.5g、1g、2g、4g、20g、40g分别加入水使溶解成100ml，混匀，即得。本液应贮存于密闭的聚乙烯塑料瓶中，或临用新制。 4→10氢氧化钠溶液取氢氧化钠40g，加入水使溶解成100ml，混匀，即得。本液均应贮存于密闭的聚乙烯塑料瓶中。 1→5氢氧化钠溶液取4→10氢氧化钠溶液稀释，即得。 2mol/L氢氧化钾溶液取氢氧化钾11.2g，加水使溶解成100ml，即得，本液应贮存于密闭的聚乙烯塑料瓶中。 1→10氢氧化钾溶液取氢氧化钾10g，加水使溶解成100ml，即得。本液应贮存于密闭的聚乙烯塑料瓶中。 0.01mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L、0.2mol/L盐酸液取0.01mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L、0.2mol/L盐酸滴定液(检验标准操作规程附录ZT-TS-02-04-042-01)。 1→2盐酸溶液取盐酸50ml，加入水中，使成100ml，混匀，即得。 1→4盐酸溶液取1→2盐酸溶液稀释，即得。 1→40盐酸溶液取1→4盐酸溶液稀释，即得。 4→10盐酸溶液取盐酸40ml，加入水中使成100ml，混匀，即得。
一，基本原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 二，试剂及仪器 1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等 2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 4 3. 饱和硫酸铵溶液（SAS ） 4. 蒸馏水 5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠) 6. 透析袋 7. 超速离心机 8. pH 计 9. 磁力搅拌器 三，操作步骤 以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% — 50% 。 （一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ） 1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 ° C ）. 2.其它不同饱和度铵溶液的配制 （二）沉淀 1.样品（如腹水）20 000 ′ g 离心30 min ，除去细胞碎片； 2.保留上清液并测量体积； 3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （
4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 ° C ），使蛋白质充分沉淀。（三）透析 1.蛋白质溶液10 000 ′ g 离心30 min （4 ° C ）。弃上清保留沉淀； 2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 ° C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。 四，应用提示 （一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1.边搅拌边慢慢加SAS 到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v) ； 2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或过夜（4 ° C ）； 3.3000 ′ g 离心30 min （4 ° C ），保留上清液；上清液再加SAS 到0.5:1(v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 4.上清液再加SAS 到0.5:1 (v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效（二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1 ）；硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。 今天作的实验是利用硫酸铵沉淀蛋白质，从之前作过的经验知道，这一个步骤是有名的烦，要慢慢用敲的把硫酸铵缓缓的加入蛋白质溶液中。 相关的原理可以在庄荣辉学习网站中找到，与盐溶刚好相反，在蛋白质溶液中加入硫酸铵，会使得蛋白质的溶解度下降，因而沉淀出来。因为硫酸铵所解离的离子容很大，所带的电子数也多(NH4+, SO42-)，因此当其溶入水中时，会吸引大量水分子与这些离子水合。 蛋白质分子表面多少有一些较不具极性的区域，水分子会在这些非极性区的表面聚集，形成类似『水笼』的构造(请见下图)，以便把蛋白质溶入水中。一旦蛋白质溶液加入硫酸铵，后者吸引了大量水分子，使水笼无法有效隔离蛋白质的非极性区，造成这些非极性区之间的吸引，因而沉淀下来。因此，分子表面上若有越多的非极性区域，就越容易用硫酸铵沉淀下来。 在计算所添加的硫酸铵的重量方面，找到了一个不错的网站——硫酸铵计算机 这个网页上可以靠着输入实验温度、溶液体积、想要到达的百分浓度以及初始的百分浓度这四个数值，就可以得到需要添加的硫酸铵克数，以及在加入固体硫酸铵后所增加的体积，算是一个很不错的网站。 此外另一个比较值得提的，是我有用两种方式加入硫酸铵，第一种是固体的硫酸铵模碎加入，另一种是将硫酸铵溶成饱和溶液再加入，各有各的优缺点，比较如下： 1.造成蛋白质变质的程度：固体的硫酸铵>硫酸铵饱和溶液 利用硫酸铵饱和溶液真的超棒，滴入的速度可以很快而不造成变质(没试过用倒入的)。不像固体的硫酸铵只能磨碎慢慢加入，速度一快蛋白质就坏了(溶液有致密的白色气泡产生)。 2.操作的容易度：硫酸铵饱和溶液>>固体的硫酸铵 固体硫酸铵最大的缺点就是操作不容易，要一直敲敲敲又不能太快，所以当你要溶解的蛋白质很多时，这是很累的步骤。然而硫酸铵饱和溶液比较麻烦只有在配制部分，要先加热让它饱合后，回到操作温度让它过饱和，最后用滤纸把硫酸铵结晶去掉。
附表一 1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃） 在0℃硫酸铵终浓度，% 饱和度 硫酸铵初浓度，％饱和度 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 每100ml 溶液加固体硫酸铵的克数 0 10.6 13.4 16.4 19. 4 22.6 25. 8 29. 1 32.6 36. 1 39.8 43. 6 47.6 51. 6 55. 9 60.3 65. 69.7 5 7.9 10.8 13.7 16. 6 19.7 22. 9 26. 2 29.6 33. 1 36.8 40. 5 44. 4 48. 4 52. 6 57.0 61. 5 66.2 10 5.3 8.1 10.9 13. 9 16.9 20. 23. 3 26.6 30. 1 33.7 37.4 41. 2 45. 2 49. 3 53.6 58. 1 62.7 15 2.6 5.4 8.2 11. 1 14.1 17.2 20. 4 23.7 27.1 30.6 34. 3 38. 1 42. 46. 50.3 54. 7 59.2 20 0 2.7 5.5 8.3 11.3 14. 3 17.5 20.7 24. 1 27.6 31. 2 34. 9 38.7 42. 7 46.9 51. 2 55.7 25 0 2.7 5.6 8.4 11. 5 14. 6 17.9 21. 1 24.5 28. 31. 7 35. 5 39. 5 43.6 47.8 52.2 30 0 2.8 5.6 8.6 11. 7 14.8 18. 1 21.4 24. 9 28. 5 32. 3 36. 2 40.2 44. 5 48.8 35 0 2.8 5.7 8.7 11.8 15. 1 18.4 21. 8 25. 4 29. 1 32. 9 36.9 41. 45.3 40 0 2.9 5.8 8.9 12. 15.3 18. 7 22. 2 25. 8 29. 6 33.5 37.6 41.8 45 0 2.9 5.9 9.0 12.3 15. 6 19. 22. 6 26. 3 30.2 34. 2 38.3 50 0 3.0 6.0 9.2 12. 5 15. 9 19. 4 23. 26.8 30. 8 34.8 55 0 3.0 6.1 9.3 12. 7 16. 1 19. 7 23.5 27.3 31.3 60 0 3.1 6.2 9.5 12. 9 16. 4 20.1 23. 1 27.9 65 0 3.1 6.3 9.7 13. 2 16.8 20. 5 24.4 70 0 3.2 6.5 9.9 13.4 17.1 20.9 75 0 3/2 6.6 10.1 13. 7 17.4 80 0 3.3 6.7 10. 3 13.9
向饱和硫酸铵溶液中加入鸡蛋清，产生白色絮状沉淀是蛋白质变性吗？不是，是蛋白质的溶解度降低，从水中析出 硫酸铵是轻金属盐，只有重金属盐（如硫酸铅、硫酸铜等）才会使蛋白质变性，使蛋白质变性还有其他情况：1、加热。2、强酸。3、强碱。4、紫外线。5、福尔马林等有机物。6、重金属盐 胶体的“盐析”：加盐而使胶粒的溶解度降低，形成沉底析出的过程，是胶体的聚沉现象的一种如向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4 或Na2SO4]溶液后，可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种作用就叫做盐析。这样析出的蛋白质仍可以溶解在水中，而不影响原来蛋白质的性质。因此，盐析是一个可逆的过程。利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质。 盐析是什麽变化？ 盐析 1.盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使溶解的物质析出的过程。如：加浓（NH4）2SO4使蛋白质凝聚的过程。 2.向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析。 3.把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。（该反应用以制肥皂） 原理 :蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 答案补充 显然是物理变化啊没有生成新物质
硫酸铵饱和度的常用表1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）
2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃） 3．不同温度下饱和硫酸铵溶液的数据
聚丙烯酰胺凝胶的配制 表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 溶液成分 不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml） 5 10 15 20 25 30 40 50 6% 水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺溶液 1 2 3 4 5 6 8 10 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02 0.024 0.032 0.04 8% 水 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.2 30%丙烯酰胺溶液 1.3 2.7 4 5.3 6.7 8 10.7 13.3 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.015 0.018 0.024 0.03 10% 水 1.9 4 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%丙烯酰胺溶液 1.7 3.3 5 6.7 8.3 10 13.3 16.7 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 12% 水 1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%丙烯酰胺溶液 2 4 6 8 10 12 16 20 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02
硫酸铵沉淀： 有生物活性的蛋白一般在做硫胺沉淀的时候要小心一点。最保险的做法是，把硫酸铵配成饱和溶液，把蛋白溶液置于冰浴上，再把饱和硫胺溶液一滴一滴的加到你的蛋白溶液中，最好边加边搅拌，避免局部硫胺浓度过高，但搅拌的时候注意不要搅出气泡。按照你的比例加完之后，最好放冰箱静置至少2h，充分沉淀后离心即可。 4M的硫酸铵pH值为，在这个酸度下可能会有一些蛋白质变性，要小心。硫酸铵会破坏蛋白质水化层，最好是缓和地加入。边加入边搅拌，如果在磁力搅拌器上搅拌，小漩涡中心有很多泡沫就表示蛋白质变性，使得溶液粘度增加，泡沫难破，那就很难保证你的蛋白质有没有变性了。 溶解度，在一定温度下，某固态物质在100g溶剂中达到饱和状态时所溶解的质量，叫做这种物质在这种溶剂中的溶解度。固体的溶解度是指在一定的温度下，某物质在100克里达到饱和状态时所的克数，用字母s表示，其单位是“g/100g水”。在未注明的情况下，通常溶解度指的是物质在水里的溶解度。 溶液饱和度(化学) 某种溶液的饱和度是指在100g该溶液中溶质在溶液中所占质量分数.一般情况下，一种溶液的饱和度在同一温度下不会变.要想使不饱和溶液饱和度增加可以选择增加溶质.在刚好有晶体析出的时候就是溶液刚好饱和的时候.溶液饱和度不会出现100%
加固体比较好，加得越慢越好。如果加快了，会造成局部浓度过大，造成意想不到的沉淀。 硫酸铵沉淀的时候应该要注意pH值的变化，就我的实验来说，一株产淀粉酶曲霉固态发酵之后用超纯水浸泡离心，得到含有酶的上清液的pH值为，但是淀粉酶能耐受，为了去除更多杂质蛋白质，我把硫酸铵浓度调节到2摩尔每升的同时会控制pH值为，4度过夜之后离心取上清液再调节到pH值，4度放置，离心，又去除一部分杂质蛋白质，上清液直接用的疏水层析系统来纯化。 一个纤维素酶的纯化我也用类似的方法，只不过第一步是用。 硫酸铵是酸式盐，2M时pH值约为5，4M时更低，用来沉淀蛋白质的时候情况就更复杂了，所以最好知道自己需要的蛋白质的耐受情况，不要搞死了。 透析之前要选用一个不影响自己想要的蛋白质的pH值，硫酸铵沉淀和透析都要保持一致，才能使损失减少。透析时候产生的沉淀不知道是不是你想要的蛋白质，不过下次做最好谨慎一点，做我说过的预备实验。 分段盐析的方法
饱和硫酸铵溶液的配制 ①在25℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。1．?2．?调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃） ①在0℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。 25℃下100%硫酸铵是1L水中约加780g硫酸铵。可以在加进去之后，用微波炉加热到溶解为止，然后放置在过夜，第二天就会有晶体析出，这就可以了。 双蒸水中加入过量硫酸铵，热至50－60度保温数分钟，趁热滤出沉淀，在0度或25度平衡1－2天，有固体析出时即达100％饱和度，以氨水调节PH值至7.0。 硫酸铵在水中的溶解度，100度时为1.034g/ml，0度时为0.706g/ml 。因此，每100ml 蒸馏水加90gAR级结晶硫酸铵，80度溶解，趁热过滤，降至室温后即有结晶析出，应任其留存瓶中，使用前吸出所需的量，用28%的氨水调PH至7.2即可。结晶（要留着，随着温度变化，溶解度也会变化，你总要保证溶液中是饱和的，所以结晶留在瓶底，不需要再过滤，使用时取上面的溶液即可。pH7.0或7.2影响不大，也有调到7.4的，因为最后沉淀的蛋白一般都是用PBS稀释的。） 最方便的就是500ml水加半瓶250g硫酸铵剧烈搅拌，上层澄清的就是饱和的了。 另外较快达到饱和状态的方法是，将过量的硫酸铵（参考不同温度下的溶解大多数，或干脆多加点）放在水浴箱内高温溶解，取出致室温放置至其平衡（会有硫酸铵重新析出），上清即为室温下的饱和硫酸铵 先将硫酸氨80克溶解到100水中，加热到80左右，溶解部分过滤，其余的再溶，仍有一部分结晶，过滤的溶液当降到室温的时候就会有结晶，平衡一两天，取上清用同时氨水调节PH值用。 硫酸铵沉淀主要分为两种形式： 1.将事先配好的饱和硫酸铵溶液加入目标溶液中，这种方法精确度高，硫酸铵是弱酸性的，事先调好pH后，再补入溶液中pH变化小，适合于对pH敏感的蛋白（酶类）或要求比较高的实验。 2.直接将固体硫酸铵补入目标溶液中，这种方法比较快速，但是加入后溶液pH值会有一定程度的降低，适合于对pH不敏感的蛋白，这种操作应该能满足一般实验的要求。
1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃） 在0℃硫酸铵终浓度，% 饱和度 硫酸铵初浓度，％饱和度 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 每100ml 溶液加固体硫酸铵的克数 0 10.6 13.4 16.4 19. 4 22.6 25. 8 29. 1 32.6 36. 1 39. 8 43. 6 47.6 51.6 55. 9 60.3 65. 69.7 5 7.9 10.8 13.7 16. 6 19.7 22. 9 26. 2 29.6 33. 1 36. 8 40. 5 44. 4 48.4 52. 6 57.0 61. 5 66.2 10 5.3 8.1 10.9 13. 9 16.9 20. 23. 3 26.6 30. 1 33.7 37.4 41. 2 45.2 49. 3 53.6 58. 1 62.7 15 2.6 5.4 8.2 11. 1 14.1 17.2 20. 4 23.7 27.1 30. 6 34. 3 38. 1 42.0 46. 50.3 54. 7 59.2 20 0 2.7 5.5 8.3 11.3 14. 3 17.5 20.7 24. 1 27.6 31. 2 34. 9 38.7 42. 7 46.9 51. 2 55.7 25 0 2.7 5.6 8.4 11. 5 14. 6 17.9 21. 1 24.5 28. 31. 7 35.5 39. 5 43.6 47.8 52.2 30 0 2.8 5.6 8.6 11. 7 14.8 18. 1 21. 4 24. 9 28. 5 32.3 36. 2 40.2 44. 5 48.8 35 0 2.8 5.7 8.7 11.8 15. 1 18. 4 21. 8 25. 4 29.1 32. 9 36.9 41. 45.3 40 0 2.9 5.8 8.9 12. 15. 3 18. 7 22. 2 25.8 29. 6 33.5 37.6 41.8 45 0 2.9 5.9 9.0 12. 3 15. 6 19. 22.6 26. 3 30.2 34. 2 38.3 50 0 3.0 6.0 9.2 12. 5 15. 9 19.4 23. 26.8 30. 8 34.8 55 0 3.0 6.1 9.3 12. 7 16.1 19. 7 23.5 27.3 31.3 60 0 3.1 6.2 9.5 12.9 16. 4 20.1 23. 1 27.9 65 0 3.1 6.3 9.7 13. 2 16.8 20. 5 24.4 70 0 3.2 6.5 9.9 13.4 17.1 20.9 75 0 3/2 6.6 10.1 13. 7 17.4 80 0 3.3 6.7 10. 3 13.9 85 0 3.4 6.8 10.5 90 0 3.4 7.0
117 附录五 硫酸铵饱和度的常用表 １．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（２５℃） 硫 酸 铵 终 浓 度 ， % 饱 和 度 10 20 25 30 33 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 90 100 每1升溶液加固体硫酸铵的克数 ① 0 56 114 144 176 196 209 243 277 313 351 390 430 472 516 561 662 767 10 57 86 118 137 150 183 216 251 288 326 365 406 449 494 592 694 20 29 59 78 91 123 155 189 225 262 300 340 382 424 520 619 25 30 49 61 93 125 158 193 230 267 307 348 390 485 583 30 19 30 62 94 127 162 198 235 273 314 356 449 546 33 12 43 74 107 142 177 214 252 292 333 426 522 35 31 63 94 129 164 200 238 278 319 411 506 40 31 63 97 132 168 205 245 285 375 469 45 32 65 99 134 171 210 250 339 431 50 33 66 101 137 176 214 302 392 55 33 67 103 141 179 264 353 60 34 69 105 143 227 314 65 34 70 107 190 275 70 35 72 153 237 75 36 115 198 80 77 157 硫 酸 铵 初 浓 度 ， % 饱 和 度 90 79 ○ 1在25℃下硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
饱和硫酸铵纯化血清中抗体 1实验原理 此方法可以将主要的免疫球蛋白从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 2实验试剂与器材 2.1实验试剂：硫酸铵、氨水、盐酸、1XPBS溶液（PH7.4）、2% NaHCO3 、 1mmol/LEDTA(PH8.0)、1mol/LNaOH、氯化钡、蒸馏水 2.2实验器材：磁力搅拌器、低温离心机、4℃冰箱、PH计、离心管、锥形瓶、 搅拌棒、量筒、烧杯、漏斗、移液器、电磁炉、铝锅、剪刀、试剂瓶、透析袋夹子 2.3样品抗血清 3实验步骤 3.1配制溶液 3.1.1 配制饱和硫酸铵溶液，25℃时饱和溶解度是767g/L，0℃时为676g/L(见附表)。配制1000ml饱和硫酸铵，将800g左右的硫酸铵加入到1L水中，加热搅拌到大部分固体溶解，趁热过滤并室温冷却，仍会有晶体析出，再用氨水调节PH 至8.5，4℃保存备用（可以根据所需量按比例调整所配溶液量）。 3.1.2 配制1XPBS溶液（PH7.4） 取1.44gNa2HPO4（或3.63gNaHPO4.12H2O），0.24gKH2PO4，8gNaCl，0.2gKCl，加入800ml水中，用盐酸调PH至7.4，补蒸馏水至1000ml，高压蒸汽灭菌。4℃保存。 3.1.3 配制2% NaHCO3，2g NaHCO3加入到100ml蒸馏水中。 3.1.4 配制1mol/LNaOH，4gNaOH慢慢加入80ml蒸馏水中，边加入边搅拌，完全溶解后定容至100ml，室温保存，无需除菌。注意放热反应，塑料烧杯储存。
用Aspen估算的饱和硫酸铵溶液各热力学参数 溶液温度溶质饱和 百分含量 泡点粘度表面张力焓密度 /℃W/% /℃/cP dyne/cm kJ/kg kg/cum 10 0.42053 106.9248 1.570693 82.06593 -12953 1256.405 12 0.422191 106.9248 1.516371 81.74553 -12936 1257.378 14 0.423872 106.9248 1.464704 81.42701 -12920 1258.301 16 0.425572 106.9248 1.415532 81.11028 -12903 1259.175 18 0.42729 106.9248 1.368704 80.7953 -12886 1260.002 20 0.429024 106.9248 1.324081 80.48201 -12869 1260.785 22 0.430773 106.9248 1.281534 80.17035 -12852 1261.525 24 0.432536 106.9248 1.240943 79.86025 -12835 1262.223 26 0.434311 106.9248 1.202195 79.55167 -12818 1262.881 28 0.436099 106.9248 1.165185 79.24455 -12801 1263.501 30 0.437898 106.9248 1.129816 78.93883 -12783 1264.083 32 0.439708 106.9248 1.095998 78.63445 -12766 1264.628 34 0.441527 106.9248 1.063644 78.33137 -12749 1265.137 36 0.443372 106.9248 1.0327 78.02987 -12731 1265.624 38 0.445209 106.9248 1.003043 77.72923 -12713.8 1266.065 40 0.447054 106.9248 0.974627 77.42973 -12696.3 1266.472 42 0.448907 106.9248 0.947387 77.13132 -12678.7 1266.847 44 0.450768 106.9248 0.921263 76.83394 -12661.2 1267.19 46 0.452635 106.9248 0.896196 76.53756 -12643.6 1267.502 48 0.45451 106.9248 0.872133 76.24213 -12625.9 1267.782 50 0.45639 106.9248 0.849024 75.94759 -12608.3 1268.033 52 0.458277 106.9248 0.82682 75.6539 -12590.6 1268.254 54 0.460171 106.9248 0.805478 75.36102 -12572.8 1268.446 56 0.46207 106.9248 0.784954 75.06889 -12555.1 1268.61 58 0.463974 106.9248 0.765211 74.77748 -12537.3 1268.745 60 0.465885 106.9248 0.746209 74.48674 -12519.5 1268.853 62 0.467801 106.9248 0.727915 74.19662 -12501.7 1268.933 64 0.469723 106.9248 0.710294 73.90709 -12483.8 1268.987 66 0.47165 106.9248 0.693316 73.6181 -12465.9 1269.015 68 0.473583 106.9248 0.676951 73.32961 -12448 1269.017 70 0.475521 106.9248 0.661171 73.04158 -12430 1268.994 72 0.477465 106.9248 0.64595 72.75397 -12412.1 1268.946 74 0.479414 106.9248 0.631262 72.46674 -12394.1 1268.874 76 0.48137 106.9248 0.617085 72.17986 -12376 1268.778 78 0.483331 106.9248 0.603395 71.89327 -12358 1268.659 80 0.485298 106.9248 0.590173 71.60696 -12339.9 1268.516 82 0.487271 106.9248 0.577397 71.32088 -12321.7 1268.351 84 0.489251 106.9248 0.565048 71.03499 -12303.5 1268.164 86 0.491238 106.9248 0.55311 70.74927 -12285.3 1267.955
硫酸鞍饱和度旳吊酰胺凝胶的配制表
硫酸鞍饱和度的常用表1.调整硫酸鞍溶液饱和度计算衷(0-C) 在O'C硫酸镀终浓度，％饱和度
2.调整硫酸镀溶液饱和度计算表（25C）
聚丙烯酰胺凝胶的配制 表1配制Tris?甘低酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 6% 26. 水 2.6 5.37.9 10.6 13.2 15.9 21.2 5 30%丙烯酰 胺溶液123 4 568 10 1.5 mol/L1 2. Tris (pH&8) 1.3 2.5 3.8 5 6.37.510 5 10% SDS0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 10%过硫酸 氨0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 0.00 0.00 0.01 0.010.02 0.03 0.0 TEMED482 6 0.024 2 4 8% 23. 水 2.3 4.6 6.99.3 11.5 13.9 18.5 2 30%丙烯酰13.胺溶液 1.3 2.74 5.3 6.7810.7 3 1.5 mol/L1 2. Tris (pH&8) 1.3 2.5 3.8 5 6.37.510 5 10% SDS0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 10%过硫酸 氨0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 0.00 0.00 0.00 0.01 0.01 0.01 0.02 0.0 TEMED369 2 58 4 3 10% 19. 1.9 4 5.9 7.9 9.9 11.915.9 8
（四）抗原的分离与纯化 从细胞中提取出来的生物大分子是不纯净的，必须进一步分离纯化才能获得纯品。在生物大分子制备工作中，分离纯化是比较复杂和重要的一个环节。对于异类的物质，如提纯蛋白质和酶时混杂着核酸，提纯核酸时混杂着蛋白质或多糖，一般可用专一性酶水解、有机溶剂抽提、选择性分部沉淀等方法处理，小分子物质常在整个制备过程中多次液相与固相互相转化被分离或最后用透析方法除去。而对同类物质，如酶和杂蛋白，RNA和DNA以及不同结构的蛋白质、酶、核酸之间的分离，情况则复杂得多，主要应用的方法有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、吸附法、结晶法、电泳法、超速离心法、柱层析法等。其中盐析法、等电点法、结晶法用于蛋白、酶的提纯较多；有机溶剂抽提和沉淀用于核酸提纯较多；柱层析法、梯度离心法在蛋白质和核酸的提纯工作中应用均十分广泛。本节侧重对蛋白质、酶和核酸分离纯化中与溶解度有关的一些方法作一简要叙述。 1．蛋白质分离纯化的一些方法 （1）盐析法 ①原理：盐析法对于许多非电解质的分离纯化都是适合的，也是蛋白质和酶提纯工作应用最早，至今仍广泛使用的方法。其原理是蛋白质、酶在低盐浓度下的溶解质随着盐液浓度升高而增加（此时称为盐溶）；当盐浓度不断上升时，蛋白质和酶的溶解度又以不同程度下降并先后析出，称为蛋白质的盐析。这一现象是由于蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团有着静电引力，当水中加入少量盐类时，由于盐类离子与水分子对蛋白质分子上的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度增加到一定程度时，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质就相互聚集而沉淀析出。盐析法就根据不同蛋白质和酶在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。 ②盐的选择：蛋白质盐析常用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最广的是硫酸铵，其优点是温度系数小而溶解度大（25℃时饱和溶解度为4.1mol/L,即767g/L;0℃时饱和溶解度为3.9mol/L，即676g/L），在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来，而且硫酸铵价廉易得，分段效果比其他盐好，不容易引起蛋白质变性。应用硫酸铵时，对蛋白氮的测定有干扰，缓冲能力比较差，故有时也应用硫酸钠，如盐析免疫球蛋白，用硫酸钠的效果也不错，硫酸钠的缺点是30℃以上溶解度太低。其他的中性盐如磷酸钠的盐析作用比硫酸铵好，但也由于溶解度太低，受温度影响大，故应用不广。 硫酸铵浓溶液的pH在4.5～5.5之间，市售的硫酸铵常含有少量游离硫酸，pH值往往降至4.5以下，当用其他pH值进行盐析时，需用硫酸或氨水调节。 ③硫酸铵饱和度计算法及加入方式：在分段盐析时，加盐浓度一般以饱和度表示，饱和溶液的饱和度定为100%。用硫酸铵盐析时其溶液饱和度调整方法有3种。一是当蛋白质溶液体积不大，所需调整的浓度不高时，可加入饱和硫酸铵溶
饱和硫酸铵检测方法 一、饱和硫酸铵溶液配制: 1、按630mL水加入500g硫酸铵的比例； 2、加热溶解，使其达到饱和； 3、冷却到室温（不同温度的溶解度不同，温度降低后有结晶析出）； 4、单层滤纸过滤，备用。 注意：不同的室温溶液的溶解度也会有差异，所以试剂存于温度较恒定的仪器室。 二、操作步骤: 1、500mL三角瓶粗量250~300mL样酒； 2、超声波除气5min以上； 3、用量筒量取200mL除气后的酒样，倒入浊度杯； 4、放20℃水浴静置10min~15min； 5、放入浊度计，读取初始浊度值； 6、加入转子，放磁力搅拌器上，准备滴定； 三、滴定过程： 1、30mL饱和硫酸铵溶液一次性滴入，搅拌30sec； 2、测浊度，浊度小于等于初始浊度时，继续以5mL/次，搅拌20sec； 3、测浊度，浊度大于初始浊度0.05EBC时，继续以2mL/次，搅拌20sec； 4、测浊度，浊度到达1.5EBC时，继续以0.5mL/次，搅拌20sec； 5、滴定终点，浊度值为2EBC； 6、读数，并记录整个过程消耗的饱和硫酸铵溶液的量即为饱和硫酸铵值。
标准混浊液 一、仪器 容量瓶，100、50ml 具塞三角瓶，100ml 移液管，5、25ml 二、试剂 1、1%硫酸肼溶液 称取1.000g分析纯硫酸肼，溶于无混浊的蒸馏水，移入100ml 容量瓶中定容，放置4小时，使其充分溶解。 2、10%六次甲基四胺溶液 称取10.000g分析纯六次甲基四胺，溶于无混浊的蒸馏水，移入100ml容量瓶中定容。 三、配制 1、制备浓富尔马进混浊液 吸取25ml1%硫酸肼溶液，缓慢加到盛有25ml10%六次甲基四胺溶液的三角瓶中，边加边摇动，然后盖塞。放置24小时后备用，该溶液在两个月内有效。 2、制备100EBC富尔马进单位混浊液 摇匀浓富尔马进混浊液混浊液，立刻吸取1体积，在容量瓶中用蒸馏水稀释成10体积（简称100EBC 单位混浊液）。该溶液一周内有效。 3.制备工作标准浑浊液： 吸取摇匀后的100EBC 单位混浊液0.00；0.25，0.50，0.75，
第二章硫酸铵生产 第一节硫铵生产的原料及产品 一、硫铵的性质及质量要求 硫酸吸收煤气中的氨制取硫酸铵。反应式： 2NH3+H2SO4→(NH4)2SO4+Q 纯态的硫酸铵为无色长菱形晶体，比重1.766；含一定水分的硫铵的堆积密度随结晶颗粒的大小而波动于780～830Kg/m3的范围内。硫铵的分子量为132.15,。化学纯的硫铵含氮量为21.2﹪或含氨为25.78﹪。 焦化厂用饱和器法生产的硫铵，由于杂志的影响往往带有颜色（蓝色或黄色），结晶多为针状、片状或粉末状，成型的颗粒很小。一般其线性平均尺寸不超过0.5毫米。 用适量的硫酸和氨进行反应时生成的是中式盐（NH4）2SO4。当硫酸过量时则生成酸式盐NH4HSO4。反应式： NH3+H2S O4→NH4HSO4。随溶液被氨饱和的程度，酸式盐又转变为中式盐：NH4HSO4+NH3→(NH4)2SO4。 饱和器里的硫铵母液就是被硫酸铵和硫酸氢铵饱和了的硫酸母液。在正常生产情况下，母液的规格大致为： 比重 1.275～1.30 游离酸含量 4～8 含氨量：NH3 150～180克/升 (NH4)2SO4 40～46﹪
NH4HSO4 10～15﹪ 硫铵结晶能吸收空气中的水分而胶结成块，在空气湿度大、结晶颗粒小和含水量高时尤甚。硫铵的结块给运输、储存和使用都带来困难。且潮湿的硫铵对钢铁、水泥和麻袋等均有侵蚀性。 硫铵施用于农田后很快溶于土壤水分中，大部分铵离子 （NH4）+能与土壤结合，且易于被植物吸收。失去铵离子的硫酸根将残留在土壤中，会使土质渐渐酸化，甚至会破坏土壤的结构。故硫铵适用于碱性或中性土壤，或者在连续使用数年后，施用石灰以改变土壤的酸性。 第二节饱和器法生产硫铵的原理及流程 一、饱和器内硫铵结晶的原理 浓度 D B 不稳区 G F E C 介稳区F′ H E′稳定区 A 温度 图3—2 液体的浓度、温度和结晶过程的关系 1.结晶原理 图3—2表明了晶核在溶液中自发地形成与溶液的浓度和温度的关系。图中AB为溶解度曲线，CD为超溶解度曲线，后者位于过饱和