小鼠C反应蛋白 (CRP)酶联免疫吸附测定试剂盒
使用说明书
产品编号：E-EL-M0053
（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）
声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组CRP浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。
*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠CRP抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的CRP会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠CRP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠CRP抗体与结合在包被抗体上的小鼠CRP结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，CRP浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中CRP的浓度。
标本收集:
1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集
血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可
检测。避免使用溶血，高血脂标本。
3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞
会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。
4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
（具体处理方法可参考：https://www.doczj.com/doc/4b13563952.html,/news2.asp?tid=477 ）
6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融，
1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。
8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做
预实验，以确定稀释倍数)。
试验所需自备物品:
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水
4.吸水纸
检测前准备工作:
1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。
3.标准品: 加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，
轻轻混匀(浓度为25ng/mL)。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0 ng/mL ，样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制12.5ng/mL标准品：取0.5mL 25ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。
4.生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配
制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。
5.酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制
100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。
当日使用。
标准品稀释方法图例：(以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管)
25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.78 0.39 0 ng/mL
洗涤方法:
1.自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。
2.手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸
去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。
操作步骤:
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μL，余孔分别加标
准品或待测样品100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液100μL（在使用前15分
钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。
3.弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μL/每孔，甩干并在吸水
纸上轻拍将孔内液体拍干。
4.每孔加酶结合物工作液（临用前15分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育30分钟。
5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6.每孔加底物溶液(TMB)100μL，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右（根据实际显
色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。7.每孔加终止液50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶
液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）。应提前打开酶标仪电源，预热
仪器，设置好检测程序。
9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。
注意事项：
1.保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强
光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。
2.酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成
任何影响。
3.加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的
“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。
4.温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标
板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。
5.洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸
水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。
6.试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，
运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。
7.显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很
明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。
8.底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
9.混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量
振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。
10.安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本
时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
11.不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）
12.试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！
结果判断:
1.每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准
品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。
2.推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3，在软件界面既可根据样品OD值，由标准
曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
灵敏度、检测范围、特异性和重复性:
● 灵敏度：最小可测0.23ng/mL。
●检测范围：0.39 – 25ng/mL。
● 特异性：可检测重组或天然的小鼠CRP，且与其它相关蛋白无交叉反应。
● 重复性：板内，板间变异系数均<10%。
说明
1.限于现有条件及科学技术水平，尚不能对所有原料进行全面的鉴定分析，本产品可能存在
一定的质量技术风险。
2.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务
必准备充足的待测样品。
3.只有全部使用Elab TM试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守
Elab TM试剂的实验说明才会得到最佳的检测结果。
4.有效期：6个月。
5.本操作说明同样适用于48T试剂盒。
Mouse CRP (C-Reactive Protein) ELISA Kit
Product Description
Catalog No: E-EL-M0053
（FOR RESEARCH USE ONLY. DO NOT USE IT IN CLINICAL DIAGONOSIS !）
Dear customer, Thank you for choosing our products. This product is produced using raw materials from world-renowned manufacturer, and professional manufacturing technology of ELISA kits. Please read the instructions carefully before use and check all the reagent compositions! If in doubt, please contact Elabscience Biotechnology Co., Ltd.
Intended use
This immunoassay kit allows for the in vitro quantitative determination of Mouse CRP concentrations in serum, plasma and other biological fluids.
Test principle
This ELISA kit uses Sandwich-ELISA as the method. The micro ELISA plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to CRP Standards or samples are then added to the appropriate micro ELISA plate wells and combined to the specific antibody. Then a biotinylated detection antibody specific for CRP and Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate is added to each micro plate well and incubated. Free components are washed away. The substrate solution is added to each well. Only those wells that contain CRP, biotinylated detection antibody and Avidin-HRP conjugate will appear blue in color. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color turn yellow. The optical density (OD) is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ±2 nm. The OD value is proportional to the concentration of CRP. You can calculate the concentration of CRP in the samples by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.
Sample collection and storage
Serum- Allow samples to clot for 2 hours at room temperature or overnight at 4°C before centrifugation for 20 minutes at approximately 1000×g. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Blood collection tubes should be disposable, non-pyrogenic, and non-endotoxin.
Plasma- Collect plasma using EDTA.Na2 or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 15 minutes at 1000×g at 2 - 8°C within 30 minutes of collection. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Avoid hemolysis, high cholesterol samples.
Tissue homogenates:For general information, hemolysis blood may affect the result, so you should rinse the tissues with ice-cold PBS (0.01M, pH=7.4) to remove excess blood thoroughly. Tissue pieces should be weighed and then minced to small pieces which will be homogenized in PBS (the volume depends on the weight of the tissue. 9mL PBS would be appropriate to 1 gram tissue pieces.Some protease inhibitor is recommended to add into the PBS.) with a glass homogenizer on ice. To further break the cells, you can sonicate the suspension with an ultrasonic cell disrupter or subject it to freeze-thaw cycles. The homogenates are then centrifugated for 5minutes at 5000×g to get the supernate.
Cell culture supernate–Centrifuge supernate for 20 minutes to remove insoluble impurity and cell debris at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the clear supernate and carry out the assay immediately.
Other biological fluids –Centrifuge samples for 20 minutes at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. (You can refer to our website for detailed processing method: https://www.doczj.com/doc/4b13563952.html,/news2.asp?tid=477 )
Sample preparation –Samples should be clear and transparent and be centrifuged to remove suspended solids.
Note: Serum and plasma to be used within 7 days when stored at 2-8°C, otherwise samples must be divided and stored at -20°C (≤1 month) or -80°C (≤6 months) to avoid loss of bioactivity and
contamination. Avoid freeze-thaw cycles. When performing the assay slowly bring samples to room temperature. If the sample concentration is higher than the maximum standard value, please dilute it with appropriate factor according to the actual situation. (A pre-test is recommended to determine the dilute factor)
Other supplies required
Microplate reader with 450nm wavelength filter
High-precision transferpettor, EP tubes and disposable pipette tips
37°C Incubator, Deionized or distilled water.
Absorbent paper
Reagent preparation
Bring all reagents to room temperature before use.
Wash Buffer - Dilute 30mL of Concentrated Wash Buffer into 750 mL of Wash Buffer with deionized or distilled water. Put unused solution back at 4°C. If crystals have formed in the concentrate, you can warm it with 40°C water bath (Heating temperature should not exceed 50°C) and mix it gently until the crystals have completely dissolved. The solution should be cooled to room temperature before use. Standard - Reconstitute the Standard with 1.0mL of Sample Diluent, let it stand for 10minutes until it dissolved fully. This reconstitution produces a stock solution of 25ng/mL. Then make serial dilutions as needed (Making serial dilution in the wells directly is not permitted). The recommended concentrations are as follows: 25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0ng/mL . As if you want to make standard solution at the concentration of 12.5ng/mL, you can take 0.5mL the standard at 25ng/mL, add it to an EP tube with 0.5mL sample dilution, and mix it. The procedures of making the remaining concentrations are all the same. The undiluted standard serves as the highest standard (25ng/mL). The Sample Diluent serves as the zero (0ng/mL).
(500μL/tube，for example. Can also be diluted according to the actual amount，such as 200μL/tube)
25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.78 0.39 0 ng/mL
Biotinylated Detection Ab —Calculate the required amount before experiment (100μL /well). In actual preparation you should prepare 100~200μL more. Dilute the concentrated Biotinylated Detection Ab to the working concentration using Diluent for Biotinylated Detection Ab (1:100).
Concentrated HRP Conjugate —Calculate the required amount before experiment (100μL/well). In actual preparation you should prepare 100~200μL more. Dilute the Concentrated HRP Conjugate to the working concentration using Diluent for Concentrated HRP Conjugate (1:100).
Washing Procedure:
1. Automated washer: add 350μL wash buffer into each well, the interval between injection and
suction should be set about 60s.
2. Manual wash: add 350μL wash buffer into each well, soak it for 1~2minutes, suck(no inside wall
touching) or get rid of liquid within the micro ELISA plate and pat it dry on thick clean absorbent paper.
Assay procedure
Allow all reagents to reach room temperature All the reagents should be mixed thoroughly by gently swirling before pipetting. Avoid foaming.
1.Add Sample: Add 100μL of Standard, Blank, or Sample per well. The blank well is added with
sample diluent. Solutions are added to the bottom of micro ELISA plate well, avoid inside wall touching and foaming to the best of your ability. Mix it gently. Cover the plate with sealer we provided. Incubate for 90 minutes at 37°C.
2.Biotinylated Detection Ab: Remove the liquid o f each well, don’t wash. Immediately add 100μL
of Biotinylated Detection Ab working solution to each well. Cover with the Plate sealer. Gently tap the plate to ensure thorough mixing. Incubate for 1 hour at 37°C.
3.Wash: Aspirate each well and wash, repeating the process three times. Wash by filling each well
with Wash Buffer (approximately 350μL) using a squirt bottle, multi-channel pipette, manifold dispenser or automated washer. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting.
Invert the plate and pat it against thick clean absorbent paper.
4. HRP Conjugate: Add 100μL of HRP Conjugate working solution to each well. Cover with the
Plate sealer. Incubate for 30 minutes at 37°C.
5. Wash: Repeat the wash process for five times as conducted in step 3.
6. Substrate:Add 100μL of Substrate Solution to each well. Cover with a new Plate sealer. Incubate
for about 15 minutes at 37°C. Protect the plate from light. The reaction time can be shortened or extended according to the actual color change, but not more than 30minutes. When apparent gradient appeared in standard wells, you can terminate the reaction.
7. Stop: Add 50μL of Stop Solution to each well. Color turn to yellow immediately. The adding order
of stop solution should be as the same as the substrate solution.
8. OD Measurement: Determine the optical density (OD value) of each well at once, using a
microplate reader set to 450nm. You should open the microplate reader ahead, preheat the instrument, and set the testing parameters.
9. After experiment, put all the unused reagents back into the refrigerator according to the specified
storage temperature respectively until their expiry.
Important Note:
1. Storage: All the reagents in the kit should be stored following the instructions. Exposure of
reagents to strong light should be avoided in the process of incubation and storage. All the taps of reagents should be tightened to prevent evaporation and microbial contamination, or erroneous results may occur.
2. ELISA Plate: Little water-like substance may appear in the ELISA Plate just opened, this is
normal and will not have any impact on the experiment results.
3. Add Sample: The interval of sample adding between the first well and the last well should not be
too long, otherwise will cause different pre-incubation time, which will significantly affect the experiment’s accuracy and repeatability. The interval controlled within 10minutes is good. Parallel measurement is recommended.
4.Incubation: To prevent evaporation, proper adhesion of plate sealers during incubation steps is
necessary. Do not allow wells to sit uncovered for extended periods between incubation steps. Do not let the strips dry at any time during the assay. Strict compliance with the given incubation time and temperature.
5.Washing: The wash procedure is critical. Insufficient washing will result in poor precision and
falsely elevated absorbance readings Residual liquid in the reaction wells should be pat dry against absorbent paper in the washing process. But don’t put absorbent paper into reaction wells directly.
Note that clear the residual liquid and fingerprint in the bottom before measurement, so as not to affect the microtiter plate reader.
6.Reagent Preparation: As the volume of Concentrated Biotinylated Detection Ab and
Concentrated HRP Conjugate is very small, liquid may adhere to the tube wall or tube cap when being transported. You better hand-throw it or centrifugal it for 1 minute at 1000rpm. Please pipette the solution for 4-5 times before pippeting. Please carefully reconstitute Standards, working solutions of Biotinylated Detection Ab and HRP Conjugate according to the instructions.
To minimize imprecision caused by pipetting, ensure that pipettors are calibrated. It is
re commended to suck more than 10μL for once pipetting. Do not reuse standard solution, working solution of Biotinylated Detection Ab and HRP Conjugate, which have been diluted. If you need to use standard repeatedly, you can divide the standard into small pack according to the amount of each assay, keep them at -20～-80°C and avoid repeated freezing and thawing.
7.Reaction Time Control: Please control reaction time strictly following this product description!
8.Substrate: Substrate Solution is easily contaminated. Please protect it from light.
9.Mixing:You’d better use microoscillator at the lowest frequency, as sufficient and gentle mixing
is particularly important to reaction result. If there is no microsocillator available, you can knock the ELISA plate frame gently with your finger before reaction.
10.Security: Please wear lab coats and latex gloves for protection. Especially detecting samples of
blood or other body fluid, please perform following the national security columns of biological laboratories.
11.Do not use component from different batches of kit(washing buffer and stop solution can be an
exception)
12.To avoid cross-contamination, change pipette tips between adding of each standard level, between
sample adding, and between reagent adding. Also, use separate reservoirs for each reagent.
Otherwise, the results will be inaccurate!
Calculation of results
Average the duplicate readings for each standard and samples and subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve by plotting the mean OD value for each standard on the y-axis or x-axis against the concentration on the x-axis or y-axis and draw a best fit curve through the points on the graph. It is recommended to use some professional software to do this calculation, such as curve expert 1.3. In the software interface, a best fitting equation of standard curve will be calculated using OD values and concentrations of standard sample. The software will calculate the concentration of samples after entering the OD value of samples. Also, you can enter the corresponding fitting equation and OD value of samples into Excel to get the concentration of samples. If samples have been diluted, the concentration calculated from the standard curve must be multiplied by the dilution factor. If the OD of the sample surpasses the upper limit of the standard curve, you should re-test it after appropriate dilution. The actual concentration is the calculated concentration multiplied dilution factor.
Sensitivity
The minimum detectable dose of Mouse CRP is 0.23ng/mL (The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection (LLD) was defined as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero).
Detection Range
0.39 – 25 ng/mL.
Specificity
This kit recognizes recombinant and natural Mouse CRP. No significant cross-reactivity or interference was observed.
Repeatability:
Coefficient of variation were<10%
Declaration:
1. Limited by the current conditions and scientific technology, we can't completely conduct the
comprehensive identification and analysis on all the raw material provided. So there might be some qualitative and technical risks for users using the kit.
2. The final experimental results will be closely related to validity of the products, operation skills of
the operators and the experimental environments. Please make sure that sufficient samples are available.
3. To get the best results, please only use the reagents supplied by the manufacturer and strictly
comply with the instructions in the description!
4. Valid period: 6 months.
5. This description is also suitable for 48T kit.
C-反应蛋白检测试剂盒（全量程）试制工作总结 一、概述 C反应蛋白（C-reactive protein）是一种能与肺炎链球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白，半衰期19小时；血清CRP由肝脏合成，白细胞介素1b、6以及肿瘤坏死因子是其合成的最重要的调节因子；CRP的分子量为105 500，由含有五个相同的未糖基化的多肽亚单位组成，每个亚单位含有187个氨基酸，这些亚单位间通过非共价键连结成环状的五聚体，并有一个链间二硫键。 1930年，Tillett和Francis首次在急性大叶性肺炎患者的血清中发现一种能在Ca2+存在时与肺炎球菌细胞壁中的C－多糖发生特异性沉淀反应的物质。1941年，Avery等测知它是一种蛋白质，故称为C反应蛋白(CRP)。1944年，Jones将其作为临床风湿热诊断标准的次要指标之一。后来，人们在非感染性疾病和感染性疾病患者的急性期血清中都测到了CRP，于是人们认为，CRP是组织损伤的一种非特异性反应。进一步研究发现：病毒或细菌感染、梗塞、免疫复合物沉积等因素都可导致组织损伤。在组织损伤的急性期，肝脏合成的一些血浆蛋白显著增加，这些蛋白质通称为急性时相蛋白，其中CRP是急性时相蛋白中变化最显著的一种。CRP在正常人血清中其含量极微；在组织受到损伤、炎症、感染或肿瘤破坏时CRP可以在数小时内急剧上升，可增高数倍或数百倍，2-3天达峰值，待病情改善时逐渐下降，恢复正常。CRP被广泛应用于临床疾病的早期诊断及鉴别诊断，其升高可见于：1、组织损伤、感染、肿瘤、心肌梗塞及一系列急慢性炎症性疾病，如风湿性关节炎、全身性血管炎、多肌痛风湿病；2、术后感染及并发症的指标：手术后病人CRP升高，术后7—10天CRP水平应下降，如CRP不降低或再次升高，提示可能并发感染或血栓栓塞；3、可作为细菌性感染和病毒性感染的鉴别诊断：大多数细菌性感染会引起患者血清CRP升高，而病毒性感染则多数不升高。 超敏C反应蛋白（High sensitivity C-reactive protein）与CRP并不是两种蛋白，只是从灵敏度上加以区分, 超敏C反应蛋白(Hs-CRP)最低检测限达0.1 mg/l; 原先认为CRP是正常的血清却发现同未来发生心血管疾病密切相关,大量研究资料表明,动脉粥样化的血栓去除了是脂肪堆积的过程外也是一个慢性炎症过程,；Hs-CRP轻度升高与冠状动脉事件、中风及周围血管病相关，是一项独立的危险因素；HS-CRP已被证实是由慢性炎症引发心血管疾病的独立危险因素，检测其浓度对心血管疾病的干预及预后起重要作用而被临床重视。流行病学调查也显示,hs-CRP 水平升高者发生急性脑卒中的几率是正常健康人的2 倍, 发生心肌梗死的几率是正常者的3 倍。2003 年欧洲高血压防治指南( ESH/ESC) 正式推荐, 高
elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。
大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。ELISA法 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成180 ng/ml，90 ng/ml，45 ng/ml，22.5 ng/ml，11.25 ng/ml， 5.63 ng/ml，2.82 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制90 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml。 4. 检测稀释液A：1×10ml。 5. 检测稀释液B：1×10ml。 6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算 好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶 液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 11. 覆膜：5张 12. 使用说明书：1份 自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸
货号：MS2802 规格：100管/96样 血清铁浓度检测试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁，该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。 测定原理： 亚硫酸钠还原血清Fe3+生成成Fe2+，Fe2+进一步与2, 2’- 联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。 自备实验用品及仪器： 离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。 试剂组成和配置： 试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前配制，加入15mL蒸馏水充分溶解。 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前配制，加入469μL冰醋酸，加入15mL蒸馏水充分溶解。 标准液：液体×1 支（EP管），100μmol/L Fe3+标准液，4℃保存。 测定： 1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到520nm，蒸馏水调零。 2. 标准液解冻：提前取出标准液，置于室温下充分解冻后混匀。 3. 空白管：取EP管，依次加入125μL蒸馏水，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧， 置于沸水浴5min，自来水冷却。加入62μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm 测定吸光度，记为A空白管。 4. 标准管：取EP管，依次加入125μL标准液，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧， 置于沸水浴5min，自来水冷却。加入62μL氯仿，充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm测定吸光度，记为A标准管。 5. 测定管：取EP管，依次加入125μL血清，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置 于沸水浴5min，自来水冷却。加入62μL氯仿，充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm测定吸光度，记为A测定管。注意：空白管和标准管只需测定一次。 血清铁浓度计算公式： 血清铁含量(μmol/dL)=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总=10× (A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) C 标准液：100 μmol/L Fe 3+ 标准液；V 总：1 dL=0.1 L。 注意事项： 1、血清铁含量少，所用器皿（EP 管）需要注意，避免被铁污染。 2、试剂一和试剂二溶液不稳定，需现配现用，新配制的试剂只能当天使用。 3. 最低检出限为1μmol/L。 第1页，共1页
便隐血转铁蛋白临床实验应用体会 宓庆梅上海市长征医院 粪便隐血试验是检测消化道出血的一个重要指标，检测方法选择的不同会直接影响判断消化道是否出血和出血的程度。目前，常规的检测方法有化学法（邻甲联苯胺法）和血红蛋白法（单克隆免疫法）。化学检测法中，易产生假阳性，并且敏感性偏底，对于消化道内的微量出血不易测出；血红蛋白法中，敏感性强，可以检测出很微量的出血情况，但是，消化道内大量出血反而会导致假阴性的结果。便隐血检测是美国最常使用的结肠癌和直肠癌普查初筛试验，也是目前唯一通过随机临床试验证实的，可以降低结肠癌和直肠癌所致死亡的检查，实施每年粪便隐血检测可以早期发现结肠癌和直肠癌的发生，可以降低30%的结肠癌和直肠癌患者的死亡率。本文对化学法、血红蛋白法和转铁蛋白法三种便潜血检测方法抗体法进行了比对试验。用单克隆胶体金显色技术，以试纸条一步法检测粪便中血红蛋白，有较高的敏感性和特异性。转铁蛋白单克隆抗体法试纸是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、抗转铁蛋白单抗金标垫、玻璃纤维样品吸液层组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条转铁蛋白单抗反应线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水板，另一端端头为玻璃纤维样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和抗转铁蛋白单抗金标垫相互交叠连接，在抗转铁蛋白单抗金标垫上压有玻璃纤维样品吸液层。当人尿液、粪便中带有转铁蛋白抗原时，样品中转铁蛋白抗原可与抗转铁蛋白单克隆抗体金标探针发生特异结合而被抗转铁蛋白单克隆抗体识别，即发生双抗夹心特异结合，因而可测定尿液、粪便中的转铁蛋白含量。 1.材料和方法 1.1试剂： 1.1.1邻甲联苯胺试剂：邻甲联苯胺1g，溶于50ml冰醋酸和50ml无水乙醇的混合液中，置于4℃冰箱中，避光保存；3%过氧化氢液。 1.1.2粪便血红蛋白胶体金试剂盒（简称WH试纸条）：万华普曼生物工程有限公司提供的万华牌“消康保”试纸条。 1.1.3转铁蛋白单克隆抗体法试剂盒：万华普曼生物工程有限公司提供的万华牌“消康保”试纸条。 1.2标本来源：本院2008年1月至3月的住院患者随机132例粪便，男81例，女51例，年龄为27岁至71岁。 1.3方法：
血清淀粉样蛋白A/C-反应蛋白测定试剂盒（胶体金免疫层析法） 适用范围：该产品用于体外定量测定人血清、血浆、全血（静脉血和指尖血）中血清淀粉样蛋白A和C-反应蛋白的含量。 1.1规 格 1人份/袋、10人份/盒、20人份/盒、50人份/盒 1.2组成 产品包含1/10/20/50人份血清淀粉样蛋白A/C-反应蛋白检测卡、1/10/20/50 支样品缓冲液（300μL/支）、1份二维码（内含校准信息），每人份试剂独立铝箔袋包装内含1支检测卡和1包干燥剂。 检测卡由标记垫（喷涂有胶体金标记的鼠抗人血清淀粉样蛋白A和鼠抗人C-反应蛋白单克隆抗体混合物）、样品垫、硝酸纤维素膜（T1线包被鼠抗人血清淀粉样蛋白A；T2线包被鼠抗人C-反应蛋白单克隆抗体；C线包被羊抗鼠多抗体）、吸水纸、塑料载板组成。 样品缓冲液由0.1%的表面活性剂和0.1mol/L的Tris溶液（pH7.0）组成。 2.1物理性状 2.1.1外观 检测卡应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固；标签字迹清晰，无破损。样品缓冲液应清澈透明、无杂质、无絮状物。 2.1.2液体移行速度 液体移行速度应不低于10 mm/min。 2.1.3 膜条宽度 检测卡的膜条宽度≥2.5mm。 2.1.4样品缓冲液装量 样品缓冲液体积应在标识体积的±5%以内。 2.2空白限 血清淀粉样蛋白A的空白限应不高于10μg/mL，C-反应蛋白的空白限应不高于0.5μg/mL。
2.3重复性 分别用高、中、低3个浓度的样本，各重复检测10次，CV(%)应不高于15.0%。 2.4批间差 用3个批号的试剂卡，分别检测2个浓度的样本，相对极差R应不高于15.0%。 2.5线性 血清淀粉样蛋白A在[10,150] μg/mL的范围内，线性相关系数应不低于0.990。C-反应蛋白在[0.5,100] μg/mL的范围内，线性相关系数应不低于0.990。 2.6准确度 检测血清淀粉样蛋白A国际标准品（92/680）、C-反应蛋白国际标准品（ERM DA-474/IFCC），相对偏差在±15%以内。 2.7 校准信息溯源性 应根据GB/T21415-2008提供校准信息的来源、赋值过程，血清淀粉样蛋白A溯源至国际校准品（92/680），C-反应蛋白溯源至国际校准品（ERM DA-474/IFCC）2.8稳定性 将试剂盒在4℃～30℃环境中放置至有效期18个月后，过有效期后3个月内，分别检测，结果应符合2.1、2.2、2.3、2.5、2.6的要求。
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）瘦素（LEP）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被瘦素（LEP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素（LEP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。
铁测定试剂盒（PAPS显色剂法） 适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中铁的含量。 1.1 产品型号/规格 试剂1：1×20 ml、试剂2：1×5 ml；试剂1：1×40 ml、试剂2：1×10 ml；试剂1：2×40 ml、试剂2：2×10 ml；试剂1：4×40 ml、试剂2：4×10 ml；试剂1：4×60 ml、试剂2：2×30 ml；试剂1：1×80 ml、试剂2：1×20 ml；试剂1：2×80 ml、试剂2：2×20 ml；试剂1：5×80 ml、试剂2：5×20 ml；试剂1：3×60 ml、试剂2：1×45 ml；试剂1：6×70 ml、试剂2：3×35 ml；试剂1：5×40 ml、试剂2：1×50 ml；试剂1：4×40 ml、试剂2：2×20 ml；试剂1：4×80 ml、试剂2：4×20 ml；试剂1：4×50 ml、试剂2：1×50 ml；试剂1：8×50 ml、试剂2：2×50 ml；试剂1：8×16.8 ml、试剂2：8×4.2 ml。 1.2 划分说明 试剂1：醋酸缓冲液 0.2 mol/L 表面活性剂适量 稳定剂适量 试剂2：PAPS 2.6 mmol/L 2. 性能指标 2.1 外观和性状 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；中文包装标签应清晰、准确、牢固。 2.1.2 试剂1应为无色澄清液体；试剂2应为棕色液体。 2.2 净含量
不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在光径1 cm、主波长578 nm下，以蒸馏水为检测样本时，吸光度应不大于0.300 。 2.4 分析灵敏度 铁含量为30.00 μmol/L时，测定吸光度差值（△A）应大于0.080。 2.5 线性范围 铁试剂在线性范围(0～120] μmol/L内： （a）回归系数r应不小于0.990； （b）在（0～12.0 ] μmol/L范围内，线性绝对偏差应不大于±1.2 μmol/L；（c）在（12.0～120]范围内，线性相对偏差应不大于±10%。 2.6 测量精密度 2.6.1 重复性 变异系数（CV）均应不大于5%。 2.6.2 批间差 相对偏差（R）应不大于5%。 2.7 准确度 采用GBW09152 冷冻人血清中无机成分分析标准物质对试剂盒进行测试，相对偏差应不超过±10%。 2.8 稳定性 铁试剂盒贮存于2 ℃～8 ℃、避光环境中，有效期为12个月。有效期满后应满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
C-反应蛋白检测试剂盒（免疫荧光法） 适用范围：用于临床机构体外定量测定人体血清、全血和血浆中的C-反应蛋白的含量。 2.1外观 2.1.1检测试剂卡 外观应平整，边缘无毛刺。 2.1.2样本稀释液 样本稀释液应澄清，无异物、沉淀物和絮状物。 2.1.3膜条宽度 应不小于3.5mm。 2.1.4移行速度 液体移行速度应不低于10mm/min。 2.2装量 样本稀释液装量应在1.50±0.15mL范围内。
2.3空白限 不高于0.5mg/L。 2.4线性 在[0.5~200]mg/L内，线性相关系数（r）应≥0.990； 在[0.5~10]mg/L区间内（不含10mg/L），绝对偏差应不超过±0.6mg/L； 在[10~200]mg/L区间内（含10mg/L），相对偏差应不超过±10%。 2.5准确度 用标准品（使用WHO的标准品，NIBSC code：85/506）稀释后作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应≤10%。 2.6精密度 2.6.1批内不精密度 批内不精密度（变异系数）：CV≤10%。 2.6.2批间不精密度 批间不精密度（变异系数）：CV≤15%。 2.7效期稳定性 在规定的贮存条件下，有效期为12个月，到期后3个月内，应符合2.1～2.6.1的要求。 2.8特异性 特异性应符合如下要求： a) 含人血清白蛋白浓度为60g/L的零浓度C-反应蛋白样本，检测结果不高于 0.5mg/L；
b) 含血红蛋白浓度为4g/L的零浓度C-反应蛋白样本，检测结果不高于 0.5mg/L； c) 含降钙素原浓度为1ng/mL的零浓度C-反应蛋白样本，检测结果不高于 0.5mg/L。
人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）含量。 试验原理： CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
总铁结合力测定试剂盒(Ferene法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中的总铁结合力。1.1包装规格 试剂Ⅰ（R1）：60mL×3、试剂Ⅱ（R2）：20mL×3、试剂Ⅲ（R1）：60mL×3、试剂Ⅳ（R2）：20mL×3； 试剂Ⅰ（R1）：60mL×2、试剂Ⅱ（R2）：20mL×2、试剂Ⅲ（R1）：60mL×2、试剂Ⅳ（R2）：20mL×2； 试剂Ⅰ（R1）：60mL×1、试剂Ⅱ（R2）：20mL×1、试剂Ⅲ（R1）：60mL×1、试剂Ⅳ（R2）：20mL×1； 试剂Ⅰ（R1）：45mL×1、试剂Ⅱ（R2）：15mL×1、试剂Ⅲ（R1）：45mL×1、试剂Ⅳ（R2）：15mL×1； 试剂Ⅰ（R1）：90mL×1、试剂Ⅱ（R2）：15mL×2、试剂Ⅲ（R1）：90mL×1、试剂Ⅳ（R2）：15mL×2。1.2主要组成成分
2.1 外观 试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；试剂均为澄清溶液，无未溶解物。2.2 装量 试剂瓶内试剂的净含量不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在波长A600nm，记录吸光度值，试剂空白吸光度（R1+R2）不超过0.80A，试剂空白吸光度（R3+R4）不超过0.80A。 2.4 分析灵敏度 Fe：测试浓度100μmol/L的样本，吸光度变化值不低于0.002A。 UIBC：测试浓度50μmol/L的样本，吸光度变化值不低于0.002A。 2.5 线性 2.5.1铁离子： 在[1，120]μmol/L范围内，线性回归的确定系数应不低于0.990； 在[1，30)μmol/L范围内，线性绝对偏差不超过±3.0μmol/L； 在[30，120]μmol/L范围内，线性相对偏差不超过±10%； 2.5.2不饱和铁： 在[1，80]μmol/L范围内，线性回归的确定系数应不低于0.990； 在[1，30)μmol/L范围内，线性绝对偏差不超过±3.0μmol/L； 在[30，80]μmol/L范围内，线性相对偏差不超过±10%。 2.6 重复性 2.6.1批内重复性
铁蛋白测定试剂盒（化学发光免疫分析法）适用范围：用于体外定量测定人血清中铁蛋白的浓度水平。 1.1规格 96T。 1.2 组成
2.1 外观 a)包装标签应清晰、无磨损; b)试剂盒各组份应齐全、包装完好，液体无渗漏。 2.2 线性 本试剂盒线性范围为：[0.1 ,600] ng/mL。线性相关系数r≥0.9900。 2.3空白限 不大于0.1ng/mL。 2.4准确度 将参考物质作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应在±10%范围内。 2.5重复性 重复检测质控品Q1和 Q2各10次，其批内变异系数（CV）应不大于10%。 2.6批间差 用三个批号的试剂盒检测质控品Q1和 Q2，三批号试剂盒之间的批间变异系数（CV）应不大于15%。 2.7质控品赋值有效性 质控品测量值应在质控范围内。 2.8特异性 2.8.1与甲胎蛋白的交叉反应 检测浓度为600 ng/mL的甲胎蛋白, 交叉反应率应小于1%。 2.8.2与转铁蛋白的交叉反应 检测浓度为600 ng/mL的转铁蛋白, 交叉反应率应小于1%。 2.8.3与尿微量白蛋白的交叉反应 检测浓度为600 ng/mL的尿微量白蛋白，交叉反应率应小于1%。 2.9稳定性 规定产品2℃～8℃储存，有效期6个月。取到效期后的样品检测准确度、空白限、线性、重复性，应符合2.2～2.5的要求。 2.10溯源性
根据《GB/T 21415—2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供校准品的来源，赋值过程以及不确定度等内容，校准品溯源至中国食品药品检定研究院标准品（150540）。
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格：96T/48T。 供应商：上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备： 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势： 全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。
铁测定试剂盒(亚铁嗪法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中铁的浓度。1.1规格 试剂1: 1×30mL，试剂2: 1×10mL； 试剂1: 2×60mL，试剂2: 2×20mL； 试剂1: 1×50mL，试剂2: 1×10mL； 试剂1: 1×40mL，试剂2: 1×10mL； 试剂1: 2×40mL，试剂2: 1×20mL； 试剂1: 2×40mL，试剂2: 2×10mL； 试剂1:3×28mL，试剂2:3×7mL； 试剂1:1×4L，试剂2:1×1L； 试剂1:2×4L，试剂2:1×2L。 1.2主要组成成分 试剂1主要组分： 试剂2主要组分： 2.1 净含量
应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观 试剂1应为无色或浅色澄清液体，试剂2应为浅色或橙色澄清液体。外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。 2.3 试剂空白 在600nm处测定试剂空白吸光度，应≤1.5； 2.4 分析灵敏度 测试25μmol/L的被测物时，吸光度变化（ΔA）应不低于0.005. 2.5 准确度 用参考物质（GBW09152）对试剂（盒）进行测试，相对偏差不超过±5%。 2.6 重复性 批内变异系数（CV）应不超过5％。 2.7 线性 2.7.1在[1,100]μmol/L 区间内，线性相关系数r应不低于0.990； 2.7.2[1,8)μmol/L区间内绝对偏差不超过±0.64μmol/L；[8,100]μmol/L区间内相对偏差不超过±8%。 2.8 批间差 对同一份样品进行重复测定，相对极差≤6％。 2.9 稳定性 取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，应符合本标准2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。
血红蛋白/转铁蛋白检测试剂盒（胶体金免疫层析法） 适用范围：该产品用于体外定性检测人体粪便样本中的血红蛋白和转铁蛋白的含量。 1.1包装规格 24人份/盒。 1.2 主要组成成分 在血红蛋白检测条和转铁蛋白检测条的基础上外加筒形状的聚苯乙烯塑料外壳制成。血红蛋白检测条主要由塑料板，吸水板，硝酸纤维素膜，胶体金，吸水纸组成；硝酸纤维素膜由包被有羊抗鼠多克隆抗体的控制线（C线）和包被有鼠抗人血红蛋白单克隆抗体的反应线1（T线）组成；胶体金由鼠抗人血红蛋白单克隆抗体2标记制成；转铁蛋白检测条主要由塑料板，吸水板，硝酸纤维素膜，胶体金，吸水纸组成；硝酸纤维素膜由包被有羊抗鼠多克隆抗体的控制线（C线）和包被有鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体的反应线1（T线）组成；胶体金由鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体2标记制成。 2.1 外观 外观整洁完整、无破损、无污染；材料附着牢固、内容物齐全。包装完整、标签清晰。 2.2 宽度 膜条应宽于2.5mm。 2.3 移行速度 液体移行速度应不低于10mm/min。 2.4 临界值及重复性 2.4.1 分别检测含被测物相应检出限浓度（见表1）的阳性质控品各20次，其结果阳性率≥95%。 2.4.2 分别检测含被测物相应阴性检测浓度（见表1）的阴性质控品各20次，其结果阴性率≥95%。 表1 被测物检出限检测浓度点
2.5 分析特异性 检测含有宣称不产生交叉反应的最高浓度/水平的干扰物质（详见表2）结果应不出现阳性。 表2 常见的交叉反应源 2.6 批间差 抽取三个批次的试纸条各20人份，分别按临界值及重复性检测方法检测，阴性结果符合率应≥95%，阳性结果符合率应≥95%。 2.7 HOOK效应 检测2000μg/ml的人血红蛋白阳性质控品及400μg/ml的转铁蛋白阳性质控品，结果应均不出现阴性。 2.8 稳定性 检测试纸条在4℃-30℃避光保存36个月后，产品的性能应符合2.4,2.5,2.7的要求。
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：E-EL-M0314 （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!） 声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，Col I浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。 标本收集: 1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集 血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可 检测。避免使用溶血，高血脂标本。 3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。 4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 （具体处理方法可参考：https://www.doczj.com/doc/4b13563952.html,/news2.asp?tid=477 ） 6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融， 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做 预实验，以确定稀释倍数)。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸
组织铁含量检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC4350 规格：50T/48S 产品内容： 提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前配制，加入7.5mL蒸馏水充分溶解，试剂一变黑后则不能使用； 试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前配制，加入375μL冰醋酸，加入12mL蒸馏水充分溶解；溶解后4℃保存一周； 标准液：液体3mL×1瓶，1μmol/mL Fe3+标准液，4℃保存；临用前稀释8倍即0.125μmol/mL的标准溶液进行实验，现用现配。 产品说明： 铁是人体必须的微量元素之一，它是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分，帮助氧的运输，促进脂肪氧化。缺乏铁元素容易造成贫血、代谢纷乱，并影响机体的免疫功能。 亚硫酸钠还原Fe3+生成Fe2+，Fe2+进一步与2,2’-联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长吸光度即可计算铁含量。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、氯仿、冰和蒸馏水。 测定操作： 1、样本处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。4000g4℃离心10分钟，取上清。 2、操作步骤： （1）可见分光光度计预热30min，波长调至520nm。蒸馏水调零。 （2）加样表： 第1页，共2页
加入试剂（μL）空白管测定管标准管蒸馏水400-- --400 0.125μmol/mL标准 液 样本-400- 试剂一200200200 试剂二400400400 混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却；加入200μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液800μL，加入1mL玻璃比色皿，于520nm立即测定吸光度，分别记为A空白管，A测定管，A标准管，计算ΔA标准=A标准管-A空白管，ΔA测定=A测定管-A空白管。 3、组织铁含量计算： （1）按组织鲜重计算: 组织铁含量（μg/g鲜重）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷W = 6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷W （2）按组织蛋白浓度计算 组织铁含量（μg/mg prot）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取） = 6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr。 C标准液：0.125μmol/mL Fe3+标准液；55.845：Fe的相对分子质量，55.845μg/μmol；Cpr：样品蛋 白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；V提取：提取液体积，1mL。 注意事项： 1、当ΔA大于1时，建议将样品用提取液稀释后进行测定；ΔA过小时，可增加酶促反应时间（1h或2h）或 增加加入的样品体积来测定。 2、试剂一溶解变黑后则不能使用；试剂二有毒性，做好防护措施。 第2页，共2页
转铁蛋白检测试剂盒（胶体金免疫层析法） 适用范围：该产品用于体外定性检测人粪便样本中转铁蛋白的含量。 1.1规格和型号 条型：1.筒装： 1）25人份/筒，12筒/盒 2）25人份/筒，24筒/盒 2.袋装： 1人份/袋；100人份/盒 板型：1）1人份/袋，25人份/盒 2）1人份/袋，40人份/盒 1.2主要组成成分 转铁蛋白检测试纸条主要由塑料板，吸水板，硝酸纤维素膜，胶体金，吸水纸组成；硝酸纤维素膜由包被有羊抗鼠多克隆抗体的控制线（C线）和包被有鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体1的反应线（T线）组成；胶体金由鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体2标记制成。板型产品主要由卡塞和转铁蛋白检测试纸条组成。 2.1外观 外观整洁完整、无破损、无污染；材料附着牢固、内容物齐全。包装完整、标签清晰。 2.2物理检查 膜条应宽于2.5mm，液体移行速度应不低于20mm/min。 2.3临界值及重复性 本产品临界值为10ng/mL。 检测浓度为40ng/mL的转铁蛋白质控品（配制方法见附录A），平行检测20次，检测结果应一致，显色度均一，结果的阳性率应≥95%。 检测浓度为5ng/mL的转铁蛋白质控品（配制方法见附录A）平行检测20次，检测结果应一致，显色度均一，结果的阴性率应≥95% 2.4特异性
检测浓度为200μg/mL的牛转铁蛋白和200μg/mL的狗转铁蛋白，检测结果应为阴性。 2.5批间差 取3个批号的产品，各40人份，按照2.3的方法检测，结果应符合要求。 2.6 HOOK效应 检测浓度为400μg/mL的转铁蛋白质控品（配制方法见附录A），检测结果应为阳性。 2.7稳定性 产品有效期为24个月，在4℃～30℃条件下放置有效期后2个月，产品性能应符合2.1 ～2.3的要求。
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 （8-OHdG）含量。 试验原理： 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
铁测定试剂盒（亚铁嗪法） 适用范围：本产品与ABBOTT ARCHITECT c4000/c8000/c16000全自动生化分析仪配套使用，用于体外定量测定人血清中铁的浓度。 1.1包装规格 液体双剂型（液体Ⅰ型） 试剂1（R1）：55mL×2，试剂2（R2）：15mL×2； 试剂1（R1）：80mL×2，试剂2（R2）：20mL×2。 1.2主要组成成分 1.2.1 试剂1（R1）（液体） 酸性缓冲 液0.4mol/L 1.2.2 试剂2（R2）（液体） 抗坏血酸57mmol/L 亚铁嗪 5.0mmol/L 2.1 外观 试剂盒中各组件的外观应满足： 2.1.1 试剂1（R1）应为无色透明液体，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损； 2.1.2 试剂2（R2）应为淡黄色透明液体，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。 2.2 净含量
液体试剂净含量应不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在波长570nm（光径1cm）处，试剂空白吸光度（A）应≤0.08。 2.4准确度 测定GBW09152，相对偏差应不超过±15%。 2.5分析灵敏度 对应于浓度为 17.9μmol/L的Iron所引起的吸光度差值（△A）的绝对值应在0.010～0.050的范围内。 2.6重复性 重复测试高、中、低浓度样本，变异系数（CV）应≤10%。 2.7批间差 测定同一样本，批间差（R）应≤10%。 2.8线性范围 在[1.0，179]μmol/L范围内，线性相关系数（r）应≥0.990； 在(20，179]μmol/L范围内，线性相对偏差应不超过±10%； 在[1.0，20]μmol/L范围内，线性绝对偏差应不超过±2μmol/L。 2.9试剂稳定性 2.9.1试剂效期稳定性： 原包装的试剂盒在2℃～8℃避光贮存，有效期为12个月。试剂有效期满后3个月以内，试剂性能应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。2.9.2开盖稳定性：