称体标定操作步骤
注意：在称体标重之前，先检检查称仓是否受外力影响如软连接过紧或其他东西碰到。
标定步骤：
〈1〉确保标定称仓内无无料，即空仓；另外准备3吨重的标准砝码或其他等重物件；称重显示控制器（PT650D）通电
后，进行参数设定：按MODE+G/N保持2秒，直到看到：”
F0 0”字样；
〈2〉按“ZERO”键切换至F4,F5,F6状态下，按TARE键设定参数如下：F4 0；F5 0；F6 15（此参数设定量程
为25吨，分度10公斤）；参数设定完后，切换至“F0 0”
状态，按MODE健退出参数设定。（F4、F5、F6根据需要
设定量程和分度值，具体设置值请查说明书）
〈3〉上述设置完成后，进行实物调校。
1、按MODE+TARE保持2秒进入“CAL 1”状态，
按“ZERO”键进行零位调校，此时称重仪表无数值显示，
仅有ZERO指示灯闪烁，确认当前称体为空称，则按MODE
键确认，标零完成，仪表显示000000。
2、完成步骤1后，将3吨重的标准砝码或其他等重
物件等分到称体上，并将称表上的000000改成你所放重量数值，上述完成后，确认称上砝码重量和称重仪表显示一致，按MODE 键确认，称重仪表显示当前称上物料重量，标定完成。
标定步骤在说明书内,6-2 设置步骤下有说明和操作步骤.
电子秤标定方法 佰仕利：268.97 79去皮-市斤 268.97 78去皮-公斤 三、耀华 （1）XK3190-A12 XK3190-A10 开机初始过程中按（#）进入标定状态（去皮）选择（#）确认 1.（d xx）选择分度值 2. （p xx）小数点 3. （full ）最大称量 4. （noload ）空秤确认 5.（ad load）放砝码（000000）输入砝码值（置零）增加1，去皮右移光标 （#）确认 6.（end） （2.）xk3190-A1+ 将大屏幕接口指针少的一端朝上，右手两端短接，屏幕出现提示， 按输入直到出现 noload 空秤确认，adload 加砝码输砝码值，确认。（3）XK3190-A7 1. 正常称重状态，仪表后端打开标定开关，显示（n xxxx） 清除进入下一步切换选择去皮确认 2.（e xx ）设分度值 3. （d 0.0）设小数点 4. 按去皮，直到显示（CAL）空秤确认 5. （000.000）加码，（累计）右循环，（切换）加1 去皮确认。 6. 关开关。 （4）XK3190-C2 将大屏幕接口短接（14 15脚） (输入) 确认 1.称重状态下，按功能显示 PASS 2.输密码 920728 按输入 3. (DC ) 小数点位数 4. （E ）分度值 5.（F ）最大称量 6. （r ）保存原有零位 7. （NO LAOD）零位确认 8. （AD LOAD）加码，（00000）输码值，按输入 （5）耀华YH-T3校正资料 开机归零后同时按一次“清除”和“F”键进入参数设置 “保持“键为确认键，“回零”键是输入键，“扣皮”键是移位键 菜单一为分度值设置 菜单二为小数点设置 菜单三为满量程设置：注，每次校正都必须重新输入满量程，输入后按“保持”键屏幕显示零点校正，按“保持”键，此时屏幕显示空载码，稳定后会自动跳到
脂质体转染的实验原理与操作步骤大全 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 脂质体(lipofectin regeant，LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy，Propyl]-n， n，n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1：1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1~5μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间(2~24小时)。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。 细胞种类：COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。 一、脂质体(liposome)转染方法原理 脂质体(liposome)转染方法原理：脂质体((Iiposome)作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹DNA，同样可以通过融合而进人细胞。使用脂质体将DNA带人不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性。 中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。 二、脂质体转染操作步骤 1、操作步骤[方法一]： (1)细胞培养：取6孔培养板(或用35mm培养皿)，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃CO2培养至40%~60%汇合时(汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL，B液：用不含血清培养基稀释2-50μgLR，终量100μL，轻轻混合A、B液，室温中置10-15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染(如出现沉淀可能因LR或DNA浓度过高所致，应酌情减量)。 (3)转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入1mL不含血清培养液。
Hieff TransTM 脂质体核酸转染试剂 产品描述 Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA 、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM 复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。 Hieff Trans TM 以无菌的液体形式提供。通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl 左右，则1ml Hieff Trans TM 约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl 左右，则1ml Hieff Trans TM 约可做160 次转染； 运输与保存方法 冰袋（wet ice ）运输。产品4oC 保存，一年有效。不可冷冻！ 注意事项 1）Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。 2）Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA 和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。 3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。 4）使用高纯度的DNA 或RNA 有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。 5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。 6）初次使用应优化DNA 浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5 μg DNA 和1-1.5 μl 转染试剂。通过调整DNA/Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA （μg ）: Hieff Trans TM （μl ）比值在1：0.5-1：5。 操作流程（以24孔板为例，其他培养板加样体积请参考表一） 【注】：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。 贴壁细胞：转染前一天（20-24小时），胰酶消化细胞并计数，细胞铺板（不含抗生素），使其在转染时密度为90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate ）。 c c l 整 理
转染步骤及经验（精华） 一、基础理论 转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分类：物理介导方法：电穿孔法、显微注射和基因枪；化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法：有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节（见后文）。 二、转染操作流程（以常用的6孔板为例） (1) 细胞培养： 取6孔培养板，以3x104/cm2密度铺板，37℃5%CO2培养箱中培养至70%～90%汇合。(不同细胞略有不同，根据实验室优化的条件进行，汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备： 在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量) A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL， B液：用不含血清培养基稀释对应量的转染试剂，终量100μL； 轻轻混合A、B液（1:1混匀），室温中置15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。 (3) 转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入2mL不含血清及PS的培养液。 (4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中（缓慢滴加），轻轻摇匀，37℃温箱置6～8小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。 三、转染注意事项 1. 血清 A. DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。 B．一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。 C. 对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一种营养丰富的无血清培养基OPTI-MEMⅠ培养基， 或者在转染培养基中使用血清。对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。 2.抗生素（PS） 抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血
联贸电子称校准方法 （1）UWA-15kg 1.按扣重+开机，出现CAL 2.按扣重，出现d12000—按扣重，出现C15—按扣重，出现数字—按零 点校正，屏幕回零，放砝码（10kg），按扣重，出现5，10，15 依次闪烁，出现10时，按扣重，完成。 （2.）UWA-H 按零点校正+开机，直到屏幕出现F0—-按零点校正，直到屏幕出现FC(12次)—按累计（2次），出现164FF (可能出现数值不一样)—按单位选择，出现内码—必须放最大称量砝码，按累计，出现FC—按设定清除，完成 （3）UD6188 仪表 按累加+开机，出现EP—4,倒计时，出现0000.00—按记忆消除移位，―记忆‖输值—加码，按累加确认，倒计时，完成。 （4）BSWE BWSI仪表 归零+开机，自检后屏幕归0—按※，出现CAL.5P—按→，出现‖CAL.00‖–按※，出现该秤最大称量，–按→，出现‖000.00―—按→移位，按↑输入数字，加砝码按※确认，完成。 （2）TCS-150 电子台秤 按扣重+开机出现CAL—按扣重显示d30000—按扣重，显示C150—按扣重，出现数字，按归零，归零，加码，按扣重，依次显示1/3,2/3,MAX,当显示的值与砝码值一样时，按扣重，完成，屏幕显示称量。 （4）老式UAC校正方法(联贸) 1.开机归零按住‖记忆清除‖不放当字幕显示SETUP为止. 2.按‖清除‖显示‖1‖ 3.按‖.‖显示‖CAL-― 4.按‖清除‖显示‖1‖
5.按‖记忆清除‖显示CAL-1,再按记忆清除 6.再按‖记忆清除‖显示‖0‖ 7.放上全称量砝码 8.待稳定后,连续按两次‖记忆清除‖ 9.秤子倒数归零,拿下砝码,校正结束。 （5）联贸UCA计数称 按住4开机，出现CAL，再按4，总重栏显示增益值，再按零点/校正，总重栏归零，输入要校正砝码重量，放码，稳定后，先按单重设定不放，再按数量设定，然后先放单重设定，再放数量设定。OK。 （6）联贸UNA电子秤，厦门联贸： 按住―扣重‖开机显示―CAL‖按―扣重‖显示―cL3000‖CAP.30kg按―扣重‖显示 ―C30‖按―扣重‖显示内码值按―零点校正‖显示―0‖放上砝码按―扣重‖显示10、20、30在相应的砝码值上按―扣重‖即可。 （7）联贸电子秤校正方法 1、按―U‖键不放开机，会显示―CAL‖； 2、按―T‖键会显示一组数字（初期值）约3000左右，如果偏差太大，可打开秤壳左边的橡皮塞，调整可调旋纽将显示值调到3000左右（顺时针方向为减少，逆时方向针为增加）。 3、按住―→0←‖使其归零。 4、放上校正砝码，按2/3量程或满量程秤量放砝码。 5、待显示COUNT值稳定后按―%/※‖键，此时会依次显示校正砝码重量值，当出现与所放砝码重量相等的值时按―%/※‖键，即完成校正。移去砝码，即可正常使用。 按―U‖开机，再按―U‖，即可进入参数设定，再按F可选择下一参数。其参数含义如下： g ——单位 Ao z ——零点追踪 A off 0 ——自动关机时间 bl 2 ——背光 ln 0 ——线形校正 Pr 0 ——打印 Br 2400 ——波特率 再按―F‖键显示―CAL D‖，按―T‖即可完成设定。 （8）ＵＴＥ联贸
脂质体转染的实验原理与操作步骤大全 日期:2012-06-25 来源:互联网作者:青岚点击:3644次 摘要: 细胞转染的方法主要包括:电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等, 理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等, 本文主要介绍细胞转染常用的方法 -脂质体转染的原理和操作步骤等。 找产品,上生物帮 >> >> 细胞转染的方法主要包括:电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等, 理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等,本文主要介绍细胞转染常用的方法 -脂质体转染的原理和操作步骤等。 脂质体 (lipofectin regeant, LR 试剂是阳离子脂质体 N-[1-2, 3-Dioleyoxy , Propyl]-n, n , n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA和 Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE的混合物 [1:1(w/w]。它适用于把 DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中 ,是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高,优于磷酸钙法,比它高 5~100倍,能把 DNA 和 RNA 转染到各种细胞。 用 LR 进行转染时, 首先需优化转染条件, 应找出该批 LR 对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等,对每批 LR 都要做:第一,先要固定一个 DNA 的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间, DNA 可从1~5μg和孵育时间 6小时开始,按这两个参数绘出相应 LR 需用量的曲线,再选用 LR 和 DNA 两者最佳的剂量,确定出转染时间 (2~24小时。因 LR 对细胞有一定的毒性,转染时间以不超过 24小时为宜。
微脂体(又称脂质体)及其制备方法一二 微脂体(又称脂质体) 微脂体起源于1960 年代中期，Bangham博士等人首先提出，在磷酸脂薄膜上加入含盐分的水溶液后，再加以摇晃，会使脂质形成具有通透性的小球；196 8年，Sessa 和Weissmann 等人正式将此小球状的物体命名为微脂体（liposo me）并做出明确的定义: 指出微脂体是由一到数层脂质双层膜(lipid bilayer) 所组成的微小的囊泡，有自行密合（self-closing）的特性。微脂体由脂双层膜包裹水溶液形成，由于构造的特性，可同时作为厌水性（hydrophobic）及亲水性（hydrophilic）药品的载体，厌水性药品可以嵌入脂双层中，而亲水性药品则可包覆在微脂体内的水溶液层中。如同细胞膜，微脂体的脂质膜为脂双层构造，由同时具有亲水性端及厌水性端的脂质所构成，脂双层由厌水性端相对向内而亲水性端面向水溶液构成，组成中的两性物质以磷酸脂质最为常见。微脂体的形成是两性物质在水溶液中，依照热力学原理，趋向最稳定的排列方式而自动形成。微脂体的性质深受组成脂质影响，脂质在水溶液的电性，决定微脂体是中性或带有负电荷、正电荷。此外，磷酸脂碳链部分的长短，不饱和键数目，会决定微脂体的临界温度(transition temperature, Tc)，影响膜的紧密度。一般来说，碳链长度越长临界温度越高，双键数越多则临界温度越低，常见的DPPC(dipalmitoylp hosphatidylcholine)与DSPC(distearoylphosphatidylcholine)的临界温度分别是42℃与56℃，而Egg PC(egg phosphatidylcholine)与POPC(palmitoyl oleoyl phosphatidylcholine)的Tc 则低于0℃。临界温度影响微脂体包裹及结合药物的紧密度，当外界温度高于Tc时，对膜有通透性的药物，较容易通过膜；此外，当外界温度处于临界温度时，微脂体脂质双层膜中的脂质，会因为流动性不一致而使微脂体表面产生裂缝，造成内部药物的释出。在磷脂质内加入胆固醇，会对微脂体性质产生下列影响：增加微脂体在血液中的安定性，较不易发生破裂；减少水溶性分子对微脂体脂膜的通透性；增加微脂体的安定性，使其在血液循环中存在的时间较长。 微脂体可依脂双层的层数或是粒子大小，加以命名或分类： (1) Multilamellar vesicle（MLV）是具有多层脂双层之微脂体，粒子大小介于100-1000 nm，特色是粒子内具多层脂质膜，一般而言，干燥后的脂质薄膜，
各款电子秤标定方法 超人电子磅标定说明(新款):先短路,去皮----3----去皮----放砝码(59kg)---去皮---输入砝码重量(50.00)---去皮---输入总秤量---去皮. 超人电子磅标定说明(新款):658---去皮----3----去皮----放砝码(59kg)---去皮---输入砝码重量(50.00)---去皮---输入总秤量---去皮. 耀华电子磅标定说明: 先短路,功能----放砝码(59kg)---功能---输入砝码重量(50.00)---输入总秤量---功能---分度值---功能. 友声电子计价磅标定:先短路,开机归零---总计---0---累积---累清---总计 ---7---放砝码----总计---输入砝码重量----累清---总计----9. 超人计价秤/健牌秤标定(1): 16699—去皮—16699—去皮---放砝码---去皮---输入砝码重量---去皮—输入总秤量—去皮.
超人计价秤标定说明(2): 储存—8.918—储存---放砝码---输入砝码重量—储存---输入总秤量—储存. 超人计价秤标定说明(3): 16699—去皮—321---去皮—放砝码—去皮—输入砝码重量—去皮---输入总秤量—去皮. 超人计价秤标定说明(4): 166.99---去皮—放半量程砝码---置零---去皮. 永州计价秤标定说明(1): 储存—3.278---储存---放砝码---储存---输入砝码重量---储存---输入重秤量---储存. 永州计价秤标定说明(2): 8818—去皮---1—去皮---放砝码—去皮---输入砝码重量---去皮---输入重秤量---去皮. 永州计价秤标定说明(3): 储存---0.567---储存---放砝码---输入砝码重量---储存---输入重秤量---储存.
细胞转染的操作步骤 转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。红外碳硫仪理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。 >需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑。 一、细胞传代 1. 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。 2. 弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。 3. 用Tip头加入1ml Trypsin液，消化1分钟。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。 4. 加入1ml的含血清培养基终止反应。 5. 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。 6. 将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。 7. 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。8. 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。 9. 将培养皿转入培养箱中培养，第二天转染。 二、细胞转染 1. 转染试剂的准备 ①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。 ②震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。 2. 选择合适的混合比例（1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。 3. 将混合液在室温放置10―15分钟。 4. 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。 5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。 6. 到时后，红外碳硫仪根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。三、第二次细胞传代1. 在转染后24小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。 2. 再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度0.8X10 个细胞/35mm培养皿将细胞重新转入培养皿中。 3. 在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。
各款电子秤校正方法内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
各款电子秤校正方法 科迪计价秤:换校正短接头—开机—置零—置零—置零—放砝码—输入砝码值—置零—关机换回校正短接头OK 奋进:开机归零---按(16880/15998)去皮---按1(15KG/39KG按2)----放砝码-----输入砝码值----按累计OK 广州白云山的ACS记数称标定方法: 单价单价进入 上海英菲计价ＴＣＳ－Ｃ的校正方法: 老式秤短接输，新式258去皮。1去皮。 志愈和泰德ACS-30的校准方法:975去皮，1去皮其余按照正常标定。 凯丰ＴＣＳ＿６０ＫＧ的标定: 输入52411（或57660 有小数点的按或）－－去皮－－－反复按1到06－03－－－－再按3－－－放砝码－－－输入砝码值－－－置零－－－关机OK (近期生产的要先短路，液晶的，短接头在液晶片那面)
用脚踩在秤盘上，开机，出现“-----”时输入2400，去皮－－－反复按1到06－03－－－－再按3－－－放砝码－－－输入砝码值－－－置零－－－关机OK 输入2400后重量窗口显示 0，单价窗口显示 CAL，单价窗口显示 CALT0 ，金额窗口显示 0 ，继续按 1 还是不变 输入2400后重量窗口显示 0，单价窗口显示 CAL，单价窗口显示 CALT0 ，金额窗口显示 0 ，放砝码，输入砝码值，按置零 OK 凯丰:开机—输入52411(或57660)—去皮—输入1选量程—放满量程砝码—置零—关机 O0 大红鹰电子计价称的标定: 打开上盖，接通标定开关，重量窗为0，按去皮键使单价窗为0，输入1，按去皮键此时金额窗为------，按去皮键加载 北京宇权GAC计数秤校正方法:按单位设定不放，再同时按开关/归零键开机，显示CAL时放开按键，再按单重设定，显示YES 后再显示LOAD、*****OR *****两种重量，放上标准法码值，待稳定后显示DONE，校正完成 北京宇权1706L校正资料:1、按住单重设定键不放，同时按开/归零键，等显示“CAL.”时放手。？ 2、再按单重设定键，显示出现“YES”后，再显示“LOAD”“XXXXg”or “XXXXg”两种重量循环显示。此两种重量
Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂说明书 产品描述 Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。 Hieff Trans TM以无菌的液体形式提供。通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做160 次转染； 运输与保存方法 冰袋（wet ice）运输。产品4oC保存，一年有效。不可冷冻！ 注意事项 1）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。 2）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。 3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。 4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。 5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。 6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5 μg DNA 和1-1.5 μl 转染试剂。通过调整DNA/Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff Trans TM（μl）比值在1：0.5-1：5。
脂质体转染的实验原理与操作步骤大全 日期：2012-06-25 来源：互联网作者：青岚点击：3644次 摘要： 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 找产品，上生物帮>> >> 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 脂质体(lipofectin regeant，LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy，Propyl]-n，n，n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1：1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1~5μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间(2~24小时)。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。 细胞种类：COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。 一、脂质体(liposome)转染方法原理 脂质体(liposome)转染方法原理：脂质体((Iiposome)作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹DNA，同样可以通过融合而进人细胞。使用脂质体将DNA带人不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性。 中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。 二、脂质体转染操作步骤 1、操作步骤[方法一]：
托利多RL00-3600电子秤标定操作 <<3600 RL00 V4.0 简易标定步骤>> 一、按代码+24681357+*+05+*出现CAL代表按校准开关，用铁线按一下校准开关。 二、按*--再按*---按1*---再按1出现CAPACTIVE（重量工程） 三、按0（2次）出现CAPACTIVE 四、按1出现SET PRELOAD（空秤） 五、按1出现SET PULLCAP 30KG 六、按0选至5KG 七、放上法码+按1出现UNLOAD 八、拿下砝码+按1（确认）
九、按1（保留数据） 梅特勒托利多电子秤的标定方法 (1) kingbird plus 3130 打开仪表盖，S1-1 在ON状态下可以标定 称重状态下，按F1键进入F1 按确认显示F1.2 用模式选择，确认 F1.3 MAX 最大称量按确认 F1.4 e 确认 F1.5 CAL X X=0 跳过进入F1.6 X=1 进入标定 E SCL 秤台为零，确认15 CAL 倒计时 ADD LD 加码，60%MAX 确认000000 去皮和模式输入砝码值，确认 15CAL 倒计时完成按确认到F2 按清零键，跳到SAVE，确认保存。 (2) HAWK(防水型) 跨接主板上CAL 开机，按printer(开关打印) 和zero(清零) 显示F1 按皮重光标移位按功能选择按开关/打印进入“F1.2”按功能选择1 进入标定状态 CAP 最大称量incr 分度值escal 空秤确认 ADD LD 加砝码，000000 通过皮重和功能键输入砝码值，确认 倒计时，CAL D 标定完成。按开关/打印退回正常显示状态。
L i p o2000瞬时转染细胞步骤 Stealth?RNAiorsiRNATransfection 以24孔板为例，其余规格的转染见表1 1中板，细胞密度为30-50%适宜。 注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。 2第二天（24-36小时后）每个孔转染方式如下： A将20pmolsiRNA溶于50ulOpti-mem无血清培养基中。 B将1ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。 C将AB两管混合，放置20min。 3转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。PlasmidDNATransfection DNA(ug):lipo2000(ul)=1:2-3 转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。1中板。 贴壁细胞：0.5-2X105cells/well，第二天待细胞密度达到70-80%时转染 悬浮细胞：4-8X105cells/well，中板后随即转染。 2转染。 A将0.8ugDNA溶于50ulOpti-mem无血清培养基中。 B将2ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。 C将AB两管混合，放置20min。 转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。 Table1.CultureSharedreagentsDNAtransfectionRNAitransfection
常用电子称/电子天平校正方法 1． ACS系列电子称（厦门巨林仪器有限公司）： 按下ON/TARE（开机键）并即时松开，再同时按下ON/TARE并保持不松开，直到显示“TEST”格不同显示数值不同）放上与显示值相同的砝码，然后在MODE功能键，显示“400”和“—”再加上相应砝码按MODE完成四次标定记录后，自动进入称重状态。 2． UCA电子计数称： 按任意键不放开机，按4键，放入砝码，输入砝码值，如5kg输入5，按住“单重设定”不放再按住“数量设定”同时松开即可。 3． ACS-1A1型（爱华计数称）： 按住“置零/去皮”开机，显示“CAL0” 再显示砝码值，放上相应砝码自动完成。 4． HF-3000N（日本电子天平）： 按住“风带行”不放，直到显示“CAL0”再按“印字”“风带行”“g /pcs/90”显示CAL2000，放上2kg砝码。按住“风带行”显示END结束。5． MB-4100S（setra 电子天平）： 按住“CAL”显示“4000.00”放上4kg砝码再CAL自动完成（按TARE/POWER 可转换砝码值）。 6． 100×0.01g（东莞宇衡电子称，电子天平）： 在空载状态下SET键，同时按下ON/OFF键，开机显示内码值，待稳定“0”出现，按住SET键直至显示“OOSAVE”放上砝码稳定后再按SET，显示“OOSAVE”按ON/OFF关机，开机即可。 7． 电子天平DJ-600J亚太电子： 按<↓>校正显示“CAL” 放上500g砝码,自动完成。 8． 厦门联贸电子UCA-型： 按住任意键不放开机,然后按4，再按归零键后放上砝码，输入砝码值，按住单重设定不放,再按“数量设定”同时放开即可。 9． SUC型按单重设定3秒，按“．”2次,放砝码，按数字倍数两次,自检完成.(如12kg放砝码6kg按2次即可) 10． BB-300型300g×0.01g电子天平： 按住“u”键开机，显示CAL按 键显示内码，按“→0←”键，显示“0”加砝码200g,按“90/A”记数键，显示“100、200、300”在200时按记数键即可。
二、脂质体转染操作步骤1、操作步骤[方法一]： (1)细胞培养：取6孔培养板(或用35mm培养皿)，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃CO2培养至40%~60%汇合时(汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL，B液：用不含血清培养基稀释2-50μgLR，终量100μL，轻轻混合A、B液，室温中置10-15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染(如出现沉淀可能因LR或DNA浓度过高所致，应酌情减量)。 (3)转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入1mL不含血清培养液。 (4)转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。 (5)其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。注意：转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。 2、快速脂质体转染法操作步骤如下[方法二]： (1)以5×105细胞/孔接种6孔板(或35mm培养皿)培养24小时，使其达到50~60%板底面积。 (2)在试管中配制DNA/脂质体复合物方法如下：①在1mL无血清DMEM中稀释PSV2-neo 质粒DNA或供体DNA。②旋转1秒钟，再加入脂质体悬液，旋转。③室温下放置5~10分钟，使DNA结合在脂质体上。 (3) (3)弃去细胞中的旧液，用1mL无血清DMEM洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入1mL DNA/脂质体复合物，37℃培养3~5小时。 (4)再于每孔中加入20%FCS的DMEM，继续培养14~24小时， (5)吸出DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜10%FCS的DMEM，2mL/孔，再培养24~48小时。 (6)用细胞刮或消化法收集细胞，以备分析鉴定。 (7) 3、稳定的脂质体转染方法如下：(1)接种细胞同前，细胞长至50%板底面积可用于转染。(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前(2)、(3)步骤。(3)在每孔中加入1mL、20%FCS 的DMEM，37℃培养48小时。(4)吸出DMEM，用G418选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染克隆，方法参照细胞克隆筛选法 细菌粘附侵入实验 1、将细胞按1.0×10? cells/ml的量接种于24孔板中，每孔1ml，置于37°的培养箱中培养3天直至细胞均勾铺满孔底，长满单层的细胞显微镜下可见细胞之间接触紧密，形成该细胞所特有的紧密连接。 2、实验前一天取E.coli菌株接种于含有相应抗生素的BHI培养基中，于37°培养箱中静置培养过夜。 3、取长满单层的HBMEC细胞，用预热的WXM培养基轻柔地将细胞洗3遍，以去除培养基中的双抗。 4、然后每孔中加入400μL培养基，于37°温箱中 5、静置期间取过夜培养的细菌，3000r/min离心5min收集菌体。弃去培养基，将菌体沉淀重悬于1mlXM培养基中。并用培养基调整菌液的OD???至0.2约为1.0×10? CFU/ml。 6、分别向24孔板中每孔细胞加入100μL细菌悬液（10?CFU,MOI约为100，使总体积达到500μL。轻轻晃动24孔板使细菌均勾分散。（若为侵入实验，则将24孔板于水平离心机中,1000r/min离心5min促使细菌与细胞的接触；若为粘附实验，则该步离心省略。
电子秤标定大全(1) 寺冈DC-685校正: 寺冈DC-685校正 （１）开机，按一下校正开关，出现DC-685 （２）按住…置零?不放，输入８７１５，松手出现CRLOO （３）按…＊?出现CRLSP （４）放全量程砝码，按…＊?等待，稳定后OK 华德机改计价秤校正方法: 先短路，输入——97.528——输入——放砝码——输入——砝码重量（刚放的砝码）——输入——输入 超众电子计价秤的校正方法: 开机按"166.99"----按"去皮"---按"1"---此时进入标定状态,金额窗口出现"--------"时,放半量程砝码(15KG)后----按"置零" ok 1、开机按"166.99"----去皮"---放半量程砝码----按"置零" ——按"去皮” 2、开机按16699----去皮"---放半量程砝码----按"置零" ——按"去皮” 上海友声ACS-15A怎么校准: 拆机换内码插头,开机出现内码,放满量程砝码,按"总计"---"3"----"总计"---"6"----"总计"---"9",关机换回内码插头OK. 30KG:拆机换内码插头,开机出现内码,放满量程砝码,按"总计"---"4"----"总计"---"6"----"总计"---"9",关机换回内码插头OK.(标定短路头,旧款短接SW1和SW2,新旧款短接JP) 昌帛磅厂GSE--450调校方法: 1、同时按【ZERO】【SELECT】，出现Keyin code； 2、再顺序按【SELECT】【ZERO】【PRIN】【UNITS】【TARE】； 3、按【ZERO】，出现ENTER—CALL； 4、再按【TARE】出现New Iero清除磅面一切东西，再按【TARE】，出现Keyin CaluT； 5、利用▲【PRIN】◣【UNITS】键入砝码重量。例如：秤台放上100Kg砝码，先按▲▲▲◣▲◣◣则出现100，如按错，则按【ZERO】即清除，再重新输入，再按【ENTER】出现AddCalwT; 6、放上砝码（例如100kg）再按【ENTER】，出现Cal on?;再按【ENTER】，出现SA VE MODE；再按【ENTER】，出现ENTER=EXIT；再按【ENTER】，完成；OK 联贸计重秤UWA校正方法: 1、先按住任何一个键开机，出现CAL； 2、再按【单位选择】，出现内码值； 3、再按【零点校正】，放上2/3MAX的砝码； 4、再按【扣重】键，出现校正值； 5、再按【扣重】键确定；校正完毕。OK 托利多PANTHER，KINGBIRD等仪表校正方法: 将PANTHER仪表的后盖板打开，将控制板上的S1-1置成ON，同时按下ENTER键和ZERO键，仪表显示“F1",即进入设定状态。 [F1.4]选择秤的分度值，按ENTER键 [XXXX]显示当前设置的分度值 用SELECT键选择合适的分度值，然后按ENTER键。 [CAL X]秤的校正 X=0跳过校正到F1.6 X=1进入校正程序 [E SCL]将负载从秤台上移去，按ENTER键 [15 CAL]仪表倒计数，并读取空秤值 [Add Ld]在秤台上加负载 [00000]用TARE和SELECT键组合输入所加重量值，不接受带小数点的值，按ENTER [15 CAL]仪表倒计数，并读取加载称量值 【CAL d】校正完成 寺冈DC-180校秤: 按下底盘上的标定开关，出现S-ON，按“置零”+8715---“置零”---【+】---“置零”---加满