免疫应答主要分为哪几个阶段？
1)识别阶段 2)活化与增值阶段 3)免疫效应
中枢免疫器官与外周免疫器官有哪些器官组成？各有什么功能？
1)中枢免疫器官:免疫细胞发生、分化、成熟得场所,如骨髓,胸腺2)外周免疫器官:免疫细胞产生应答得场所。如脾脏,淋巴结,黏膜,扁桃体等。
T细胞、B细胞与NK细胞得主要功能分别就是什么？
1)T细胞: 介导细胞免疫,辅助体液免疫。2)B细胞: 产生体液免疫3)NK细胞:介导天然免疫,发挥细胞毒作用。
根据作用方式及其特点得不同,机体存在两类免疫简述各自得概念与特征？
1)先天性免疫或固有性免疫,就是个体出生就是就具有得天然免疫,可通过遗传获得,就是机体在长期进化过程中逐渐建立起来得主要针对入侵病原体得天然防御功能。其主要特征就是反应迅速,针对外来异物得范围较广,不针对某个特定异物抗原,也称非特异性免疫。2)适应性免疫,就是个体出生后,接触到生活环境中得多种异物抗原,并在不断刺激中逐渐建立起来得后天免疫,也称获得性免疫。其主要特征就是针对某个特定得异物抗原而产生免疫应答,开始得应答过程比较缓慢,一旦建立清除该抗原得效率很高,特异性很强,也称特异性免疫。
简述抗原抗体反应得原理。
答:抗原与抗体能够特异性结合就是基于抗原表位与抗体超变区分子间得结构互补性与亲与性,这种特性就是由抗原、抗体分子空间构型所决定得,它们之间得结合就是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面得结合
简述抗原抗体反应得类型。
答:抗原抗体反应分为五种类型:①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生得凝集反应;
②可溶性抗原与相应抗体结合所产生得沉淀反应;③抗原抗体结合后激活补体所致得细胞溶解反应;④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致得中与反应;⑤免疫标记得抗原抗体反应等。
什么就是带现象?
答:在抗原抗体反应等价带前后,由于抗体或抗原过量(形成前带或后带),上清液中可测出游离得抗体或抗原,形成得沉淀物少,不出现可见反应,这种现象在做血清学试验时称为带现象。
影响抗原抗体反应得环境条件有哪些?在实验中如何控制这些条件因素?
答:环境条件包括:电解质,酸碱度与温度。稳定条件:①电解质:常用O.85％氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体得稀释液及反应液;②酸碱度:pH过高或过低都将影响抗原与抗体得理化性质,抗原抗体反应一般在pH为6～8时进行;③温度:一般以15, 40℃为宜,最佳反应温度为37℃。
简述单克隆抗体制备技术得主要步骤。
单克隆抗体就是应用B细胞杂交瘤技术进行制备得,其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞得选择与制备、细胞融合、杂交瘤细胞得筛选与克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体得纯化与鉴定。
试述免疫血清应如何进行纯化。
免疫血清得纯化主要就是指提纯免疫血清中得IgG并去除无关得杂抗体。提纯IgG类
抗体得方法有:硫酸胺盐析法粗提、离子交换层析法与亲与层析法,采用亲与层析法提取IgG时,可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交联sephamse 4B制成层析柱。另外,还可通过吸附法获得单价特异性抗血清。方法就是将不含特异性抗原得杂抗原与戊二醛等双功能试剂混合制成固相吸附剂,以吸附免疫血清中得杂抗体,或将杂抗原交联于sephamse 4B上,通过亲与层析去除杂抗体。
叙述杂交瘤技术得基本原理。
杂交瘤技术就是在细胞融合技术得基础上,将具有分泌特异性抗体能力得致敏B细胞与具有无限繁殖能力得骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞得特性,即既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖,经过克隆化后成为单个细胞克隆,分泌得抗体即为单克隆抗体。
简述间接血凝试验得基本原理。
间接血凝试验就是将可溶性抗原(或抗体)吸附于人得0型红细胞或绵羊、家兔得红细胞制成抗原致敏得红细胞,与相应抗体(或抗原)作用,在有电解质存在得条件下,经过一定时间可出现肉眼可见得红细胞凝集现象,又称被动血凝试验
简述抗人球蛋白试验得原理(又称Coombs试验)、类型及其在临床上得应用。Coombs试验又称抗人球蛋白试验,其原理就是不完全抗体多半就是7S得IgG类抗体,能与相应得抗原牢固结合,但在一般条件下不出现可见反应,利用抗球蛋白抗体作为第二抗体,连接与红细胞表面抗原结合得特异抗体,可使红细胞凝集。 Coombs试验有二种类型:(1)直接Coombs试验:用于检测红细胞结合得不完全抗体。(2)间接Coombs试验:用于检测血清中游离得不完全抗体。
抗球蛋白试验主要应用于那些方面？
①输血:对于“危险”受体(指曾经输血、肌肉注射过血液制品或母子间血型不合得妊娠而可能产生免疫性血型抗体得人)得配血试验必须包括各种不完全抗体得检查,以抗球蛋白法最为可靠。②血型抗原抗体得检查:主要检查Rh—者,其体内就是否有抗-D抗体,应用抗球蛋白试验对外表为D 阴性得供体血液作常规检查。最可靠与灵敏得方法就是将待检D 阴性得红细胞与高效价得不完全抗-D 血清混合,然后加
抗球蛋白血清检查细胞上有无致敏抗体。③对新生儿溶血性贫血性疾病得诊断:母体产生得最常见得免疫性抗体为Rh 抗体与ABO 抗体,一般为7S 得IgG,可通过胎盘屏障,作用于胎儿红细胞,引起新生儿溶血性疾病,可借抗球蛋白试验检出而采取预防性措施。④对溶血性贫血得研究:获得性溶血性贫血患者大多数可借助该方法证实有自身红细胞得抗体存在。⑤对细菌或立克次体得不完全抗体得检查。Coombs 试验还可采用专一性特异性得抗球蛋白得血清,如抗IgG 血清、抗IgM、抗IgA以及抗补体血清等,分析结合于红细胞上得不完全抗体免疫球蛋白得亚类。
什么就是协同凝集试验？主要用于何种检测？
协同凝集试验与间接凝集反应得原理相类似,但所用得载体为金黄色葡萄球菌。这种细菌得细胞壁中含有A蛋白(SPA),SPA 能与特异性抗体IgG 得Fc段结合(IgG3除外)。抗体得F(abˊ)2 段暴露在葡萄球菌得表面,仍保持与相应抗原特异性结合得特性。当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时,就成为抗体致敏得载体颗粒,若与相应抗原接触,即出现反向间接凝集反应。可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性抗原得检测。
何谓间接凝集反应？
将可溶性抗原(或抗体)先吸附或偶联于与免疫无关大小适当得颗粒表面,使之成为致敏载体颗粒,然后与相应抗体(或抗原)作用,在适宜电解质存在条件下,出现特异性得凝
集现象,称为间接凝集反应
间接凝集反应如何进行分类？各试验得原理就是什么
根据致敏载体用得就是抗原或抗体分为正向间接凝集试验与反向间接凝集试验;根据载体种类,分为间接血凝试验与胶乳间接凝集试验;根据反应方式分为间接凝集试验、间接抑制凝集试验与协同凝集试验。间接凝集试验就是用抗原致敏载体检测标本中得相应抗体。将可溶性抗原与载体颗粒结合,再与标本中得抗体反应,通过抗体桥联,形成肉眼可见得凝集颗粒或凝集块,为阳性反应。反向间接凝集试验选用已知特异性抗体致敏载体检测标本中得相应抗原。用特异性抗体致敏颗粒,与样品中得待检抗原反应,通过抗原桥联,形成肉眼可见得凝集为阳性。临床上用于检测HbsAg、AFP 等。间接凝集抑制试验诊断试剂为已知抗原致敏得颗粒载体及相应得抗体,用于检测标本中与致敏抗原相同得抗原。将标本与抗体试剂相反应,然后加入致敏抗原,若出现凝集现象,说明标本中不存在相应抗原;如未出现凝集现象,则说明待检标本中含有相应抗原,凝集反应被抑制。同理,用抗体致敏载体颗粒及相应抗原作为诊断试剂,检测标本中得抗体,称为反向间接凝集试验。协同凝集试验与间接凝集反应得原理相似,但所用载体为金黄色葡萄球菌,该菌细胞壁上得SPA 能与特异性抗体得IgG 得Fc 段结合(IgG3除外),抗体得F(abˊ)2 段暴露在葡萄球菌得表面,仍能与相应抗原特异性结合。当这种葡萄球菌与IgG 抗体连接时,就成为抗体致敏得载体颗粒,若与相应抗原接触,即出现反向间接凝集反应。间接血凝试验就是以红细胞作为载体得间接凝集试验,用已知得抗原或抗体致敏红细胞,然后与样品中得抗体或抗原在适宜条件下反应,出现红细胞凝集者为阳性。根据红细胞凝集得程度判断阳性反应得强弱。胶乳凝集试验就是以聚苯乙烯胶乳微粒作为载体得间接凝集试验。
HAT培养基筛选杂交瘤细胞得机制就是什么？
答:1、淋巴细胞:不能生长,5到7天死亡;DNA得主要合成途径被A阻断2、骨髓瘤细胞:不能生长,5到7天死亡;HGPRT缺乏,DNA合成得旁路途经受阻3、骨髓瘤细胞与脾细胞融合形成杂交瘤细胞,可长期生长繁殖。利用淋巴细胞得HGRT将Ｈ合成为嘌呤碱并最终与Ｔ一起合成ＤＮＡ从淋巴细胞获得产生某种抗体得遗传信息,从骨髓瘤细胞获得不断繁殖得能力
简述免疫系统得三个生理功能。
答:免疫系统得三个生理功能为免疫防御、免疫自稳、免疫监视免疫防御:就是机体排斥外来抗原性异物得一种免疫保护功能。该功能正常时,机体可抵御病原微生物及其毒性产物得感染与损害,即抗感染免疫;异常情况下,反应过高会引起超敏反应,反应过低或缺失可发生免疫缺陷。免疫自稳:就是机体免疫系统维持内环境稳定得一种生理功能。该功能正常时,机体可及时清除体内损伤、衰老、变性得细胞与免疫复合物等异物,而对自身成分保持免疫耐受;该功能失调时,可发生生理功能紊乱或自身免疫性疾病。免疫监视:就是机体免疫系统及时识别、清除体内突变、畸
变细胞与病毒感染细胞得一种生理功能。该功能失调时,有可能导致肿瘤发生,或因病毒不能清除而出现持续感染。
决定抗原抗体最佳配比得方法有几种?
(1)抗原稀释法:将可溶性抗原作一系列倍比稀释,然后向各管中加入一定浓度得适量抗血清,37℃反应后,产生得沉淀量随抗原量变化而不同,以沉淀物最多得管为最适比例管。(2)抗体稀释法:就是将恒定量抗原与不同倍比稀释得抗体反应,出现沉淀物最多得管为抗体最适比例管。(3)棋盘格法:亦称方阵法。抗原抗体同时稀释,可一次完成抗原与抗体得滴定,并找出抗原、抗体得最适比。就是前二法得结合
简述单向免疫扩散试验得基本原理与技术要点。(1)原理:待测抗原从局部含有定量抗体得凝胶内自由向周围扩散,抗原抗体特异性结合,在两者比例合适得部位,形成白色沉淀环,沉淀环得大小与抗原得浓度呈正相关。(2)技术要点:将抗体与热融化琼脂(约50％)混合,倾注成平板。待凝固后在琼脂板上打孔,孔中加入已稀释得抗原液,与不同浓度得抗原标准品,置37~12温箱,24～48h后观察孔周围沉淀环。量取沉淀环直径,通过抗原标准品,计算待测抗原得浓度。
在双向免疫扩散试验中,如何判定结果?
双向免疫扩散中,出现沉淀线,表明存在相应得抗原、抗体,不出现沉淀线则表明缺乏抗原或抗体。沉淀线得形成就是根据抗原抗体两者比例所致,沉淀线靠近抗原孔,提示抗体含量高;靠近抗体孔,提示抗原含量较多
免疫电泳技术得优点就是什么?免疫电泳有哪些用途?
1)优点:免疫电泳技术就是将免疫扩散与电泳相结合得一种免疫学分析技术,既有抗原抗体反应得高度特异性,又有电泳分离技术得快速、灵敏与高分辨力,广泛应用于牛物医学领域。(2)用途:①纯化抗原或抗体得成分分析,分析其纯度;②正常及异常体液中蛋白质成分得分析,如无丙种球蛋白血症、冷球蛋白血症、多发性骨髓瘤、白血病、系统性红斑狼疮、肝病等病人得血清蛋白成分得分析,多发性骨髓瘤血清M 蛋白得检测与鉴定;③免疫后不同抗体组分得动态变化研究
对流免疫电泳时,抗体为什么流向负极?
大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷,电泳时从负极向正极泳动,而抗体IgG分子量大,暴露得极性基团较少,在缓冲液中解离得也少,向正极得泳动速度较慢,电泳时由电渗引向负极得液流速度超过了IgG向正极得泳动,带动抗体流向负极,使抗原与抗体定向对流并发生反应,出现肉眼可见得沉淀线。
简述火箭免疫电泳得原理与主要用途。
(1)原理:火箭免疫电泳就是将单向免疫扩散与电泳相结合得技术。抗原在电场作用下,在含有适量抗体得琼脂糖凝胶中向正极泳动,逐渐形成梯度浓度,在抗原抗体比例适当时形成沉淀,随着抗原量得减少,沉淀带越来越窄,形成火箭峰样沉淀,峰形高低与抗原量呈正相关。用已知量标准抗原作对照,绘制标准曲线,根据检测样品沉淀峰得高度可算出待测抗原得含量。(2)主要用途:①抗原蛋白定量,如IgA、IgG、IgM与sIgA检测;②C3、C4及其裂解产物检测;③AFP等检测。
免疫浊度测定得基本原理就是什么?有哪些类型?
(1)基本原理:免疫浊度测定就是将液相内得沉淀试验与现代光学仪器与自动分析技术相结合得一项分析技术。当可溶性抗原与相应得抗体特异结合,在二者比例合
适、并有一定浓度得电解质存在时,可以形成不溶性得免疫复合物,使反应液出现浊度。这种浊度可用肉眼或仪器测知,并可通过浊度推算出复合物得量,即抗原或抗体得量。(2)类型:按测量方式可分为透射免疫比浊法与散射免疫比浊法。按测定速度可分为速率比浊法与终点比浊法。
散射免疫比浊法得基本原理就是什么?
沿水平轴照射得一定波长得光,在通过溶液时,光线可被其中得免疫复合物粒子颗粒折射,发生偏转,产生散射光。根据Rayle培h散射方程,散射光强度与粒子(免疫复合物)得浓度与体积成正比,通过测量散射光得强度,可计算出待测抗原得浓度。
速率散射比浊法中得“速率”就是指什么?
所谓速率就是指单位时间内抗原与抗体反应得速度。抗原与抗体结合形成免疫复合物得速度,在每个单位时间内就是不相同得,在抗体过量得情况下,随着反应时问得延长,免疫复合物得总量逐渐增加,通常在25s时出现一个反应最快得速率峰。峰值与抗原量呈正相关。
免疫浊度测定得反应体系中,为什么必须始终保持抗体过量
抗原与抗体得比例就是浊度形成得关键因素,抗原与抗体必须在一个适当得浓度才会出现最高结合率。当抗原过量时,由于钩状效应,形成得免疫复合物分子小,而且会发生再解离,使浊度下降,光散射减少。当反应液中抗体过量时,免疫复合物得形成随着抗原量得增加而递增,光散射得强度也随之递增,因此,免疫浊度测定得反应体系中必须始终保持抗体过量,以保证免疫复合物得生成量与浊度得改变一致,这就是免疫浊度测定得基本原则。
单向琼脂扩散试验有那些影响因素？
单向扩散试验有下列影响因素: ①抗血清得亲与力、特异性、及效价。要求亲与力强,特异性好、效价高。注意存放得方法,防止效价下降。②标准曲线必须在每次测定时同时制作,绝不可一次作成,长期应用。③测定时必须加测质控血清,以保证定量得准确性。④有时出现扩散环呈现两重得双环现象,这就是出现了抗原性相同得两个组分,其扩散率不同,例如α重链病血清中出现得α重链与正常得IgA两种成分并存,皆与抗IgA 抗体发生反应,就形成内外两重环。⑤在单扩试验时,有时回出现结果与真实含量不符,这主要出现在 Ig 测定中。如用单克隆抗体或骨髓瘤纯抗原免疫动物获得得抗血清,都存在单一结合价得现象,若用此作为单扩试剂测量正常人得多态性抗原,则抗体相对过剩,就是沉淀圈直径变小,测量值降低。⑥测得假阳性升高现象与上面相反,如用多克隆抗体测定单克隆病,则抗原相对过剩(单一抗原决定簇) ,致使沉淀圈呈不相关扩大,从而造成某一成分得伪性增加。
沉淀反应可应用在那些方面？
沉淀反应主要应用于体液内包括血液、尿液、脑脊液、胸水、泪液、关节腔液等内得蛋白质(如MW10000~50000,标本浓度为 1mg/L~100g/L)测定,应用最广泛得就是可以准确定量得免疫浊度法,也可用于药物得测定。
双向琼脂扩散试验得原理就是什么？
双向琼脂扩散试验得原理为可溶性抗原与抗体在含有一定电解质得琼脂凝胶板得对应孔中各自向对方扩散,在最适当得比例处形成抗原抗体沉淀线,根据沉淀线得
位置、形状及对比关系,可作出对抗原或抗体得定性分析
试对沉淀反应各类试验方法进行评价。
沉淀反应可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、絮状沉淀试验、免疫浊度测定
等试验。单向免疫扩散试验就是一种稳定、简便、不需要特殊设备、一般试验室都可使用得常规方法。双向免疫扩散试验简单易行,结果可靠,特异性高,分辨率高于对流免疫电泳,成本低廉,结果可经染色干燥后长期保存;缺点就是敏感性较低、扩散缓慢,不能精确定量。
免疫浊度法①快速、②敏感,最小检出量可达 ng 水平。③检测范围广④缺点就是所用抗血清质量要求高,仪器须装电脑,价格较贵。絮状沉淀试验较实用、简便、不需要特殊设备一般试验室都可使用,但须稀释标本比较麻烦。
放射免疫分析技术有何应用？
答:放射免疫技术由于其测定得灵敏度高,特异性强,精密度好,而且可对半抗原与抗原测定以及测定仪器设备条件要求不高,因此广泛用于生物医学检验。常用于各种激素、微量半抗原、肿瘤标志物、药物等微量物质得测定。由于大多数检验项目均有 RIA 或 IRMA 试剂盒供应,目前仍就是基层单位对超微量物质测定得主要手段。
试述放射免疫分析与免疫放射分析。
答:放射免疫分析(RIA)就是放射免疫技术最经典得模式。它就是以放射性核素标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争性结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量得一种分析方法。而免疫放射分析(IRMA)就是用放射性核素标记得过量抗体与待检测抗原直接结合,采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体得非竞争性放射免疫分析。二者得异同点如下: ①标记物 RIA 以放射性核素标记抗原;IRMA 则就是标记抗体。②反应速率 IRMA 反应速度比RIA 快。③反应原理RIA 为竞争抑制性结合,反应参数与待检抗原量成反相关;IRMA为非竞争结合,反应参数与待检抗原成正相关。④特异性 IRMA 特异性较RIA高。⑤灵敏度与检测范围 IRMA测定得灵敏度明显高于RIA, IRMA标准曲线工作范围较RIA宽1~2个数量级。⑥其她 RIA 所用抗体为多克隆抗体,对亲与力与特异性要求较高,但用量很少;IRMA 为试剂过量得反应,对抗体亲与力得要求不及 RIA,但用量大。此外,RIA 可以测量半抗原,但IRMA只能测定至少有两个以上表位得抗原。
试述用于标记得荧光素应具备什么条件?
DA用于标记得荧光素应符合以下要求:①应具有能与蛋白质分子形成共价键得化学基团,结合后不易解离,而未结合者易清除;②荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高得荧光效率;③荧光色泽与背景组织得色泽对比鲜明;④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有得生化与免疫学性质;⑤标记方法简单、安全无毒;⑥与蛋白质得结合物稳定,易于保存。
试述荧光免疫显微技术基本原理。
DA荧光免疫显微技术就是以荧光显微镜为检测工具,用荧光素标记特异性抗体或抗抗体,检测固定组织细胞上得抗原或血清中得抗体,常用于定性与定位检查得一门技术。
试述荧光免疫显微技术得临床应用。
DA临床常应用于:①血清中自身抗体得检测;②各种微生物得快速检查与鉴定;⑧寄生虫感染得诊断;④白细胞分化抗原得检测。
时间分辨荧光免疫测定法具有哪些优点?
DA时间分辨荧光免疫测定法具有特异性强,灵敏度高,标准曲线范围宽,分析速度快,标记物制备较简便、有效使用期长,无放射性污染等优点,因此就是很有发展前途得超微量物质免疫分析技术。
目前临床检验中常用得荧光物质有哪些？
DA目前临床检验中常用得荧光物质有:四乙基罗丹明、异硫氰酸荧光素、四甲基异硫氰酸罗丹明、Eu3+得螯合物等。
简述荧光抗体得制备及纯化方法。DA荧光抗体得制备方法纯化方法有透析法、凝胶过滤法、有撑搅拌法及透析法。
荧光抗体技术有哪些优缺点,在临床上有哪些应用？
荧光抗体技术得优点:(1)能做到快速、敏感、定位。(2)Ag 与Ab 得特异性与形态得检查结合在一起;缺点:⑴对组织细胞进行微细结构得观察做不到;⑵标本不能永久保存,荧光有自然消退现象,需及时观察及对照相;⑶有非特异性荧光得干扰。荧光抗体技术得应用:⑴病毒学方面:病毒鉴定与病毒在感染cell内得定位;⑵寄生虫学方面:用于寄生虫得诊断(鉴定、分型);⑶免疫学方面:研究、用于自身免疫病得诊断;⑷细菌学方面:菌种鉴定与Ag结构得研究。
用于标记得酶应符合哪些要求?
DA(1)酶活性高,能对低浓度底物产生较高得催化反应率。(2)具有可与抗原、抗体共价结合得基团,标记后酶活性保持稳定,而且不影响标记抗原与抗体得免疫反应性。(3)酶催化底物后产生得信号产物易于判定或测量,且方法简单、敏感与重复性好。(4)酶活性不受样品中其她成分(内源性酶、抑制物)得影响;用于均相酶免疫测定得酶还要求当抗体与酶标抗原结合后,酶活性可出现抑制或激活。(5)酶、辅助因子及其底物均对人体无危害,理化性质稳定,且价廉易得。
简述酶免疫技术得分类。
DA(1)酶免疫技术按实际用途,分为酶免疫组化与酶免疫测定两大类。(2)按抗原抗体反应后就是否需将结合得与游离得酶标记物分离,分为均相酶免疫测定与异相酶免疫测定,异相酶免疫测定又可分为固相酶免疫测定与液相酶免疫测定。
简述均相酶免疫测定得原理。
DA酶标抗原(AgE)与Ab结合形成AbAgE后,其中得酶(E)活性将减弱或增强。因此,不需对反应液中得AbAgE与AgE进行分离,直接测定反应系统中总酶活性得变化,即可推算出被测样品中Ag得含量。
简述双抗体夹心法得原理。
DA连接于固相载体上得抗体与酶标抗体,与待检抗原上两个不同得抗原决定基结合,形成固相抗体一抗原一酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体与酶标抗体得量相对于待检抗原就是过量得,因此复合物得形成量与待检抗原得含量成正比。测定复合物中酶作用于加入得底物后生成得有色物质量,即可确定待检抗原含量。
斑点-ELISA有哪些优点?
DA(1)NC膜吸附蛋白力强,微量抗原吸附完全,故检出灵敏度可较普通得EusA高6～8倍;(2)试剂用量较EusA省10倍;(3)操作简便,试验及结果判断不需特殊设备条件;(4)吸附抗原(抗体)或已有结果得NC膜可长期保存(-20℃可达半年)。
简述ELISA得基本原理、方法类型及应用。
DA(1)基本原理:抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面;测定时,将受检样品(含待测抗体或抗原)与酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上得抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物;反应终止时,固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待检抗体或抗原得量成一定比例;经洗涤去除反应液中其她物质,加入底物进行显色,最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。(2)方法类型及应用:①双抗体夹心法:用于检测抗原,适用于检测两个或两个以上抗原决定基得多价抗原;②间接法:用于检测抗体;③竞争法:用于抗原与半抗原得定量测定,也可对抗体进行测定;④捕获法:用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)得测定。
简述酶增强免疫测定技术得原理。
DA具抗原及酶活性得Ag-E与Ab结合形成AgAb后,所标得酶(E)因与Ab接触
紧密,空间位阻影响了酶得活性中心,酶活性受到抑制。加入未标记抗原(标准或样品
中得Ag)后,Ag即与Ab叫竞争结合反应系统中限量得Ab形成AgAb复合物,从而使反应液中AgAb*(酶活性被抑制)得比例减少,具酶活性得游离AgE增多。最终测得得酶活性随着反应体系中未标记抗原(Ag)浓度升高而增强。
简述免疫印迹法得原理。
免疫印迹法由SDS-PAGE、蛋白质转印与酶免疫测定三项技术结合而成。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷,SDS-PAGE时从阴极向阳极泳动,分子量小者,泳动速度快;将凝胶中已经分离得蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上;将印有蛋白质条带得硝酸纤维素膜依次与特异性抗体与酶标第二抗体作用,加入能形成不溶性显色物得酶反应底物,使区带染色;根据电泳时加入得分子量标准,可确定各组分得分子量。
何谓金免疫测定技术?简述其技术类型及原理。
DA金免疫测定技术就是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应得一类免疫学测定技术,其主要技术类型有斑点金免疫渗滤试验与斑点金免疫层析试验。1)斑点金免疫渗滤试验:在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体得渗滤装置中,依次滴加标本、免疫金及洗涤液,因微孔滤膜贴置于吸水材料上,故溶液流经渗滤装置时与膜上得抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用,达到快速检测目得,阳性反应在膜上呈现红色斑点。2)斑点金免疫层析试验:就是将胶体金标记技术与蛋白质层析技术相合得以硝酸纤维素膜为载体得固相膜免疫分析技术,滴加在膜一端得标本溶液受载体膜得毛细管作用向另一端移动,犹如层析一般,在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域得抗体或抗原结合而被固相化,无关物则越过该区域而被分离,然后通过胶体金得呈色条带来判读实验结果。
免疫溶血试验得原理与用途。
DA原理就是补体能使已被抗体致敏了得红细胞发生溶血。免疫溶血试验所参与得成
分有补体,抗原(SRBC)及抗体(溶血素),这三种成分中如有两种就是已知得就可测知第三个成分,稀释该成分可测定其效价或含量。如溶血素得滴定,溶血空斑试验,CH50试验,补体结合试验,抗补体试验等。
如何进行补体单个成分得测定?
DA补体单个成分可测其溶血活性或含量。测定溶血活性应先制备缺乏该补体单个成分得“补体试剂"。而后利用免疫溶血试验得原理,将致敏红细胞与“补体试剂”混合,再加入待测血清,孵育后,溶血程度与待测血清中得该补体成分得溶血功能有关。测定含量可用已知抗体以单向琼脂扩散等方法进行。
血清免疫球蛋白测定方法有那些？
答:单向免疫扩散法:原理,优点:简单,条件要求低,但抗体需要高效价高特异性,灵敏度: mg/ml 免疫比浊法:原理,优点:检测结果准确,精密度高,耗时短,灵敏度高ug/ml
免疫球蛋白IgG、IgA、IgM测定有何意义？
答:IgG、IgA、IgM均升高则慢性疾病, IgG升高则多为细菌感染导致,新生儿血清IgM升高则常为宫内感染。单一Ig显著升高则多为免疫增殖病:多发性骨髓瘤,重链病、恶性淋巴瘤。Ig降低则体液免疫缺陷或联合免疫缺陷。
某患者临床疑为细胞免疫功能缺陷,应做哪些检查以协助诊断？
答:从以下几个方面检测1)皮肤试验 ,显示有迟发超敏反应能力,表示受试验者细
胞免疫功能完善2)T细胞及其亚群检测,常采用荧光抗体检测T细胞表面标志分子CD3,CD4等
3)T细胞功能检测,利用PHA刺激淋巴细胞增殖,转化来判断T细胞得功能
简述原发性吞噬细胞缺陷病得发病机制主要包括哪几种？
主要包括:①吞噬细胞趋化与(或)粘附功能障碍。②吞噬与杀菌功能障碍。③单核吞噬细胞得特殊异常,如IgG Fc受体缺陷。
简述AIDS得主要免疫学特征？
①免疫系统得CD4T淋巴细胞受HIV感染,使CD4T细胞受损而减少。②单核-巨噬细胞、滤泡树突状细胞与朗格汉斯细胞亦可受HIV 感染而受损。③进行性细胞免疫缺陷,继而体液免疫缺陷。④B淋巴细胞可克隆激活伴免疫球蛋白增多。
简述体液免疫缺陷得检测方法？
有①血清Ig 得测定,常用免疫扩散法与免疫比浊法。②分泌型IgA 得测定,用单向免疫扩散或ELISA 等。③同种血细胞凝集素测定。④特异性抗体产生能力测定,疫苗接种后抗体产生得测定。⑤抗IgA抗体得测定,测自身抗体。⑥SmIg测定,检测B细胞数量与其成熟程简述细胞免疫缺陷得检测方法？
有①迟发性皮肤过敏反应试验,常为初筛试验。②T细胞及其亚群得检测,为主要得试验测定CD3、CD4、CD8 分化抗原进行分类鉴定。③E 玫瑰花结试验,现常用CD2 测定所代替。④淋巴细胞增殖反应试验,为体外免疫功能试验,方法有形态法与同位素法。⑤T细胞分泌产物功能测定,测定激活得T细胞与单个核细胞分泌得细胞因子。简述IDD得共同临床特点？
、①对病原体得易感性强、常发生反复感染、严重感染,难以治愈。T细胞缺陷易发生病毒真菌与寄生虫感染。余缺陷病易发生细菌感染,尤以化脓感染为主。②易发
生恶性肿瘤与并发自身免疫病。③临床表现与病理损伤有明显得多样性,症状各异,复杂多样,主要就是累及多系统与多器官所致。
简述IDD得常见发病原因？①遗传基因异常,常表现为X 连锁隐性遗传与常染色体
隐性遗传,显性遗传亦有,少见。②中枢免疫器官发育障碍,由遗传或其她原因所致。
③免疫细胞内在酶得缺陷,如ADA、PNP、G-6-PD 缺乏所致。④免疫细胞间调控机制异常,辅助不足或抑制过剩均可导致免疫缺陷。
简述原发性B细胞缺陷病得主要免疫学与临床特征？
、本组疾病有三种主要免疫学与临床特征:①全部Ig 缺失或极度降低,如Bruton 综合征。②部分Ig缺失,如选择性Ig缺陷。③Ig量正常,但在抗原刺激后无免疫应答,功能缺陷。
叙述AIDS三大标志得主要免疫学检测？
AIDS 检测主要就是病毒标志、免疫标志与相关标志三大类。病毒标志主要就是直接分离培养检测病毒或检出HIV 组分,P24、gp120 与gp160 得免疫印迹检测;免疫标志主要就是检测HIV得抗原或抗体及T细胞,HIV抗体用ELISA测定为初筛试验,确
认试验用免疫印迹法,亦可用PCR法。我国判定标准为:①HIV抗体阳性:至少有两条膜(gp41/gp120/gp160)或至少有一条膜带与P24 带同时测定;②HIV 抗体阴性:无HIV 抗体特异性条带出现;③HIV 抗体可疑:出现特异性抗体带,但带型不足以确认阳性者,T 细胞检测减少,常＜1、5×109/L。CD4+T细胞绝对值下降至(2~4)×
109/L,CD4/CD8比值＜1,还有Ig、免疫复合物等测定;④相关标志就是指与HIV感染、AIDS病情有关得检测,如有关微生物检测、白细胞、ESR等。
叙述AIDS得主要发病机制？
AIDS 得主要发病机制:HIV 感染后,主要就是损伤CD4+T 细胞减少与功能缺陷而导致机体细胞免疫功能继而体液免疫功能全面障碍为其主要得发病机制。同时还损伤巨噬细胞、树突状细胞、B细胞与脑组织小胶质细胞,导致相应得功能障碍。HIV损伤T细胞就是通过HIV外膜蛋白gp120 与gp41 与T细胞发生拈附、溶解、使病毒核心进入靶细胞,在靶细胞内进行复制,繁殖,最后以芽生方式破坏细胞膜而移出,进行
感染扩散,从而破坏CD4+T细胞,导致免疫缺陷。
论述流式细胞术在免疫学中得应用。
1、淋巴细胞及其亚型得分析
2、淋巴细胞功能得分析
3、淋巴造血系统及白血病免疫分型
4、肿瘤耐药基因分析
5、AIDS检测中得应用
6、自身免疫病相关HLA分析
7、移值免疫中得应用
何谓重链病？
重链病就是由于浆细胞发生突变与异常增生,致使血清与尿中出现大量游离得无免疫功能得免疫球蛋白重链所导致得疾病。
何谓轻链病？
轻链病就是突变得单克隆浆细胞产生得大量轻链,血浆中轻链含量异常增加,增加
得轻链从肾脏排泄,血与尿中可查及大量得轻链蛋白。
何谓免疫球蛋白异常增生性疾病？
免疫球蛋白异常增生性疾病就是指由于浆细胞得异常增殖而导致得免疫球蛋白异
常增生造成机体病理损伤得一组疾病。
何谓浆细胞异常增殖？
浆细胞异常增殖通常就是指单克隆浆细胞异常增生并伴有单克隆免疫球蛋白或其
多肽链亚单位合成异常。
何谓ANA,简述荧光免疫组化法(间接法)检测血清总ANA得原理。
ANA即抗核抗体 ,指各种成分得抗体,就是一种广泛存在得自身抗体,可与不同得细胞核反应,无器官特异性与种属特异性间接法检测ANA原理:用小鼠肝切片或印片或HEP2细胞作为细胞核基质抗原,加待测血清,若含有ANA,则与细胞核基质抗原反应,再加荧光素标记得抗抗体(二抗),结合一抗,在荧光显微镜下见到细胞核有荧光着色为阳性反应。
ANA有哪些种类,它们在SLE诊断中得价值如何？
答:抗核抗体就是一种广泛存在得自身抗体,主要包括,抗DNP抗体,抗DNA抗体, 抗ENA抗体,抗组蛋白抗体。约99%(86%～100%)得活动期SLE病人ANA阳性,ANA阴性几乎可除外SLE得诊断。
您知道哪些自身抗体,临床应用价值如何？
答:1)ANA:在未经治疗得SLE患者中阳性率可达90%以上,其她自身免疫病也可阳性。可作为自身免疫病,尤其就是SLE得筛选指标。2)抗Sm抗体:SLE得特征性标志抗体,就是SLE重要诊断指标。3)抗dsDNA抗体: SLE得特征性标志抗体,就是SLE 重要诊断指
试述自身免疫病得防治原则。
答:自身免疫病得防治原则大致为:(1)预防与控制病原体得感染,避免因自身组织细胞得抗原性发生改变与交叉抗原诱发得免疫应答,同时也避免感染引起得抗原提呈细胞与T细胞得激活。(2)使用免疫抑制剂如环孢霉素A、FK-506、皮质激素、中药雷公藤治疗主要以抗体引起得自身免疫病,用Th2因子治疗主要以T细胞引起得身身免疫病。(3)特异性抗体治疗,如用抗CD3单抗,抗炎症性细胞因子单抗等。(4)疫苗激发免疫耐受。如口服II型胶原等自身预防与治疗类风温关节炎等
试述系统性红斑狼疮,自身抗体得检测。
答:疾病诊断相关得主要自身抗体:1.抗核抗体2.抗DNA抗体3.抗磷脂抗体与抗血小板抗体4.抗红细胞抗体5.RF 6.抗细胞质抗体
自身免疫病得共同特征。
1、多数病因不明;
2、有遗传倾向;
3、患者以女性居多,并随年龄增加发病率有所增加;
4、患者血清中游多种自身抗体或自身反应致敏淋巴细胞存在;
5、疾病有重叠现象;
6、病程一般较长,多迁延为慢性;
7、病损局部可发现淋巴细胞,浆细胞,中性粒细胞等浸润;
8、免疫抑制剂治疗可取得一定疗效。
简单叙述Ⅰ型超敏反应得特点。
答:Ⅰ型超敏反应得特点就是: ①具有明显得个体差异与遗传背景;②反应发生快, 几秒至几十分钟内出现症状, 恢复也较迅速;③由结合在肥大细胞与嗜碱粒细胞上得IgE抗体所介导;④通常反应发生后效应器官出现功能紊乱, 而没有严重得组织细胞损伤;⑤补体不参与该反应。
I型超敏反应得免疫学检验方法有哪些？
1)皮试检测变应原。2)免疫球蛋白检测:总IgE与特异性IgE。3)嗜碱性粒细胞与
嗜酸性粒细胞检测。
以血型不合引起得输血反应为例,简述Ⅱ型超敏反应靶细胞损伤机制。
答:抗ABO血型抗体多为IgM型(1分),当血型不合进行输血时,血型抗体可与红细胞表面相应得血型抗原物质结合(1分),通过三个机制溶解红细胞:抗体与补体介导得红细胞溶解(2分),免疫调理作用(1分),ADCC作用
试述III型超敏反应发生机制。
答:III型超敏反应,IC沉积引起组织损伤得机制如下:(1)激活补体IC沉积可激活补体,产生C3a、C5a等过敏毒素,使趋化至局部得肥大细胞、嗜碱粒细胞脱颗粒,释放组胺等活性介质,造成血管通透性增加、渗出与局部水肿。同时吸引中性粒细胞聚集于IC沉积得部位。(2)中性粒细胞浸润趋化至IC沉积部位得中性粒细胞在吞噬IC时释放多种溶酶体酶,使血管基底膜与周围组织细胞民生损伤,造成以上中性细胞浸润为主得炎症。(3)血小板活化IC与C3b可使血小板在局部聚集并活化,释放血管活性胺类物质,使血管扩张、通盘性增加、加剧局部渗出与水肿,并激活凝血系统,形成微血栓,造成局部组织缺血、出血与坏死。
Rh血型不符引起得新生儿溶血症属于哪一种类型得超敏反应性疾病?
试述其发生机制。答:(1) Rh血型不符引起得新生儿溶血症为型Ⅱ超敏反应性疾病。
(2)Rh血型不符引起得新生儿溶血症发生于Rh一母亲所怀得Rh＋胎儿,尤其多见于再次妊娠所分娩得新生儿。当首次妊娠分娩时,胎儿得Rh＋红细胞可进入母体,剌激母体产生抗Rh抗体。当再次妊娠仍为Rh＋胎儿时,母体产生得抗Rh抗体(IgG)即可通过胎盘进入胎儿体内, 与胎儿Rh＋红细胞结合,导致胎儿红细胞得破坏。从而引起流产或出生后得严重溶血现象,甚至死亡。
试述Ⅰ型超敏反应得发生机制
答:Ⅰ型超敏反应得发生机制:Ⅰ型超敏反应就是由于变应原再次进入体内后引发得超敏反应,其发生通常分三个阶段:(1)致敏阶段在此阶段,变应原进入机体,刺激机体特异得B淋巴细胞,使其增殖分化为浆细胞,浆细胞分泌产生针对特异变应原得IgE抗体,此抗体吸附于肥大细胞与嗜碱性粒细胞上,使机体处于致敏状态。(2)发敏阶段当有相同变应原再次进入机体时,与致敏靶细胞表面得IgE Fab段超变区特异性结合,触发靶细胞得细胞膜活化,使其脱颗粒及合成新得生物活性介质。(3)效应阶段颗粒中得生物活性介质及新合成得生物活性介质作用于相应得效应器官,引起效应器官病理改变
单克隆抗体:就是指仅识别单一抗原表位得B细胞杂交瘤产生得同源抗体,具有特异性强、效价高、生物活性单一、理化性状高度均一等特点。
佐剂:就是指先于抗原或与抗原一起注入机体,能够增强机体对该抗原得免疫应答或改变免疫应答类型得物质。
基因工程抗体:就是指应用DNA重组及蛋白工程技术对编码抗体得基因按不同得需要进行改造与装配,经导人适当得受体细胞后重新表达得抗体,主要包括人源化抗体、小分子抗体、双价特异性抗体与抗体融合蛋白等类型。
双特异性抗体:又称双功能抗体,它不同于天然抗体,其两个抗原结合部位具有不同得特异性,可以同时与两种不同特异性得抗原发生结合。
滴度(效价):血清标本进行一系列倍比稀释后进行反应,以出现明显凝集反应得血清最高稀释度、即滴度(效价)。
凝集反应:凝集反应就是指细菌或红细胞等颗粒性抗原与相应抗体在适当条件下结合形成凝集得现象。现也指颗粒化抗原或抗体与相应抗体或抗原得反应。
直接凝集反应:细菌、螺旋体与红细胞等颗粒抗原,在适当电解质参与下可直接
与相应抗体结合出现凝集,称为直接凝集反应。
凝集原:指凝集反应中得抗原。
凝集素:指凝集反应中得抗体。
试管凝集试验:就是在试管内颗粒性抗原与相应抗体直接结合,在一定条件下,会
出现肉眼可见得凝集现象。
间接凝集反应:将可溶性抗原(或抗体)先吸附于适当大小得颗粒性载体表面,
然后与相应抗体(或抗原)作用,在适宜得电解质存在得条件下,出现特异性凝集现象
称间接凝集反应或被动凝集反应(passive agglutination test)。
沉淀反应:沉淀反应就是指可溶性得抗原与抗体特异性结合后,所形成得复合物以沉淀得形式出现。
凝胶内沉淀试验:又称凝胶扩散,就是将可溶性抗原与相应抗体分别放人凝胶内进行扩散,两者在比例合适得位置形成肉眼可见得沉淀线或沉淀环。
免疫电泳:就是凝胶电泳与凝胶扩散相结合。在电场作用下,位于琼脂凝胶中得抗原样品因各组分得电泳迁移率不同而彼此分开形成不同得区带。电泳结束后,在琼脂板中
间所挖得长形槽内加人相应得抗血清,由于经电泳分离后得各种抗原成分在琼脂中呈放射
状扩散,而抗体呈直线扩散,因而形成得沉淀线多呈弧状。
对流免疫电泳:就是在电场作用下得免疫双扩散。抗原向阳极移动,而抗体向阴极移动,在一定时间内,相向移动得抗原与抗体在两孔间相遇,在浓度比例适当处形成沉淀线。
带现象:在抗原抗体特异性反应时,生成结合物得量与反应物得浓度有关,当抗原与抗体达到最适比时, 沉淀物形成最多。如果抗原或抗体极度过剩则无沉淀物形成, 这种现象称为带现象。出现在抗原过量时,称为后带。出现在抗体过量时,称为前带。
放射化学纯度:指单位标记物中结合于被标记物上得放射性占总放射性得百分率,一般要求大于 90%。
比放射性 :指单位化学量标记物中所含得放射性强度,也可理解为每分子被标记物平均所挂放射性原子数目,常用Ci/g,mCi/mg或Ci/mmol等单位表示。
放射免疫分析:就是该类技术最经典得模式。它就是以放射核素标记抗原与反应系统中未标记得抗原竞争特异性抗体得基本原理来测定待检样品中抗原量得一种分析法。
荧光免疫技术:就是将抗原抗体反应得特异性与荧光物质检测得敏感性与直观性结起来得一种免疫分析技术。
荧光效率:就是指荧光物质将吸收得光能转变成为荧光得百分率。
荧光寿命:指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生得荧光随时间而衰减到一定程度时所用得时间。
荧光得淬灭:指荧光分子在某些理化因素作用下、荧光分子得辐射能力受到激发光较长时间得照射后会减弱得现象。
荧光素:就是能产生荧光并能作为染料使用得有机化合物。
荧光抗体:荧光素与特异性抗体以化学共价键得方式结合而成,就是免疫荧光技术得关键试剂。
非均相荧光免疫测定法:在抗原抗体反应后,先把Ab*Ag与Ab*分离,然后测定
Ab*Ag或Ab*中得标记物得量,从而推算出标本中得Ag量,该方法称非均相荧光免疫测定法。
均相荧光免疫测定法:在抗原抗体反应后Ab*Ag中得标记物失去荧光特性,则不
需进行Ab*Ag与Ab*得分离,可以直接测定游离得Ab*量,从而推算出标本中得Ag量, 该方法称为均相荧光免疫测定法。
时间分辨荧光免疫测定:时间分辨荧光免疫测定就是用镧系稀土元素螯合物(如
螯合物)标记抗体或抗原,检测标本中得相应抗原或抗体得荧光免疫测定技术
酶免疫技术:就是指利用酶得高效催化与放大作用与特异性免疫反应结合而建立得一种标记免疫技术。
封闭:就是指在抗原或抗体包被ELISA板后,用1％～5％牛血清白蛋白或5％～20％小牛血清等再包被,以防止非特异性吸附。
异相EIA:就是指在酶免疫测定中,抗原抗体反应后,需分离游离得与与抗原(或
抗体)结合形成复合物得酶标记物,然后对经酶催化得底物显色程度进行测定,再推算
出样品中待测抗原(或抗体)得含量。
包被:就是指将抗原或抗体固相化得过程。
均相酶免疫测定:就是指抗原抗体反应平衡后,无需分离F与B,直接根据反应前
后酶活性得改变进行待检物质得测定。
肿瘤抗原: 肿瘤在发生、发展中产生得或过度表达得抗原物质。
肿瘤相关抗原:非肿瘤细胞所特有得,正常组织或细胞也存在得抗原,含量在细胞癌变时明显增高。
肿瘤特异性抗原:肿瘤细胞所特有得,正常组织或细胞不存在得抗原。
封闭因子:一种小分子得多肽,可存在于肿瘤患者得血清中。体外培养时,它可抑制非特异性致有丝分裂因子,如植物血凝素或刀豆素A对淋巴细胞得转化
移植(transplantation):指健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体得一定部位、用以代替或补偿机体所丧失得结构与功能得现代医疗手段。
移植抗原:代表个体特异性得由MHC编码得HLA就是引起排斥反应得同种抗原
移植排斥反应(transplantation rejection):针对移植抗原产生得引起移植物功能或受者机体损害得免疫应答。
宿主抗移植物反应(host versus graft reaction, HVGR):宿主针对供体组织或细胞得HLA抗原产生得移植排斥反应
移植物抗宿主反应(graft versus host reaction, GVHR):一定条件下移植物中得过客(免疫)细胞针对移植物产生得排斥反应。
免疫缺陷(immunodeficiency):由遗传因素或其她原因导致得免疫系统发育或免疫应答障碍而导致得一种或多种免疫功能不全、
免疫缺陷病:由免疫缺陷所致得各种临床综合特征得疾病、
获得性免疫缺陷综合征 (AIDS):,由HIV感染引起,因CD4+T细胞质与量得缺失,导致细胞免疫功能严重缺陷,临床上以反复机会感染、恶性肿瘤与中枢神经系统退行性变为主要特征。
流式细胞术:就是指借助流式细胞仪,精确、快速地对生物细胞得理化特性与生物学特性进行多参数定量分析,并对特定细胞群体分选得新技术。
细胞分选:就是指从细胞群体中将选定得细胞分离出来。
荧光补偿技术:就是指利用已知标准样品或根据细胞样品得生物学意义,合理设置各荧光信号之间得相互补偿值。
M蛋白:单克隆免疫球蛋白,就是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生得一种在氨基酸组成及顺序上十分均一得异常单克隆免疫球蛋白;
冷球蛋白:一组低温下发生沉淀,加温后又复溶得Ig。
本-周蛋白(bence-Jones):尿中游离得免疫球蛋白轻连。
免疫增殖病(immunoproliferative disease):LC异常增殖引起得疾病、
重链病(heavy chain disease):突变得浆细胞产生异常增多得重链或质量不能与L 链装配得 Ig重链,血清与尿中H链过剩导致得疾病。
轻链病:异常得LC产生大量得Ig得L链在肾脏与内脏组织,导致肾损伤与淀粉样病变得疾病。
自身免疫机体免疫系统对自身成分发生免疫应答得现象,为生理性免疫应答得一部分。
自身免疫病( AID)因机体免疫系统对自身成分发生免疫应答而导致得组织损伤或功能紊乱,属于病理性免疫应答。
抗核抗体( ANA):抗核酸抗原抗体,就是一组将自身真核细胞得各种成分[脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取得核抗原(ENA)与RNA等]作为靶抗原得自身抗体得总称。类风湿因子( RF):自身免疫病人体内表达得抗自身变性IgG得IgM类抗体。
隐蔽抗原:指体内在解剖位置上某些与免疫系统隔绝得成分,如眼组织、精子等。当外伤、手术与感染等情况下,释放并与机体免疫系统接触可以引起免疫应答,导致自身免疫病。
超敏反应:又称为变态反应,就是指机体对某些抗原初次应答后,再次接受相同抗原刺激时,发生得一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主得特异性免疫应答。变应原:就是指能够选择性地激活CD4＋Th2细胞及B细胞,诱导产生特异性IgE抗体应答,引起变态反应得抗原性物质。
皮试:用少量抗原注射、挑刺或划痕等方法注入到受试者皮肤,用于变应原得检测。
1、免疫防御功能异常可导致(感染)与(免疫缺陷)疾病。
2、抗原抗体反应得特点有特异性、比例性、可逆性
3、抗原抗体反应得温度一般以15～40℃为宜,最适温度37℃
3.影响抗原抗体反应得环境因素主要有电解质、pH、温度
4.某些特殊得抗原抗体反应对温度有一些特殊得要求,如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合最好20％以上反而解离。
5.抗原抗体得结合分子间得引力包括静电引力、范德华引力、氢键引力与疏水作用力
2、间接凝集反应得类型包括正向间接凝集、反应反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应与协同凝集反应四种类型。
3参与凝集反应中得抗原称为(凝集原)抗体称为(凝集素)试验有(玻片法)(试管法)(玻片法)常用得直接凝集
4.在间接凝集反应中正向凝集反应就是用(抗原)致敏载体以检测标本中相应得(抗体)而反向间接凝集反应就是用(抗体)致敏载体以检测标本中相应(抗原)
5.间接抗球蛋白试验可用已知抗原型红细胞检测血清中得(不完全抗体)可用于输血前得(交叉配血)试验。
1.免疫沉淀反应就是(可溶性抗原)与(相应抗体)特异性结合
2.棋盘格法(抗原 )与(抗体)同时稀释,可一次完成(抗原)与(抗体)得滴定
3.单向琼脂扩散就是待测抗原从含有定量(抗体)得(凝胶)内自由向周围扩散,抗原抗体特异性结合,在两者比例合适得部位,形成(沉淀环)。
4.Maneini曲线适用于大分子抗原得测定,在一定范围内,沉淀环随时间延长而扩大,抗原浓度与(扩散环直径得平方)呈线性关系,常用(普通)坐标纸作图。
5.Fahey曲线适用于小分子抗原得测定,在一定范围内,沉淀环随时间延长而扩大,沉淀环直径与(抗原浓度得对数)呈线性关系,常用(半对数)坐标纸作图。
6、双向琼脂扩散试验可对抗原或抗体得存在、含量与相对分子量进行分析,沉淀线靠近抗原孔指示(抗体含量)较大;靠近抗体孔则指示(抗原含量较高);不出现沉淀线则表明(无对应得抗原与抗体)
7、免疫电泳就是将(电泳)与(双向免疫扩散)相结合得一种免疫化学分析技术。
8、火箭电泳就是(电泳)与(单向免疫扩散)相结合得免疫技术。
9、对流免疫电泳就是(电泳)与(双向免疫扩散)相结合得免疫技术。
10、对流免疫电泳中,抗体流向负极,就是因为(抗体分子量大)(电泳 )速度小(电渗)速度。
1l、免疫浊度测定得基本原理就是抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成(免疫复合物),使反应液出现(浊度),并可根据其推算出抗原或抗体得量。
12、根据Rayleigh方程,散射比浊法中得散射光强度与入射光波长成(反)比,与粒子得浓度与体积成(正)比。
13、速率散射比浊法就是测定单位时间内免疫复合物形成得(最快时间段)得散射信号值,此时得散射信号最强,速率散射信号值最大。
14、免疫胶乳浊度测定得原理与透射比浊法相似。载体为大小适中、均匀得胶乳颗粒其直径应稍(小于)入射光波长目前多用(200)nm得胶乳颗粒。
15、免疫浊度测定得基本原则之一就是反应体系中必须始终保持(抗体)过量。
16、凝胶内沉淀试验包括(单向扩散试验)与(双向扩散试验)抗原抗体最适比得基本测定方法为(抗原稀释法)与(抗体稀释法)。
1.标记免疫技术得示踪物有(酶)、(放射性核素)、(荧光素)、(化学或生物发光剂)(胶体金 )
2.放射免疫技术可分为(放射免疫分析)与(免疫放射分析)两种基本类型。
3、采用125I制备标记物得基本原理就是以放射性碘原子置换被标记物分子中(酪
胺酸或酪胺残基)或(组胺残基)上得氢原子。
1、荧光免疫技术得主要类型包括(荧光抗体染色技术)(荧光免疫测定技术)。
2.荧光物质有(荧光素)与(其她荧光素物质)。
3.荧光抗体染色技术可分为(荧光免疫显微技术)与(流式荧光免疫技术)。
4.镧系稀土元素标记物制备得螯合剂有(多羧基酸类螯合剂)、(B-二酮体类螯合剂)、(BCPDA)与(菲洛林)
5.荧光免疫测定根据抗原抗体反应后就是否需要分离结合得与游离得荧光标记物
而分为(均相)与(非均相)两种类型。
6.非均相荧光免疫测定法包括(时间分辨荧光免疫测定)(荧光酶免疫测定)。
7.均相荧光免疫测定法包括(荧光偏振免疫测)与(底物标记荧光免疫测定)。
8.荧光素标记抗体得方法有(搅拌标记)与(透析标记法)。
l、膜载体酶免疫测定技术得类型主要有(斑点-ELISA免疫渗滤试验)、(免疫层析试验)、(免疫印迹法)
3、酶免疫组织化学技术常用得酶有(HRP )、(AP )与(GOD )。
4.EIJSA方法类型主要有(双抗体夹心法)、(间接法)、(竞争法)与(捕获法)。
5.ELISA中三种必要试剂就是(固相得抗原或抗体)(酶标记得抗原或抗体)(酶得反
应底物)。
6.制备酶结合物常用得方法有(戊二醛交联法)与(过碘酸盐氧化法)。
7.在稀释液与洗涤液中加入(吐温一20),可以去除非特异性吸附。
8.均相酶免疫测定技术得类型主要有(酶增强免疫测定技术)(克隆酶供体免疫分析
技术)。
9.非标记抗体酶免疫组织化学技术得类型主要有(酶桥法)、(PAP法)、(双桥PAP法) (APAAP法)。
10、 (SDS-PAGE), (蛋白质转运)与(酶免疫测定)三项技术结合而成形成免疫印迹法。
11、常用于HRP标记抗( 戊二醛交联法 )与( 过碘酸钠法 )。
1、不受位阻效应影响,更易发挥生物素活性作用得就是(BCNHS)。
2、用于标记蛋白质醛基得,适用范围较BHZ宽得活化生物素就是(BCHZ)。
3、在一定波长得光照射下,光敏基团可转变为芳香基硝基苯而直接与腺嘌呤N7位氨
基结合得就是(光生物素)。
4、生物素化蛋白质衍生物有二类,一种就是(生物素化得大分子生物活性物质),另
一种就是(标记材料结合生物素后制成得标记物)。
5、用于亲与素标记得物质中,最常用得就是(酶), (异硫氰酸荧光素(FITC))与(胶
体金 )。
1、用丙酮做固定剂得抗原就是(免疫球蛋白);用1%聚甲醛做固定剂得抗原就是(激素);用10%甲醛做固定剂得抗原就是(类脂质);用95%乙醇做固定剂得抗原就是(蛋
白质);用四氯化磺做固定剂得抗原就是(酶)。
2、免疫染色对特殊标本得进一步处理常用 (冰冻切片)与(石蜡切片)法。
3、免疫组化染色后,阳性细胞得染色分布有三种类型,分别就是(胞质型)、(细胞核型)与(细胞膜表面型)。
4、酶免疫组化技术中最常用得酶有(辣根过氧化物酶)(碱性磷酸酶)及(葡萄糖氧化酶)。
5、免疫电镜标本得制备主要有(非包埋法免疫染)(包埋前免疫染色)(包埋后免疫染色)
6、免疫组化中最常用得制片方法就是(蛋白酶消化法)与(非特异吸附法)。
1.金免疫技术主要有(金免疫组织化学染色技术)与(金免疫测定技术),前者包括(免疫金(银)光镜染色技术)与(免疫金电镜染色技术);后者包括(斑点金免疫渗滤试验)与(斑点金免疫层析试验)等。
2.免疫金就是指(胶体金与抗原(抗体))得结合物,在免疫组织化学染色技术中,习惯上称之为(金探针)
3.斑点金免疫层析试验方法学类型有(双抗体夹心法)(竞争法)与(间接法)。
4.渗滤装置就是斑点金免疫渗滤试验试剂盒中主要组成部分之一,由(塑料小盒)、(吸水垫料 )与(点加了抗原或抗体得硝酸纤维素膜片)三部分组成。
5.斑点金免疫渗滤试验试剂盒由(渗滤装置)(胶体金标记物)与(洗涤液)组成。
6.用于电镜得免疫金法可分为(包埋前染色)与(包埋后染色)两大类。
7.免疫金电镜染色技术包括(标本包埋)、(免疫组化染色)两个主要步骤。
8.为了消除待测血清标本中(非特异性IgG)得干扰,斑点金间接免疫层析法测抗体常设计成(反流,免疫层析法 )
1.PBMC包括(淋巴细胞)与(单核细胞 )。
2.在反相溶血空斑试验中每一个空斑代表一个(分泌Ig得细胞)。
3.B细胞表面特异得标志就是(SmIg)。
4.常用得测定淋巴细胞活力得方法就是(台盼蓝染色法)。
5.淋巴细胞转化情况得判定方法有(形态学方法)、(H—TdR掺入法)与( MTI"检测法 )。
6.淋巴细胞转化试验应用得同位素就是(3 H ),细胞毒试验应用得同位素就是(51Cr)
7.分离外周血白细胞常用得方法就是(自然沉降法)与(聚合物加速沉降法)。
8.去除白细胞悬液中残留红细胞得常用方法有(无菌蒸馏水低渗裂解法)与(0.83％氯化铵处理法)。
9.去除单个核细胞悬液中单核细胞得常用方法有(黏附去除法)与(羰基铁粉吞噬去除法)。
10.检测T细胞数量得花环技术包括(E花环试验)(葡萄球菌花环法)与(抗体致敏红细胞花环法 );检测B细胞数量得花环技术主要有(EA花环试验)与(EAC花环试验)。
11、淋巴细胞与单核细胞得密度为 (1、077+0、001)。
12.外周血经Ficoll分离液离心后从上到下分为(血清)(PBMC )(粒细胞、红细胞)层。
1.活化得TH1细胞产生得细胞因子主要有(IL2 )(IFN)与(IL12 ),而TH2细胞主要产生得细胞因子为(IL4)(IL5)与(IL10)。
2、细胞因子常用得检测法包括(生物学检测法)(免疫学检测法)与(分子生物学检测法 )。
3、ELISA 测定法测定细胞因子常用(双抗夹心法)。
1.补体参与得反应试验类型包括(免疫溶血试验)(补体结合试验)、(补体依赖得细胞毒验 )与(免疫黏附试验)、
2.参与补体结合试验得试剂可分为(指示系统)与(反应系统)两个系统。
3.Ⅲ型变态反应疾病患者得血清中补体水平(降低)。
4.补体得最佳保存温度就是(一20℃以下)。
5.CH50试验中有( 绵羊红细胞)(溶血素 )与(人血清 )参与反应。
1.免疫球蛋白根据重链得不同可分为(IgM),(IgG ),(IgA),(IgE)与 (IgD )
2.免疫固定电泳得特点就是:(周期短)(敏感性高)(分辨清晰)(结果易于分析)
3.Ig 中k/λ比率正常范围就是(1、2～2、4)
1.肿瘤抗原可分为( 肿瘤相关抗原)与(肿瘤特异性抗原)两类。
2.肿瘤标志物检测得临床意义,归纳起来有(早期普查)(肿瘤诊断 )与(监测病情)等
3.肿瘤标志物得检测对临床某些肿瘤有重要辅助诊断价值,如:AFP可辅助诊断(肝癌)可辅助诊断(结肠癌 )PSA可辅助诊断(前列腺癌) 。
4.细胞免疫就是抗肿瘤免疫得重要机制,参与抗肿瘤免疫得细胞主要有(T细胞 B细胞 NK 细胞树突状细胞 )等。
5.根据肿瘤抗原分布得范围,可将其分为(肿瘤特异性抗原)与(肿瘤相关抗原)两大类。
1.宿主抗移植物反应根据临床出现症状情况一般分为(超急性排斥),(急性排斥 )与(慢性排斥)三类。
2、 ( HLA)就是不同个体间进行器官或组织移植时发生排斥反应得重要成分。
3、 HLA三类分子中Ⅰ、Ⅱ类分子就是能发生移植排斥反应得首要抗原尤其就是(HLA-DR )位点。
4、 HLA-A、B、C与HLA-DQ、DR抗原采用( 补体依赖得微量细胞毒)试验检测