果树学报2013，30（5）:854～856
Journal of Fruit Science
火龙果溃疡病的症状观察和病原菌鉴定张荣1，刘爱媛1*，白成艳1，刘成明1，罗笑容2，姜峰3，梁瑞伟2，郑红莉1
（1华南农业大学园艺学院，广州510642；2清远市大丰果业有限公司，广东清远511500；
3华南农业大学发展规划处，广州510642）
摘要:【目的】2012年广东省清远市火龙果种植区爆发一种病害，株发病率高达60%，对火龙果茎和果实造成极大危害，为识别和控制该病害的发生，进行了该项研究。【方法】采用常规植物病理学方法观察病害症状，鉴定病害的病原菌。【结果】发病初期，受侵染的肉质茎和果实出现圆形凹陷褪绿病斑，病斑逐渐变成橘黄色；发病后期，受侵染部位呈灰白色突起，产生黑色分生孢子器，病斑直径可扩展到0.5cm。从病组织中分离出的病原菌，在PDA培养基上生长的菌落由白色逐渐转为黑绿色，产生具0~2个隔膜的节孢子，节孢子无色到浅褐色，杆状、柱状或腰鼓状；节孢子细胞壁加厚，形成深褐色，球形厚垣孢子；在马尾松（Casuarina equisetifolia）水琼脂培养基中，可产生黑色分生孢子器，分生孢子器遇水喷射出分生孢子，产孢细胞无色桶形，分生孢子卵圆形，无色单孢，大小（13.31±1.42）μm×（5.4±
0.35）μm。【结论】经鉴定该病原菌为Neoscytalidium dimidiatum，导致火龙果肉质茎和果实溃疡。
关键词:火龙果；溃疡病；Neoscytalidium dimidiatum
中图分类号：S667．9文献标志码：A文章编号：1009－9980(2013)05－0854－03
Symptom observation and pathogen identification on canker disease of pitaya
ZHANG Rong1，LIU Ai-yuan1*，BAI Cheng-yan1，LIU Cheng-ming1，LUO Xiao-rong2，JIANG Feng3，LIANG Rui-wei2，ZHENG Hong-li1
(1College of Horticulture，South China Agricultural University，Guangzhou，Guangdong510642；2Qingyuan Dafeng Fruit Industry Co.，Ltd，Qingyuan，Guangdong511500；3Office of Development and Planning，South China Agricultural University，Guangzhou，Guangdong510642) Abstract:【Objective】Canker disease of pitaya expanded quickly in most commercial planting areas of Qingyuan city in Guangdong，where incidence rate of the disease reached as high as60%in2012.The objective of the study was to identify and control the disease.【Method】The symptoms were described，the pathogen was identified by using phytopathological research methods.【Result】The results showed that symptoms on the stem and fruit were small，circular，sunken，chlorotic spots at early infection and then developed into cankers.In late infection period，black pycnidia were erumpent from the surface of the cankers.Disease spots enlarged as they matured to a maximum of0.5cm in diameter.Colony changes from white，sparse，radial expansion to black-green with long and sparse aerial mycelium on PDA.Hyphae disarticulated into cylindrical-truncate，oblong-obtuse to dolioform，0-to-2-septate arthrospores，which developed from hyaline to brown.Brown and globose chlamydospores were produced.Subconical and black pycnidia were induced by culturing on sterile horsetail tree(Casuarina equisetifolia)leaves.Conidiogenous cells were dolioform.Conidia(13.31±1.42μm×5.4±0.35μm)ejected from pycnidium in water droplets were one-celled，hyaline，and ovate.【Conclusion】The pathogen causing canker disease of pitaya was i-dentified as Neoscytalidium dimidiatum based on pathogenicity and morphological observation.
Key words:Pitaya；Canker；Neoscytalidium dimidiatum
火龙果（Hylocereus spp.）原产墨西哥、中美洲和南美洲[1]，它集水果、花卉、蔬菜、保健为一体，有很高
收稿日期：2013－03－25接受日期:2013－06－05
作者简介：张荣，女，实验师，博士，研究方向为果树病害。Tel:020-********，E-mail:r-zhang@https://www.doczj.com/doc/424823712.html,
觹通讯作者Author for correspondence．Tel:020-********，E-mail:liuay@https://www.doczj.com/doc/424823712.html,
的经济价值。在马来西亚、泰国、越南、菲律宾、以色列、美国、日本、澳大利亚等国家已成为重要的经济作物[2]。1624年，荷兰人从中美洲将火龙果引种至我国台湾省[3]，直至20世纪90年代初，大陆由台湾省引进试种，90年代中后期陆续在广东、广西、贵州、福建等省区种植[4]，逐渐成为种植者创收的经济作物之一。
目前由于大面积引种，火龙果种植区病害发生日趋严重，在火龙果上已记载发生的病害有17种，如炭疽病（Collectotrichum gloeosporioides）、枯萎病（Fusarium oxysporium）、黑斑病（Alternaria sp.）、茎枯病（Ascochyta sp.）、茎斑病（Botryosphaeria dothidea）、果腐病（Bipolaris cactivora）、溃疡病（Neoscytalidium dimidiatum）、软腐病（Enterobacter cloacae），病毒病（Cactus virus X）等[5-9]。然而，2012年春夏，我国南方降雨较多，日照偏少，广东省火龙果种植区大面积爆发一种未知病害，在清远种植区株发病率高达60%。为了更好的识别和防治该病害，我们详细描述了病害的症状表现，对其病原菌进行了分离鉴定。以期引起种植者重视，便于识别和控制该病害的发生。
1材料和方法
1.1病害调查及症状观察
2012年4—12月，在广东清远火龙果园对火龙果病害的发生情况进行调查。采集具有典型特征的火龙果肉质茎，观察并记录病害症状。
1.2病原菌的分离培养
在病斑的病健交界处切取大小为5mm×5mm 的组织块，采用组织分离法进行病原物的分离培养，通过单孢分离得到纯培养物。置4℃冰箱中保存备用[10]。
1.3病原菌致病性测定
根据柯赫氏法则，将纯化的菌株配成浓度为1×104个·mL-1的孢子悬浮液，喷雾接种到健康的火龙果盆栽苗上，以茎部布满小水珠但不下滴为宜，保湿24h后，室温（24~31.8℃）下正常管理，待植株发病后，观察症状，再次分离培养病原菌。以清水接种作为对照。
1.4病原菌鉴定
1.4.1病原菌形态观察将病原菌移接于PDA培养基平板上，28℃培养4~10d后，记录菌落形态及颜色。
1.4.2病原菌分生孢子诱导将病原菌接种到马尾松水琼脂培养基中，于25℃的近紫外灯下培养，诱导产孢结构和分生孢子，同时在显微镜下观察病原菌各种孢子形态，并选取30个分生孢子和厚垣孢子，于400倍下测量其大小[11]。
2结果与分析
2.1病害症状
病害从火龙果抽生嫩芽到开花结果期间均可发生，发病始于幼嫩的茎部，发病初期茎上出现圆形凹陷褪绿病斑（图版-a），病斑逐渐变成橘黄色，严重时整条肉质茎上密密麻麻布满了病斑（图版-b）；发病后期受侵染部位呈灰白色突起，形成溃疡斑，其上产生黑色分生孢子器，病斑直径可扩展到0.5cm（图版-c），严重时茎部完全腐烂（图版-d）。取发病后期腐烂部位进行镜检观察，发现与炭疽菌和镰刀菌形成共同侵染，导致肉质茎软腐（图版-e）。
果实受侵染，在发病初期，果实的鳞片和果实表面出现圆形凹陷褪绿病斑（图版-f），病斑逐渐变成橘黄色（图版-g，h），随着果实成熟黄色病斑突起，呈灰白色，形成溃疡斑，其上着生分生孢子器（图版-i）。
2.2病原菌分离与培养性状
通过组织分离，得到1个菌株。该菌株在PDA 平板上培养4d后，菌丝白色稀疏，辐射状扩展（图版-j）；培养6d后，菌落转为灰绿色（图版-k）；培养10d后，菌落逐渐变成黑绿色，贴近培养基的菌丝致密，气生菌丝长而稀疏（图版-l）。
2.3病原菌的致病力
将此菌株的孢子悬浮液喷到盆栽苗的嫩茎上，5 d后观察到圆形褪绿病斑（图版-m），3个月后即9月1日病斑突起或呈干腐状（图版-n，o），9月10日观察到受侵染部位与其他菌复合侵染呈软腐状（图版-p）。从发病的茎上可再分离到原病菌。喷清水的对照未见发病（图版-q），且未分离到病原菌。人工接种的发病症状与田间相同，由此进一步确定其对火龙果的致病性。将接种的离体嫩茎置于34℃的人工培养箱中，24h后即可观察到病斑，可见此病害在高温高湿的环境中发病只需24h。
2.4病原菌形态学鉴定
病原菌有3种类型的孢子，分别是节孢子（arthrospore）、厚垣孢子（chlamydospore）和分生孢子（conidia）。在PDA培养基上，初生菌丝为无色，成熟后变成褐色；在马尾松水琼脂和PDA培养基上，菌丝断裂成节孢子链（图版-r），产生具0~2个隔膜的
张荣等:火龙果溃疡病的症状观察和病原菌鉴定
5期855
节孢子，节孢子无色到浅褐色，形态多样，杆状，柱状或腰鼓状（图版-s），节孢子细胞壁加厚，形成厚垣孢子，深褐色，球形，大小5.48±1.40μm×5.16±1.25μm （图版-t）。在马尾松水琼脂培养基上，产生分生孢子器，黑色（图版-u），分生孢子器遇水喷射出分生孢子；产孢细胞桶形，无色（图版-v），分生孢子单生在产孢细胞顶端（图版-w），无色单孢，卵圆形，大小13.31±1.42×5.4±0.35μm（图版-x）。根据病原菌形态，查阅相关文献，将病原菌鉴定为Neoscytalidium dimidiatum[9，11]。
3讨论
火龙果在我国是一种新兴果树，关于病害方面的研究报道较少见。本文详细描述了在广东省清远市火龙果种植区一种发生严重的病害症状表现和病原菌的形态。根据症状表现和试验结果，查阅相关文献，将该病害病原菌鉴定为Neoscytalidium dimidia-tum，导致的病害称为溃疡病。2012年Chuang等[9]报道了台湾省大面积爆发由Neoscytalidium dimidia-tum引起火龙果茎部溃疡病（Stem canker of pitaya），但是没有提及病原菌对果实的危害。袁诚林等[7]和郑伟等[12]分别报道了贵州和粤西地区火龙果溃疡病，但是只对初始症状进行简单描述并没有确定病原菌；Valencia-Botin等[13]在2003年报道了墨西哥火龙果茎部斑点病（stem spots），根据作者对症状和病原菌的描述，火龙果茎部斑点病和火龙果溃疡病疑似同一种病害，但是他们认为病原菌的有性态是葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea），无性态为壳梭孢属真菌（Fusicoccum sp.），而且在受侵染的火龙果上可以观察到有性态孢子，人工培养不能产生有性态孢子。我们报道的火龙果斑点病是否与Valencia-Botin等[13]报道的溃疡病为同一种病害有待于进一步研究。
2012年对清远火龙果病害调查表明，在春夏季节火龙果茎部溃疡病株发病率高达60%，该病原菌不仅能侵染火龙果的茎，也危害幼果和成熟果实。我们对Neoscytalidium dimidiatum的生物学特性进行初步研究发现该菌在温度为32~34℃，pH为3~4的酸性环境中生长最快（将另文报道）。由此可见，火龙果溃疡病在高温多雨季节发生严重。随病原菌量的不断积累，极易造成大发生和流行。种植者应高度重视，提前预防病害发生，同时加强抗病品种的选育。火龙果溃疡病的田间发病规律和有效防治措施有待于进一步研究。4结论
火龙果溃疡病是我国大陆火龙果产区发生的一种新病害。根据症状表现和试验结果，查阅相关文献，将该病害病原菌鉴定为Neoscytalidium dimidia-tum，并首次明确了Neoscytalidium dimidiatum对我国大陆火龙果茎部和果实均造成危害。（本文图版见插2）
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